JPS583680B2 - タイエキチユウノ カサンカセイサヨウブツシツオ ケンシユツスルタメノ シケンヘン - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、動物体液中の極く僅少量の血液及び他のペル
オキシダーゼ作用物質を検出するための敏感な迅速試験
に関する。

肉眼ではもはや確認不可能な少量の、尿、糞便又は嘔吐
物中の血液の検出は胃、腸及び尿路中の出血の診断に非
常に重要である。

そのような出血は例えば相応する器官の腫瘍、潰瘍又は
炎症により起る。

それと共に特定の溶血性毒素の作用下に尿及び血漿中に
ヘモグロビンが遊出しうる。

血液及びヘモグロビンはペルオキシダーゼ作用を有し、
即ちそれらはヒドロペルオキシドから酸素を遊離しかつ
これを特定の受容体に運搬する。

他のペルオキシダーゼ作用物質は白血球及び細菌中に存
在する。

これらの物質の検出は腎及び尿路の疾患及び感染の診断
に重要である。

同様にペルオキシダーゼ作用をするミオグロビンは例え
ば心臓硬塞後に尿に見出される。

特に、膀胱結石又は腎臓結石を患うと、屡々血尿を伴う
。

これらのすべての物質を敏感に検出するにはそれらのペ
ルオキシダーゼ作用が特に適当である。

この場合、ヒドロペルオキシドから遊離させる酸素は色
原体に運搬され、色原体は色素に酸化されるので、それ
がペルオキシダーゼ作用物質の存在を呈示する。

特に血液を検出するのにこの反応は従来医学的及び法医
学的分析で重要である。

一般に、それは試験管反応又は斑点反応として実施され
、その際にヒドロペルオキシドとして殆んどの場合に過
酸化水素が使用される。

殊に、色原体としてはベンジジン、ｏ−トルイジン又は
ロイコ・マラカイト縁が適用される。

迅速試験は吸引性担体、たいていの場合、検出反応に必
要なすべての試薬が含浸されておりかつ体液中に単に浸
漬することにより着色反応を示す紙である。

最近、迅速試験により達成された大きな意義により、こ
の試験は既に度々体液中の血液を検出するためにも展開
された。

血液を検出する際には迅速試験に対する敏感性が決定的
に重要であり、更にペルオキシダーゼ反応に余り敏感に
反応しない白血球及び細菌を捕えることも望まれている
ので、公知の検出反応の敏感性を添加物により高めるこ
とが既に度々試みられた。

それ故、例えばドイツ国特許出願公告第１２４２９０５
号公報には、活性添加物として一定のキノリン誘導体、
殊にキニンを含有する試験紙が記載されている。

敏感性が前記の添加物により著しく高められることが述
べられているが、実験によると実際にはそのように改良
された試験片で白血球及び細菌をも検出することは不可
能である。

基体キノリンの血液検出に対する活性化作用は既に長い
間知られている〔“Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ ｆ．ｇｅ
ｒｉｃｈｔｌ． Ｍｅｄ．”（ツアイトウシュリフトウ
・フユアゲリヒトウリツヒエ メデイツイン）、１２巻
、２１６頁（１９２８年）〕が、これ並びにその簡単な
誘導体は液状もしくは揮発性であり、それ故本発明によ
れば使用不可能である。

ところで、活性剤として一般式■： 〔式中Ｒ１は水素又はメチル基を表わしかつｃ，（ｄ、
ｅ）、ｆ及びｇの位置の少なくとも１つの位置でベンゼ
ン環及び（又は）ピリジン環が隣接しており、その際に
隣接している２つの環は同時にそれぞれ項窒素原子を有
していてはならずかつ−Ｈ及びＲ１の位置以外で低級ア
ルキル基により置換されていてよく、それらは一緒にな
ってヒドロ芳香族環を形成することもできる。

〕の芳香族化合物を使用する場合に、従来達成不可能で
あった敏感性を有する、ペルオキシダーゼ作用物質を検
出するための試験片が得られることが判明した。

その際に（ｄ，ｅ）とは、隣接環が常にこの両者の位置
を包含することを現わす。

Ｒ１が水素原子を表わす化合物は優れている。

低級アルキル基とは炭素原子１〜４個を有するアルキル
基であり、その際に２つのアルキル基が一緒になって１
つのヒドロ芳香族環を形成する場合に５−及び６一員環
が優れている。

次の実施例で一般式■に包含される最も重要な化合物群
類を挙げる。

それぞれの化合物はすべて文献から公知である。

１．ベンゾキノリン １．１． ベンゾ〔ｃ〕キノリン（フエナントリジン）
２−メチルフエナントリジン ６−メチルフエナントリジン ２−エチルフエナントリジン １．２． ベンゾ〔ｆ〕キノリン ３−メチルベンゾ〔ｆ〕キノリン １，３−ジメチルベンゾ〔ｆ〕キノリン １，２−テトラエチレンベンゾ〔ｆ〕キノリン１，２−
トリメチレンベンゾ〔ｆ〕キノリン１．３． ベンゾ〔
ｇ〕キノリン ４−メチルベンゾ〔ｇ〕キノリン ２，４−ジメチルベンゾ〔ｇ〕キノリン ２． ジベンゾ−キノリン ２．１． ジベンゾ〔ｃ，ｆ〕キノリン（ベンゾ〔α〕
フエナントリジン） ２．２． ジベンゾ〔ｃ，ｄ，ｅ〕キノリン（４−ア
ザピレン、テベニジン） ３． ピリドキノリン ３．１． ピリド〔２，３−ｆ〕キノリン（１．７フエ
ナントロリン） ２−メチル−１，７−フエナントロリン ２，８−ジメチル−１，７−フエナント ロリン ３．２． ピリド〔３，２−ｆ〕キノリン（４，７−フ
エナントロリン） ３−メチル−４，７−フエナントロリン ３，８−ジメチル−４，７−フエナント ロリン １，３，８，１０−テトラメチル−４， ７−フエナントロリン ３．３． ピリド〔２，３−ｇ）キノリン（１，６−ア
ントラゾリン） ２，７−ジメチル−１，６−アントラゾ リン 従って、本発明の目的は、ヒドロペルオキシド及び少な
くとも１つの色原体で含浸させる吸引性担体から成る、
動物体液中のペルオキシダーゼ作用物質を検出するため
の試験片であり、これは担体が活性剤として付加的に一
般式■の化合物を含有することを特徴とする。

本発明の他の目的は、ペルオキシダーゼ作用物質を検出
するための試験片の製造に■式の化合物を使用すること
である。

活性剤として知られているキノリンを本発明により変換
することによって全く著しい作用上昇が達せられること
を予測することはできなかった。

本発明の重要なことは、キノリン系の特定な位置に隣接
させるだけで活性度上昇が達成されるという事実である
。

従って、例えばキノリンの〔ｂ〕−及び〔ｈ〕−位に隣
接させる場合、つまりアクリジン及びベンゾ−〔ｈ〕−
キノリンの場合にキノリンに比較して活性度低下が惹起
される。

本発明による有効作用をほとんど説明することはできな
いが、ペルオキシダーゼ作用物質との錯体形成に依るも
のと予測する場合、例えば強力な錯形成体として知られ
ているｏ−フエナントロリンは強力な活性化作用を呈示
するはずである。

しかしながらこれは当てはまらず、これに反してｍ−及
びｐ−フエナントロリンが非常に有効な活性剤である。

意外にも、化合物Ｉは例えば西洋わさびペルオキシダー
ゼのような植物産の過酸化酵素の敏感性を高めずに、特
異的に人間又は動物の器官のペルオキシダーゼ作用化合
物に作用する。

それ故、便又は嘔吐物中の白血球、血液、血液成分又は
細菌を植物性ペルオキシダーゼと共に選択的に検出する
ことができる。

この場合にミオグロビンはヘモグロビンとほぼ同様の敏
感性で検出される。

検出反応の敏感性は一般式■のそれぞれの化合物により
著しく高められるので、尿中で試験紙上で着色点として
観察可能になる個々の赤血球を検出することが可能であ
る。

従って、例えば試験紙をフエナントリジンによって製造
する場合に、尿１ｍｍ３当り５個の赤血球をなお明瞭に
検出することができる。

これは血液稀釈率１：１００００００に相当する。

本発明による活性剤を含まない場合、試験片は感度約１
５０〜２５０（赤血球／ｍｍ３）を有する。

一般式■に包含される全部の化合物が同じ程度の活性化
特性を有するのではないことは勿論である。

従って、例えば血液試験の敏感性を全く実際の要求に応
じて任意に調節することができる。

例えば活性剤として次に挙げた化合物を活性剤としての
それらの順序で添加する場合に、増加する活性度の試験
片が得られる： ｍ−フエナントロリン＜ｐ−フエナントロリン＜ベンゾ
（ｆ）−キノリン＜フェナントリジン。

アルキル置換により敏感性を更に変えることができ、従
って例えば核窒素原子に対するα−位のメチル置換基に
より活性化は若干低下するが、その場合には一般に活性
化上昇が達せられる。

従って、例えば２，８−ジメチル−１，７−フエナント
ロリンのような弱い活性剤を含有する試験紙の敏感性限
度は尿１ｍｍ３当り約５０の赤血球である。

本発明による活性剤は含浸溶液１００ｍｌ当り約０．０
５〜１．０ｇ、殊に０．２〜０．５ｇの量で使用する。

血液に対する迅速試験の他の成分は有機ヒドロペルオキ
シド、酸化指示薬、緩衝液及び表面活性剤並びに所望の
場合には例えば安定化用の燐酸トリモルホリドのような
燐アミド並びに他の助薬である。

ヒドロペルオキシドとしては、例えばクモールヒドロペ
ルオキシド又は２，５−ジメチルヘキサン−２，５−ジ
ヒドロペルオキシドが該当し、指示薬としてはｏ−トル
イジンのようなベンジン系列からのもの又はビス−（Ｎ
−エチル−キノリン−２）−アジン又は（Ｎ−メチル−
ベンズチアゾロン−２）−（１−エチル−３−フェニル
−５−メチル−トリアゾロン−２）−アジン（ドイツ国
特許第１６４８８４０号明細書による）のようなヘテロ
環式アジン系列からのものが該当する。

指示薬を含浸溶液１００ｍｌ当り０．０５〜５ｇ、殊に
０．２〜１．０ｇの量で使用する。

緩衝液としては、例えばクエン酸塩−、燐酸塩−、フタ
ル酸塩−又はコハク酸塩緩衝液が該当し、その際にｐＨ
値及び容量は、試験片を体液中に浸漬した後で試験片上
でｐＨ値４〜７、殊に５〜６になるように選択しなけれ
ばならない。

処方に僅少量（１００ｍｌ当り約０．０５ 〜０．５ｇ
のメタ燐酸ナトリウム又はエチレンジアミン−テトラ酢
酸のような錯形成体を供給することも有利であり、それ
により痕跡量金属により惹起されうる偽陽性反応が回避
される。

比較的多量の水溶性物質に基いてさる試験紙は流出する
傾向がありうるので、処方にメチルセルロース及び特に
ゼラチンのような粘稠剤を１００ｍｌ当り約０．５〜５
ｇで添加することは有利である。

湿潤剤としては、長鎖状の有機サルフエート又はスルホ
ネート、例えばドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム
、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム又はラウリル硫
酸ナトリウムを使用すると有利であり、これらは周知の
ように酸化せるｏ−トルイジンのようなラジカルカチオ
ンを安定化する。

本発明による試験片を製造するには、例えば濾紙、セル
ロース又は人造繊維フリースのような吸引性担体を易揮
発性溶剤中の試薬の溶液で含浸する。

これは２つの別工程で行なうと有利である。初めにヒド
ロペルオキシド、湿潤剤、緩衝液及び場合により粘稠剤
を含有する溶液で含没する。

その後で指示薬及び一般式■の活性剤の溶液で含没する
。

本発明による試験片を乾燥後条片に切断しかつ殊にプラ
スチックシ一トと微細な網状物の間にドイツ国特許第２
１１８４５５号明細書により封入する。

便中のペルオキシダーゼ作用物質を検出するには、本発
明による活性剤を試薬と共に耐水性膜中にドイツ国特許
公開公報第１５９８１５３号により装入加工することも
できる。

これは、試験片の表面を着色反応を測定するために簡単
にふき取ることによって清浄しうるという利点を有する
。

次に実施例につき本発明を詳細に説明する。

例１ 濾紙を相次いで次の溶液で含浸しかつ４０℃で乾燥する
： 溶液１ ｐＨ５．２５の１．２モル−クエン酸塩 ３５．０ｍｌ
緩衝液 エチレンジアミンテトラ酢酸、ジナ ０．１ｇトリウ
ム塩 スルホコハク酸ジオクチルナトリウ ２．０ｇム ２，５−ジメチルヘキサン−２．５ １．６ｇ−ジ
ヒドロペルオキシド（約７０％） 燐酸トルモルホリド １２．７ｇエタノ
ール ３０．Ｏｍｌ蒸留水
全量１００．０ｍｌ溶液２ ｏ−トルイジン ０．３ｇフエナ
ントリジン ０．２ｇトルエン
全量１００．０ｍｌ白色試験紙が得ら
れる。

これは血尿中に浸漬する際に約５〜２０秒後に緑化する
。

赤血球に損傷のない場合には、紙には緑色斑点が現われ
る。

溶血が起るか又は最初から遊離へモグロビンが尿中に存
在する場合には、紙は均一に緑色に変化する。

敏感性は約５（赤血球）／ｍｍ３又は相応する量のヘモ
グロビンである。

少数の完全赤血球は場合により個々の緑色斑点を試験紙
上に生ぜしめることができる。

ミオグロビンに対する敏感性はヘモグロビンのそれに一
致する。

同様に白血球及び細菌も検出し、つまり完全赤血球を斑
点反応により、溶解して均一な着色により検出する。

例２ 例１の溶液１の２，５−ジメチルヘキサン−２，５−ジ
ヒドロペルオキシドの代りに当モル量のジイソプロピル
ベンゼンヒドロペルオキシドを使用しかつ溶液２ではフ
エナントリジンを次に挙げた活性剤に代える場合に、血
液、白血球及び細菌に対してその敏感性が例１の場合と
同程度である試験紙が得られる： 赤血球／ｍｍ３ フエナントリジン ５２−メチル−
もしくは２−エチル ５−フエナントリジン 赤血球／ｍｍ３ ベンゾ〔ｆ〕キノリン ５１，２−テト
ラメチレンベンゾ ５〜８〔ｆ〕キノリン ベンゾ〔ｇ〕キノリン ５〜１０４−メチ
ルベンゾ〔ｇ〕キノリン ５〜１０ジベンゾ〔ｃ，ｄ
，ｅ〕キノリン ８〜１０ジベンゾ〔ｃ，ｆ〕キノリ
ン ８〜１０ピリド〔３，２−ｔ〕キノリン
１０〜１５３−メチル−４，７−フエナント １０〜１
５ロリン ピリド〔２，３−ｆ〕キノリン １０〜１５活性剤な
し １５０〜２５０例３ 濾紙を次の溶液で含浸しかつ４０℃で乾燥する：溶液１ ｐＨ５．２５の１．２モル−クエン酸 ４０．０ｍｌ
塩緩衝液 エチレンジアミンテトラ酢酸、ジ ０．１ｇナトリ
ウム塩 スルホコハク酸ジオクチルナトリ ２．０ｇウム ゼラチン ２．０ｇ２，５
−ジメチルヘキサン−２． １．６ｇ５−ジヒド
ロペルオキシド（約 ７０％） エタノール ３０．０ｍｌ蒸
留水 全量１００．０ｍｌ溶液２ ｏ−トルイジン ０．３ｇ３−メ
チルベンゾ〔ｆ〕キノリン ０．２ｇトルエン
全量１００．０ｍｌ得られた試験片は
例１及び２による試験紙よりも約１０１倍敏感ではない
（約３０〜６０秒間で約５０〜１００（赤血球）／ｍｍ
３）。

３−メチルベンゾ〔ｆ〕キノリンの代りに次の活性剤を
当モル量で使用する場合に同様の敏感性の試験紙が得ら
れる。

赤血球／ｍｍ３ １，３−ジメチルベンゾ〔ｆ〕 ５０〜 ７０キノ
リン ２，４−ジメチルベンゾ〔ｇ〕 ５０〜 ７０キノ
リン ６−メチルフエナントリジン ５０〜 ７０３，８−
ジメチル−４，７− ８０〜１００フエナントロリン ２，８−ジメチル−１．７− ８０〜１００フエナン
トロリン ２，７−ジメチル−１．６− ８０〜１００アントラ
ゾリン 例４ 濾紙を次の溶液■で含浸しかつ乾燥箱中８０℃で約１５
分間乾燥させる： 溶液■ ジイソプロピルベンゼンヒドロペル ３．５ｇオキシ
ド（５０％） ベンゼンホスホン酸ジモリホリド ６．１ｇドデシ
ルベンゼンスルホン酸、ナ ２．０ｇトリウム塩 メタノール 全量１００．０ｍｌその
後、次の溶液で後含浸しかつ４０℃で乾燥させる： 溶液■ １．２モルクエン酸塩緩衝 ｐＨ５．２５ ３５．０
ｍｌ液メタ燐酸ナトリウム ０．２ｇ
蒸留水 全量１００．０ｍｌ溶液■ ビス〔Ｎ−エチル−キノロン−２〕−アジン ０．１
ｇフエナントロリン ０．２ｇトル
エン 全量１００．０ｍｌ感度は１
０〜２０（赤血球／ｍｍ３）又は相当量のヘモグロビン
である。

例５ 濾紙を次の溶液で含浸しかつ乾燥箱中８０℃で約１５分
間乾燥させる： クエン酸塩緩衝液（ｐＨ５．２５，１モル） ３０ｍ
ｌエチレンジアミンテトラ酢酸 ０．５ｇリン
酸トリモルホリド １５．２５ｇ水
１０ｍｌスルホコハク酸ジ
オクチルナトリウム ０．５ｇウム ３，３’，５，５’−テトラメチル ０．２８ｇベン
ジジン フエナントリジン ０．２５ｇクモル
ヒドロペルオキシド（約８０％） １．２５ｇメタノー
ル ３０ｍｌ水／メタノール
混合物 全量１００ｍｌ（４０：１５） 白色試験紙が得られ、これは１年間の貯蔵後にも変色せ
ずかつ赤血球数約５〜１０／ｍｍ３を示す。

フエナントリジンを含まない相応する試験紙では赤血球
数１５０〜２５０／ｍｍ３でだけ確実に認められるに過
ぎない。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ヒドロペルオキシド及び少なくとも１種の色原体で
   含浸せる担体から成る、動物体液中のペルオキシダーゼ
   作用物質を検出するための試験紙において、担体が活性
   剤として付加的に一般式■：〔式中Ｒ１は水素又はメチ
   ル基を表わしかつｃ，（ｄ，ｅ），ｆ及びｇの位置の少
   なくとも１つでベンゼン環及び（又は）ピリジン環が隣
   接しており、その際に２つの隣接環は同時に各々環窒素
   原子を含有していてはならずかつ−Ｈ及びＲ１の位置以
   外で低級アルキル基により置換されていてよく、それら
   は一緒になってヒドロ芳香族環を形成することもできる
   〕の化合物を含有することを特徴とする動物体液中のペ
   ルオキシダーゼ作用物質を検出するための試験片。