DE1941370C3 - Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Nitrit und nitritbildenden Bakterien in Körperflüssigkeiten - Google Patents

Description

1

In den folgenden Beispielen soll die Erfindung näher erläutert werden. ⁶

Beispiel 1

Filterpapier (Nr. 2316 Schleicher & Schüll) wird mit einer Losung folgender Zusammensetzung getränkt und danach getrocknet: Β«ι<ιηκΐ

Sulfanilamid q ·,

S-Hydroxy-l.Z^^tetrahydro- '" ^g

benzo(h)chinolin 0 17 e

Wei nsäure ?*5

Methanol .".".".'.".".'.■.'.'.'.' 'ad' 100,0 ml

Das Testpapier reagiert mit nitrithaltigem Urin unter Bildung von rosa bis rotvioletter Farbe bei ein.-r is unteren Nachweisgrenze von 0,OL bis 0,02 mg% Nitrit.

Beispiel 2

Filterpapiere (Nr. 2316 Schleicher & Schall) werden mit Losungen aus 1 mMol 3-Hydroxytetrahydro- _so benzo(h)chinohn, 2 mMol der folgenden Diazokomponenten und 1,5 g Oxalsäure in 100 ml Methanol getränkt:

Diazokomponente

Sulfanilsäure
Arsanilsäure
p-Aminobenzoesäure

Farbe mit nitrithaltigem Urin

rosa — rotviolett

rosa — purpur

bläulichrosa — blauviolett 370

Die untere Nachweisgrenze von Nitrit mittels der so entstandenen Testpapiere liegt zwischen 0,01 und 0,02 mg% Nitrit.

Beispiel 3

Filterpapiere (Nr. 2316 Schleicher & Schüll; werden mit Lösungen aus 2 mMol Sulfanilamid, 2 mMol der folgenden Kupplungskomponenten und 2,5 g Weinsäure in jeweils 100 ml Methanol getränkt:

Kupplungskomponente	Farbe mit nitrithaltigem Urin
1,2,3,4-Tetrahydro- benzo(h)chinolin	rosa -
1,2,3,4-Tetrahydro benzo(h)china!din	rosa -
3-Hydroxy-N-methyl-l,2,3, 4-tetrahydrobenzo( h )ch ino- lin	rosa -
3-Acetoxy-N-methyl-l,2,3, 4-tetrahydrobenzo(h)chino- lin	rosa -
N-Methyl-l^^-tetrahydro- benzo(h>chinolin	rosa -
— karmin
— karmin
— purpurrot
- purpurrot
- rot

Die untere Nachweisgrenze der so hergestellten Testpapiere liegt zwischen 0,01 und 0,03 mg% Nitrit.

Claims (1)

1 2

den stark sauren Lösungen zu vermeiden. Die Reagenz-Patentanspruch: mischung aus Sulfanilsäure, τί-Naphthylamin und einer

festen organischen Säure ist auf dem saugfähigen

Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Nitrit Träger im trockenen Zustand wesentlich beständiger und nitritbildenden Bakterien, bestehend aus einem 5 als in Lösung, so daß entsprechende diagnostische diazotierbaren Amin, einer mit Diazoniumsalzen Mittel längere Zeit gelagert werden können, ohne ihre kuppelnden Komponente und einer festen orga- Empfindlichkeit zu verlieren. Beispiele für solche nischen Säure auf einem saugfähigen Träger, diagnostischen Mittel sind die von Fisch 1 und dadurch gekennzeichnet, daß als kup- P i η t ο (Clin. Chim. Acta 2, S. 527 bis 533 [1957]) pelnde Komponente Verbindungen der allgemeinen io vorgeschlagenen Testpapiere, die mit einem Gemisch Formel aus Sulfanilsäure, ,x-Naphthylamin und Zitronensäure

_s, R' imprägniert sind; ferner die Testpapiere entsprechend

_R_ _N ^ dem USA.-Patent 3 415 717, in dem ein Gemisch aus

einem diazotierbaren Amin, N,N-Dialkyl->-naph- »5 thylamin und einer festen organischen Säure beschrieben ist.

Testpapiere, die nach diesen Vorschriften hergestel t wurden, besitzen eine untere Nachweisgrenze von 0,1 bis 1 mg% Natriumnitrit. Da das von den

in der R Wasserstoff oder eine Alkylgruppe und 20 Bakterien gebildete Nitrit ausschließlich durch Reduk-R' Wasserstoff, eine Alkyl-, Hydroxy- oder Acyl- tion von Nitrat entsteht, welches nur in Spuren mit der oxygruppe bedeuten, enthalten sind. Nahrung aufgenommen wird, liegen die Nitrit-Spuren,

die bei einer bakteriellen Infektion noch nachgewiesen werden müssen, häufig unterhalb dieser Nachweis-

25 grenze. Es ist daher wünschenswert, stabile Testpapiere

mit wesentlich erhöhter Empfindlichkeit herzustellen.

Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß man

stabile Testpapiere herstellen kann, die nach dem

Die Erfindung betrifft ein diagnostisches Mittel zum Prinzip der Grießschen Probe arbeiten und noch Nachweis von Nitrit und nitritbildenden Bakterien, 30 Nitritspuren von 0,02 mg°/₀ sicher anzeigen, wenn man bestehend aus einem diazotierbaren Amin, einer mit als Kupplungskomponente 1,2,3,4-Tetrahydro-ben-Diazontumsalzen kuppelnden Komponente und einer zo(h)chinolin oder seine Derivate verwendet. Demiesten organischen Säure auf einem saugfähigen Träger, gemäß besteht die Erfindung in einem diagnostischen Bakterielle Infektionen der Nieren und der ab- Mittel der eingangs genannten Art, bei dem als leitenden Harnwege führen, wenn sie nicht rechtzeitig 35 kuppelnde Komponente Verbindungen der allgeerkannt und behandelt werden, zu schweren gesund- menen Formel
heitlichen Schädigungen. Durch den Nachweis der im· _v R'

Urin ausgeschiedenen Bakterien ist eine solche In- ^ N

fektion auch in ihrem Frühstadium zu erkennen. Der

wissenschaftlich exakte Nachweis erfolgt dabei durch 40 ^

Bebrüten des bakterienhaltigen Urins auf geeigneten ^S;

Nährböden und Keimzählung. Diese Methode ist

jedoch für die ärztliche Praxis zu zeitraubend und

umständlich und für einen Schnelltest völlig ungeeignet.

Die meisten bei Harnweginfektionen vorkommenden 45 in der R Wasserstoff oder eine Alkylgiuppe und Bakterien reduzieren das in der Harnblase vor- R' Wasserstoff, eine Alkyl-, Hydroxy- oder Acyloxykommende Nitrat zu Nitrit. Auf dem Nachweis gruppe bedeuten, enthalten sind,
dieser Nitritmengen im ausgeschiedenen Harn mittels Als diazotierbares Amin kommen Sulfanilsäure,

der »Grießschen Probe« beruht eine bekannte, emp- Arsanilsäure, p-Aminobenzoesäure und vorzugsweise ■Rindliche Methode zum Bakteriennachweis im Harn- 50 Sulfanilamid in Frage. Als feste Säure haben sioh trakt. Dem Harn wird dabei eine saure Lösung von Zitronensäure, Apfelsäure und vor allem Oxalsäure Sulfanilsäure und a-Naphthylamin zugefügt; im Harn und Weinsäure bewährt. Die verschiedenen Kompovorhandenes Nitrit diazotiert die Sulfanilsäure, und nenten werden vorzugsweise in einem niederen Alkohol das Diazoniumsalz kuppelt mit dem Λ-Naphthylamin gelöst und Papiere oder andere saugfähige Träger mit 2IU dem bekannten roten Azofarbstoffe dessen Konzen- 55 dieser Lösung imprägniert und getrocknet,
tration der Konzentration des Nitrits entspricht. Die Kupplungskomponente und das diazotierbare

Obwohl dieser Test ausreichend empfindlich ist, Amin werden in Mengen von 0,2 bis etwa 20, vorzugsum die teilweise sehr kleinen Mengen von Nitrit bei weise 1 bis 2 mMol/100 ml Imprägnierlösung ver-Harnweginfekten noch sicher nachweisen zu können, wendet. Das Verhältnis Kupplungskomponente zu und auch für die ärztliche Praxis schnell und einfach 60 Diazokomponente ist praktischerweise 1:1, kann genug durchzuführen, ist, hat er den großen Nachteil, aber auch Werte von 2:1 bis 1:5 annehmen. Die daß die Reagenzlösungen nicht stabil sind. Die ent- Säure wird in Konzentrationen von 1 bis IC g/100 ml sprechenden Lösungen müssen deshalb vor jeder Imprägnierlösung zugesetzt.

Probe neu angesetzt werden, was geschultes Personal Die Testpapiere sind natürlich nicht nur zum Nach-

und eine gewisse Laboreinrichtung voraussetzt. 65 weis von nitritbildenden Bakterien im Harn geeignet,

Es wurden deshalb schon mehrfach Versuche be- sondern ganz allgemein dort, wo es auf den Nachweis schrieben, die Grießsche Probe auf saugfähigen Trä- von Nitrit bzw. nitritbildenden Bakterien ankommt, eern durchzuführen, um so das lästige Arbeiten mit z. B. im Trinkwasser oder Lebensmitteln.