JPS62147360A - 亜硝酸塩測定用試薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の利用分野〕 本発明は１体液中の亜硝酸塩又は亜硝酸塩を生成させ得
る（硝酸塩還元能を有する）細菌を検出するための新規
な測定用試薬組成物に関する。

〔発明の背景〕

通常の食事を摂取した人では、大か″れ少なかれ尿中に
硝酸塩が存在するが、尿路管、膀胱内に細菌が多量に存
在すると、これらの硝酸塩は還元されて亜硝ｆＩ＃塩と
なる。従って、この亜硝ｆｆ＊１１！（又は亜硝酸イオ
ン。以下同様。）を検出測定することにより尿路感染の
有無を診断することが可能となる。この場合亜硝酸塩は
亜硝酸ナトリウムとして、少くとも０．０５ｍｇ／ｄＡ
’を検出し得ることが要求される。

゛通常、この亜硝酸塩の量はグリース試験により１ｆｌ
ｌＩ定されている。この試験はスルファニル酸及びα−
ナフチルアミンを含む酸性溶液を尿中に加え、亜硝酸塩
が存在すればシアンカップリング反応が起って赤色に呈
色することを利用してΔ１１定を行っている。

この試験に用いる試薬は溶液状態では極めて不安定であ
るため、近年、スルファニル酸、α−ナフチルアミン及
び固体酸からなる試薬を含浸させた試験紙法が多く採用
されている。

しかし、α−ナフチルアミンや従来から用いられている
その誘導体、Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミンなどは
いずれも検出下限は亜硝酸ナトリウムとして０．０５ｍ
ｇ／ｄ／！程度である。

一方、細菌により生成される亜硝酸塩は極めて微量であ
り、従って、より高感度な測定用試薬が要求されている
。

また、前記の試薬からなる試験紙は１食餌或は投薬の関
係で尿中に高頻度に高く含有される可能性のあるアスコ
ルビン酸の影響を大きく受けるという欠点かある。

これに対し、呈色感度改善の目的でカー、プリング成分
として　１．２．３．４−テトラヒドローヘンゾ（ｈ）
キノリン又はその誘導体を用いる技術が開示されており
、（特公昭４９−２７７＋９号公報）、この方法によれ
ば、検出下限は０．０２ｍｇ％であると記・成されてい
る。しかしながら、実際の呈色は非常にａ察し難く、ｌ
亜硝酸塩濃度の高いものでも呈色か必ずしも充分ではな
い。

従って、より感度の高い、また、アスコルビン酸等コ元
性物質の影響を受けない、該測定用試薬組成物の出現が
渇望されている。

〔発明の目的〕

未発明は、上記した如きジアゾカップリング反応を利用
した亜硝酸塩の測定法に於ける問題点、即ち、−元性物
質の影響が大きい点及び呈色感度が低い点を改善すべく
なされたもので、特異的に、且つ高感度に体液中の亜硝
酸塩又は亜硝酸塩を生成させ得る細菌（硝酸塩還元能を
有する細菌）を検出するための試薬組成物を提供するこ
とを目的とする。

〔発明の構成〕

本発明は、ジアゾ化可能なアミン類と、該アミ７類とカ
ンプリングし得るカップリング成分と。

固体酸とからなる１体液中の亜硝酸塩又は亜硝酸塩を生
成させ得る細菌（硝酸塩還元能を有する細菌）を検出す
るための測定用試薬組成物に於て、カップリング成分と
して一般式［Ｉ］ （但し、Ｒは炭素数１〜５のヒドロキシアルキルノ、ｔ
を表わす。）で示されるα−ナフチルアミン１シ（導体
又はその塩類を含有することを特徴とする体液中の亜硝
酸塩又は亜硝酸塩を生成させ得る細菌（硝酸塩還元能を
有する細菌）を検出するための新規な測定用試薬組成物
の発明である。

即ち、禾発明者らは、従来のｆｌｌｌｌｌｌｌｌ定文組
成物感度で、且つ特異性に優れた、体液中の亜硝酸１！
２Ｊｌｌｌ定用試薬ｍｌ成物を求めて鋭意研究を重ねた
Ｍ果、上記　［ｒ１式で示される化合物又はそのＪｚＡ
類をカンプリング成分として用いることにより目的を達
成し得ることを見出し本発明を完成するに到った。

−ｔｌＱ式［）］で示される１本発明のカップリング成
分であるα−ナフチルアミン誘導体に於て。

Ｒで表されるヒドロキシアルキル基としては、例えば、
ヒドロキシメチル基、ヒドロキシエチル基、ヒドロキシ
プロピル基、ヒドロキシブチル基、ヒドロキシペンチル
基環炭素ｆｉ１〜５のヒドロキンアルキル基が挙げられ
、直錯状、分枝状のいずれにてもよく、また、水酸基の
置換位者も特に限定されず、どの位置についたものでも
よい。

また、これらの化合物と塩を形成させるに適した酸類と
しては１例えば、１１！酸、硫酸、リン酸、メタリン酸
、酢酸、クエン酸、酒石酸、シュウ酸、マロン酸等が挙
げられるが、特にこれらに限定されるものではない。

本発明で用いられるシアン化可能なアミン類としては、
例えば、ｐ−アミン安息香酸、スルファニル酸、スルフ
ァニルアミド、アルサニル酸等が挙げられるか、スルフ
ァニルアミＦか特に好ましく用いられる。

本発明で用いられる固体酸としては、例えば、クエン酸
、酒石酸、シュウ酸、マロン酸１．’　夕１）ン酸笠が
挙げられるが、これらに限定されるものではない。

表１にジアゾ化可能なアミン類としてスルファニルアミ
ドを用い、カップリング成分として本発明に係るα−ナ
フチルアミン誘導体、及び従来から用いられているα−
ナフチルアミンその他のカンプリング成分を用いてカッ
プリング反応を行い生成した色素の吸収波長を測定した
結果を示す。

表　　　　１ バｌり定条件：０．８Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ３，２）
にそれぞれＡ”　Ｃ度としてスルファニルアミドか３０
ｍＭ、カップリング成分が１０ｍＭ、亜硝酸ナトリウム
が０．０３０　ｍＭとなるように添加した。

本発明の試薬組成物は、溶液法によるａｌｌｌ’定にこ
れを用いてもよいが、試験紙法による使用がより好まし
い。即ち、常法に従いこれらの成分を１液又は散液に分
けて吸収性担体に含浸させ、乾燥させて試験紙を作製し
、これを用いて測定を行う方法である。

本発明の試薬組成物を用いる試験紙法に於て用いられる
吸収性担体としては紙、セルロース、化学繊維、合成樹
脂５！織布及び不織布等通常の測定用試験片に於て用い
られる吸収性担体が例外なく用いられる。又、吸収性担
体を保持する支持体としては、ガラス繊維、及びポリ塩
化ビニル、ポリスチレン、ポリビニルアセタール、アヤ
チルセルロース、ニトロセルロース、ポリ塩化ビニリデ
ン、ポリプロピレン等の合成高分子化合物などか挙げら
れ、こ、れらのシートあるいはこれらをコーティングし
た厚紙等が好ましく用いられる。

これら吸収性担体及び支持体の大きさ、寸法等について
は特に制約はなく、通常用いられている測定用試験片に
於ける吸収性担体及び支持体の大きさ、寸法に準じたも
のを用いれば足りる。また、吸収性担体への薬剤の含浸
方法、及び吸収性担体の支持体への接着方法に関しては
、通常の測定用試験片に於て行われているいずれの方法
で行ってもよく、特別な方法は必要としない。

以下に実施例を挙げるが本発明はこれら実施例により同
等限定されるものではない。

〔実施例〕

実施例Ｉ Ａ液　クエン酸　　　　　　　　　１３．２ｇクエン酸
ナトリウム　　　　５．ｅｇ 法留水　　　　　　　　　１０〇− Ｂ液　Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−α−ナフチル
アミン塩酸塩　　　　　　　０−２４ｇメタノール　　
　　　　　　５０ｍＪ！エタノール　　　　　　　　５
０　ｍｌＣ液　スルファニルアミド　　　　０．５１７
ｇ工タ／−ル　　　　　　　　１ＯＯＴｎ！が紙にＡ液
を含浸させ乾燥させたのち、Ｂ液を含浸させて乾燥させ
、然る後これにＣ液を含浸させて乾燥させ、亜硝酸塩測
定用試験片を作製した。

このようにして得られた試験片を夫々亜硝酸ナトリウム
を含鳴しない尿、０．２ｍｇ／ｄ！及び０．５１１Ｉｇ
／ｄｌの亜硝酸ナトリウムを含噛する尿、並び番、−こ
れらの各々にアスコルヒン酩を５０ｍｇ／ｄＡ’含有さ
せた試料中に浸してその車色の度合を調へた。結果を表
２に示す。

比較例１ 実施例１に於て、Ｂ液のＮ−（３−ヒドロキシプロピル
）−α−ナフチルアミン０２４ｇの代りに３−ヒドロキ
シ−１，２，３，４−テトラヒドロヘンソキノリン０．
２０　ｇを用いた以外は実施例１と全く同様にして作製
した亜硝酸塩測定用試験片を用い、実施例１と同様の試
験を行った。結果を表２に示す。

比較例２ 実施例１に於て、Ｂ液のＮ−（３−ヒドロキシプロピル
）−α−ナフチルアミン０．２４ｇの代りにＮ−１−ナ
フチルエチレンジアミン２　ｋｍ　ｍ　ｋｎ　０．２８
　ｇを用いた以外は実施例１と全く同様にして作製した
亜硝酸塩測定用試験片を用い、実施例１と同様の試験を
行った。結果を表２に示す。

以下余白 表　　　２ 一：変化なし、＋：呈色、棒：強く呈色。

−〜＋：〜と十の中間に呈色 十〜４＋：＋と種の中間に呈色 ＋↓：＋と　（−〜＋）の中間に呈色 件↓：＋と（十−妊）の中間に呈色 実施例２ Ａ液　酒石酸　　　　　　　　　　２．３ｇＮ−（４−
ヒドロキシブチル）−α−ナフチルアミン塩酸塩　　　
　　　　０．２５ｇメタノール　　　　　　　　５０　
ｄ エタノール　　　　　　　　　５０　ａＺＢ液　スルフ
ァニルアミド　　　　０．５２ｇエタノール　　　　　
　　　＋００　ｍＪが紙にＡ液を含浸させ乾燥させたの
ち、Ｂ液（含浸乾燥させて亜硝酸塩測定用試験片を作製
した。

このようにして得られた試験片を夫々亜硝酸ナトリウム
を全損しない尿、０．２ｍｇ／ｄ！及び０．５ｍｇ／ｄ
ｌの亜硝酸ナトリウムを金層する尿、並びにこれらの各
々に７スコルビン酸を５０ｍｇ／ｄ！含有させた試料中
に浸して試験を行った。結果を表３に示す。

比較例３ 実施例２に於て、Ａ液のＮ−（４−ヒドロキシブチル）
−α−ナフチルアミン塩酸ｔｈ！！０．２５　ｇの代り
にＮ−１−ナフチルエチレンジアミン２塩酸ｊｐ０．２
Ｅｉｇを用いた以外は実施例２と全く同様にして作製し
た亜硝酸塩４１１定用試験片を用い、実施例１と同様の
試験を行った。結果を表３に示す。

表　　　３ 表中の記号については表２に回し。

〔発明の効果〕

以−ヒ述べた如く１本発明は体液中の亜硝酸塩又は亜硝
酸塩を生成させ得る細菌（硝酸塩還元能を有する細菌）
を検出するだめの新規で且つ極めて効果的な試薬組成物
を提供するものであり、本発明に係るカップリング成分
を使用することにより、従来の方法に比へ （１）感度が高い。

（２）尿中のアスコルビン＃等の還元性物質の影ゴが少
なく特異性が高い。

等の点に顕著な効果を奏するものである。

特許出願人　和光純薬工業株式会社 手続補正書 昭和６２年　３月　１８日 ｌ　事件の表示 昭和６０年特許願第２８８１０２号 ２、　発明の名称 亜硝酸塩測定用試薬組成物 ユ　補正をする者 事件との関孫　　特許出願人 郵便番号　５４１ 連絡装置　０３−２７０−１１５７１ 自　　　発 ５、　補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄。

６　補正の内容 （１）明細書２頁７行目に記載の「大かれ少なかれ」を
「多かれ少なかれ」と補正する。

（２）明細書３頁２０行目に記載の「されており、」の
「、」を削除する。

（３）明細書６頁２行目に記載の「Ｒで表される」を「
Ｒで表わされる」と補正する。

（４）明細書１０頁２行目に記載のｒｏ、５１７．９ｊ
を、ｒＯ，５２，ｌと補正する。

以上

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ジアゾ化可能なアミン類と、該アミン類とカップリング
   し得るカップリング成分と、固体酸とからなる、体液中
   の亜硝酸塩又は亜硝酸塩を生成させ得る細菌（硝酸塩還
   元能を有する細菌）を検出するための測定用試薬組成物
   に於て、カップリング成分として一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼［ I ］　 （但し、Ｒは炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基を表
   わす。）で示されるα−ナフチルアミン誘導体又はその
   塩類を含有することを特徴とする体液中の亜硝酸塩又は
   亜硝酸塩を生成させ得る細菌（硝酸塩還元能を有する細
   菌）を検出するための測定用試薬組成物。