JPS60233552A - 試験片 - Google Patents

試験片

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JPS60233552A
JPS60233552A JP59087858A JP8785884A JPS60233552A JP S60233552 A JPS60233552 A JP S60233552A JP 59087858 A JP59087858 A JP 59087858A JP 8785884 A JP8785884 A JP 8785884A JP S60233552 A JPS60233552 A JP S60233552A
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nitrite
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acid
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Satoshi Kaminagayoshi
上永吉 敏
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Terumo Corp
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Terumo Corp
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    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N31/00Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
    • G01N31/22Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
    • G01N31/227Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators for nitrates or nitrites
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C12Q1/12Nitrate to nitrite reducing bacteria
    • GPHYSICS
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    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/84Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02ATECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ■8発明の背景 (技術分野) 本発明は、ジアゾカップリング反応を用いて、亜硝酸塩
を検出するための試験片において、還元性物質による影
響を受けない試験片、特に微生物に起因する尿中の亜硝
酸塩の検出用の改良された試験片に関するものである。
(先行技術) 最近、迅速診断剤は、医学プラクティスおよび臨床試験
において著しく重要になっており、吸収性相持体をベー
スとする迅速診断剤は重要である。
多くの場合、紙であるこの吸収性担持体に検出反応に必
要な薬剤を含浸させ、これを体液中に浸漬すると、検出
すべき物質が存在する場合には呈色反応を呈する。医学
的診断で非常に重要になった迅速診断剤としては、例え
ば亜硝酸塩用迅速診断剤がある。亜硝酸塩は、例えば大
腸菌、バラ大腸菌、チフス菌、パラチフス菌、ブドウ球
菌および腸球菌などの一定の細菌等の硝酸塩還元活動に
よって生じ得るものである。従って亜硝酸塩、特に、尿
中の亜硝酸塩の検出は、人体に対し病原となる5tui
や微生物による感染を診断するために重要である。
この試験は、つぎの原理にも基づいている。すなわち亜
硝酸塩を測定する際には、亜硝酸塩を酸性条件下にジア
ゾ化剤と反応させることによりジアゾ化合物を形成させ
、該ジアゾ化合物にカップリング剤を反応させて赤色発
色団のアゾ基−N−N−を有するアゾ化合物を形成させ
る。この色の濃度が、亜硝酸イオンの濃度と充分な相関
関係を有することにより、亜硝酸塩量の尺麿となる。
しかるに、最近の加工食品、清涼飲料等にはビタミンC
として多量のアスコルビン酸が含まれており、また健康
管理の点からもビタミン剤等が多量服用されているので
、血液中に多量含まれているだけでなく、余分な水溶性
ビタミンは尿中に含有されて体外に排泄されることにな
る。このため前記のごとき診断剤を用いて、尿や血液の
試験を行なう場合、存在するアスコルビン酸の強い還元
性によりジアゾカップリング反応が阻害され充分な発色
が得られないという問題点が生じてきた。
■0発明の目的 したがって本発明の目的は、ジアゾカップリング反応を
用いて亜硝酸塩を検出するための還元性物質による影響
を受けない新規な試験片を提供することにある。本発明
の他の目的は、微生物に起因する尿中の亜硝酸塩の検出
に好適な安定性に優れた試験片を提供することにある。
これらの諸口的は、亜硝酸塩を、ジアゾカップリング反
応を用いて測定する試験片において、ジアゾ化剤および
カップリング剤とともに、有効量の酸化剤を基材に担持
させることを特徴とする試験片により達成される。
また、本発明は、酸化剤が酸素酸またはその塩および金
属塩類よりなる群から選ばれたものである。さらに本発
明は、酸素酸またはその塩がM”XO% N’l”X 
Oa 、M”X O413cl; ヒMT3H2X O
a(ただし、MIは一価の陽イオンとなり得る原子であ
り、またXはハロゲン原子である。)よりなる群より選
ばれたものである試験片である。また、本発明は、酸素
酸またはその塩がM”104(ただしMlは前記のとお
りである。)である試験片である。本R明ハM”l 0
4 カNa I 04 t、タハHI 04である試論
片である。さらに本発明は金属塩類がエチレンジアミン
四酢酸第二鉄(E’ D T A−鉄[1”])、酸化
第一銅、硫酸銅、酢酸銅、酢酸水銀、酢酸ビスマスおよ
び酢酸鉛よりなる群から選ばれたものである試験片であ
る。本発明は、酸化剤の有効量が、試験片の単位面積当
り、0.9〜15amol/a+ 2である試験片であ
る。本発明は、ジアゾ化剤がアルサニル酸またはスルフ
ァニルアミドである試験片である。さらに本発明は、カ
ップリング剤が、N−(1−ナフチル)−エチレンジア
ミンニ塩酸塩または、N、N−ジメチルナフチルアミン
ある試験片である。
■発明の具体的構成 本発明による試験片は、ジアゾカップリング反応を用い
て検体中の亜硝酸塩を検出測定するものである。その際
に前記検体中に含まれるアスコルビン酸等の還元性物質
によって影響を受けないために配合される酸化剤として
は、好ましくは酸素酸またはその塩および金属塩類があ
る。
酸素酸または(の塩としてはM”XO,MXXO3。
M”XO4、M”31−+2 XO6(ただし、Jは一
価陽イオンとなり得る原子、例えばNa 、に、H等で
あり、またXはハロゲン原子、例えば、I、Br。
CI等である。)等がある。−例を挙げると、例えばト
IcI O,Na CI O,KCI O,HBr O
Na Br O,KBr O,l−110,Na IO
,KIO,HCl03.NaClO3,K(lo3.H
Br0a、NaBrO3,KBrO3,HIO3゜Na
 IO3、’KIO3、トICI 04 、 Na C
l 04、KCI 04 、HBr 04 、Na 1
3r O4,に3r 04 、HIO4、Na 10イ
 、KIO4、Na5H2foe 、に3 H2+06
等があり、好ましくはM”X O4であり、さらに好ま
しくはM1104であり、最も好ましくはNaIO4お
よびl−1(04である。金属塩類としてはエチレンジ
アミン四酢酸第二鉄(EDTA−鉄[■])塩化第二鉄
、塩化第一銅、硫酸銅、酢酸銅、酢酸水銀、酢酸ビスマ
ス、酢酸鉛等がある。
前記酸化剤は、試験に使用するに際しては、被検液体中
に存在するアスコルビン酸等の還元性物質による酸化指
示薬の反応阻害を防止するに有効なだけの聞が使用され
る。具体的には、前記試験単位面積当りの酸化剤の有効
量は、被検液体中に存在づる還元性物質の量に影響され
るが、Na +04を例にとると通常0.2〜3.Oo
/+2゜好ましくは0.3〜2.OQ/rA2である。
すなわち0.1g/m2未満であると効果が認められな
くなり、またあまり量が多いと、経時変化を受けやすく
なるためである。一般に酸化剤の有効量を当量で示せば
、およそ0.9〜15mmol/m 2である。
本発明による試験片に含有されるジアゾ化剤は、酸性条
件下に検体液中に含まれる亜硝酸塩と作用してジアゾ化
合物を形成するものであるが、芳香族第一級アミン類の
うち、アルサニル酸およびスルファニルアミドが好まし
く用いられる。
また本発明による試験片に含有されるカップリング剤と
しては、例えばα−ナフチルアミン、N−(1−ナフチ
ル)−エチレンジアミン、N−アルキル−α−ナフチル
アミンおよびN、N−ジアルキル−α−ナフチルアミン
ならびこれらの塩等が用いられ得るが、好ましくはN−
(1−ナフチル)−エチレンジアミンニ塩酸塩およびN
、N−ジメチル−α−ナフチルアミンである。
本発明による試験片による亜硝酸塩の検出において、該
亜硝酸塩とジアゾ化剤との反応にお%fる酸性条件を与
えるものとして、例えば酒石酸、クエン酸、シュウ酸、
リンゴ酸、マロン酸、コノ\り酸、グルタル酸およびア
ジピン酸等が上記薬剤と共に試験片に含有される。
また、試験片を体液中に浸漬したとき、該体液が均一に
湿潤するように使用される湿潤剤としては、ラウリル硫
酸ナトリウム、ドデシル硫酸ナトリウム、テトラドデシ
ル硫酸ナトリウム等のアルキル硫酸塩、ドデシルベンゼ
ンスルホン酸ナトリウム等のアルキルベンゼンスルホン
酸塩、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ジヘプチ
ルスルホコハク酸ナトリウム等のジアルキルスルホコノ
\り酸塩等の界面活性剤等がある。
また、基材に含浸させた試験片には、該試験片からの薬
剤の流出を防止するために、粘稠剤を使用し工もよい。
代表的な粘稠剤としては、ポリビニルアルコール、ポリ
ビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリアク
リル酸塩、ポリアクリルアミド、ポリ(ヒドロキシエチ
ルメタクリレート)、ポリ(ヒドロキシエチルアクリレ
ート)。
カルボキシメチルセルロース等の重合体、ゼラチン、ア
ラビアゴム等がある。
前記薬剤は、溶媒、例えばベンゼン、トルエン。
キシレン、メタノール、エタノ−゛ル、イソプロパツー
ル、アセトン、メチルエチルケトン、クロロホルム、四
塩化炭素、水等に溶解さu1該溶液を基材に含浸させて
乾燥して得られる試験片として使用される。
基材としては、濾紙、ガラス繊維、プラスチック素材か
らなる不織布等があり、含浸液と反応したりあるいは含
浸液に溶解したすせず、かつ吸収性を有しているもので
あればよい。
薬剤を含浸させ乾燥させた試験片は必要により、該試験
片の保存時および操作時における、試験片の湿気および
周辺雰囲気ガスによる変質を防ぐためおよび試験片の保
護のため、例えばポリエチレン、ポリ塩化ビニル、ポリ
塩化ビニリデン、ナイロン等の剥離可能な薄膜を試験片
にコーティングまたは貼付することが可能である。この
場合、検定直前に該保護膜を剥離して試験片を使用する
つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
実施例 1 A液 アルケニルm O,BQ メタ/−)Lt 100/! B液 N−(1−ナフチル) エチレンジアミン二ml!mo、9゜ メタノール 100購り 水溶性ポリマー cm m化剤(Na 104 ) 10010蒸溜水 
10011 v1紙にA液を含浸させ乾燥させたのちB液に含浸させ
乾燥させる。最後にこの濾紙をC液に含浸乾燥させて亜
硝酸塩試験片を得た。このようにして得られた試験片を
Na NO2を含有しない尿、および0.1111/d
j2.のNaNO2を含有する尿にいずれもアスコルビ
ン酸を50+ao/d、Q含有させた試料中に浸漬して
試験を行なったところ第1表の結果が得られた。
比較例 1 実施例1において、A、B液のみを用いて試験片を作成
し、実施例1と同様の試験を行なったところ第1表の結
果が得られた。
(以下余白) 則 で−−〇 + 実施例 2 A液 スルフ戸ニルアミド 104膳9メタノール 2
0驕a B液 酒石Ill 0.59 ポリビニルピロリドンに3G 2Q NaIO420111 水 20“ 9 C液 ジメチルアミン 692簡9 ベンゼン 20.210 上記のA、BおよびC液を用いて、実施例1と同様にし
て試験片を作成し同様の試験を行なったところ、第2表
に示す結果が得られた。
比較例 2 実施例2におけるB液のNa1o4のみを除く以外は実
施例2と同様の操作で試験片を作−し、実施例1と同様
な試験を行なったところ第2表に示す結果が得られた。
医 洒 ■0発明の具体的効果 以上述べたように、本発明による試験片は、ジアゾカッ
プリング反応を用いて亜硝酸塩を検定測定する試験片に
おいて、ジアゾカップリング剤およびカップリング剤と
ともに、有効量の酸化剤を基材に担持させることを特徴
とする試験片であるから、尿のごとき検液体中にアスコ
ルビン酸等の還元性物質が存在していても、該還元性物
質は前記酸化剤により酸化されるので、ジアゾカップリ
ング反応が阻害されることはない。特に酸化剤が酸素酸
もしくはその塩または金属塩類である場合にはその効果
が著しく、その中でも過ヨウ素酸またはその塩の場合に
はその効果が最も大である。
ざらにジアゾ化剤がアルサニル酸またはスルファニルア
ミドであり、カップリング剤がN−(1−ナフチル)エ
チレンジアミンニ塩酸塩またはN。
N−ジメチルナフチルアミンであるときは、亜硝酸塩の
測定は優れたものとなる。
1、事件の表示 昭和59年 特許願 第87,858号2、発明の名称 シ ケンヘン 試験片 3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 トザワ ミツオ 代表取締役 戸 澤 三 雄 4、代理人 住 所 東京都千代田区二番1t)1i番地9ダイアパ
レス二番町氏名 (7234)弁理士 八1)幹雄明細
書の「特許請求の範囲」の欄および「発明の詳細な説明
」の7、補正の内容 明細書を、つぎのとおり補正する。
(1) 請求の範囲を別紙のとおり補正する。
(2)第14頁第8行目 「ジメチルアミン」とあるを [ジメチルナフチルアミン]と補正する。
特許請求の範囲 (1)亜硝酸塩を、ジアゾカップリング反応を用いて測
定する試験片において、ジアゾ化剤およびカップリング
剤とともに、有効量の酸化剤を基材に担持させることを
特徴とする試験片。
(2)酸化剤がlI!素酸またはその塩および金属塩よ
りなる群から選ばれたものである特許請求の範囲第1項
に記載の試験片。
(3) 1111 t タハソ(1)jlAffiM”
X O、MrX O3、M”X O4およびM”3 H
2XO6(ただしM”は−価の陽イオンとなり得る原子
であり、またXはハロゲン原子である。)よりなる群か
ら選ばれたものである特許請求の範囲第2項に記載の試
験片。
(4)酸素酸またはその塩がMIO4(ただし、Mxは
前記のとおりである。)である特許請求の範囲第3項に
記載の試験片。
(5)%がNa1O+またはHIO4である特1FF−
請求の範囲第41に記載の試験片。
(6)金属塩類がエチレンジアミン四酢酸第二鉄(ED
TA−鉄[11)、塩化第二鉄、塩化第一銅、硫酸銅、
酢酸銅、酢酸水銀、を酸ビスマスおよび酢酸鉛よりなる
群から選ばれたものである特許請求の範囲第2項に記載
の試験片。
(7)酸化剤の有効量が、試験片の単位1Ii1a当り
0.9〜15 mmol/m 2であることを特徴とす
る特r+請求の範囲第1項ないし第6項のいずれか一つ
に記載の試験片。
(8)ジアゾ化剤がアルサニル酸またはスルフ7ニルア
ミドである特許請求の範囲第1項に記載の試験片。
(9)カップリング剤がN、N−ジメチルナフチルアミ
ンまたはN−(1−ナフチル)−エチレンジアミンニ塩
酸塩である特許請求の範囲第1項に記載の試験片。

Claims (9)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)亜硝酸塩を、ジアゾカップリング反応を用いて測
    定する試験片において、ジアゾ化剤およびカップリング
    剤とともに、有効量の酸化剤を基材に担持させることを
    特徴とする試験片。
  2. (2)酸化剤が酸素酸またはその塩および金属塩よりな
    る群から選ばれたものである特許請求の範囲第1項に記
    載の試験片。
  3. (3)i!m酸*たはそ(7)塩がM”Xo、M”XO
    3、Jxo4eヨtFM]13H2X0II <kりL
    tM”バー11iの陽イオンとなり得る原子であり、ま
    たXはハロゲン原子である。)よりなる群から選ばれた
    ものである特許請求の範囲第2項に記載の試験片。
  4. (4)酸素酸またはその塩がM”104(ただし、MX
    は前記のとおりである。)である特許請求の範囲第3項
    に記載の試験片。
  5. (5)M”104がNa 104またはHIO4である
    特許請求の範囲第4項に記載の試験片。
  6. (6)金属m類がエチレンジアミン四酢酸第二鉄(ED
    TA−鉄[11)、塩化第二鉄、塩化第一銅、硫酸銅、
    酢酸銅、酢酸水銀、酢酸ビスマスおよび酢酸鉛よりなる
    群から選ばれたものである特許請求の範囲第2項に記載
    の試験片。
  7. (7)酸化剤の有効量が、試験片の単位面積当り0.9
    〜15mmol/* 2であることを特徴とする特許請
    求の範囲第1項ないし第6項のいずれか一つに記載の試
    験片。
  8. (8)ジアゾ化剤がアルサニル酸またはスルファニルア
    ミドである特許請求の範囲第1項に記載の試験片。
  9. (9)カップリング剤がN、N−ジメチルナフチルアミ
    ンまたはN−(1−ナフチル)−エチレンジアミンニ塩
    酸塩である特許請求の範囲第1項に記載の試験片。
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