DK161340B - Diagnostisk middel til paavisning af leukocytter i legemsvaesker, fremgangsmaade til dets fremstilling samt dets anvendelse - Google Patents

Diagnostisk middel til paavisning af leukocytter i legemsvaesker, fremgangsmaade til dets fremstilling samt dets anvendelse Download PDF

Info

Publication number
DK161340B
DK161340B DK063480A DK63480A DK161340B DK 161340 B DK161340 B DK 161340B DK 063480 A DK063480 A DK 063480A DK 63480 A DK63480 A DK 63480A DK 161340 B DK161340 B DK 161340B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
residue
group
phenyl
activators
optionally
Prior art date
Application number
DK063480A
Other languages
English (en)
Other versions
DK63480A (da
DK161340C (da
Inventor
Dieter Berger
Guenter Frey
Manfred Kuhr
Wolfgang Werner
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=6062854&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DK161340(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of DK63480A publication Critical patent/DK63480A/da
Publication of DK161340B publication Critical patent/DK161340B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK161340C publication Critical patent/DK161340C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B11/00—Diaryl- or thriarylmethane dyes
    • C09B11/04—Diaryl- or thriarylmethane dyes derived from triarylmethanes, i.e. central C-atom is substituted by amino, cyano, alkyl
    • C09B11/06—Hydroxy derivatives of triarylmethanes in which at least one OH group is bound to an aryl nucleus and their ethers or esters
    • C09B11/08—Phthaleins; Phenolphthaleins; Fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B43/00—Preparation of azo dyes from other azo compounds
    • C09B43/18—Preparation of azo dyes from other azo compounds by acylation of hydroxyl group or of mercapto group
    • C09B43/20—Preparation of azo dyes from other azo compounds by acylation of hydroxyl group or of mercapto group with monocarboxylic acids, carbamic acid esters or halides, mono- isocyanates or haloformic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/40—Triphenylmethane dye chromogens, e.g. fluorescein derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/50—Indoles

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)

Description

DK 161340 B
Påvisningen af leukocytter i legemsvæsker, specielt i urin, indtager en fremtrædende plads ved diagnosen af nyre- og urogenitaltraktsygdoimne.
Denne påvisning blev hidtil gennemført ved hjælp af mikro-5 skopiske optællinger af leukocytteme i ikke centrifugeret urin eller i urinsedimentet.
Begge metoder har naturligvis det fælles, at der kun registreres intakte leukocytter. På den anden side er det kendt, at hastigheden af lysen af leukocytter alt efter urinstofmiljøet 10 er underkastet voldsomme svingninger. Således må der f.eks. i stærkt alkalisk urin regnes med en leukocythalveringstid på kun 60 min. Til lave leukocyttal eller ved længere urinhenstandstider giver dette endog falske, negative resultater .
15 Bortset fra lysefejl giver den kvantitative mikroskopiske bestemmelse af leukocytteme i ikke centrifugeret, homogeniseret urin i optællingskammeret ret pålidelige værdier. I praksis anvendes denne metode kun sjældent, da den er besværlig, trættende og tidsrøvende og kræver anvendelsen af 20 uddannet personale.
Det største antal af leukocytbestemmelserne i urin bliver i den medicinske praksis gennemført ifølge den såkaldte synsfeltmetode i urinsedimentet. Hertil skal materialet, der skal undersøges (sediment),udvindes ved centrifugering. Der-25 ved beriges dog også andre af urinens bestanddele, der som f.eks. salte og epitelceller i væsentlig grad kan vanskeliggøre den mikroskopiske optælling af leukocytteme. Svingende sedimentindhold, inhomogenitet af sedimentet samt måske oven i købet forskellige mikroskopiske forstørrelser 30 og forskellige optiske udstyr på mikroskoperne fører til, at de her sædvanlige angivelser over antallet af leukocytter per mikroskopisk synsfelt kan være behæftet med fejl på mere end 100%.
2
DK 161340 B
I den senere tid har der ikke manglet forsøg på at tilvejebringe et diagnostisk middel/ hvormed leukocytterne i legemsvæsker på simpel og let håndterlig måde kunne påvises så ^ hurtigt og fuldstændigt som muligt. Som påvisningsprincip for en sådan leukocyttest er> der foreslået enzymatiske reaktioner,. da leukocytter besidder et bredspektret enzymspektrum.
10 I DE-offentiiggørelsesskrifterne nr. 28 26 965, 28 36 644 og 28 54 987 er der allerede beskrevet diagnostiske midler, som består af en sugedygtig bærer, som er imprægneret med et egnet pufferstof, sædvanlige hjælpestoffer og et chromogen. Som chromogener anvendes derved ifølge DE-offenti iggørelsesskrift 15 nr. 28 26 965 sulfonphthalein-estere med den almene formel A
1 R^" i R A /O-R1" ysNS /3“Νγ IJs* I ^ 2° r2„ I3 *9 (Al 4 i 1 R Y°2 25 R4 " hvori R^" betegner en eventuelt med halogen eller en lavere alkoxygruppe substitueret carboxylsyrerest, en med en i peptidkemien sædvanlig nitrogenbeskyttelsesgruppe forsynet o A 2 aminosyre- eller peptidrest, R " betegner et halogenatom 3 4 eller en lavere alkylgruppe, R " og R ",som kan være ens eller forskellige, hver betegner et hydrogen- eller et } halogenatom; ifølge DE-offentiiggørelsesskri ft nr. 28 36 644 azofarvestofestere med den almene formel B 35 A'-N=N-B*(0R)n (B) hvori A1 betegner en 5- eller 6-leddet, eventuelt benzo- 3
DK 161340 B
anelleret rest med 1-2 heteroatomer fra gruppen N, S, O, som eventuelt kan være substitueret en eller flere gange med halogen, lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper, 5 eller en 1-3 gange med lavere alkyl-, lavere alkoxy-, nitro-, sulfonat- og/eller acylaminogrupper substitueret phenylrest, B' betegner en eventuelt 1-2 gange med sulfonat-, lavere alkoxy- og/eller lavere alkoxypolyalkylenoxygrupper substitueret benzen-, naphthalin- eller quinolinrest, R be- 10 tegner en carboxylsyrerest eller en med en i peptidkemien sædvanlig nitrogenbeskyttelsesgruppe forsynet aminosyre- eller peptidrest, og n betegner tallet 1 eller 2,
og ifølge DE-offent1 iggørelsesskrift nr. 28 54 987 indoxyle-15 stere med den almene formel C
, R1'" R"' JL jO-A"-B" ^ ]i i) (C), 3 20 R·3'" R44 hvori R·*"" , R^, R^, R^"' , der kan være ens eller forskellige, hver betegner hydrogen eller halogen, en lavere alkyl-, lavere alkoxy-, aryl-, aralkyl-, aralkoxy-, en hydroxy-, en carboxy-, en carboxy-lavere-alkoxy-, en aralk= oxycarbonyl-, en aralkoxycarbonyl-lavere-alkoxy-, en nitro-eller en lavere acylaminogruppe,eller eventuelt to nabo= substituenter betegner en eventuelt med halogen substitueret benzoanelleret rest, X betegner et svovlatom eller en even-30 tuelt med en lavere alkyl-, en aryl-, en aralkyl- eller en acylrest substitueret iminogruppe, A" betegner en aminosyre- eller peptidrest, B" betegner en i peptidkemien sædvanlig og derfra afledt nitrogenbeskyttelsesgruppe.
35 Ved hjælp af disse diagnostiske midler kan påvisningen af esterolytiske eller proteolytiske enzymer,specielt de i leu-kocytterne tilstedeværende esteraser eller proteaser i legemsvæsker, specielt i urin, gennemføres simpelt og hurtigt via et farveomslag.
4
DK 161340 B
Det var nu opgaven med den foreliggende opfindelse at søge efter muligheder for at fremskynde påvisningsreaktionen, som ligger til grund for denne enzymatiske test.
5
Det har nu overraskende vist sig, at reaktionstiderne for disse enzymatisk gennemførte leukocyttests kan forkortes væsentligt, når man yderligere til de hidtil sædvanlige hjælpemidler og chranogener tilsætter en eller flere akti-10 vatorer.
Opfindelsen angår derfor et diagnostisk middel til påvisning af esterolytiske og/eller proteolytiske enzymer specielt leu-kocytter - esteraser og/eller -proteaser i legemsvæsker, som I5 foruden sædvanlige hjælpestoffer indeholder et sædvanligt esterase- og/eller proteasesubstrat, som er ejendommeligt ved, at det yderligere indeholder en eller flere aktivatorer valgt blandt
20 a. Pyridinderivater med den almene formel I
:b& hvori Ri , R2 , r3 , r4 0g r5 f SOm kan være ens eller forskellige, hver betegner hydrogen eller halogen, en lavere alkyl- eller en lavere alkoxygruppe eller en vinyl-3Q gruppe, som er substitueret med eventuelt en til flere la vere alkoxy-, amino-, alkylamino-, dialkylaminogrupper, som bærer en phenyl- eller naphthyl rest, eller med en pyridin-eller thiophenrest, idet to tilstedeværende nabosubstitu-enter kan betegne en eventuelt en til flere gange med ha-logen, hydroxygrupper, lavere alkyl- eller lavere alkoxy-grupper substitueret indeno- eller benzoanelleret rest, som igen kan bære en eventuelt med en lavere alkylgruppe substitueret benzo- eller pyri doane 11eret rest, og r3 kan yderligere betegne en vinyl-quinuclidylcarbinolgruppe, 5
DK 1613 A O B
b) Imidazolderivater med den almene formel II
R2’ ri S) s* <IJ> 11·
R
hvori R1' beteqner hvdroqen, en lavere alkylqruope eller en eventuelt med en hydroxy- eller en acylqruppe substitueret phenylrest, og 10 o R*' beteqner hydrogen, en am i no-1avere-a1 kyl-, N-lavere-acy1 am i no-1avere-a1ky1 - eller en lavere alifatisk, eventuelt umættet carboxyl syrerest eller en eventuelt ved nitrogenatomet acyle’-et lavere alifatisk cc-ami nosyrerest, 15
c) Alkoholer med den almene formel III
X-A-OH III
20 hvori X betegner hydrogen eller en hydroxygruppe, og A en liqekædet eller forgrenet hydrocarbonrest, som er mættet eller umættet, cyklisk eller acyklisk og in-25 deholder 1-30, fortrinsvis 5-22 carbonatomer i acyklisk binding og 3-20, fortrinsvis 6-17 carbonatomer i en cyklisk binding, d) Metalkomplekser med den almene formel IV 30
Dm[B(CN)n(N0)p! (IV.) hvori 35 6
DK 161340 B
D betegner en alkalimetalion, B betegner en tungmetalion, m betegner et helt tal fra 2 til 5, n betegner et helt tal fra 4 til 8, 0g 5 p er nul eller 1, hvorhos tallet m fremgår af tungmetalionens valens og talr let n.
Opfindelsen angår yderligere fremgangsmåder til fremstillingen 10 af diagnostiske midler, som er ejendommelige ved, at man på i og for sig kendt måde imprægnerer en sugedygtig bærer med det sædvanlige esterase- og/eller proteasesubstrat, de sædvanlige yderligere hjælpestoffer og aktivatorer samt deres anvendelse til påvisningen af leukocytter i legemsvæsker, specielt 15 i urin.
Det diagnostiske middel består fortrinsvis af en sugedygtig bærer, et filmlag, en pulverblanding, et lyofilisat, en opløsning eller en reagenstablet, som indeholder et sædvanlig 20 esterase- og/eller proteasesubstrat, sædvanlige tilsætnings stoffer samt en eller flere aktivatorer.
1 2 3 4 *3 Når substituenterne R , R , R , R og R er halogen skal hermed forstås fluor, chlor, brom og jod, fortrinsvis chlor 25 og brom.
De lavere alkyl·" og alkoxygrupper i definitionen af substh-1 2 3 4 5 tuenterne R , R , R , R og R samt de lavere alkylgrupper
7 DK 161340 B
2
Som acylrester i defintionen af substituenterne Ri' og R ' kommer resterne af alifatiske carboxylsyrer med 1-5/ fortrinsvis 1-3 carbonatomer/ på tale, hvorhos acetylresten er særligt foretrukket, 5 1 2
Ued en arylrest i definitionen af substituenterne R , R , 3 4 5 1 R , R og R og R 1 2 3 4 skal fortrinsvis forstås phenyl- eller naphthylgruppen. Som substituent R^1 foretrækkes phenyl= gruppen særligt, 10
Med en heterocyklisk rest i defintionen af substituenter R^·, R^, R^, R^ og R^ skal forstås 5- eller 6-leddede ringe med 1-3 heteroatomer, hvorhos nitrogen-, svovl- og oxygen= atomer kommer på tale som heteroatomer. Pyridyl-, furyl-*5 6 og thienylresten foretrækkes særligt.
Som "lavere alifatisk eventuelt umættede carboxylsyrerest" og "eventuelt véd nitrogenatomet acyleret lavere alifatisk o α-aminosyrerest" R * kommer carboxylsyrer med 1-5, fortrins-20 vis 1-3 carbonatomer,eller deres α-aminoderivater på tale.
Eddikesyre, propionsyre og acrylsyre eller L-alanin og N-acetyl-L-alanin foretrækkes særligt.
I aktivatorerne med den almene formel IV kommer som alkali-25 metalioner D fortrinsvis natrium- og kaliumioner på tale, og som tungmetalioner B fortrinsvis ioner af metallerne jern, nikkel, chrom, mangan, kobolt, molybdæn og vanadium på tale.
20 Som eksempler på aktivatorer, der kan anvendes i forbindelse med den foreliggende opfindelse, skal nævnes: pyridin 2 2-methylpyridin 3 35 3. 3-ethylpyridin 4 2-brompyridin 5 3,5-dichlorpyridin 6 4-methoxypyridin 8
DK 161340 B
7. 2,6-dimethyl-4-ethoxypyridin 8. quinolin 9. 2-methylquinolin 1Q. 8-methylquinolin 5 11. 7-isopropylquinolin 12. 2-chlorquinolin 13. 4-bromquinolin 14. 3-methoxyquino1In 15. 6-ethoxyquinolin 10 16. 2-iaethyl-6-bromquinolin 17. 2-methyl-4-methoxyquinolin 18. 5,7-dtbroni-8-methoxyquino 1 in 19. isoquinolln 20. 1-methylisoquinolin I5 21. 3-propylisoquinolin 22. 7-methylisoquinolin 23. 1-chlorisoquino1in 24. 4-bromisoquinolin 25. 7-methoxyisoquinolin 20 26. l-methoxy-3-chlorisoquinolin 27. l-chlor-4-methyl-5-met±LOxyisoquinolin 28. benzo-[b]-quinolin (= acridin).
29. benzo-[c]-quinolin (= phenanthridin).
30. 2-xnethylphenantlirIdIn 25 31. 2-ethylphenanthridin 32. 2-propylphenanthridin 33. 2-methoxyphenanthrIdin 34. benzo-[f]-quinolin 35. 2-isopropylbenzo-[f]-quinolin 3 0 36. 3-methylbenzo-[f]-quinolin 37. 2,4-dimethylbenzo-[f]-quinolin 38. benzo-[g]-quinolin 39. 4-methylbenzo-[g]-quinolin 40. 2,4-dimethylbenzo-[g]-quinolin 3 5 41. benzo-[h]-quinolin 42. 1,7-phenanthrolin 9
DK 161340 B
43. 2-methyl-l,7-phenanthrolin 44 . 2, 8'-dimethyl-1,7-phenanthrolin 45. 4,7-phenanthrolin _ 46. 3-methyl-4,7-phenanthrolin 5 47. 3,8-dimethyl-4,7-phenanthrolin 48. 1,10-phenanthrolin 49. 2,9-dimethyl-l,10-phenanthrolin 50. 4-azafluoren 51. kinin 52. kinidin 53. cinchonin 54. cinchonidin 55. cuprein ,c 56. 2-[phenyl]-vinylpyridin-(2'i 1 o 57. 2-[4"-methoxyphenyl]-vinylpyridin-(211 58 . 2- [4" - (Ν,Ν-dimethylamino).-phenyl] -vinylpyridin- (2 1 ] 59. bis-[2-(phenyl]-vinyl]-pyridin-(21,41] 60. 2-[naphthyl-(1")]-vinylpyridin-(2') 2Q 61. 2-[pyridyl-(2")]-vinylpyridin-(2'} 62. 2-[pyridyl-(3")]-vinylpyridin-(2') 63. 2-[pyridyl-(4”)]-vinylpyridin-(21) 64. 2-[furyl-(2")]-vinylpyridin-(21) 65. 2- [pyridyl-(3")]-vinylpyridin-(3') 25 66. 2-[pyridyl-(3")]-vinylpyridin-(4') 67. 2-[pyridyl-(4")]-vinylpyridin-(41) 68. 2-[thienyl-(2")]-vinylpyridin-(41) 69. imidazol 70. 1-ethylimidazol 71. 1-phenylimidazol 72. 1-(4'-hydroxypheny1)-imidazol 73. 1-(4'-acetylphenyl)-imidazol 74. histamin 75. N-a-acetylhistamin 35 76. (imidazolyl-4)-eddikesyre 77. 3-(imidazolyl-4)-propionsyre 78. 3-(imidazolyl-4)-acrylsyre 10
DK 161340 B
79. L-histidin 80. Ν-α-acetyl-L-histidin 81. hexanol-(l) 8 2. heptanol-(1) 5 83. octanol-(l).
84. nonanol-(l) 85. decanol-(l) 86. dodecanol-(1) 87. tetradecanol-(1) 10 88. pentadecanol-(1) 89. hexadecanol-(1) 90. heptadecanol-(11 91. octadecanol-(1) 92. nonadecanol-(11
15 93. eicosanol-(H
94. docosanol-(1) 95. cyklohexanol 9 6. cyklohexen- (1). -o 1 - (11 97. cykloheptano1 20 98. cyklooctanol 99. cyklononanol 100. cyklodecanol 101. cyklododecanol 102. cykloheptadecanol 25 103. cykloheptadecen-(9)-ol-(1) 104. citronellol 105. geraniol 106. nerol 107. linalool 3q 108. farnesol 109. nerolidol 110. cis-octadecen-(9)-ol-(1) 111. phytol 112. pentadiol-(l,5) 35 113. hexandiol-(1,6) 114. heptandiol-(1,7) 115. octandiol-d^) 11
DK 161340 B
116. nonandiol-(1,9) 117. decandiol-(1,10) 118. dodecandiol-(1,12)
119. trikaliumhexacyanoferrat-III
5 120. tetrakaliumhexacyanoferrat-II
121. di-kaliumtetracyanonickelat-II 112. trinatriumoctacyanomolybdat-V
123. dinatriumpentacyanonitrosylferrat-II
124. trikaliumpentacyanonitrosylmancjanat-I
10 125. trikaliumpentacyanonitrosylchromat-I
126. trikaliumpentacyanonitrosylkoboltat-I
127. pentakaliumpentacyanonitrosylvanadat-I
Samtlige aktivatorer er kendte forbindelser eller kan 15 fremstilles i analogi med kendte forbindelser.
Fra US-patentskrifterne nr. 3.290.117, 3.853.472 og 3.917.452 er det kendt, at qui no 1 i nforbi ndel ser og vinylpyridinforbin-delser har en evne til at fremskynde de peroxidatiske proces-2Q ser ved kolometrisk påvisning af blod og andre peroxidatisk virksomme substanser ved hjælp af velegnede kromogene substrater og hydrogenperoxid. Ifølge den foreliggende opfindelses ide virker disse substanser som aktivatorer ved påvisning af 1eukocytter-esteraser og/eller -proteaser, dvs. ved et helt 2g anderledes mere følsomt og komplekst enzymsystem, hvor ingen peroxidatiske processer finder sted.
De som aktivatorer i forbindelse med opfindelsen anvendte forbindelser med de almene formler I, II og IV anvendes i 30 koncentrationer på 10“^ til 1 mol/liter, fortrinsvis 10”^ til 10”1 mol/liter imprægneringsopløsning; aktivatorerne med den almene formel III sættes til imprægneringsopløsningen i 0,5-10% (vægt/volumen),fortrinsvis 1-5% (vægt/volumen).
35 12
DK 161340 B
De diagnostiske midler ifølge opfindelsen indeholder foruden aktivatorerne de yderligere sædvanligvis anvendte bestanddele som f.eks. sædvanlige esterase- eller protease= substrater, puffere, befugtningsmidler eventuelt kompleks-5 dannere og oxidationsmidler. Disse anvendes på den måde og i de koncentrationer, som er beskrevet i DE-offentliggørel-sesskrifterne nr. 28 26 965, 28 36 644 og 28 54 987.
De som esterase- eller proteasesubstrater anvendte chromo-gener tilsættes således sædvanligvis i koncentrationer på 10 10-4 til 1 mol/liter, fortrinsvis 10-^-10~^ mol/liter im prægneringsopløsning, belægningsmasse eller væske, der skal undersøges.
En yderligere bestanddel af det diagnostiske middel til påvisningen af esterolytiske og/eller proteolytiske en-15 zymer, specielt leukocytproteaserne, er et egnet puffersystem. Hertil kommer f.eks. phosphat-, borat-, barbiturat-, tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-(=tris-)-, 2-amino-2-methy1= propandiol-1,3-(=amediol)- eller aminosyrepuffere på tale, hvorhos pH-værdi og kapacitet skal vælges således, at der 20 i måleopløsningen eller på teststrimlerne indstilles en pH-værdi på 6-10, fortrinsvis 7-9.
En yderligere bestanddel af et diagnostisk middel til påvisningen af esterolytiske og/eller proteolytiske enzymer, specielt af leukocytesteraser eller-proteaser, kan være 25 et befugtningsmiddel. Der anvendes fortrinsvis ikke~iono= gene^ men også amphotere, kationiske eller anioniske befugtningsmidler i koncentrationer på 0,05-2%, fortrinsvis 0,1-1%.
En yderligere bestanddel af det diagnostiske middel ifølge 30 opfindelsen kan være en egnet kompleksdanner. Der anvendes fortrinsvis metalsalte, f.eks. af metallerne jern, kobber, chrom, kobolt, nikkel, mangan og zink. De anvendes i koncentrationer på 10“^ til 10"1 mol/liter, fortrinsvis 10^3-10^2 mol/liter imprægneringsopløsning.
13
DK 161340 B
Desuden kan ved fremstillingen af de diagnostiske midler ifølge opfindelsen anvendes yderligere oxidationsmidler som f.eks. kaliumhexacyanoferrat-III, kaliumbromat, kali urnehromat, phenazinmethosulfat eller tetrazoliumsalte. Disse anvendes i 5 koncentrationer på 10“4-1 mol/liter, fortrinsvis 10"3-10_1 mol/liter i mpraegner i ngsop 1 øsn i ng , belægningsmasse eller væske, der skal undersøges.
Til fremstilling af det diagnostiske middel ifølge opfin- 10 delsen imprægneres f.eks. sugedygtige bærere, fortrinsvis filtrerpapir, cellulose eller kunstfiberfilt,med opløsninger af de nødvendige, sædvanligvis til fremstillingen af teststrimler anvendte reagenser (substratpuffer, aktivatorer, eventuelt befugtningsmidler, kompleksdannere, oxi- 15 \ dationsmidler etc.; i let flygtige opløsningsmidler, som f.eks. vand, methanol, ethanol eller acetone. Dette sker hensigtsmæssigt i to trin; Først imprægneres med en vandig opløsning, som indeholder puffer og eventuelt vandopløselige aktivatorer. Derpå imprægneres med en opløsning,som indeholder esterase- eller proteasesubstrater,eventuelt ikke vandopløselige aktivatorer samt andre ikke vandopløselige tilsætningsstoffer.
I specielle tilfælde kan der også anvendes den omvendte 25 imprægneringsrækkefølge.
Det færdige testpapir kan anvendes som sådant eller på i og for sig kendt måde klæbet til greb eller fortrinsvis indlejret mellem plast og finmasket netstof ifølge DE patentskrift nr. 21 18 455.
Til fremstillingen af filmbelagte teststrimler indføres samtlige reagenser i opløsningen eller dispersionen af et filmdannende stof, som f.eks. polyvinylester eller 35 polyamid, og blandes homogent. Blandingen fordeles som et tyndt lag på en plastbærer og tørres. De filmbelagte 14
DK 161340 B
i j teststrimler udskæres efter tørringen og kan anvendes som ! sådanne eller på i og for sig kendt måde fastklæbet til greb eller indlejret f.eks. mellem plast og finmasket netstof ifølge DE-patentskrift nr. 21. 18 455. ! 5
Det diagnostiske middel ifølge opfindelsen til påvisning af esterolytiske og/eller proteolytiske enzymer kan fremstilles i form af pulverblandinger eller reagenstabletter ved, at man ; behandler de ovenfor anførte testbestanddele med sædvanlige 10 galeniske tilsætningsstoffer og granulerer. Tilsætningsstoffer af denne art er f.eks. carbonhydrater som f.eks. mono-, oligo-eller polysaccharider, eller sukkeralkoholer som f.eks. mannit, sorbit eller xylit, eller andre opløselige inaktive forbindelser såsom polyethylenglycoler eller polyvinylpyrrolidon.
15 Pulverblandingerne eller reagenstabletterne har i almindelig hed en slutvægt på ca. 50-200 mg, fortrinsvis 50-80 mg.
Til fremstillingen af lyofilisater med en samlet vægt på ca. 5-20 mg, fortrinsvis ca. 10 mg,.frysetørres en opløs- 20 ning, som foruden samtlige for testen nødvendige reagenser indeholder sædvanlige strukturdannende stoffer som f.eks. polyvinylpyrrolidon og eventuelt yderligere fyldstoffer. som f.eks. mannit, sorbit eller xylit.
25
Det diagnostiske middel ifølge opfindelsen kan fremstilles i form af en opløsning, der indeholder fortrinsvis samtlige for testen nødvendige reagenser. Som opløsningsmiddel kommer vand eller blandinger af vand og et vandopløseligt, organisk opløsningsmiddel som f.eks. methanol, ethanol, acetone 30 eller dimethylformamid på tale. Af holdbarhedsgrund kan det være fordelagtigt at fordele de for testen nødvendige reagenser på to eller flere opløsninger, som først forenes ved den egentlige undersøgelse.
35 Det således fremstillede diagnostiske middel muliggør i legemsvæskerne, der skal undersøges, hurtigt og enkelt via en farvedannelse eller en farveændring at påvise leu-kocytterne. I sammenligning med de diagnostiske midler 15
DK 161340 B
ifølge DE-offentl iggørel sesskri f ter nr. 28 26 965, 28 36 644 og 28 54 987 kan der ved anvendelsen af aktivatorerne konstateres væsentligt forkortede reaktionstider.
5 Den foreliggende opfindelse belyses nærmere ved hjælp af de efterfølgende eksempler.
Eksempel 1
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schiill 23 SL) imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres så ved 1Q 60°C henholdsvis stuetemperatur.
Opløsning 1
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 9,0, i vand.
Opløsning 2 15 Substratopløsninger 10“4 mol/liter i acetone.
Aktivatorerne sættes alt efter opløseligheden til opløsning 1 eller opløsning 2, således at der ved aktivatorerne med de almene formler I, II og IV fås s lutkoncentrationer _2 på 10 mol/liter imprægneringsopløsmng, ved aktivatorer-20 ne med den almene formel III slutkoncentrationer på 2% (vægt/volumen) af imprægneringsopløsningen.
I tabel 1 er sammenfattet forsøgsresultaterne med følgende esterase- eller proteasesubstraterl 25 A: diacetyl-3'-3"-dibrom-5',5"-dichlorphenolsulfonphthalein, B: diacetyl-4,5,6,7,31,5',3",5"-octabromphenolsulfonphthalein, C: di-(N-benzylcarbonyl-L-alanyl)-3', 5*,3", 5"-tetrabrom= phenolsulfonphthalein, 16
DK 161340 B
D: di- (N-benzyloxycarbonyl-L-phenylalanyl)-3 *, 5"', 3", 5"-tetrabromphenolsulfonphthalein.
I tabel 1 er anført reaktionstiderne, som forløber fra neddypningen af teststrimlerne i en standardopløsning 5 af 5000 leukocytter/yl isotonisk kogsaltopløsning til den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiderne for de pågældende recepter uden aktivatortilsætning.
Farveomslaget ved de fire her undersøgte forbindelser 1Q sker fra farveløs til dybblå.
17
DK 161340 B
Tabel 1
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
A B C D
Sammenlignings-5 recept uden aktivator 210 90 600 550 1. Pyridin 110 70 410 450 2. 3-ethylpyridin 95 65 440 470 3. 4-methoxypyridin 110 65 470 450 10 4. quinolin 75 50 320 340 5. 2-methylquinolin 45 55 300 350 6. 4-bromquinolin 60 60 370 330 7. methoxyquinolin 50 50 310 380 8. isoquinolin 85 55 350 380 15 9. benzo-[b]-quinolin 90 65 280 330 = acridin 10. benzo-[c]-quinolin 75 60 260 360 = phenanthridin 11. 2-methylphenan= 20 thridin 100 65 250 370 12. 2-ethylphenan= 80 70 300 360 thridin 13. 2-propylphenan= thridin 80 60 280 330 25 14. 2-methoxyphenan= thridin 85 60 260 350 15. benzo-[f]-quinolin 90 40 310 310 16. benzo-[h]-quinolin 90 55 290 340 17. 1,7-phenanthrolin 75 65 340 410 30 18. 4,7-phenanthrolin 80 70 270 380 19. 4-azafluoren 120 50 240 290 20. kinin 110 70 350 330 21. kinidin 70 65 375 280 22. cinchonin 60 50 340 300 35 23. cinchonidin 65 55 390 320 24. cuprein 70 60 400 305 25. 2-[phenyl]-viny1= pyridin-(2') 115 70 370 270 26. 2-[pyridyl-(3"l]~ 40 vinylpyridin-(2')145 65 430 250 18
DK 161340 B
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
A B C D
27. 2-[pyridyl-(4")]- 5 vinylpyridin-(41) 140 55 350 280 28. 2-[furyl-(2")]- vinylpyridin-(2") 150 70 410 250 29. imidazol 90 55 380 210 30. histamin 110 60 440 290 10 31. (imidazolyl-4)- eddikesyre 150 75 450 350 32. β-(imidazolyl-4-)- propionsyre 170 70 490 380 33. L-histidin 130 80 465 320 15 34. octanol-(1) 150 75 500 460 35. decanol-(l) 130 70 480 420 36. tetradecanol-(1) 105 60 420 400 37. cyklooctanol 125 80 530 480 38. cyklododecanol 90 55 490 470 2Q 39. citronellol 100 40 430 440 40. farnesol 130 50 440 410 41. phytol 135 55 430 450 42. tri-kalium-hexa= cyanoferrat-II 160 70 550 480 25 43. di-kalium-tetra= cyanonickelat-II 160 80 530 450 44. di-natrium-penta= cyanonitrosylferrat-II 150 65 470 460
19 DK 161340 B
Lignende forsøgsresultater opnås, når man i stedet for substraterne A, B, C og D anvender andre sulfonphthaleinestere ifølge DE-of fentliggørelsesskrift nr. 28 26 965 og/eller i stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk 5 kogsaltopløsning anvender leukocytholdig urin.
Eksempel 2
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schull 23 SL) imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres så ved 60°C eller stuetemperatur.
10 Opløsning 1
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 7,0,i vand (for substraterne E, F og G), eller tris-(hydroxymethyD-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0,i vand (for substrat H) .
15 Opløsning 2
Substratopløsninger 10”^ mol/liter i acetone.
Aktivatortilsætninger og forsøgsforløbet skete som i eksempel 1.
I tabel 2 er sammenfattet forsøgsresultaterne for de føl-20 gende protease-substrater: E: thiazol-2-azo-4'-[1'-(N-benzyloxycarbonyl-L-alanyloxy)-51-methoxynaphthalin] (farveomslag for testpapir fra rosa mod rød).
F: 6-methoxybenzothiazol-2-azo-2"-[1'-(N-benzyloxycarbonyl-25 L-alanyloxy)-naphthalin) (farveomslag af testpapir fra rosa mod rød).
G: 2,4-dinitrobenz en-azo-4'-[1'-(N-benzyloxycarbonyl-L-alanyl= oxy) -benzen] 20
DK 161340 B
(farveomslag af testpapir fra gul mod rødviolet).
H: 2,5-dimethoxybenzen-azo-41 — C11 — (N-benzyloxycarbonyl-L-alanyloxy)-naphthalin] (farveomslag af testpapir fra lys orange mod rød).
5 De reaktionstider, som forløber fra neddypningen af teststrimlerne i en standardopløsning af 5000 leukocytter/μ1 isotonisk kogsaltopløsning til den første tydelige farvereaktion, er anført. Som referenceværdier tjener reaktionstiderne for de pågældende recepter uden aktivatortilsætning.
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
E F G H
21
DK 161340 B
Tabel 2
Sammenlignings-cept uden aktivator 60 180 160 70 1. Pyridin 50 150 130 55 2. 2-methylpyridin 45 140 135 50 3. 2-brorapyridin 50 150 125 45 4. 3,5-dichlorpyridin 45 160 130 50 5. guinolin 50 110 95 45 6. 8-methylquinolin 45 130 110 40 7. 2-chlorquinolin 4Q 130 110 35 8. 6-ethoxyquinolin 35 150 120 40 9. 2-methyl-4-methoxy- quinolin 40 120 105 40 10. isoquinolin 40 130 110 40 11. 1-methylisoquinolin 45 100 120 35 12. 4-bromisoquinolin 45 140 115 40 13. 7-methoxyisoqudnolin 50 130 130 45 14. benzo-[b]-quinolin = acridin 30 150 60 45 15. benzo-[c]-quinolin = phenanthridin 35 120 80 40 16. 2-methyl-phenan= thridin 40 140 90 40 17. benzo-[f]-quinolin 50 130 70 30 18. 2-isopropyl-benzo- [f]-quinolin 45 130 95 35 19. 3-methyl-benzo- [f]-quinolin 40 125 8Q 40 20. 2,4-dimethyl-benzo- [f]-quinolin 40 110 90 40 21. benzo-[g]-quinolin 40 90 70 35 22. 4-methyl-benzo-[g]- quinolin 40 100 80 40 23. benzo-[h]-quinolin 35 70 50 30 24. 1,7-phenanthrolin 45 120 120 40 25. 4,7-phenanthrolin 40 105 105 45 26. 1,10-phenanthrolin 45 130 110 45
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
E F G H
22
DK 161340 B
27. kinin 40- 120 60 35 5 28. cinchonin 45 100 90 30 29. cuprein 40 140 105 30 30. 2-[phenyl]-vinyl- pyridin-(2') 35 125 120 50 31. bis-[2-(phenyl)- 10 vinyl]-pyridin- (21,4') 30 150 140 60 32. 2- [furyl- (2") ]-vinyl- pyridin-(21) 30 120 90 55 33. imidazol 45 140 120 40 15 34. 1-ethylimidazol 40 130 130 45 35. 1-phenylimidazol 35 120 120 40 36. 1— (4 * -hydroxy-phenyl) -
imidazol 45 140 135 5Q
37. histamin 50 130 140 55 20 38. 3-(imidazolyl-4)-pro= pionsyre 50 150 140 50 39. β-(imidazolyl-4) - acrylsyre 50 160 135 55 40. L-histidin 45 150 125 50 25 41. Ν-α-acetyl-L-histidin 45 140 130 40 42. heptanol-(1) 30 130 1Q0 40 43. octanol-(1) 30 120 95 35
44. decanol-(1) 20 90 80 3Q
45. dodecanol-(1) 20 80 70 30 30 46. hexadecanol-(1) 25 105 8Q 40 47. eicosanol-(1) 30 120 110 45 48. cyklohexanol 35 110 105 40 49. cyklodecanol 25 95 85 30 50. cyklododecanol 25 12Q 90 25 35 51. cykloheptandecanol 30 130 120 30 52. cykloheptadecen- (9)-ol-(1) 30 110 100 35 53. citronellol 25 110 70 25 54. linalool 20 105 60 30 40 55. farnesol 30 110 75 25
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
E P G H
23
DK 161340 B
56. cis-octadecen- 5 (9)-ol-(1) 25 90 85 40 57. phytol 30 80 65 30 58. pentandiol-(1,5) 35 130 120 45 59. heptandiol-(1,7) 40 150 125 40 60. decandiol-(1,10) 30 135 140 50 10 61. dodecandiol-(1,12) 40 160 130 50 62. trikaliumhexacyano= ferrat-III 45 160 135 55 63. tetrakaliumhexa= cyanoferrat-II 40 160 140 50 15 64. dinatriumpenta= cyanonitrosylferrat- II 40 140 130 40 65. trikaliumpentacyano= nitrosylchromat-I 50 145 130 50 20 66. trikaliumpentacyano= nitrosylkoboltat-I 50 160 145 45 24
DK 161340 B
Lignende forsøgsresultater opnås, når man i stedet for substraterne E, F, G og H anvender andre azofarvestofestere ifølge DE-offentliggørelsesskrift nr. 28 36 644, og/eller i stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk 5 kogsaltopløsning anvender leukocytholdig urin.
Eksempel 3
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schiill 23 SL) imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres så ved 60°C eller stuetemperatur.
Opløsning 1
Natriumtetraborat-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0,i vand. Opløsning 2
Substratopløsning 10"“ ^ mol/liter i acetone.
Aktivatortilsætninger og gennemførelse af forsøg skete som 15 i eksempel 1.
25
DK 161340 B
De med de tre substrater fremstillede testpapir giver efter neddypning i leukocytholdige opløsninger farveomslag fra farveløs mod dybblå.
26
DK 161340 B
Tabel 3
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat _____I_J_K_
Sammenligningsrecept uden aktivator 300 180 60 1. Pyridin 220 140 45 5 2. 2-brompyridin 205 130 40 3. 2,6-dimethy1-4-ethoxy= pyridin 160 110 40 4. quinolin 185 90 35 5. 2-methylquinolin 190 105 40 1Q 6. 7-isopropylquinolin 165 80 35 7. 3-methoxyquinolin 150 75 30 8. 2-methyl-6-bromquinolin 170 80 40 9. 5,7-dibrom-8-methoxyquinolin 195 90 40 10. isoquinolin 150 80 40 15 11. 3-propylisoquinolin 170 75 35 12. 7-methylisoquinolin 145 105 30 13. 1-chlorisoquinolin 180 90 35 14. l-methoxy-3-chloriso= quinolin 155 95 40 20 15. l-chlor-4-methyl-5-methoxy= isoquinolin 190 80 35 16. benzo[b]-quinolin =acridin 170 90 40 17. benzo-[c]-quinolin 25 = phenanthridin 130 110 35 18. 2-ethylphenanthridin 160 10Q 30 19. 2-methoxyphenanthridin 145 120 35 20. benzo-[f]-quinolin 130 105 35 21. benzo-[g]-quinolin 140 130 45 30 22. 2,4-dimethylbenzo-[g] - quinolin 135 110 40 23. benzo-[h]-quinolin 110 70 40 24. 1,7-phenanthrolin 165 130 45 25. 2-methy1-1,7-phenanthrolin 130 110 45 35 26. 2,8-dimethyl-l,7-phen= anthrolin 145 105 40 27. 4,7-phenanthrolin 12Q 120 35 28. 3-methyl-4,7-phenanthrolin 145 95 40 29. 3,8-dimethyl-4,7- phenanthrolin 160 80 35 27
DK 161340 B
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
I J K
30. 1,10-phenanthrolin 170 90 35 5 31. 2,9-dimethyl-l,l°" phenanthrolin 145 120 45 32. 4-azafluoren 90 60 35 33. kinin 150 90 30 34. cinchonidin 125 85 30 1Q 35. cuprein 160 95 35 36. 2-[4"-methoxy-phenyl]- vi-nylpyr idin-(21) 95 90 45 37. 2-[4"-(Ν,Ν-dimethyl-amino)- phenyl]-vinylpyridin-(21) 110 110 45 15 38. bis-[2-(phenyl)-vinyl]-py= ridin-(2',4') 120 95 40 39. 2-[naphthyl-(1")]-viny1= pyridin-(2') 105 90 40 40. 2-[pyridyl-(2")]-viny1= 20 pyridin-(2') 80 80 30 41. 2-[pyridyl-(4")]-vinyl= pyridin-(2*) 60 50 25 42. 2-[pyridyl-(3")]-vinyl= pyridin-(3') 75 70 30 25 43. 2-[pyridyl-(3")]-viny1= pyridin-(4') 95 90 25 44. 2-[thienyl-(2")]-vinyl= pyridin-(4') 80 75 35 45. imidazol 175 120 35 30 46. 1-phenyl-imidazol 180 140 40 47. histamin 230 150 45 48. N-a-acetyl-histamin 205 130 40 49. (imidazolyl-4)-eddikesyre 220 150 50 50. L-histidin 195 120 45 35 51. N-a-acetyl-L-histidin 165 110 40 52. hexanol-(l) 95 95 30 53. octanol-(l) 90 100 30 54. nonanol-(l) 90 80 30 55. decanol-(l) 80 60 25 40 56. dodecanol-(1) 75 90 25 57. pentadecanol-(1) 100 80 30 28
DK 161340 B
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
for substrat
I J K
58. heptadecanol-(1) 80 105 35 5 59. octadecanol-(1) 90 95 40 60. nonadecanol-(1) 85 120 40 61. docosanol-(1) 85 110 40 62. cyklohexen-(1)-ol-(1) 95 130 35 63. cyklononanol 80 120 35 1Q 64. cyklodecanol 80 115 40 65. cykloheptadecanol 90 130 40 66. geraniol 75 85 30 67. nerol 90 70 35 68. linalool 80 80 30 15 69. nerolidol 105 90 25 70. cis-octadecen-(9)-ol-(1) 110 115 25 71. hexandiol-(1/6) 130 130 45 72. octandiol-(1,8) 115 125 40 73. nonandiol-(1,9) 140 130 45 20 74. decandiol-(1r10) 130 115 50 75. tetrakaliuiuhexacyano= ferrat-II 230 160 50 76. trinatriumoctacyano= molybdat-V 205 150 50 25 77. trikaliumpentacyano= nitrosylferrat-II 180 150 45 78. trikaliumpentacyano=
nitrosylmanganat-I 210 145 4Q
79. pentakaliumpentacyano= 50 nitrosylvanadat-I 220 155 45
Lignende forsøgsresultater opnås med andre indoxylestere ifølge DE-offentliggørelsesskrift nr. 28 54 9 87 og/eller leukocyt-holdig urin i stedet for standard-opløsningen af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk kogsaltopløsning.
29
DK 161340 B
Eksempel 4
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schull 23 SL) imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres så ved 60°C eller stuetemperatur.
5 Opløsning 1
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 9,0, i vand.
Opløsning 2 _3
Diacetyl-3',5',3", 5"-tetrabromphenylsulfonphthalein, 10 10 mol/liter i acetone.
Aktivatorerne tilsættes enkeltvis eller som blanding alt efter opløseligheden til opløsning 1 og/eller opløsning 2, således at der ved de enkelte aktivatorer med de almene formler I, II og IV fås enkeltkoncentrationer på _2 15 10 mol/liter imprægneringsopløsning,ved aktivatorerne med den almene formel III fås slutkoncentrationer på 2% (vægt/volumen)"af imprægneringsopløsningen.
I tabel 4 er anført reaktionstiderne, som forløber fra ned-dypningen af teststrimlerne i en standardopløsning af 5000 20 leukocytter/μΐ isotonisk kogsaltopløsning til den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiden af recepten uden aktivatortilsætning.
Testpapirets farve andres efter neddykning i leukocytholdige opløsninger fra farveløs mod dybblå.
30
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
Tabel 4
DK 161340 B
Sammenligningsrecept uden aktivatorer . . 16.0 1. 2-methylquinolin 110 5 2. tetradecanol-(1) 90
Aktivatorer 1. og 2. 6Q
3. 1,7-phenanthrolin 80 4. tetrakaliumhexacyanoferrat-II 140
Aktivatorer 3. og 4. 70 10 5. cinchonin 90 6. 2-[phenyl]-vinylpyridin-(2') 105
Aktivatorer 5. og 6. 65
Lignende forsøgsresultater fås med leukocytholdig urin i stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/μΐ 15 isotonisk kogsaltopløsning.
Eksempel 5 På den i eksempel 4 beskrevne måde fremstilles testpapir med følgende opløsninger:
Opløsning 1
DK 161340 B
31
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0, i vand.
Opløsning 2 5 2-methoxy-4-rdtrobenzenazo -4' - [1 * - (N-benzyloxycarbonyl-L- alanyloxy)-naphthalin] -3 10 mol/liter i acetone.
Testpapirets farve ændres ved neddypning i leukocytholdige opløsninger fra lys orange mod rød.
10 i tabel 5 er angivet forsøgsresultaterne. Der er angivet reaktionstider, som forløber fra neddypningen af teststrimler i en standardopløsning af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk kogsaltopløsning til den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiden 15 åf recepten uden aktivatortilsætning.
32
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
Tabel 5
DK 161340 B
Sammenligningsrecept uden aktivatorer 80 1. benxo-[b]-quinolin 5 = acridin 60 2. cis-octadecen-(9)-ol-(1) 40
Aktivatorer 1. og 2. 30 3. benzo-[h]-quinolin 50 4. kinin 55 1Q Aktivatorer 3. og 4. 35 5. 1,7-phenanthrolin 45 6. farnesol 30
Aktivatorer 5. og 6. 25
Lignende forsøgsresultater opnås med leukocytholdig urin 15 i stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk kogsaltopløsning.
Eksempel 6 På den i eksempel 4 beskrevne måde fremstilles testpapir med følgende opløsninger:
Natriumtetraborat-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0, i vand.
Opløsning 2
Opløsning 1
DK 161340 B
33 3-[N-(2'-nitrobenzensulfenyl)-L-alanyloxy]-indol _3 5 10 mol/liter i acetone.
Testpapir ændrer farve fra gul mod grøn ved neddypning i leukocytholdige opløsninger.
Forsøgsresultaterne er angivet i tabel 6. Der er anført reaktionstiderne, som forløber fra neddypningen af test-10 strimlerne i en standardopløsning af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk kogsaltopløsning til den først tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiden af recepten uden aktivatortilsætning.
34
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
Tabel 6
DK 161340 B
Sammenligningsrecept uden aktivatorer 100 1. quinolin 80 2. cyklododecanol 70
Aktivatorer 1. og 2. 55 3. 2-[fury1-(2")]-vinylpyridin-(2') 75 4. Phytol 50
Aktivatorer 3. og 4. 40 5. 4f7-phenanthrolin 85 6. tetrakaliumhexacyanoferrat-II 90
Aktivatorer 5. og 6- 70
Lignende forsøgsresultater opnås med leukocytholdigt urin i stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/yl isotonisk kogsaltopløsning.
Eksempel 7 På den i eksempel 4 beskrevne måde fremstilles testpapir med følgende opløsninger:
Natriumtetraborat-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0/ i vand.
Opløsning 2 35
Opløsning 1
DK 161340 B
3-[N-(benzoyl)-D,L-alanyloxy]-indol _3 5 10 mol/liter i acetone.
Ved neddypning af testpapir i leukocytholdige opløsninger ændres farven fra farveløs til blå.
Forsøgsresultaterne er angivet i tabel 7. Der er angivet reaktionstiderne, som hengår fra neddypningen af teststrim-10 ler i en standardopløsning af 5000 leukocytter/yl isotonisk kogsaltopløsning, indtil den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiden af recepten uden aktivatortilsætning.
Tabel 7 36
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
DK 161340 B
Sammenligningsrecept uden aktivatorer 90 1. 2-[phenyl]-vinylpyridin-(2') 70 5 2. hexadecanol-(1) 55
Aktivatorer 1. og 2. 40 3. 2-[pyridyl-(4")]-vinylpyridin-(41) 40 4. linalool 50
Aktivatorer 3. og 4. 30 10 5. cinchonin 75 6. dinatriumpentacyanonitrosylferrat-II 60
Aktivatorer 5. og 6. 40
Der opnås lignende forsøgsresultater med leukocytholdig urin i stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/jil 15 isotonisk kogsaltopløsning.
Eksempel 7a På den i eksempel 4 beskrevne måde fremstilles testpapir med følgende opløsninger.
Natriumtetraborat-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0, i vand.
Opløsning 2
Opløsning 1
DK 161340 B
37 3-[N~(toluen-4'-sulfonyl]-L-alanyloxy]-indol _3 5 10 mol/liter i acetone.
Ved neddypning af testpapir i leukocytholdige opløsninger ændres farven fra farveløs til blå.
Forsøgsresultaterne er angivet i tabel 7a. Der er angivet reaktionstiderne, som forløber fra neddypningen af test-10 strimlerne i en standardopløsning på 5000 leukocytter/μΐ isotonisk kogsaltopløsning til den første tydelige farve-reaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiden af recepten uden aktivatortilsætning.
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
Tabel 7a 38
DK 161340 B
Sammenligningsrecept uden aktivatorer 24 1. kinin 22 5 2. dinatriumpentacyano= nitrosylferrat-II 15 3. decanol-(l) 18
Aktivatorer 1., 2. og 3. 6
Lignende forsøgsresultater opnå med leukocytholdig urin i 10 stedet for standardopløsningen af 5000 leukocytter/yl iso- tonisk kogsaltopløsning.
Eksempel 8
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schull 23 SL) imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og derpå tørres ved 15 60°C eller stuetemperatur.
Opløsning 1
Laurylpyridiniumchlorid; 0,2¾ i tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 7/0, i vand.
20 Opløsning 2
Thiazol-2-azo-4'-[11-(N-henzyloxycarbonyl-L-alanyloxy)- naphthalin] 10~3 mol/liter i acetone.
39
DK 161340 B
Aktivatortilsætninger og forsøgsgennemførelse sker som i eksempel 1.
Testpapiret ændres ved neddypning i leukocytholdige opløsninger farve fra rosa til violet.
I tabel 8 er forsøgsresultaterne anført. Der er anført reak-tiderne, som forløber fra neddypningen af teststrimlerne i en standardopløsning af 5000 leukocytter/yl isotonisk kogsaltopløsning til den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiderne af de pågældende recepter uden aktivatortilsætning.
Tabel 8
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
Sammenligningsrecept uden aktivator 70 1. pyridin 45 2. quinolin 40 3. benzo-[b]-quinolin = acridin 35
4. 1,10-ph.enanthrolin 4Q
5. 4-azafluoren 30 6. kinin 35 7. 2-[pyridyl-(4")3-vinylpyridin-(4'} 30 8. imidazol 50 9. dodecanol 30 10. phytol 25 11. dinatriumpentacyanonitrosylferrat-ll 60
Lignende forsøgsresultater opnås med andre i eksemplerne 1-7 nævnte substrater og aktivatorer og/eller andre sædvanlige befugtningsmidler.
40
DK 161340 B
Eksempel 9
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schull 23 SL) imprægneres efter hinanden med følgende opløsninger og tørres derpå ved 60°C eller stuetemperatur.
5 Opløsning 1
Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 7,0, i vand.
Opløsning 2
Thiazol-2-azo-l'-[21-(N-benzyloxycarbonyl-L-alanyloxy)-10 naphthalin], _o _3 10 mol/liter og zinkacetatdihydrat, 10 mol/liter i acetone.
Aktivatortilsætninger og forsøgsgennemførelse skete som i eksempel 1.
15 Testpapiret ændrer ved neddypning i leukocytholdige opløsninger farve fra rosa til blåviolet.
tabel 9 er angivet forsøgsresultaterne. Der er angivet reaktionstiderne, som forløber fra neddypning af teststrimler i en standardopløsning af 5QQQ leukocytter/pl isotonisk kog-20 saltopløsning til den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiderne af de pågældende recepter uden aktivatortilsætning.
41
Aktivatorer Reaktionstider i sek.
Tabel 9
DK 161340 B
Sammenligningsrecept uden aktivatorer 65 5 1. pyridin 50 2. quinolin 45 3. benzo-[b]-quinolin 40 = acridin 4. 1,10-phenantrholin 30 5. 4-azafluoren 35 6. kinin 30 7. 2-[pyridyl-(4'1)]-vinyl= pyridin-(4') 35 8. imidazol 45 15 9, dodecanol 25 10. phytol 30 11. dinatriumpentacyanonitrosyl= ferrat-II 50
Lignende forsøgsresultater opnås med andre azofarvestofestere 20 ifølge DE patentansøgning P 28 36 644.1 med andre i eksemplerne 1-7 nævnte aktivatorer og/eller andre sædvanlige kompleks-dannere.
Eksempel 10
Filterpapir (f.eks. Schleicher & Schiill 23 SL) imprægneres 25 efter hinanden med følgende opløsninger og tørres så ved 60°C eller stuetemperatur.
Opløsning 1 -2
Kaliumbromat 10 mol/liter i natriumtetraborat-HCl-puffer, 0,2 mol/liter, pH 8,0, i vand.
Opløsning 2 42
DK 161340 B
-O
3-[N-formyl-L-alanyloxy]-indol, 10 mol/liter i acetone.
Aktivatortilsætninger og forsøgsgennemførelse skete som i eksempel 1.
5 Testpapiret ændrer ved neddypning i leukocytholdige opløsninger farve fra farveløs til blå.
I tabel 10 er angivet forsøgsresultaterne. Der er angivet reaktionstiderne, som forløber fra neddypning af teststrimler i en standardopløsning af 5000 leukocytter/μΐ isotonisk kog-10 saltopløsning til den første tydelige farvereaktion. Som referenceværdi tjener reaktionstiderne for de pågældende receptor uden aktivatortilsætning.

Claims (6)

  1. 30 R hvori r!’ betegner hydrogen, en lavere alkylgruppe eller en eventuelt med en hydroxy- eller en acylgruppe substitueret phenylrest, og r2> betegner hydrogen, en amino-lavere-alkyl-, N-lavere-35 acyl ami no-1avere-al kyl - eller en lavere alifatisk, eventuelt umættet carboxyl syrerest eller en eventuelt ved nitrogenatomet acyleret lavere alifatisk α-aminosyrerest, DK 161340 B c) Alkoholer med den almene formel III _ X-A-OH (III) O hvori X betegner hydrogen eller en hydroxygruppe, og A en ligekædet eller forgrenet hydrocarbonrest, som er mættet eller umættet, cyklisk eller acyklisk og indeholder 1-30, fortrinsvis 5-22 carbonatomer i acyklisk binding og 3-20, fortrinsvis 6-17 carbonatomer i en cykl i sk binding, d) Metalkomplekser med den almene formel IV 15 Dm[B(CN)n(N0)p] (IV) hvori 20 D betegner en alkalimetalion, B betegner en tungmetalion, m betegner et helt tal fra 2 til 5, n betegner et helt tal fra 4 til 8, og __ p er nul eller 1, 25 hvorhos tallet m fremgår af tungmetalionens valens og tallet n.
  2. 2. Diagnostisk middel ifølge krav 1, kendetegnet 30 ved, at der som yderligere hjælpestoffer anvendes i og for sig kendte puffere, kompleksdannere, befugtningsmidler, oxidationsmidler, filmdannere, galeniske til sætn i ngsstoffer og/el-ler strukturdannende stoffer.
  3. 3. Diagnostisk middel ifølge krav 1 eller 2, kendeteg net ved, at der som sædvanlige esterase- og/eller protease-substrater anvendes sulfonphthaleinestere med den almene formel A DK 161340 B . R3" R2” i R1,,-0\ As. / O—RJ'" ^ C-0 (A) I 3 2j ' R4«snJX>S°2 5 7M r4^W^r4,, 10 . . ^4„ hvori Rx" betegner en eventuelt med halogen eller en lavere alkoxygruppe substitueret carboxylsyrerest, en med en i pep- tidkemien sædvanlig nitrogenbeskyttelsesgruppe forsynet ami- 2 nosyre- eller peptidrest, R 11 betegner et halogenatom eller en 3 4 15 lavere alkylgruppe, R ” og R ", der kan være ens eller forskellige, hver betegner et hydrogen- eller et halogenatom, azofarvestofestere med den almene formel B A’-N=N-B1(OR) (Bl, n 20 hvori A1 betegner en 5- eller 6-leddet; eventuelt benzoanel-leret rest med 1-2 heteroatomer fra gruppen N, S, O, som eventuelt en eller flere gange kan være substitueret med halogen, lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper, eller betegner 25 en 1-3 . gange med lavere alkyl-, lavere alkoxy-, nitro-, sulfonat- og/eller acylaminogrupper substitueret phenylrest, B1 betegner en eventuelt en til to gange med sulfonat-, lavere alkoxy- og/eller lavere alkoxypolyalkylenoxygrupper substitueret benzen-, naphthalin- eller guinolinrest, R be-30 tegner en carboxylsyrerest eller en med en i peptidkemien sædvanlig nitrogenbeskyttelsesgruppe forsynet aminosyre- eller peptidrest, og n betegner tallet 1 eller 2, eller indoxylestere med den almene formel C 35 1 rZ,„ j. .o—A"-B” R4 DK 161340 B hvori Ri'1', R2,'', R3'*', R^''·, som kan være ens eller forskellige, hver betegner hydrogen eller halogen, en lavere alkyl-, lavere alkoxy-, phenyl- eller naphthyl-, phenyl-1avere-alky1 - eller napthy1 -1avere-a1ky1 -, phenyl- eller g naphthyl-1avere-alkoxy-hydroxy-, en carboxy-, en carboxy-1avere-alkoxy-, en phenyl- eller naphthy1 -1avere-a1koxycarbo-nyl-, en phenyl- eller naphthy1 -1avere alkoxycarbonyl-1avere-alkoxy-, en nitro- eller en lavere acylaminogruppe, eller til enhver tid to nabosubstituenter betegner en eventuelt med ha-logen substitueret benzoanelleret rest, X betegner et svovlatom eller en eventuelt med en lavere alkyl-, en aryl-, en aralkyl- eller en acylrest substitueret iminogruppe, A'' betegner en aminosyre- eller en peptidrest, B'1 betegner en i peptidkemien sædvanlig og derfra afledt nitrogenbeskyttelses-15 gruppe.
  4. 4. Fremgangsmåde ti 1 fremstil ling af diagnostiske midler ifølge ethvert af kravene 1-3, kendetegnet ved, at man på i og for sig kendt måde imprægnerer en sugedygtig bærer ^ med det sædvanlige esterase- og/eller proteasesubstrat, de sædvanlige yderligere hjælpestoffer og aktivatorerne.
  5. 5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at imprægneringen af den sugedygtige bærer sker i to trin. 25
  6. 6. Anvendelsen af diagnostisk middel ifølge ethvert af kravene 1-3 til påvisning af leukocytter i legemsvæsker, specielt i urin. 30 35
DK063480A 1979-02-14 1980-02-14 Diagnostisk middel til paavisning af leukocytter i legemsvaesker, fremgangsmaade til dets fremstilling samt dets anvendelse DK161340C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2905531 1979-02-14
DE19792905531 DE2905531A1 (de) 1979-02-14 1979-02-14 Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK63480A DK63480A (da) 1980-08-15
DK161340B true DK161340B (da) 1991-06-24
DK161340C DK161340C (da) 1991-12-02

Family

ID=6062854

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK063480A DK161340C (da) 1979-02-14 1980-02-14 Diagnostisk middel til paavisning af leukocytter i legemsvaesker, fremgangsmaade til dets fremstilling samt dets anvendelse

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4299917A (da)
EP (1) EP0014929B1 (da)
JP (1) JPS581920B2 (da)
AR (1) AR223025A1 (da)
AT (1) ATE543T1 (da)
AU (1) AU519912B2 (da)
BR (1) BR8000886A (da)
CA (1) CA1148073A (da)
CS (1) CS216523B2 (da)
DD (1) DD149121A5 (da)
DE (2) DE2905531A1 (da)
DK (1) DK161340C (da)
ES (1) ES488402A0 (da)
FI (1) FI69869C (da)
HK (1) HK15285A (da)
HU (1) HU182102B (da)
PL (1) PL125796B1 (da)
PT (1) PT70813A (da)
RU (1) RU1784097C (da)
SG (1) SG79484G (da)
YU (2) YU45527B (da)
ZA (1) ZA80765B (da)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3005845A1 (de) * 1980-02-16 1981-09-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Aminosaeure- und peptidester von leuko-indoanilinen, verfahren zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende mittel zum nachweis proteolytischer enzyme
DE3017721A1 (de) * 1980-05-09 1981-11-26 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate
DE3118381A1 (de) * 1981-05-09 1982-11-25 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mehrschichtiges testmittel zum nachweis einer komponente einer fluessigen probe
DE3211254A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens
US4499185A (en) * 1982-05-17 1985-02-12 Miles Laboratories, Inc. Test for esterase activity in a liquid sample
DE3309544A1 (de) * 1983-03-17 1984-09-20 Macherey-Nagel & Co Chemikalienhandel, 5160 Düren Teststreifen zum nachweis von leukozyten im harn
US4637979A (en) * 1984-04-06 1987-01-20 Miles Laboratories, Inc. Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent
US4657855A (en) * 1984-04-06 1987-04-14 Miles Laboratories, Inc. Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample
US4645842A (en) * 1984-04-06 1987-02-24 Miles Laboratories, Inc. Pyrrole compounds for detecting the presence of hydrolytic analytes
DE3413119A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
DE3413120A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
DE3413118A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
DD247808C2 (de) * 1984-04-09 1989-01-11 Dresden Arzneimittel Teststreifen zur aufnahme von blutzuckertagesprofilen und verfahren zu seiner herstellung
EP0182874B1 (en) * 1984-05-31 1993-10-20 Coulter Corporation A reagent system and method for identification, enumeration and examination of classes and subclasses of blood leukocytes
US4672029A (en) * 1984-12-06 1987-06-09 Eastman Kodak Company Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes
US5051358A (en) * 1987-05-07 1991-09-24 The Procter & Gamble Company Diagnostic methods for detecting periodontal diseases
GB8713951D0 (en) * 1987-06-15 1987-07-22 Dewar M H Enhanced chemiluminescent reaction
DE3732871A1 (de) * 1987-09-30 1989-04-20 Behringwerke Ag Chromogene substrate
US5192688A (en) * 1988-08-15 1993-03-09 Switzer Iii Robert C Histological analysis method
FR2657895A1 (fr) * 1990-02-05 1991-08-09 Inst Textile De France Materiau antiseptique a greffons complexes par des ions metalliques et procede de preparation.
US6046019A (en) * 1991-07-09 2000-04-04 Goumeniouk; Alexander P. Diagnostic kits and methods for making granulocyte cell counts
DE19500768C2 (de) * 1994-01-17 2003-11-20 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Phenanthren-Derivate und ihre Verwendung in flüssigkristallinen Mischungen
US5464739A (en) * 1994-08-22 1995-11-07 Bayer Corporation Composition method for determining the presence of leukocyte cells, esterase or protease in a test sample
CA2161574A1 (en) 1994-11-15 1996-05-16 James Noffsinger Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid
DE19651886A1 (de) * 1996-12-13 1998-06-18 Merck Patent Gmbh Mittel und Verfahren zur Bestimmung von hydrolytischen Enzymen
US6348324B1 (en) 1999-01-21 2002-02-19 Hypoguard America Limited Composition and device for detecting leukocytes in urine
US6528652B1 (en) 1999-01-21 2003-03-04 Chronimed Composition and device for detecting leukocytes in urine
US20040052928A1 (en) * 2002-09-06 2004-03-18 Ehud Gazit Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
US20070021345A1 (en) * 2003-06-30 2007-01-25 Ehud Gazit Peptides antibodies directed thereagainst and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
US7781396B2 (en) * 2002-01-31 2010-08-24 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Peptides directed for diagnosis and treatment of amyloid-associated disease
US6709868B2 (en) * 2002-05-20 2004-03-23 Portascience Inc. Method and apparatus for measuring white blood cell count
US20050260126A1 (en) * 2002-08-30 2005-11-24 Yukitsuka Kudo Diagnostic probes and remedies for diseases with accumulation of prion protein, and stains for prion protein
US7491699B2 (en) 2002-12-09 2009-02-17 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures and methods of generating and using the same
US20040126897A1 (en) 2002-12-19 2004-07-01 3M Innovative Properties Company Colorimetric sensors constructed of diacetylene materials
US6963007B2 (en) * 2002-12-19 2005-11-08 3M Innovative Properties Company Diacetylenic materials for sensing applications
EP2058275A1 (en) * 2003-01-07 2009-05-13 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Peptide nanostructures encapsulating a foreign material and method of manufacturing same
WO2005027901A1 (en) * 2003-09-25 2005-03-31 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Compositions and methods using same for treating amyloid-associated diseases
US7625707B2 (en) * 2003-10-02 2009-12-01 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Antibacterial agents and methods of identifying and utilizing same
WO2006006172A2 (en) * 2004-07-15 2006-01-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of anti-amyloid agents for treating and typing pathogen infections
US8568637B2 (en) * 2004-08-02 2013-10-29 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Method of forming a fiber made of peptide nanostructures
EP1793816B1 (en) * 2004-08-19 2012-01-04 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Compositions for treating amyloid associated diseases
US7786086B2 (en) * 2004-09-08 2010-08-31 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Peptide nanostructures containing end-capping modified peptides and methods of generating and using the same
EP1825268A2 (en) * 2004-12-17 2007-08-29 3M Innovative Properties Company Colorimetric sensors constructed of diacetylene materials
GB2426334A (en) * 2005-05-20 2006-11-22 Orion Diagnostica Oy Application of a reagent to a matrix material
US7504235B2 (en) * 2005-08-31 2009-03-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzyme detection technique
US8003399B2 (en) * 2005-08-31 2011-08-23 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Nitrite detection technique
US10004828B2 (en) * 2005-10-11 2018-06-26 Romat at Tel-Aviv University Ltd. Self-assembled Fmoc-ff hydrogels
US7879212B2 (en) * 2005-11-03 2011-02-01 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Peptide nanostructure-coated electrodes
JP2011504236A (ja) * 2007-11-20 2011-02-03 スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー ジアセチレンを含むポリマーセンサーを用いる細菌試料の分析方法
US9103796B2 (en) * 2007-12-14 2015-08-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Multi-layered devices for analyte detection
US11104933B1 (en) * 2016-03-22 2021-08-31 Cleu Diagnostics, Llc Compositions and methods for determining the presence of active leukocyte cells using an electrochemical assay
JP2019513238A (ja) * 2016-03-30 2019-05-23 クオリザイム・ダイアグノスティクス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コムパニー・コマンディットゲゼルシャフトＱｕａｌｉｚｙｍｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｇｍｂｈ Ａｎｄ Ｃｏ． Ｋｇ 創傷における微生物感染の検出
JP6902416B2 (ja) * 2016-07-05 2021-07-14 ライオン株式会社 睡眠評価用マーカー及びその用途

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3087794A (en) * 1960-05-23 1963-04-30 Miles Lab Chemical test for differentiating leucocytes from erythrocytes
NL126365C (da) * 1963-06-24
US3378463A (en) * 1965-06-22 1968-04-16 Army Usa Method of measuring enzyme activity
GB1128371A (en) * 1965-10-04 1968-09-25 Miles Lab Diagnostic composition
CH506792A (de) * 1968-09-20 1971-04-30 Merck Ag E Neues Mittel und Verfahren zur Lipasebestimmung
US3715325A (en) * 1970-10-02 1973-02-06 Miles Lab Insoluble polymeric diazonium salt chromogen
CA1007555A (en) * 1971-08-16 1977-03-29 Robert E. Smith Carbobenzoxydiglycyl-1-arginyl-4-methoxy-2-naphthylamide and process for determining enzyme concentrations
DE2235152C2 (de) * 1972-07-18 1975-07-10 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Blut und anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen in Körperflüssigkeiten
AR204182A1 (es) * 1973-12-20 1975-11-28 Boehringer Mannheim Gmbh Tira de ensayo para la comprobacion de substancias de actividad peroxidica en los liquidos del cuerpo
JPS5342438B2 (da) * 1974-05-20 1978-11-11
US3874852A (en) * 1974-07-05 1975-04-01 Coulter Diagnostics Inc Reagent and method for determining leukocytes and hemoglobin in the blood
CS176664B1 (da) * 1975-02-14 1977-06-30
US4045290A (en) * 1975-02-28 1977-08-30 Princeton Biomedix Incorporated Diagnostic method and compounds for use therewith
JPS6010261B2 (ja) * 1975-07-31 1985-03-15 和光純薬工業株式会社 潜血検出用組成物
JPS5263794A (en) * 1975-11-21 1977-05-26 Shionogi Seiyaku Kk Test piece for latent blood
US4206280A (en) * 1975-12-24 1980-06-03 Hoffmann-La Roche Inc. Determination of acid phosphatase
GB1530238A (en) * 1976-05-04 1978-10-25 Du Pont Method of determining lipase activity using a triglyceride reagent and method for preparing that reagent
JPS584560B2 (ja) * 1976-06-01 1983-01-26 三共株式会社 鉄錯塩を用いた酵素活性測定法
JPS5389492A (en) * 1977-01-13 1978-08-07 Uni Arabama Method and reagent for determination of carxylic esterhydrolase
JPS6058746B2 (ja) * 1977-09-22 1985-12-21 中外製薬株式会社 高級脂肪酸エステル
US4184923A (en) * 1977-11-03 1980-01-22 Eastman Kodak Company Reduction of gentisic acid interference in analytical elements
US4212939A (en) * 1977-11-22 1980-07-15 The University Of Alabama Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination
DE2826965A1 (de) * 1978-06-20 1980-01-17 Boehringer Mannheim Gmbh Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene
US4251223A (en) * 1979-12-17 1981-02-17 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests
US4251222A (en) * 1979-12-17 1981-02-17 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests

Also Published As

Publication number Publication date
HK15285A (en) 1985-03-15
AR223025A1 (es) 1981-07-15
YU45527B (en) 1992-05-28
DD149121A5 (de) 1981-06-24
ATE543T1 (de) 1982-01-15
JPS55108300A (en) 1980-08-20
CS216523B2 (en) 1982-11-26
DE2905531A1 (de) 1981-01-08
PL221884A1 (da) 1980-11-03
AU5535980A (en) 1981-01-15
ES8102726A1 (es) 1981-02-16
FI800444A (fi) 1980-08-15
YU38680A (en) 1989-02-28
EP0014929B1 (de) 1982-01-06
AU519912B2 (en) 1982-01-07
US4299917A (en) 1981-11-10
PL125796B1 (en) 1983-06-30
CA1148073A (en) 1983-06-14
EP0014929A1 (de) 1980-09-03
FI69869B (fi) 1985-12-31
DK63480A (da) 1980-08-15
BR8000886A (pt) 1980-10-21
ZA80765B (en) 1981-03-25
JPS581920B2 (ja) 1983-01-13
YU212888A (en) 1990-04-30
SG79484G (en) 1985-08-16
HU182102B (en) 1983-12-28
PT70813A (de) 1980-03-01
FI69869C (fi) 1986-05-26
ES488402A0 (es) 1981-02-16
RU1784097C (ru) 1992-12-23
DE3060134D1 (en) 1982-02-25
DK161340C (da) 1991-12-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK161340B (da) Diagnostisk middel til paavisning af leukocytter i legemsvaesker, fremgangsmaade til dets fremstilling samt dets anvendelse
US4496722A (en) Reporter compounds
Anbu et al. Recent developments in molecular sensor designs for inorganic pyrophosphate detection and biological imaging
KR100259144B1 (ko) 포스파타제와의 반응에 의해 화학발광을 생성하는 화합물, 조성물 및 방법
JP2922003B2 (ja) 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法の改良
US5534416A (en) Fluorescent viability assay using cyclic-substituted unsymmetrical cyanine dyes
CA1211349A (en) Composition, analytical element and method for the detection of bacteria
JPS583680B2 (ja) タイエキチユウノ カサンカセイサヨウブツシツオ ケンシユツスルタメノ シケンヘン
JPS61182576A (ja) 置換キノン電子移動剤の分析測定への使用
JPH04213064A (ja) 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法
NO164866B (no) Reagens og forsoeksinnretning til bestemmelse av tilstedevaerelsen av leukocytter, esterase og protease i en proeve.
AU617097B2 (en) Compounds, reagents and procedures for determining cations
Rohini et al. 8‐Hydroxyquinoline Fluorophore for Sensing of Metal Ions and Anions
US5141855A (en) Signal amplifying cobalt (III) redox reagents and methods for the determination of analytes in aqueous fluids
US4442033A (en) Azo dyestuff for use as a chromogen in detecting leukocytes
JPH10130247A (ja) レドックス活性化合物およびその使用
US4988616A (en) Method for detecting hydrogen peroxide employing triaryl- and trihetarylmethane derivatives as redox indicators
Jin et al. Tracking bacterial infection of macrophages using a novel red-emission pH sensor
US8968997B2 (en) Benzoxazole-based fluorescent metal ion indicators
Zhao et al. A multifunctional fluorescent probe based on Schiff base with AIE and ESIPT characteristics for effective detections of Pb2+, Ag+ and Fe3+
US5310888A (en) Arylazo chromoionophores
CA3190731A1 (en) Conjugates including a detectable moiety
JP2017530098A (ja) レドックス指示薬
PL213316B1 (pl) Sposób analizy kolorymetrycznej, odczynnik i próbka do badan
EP1466987B1 (en) Method of colorimetry

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired