DE2728236A1

DE2728236A1 - Stabilisierte diagnostische zubereitung zum nachweis von urobilinogen

Info

Publication number: DE2728236A1
Application number: DE19772728236
Authority: DE
Inventors: Wolfgang Dr Hirsch
Original assignee: Riedel de Haen AG
Current assignee: Honeywell Riedel de Haen AG
Priority date: 1977-06-23
Filing date: 1977-06-23
Publication date: 1979-01-11
Also published as: US4161507A; ES470865A1; JPS5410795A; GB2000287A; FR2395508A1; IT7824816A0; DE2728236B2; AU3733878A; IT1096773B

Description

Stabilisierte diagnostische Zubereitung zum Nachweis von ürobilinogen

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein diagnostisches Mittel zum Nachweis von Ürobilinogen, vorzugsweise in biologischen Flüssigkeiten, insbesondere in Urin,enthaltend ein Diazoniumsalz, imprägniert auf einem saugfähigen Träger.

Es ist bereits bekannt, ürobilinogen mit einer Lösung von Dimethylaminobenzaldehyd in Salzsäure nachzuweisen. Dieser Nachweis, als Ehrlich-Reaktion bekannt, hat im Laufe der Zeit, obwohl er nicht sehr spezifisch ist, in der medizinischen Diagnostik erheblich an Bedeutung gewonnen. Der Nachweis von Ürobilinogen in Urin gilt mittlerweile als Standardmethode für die Diagnose von leber- und Gallenerkrankungen. Im Rahmen der verbreiteten Anwendung von Schnelldiagnostika sind vor einiger Zeit auch Testpapiere zum Nachweis von Ürobilinogen auf der Basis der Ehrlich-Reaktion entwickelt worden (DT-OS 15 98 140). Diese Papiere besitzen naturgemäß die Unspezifität der Ehrlichprobe und haben zudem noch den Nachteil, daß die Farbreaktion sich sehr langsam entwickelt.

In neuerer Zeit sind jedoch Testpapiere zum Nachweis von Ürobilinogen in Flüssigkeiten beschrieben worden, die auf der Kupplung einesDiazoniumsalzes mit Ürobilinogen beruhen. Als Reagenzien werden aromatisch substituierte bzw. anellierte stabile Phenyl-, Pyrrol- Pyrazol-Diazoniumsalze bzw. auch substituierte Benzidinderivate (DT-OS 22 29 611 bzw. DT-OS 25 21 402.2) beschrieben. Diese Teststreifen besitzen zwar nicht mehr die Unspezifität der Ehrlichprobe, zeigen jedoch bei Lagerung eine Verfärbung des Reaktionsfeldes, die zu einem falsch-positiven Ergebnis führen kann, bzw. die Ablesung einer Reaktion unmöglich macht.

Ziel der vorliegenden Erfindung war es daher, eine stabilisierte diagnostische Zubereitung zum Nachweis von Ürobilinogen, insbesondere

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in Urin, enthaltend ein Diazoniumsalz, imprägniert auf einem saugfähigen Träger zu schaffen, welche sich bei Lagerung nicht verfärbt.

überraschenderweise wurde nun gefunden, daß sich diese Aufgabe dadurch lösen läßt, daß die diagnostische Zubereitung als Stabilisator ein oder mehrere Phosphorsäuretriamide der allgemeinen Formel I

fi

0 = P - R₉ I

I
^R3

worin R₁, R₂ und R₃ eine ggf. mit Alkyl- oder Arylgruppen substituierte Aminogruope oder einen N-Methylanilid-, N-Piperidid- oder N-Morpholinrest bedeuten, enthält. Bevorzugt werden die Verbindungen Phosphorsäure-tris-nmethylanilid, Phosphorsäuretripiperidid und Phosphorsäuretrimorpholid verwendet.

Phosphorsäureamide sind zur Verwendung in Teststreifen bereits beschrieben (DT-OS 2 235 127) dienen in dem Fall jedoch zur Stabilisierung eines Hydroperoxids. Der Mechanismus dieses Stabilisierungseffektes ist noch nicht bekannt. Es war daher keinesfalls zu erwarten, daß diese Phosphorsäureamide auch die Verfärbung eines Urobilinogentestpapiers bei der Lagerung verhindern können. Zur Klärung des Stabilisierungseffektes durchgeführte Versuche ergaben, daß die Verhinderung der Verfärbung nicht auf einer Stabilisierung des Diazoniumsalzes beruht.

Die erfindungsgemäßen diagnostischen Zubereitungen weisen daher neben den Vorteilen der bisherigen Testpapiere, wie Spezifität der Reatkion und schnelle Ablesbarkeit, zusätzlich noch erhöhte Lagerstabilität auf.

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Bei der Herstellung von Testpapieren werden die Phosphorsäureamide mit einer Säure und einer Diazoniumverbindung auf einen saugfähigen Träger aufgebracht, ggf. mit Zusatzstoffen wie Netzmitteln bzw. optischen Aufhellern.

Zur Herstellung wird ein saugfähiger Träger, vorzugsweise Papier oder Polyestervlies, mit einer Lösung der o.g. Reagenzien in einem Gemisch aus einem organischen, mit Wasser mischbaren Lösungsmittel und Wasser getränkt und anschließend in bewegter Luft zwischen 0 und 80⁰C getrocknet.

Die Diazoniumverbindungen, die in Mengen von 0,02 - 2 g, vorzugsweise 0,1 - 0,5 g /100 ml, der Tränklösung zugesetzt werden, können nach den üblichen Verfahren der Diazochemie hergestellt werden, oder werden in der Tränklösung aus dem entsprechenden aromatischen Amin nach den in der Diazochemie bekannten Verfahren erzeugt.

Als feste Säure, die in Mengen von 1-3Og, vorzugsweise 5 - 15 g/ 100 ml, der Tränklösung zugesetzt werden, kommen organische aromatische und aliphatische Carbon- bzw. Sulfonsäuren allein oder in Mischung auch mit anorganischen Säuren in Betracht.

Stabilisatoren für Diazoniumsalze, wie Naphthalin-1,5-disulfonsäuredinatriumsalz bzw. Natriumlaurylculfat, sind aus der Diazochemie hinlänglich bekannt. Sie können in Mengen von 1 - 10 g, vorzugsweise 1 - 7 g /100 ml der Tränklösung zugesetzt werden.

Netzmittel,wie Dodecylbenzolsulfonsäure oder Natriumlaurylsulfat, können in Mengen von 0,1 - 5 g, vorzugsweise 0,5 - 1 g /100 ml, der Tränklösung zugesetzt werden. Optische Aufheller, die eine Verbesserung der Ablesbarkeit ergeben, können in Mengen von 0,01 - 5 g, vorzugsweise 0,1 - 2 g /100 ml, der Tränklösung zugegeben werden.

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Als Lösungsmittel kommt Wasser in Verbindung mit einem wassermischbaren organischen Lösungsmittel, vorzugsweise einem niederen Alkohol, z.B. Methanol, in Betracht, wobei das Verhältnis Wasser : Lösungsmittel nicht kritisch ist, sondern lediglich von der Löslichkeit der Komponenten bestimmt wird.

Als saugfähige Träger können Filterpapiere, aber auch Vliese aus Polyamid bzw. Polyester oder anderen säurebeständigen Kunststoffen Verwendung finden. Das Material des saugfähigen Trägers ist aber nicht kritisch. Auch andere Materialien, die in der Lage sind, die Tränklösung aufzunehmen, können verwendet werden. Die einzelnen Bestandteile der Rezeptur können selbstverständlich auch nacheinander auf den Träger aufgebracht werden, wenn die Löslichkeit oder besondere Umstände es erfordern sollten.

In dem folgenden Beispiel wird die erfindungsgemäße stabilisierte diagnostische Zubereitung zum Nachweis von ürobilinogen in Flüssigkeiten näher erläutert, ohne sie jedoch hierauf zu beschränken.

Beispiel

Tränklösung A: 20 g meta-Phosphorsäure

6 g Citronensäure-1-hydrat,

14 g Naphthalin-1,5-disulfonsäure Dinatriumsalz,

180 ml Permutitwasser.

In dieser Lösung werden jeweils 2 g folgender

Verbindungen gelöst:

a) Phosphorsäuretrimorpholid,

b) Phosphorsäure-tris-n-methylanilid,

c) Phosphorsäuretripiperidid.

Tränklösung B: 375 mg 4-Fluor-3-nitrobenzoldiazoniumtrifluormethylsulfonat
50 ml Methanol.

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Papier der Fa. Schleicher u. Schüll Nr. 2316 wird mit einer Mischung der Lösungen A und B getränkt und anschließend im ümlufttrockenschrank bei 40⁰C getrocknet. Anschließend werden die Reagenzpapiere unter Ausschluß von Luftfeuchtigkeit bei 70⁰C Tage lang gelagert. Nach dieser Zeit hat sich ein ohne Zusatz von Phosphorsäuretriamid hergestelltes Papier bräunlich verfärbt. Das Papier mit Phosphorsäuretrimorpholid ist weiß, das Papier mit Phosphorsäure-tris-n-methylanilid ist eine Spur bräunlich und das Papier mit Phosphorsäure-tripiperidid ist eine Spur grau verfärbt.

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Claims

RIEDEL DE HAEN AKTIENGESELLSCHAFT Datum: 22. Juni 1977 Aktenzeichen: HOE 77/D 009 Dr.KO/cr Stabilisierte diagnostische Zubereitung zum Nachweis von Urobilinogen ' PATENTANSPRÜCHE

1.)Stabilisierte diagnostische Zubereitung zum Nachweis von Urobilinogen, vorzugsweise in biologischen Flüssigkeiten, insbesondere in Urin,enthaltend ein Diazoniumsalz, imprägniert auf einem saugfähigen Träger, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator ein oder mehrere Phosphorsäuretriamide der allgemeinen Formel I

0 = P - R₀ I

worin R₁, R₂ und R₃ eine ggf. mit Alkyl- oder Arylgruppen substituierte Aminogruppe oder einen N-Methylanilid-, N-Piperidid- oder N-Morpholinrest bedeuten,
enthält.

2. Stabilisierte diagnostische Zubereitung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator Phosphorsäure- tris-n-methyl-anilid enthält.

3. Stabilisierte diagnostische Zubereitung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator Phosphorsäuretripiperidid enthält.

4. Stabilisierte diagnostische Zubereitung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Stabilisator Phosphorsäuretrimorpholid enthält.

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