FI69869B - Diagnostiskt medel foer paovisande av leukosyter i kroppsvaetskor foerfarande foer framstaellning av detsamma och anvaendning av detsamma - Google Patents

Diagnostiskt medel foer paovisande av leukosyter i kroppsvaetskor foerfarande foer framstaellning av detsamma och anvaendning av detsamma Download PDF

Info

Publication number
FI69869B
FI69869B FI800444A FI800444A FI69869B FI 69869 B FI69869 B FI 69869B FI 800444 A FI800444 A FI 800444A FI 800444 A FI800444 A FI 800444A FI 69869 B FI69869 B FI 69869B
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
sec
residue
optionally
alkoxy
group
Prior art date
Application number
FI800444A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
FI800444A (fi
FI69869C (fi
Inventor
Dieter Berger
Guenter Frey
Manfred Kuhr
Wolfgang Werner
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=6062854&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=FI69869(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of FI800444A publication Critical patent/FI800444A/fi
Publication of FI69869B publication Critical patent/FI69869B/fi
Application granted granted Critical
Publication of FI69869C publication Critical patent/FI69869C/fi

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B11/00—Diaryl- or thriarylmethane dyes
    • C09B11/04—Diaryl- or thriarylmethane dyes derived from triarylmethanes, i.e. central C-atom is substituted by amino, cyano, alkyl
    • C09B11/06—Hydroxy derivatives of triarylmethanes in which at least one OH group is bound to an aryl nucleus and their ethers or esters
    • C09B11/08—Phthaleins; Phenolphthaleins; Fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B43/00—Preparation of azo dyes from other azo compounds
    • C09B43/18—Preparation of azo dyes from other azo compounds by acylation of hydroxyl group or of mercapto group
    • C09B43/20—Preparation of azo dyes from other azo compounds by acylation of hydroxyl group or of mercapto group with monocarboxylic acids, carbamic acid esters or halides, mono- isocyanates or haloformic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/40—Triphenylmethane dye chromogens, e.g. fluorescein derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/50—Indoles

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)

Description

m M1v KUULUTUSJULKAISU /qn /Q jjlgfja B 11 UTLÄGGNINGSSKRIFT 0:7007 ^3\·χ« C /45) Patentti myönnetty
r^nija ' ' pr> t r:-1 r l·1 ^ ' t ‘"0 ", nG
(51) Kv.lk.4/lnt.CI.* C 12 Q 1/3*1 SUOMI —FINLAND (21) Patenttihakemus - Patentansökning 800^^ (22) Hakemispäivä — Ansökningsdag . 0 /Π|\ 14.02.80 ' ' (23) Alkupäivä — Giltighetsdag 1 h.02.80 (41) Tullut julkiseksi — Blivit offentlig ' 7 ie nfi ftil
Patentti- ja rekisterihallitus Nähtäväksipanon ja kuul.julkaisun pvm.—
Patent-och registerstyrelsen v ' Ansökan utlagd och utl.skriften publicerad 31.12.85 (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Begärd prioritet ^ 02 yg
Saksan 1i i ttotasavaita-Förbundsrepub 1iken Tyskland(DE) P 2905531.0 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Wa1dhof, Saksan liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Dieter Berger, Viernheim, Gunter Frey, Ludwigshafen/Rhein,
Manfred Kuhr, Mannheim, Wolfgang Werner, Mannheim, Saksan Ii i ttotasava1ta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) {7 k) Berggren Oy Ab (5*0 Diagnostinen väline leukosyyttien osoittamiseksi kehon nesteissä, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö - Diagnostiskt medel för pavisande av leukosyter i kroppsvätskor, förfarande för fram-ställning av detsamma och användning av detsamma
Leukosyyttien osoittamisella kehon nesteissä, erikoisesti virtsassa, on huomattava asema diagnostisoitaessa munuaisten ja virtsateiden sairauksia.
Tähän asti tämä osoittaminen on suoritettu laskemalla mikroskoopin avulla leukosyyttien määrä sentrifugoimattomassa virtsassa tai virtsalaskeutumassa.
Kummallekin menetelmälle on luonnollisesti yhteistä, että ainoastaan ehjät leukosyytit saadaan lasketuksi. Toiselta puolen on tunnettua, että leukosyyttien hajoamisnopeudessa tapahtuu suuria vaihteluita virtsaympäristöstä riippuen. Niinpä voimakkaasti alkalisessa virtsassa leukosyyttien puoliintumisaika on ainoastaan 60 minuuttia. Tästä ovat seurauksena liian alhaiset leukosyyttimäärät tai virtsan pidemmän aikaa seistessä vieläpä väärät negatiiviset tulokset.
69869
Analyysivirheiden kannalta katsottuna saadaan leukosyyttien kvantitatiivisen mikroskooppisen määräyksen avulla ei-sentri-fugoidussa, homogenoidussa virtsassa laskukammiossa sangen tyydyttävät arvot. Käytännössä tätä menetelmää käytetään kuitenkin harvoin, koska se on vaivalloinen, aikaa kuluttava ja vaatii koulutetun henkilökunnan käyttöä.
Valtaosa virtsan leukosyyttimääräyksistä suoritetaan käytännössä ns. näkökenttämenetelmän avulla virtsaäedimenttiä käyttäen. Tätä varten on valmistettava ensin tutkittava aines (sedimentti) sentrifugoimisen avulla. Tällöin rikastuvat kuitenkin myös muut virtsan aineosat, jotka, kuten suolat ja epiteelisolut, voivat vaikeuttaa huomattavasti leukosyyttien mikroskoopin avulla tapahtuvaa laskemista. Vaihteleva sedi-menttipitoisuus, sedimentin epähomogeenisuus sekä mahdolliset erilaiset mikroskoopin suurennussuhteet tai erilaiset optiset järjestelmät aiheuttavat sen, että tällöin tavallisesti saadut leukosyyttimäärien arvot mikroskoopin näkökenttää kohden voivat sisältää usean sadan prosentin suuruisen virheen.
Viimeaikoina ei tämän johdosta ole puuttunut yrityksiä aikaansaada sellainen diagnostinen väline, jonka avulla kehon nesteissä olevat leukosyytit voidaan osoittaa yksinkertaisella ja helpolla tavalla sekä mahdollisimman nopeasti ja täydellisesti. Määräysperiaatteen tällaista leukosyyttikoetta varten ovat tarjonneet entsymaattiset reaktiot, koska leukosyyteillä on erittäin laaja entsyymispektri.
Saksalaisissa patenttihakemuksissa P 28 26 965.0, P 28 36 644.1 ja P 28 54 987.3 on kuvattu esimerkiksi sellaisia diagnostisia välineitä, jotka muodostaa imukykyinen kantaja, joka on kyllästetty sopivalla puskuriaineella, tavanomaisilla apuaineilla ja kromogeenisella aineella. Patenttihakemuksen P 28 26 965.0 mukaisesti käytetään kromogeenisena aineena sulfoniftaleiini-esteriä, jolla on yleinen kaava A
3 69869 P ” R” 2 R "-0 J I /0_Rl" 1 Ύη ιΓ3^ II 3· I 5" V A^\r3·' _0 R"" (A)
N II
V 1 4 R4'' jossa kaavassa R.J " on mahdollisesti halogeenilla tai alemmalla alkoksiryhmällä substituoitu karbonihappojäännös (selityksessä käytetään karboksyy-lihaposta sanontaa karbonihappo) tai peptidikemiassa käytetyllä typpisuojaryhmällä varustettu aminohappo- tai peptidijäännös, R2" on halogeeniatomi tai alempi alkyyliryhmä, " ja jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kumpikin erikseen vety- tai halogeeniatomi,
patenttihakemuksen P 28 36 644.1 mukaisesti atsoväriaine-este-reitä, joilla on yleinen kaava B
A'-N=N-B'(OR) (B) n jossa A' on viisi- tai kuusijäseninen, mahdollisesti bentsokonjugoitu jäännös, jossa on yksi tai kaksi heteroatomia, jotka kuuluvat ryhmään, N, S, O, ja joka voi mahdollisesti olla substituoitu kerran tai useamman kerran halogeenilla, alemmalla alkyyli-ja/tai alemmalla alkoksiryhmällä, tai yksi- -kolmekertaisesti alemmalla alkyyli-, alemmalla alkoksi-, nitro-, sulfonato- ja/ tai asyyliaminoryhmällä substituoitu fenyvlijäännös, B' on edullisesti kerran tai kahdesti sulfonato-, alempi alkoksi- ja/tai alempi alkoksi-poly-alkyleenioksi-ryhmällä substituoitu bentseeni, naftaliini- tai kinoliini-jäannös, R on karbonihappojäännös tai peptidikemiassa käytetyllä typpisuojaryhmällä varustettu aminohappo- tai peptidijäännös, ja 4 69869 n on luku 1 tai 2,
ja patenttihakemuksen P 28 54 987.3 mukaisesti indoksyyli-es-teriä, jolla on yleinen kaava C
V" I 0-A"-B" R ' ' ' ^ .--v 2 ;( r (c) R III -- ^ R3 1 V" jossa kaavassa R1''', R2'''t R3''', '1', jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, voivat kukin olla vety tai halogeeni, alempi alkyy-li-, alempi alkoksi-, aryyli-, aralkyyli-, aralkoksi-, hydrok-si-, karboksi-, karboksi-alempi alkoksi-, aralkoksikarbonyyli-, aralkoksikarbonyyli-alempi alkoksi-, nitro- tai alempi asyyli-aminoryhmä, tai kulloinkin kaksi viereistä substituenttia merkitsee mahdollisesti halogeenilla substituoitua bentsokonjugoi-tua jäännöstä, X on rikkiatomi tai mahdollisesti alemmalla alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai asyylijäännöksellä substituoitu imino-ryhmä, A" on aminohappo- tai peptidijäännös, ja B" on peptidikemiassa käytetty tai siitä johdettu typpisuoja-ryhmä.
Tämän diagnostisen välineen avulla voidaan esterolyyttisten, vast, proteolyyttisten entsyymien, erikoisesti leukosyyteissä olevien esteraasien vast, proteaasien, osoittaminen kehon nesteissä, erikoisesti virtsassa, suorittaa yksinkertaisesti ja nopeasti värin muuttumisen perusteella.
Esillä olevan keksinnön tarkoituksena on ollut nopeuttaa tämän entsymaattisen kokeen perustana olevaa osoitusreaktiota.
Yllättäen on todettu, että tällaisen entsymaattisesti suoritetun leukosyyttikokeen reaktioaikoja voidaan lyhentää huomattavasti jos tähän asti tavanomaisten apuaineiden ja kromogeenis-ten aineiden lisäksi käytetään yhtä tai useampaa aktivaattoria.
...... 5 69869
Esillä olevan keksinnön kohteena on tämän johdosta diagnostinen väline esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi, joka sisältää tavanomaisten apuaineiden ohella tavanomaista esteraasi- ja/tai proteaasisubstraattia, jolle on tunnusomaista se, että se tämän lisäksi sisältää yhtä tai useampaa aktivaattoria ryhmästä:
a) pyridiini-johdannaiset, joilla on yleinen kaava I
R3 (I> R .AtX *5 jossa , R2> R^» ja R^, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin vety tai halogeeni, alempi alkyyli- tai alempi alkoksiryhmä, tai vinyyliryhmä, joka on substituoitu mahdollisesti yhden tai useamman alemman alkoksi-, amino- alempi alkyyli-amino-, di-alempi-alkyyliaminoryhmän fenyyli- tai naftyylijäännöksellä tai pyridiini- tai tiofeenijäännöksellä, kulloinkin kaksi viereistä substituenttia voi merkitä mahdollisesti kerran tai useammin halogeenilla, hydroksiryhmillä, alempi alkyyli- tai alemmilla alkoksiryhmillä substituoitua indeno- tai bentsokonjugoitua jäännöstä, joka puolestaan voi mahdollisesti sisältää alemmalla alkyyliryhmällä substituoidun bentso- tai pyridokonjugoidun jäännöksen, ja R^ voi lisäksi olla vinyyli-kinuklidyyli-karbinoliryhmä.
b) imidatsoli-johdannaiset, joilla on yleinen kaava II
γίΓ (ii) J,· jossa R.j ' merkitsee vetyä, alempaa alkyyliryhmää tai mahdollisesti hydroksi- tai asyyliryhmällä substituoitua fenyylijäännöstä, ja R2' on vety, aminoalkyyli-, N-asyyliaminoalkyyli- tai alempi 6 69869 alifaattinen, mahdollisesti tyydyttämätön karboksyylihappo-jäännös, tai mahdollisesti typpiatomiiin asyloitu alempi alifaattinen α-aminohappojäännös.
c) alkoholit, joilla on yleinen kaava III
X-A-OH (III) jossa X on vety tai hydroksiryhmä, ja A on suora- tai haarautunutketjuinen hiilivetyjäännös, joka on tyydytetty tai tyydyttämätön, syklinen tai asyklinen ja sisältää 1-30, edullisesti 5-22 hiiliatomia asyklisessä yhdisteessä ja 3-20, edullisesti 6-17 hiiliatomia syklisessä yhdisteessä.
d) metallikompleksit, joilla on yleinen kaava IV
D /B (CN) (NO) 7 (IV) m— n p— jossa D on alkalimetalli-ioni, B on raskasmetalli-ioni, m on kokonaisluku 2-5, n on kokonaisluku 4-8 ja p on 0 tai 1, jolloin luku m riippuu raskasmetalli-ionin arvosta ja luvusta n.
Keksinnön mukaisen diagnostisen välineen muodostaa edullisesti imukykyinen kantaja, kalvokerros, jauheseos, lyofilisaatti, liuos tai reagenssitabletti, joka sisältää tavanomaista es-teraasi- ja/tai proteaasisubstraattia, tavanomaisia lisäaineita sekä yhtä tai useampaa aktivaattoria.
Keksintö koskee myös diagnostisen välineen käyttöä.
Halogeenilla tarkoitetaan substituentteja R1 , , r4 ja R(.
määriteltäessä fluoria, klooria, bromia ja jodia, edullisesti klooria ja bromia.
7 69869
Alemmat alkyyli- ja alkoksiryhmät määriteltäessä substituentte-ja / R^ , R^ ja R^, sekä alemmat alkvyliryhmät, määri teltäessä substituentteja R^' ja R ' voivat olla suoraketjui-sia tai haarautuneita ja sisältää 1-5, edullisesti 1-3, hiili-atomia .
Erittäin edullisia ovat metyyli-, etyyli-, n-propyyli- ja iso-propyyli- vast, metoksi-ja etoksiryhmät.
Asyylijäännöksinä määriteltäessä substituentteja ' ja R2' tulevat kysymykseen alifaattisten karbonihappojen jäännökset, joissa on 1-5 edullisesti 1-3 hiiliatomia, jolloin asctyyli-jäännös on erittäin edullinen.
Heterosyklisellä jäännöksellä, määriteltäessä substituentteja R^ , R2, R^, R^ ja R,-, ymmärretään 5- tai 6-jäsenisiä jäännöksiä, joissa on 1-3 heteroatomia, jolloin heteroatomeina tulevat kysymykseen typpi-, tikki- ja happiatomi. Erittäin edullisia ovat pyridyyli-, furyyli- ja tienyylijäännös.
"Alempana alifaattisena, mahdollisesti tyydyttämättömänä, karbonihappojäännöksenä" ja "mahdollisesti typpiatomiiin asy-loituna alempana alifaattisena α-aminohappo-jäännöksenä" tulevat kysymykseen karbonihapot, joissa on 1-5, edullisesti 1-3, hiiliatomia vast, niiden α-amino-johdannaiset. Erittäin edullisia ovat etikkahappo, propionihappo ja akryylihappo, vast. L-alaniini ja N-asetyyli-L-alaniini.
Aktivaattoreina, joilla on yleinen kaava IV, tulevat kysymykseen alkalimetalli-ionit D, edullisesti natrium- ja kaliumionit, ja raskasmetalli-ioneina B edullisesti metallien rauta-, nikkeli-, kromi-, mangaani-, koboltti-, molybdeeni- ja vanadiini-ionit.
Esillä olevan keksinnön mielessä käytettävinä aktivaattoreina mainittakoon esimerkiksi seuraavat: 8 1. Pyridiini 69 8 69 2. 2-inetyyli-pyridiini 3. 3-etyyli-pyridiini 4. 2-bromi-pyridiini 5. 3,5-dikloori-pyridiini 6. 4-metoksi-pyridiini 7 . 2,6-dimetyyli-4-etoksi-pyridiini 8. Kinoliini 9. 2-metyyli-kinoliini 10. 8-metyyli-kinoliini 11. 7-isopropyyli-kinoliini 12. 2-kloori-kinoliini 13. 4-bromi-kinoliini 14. 3-metoksi-kinoliini 15. 6-etoksi-kinoliini 16. 2-metyyli-6-bromi-kinoliini 17. 2-metyyli-4-metoksi-kinoliini 18. 5,7-dibromi-8-metoksi-kinoliini 19. Isokinoliini 20. 1-metyyli-isokinoliini 21. 3-propyyli-isokinoliini 22. 7-metyyli-isokinoliini 23. 1-kloori-isokinoliini 24. 4-bromi-isokinoliini 25. 7-metoksi-isokinoliini 26. l-metoksi-3-kloori-isokinoliini 27. l-kloori-4-metyyli-5-metoksi-isokinoliini 28. Bentso-/b_/-kinoliini (= akridiini) 29. Bentso-/ c_/-kinoliini (= fenantridiini) 30. 2-metyyli-fenantridiini 31. 2-etyyli-fenantridiini 32. 2-propyyli-fenantridiini 33. 2-metoksi-fenantridiini 34 . Bentso-/ f_/-kinoliini 35. 2-isopropyyli-bentso-/ f/-kinoliini 36. 3-metyyli-bentso-/f_/-kinoliini 37. 2,4-dimetyyli-bentso-/f_/-kinoliini 38. Bentso-/ g_/-kinoliini 39. 4-metyyli-bentso-/ g_/-kinoliini 40. 2,4 -dimetyy li -bentso-/"^/"^!110^ 9 69869 41. Bentso-/ h/-kinoliini 42. 1,7-fenantroliini 43. 2-metyyli-l,7-fenantroliini 44. 2,8-dimetyyli-1,7-fenantroliini 45. 4,7-fenantroliini 46. 3-metyyli-4,7-fenantroliini 47 . 3,8-diinetyyli-4,7-fenantroliini 48. 1,10-fenantroliini 49. 2,9-dimetyyli-l,10-fenantroliini 50. 4-atsa-fluoreeni 51. Kiniini 52. Kinidiini 53. Kinkoliini 54. Kinkonidiini 55. Kupreiini 56 . 2-/fenyyli./-vinyyli-pyridiini- (2 ') 57 . 2-/4"-metoksi-fenyyli1/-vinyyli-pyridiini- (2 ' ) 58. 2-/4"-(Ν,Ν-dimetyyliamino)-fenyyliy-vinyyli-pyridiini-(2') 59. Bis-/2-(fenyyli)-vinyyliV-pyridiini-(2',41) 60. 2-/naftyyli - (l"]_/-vinyyli-pyridiini- (2 ’) 61. 2-/pyridyyli- (2"]_7~vinyyli-pyridiini- (2 ') 6 2 . 2-/pyridyyli- (3 " )_/-vinyyli-pyridiini- (2 ' ) 63. 2-/pyridyyli - (4"]_7-vinyyli-pyridiini- (2' ) 64. 2-/furyyli-(2"^/-vinyyli-pyridiini-(2') 65 . 2-/pyridyyli- (3 "J_/-vinyyli-pyridiini- ( 3 ' ) 66 . 2-/pyridyyli- ( 3"J_/-vinyyli-pyridiini- (4 ' ) 67 . 2-/pyridyyli- (4"j_/-vinyyli-pyridiini- (4 ' ) 68 . 2-/tienyyli- (2"]_/-vinyyli-pyridiini- (4 ') 69. Imidatsoli 70. 1-etyyli-imidatsoli 71. 1-fenyyli-imidatsoli 72. 1-(4'-hydroksi-fenyyli)-imidatsoli 73. 1-(4’-asetyyli-fenyyli)-imidatsoli 74. Histamiini 75. Ν-α-asetyyli-histamiini 76. (Imidatsolyyli-4)-etikkahappo 77. 8-(imidatsolyyli-4)-propionihappo 78. 8-(imidatsolyyli-4)-akryylihappo 79. L-histidiini 80. N-a-asetyyli-L-histidiini 69869 10 81. Heksanoli-(1) 82. Heptanoli-(1) 83. Oktanoli-(l) 84. Nonanoli-(l) 85. Dekanoli-(l) 86. Dodekanoli-(1) 87. Tetradekanoli-(1) 88. Pentadekanoli-(1) 89. Heksadekanoli-(1) 90. Heptadekanoli-(1) 91. Oktadekanoli-(1) 92. Nonadekanoli-(1) 93. Ikosanoli-(1) 94. Dokosanoli-(1) 95. Sykloheksanoli 96. Sykloheksen-(1)-oli-(1) 97. Sykloheptanoli 98. Syklo-oktanoli 99. Syklononanoli 100. Syklodekanoli 101. Syklododekanoli 102. Sykloheptadekanoli 103. Sykloheptadeken-(9)-oli-(1) 104. Sitronelloli 105. Geranioli 106. Neroli 107. Linaloli 108. Farnesoli 109. Nerolidoli 110. cis-oktadeken-(9)-oli-(1) 111. Fytoli 112. Pentadioli-(1,5) 113. Heksaanidioli-(1,6) 114. Heptaanidioli-{1,7) 115. Oktaanidioli-(1,8) 116. Nonaanidioli-(1,9) 117. Dekaanidioli-(1,10) 118. Dodekaanidioli-(1,12)
119 . Tri-kaliuxn-heksasyano-ferraatti-III
120. Tetra-kalium-heksasyano-ferraatti-II
121. Di-kalium-tetrasyano-nikkelaatti-II
11 69869
122. Tri-natrium-oktasyano-molybdaatti-V
123. Di-natrium-pentasyano-nitrosyyli-ferraatti-II
124. Tri-kalium-pentasyano-nitrosyyli-manganaatti-I
125. Tri-kalium-pentasyano-nitrosyyli-kromaatti-I
126. Tri-kalium-pentasyano-nitrosyyli-koboltaatti-I 12 7. Penta-kalium-pentasyano-nitrosyyli-vanadaatti-I
Kaikki aktivaattorit ovat tunnettuja yhdisteitä tai niitä voidaan valmistaa analogisesti tunnettujen yhdisteiden valmistamiseen verrattuna.
Keksinnön mukaisesti aktivaattoreina käytettyjä yhdisteitä, joilla on yleinen kaava I, II ja IV, käytetään väkevyyksissä -4 -3 -1 10 -1 moolia/litra, edullisesti 10 -10 moolia/litra kylläs- tysliuosta, ja yleisen kaavan III mukaisia aktivaattoreita lisätään kyllästysliuokseen 0,5-10 % (p/t), edullisesti 1-5 % (p/t) .
Keksinnön mukaiset diagnostiset aineet sisältävät aktivaatto-reiden lisäksi muita tavanomaisesti käytettyjä aineosia, kuten esimerkiksi tavanomaisia esteraasi- tai proteaasi-substraatteja, puskuria, kostutusainetta, sopivassa tapauksessa kompleksin muodostajaa ja hapetusainetta. Nämä lisätään sillä tavoin ja sellaisissa väkevyyksissä kuin saksalaisissa patenttihakemuksissa P 28 26 965.0, P 28 36 644.1 ja P 28 54 987.3 on kuvattu.
Niinpä lisätään esteraasi- tai proteaasisubstraattina käytet- tyjä kromogeeneja tavallisesti väkevyydessä 10 -1 mooli/litra, -3 -1 edullisesti 10 -10 moolia/litra, kyllästysliuosta, päällys- tysmassaa tai tutkittavaa nestettä.
Eräs toinen diagnostisen aineen aineosa, joka on tarkoitettu esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi, erikoisesti leukosyytti-proteaasien osoittamiseksi, on sopiva puskurijärjestelmä. Tällöin tulevat kysymykseen esimerkiksi fosfaatti-, boraatti-, barbituraatti-, tris-(hydroksimetyyli)-aminometaani-(=tris)-, 2-amino-2-metyyli-propaanidioli-1,3-(=amedioli)- tai aminohappopuskurit, jolloin pH-arvo ja kapasiteetti on valittava siten, että mittausseoksessa 12 69869 tai koeliuskassa vallitsee pH-alue 6-10, edullisesti 7-9.
Eräs toinen esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseen käytettävän diagnostisen aineen aineosa, erikoisesti leukosyyttiesteraasien- tai proteaasien osoittamiseen käytetty, voi olla pintai-aktiivinen aine. Edullisesti käytetään ei-ionisia pinta-aktiivisia aineita, mutta voidaa myös käyttää amfoteerisiä, kationi- tai anioniaktiivisia, pinta-aktiivisia aineita väkevyydessä 0,05-2 %, edullisesti 0,1-1 %.
Eräs toinen keksinnön mukaisen diagnostisen välineen aineosa voi olla sopiva kompleksinmuodostaja. Edullisesti käytetään metallisuoloja, esimerkiksi alkuaineiden rauta, kupari, kromi, koboltti, nikkeli, magnaani ja sinkki metallisuoloja. Niitä -4 -1 lisätään väkevyydessään 10 -10 moolia/litra, edullisesti -3 -2 10 -10 moolia/litra kyllästysliuosta.
Keksintö koskee myös menetelmää keksinnön mukaisten diagnostisten välineen valmistamiseksi, jossa voidaan käyttää myös hapetusaineita, kuten esimerkiksi kalium-heksasyanoferraattia- III, kaliumbromaattia, kaliumkromaattia, fenatsiini-metosulfaat- -4 tia tai tetratsoliumsuolaa. Niitä lisätään väkevyydessään 10 -1 -3 -1 moolia/litra, edullisesti 10 -10 moolia/litra kyllästysliuosta, päällystysmassaa tai tutkittavaa nestettä.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle diagnostisen välineen valmistamiseksi on tunnusomaista, että sinänsä tunnetulla tavalla imu-kykyinen kantaja kyllästetään, aktivaattoreilla tavanomaisella esteraasi- ja/tai proteaasisubstraatilla, sekä tavanomaisilla apuaineilla. Kantaja on edullisesti suodatuspaperi, selluloosa tai tekoaineliuska. Kyllästys siis suoritetaan tarvittavien tavanomaisesti koeliuskojen valmistuksessa käytettyjen reagens-sien liuoksella (substraatti, puskuri, aktivaattori, mahdollisesti pinta-aktiivinen aine, kompleksinmuodostaja, hape-tusaine jne.), jossain helposti haihtuvassa liuottimessa, kuten vedessä, metanolissa, etanolissa tai asetonissa. Tämä tapahtuu tarkoituksenmukaisesti kahdessa vaiheessa:
Ensin kyllästetään käyttäen vesiliuosta, joka sisältää puskurin ja sopivassa tapauksessa vesiliukoisia aktivaattoreita. Tämän jälkeen kyllästetään käyttäen liuosta, joka sisältää esteraasi-tai proteaasisubstraatin, mahdollisesti veteen liukenemattomia aktivaattoreita sekä muita veteen liukenemattomia 13 69869 lisäaineita. Erikoistapauksissa voidaan käyttää myös päinvastaista kyllästysjärjestystä.
Valmiit koepaperit voidaan käyttää sellaisinaan tai liimattuina sinänsä tunnetulla tavalla tarttumislaitteisiin, tai edullisesti sovitettuina tekoaineen ja hienosilmäisen verkkorakenteen väliin saksalaisen patenttijulkaisun 21 18 455 mukaisesti.
Kalvolla päällystettyjen koeliuskojen valmistamiseksi lisätään kaikki reagenssit kalvon muodostavan aineen, kuten esimerkiksi polyvinyyliesterin tai polyamidin, liuoksessa ja sekoitetaan homogeeniseksi. Seos levitetään ohuena kerroksena tekoaine-kantajalle ja kuivataan. Keksinnön mukaisesti leikataan kalvolla päällystetyt koeliuskat kuivaamisen jälkeen ja niitä voidaan käyttää sellaisinaan tai sinänsä tunnetulla tavalla tartuntaeli-miin liimattuina tai esimerkiksi sovitettuina tekoaineen ja hienosilmäisen verkon väliin saksalaisen patenttijulkaisun 21 18 455 mukaisesti.
Keksinnön mukainen diagnostinen aine esterolyyttisten ja/tai proteolyyttisten entsyymien osoittamiseksi jauheseosten tai reagenssitablettien muodossa voidaan valmistaa lisäämällä edellä mainittuihin, kokeissa käytettyihin aineosiin tavanomaisia galeenisiä lisäaineita ja rakeistamalla tämän jälkeen. Tällaisia lisäaineita ovat esimerkiksi hiilihydraatit, kuten esimerkiksi mono-, oligo- tai polysakkaridit, tai sokerialkoholit, kuten esimerkiksi manniitti, sorbiitti tai ksyliitti, tai muut liukoiset inertiset yhdisteet, kuten polyetyleeniglykoli tai polyvinyylipyrrolidoni. Jauheseosten tai reagenssitablettien loppupaino on yleensä suunnilleen 50-200 mg, edullisesti 50-80 mg.
Sellaisten lyofilisaattien valmistamiseksi, joiden kokonaispaino on noin 5-20 mg, edullisesti noin 10 mg, jäädytyskuivataan sellainen liuos, joka sisältää kaikkien koetta varten tarpeellisten reagenssien lisäksi tavanomaisia vahvistavia aineita, kuten esimerkiksi polyvinyylipyrrolidonia, ja mahdollisesti muita lisäaineita, kuten esimerkiksi manniittia, sorbiittia tai ksy-liittiä.
14 69869
Keksinnön mukainen diagnostinen aine, joka on liuoksen muodossa, sisältää edullisesti kaikkia kokeessa tarvittavia reagens-seja. Liuottimina tulevat kysymykseen vesi tai veden seokset jonkin vesiliukoisen orgaanisen liuottimen, kuten esimerkiksi metanolin, etanolin, asetonin tai dimetyyliformamidin kanssa. Säilyvyyssyistä voi olla edullista jakaa kokeissa tarvittavat reagenssit kahdeksi tai useammaksi liuokseksi, jotka yhdistetään vasta varsinaisen kokeen aikana.
Täten valmistettu diagnostinen väline tekee mahdolliseksi osoittaa leukosyytit tutkittavissa kehon nesteissä nopeasti ja yksinkertaisesti värin muodostuksen tai värin muutoksen avulla. Verrattuna niihin diagnostisiin välineisiin, jotka on esitetty hakemuksissa P 28 26 965.0, P 28 36 644.1 ja P 28 54 987.3, voidaan keksinnön mukaisia aktivaattoreita käytettäessä todeta huomattavasti lyhyemmät reaktioajat.
Esillä olevaa keksintöä kuvataan lähemmin seuraavien esimerkkien avulla.
Esimerkki 1
Suodatinpaperi (esim. "Schleicher & Schiill 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C vast, huoneen lämpötilassa.
Liuos 1
Tris-(hydroksimetyyli)-amino-metaani-HCl-puskuri, 0,2 moolia/ litra, pH 9,0, vedessä.
Liuos 2 -3
Substraattiliuos 10 moolia/litra asetonissa.
Keksinnön mukaiset aktivaattorit lisätään liukoisuudesta riippuen liuokseen 1 tai liuokseen 2 niin, että yleisen kaavan I, II ja IV mukaisia aktivaattoreita käytettäessä saadaan loppu- -2 väkevyydeksi 10 moolia/litra kyllästysliuosta ja yleisen kaavan III mukaista aktivaattoria käytettäessä 2 % (p/t) kyllästysliuok-sesta laskettuna.
15 69869
Taulukossa 1 on esitetty koetulokset käytettäessä seuraavia esteraasi- tai proteaasisubstraatteja: A: Di-asetyyli-3',3"-dibromi-5',5"-dikloori-fenolisulfoni- ftaleiini, B: Di-asetyyli-4,5,6,7,3',5',3",5"-oktabromi-fenolisulfoni- ftaleiini, C: Di-(N-bentsyylikarbonyyli-2-(fenyylialanyyli)-3',5',3",5"- tetrabromi-fenolisulfoniftaleiini, D: Di-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-fenyylialanyyli)-3',5',3",5"- tetrabromi-fenolisulfoniftaleiini.
Taulukossa 1 on esitetty reaktioajat, jotka kuluvat koeliuskan kastamisesta standardiliuokseen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^,ul isotonisessa ruokasuolaliuoksessa, ensimmäiseen selvään väri-reaktioon. Vertailuarvoina käytetään samojen koostumusten reaktioaikoja ilman aktivaattorilisäystä.
Neljän tässä yhteydessä tutkitun yhdisteen värinmuutos tapahtuu värittömästä tummansiniseen.
Taulukko 1
Aktivaattorit Substraatin reaktioajat
Abc d
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_210 sek. 90 sek. 600 sek. 550 sek.
1. Pyridiini 110 sek. 70 sek. 410 sek. 450 sek.
2. 3-etyyli-pyridiini 95 sek. 65 sek. 440 sek. 470 sek.
3. 4-metoksi-pyridiini 110 sek. 65 sek. 470 sek. 450 sek.
4. Kinoliini 75 sek. 50 sek. 320 sek. 340 sek.
5. 2-metyyli-kinoliini 45 sek. 55 sek. 300 sek. 350 sek.
6. 4-brc*ni-kinoliini 60 sek. 60 sek. 370 sek. 330 sek.
7. 3-metoksi-kinoliini 50 sek. 50 sek. 310 sek. 380 sek.
8. Isokinoliini 85 sek. 55 sek. 350 sek. 380 sek.
9. Bentsoyj b7~kinoliini = akridiini 90 sek. 65 sek. 280 sek. 330 sek.
10. Bentso-/c_/-kinoliini = fenantridiini 75 sek. 60 sek. 260 sek. 360 sek.
11. 2-metyyli-fenantridiini 100 sek. 65 sek. 250 sek. 370 sek.
12. 2-etyyli-fenantridiini 80 sek. 70 sek. 300 sek. 360 sek.
13. 2-propyyli-fenantridiini 80 sek. 60 sek. 280 sek. 330 sek.
16 69869
Vertailukoostumus
Ilman aktivaattoria_210 sek. 90 sek. 600 sek. 550 sek.
14. 2-metoksi-fenantridiini 85 sek. 60 sek. 260 sek. 350 sek.
15. Bentso-^~f7-kinoliini 90 sek. 40 sek. 310 sek. 310 sek.
16. Bentso-/h_7~kinoliini 90 sek. 55 sek. 290 sek. 340 sek.
17. 1,7-fenantroliini 75 sek. 65 sek. 340 sek. 410 sek.
18. 4,7-fenantroliini 80 sek. 70 sek. 270 sek. 380 sek.
19. 4-atsa-fluoreeni 120 sek. 50 sek. 240 sek. 290 sek.
20. Kiniini 110 sek. 70 sek. 350 sek. 330 sek.
21. Kinidiini 70 sek. 65 sek. 375 sek. 280 sek.
22. Kinkoniini 60 sek. 50 sek. 340 sek. 300 sek.
23. Kinkonidiini 65 sek. 55 sek. 390 sek. 320 sek.
24. Kupreiini 70 sek. 60 sek. 400 sek. 305 sek.
25. 2-/fenyyli/-vinyyli-pyridiini- (2') 115 sek. 70 sek. 370 sek. 270 sek.
26. 2-/pyridyyli- (3 ")_/-vinyyli- pyridiini-(2') 145 sek. 65 sek. 430 sek. 250 sek.
2 7. 2-/pyridyyli-(4")/-vinyyli- pyridiini-(41) 140 sek. 55 sek. 350 sek. 280 sek.
28. 2-/furyyli- (2 ")J-vinyyli- pyridiini- (2') 150 sek. 70 sek. 410 sek. 250 sek.
29. Imidatsoli 90 sek. 55 sek. 380 sek. 210 sek.
30. Histamiini 110 sek. 60 sek. 440 sek. 290 sek.
31. (Imidatsolyyli-4)-etikkahappo 150 sek. 75 sek. 450 sek. 350 sek.
32. β - (imidatsolyyli-4-) -propioni- happo 170 sek. 70 sek. 490 sek. 380 sek.
33. L-histidiini 130 sek. 80 sek. 465 sek. 320 sek.
34. Oktanoli-(l) 150 sek. 75 sek. 500 sek. 460 sek.
35. Dekanoli-(1) 130 sek. 70 sek. 480 sek. 420 sek.
36. Tetradekanoli-(1) 105 sek. 60 sek. 420 sek. 400 sek.
37. Syklo-aktanoli 125 sek. 80 sek. 530 sek. 480 sek.
38. Syklododekanoli 90 sek. 55 sek. 490 sek. 470 sek.
39. Sitronelloli 100 sek. 40 sek. 430 sek. 440 sek.
40. Famesoli 130 sek. 50 sek. 440 sek. 410 sek.
41. Fytoli 135 sek. 55 sek. 430 sek. 450 sek.
42. Tri-kalium-heksasyanoferraatti- II 160 sek. 70 sek. 550 sek. 480 sek.
4 3. Di-kalium-tetrasyano-nikke- laatti-II 160 sek. 80 sek. 530 sek. 450 sek.
44. Di-natrium-pentasyano- nitrosyyli-ferraatti-II 150 sek. 65 sek. 470 sek. 460 sek.
17 69869
Samanlaisia koetuloksia aikaansaadaan lisättäessä substraattien A, B, C ja D sijasta muita sulfoniftaleiini-estereitä hakemuksen P 28 26 965.0 mukaisesti ja/tai vakioliuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonisessa suolaliuoksessa, leukosyyttipitoista virtsaa.
Esimerkki 2
Suodatinpaperi (esimerkiksi "Schleicher & Schiill 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C tai huoneen lämpötilassa.
Liuos 1
Tris-(hydroksimetyyli)-aminometaani-HCl-puskuri, 0,2 moolia/ litra, pH 7,0, vedessä (substraatit E, F ja G) vast, tris-(hydroksimetyyli)-amino-metaani-HCl-puskuri, 0,2 moolia/litra, pH 8,0, vedessä (substraatti H).
Liuos 2 -3
Substraatti liuos 10 moolia/litra asetonissa.
Aktivaattorilisäys ja kokeen suorittaminen tapahtuvat samalla tavoin kuin esimerkissä 1.
Taulukossa 2 on esitetty seuraavien proteaasi-substraattien koetulokset: E: Tiatsoli-2-atso-4’-/1'-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyy- lioksi)-5'-metoksinaftaliini/ (koepaperin värinmuutos ruusunpunaisesta punaiseen) F: 6-metoksi-bentsotiatsoli-2-atso-2’-/Τ'-(N-bentsyylioksi- karbonyyli-L--alanyylioksi) -naftaliini./ (koepaperin värinmuutos ruusunpunaisesta punaiseen).
G: 2,4-dinitro-bentsoli-atso-4'-/1'-(N-bentsyylioksikarbonyyli- L-alanyylioksi)-bentsoli7 (koepaperin värinmuutos keltaisesta punaisenvioletiksi).
H: 2,5-dimetoksi-bentsoli-atso-4'-/1'-(N-bentsyylioksikarbonyy- li-L-alanyylioksi)-naftaliini/ (koepaperin värinmuutos kirkkaanoranssista punaiseksi).
18 69869
Reaktioaikoina on esitetty ne ajat, jotka kuluvat koeliuskan kastamisesta standardiliuokseen, jossa on 5000 leukosyyttiä/ ^,ul isotonista ruokasuolaliuosta, ensimmäiseen selvään värireak-tioon. Vertailuarvoina käytetään reaktioaikoja, jotka saadaan käytettäessä samaa koostumusta ilman aktivaattorilisäystä.
Taulukko 2
Aktivaattorit Substraatin reaktioajat
E F G H
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_60 sek. 180 sek. 160 sek. 70 sek.
1. Pyridiini 50 sek. 150 sek. 130 sek. 55 sek.
2. 2-metyyli-pyridiini 45 sek. 140 sek. 135 sek. 50 sek.
3. 2-bromi-pyridiini 50 sek. 150 sek. 125 sek. 45 sek.
4. 3,5-dikloori-pyridiini 45 sek. 160 sek. 130 sek. 50 sek.
5. Kinoliini 50 sek. 110 sek. 95 sek. 45 sek.
6. 8-metyyli-kinoliini 45 sek. 130 sek. 110 sek. 40 sek.
7. 2-kloori-kinoliini 40 sek. 130 sek. 110 sek. 35 sek.
8. 6-etoksi-kinoliini 35 sek. 150 sek. 120 sek. 40 sek.
9. 2-metyyli-4-metoksi-kinoliini 40 sek. 120 sek. 105 sek. 40 sek.
10. Isokinoliini 40 sek. 130 sek. 110 sek. 40 sek.
11. 1-metyyli-isokinoliini 45 sek. 100 sek. 120 sek. 35 sek.
12. 4-brcmi-isokinoliini 45 sek. 140 sek. 115 sek. 40 sek.
13. 7-metoksi-isokinoliini 50 sek. 130 sek. 130 sek. 45 sek.
14. Bentso-/fb7-kin°liini = akridiini 30 sek. 150 sek. 60 sek. 45 sek.
15. Bentso-/ c7~kinoliini = fenantridiini 35 sek. 120 sek. 80 sek. 40 sek.
16. 2-metyyli-fenantridiini 40 sek. 140 sek. 90 sek. 40 sek.
17. Bentso-/f_/-kinoliini 50 sek. 130 sek. 70 sek. 30 sek.
18. 2-isopropyyli-bentso-/ f/- kinoliini 45 sek. 130 sek. 95 sek. 35 sek.
19. 3-metyyli-bentso-/ f/-kinoliini 40 sek. 125 sek. 80 sek. 40 sek.
20. 2,4-dimetyyli-bentso-/ f_/~ kinoliini 40 sek. 110 sek. 90 sek. 40 sek.
21. Bentso-/g_/-kinoliini 40 sek. 90 sek. 70 sek. 35 sek.
22. 4-metyyli-bentso-/g_/-kinoliini 40 sek. 100 sek. 80 sek. 40 sek.
23. Bentso-/h_/-kinoliini 35 sek. 70 sek. 50 sek. 30 sek.
24. 1,7-fenantroliini 45 sek. 120 sek. 120 sek. 40 sek.
25. 4,7-fenantroliini 40 sek. 105 sek. 105 sek. 45 sek.
26. 1,10-fenantroliini 45 sek. 130 sek. 110 sek. 45 sek.
27. Kiniini 40 sek. 120 sek. 60 sek. 35 sek.
19 69869
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_60 sek. 130 sek. 160 sek. 70 sek.
28. Kinkoniini 45 sek. 100 sek. 90 sek. 30 sek.
29. Kupreiini 40 sek. 140 sek. 105 sek. 30 sek.
30. 2-/fenyy1i/-vinyy1i-pyridiini- (2') 35 sek. 125 sek. 120 sek. 50 sek.
31. Bis-/2-(fenyyli)-vinyyli/- pyridiini-(2',4') 30 sek. 150 sek. 140 sek. 60 sek.
32. 2-/furyyli-(2"//-vinyyli- pyridyyli-(2') 30 sek. 120 sek. 90 sek. 55 sek.
33. Imidatsoli 45 sek. 140 sek. 120 sek. 40 sek.
34. 1-etyyli-imidatsoli 40 sek. 130 sek. 130 sek. 45 sek.
35. 1-fenyyli-imidatsoli 35 sek. 120 sek. 120 sek. 40 sek.
36. 1-(41-hydrcksi-fenyyli)-imidat- soli 45 sek. 140 sek. 135 sek. 50 sek.
37. Histamiini 50 sek. 130 sek. 140 sek. 55 sek.
38. β-(imidatsolyyli-4)-propioni- happo 50 sek. 150 sek. 140 sek. 50 sek.
39. β-(imidatsolyyli-4)-akryyli- happo 50 sek. 160 sek. 135 sek. 55 sek.
40. L-histidiini 45 sek. 150 sek. 125 sek. 50 sek.
41. N-a-asetyyli-L-histidiini 45 sek. 140 sek. 130 sek. 40 sek.
42. Heptanoli-(l) 30 sek. 130 sek. 100 sek. 40 sek.
43. Oktanoli-(l) 30 sek. 120 sek. 95 sek. 35 sek.
44. Dekanoli-(l) 20 sek. 90 sek. 80 sek. 30 sek.
45. Dodekanoli-(l) 20 sek. 80 sek. 70 sek. 30 sek.
46. Heksadekanoli-(1) 25 sek. 105 sek. 80 sek. 40 sek.
47. Ikosanoli-(1) 30 sek. 120 sek. 110 sek. 45 sek.
48. Sykloheksanoli 35 sek. 110 sek. 105 sek. 40 sek.
49. Syklcdekanoli 25 sek. 95 sek. 85 sek. 30 sek.
50. Syklododekanoli 25 sek. 120 sek. 90 sek. 25 sek.
51. Sykloheptadekanoli 30 sek. 130 sek. 120 sek. 30 sek.
52. Sykloheptadeken-(9)-oli-(1) 30 sek. 110 sek. 100 sek. 35 sek.
53. Sitronelloli 25 sek. 100 sek. 70 sek. 25 sek.
54. Linaloli 20 sek. 105 sek. 60 sek. 30 sek.
55. Farnesoli 30 sek. 110 sek. 75 sek. 25 sek.
56. cis-oktadeken-(9)-oli-(l) 25 sek. 90 sek. 85 sek. 40 sek.
57. Fytoli 30 sek. 80 sek. 65 sek. 30 sek.
58. Pentadioli-(1,5) 35 sek. 130 sek. 120 sek. 45 sek.
59. Heptaanidioli-(1,7) 40 sek. 150 sek. 125 sek. 40 sek.
60. Dekaanidioli-(1,10) 30 sek. 135 sek. 140 sek. 50 sek.
20 69869
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_60 sek. 180 sek. 160 sek. 70 sek.
61. Dodekaanidioli-(1,12) 40 sek. 160 sek. 130 sek. 50 sek.
62. Tri-kalium-heksasyano-fer- raatti-III 45 sek. 160 sek. 135 sek. 55 sek.
63. Te tra-ka1ium-heksasyano- ferraatti-II 40 sek. 160 sek. 140 sek. 50 sek.
64. Di-natrium-pentasyano-nitro- syyli-ferraatti-II 40 sek. 140 sek. 130 sek. 40 sek.
6 5. Tri-kalium-pentasyano-nitrosyyli- kromaatti-I 50 sek. 145 sek. 130 sek. 50 sek.
66. Tri-kalium-pentasyano-nitro- syyli-koboltaatti-I 50 sek. 160 sek. 145 sek. 45 sek.
Samanlaisia koetuloksia saadaan käytettäessä substraattien E, F, G ja H sijasta muita hakemuksen P 28 36 644.1 mukaisia atso-väriaine-estereitä ja/tai sellaisen standardi liuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^,ul isotonisessa ruokasuolaliuoksessa, leukosyyttipitoista virtsaa.
Esimerkki 3
Suodatinpaperi (esimerkiksi "Schleicher & Schull 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C tai huoneen lämpötilassa.
Liuos 1
Natrium-tetraboraatti-HCl-puskuri, 0,2 moolia/litra, pH 8,0, vedessä.
Liuos 2 -3
Substraattiliuos 10 moolia/litra asetonissa.
Aktivaattorilisäys ja kokeen suoritus tapahtuvat samalla tavoin kuin esimerkissä 1.
Taulukossa 3 esitetään seuraavien proteaasi-substraattien koetulokset: I: 3-/N-(difenyylikarbamoyyli)-L-alanyylioksi7~indoli J: 3-/N-(5',5', dimetyyli-3'-okso-sykloheksen-1'-yyli)-L- alanyylioksi/-indoli K : 3-/N- (bentsyylioksikarbonyyli) -L-alanyylioksiJ7-indoli .
21 69869
Reaktioaikoina on esitetty ne ajat, jotka kuluvat koeliuskan kastamisesta standardiliuokseen, jossa on 5000 leukosyyttiä/ ^,ul isotonista ruokasuolaliuosta, ensimmäiseen selvään väri-reaktioon. Vertailuarvoina käytetään reaktioaikoja, jotka saadaan käytettäessä samaa koostumusta ilman aktivaattorilisäys-tä.
Näiden kolmen substraatin avulla valmistetuissa koepapereissa tapahtuu kastamisen jälkeen leukosyyttipitoisiin liuoksiin värinmuutos värittömästä tummansiniseksi.
Taulukko 3
Aktivaattorit Substraatin reaktioajat
I TK
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_300 sek. 180 sek. 60 sek.
1. Pyridiini 220 sek. 140 sek. 45 sek.
2. 2-bromi-pyridiini 205 sek. 130 sek. 40 sek.
3. 2,6-dimetyyli-4-etoksi-pyridiini 160 sek. 110 sek. 40 sek.
4. Kinoliini 185 sek. 90 sek. 35 sek.
5. 2-metyyli-kinoliini 190 sek. 105 sek. 40 sek.
6. 7-isopropyyli-kinoliini 165 sek. 80 sek. 35 sek.
7. 3-metoksi-kinoliini 150 sek. 75 sek. 30 sek.
8. 2-metyyli-6-bromi-kinoliini 170 sek. 80 sek. 40 sek.
9. 5,7-dibrani-8-metoksi-kinoliini 195 sek. 90 sek. 40 sek.
10. Isokinoliini 150 sek. 80 sek. 40 sek.
11. 3-propyyli-isokinoliini 170 sek. 75 sek. 35 sek.
12. 7-metyyli-isokinoliini 145 sek. 105 sek. 30 sek.
13. 1-kloori-isokinoliini 180 sek. 90 sek. 35 sek.
14. l-metoksi-3-kloori-isokinoliini 155 sek. 95 sek. 40 sek.
15. l-kloori-4-netyyli-5-metoksi-isokinoliini 190 sek. 80 sek. 35 sek.
16. Bentso-/^b/-kinoliini = akridiini 170 sek. 90 sek. 40 sek.
17. Bentso-/ c/-kinoliini = fenantridiini 130 sek. 110 sek. 35 sek.
18. 2-etyyli-fenantridiini 160 sek. 100 sek. 30 sek.
19. 2-metoksi-fenantridiini 145 sek. 120 sek. 35 sek.
20. Bentso-/f_/-kinoliini 130 sek. 105 sek. 35 sek.
21. Bentso-/ g_/-kinoliini 140 sek. 130 sek. 45 sek.
22. 2,4-dimetyyli-bentso-/ g/-kinoliini 135 sek. 110 sek. 40 sek.
23. Bentso-/ h_/-kinoliini 110 sek. 70 sek. 40 sek.
24. 1,7-fenantroliini 165 sek. 130 sek. 45 sek.
25. 2-metyyli-l,7-fenantroliini 130 sek. 110 sek. 45 sek.
22 69869
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_300 sek. 180 sek. 60 sek.
26. 2,8-dimetyyli-l,7-fenantroliini 145 sek. 105 sek. 40 sek.
27. 4,7-fenantroliini 120 sek. 120 sek. 35 sek.
28. 3-metyyli-4,7-fenantroliini 145 sek. 95 sek. 40 sek.
29. 3,8-dimetyyli-4,7-fenantroliini 160 sek. 80 sek. 35 sek.
30. 1,10-fenantroliini 170 sek. 90 sek. 35 sek.
31. 2,9-dimetyyli-l,l0-fenantroliini 145 sek. 120 sek. 45 sek.
32. 4-atsa-fluoreeni 90 sek. 60 sek. 35 sek.
33. Kiniini 150 sek. 90 sek. 30 sek.
34. Kinkonidiini 125 sek. 85 sek. 30 sek.
35. Kupreiini 160 sek. 95 sek. 35 sek.
36. 2-/4"-metoksi-fenyyli/-vinyyli-pyridii- ni-(2’) 95 sek. 90 sek. 45 sek.
37. 2-/4"-(Ν,Ν-dimetyyli-amino)-fenyyli/- vinyyli-pyridiini-(2') 110 sek. 110 sek. 45 sek.
38. Bis-/2-(fenyyli)-vinyyli/-pyridiini- (2',4') 120 sek. 95 sek. 40 sek.
39. 2-/naftyyli-l (1" V-vinyyli-pyridiini- (2') 105 sek. 90 sek. 40 sek.
40. 2-/pyridyyli-(2"]/-vinyyli-pyridiini- (2') ~~ 80 sek. 80 sek. 30 sek.
41. 2-/pyridyyli- (4 "]/-vinyy li-pyr idiini- (2') 60 sek. 50 sek. 25 sek.
42. 2-/j?yridyyli-(3"//-vinyyli-pyridiini- (3') 75 sek. 70 sek. 30 sek.
43. 2-/pyridyyli- (3"j/-vinyyli-pyridiini- (4') 95 sek. 90 sek. 25 sek.
44. 2-/tienyyli-(2"j/-vinyyli-pyridiini- (4') 80 sek. 75 sek. 35 sek.
45. Imidatsoli 175 sek. 120 sek. 35 sek.
46. 1-fenyyli-imidatsoli 180 sek. 140 sek. 40 sek.
47. Histamiini 230 sek. 150 sek. 45 sek.
43. N-a-asetyyli-histamiini 205 sek. 130 sek. 40 sek.
49. (Imidatsolyyli-4)-etikkahappo 220 sek. 150 sek. 50 sek.
50. L-histidiini 195 sek. 120 sek. 45 sek.
51. N-ar-asetyyli-L-histidiini 165 sek. 110 sek. 40 sek.
52. Heksanoli-(1) 95 sek. 95 sek. 30 sek.
53. Oktanoli-(l) 90 sek. 100 sek. 30 sek.
54. Nonanoli-(l) 90 sek. 80 sek. 30 sek.
55. Dekanoli-(l) 80 sek. 60 sek. 25 sek.
56. Dodekanoli-(1) 75 sek. 90 sek. 25 sek.
57. Pentadekanoli-(l) 100 sek. 80 sek. 30 sek.
23 69869
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_ 300 sek. 180 sek. 60 sek.
58. Heptadekanoli-(1) 80 sek. 105 sek. 35 sek.
59. Oktadekanoli-(l) 90 sek. 95 sek. 40 sek.
60. Nonadekanoli-(1) 85 sek. 120 sek. 40 sek.
61. Dokosanoli-(l) 85 sek. 110 sek. 40 sek.
62. Sykloheksen-(l)-oli-(1) 95 sek. 130 sek. 35 sek.
63. Syklononanoli 80 sek. 120 sek. 35 sek.
64. Syklodekanoli 80 sek. 115 sek. 40 sek.
65. Sykloheptadekanoli 90 sek. 130 sek. 40 sek.
66. Geranioli 75 sek. 85 sek. 30 sek.
67. Neroli 90 sek. 70 sek. 35 sek.
68. Linaloli 80 sek. 80 sek. 30 sek.
69. Nerolidoli 105 sek. 90 sek. 25 sek.
70. cis-oktadeken-(9)-oli-(l) 110 sek. 115 sek. 25 sek.
71. Heksaanidioli-(l,6) 130 sek. 130 sek. 45 sek.
72. Oktaanidioli-(1,8) 115 sek. 125 sek. 40 sek.
73. Nönaanidioli-(1,9) 140 sek. 130 sek. 45 sek.
74. Dekaanidioli-(1,10) 130 sek. 115 sek. 50 sek.
75. Tetra-kalium-heksasyano-ferraatti-II 230 sek. 160 sek. 50 sek.
76. Tri-natrium-oktasyano-molybdaatti-V 205 sek. 150 sek. 50 sek.
77. Tri-kalium-pentasyano-nitrosyyli- ferraatti-II 180 sek. 150 sek. 45 sek.
78. Tri-kalium-pentasyano-nitrosyyli- manganaatti-I 210 sek. 145 sek. 40 sek.
79. Penta-kalium-pentasyano-nitrosyyli- vanadaatti-I 220 sek. 155 sek. 45 sek.
Samanlaisia koetuloksia saadaan käytettäessä muita hakemuksen P 28 54 987.3 mukaisia indoksyyliestereitä ja/tai leukosyytti-pitoisia virtsoja sellaisen vakioliuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta.
Esimerkki 4
Suodatuspaperi (esimerkiksi "Schleicher & Schiill 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C tai huoneen lämpötilassa.
Liuos 1
Tris-(hydroksimetyyli)-amino-metaani-HCl-puskuri, 0,2 moolia/ litra, pH 9,0, vedessä.
24 69869
Liuos 2
Di-asetyyli-3',5',3",5"-tetrabromi-fenyylisulfonftaleiini, 10 ^ moolia/litra, asetonissa.
Keksinnön mukaiset aktivaattorit lisätään yksin tai seoksena riippuen liuoksen 1 ja/tai liuoksen 2 liukoisuudesta niin, että kysymyksen ollessa yksittäisistä yleisen kaavan I, II ja IV mukaisista aktivaattoreista saadaan kulloinkin lopDuväkevyy--2 deksi 10 moolia/litra kyllästysliuosta, ja yleisen kaavan III mukaisesta aktivaattorista kysymyksen ollessa loppuväkevyydeksi 2 % (p/t) kyllästysliuoksesta.
Taulukossa 4 on esitetty ne reaktioajat, jotka kuluvat koelius-kan kastamisesta standardiliuokseen, jossa on 5000 leukosyyt-tiä/yUl isotonista ruokasuolaliuosta, ensimmäiseen selvään väri-reaktioon saakka. Vertailuarvona käytetään samanlaisen koostumuksen reaktioaikaa, jossa ei käytetä aktivaattorilisäystä.
Koepaperit värjäytyvät kun ne kastetaan leukosyyttipitoiseen liuokseen värittömästä tummansiniseksi.
Taulukko 4
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria__160 sek.
1. 2-metyyli-kinoliini 110 sek.
2. Tetradekanoli-(1) 90 sek.
Aktivaattorit 1 ja 2 60 sek.
3. 1,7-fenantroliini 80 sek.
4. Tetra-kalium-heksasyano-ferraatti-II 140 sek.
Aktivaattorit 3 ja 4 70 sek.
5. Kinkoniini 90 sek.
6. 2-/fenyyli/-vinyyli-pyridiini-(2') 105 sek.
Aktivaattorit 5 ja 6 65 sek.
Vastaavia koetuloksia saadaan käytettäessä leukosyyttipitoista virtsaa sellaisen vakioliuoksen sijasta, joka sisältää 5000 leukosyyttiä/^,ul isotonista ruokasuolaliuosta.
Esimerkki 5
Esimerkissä 4 kuvatulla tavalla valmistetaan koepapereita 25 käyttäen seuraavia liuoksia: 69869
Liuos 1
Tris- (hydroksimetyyli) -amino-metaani-llCl-puskuri , 0,2 moolia/ litra, pH 8,0, vedessä.
Liuos 2 2-metoksi-4-nitro-bentsoli-atso-4'-/1'-(N-bentsyylioksi-karbonyyli-L-alanyylioksi) -naftaliini./ -3 10 moolia/litra asetonissa.
Koepaperit värjäytyvät kastettaessa leukosyyttipitoiseen liuokseen kirkkaan oranssista punaisiksi.
Taulukossa 5 on esitetty koetulokset. Siinä on esitetty ne reaktioajat, jotka saadaan kastettaessa koeliuska standardiliuok-seen, jossa on 5000 leukosyyttiä/yul isotonista ruokasuolaliuos-ta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuarvona käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, jossa ei ole aktivaat-torilisäystä.
Taulukko 5
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_ 80 sek._ 1. Bentso-/ b/-kinoliini = akridiini 60 sek.
2. cis-oktadeken-(9)-oli-(1) 40 sek.
Aktivaattorit 1 ja 2 30 sek.
3. Bentso-/ h/-kinoliini 50 sek.
4. Kiniini 55 sek.
Aktivaattorit 3 ja 4 35 sek.
5. 1,7-fenantroliini 45 sek.
6. Fernesoli 30 sek.
Aktivaattorit 5 ja 6 25 sek.
Vastaavia koetuloksia saadaan käytettäessä leukosyyttipitoista virtsaa sellaisen standardiliuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^,ul isotonista ruokasuolaliuosta.
Esimerkki 6
Esimerkissä 4 kuvatulla tavalla valmistetaan koepapereita käyttäen seuraavia liuoksia: 26 69869
Liuos 1
Natrium-tetraboraatti-HCl-puskuri, 0,2 moolia/litra, pH 8,0, vedessä.
Liuos 2 3-/N-(2'-nitrobentsoli-sulfenyyli)-L-alanyy1ioksi/-indoli, _3 10 moolia/litra, asetonissa.
Koepaperit värjäytyvät, kun ne kastetaan leukosyyttipitoisiin liuoksiin, keltaisesta vihreäksi.
Koetulokset on esitetty taulukossa 6. Siinä on esitetty reaktioajat, jotka saadaan koeliuskan kastamisesta vakioliuokseen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuarvoina käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, joka ei sisällä aktivaat-toria.
Taulukko 6
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_100 sek.
1. Kinoliini 80 sek.
2. Syklododekanoli 70 sek.
Aktivaattorit 1 ja 2 55 sek.
3. 2--/furyyli- (2"2.7-vinyyli-pyr Idiini-(2 ') 7 5 sek.
4. Fytoli 50 sek.
Aktivaattorit 3 ja 4 40 sek.
5. 4,7-fenantroliini 85 sek.
6. Tetra-kalium-heksasyano-ferraatti-II 90 sek.
Aktivaattorit 5 ja 6 70 sek.
Vastaavia koetuloksia saadaan käytettäessä leukosyyttipitoista virtsaa sellaisen standardiliuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta.
Esimerkki 7
Esimerkissä 4 kuvatulla tavalla valmistetaan koepapereita seuraavia liuoksia käyttäen: 27 69869
Liuos 1
Natrium-tetraboraatti-HCl-puskuri, 0,2 moolia/litra, pH 8,0, vedessä.
Liuos 2 3-/N-(bentsoyyli)-D,L-alanyylioksi/-indoli 10 moolia/litra, asetonissa.
Koepaperit värjäytyvät, kun ne kastetaan leukosyyttipitoisiin liuoksiin, värittömästä siniseksi.
Koetulokset on esitetty taulukossa 7. Siinä esitetään reaktio-ajat, jotka lasketaan koeliuskojen kastamisesta vakioliuokseen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuaikana käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, joka ei sisällä aktivaat-torilisäystä.
Taulukko 7
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_____90 sek.
1. 2-/fenyyli7-vinyyli-pyridiini-(2') 70 sek.
2. Heksadekanoli-(1) 55 sek.
Aktivaattorit 1 ja 2 40 sek.
3. 2-/pyridyyli-(4"j_7~vinyylipyridiini-(4 ') 40 sek.
4. Pellavasiemenöljy 50 sek.
Aktivaattorit 3 ja 4 30 sek.
5. Kinkoniini 75 sek.
6. Di-natrium-pentasyano-nitrosyyli- ferraatti-II 60 sek.
Aktivaattorit 5 ja 6 40 sek.
Samankaltaisia koetuloksia saadaan käytettäessä leukosyytti- pitoista virtsaa sellaisen standardiliuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta.
Esimerkki 7a
Esimerkissä 4 kuvatulla tavalla valmistetaan koepaperit käyt täen seuraavia liuoksia: 28 69869
Liuos 1
Natrium-tetraboraatti-HCl-puskuri, 0,2 moolia/litra, pH 8,0, vedessä.
Liuos 2 3-/N-(toluoli-4'-sulfonyyli)-L-alanyylioksi/-indoli, -3 10 moolia/litra, asetonissa.
Koepaperit värjäytyvät, kun ne kastetaan leukosyyttipitoisiin liuoksiin, värittömästä siniseksi.
Koetulokset on esitetty taulukossa 7a. Siinä esitetään reaktioajat, jotka lasketaan koeliuskojen kastamisesta vakioliuok-seen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuola-liuosta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuaikana käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, joka ei sisällä aktivaattorilisäystä.
Taulukko 7a
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria__24 sek.
1. Kiniini 22 sek.
2. Di-natrium-pentasyano-nitrosyyli-ferraat- ti-II 15 sek.
3. Dekanoli-(l) 18 sek.
Aktivaattorit 1, 2 ja 3 6 sek.
Samankaltaisia koetuloksia saadaan käytettäessä leukosyytti-pitoista virtsaa sellaisen standardiliuoksen sijasta, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta.
Esimerkki 8
Suodatinpaperi (esimerkiksi "Schleicher & Schiill 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C tai huoneen lämpötilassa.
29 69869
Liuos 1
Lauryylipyridiniumkloridi 0,2 % tris-(hydroksimetyyli)-amino-metaani-HCl-puskurissa, 0,2 moolia/litra, pH 7,0, vedessä.
Liuos 2
Tiatsoli-2-atso-4'-/1'-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyyli-oksi)-naftaliini/ -3 10 moolia/litra asetonissa.
Aktivaattorilisäys ja kokeen toteuttaminen tapahtuivat esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.
Koepaperit värjääntyvät, kun ne kastetaan leukosyyttipitoisiin liuoksiin, roosanvärisestä violetiksi.
Koetulokset on esitetty taulukossa 8. Siinä esitetään reaktio-ajat, jotka lasketaan koeliuskojen kastamisesta vakioliuok-seen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuos-ta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuaikana käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, joka ei sisällä aktivaattorilisäystä.
Taulukko 8
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_70 sek.
1. Pyridiini 45 sek.
2. Kinoliini 40 sek.
3. Bentso-/ b/-kinoliini = akridiini 35 sek.
4. 1,10-fenantroliini 40 sek.
5. 4-atsa-fluoreeni 30 sek.
6. Kiniini 35 sek.
7. 2-/pyridyyli- (4"j_/-vinyyli-pyridiini-(4 ' ) 30 sek.
8. Imidatsoli 50 sek.
9. Dodekanoli 30 sek.
10. Fytoli 25 sek.
11. Di-natrium-pentasyano-nitrosyyli-ferraatti-II 60 sek.
Samankaltaisia koetuloksia saadaan käytettäessä muita esimerkissä 1-7 mainittuja substraatteja ja aktivaattoreita ja/tai muita tavanomaisia pinta-aktiivisia aineita.
30 69869
Esimerkki 9
Suodatuspaperi (esimerkiksi "Schleicher & Schiill 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C vast, huoneen lämpötilassa.
Liuos 1
Tris-(hydroksimetyyli)-amino-metaani-HCl-puskuri, 0,2 moolia/ litra, pH 7,0, vedessä.
Liuos 2
Tiatsoli-2-atso-l1-/2'-(N-bentsyylioksikarbonyyli-L-alanyyli- — -3 oksi)-naftaliini/ 10 moolia/litra, ja -3 sinkkiasetaatti-dihydraatti 10 moolia/litra asetonissa.
Aktivaattorilisäys ja kokeen suorittaminen tapahtuvat samalla tavoin kuin esimerkissä 1.
Koepaperit värjääntyvät kastettaessa leukosyyttipitoisiin liuoksiin ruusunpunaisesta sinisenvioletiksi.
Koetulokset on esitetty taulukossa 9. Siinä esitetään reaktio-ajat, jotka lasketaan koeliuskojen kastamisesta vakioliuokseen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuosta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuaikana käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, joka ei sisällä akti-vaattorilisäystä.
31 69869
Taulukko 9
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktlvaattoria______65 sek.
1. Pyridiini 50 sek.
2. Kinoliini 45 sek.
3. Bentso-/b_/-kinoliini = akridiini 40 sek.
4. 1,10-fenantroliini 30 sek.
5. 4-atsa-fluoreeni 35 sek.
6. Kiniini 30 sek.
7. 2-/pyridyyli-(4 " )_/-vinyyli-pyridiini- (4 ') 35 sek.
8. Imidatsoli 45 sek.
9. Dodekanoli 25 sek.
10. Fytoli 30 sek.
11. Di-natrium-pentasyano-nitrosyyli-ferraatti-II 50 sek.
Samankaltaisia koetuloksia saadaan käytettäessä muita patenttihakemuksen P 28 36 644.1 mukaisia atso-väriestereitä yhdessä muiden esimerkeissä 1-7 mainittujen aktivaattorien ja/tai muiden tavanomaisten kompleksien muodostajien kanssa.
Esimerkki 10
Suodatuspaperi (esimerkiksi "Schleicher & Schiill 23 SL") kyllästetään peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan sitten lämpötilassa 60°C huoneen lämpötilassa.
Liuos 1 _2
Kaiiumbromaatti, 10 moolia/litra, natrium-tetraboraatti-HCl-puskurissa, 0,2 moolia/litra, pH 8,0, vedessä.
Liuos 2 -—- _ 3 3-/N-formyyli-L-alanyylioksi7-indoli, 10 moolia/litra, asetonissa .
Aktivaattorilisäys ja kokeiden suorittaminen tapahtuu samalla tavoin kuin esimerkissä 1.
Koepaperit värjääntyvät kun ne kastetaan leukosyyttipitoisiin liuoksiin värittömästä siniseksi.
32 69869
Koetulokset on esitetty taulukossa lo. Siinä esitetään reaktioajat, jotka lasketaan koeliuskojen kastamisesta vakioliuok-seen, jossa on 5000 leukosyyttiä/^ul isotonista ruokasuolaliuos-ta, ensimmäiseen selvään värireaktioon saakka. Vertailuaikana käytetään saman koostumuksen reaktioaikaa, joka ei sisällä akti vaat tori lisäystä .
Taulukko 10
Aktivaattori Reaktioaika
Vertailukoostumus ilman aktivaattoria_____________120 sek.
1. Pyridiini 85 sek.
2. Kinoliini 70 sek.
3. Bentso-/ b/-kinoliini = akridiini 100 sek.
4. 1,10-fenantroliini 65 sek.
5. atsa-fluoreeni 50 sek.
6. Kiniini 75 sek.
7. 2-/pyridyyli-(4 "]_/-vinyyli-pyridi ini-(4 ' ) 70 sek.
8. Imidatsoli 85 sek.
9. Dodekanoli 35 sek.
10. Fytoli 40 sek.
11. Di-natrium-pentasyano-nitrosyyli-ferraatti-II 90 sek.
Samankaltaisia koetuloksia saadaan käytettäessä muita hakemuksen P 28 54 987.3 mukaisia indoksyyliestereitä muiden esimerkeissä 1-7 kuvattujen aktivaattorien ja muiden tavanomaisten hapetusaineiden kanssa.

Claims (6)

33 69869
1. Diagnostinen väline esterolyyttisten ja/tai proteolyyt-tisten entsyymien osoittamiseksi, erikoisesti leukosyytti-esteraasien ja/tai -proteaasien osoittamiseksi kehon nesteissä, joka sisältää tavanomaisen esteraasi- ja/tai proteaasi-substraatin, sekä lisäksi tavanomaisia apuaineita, tunnettu siitä, että se sisältää myös yhtä tai useampaa aktivaattoria ryhmästä a) pyridiini-johdannaiset, joilla on yleinen kaava I i3 R2yY jossa R.j , R0, R^ t ja R^, jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kukin vety tai halogeeni, alempi alkyyli- tai alempi alkoksiryhmä, tai vinyyliryhmä, joka on substituoitu mahdollisesti yhden tai useamman alemman alkoksi-, amino-, alkyyliamino-, dialkyy1iaminoryhmän sisältävällä fenyyli-tai naftyylijäännöksellä tai pyridiini- tai tiofeenijäännöksellä, kulloinkin kaksi viereistä substituenttia voi merkitä mahdollisesti kerran tai useammin halogeenilla, hydroksiryhmillä, alempi alkyyli- tai alemmalla alkoksiryhmillä substituoitua indeno- tai bentso-konjugoitua jäännöstä, joka puolestaan voi mahdollisesti sisältää alemmalla alkyyliryhmällä substi-tuoidun bentso- tai pyrido-konjugoidun jäännöksen, ja R3 voi lisäksi olla vinyyli-kinuklidyvli-karbinoliryhmä, b) imidatsoli-johdannaiset, joilla on yleinen kaava II U ui) V 34 69869 jossa ' merkitsee vetyä, alempaa alkyyliryhmää tai mahdollisesti hydroksi- tai asetyyliryhmällä substituoitua fenyylijäännöstä, ja R0' on vety, amino-alempi-alkyyli-, N-alempiasyyliamino-alempi-z alkyyli— tai alempi alifaattinen, mahdollisesti tyydyttymätön karboksyyli— happojäännös, tai mahdollisesti typpiatomiin asyloitu alempi alifaattinen α-aminohappojäännös, c) alkoholit, joilla on yleinen kaava III X-A-OH (III) jossa X on vety tai hydroksiryhmä, ja A on suora- tai haarautunut ketjuinen, joka on tyydytetty tai tyydyttämätön, syklinen tai asyklinen ja sisältää 1-30, edullisesti 5-22 hiiliatomia asyklisessä yhdisteessä ja 3-20, edullisesti 6-17 hiiliatomia syklisessä yhdisteessä d) metallikompleksit, joilla on yleinen kaava IV Dm/B(CN)n(NO)p_7 (IV) jossa D on alkalimetalli-ioni, B on raskasmetalli-ioni, m on kokonaisluku 2-5, n on kokonaisluku 4-8 ja p on 0 tai 1, jolloin luku m riippuu raskasmetalli-ionin arvosta ja luvusta n.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen diagnostinen väline, tunnettu siitä, että sinänsä tunnettuna apuaineena käytetään puskuri-aineita, kompleksin muodostajia, kostutusaineita, hapetus-aineita, kalvonmuodostusaineita, galeenisia lisäaineita ja/tai vahvistavia aineita.
3. Patenttivaatimuksen 1 ja 2 mukainen diagnostinen väline, tunnettu siitä, että tavanomaisena esteraasi- ja/tai proteaasisubstraattina lisätään sellaista sulfoniftaleiini- esteriä, jolla on yleinen kaava A 35 69869 n M R3 R2" R i. I 0~R " 1 1 I I 3 3 " C3-2 O 3 (A) 1 * vAp R4.. R4" jossa R^" on mahdollisesti halogeenilla tai alemmalla alkoksi-ryhmällä substituoitu karboksyylihappojäännös tai peptidikemias-sa käytettävällä typpisuojaryhmällä varustettu aminohappo-tai peptidijäännös, R2" on halogeeniatomi tai alempi alkyyliryhmä, R-j" ja R^", jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, ovat kumpikin erikseen vety- tai halogeeniatomi, atsoväriaine-estereistä, joilla on yleinen kaava B a'-n=n-b’ (0r) (B) n jossa A1 on viisi- tai kuusijäseninen, mahdollisesti bentsokonju-goitu jäännös, jossa on yksi tai kaksi heteroatornia, jotka kuuluvat ryhmään N, S, 0, ja joka voi mahdollisesti olla substituoitu kerran tai usemman kerran halogeenilla, alemmalla alkyyli- ja/tai alemmalla alkoksiryhmällä, tai yksi-kolmekertaisesti alemmalla alkyyli-, alemmalla alkoksi-, nitro-, sulfonato- ja/tai asyyliaminoryhmällä substituoitu fenyylijäännös, B' on mahdollisesti kerran tai kahdesti sulfonato-, alempi alkoksi- ja/tai alempi alkoksi-poly-alkyleenioksi-ryhmällä substitutoitu bentseeni, naftaleeni- tai kinoliini- 36 69869 jäännös , R on karboksyylihappojäännös tai peptidikemiassa käytetyllä typpisuojaryhmällä varustettu aminohappo- tai peptidijään-nös/ ja n on luku 1 tai 2, tai indoksyyli-esteri, jolla on yleinen kaava C R1 ' ' ' R " ’ I 0-A"-B" 2 ··, ..... . !l 1 I'-'1 ///^-χ/ V i R4’ ’ ’ jossa kaavassa Rl"·, R^ ' ' ' , R^ ' ' ' , R^ " ' , jotka voivat olla samanlaisia tai erilaisia, voivat kukin olla vety tai halogeeni, alempi alkyyli-, alempi alkoksi-, fenyyli- tai naftyyli-, fenyyli- tai naftyyli-alempialkyyli-, fenyyli- tai naftyy1i-alenpi-alkoksi-hydroksi-, karboksi-, karboksi-alerrpi alkoksi-, fenyyli- tai naftyyli-alempialkoksikarbonyyli-, fenyyli-tai naftyyli-alempialkoksikarbonyyli-alempialkoksi, nitro- tai alempi asyyli-aminoryhmä, 'tai kaksi viereistä substituenttia merkitsee mahdollisesti halogeenilla substituoitua bentsokonjugoitua jäännöstä, X on rikkiatomi tai mahdollisesti alemmalla alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai asyylijäännöksellä substituoitu iminoryhmä, A" on aminohappo- tai peptidijäännös, ja B” on peptidikemiassa käytettävä tai siitä johdettu typpisuoja-ryhmä.
4. Menetelmä patenttivaatimusten 1-3 mukaisen diagnostisen välineen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että sinänsä tunnetulla tavalla imukykyinen kantaja kyllästetään aktivaat-toreilla, tavanomaisella esteraasi- ja/tai proteaasisubstraa-tilla, sekä tavanomaisilla apuaineilla.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että imukykyisen kantajan kyllästäminen tapahtuu kahdessa vaiheessa. .:. ‘ : : .l· " 37 ’ -.....’.....* 69869
6. Jonkin patenttivaatimuksista 1-3 mukaisen diagnostisen välineen käyttö leukosyyttien osoittamiseksi kehon nesteissä, erikoisesti virtsassa.
FI800444A 1979-02-14 1980-02-14 Diagnostiskt medel foer paovisande av leukosyter i kroppsvaetskor foerfarande foer framstaellning av detsamma och anvaendning av detsamma FI69869C (fi)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE2905531 1979-02-14
DE19792905531 DE2905531A1 (de) 1979-02-14 1979-02-14 Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI800444A FI800444A (fi) 1980-08-15
FI69869B true FI69869B (fi) 1985-12-31
FI69869C FI69869C (fi) 1986-05-26

Family

ID=6062854

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI800444A FI69869C (fi) 1979-02-14 1980-02-14 Diagnostiskt medel foer paovisande av leukosyter i kroppsvaetskor foerfarande foer framstaellning av detsamma och anvaendning av detsamma

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4299917A (fi)
EP (1) EP0014929B1 (fi)
JP (1) JPS581920B2 (fi)
AR (1) AR223025A1 (fi)
AT (1) ATE543T1 (fi)
AU (1) AU519912B2 (fi)
BR (1) BR8000886A (fi)
CA (1) CA1148073A (fi)
CS (1) CS216523B2 (fi)
DD (1) DD149121A5 (fi)
DE (2) DE2905531A1 (fi)
DK (1) DK161340C (fi)
ES (1) ES488402A0 (fi)
FI (1) FI69869C (fi)
HK (1) HK15285A (fi)
HU (1) HU182102B (fi)
PL (1) PL125796B1 (fi)
PT (1) PT70813A (fi)
RU (1) RU1784097C (fi)
SG (1) SG79484G (fi)
YU (2) YU45527B (fi)
ZA (1) ZA80765B (fi)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3005845A1 (de) * 1980-02-16 1981-09-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Aminosaeure- und peptidester von leuko-indoanilinen, verfahren zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende mittel zum nachweis proteolytischer enzyme
DE3017721A1 (de) * 1980-05-09 1981-11-26 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate
DE3118381A1 (de) * 1981-05-09 1982-11-25 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mehrschichtiges testmittel zum nachweis einer komponente einer fluessigen probe
DE3211254A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens
US4499185A (en) * 1982-05-17 1985-02-12 Miles Laboratories, Inc. Test for esterase activity in a liquid sample
DE3309544A1 (de) * 1983-03-17 1984-09-20 Macherey-Nagel & Co Chemikalienhandel, 5160 Düren Teststreifen zum nachweis von leukozyten im harn
DE3413120A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
US4657855A (en) * 1984-04-06 1987-04-14 Miles Laboratories, Inc. Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample
US4637979A (en) * 1984-04-06 1987-01-20 Miles Laboratories, Inc. Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent
DE3413119A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
DE3413118A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
US4645842A (en) * 1984-04-06 1987-02-24 Miles Laboratories, Inc. Pyrrole compounds for detecting the presence of hydrolytic analytes
DD247808C2 (de) * 1984-04-09 1989-01-11 Dresden Arzneimittel Teststreifen zur aufnahme von blutzuckertagesprofilen und verfahren zu seiner herstellung
JPS61502280A (ja) * 1984-05-31 1986-10-09 ク−ルタ−・エレクトロニクス・インコ−ポレ−テッド 白血球のクラスおよびサブクラスの同定、計数並びに試験方法およびそれに用いる試薬系
US4672029A (en) * 1984-12-06 1987-06-09 Eastman Kodak Company Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes
US5051358A (en) * 1987-05-07 1991-09-24 The Procter & Gamble Company Diagnostic methods for detecting periodontal diseases
GB8713951D0 (en) * 1987-06-15 1987-07-22 Dewar M H Enhanced chemiluminescent reaction
DE3732871A1 (de) * 1987-09-30 1989-04-20 Behringwerke Ag Chromogene substrate
US5192688A (en) * 1988-08-15 1993-03-09 Switzer Iii Robert C Histological analysis method
FR2657895A1 (fr) * 1990-02-05 1991-08-09 Inst Textile De France Materiau antiseptique a greffons complexes par des ions metalliques et procede de preparation.
US6046019A (en) * 1991-07-09 2000-04-04 Goumeniouk; Alexander P. Diagnostic kits and methods for making granulocyte cell counts
DE19500768C2 (de) * 1994-01-17 2003-11-20 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Phenanthren-Derivate und ihre Verwendung in flüssigkristallinen Mischungen
US5464739A (en) 1994-08-22 1995-11-07 Bayer Corporation Composition method for determining the presence of leukocyte cells, esterase or protease in a test sample
CA2161574A1 (en) 1994-11-15 1996-05-16 James Noffsinger Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid
DE19651886A1 (de) * 1996-12-13 1998-06-18 Merck Patent Gmbh Mittel und Verfahren zur Bestimmung von hydrolytischen Enzymen
US6528652B1 (en) * 1999-01-21 2003-03-04 Chronimed Composition and device for detecting leukocytes in urine
US6348324B1 (en) 1999-01-21 2002-02-19 Hypoguard America Limited Composition and device for detecting leukocytes in urine
US20040052928A1 (en) * 2002-09-06 2004-03-18 Ehud Gazit Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
US7781396B2 (en) * 2002-01-31 2010-08-24 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Peptides directed for diagnosis and treatment of amyloid-associated disease
US6709868B2 (en) * 2002-05-20 2004-03-23 Portascience Inc. Method and apparatus for measuring white blood cell count
AU2003261834A1 (en) * 2002-08-30 2004-05-04 Bf Research Institute, Inc. Diagnostic probes and remedies for diseases with accumulation of prion protein, and stains for prion protein
US7491699B2 (en) * 2002-12-09 2009-02-17 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures and methods of generating and using the same
US20040126897A1 (en) 2002-12-19 2004-07-01 3M Innovative Properties Company Colorimetric sensors constructed of diacetylene materials
US6963007B2 (en) 2002-12-19 2005-11-08 3M Innovative Properties Company Diacetylenic materials for sensing applications
DE602004020179D1 (de) * 2003-01-07 2009-05-07 Univ Ramot Peptidenanostrukturen die fremdmaterial enthalten, und verfahren zur herstellung derselben
EP1638517A4 (en) * 2003-06-30 2010-01-06 Univ Tel Aviv Future Tech Dev PEPTIDES, ANTIBODIES AGAINST DISEASES ASSOCIATED WITH AMYLOID AND METHODS OF USE FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF THESE DISEASES
CA2540407A1 (en) * 2003-09-25 2005-03-31 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Compositions and methods using same for treating amyloid-associated diseases
WO2005031362A2 (en) * 2003-10-02 2005-04-07 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Novel antibacterial agents and methods of identifying and utilizing same
US20090156471A1 (en) * 2004-07-15 2009-06-18 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of anti-amyloid agents for treating and typing pathogen infections
WO2006013552A2 (en) 2004-08-02 2006-02-09 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Articles of peptide nanostructures and method of forming the same
ATE539745T1 (de) * 2004-08-19 2012-01-15 Univ Tel Aviv Future Tech Dev Zusammensetzungen zur behandlung von amyloid- assoziierten erkrankungen
WO2006027780A2 (en) 2004-09-08 2006-03-16 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures containing end-capping modified peptides and methods of generating and using the same
EP1825268A2 (en) * 2004-12-17 2007-08-29 3M Innovative Properties Company Colorimetric sensors constructed of diacetylene materials
GB2426334A (en) * 2005-05-20 2006-11-22 Orion Diagnostica Oy Application of a reagent to a matrix material
US8003399B2 (en) * 2005-08-31 2011-08-23 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Nitrite detection technique
US7504235B2 (en) * 2005-08-31 2009-03-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzyme detection technique
EP1973928A2 (en) * 2005-10-11 2008-10-01 Ramot at Tel-Aviv University Ltd. Self-assembled fmoc-ff hydrogels
US7879212B2 (en) * 2005-11-03 2011-02-01 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Peptide nanostructure-coated electrodes
WO2009067595A1 (en) * 2007-11-20 2009-05-28 3M Innovative Properties Company Method of analyzing a sample for a bacterium using diacetylene-containing polymer sensor
US9103796B2 (en) 2007-12-14 2015-08-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Multi-layered devices for analyte detection
US11104933B1 (en) 2016-03-22 2021-08-31 Cleu Diagnostics, Llc Compositions and methods for determining the presence of active leukocyte cells using an electrochemical assay
KR20190008199A (ko) * 2016-03-30 2019-01-23 시노보 게엠베하 상처에서 미생물 감염의 검출 방법
JP6902416B2 (ja) * 2016-07-05 2021-07-14 ライオン株式会社 睡眠評価用マーカー及びその用途

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3087794A (en) * 1960-05-23 1963-04-30 Miles Lab Chemical test for differentiating leucocytes from erythrocytes
NL126365C (fi) * 1963-06-24
US3378463A (en) * 1965-06-22 1968-04-16 Army Usa Method of measuring enzyme activity
GB1128371A (en) * 1965-10-04 1968-09-25 Miles Lab Diagnostic composition
CH506792A (de) * 1968-09-20 1971-04-30 Merck Ag E Neues Mittel und Verfahren zur Lipasebestimmung
US3715325A (en) * 1970-10-02 1973-02-06 Miles Lab Insoluble polymeric diazonium salt chromogen
CA1007555A (en) * 1971-08-16 1977-03-29 Robert E. Smith Carbobenzoxydiglycyl-1-arginyl-4-methoxy-2-naphthylamide and process for determining enzyme concentrations
DE2235152C2 (de) * 1972-07-18 1975-07-10 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Blut und anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen in Körperflüssigkeiten
AR204182A1 (es) * 1973-12-20 1975-11-28 Boehringer Mannheim Gmbh Tira de ensayo para la comprobacion de substancias de actividad peroxidica en los liquidos del cuerpo
JPS5342438B2 (fi) * 1974-05-20 1978-11-11
US3874852A (en) * 1974-07-05 1975-04-01 Coulter Diagnostics Inc Reagent and method for determining leukocytes and hemoglobin in the blood
CS176664B1 (fi) * 1975-02-14 1977-06-30
US4045290A (en) * 1975-02-28 1977-08-30 Princeton Biomedix Incorporated Diagnostic method and compounds for use therewith
JPS6010261B2 (ja) * 1975-07-31 1985-03-15 和光純薬工業株式会社 潜血検出用組成物
JPS5263794A (en) * 1975-11-21 1977-05-26 Shionogi Seiyaku Kk Test piece for latent blood
US4206280A (en) * 1975-12-24 1980-06-03 Hoffmann-La Roche Inc. Determination of acid phosphatase
GB1530238A (en) * 1976-05-04 1978-10-25 Du Pont Method of determining lipase activity using a triglyceride reagent and method for preparing that reagent
JPS584560B2 (ja) * 1976-06-01 1983-01-26 三共株式会社 鉄錯塩を用いた酵素活性測定法
JPS5389492A (en) * 1977-01-13 1978-08-07 Uni Arabama Method and reagent for determination of carxylic esterhydrolase
JPS6058746B2 (ja) * 1977-09-22 1985-12-21 中外製薬株式会社 高級脂肪酸エステル
US4184923A (en) * 1977-11-03 1980-01-22 Eastman Kodak Company Reduction of gentisic acid interference in analytical elements
US4212939A (en) * 1977-11-22 1980-07-15 The University Of Alabama Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination
DE2826965A1 (de) * 1978-06-20 1980-01-17 Boehringer Mannheim Gmbh Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene
US4251223A (en) * 1979-12-17 1981-02-17 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests
US4251222A (en) * 1979-12-17 1981-02-17 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests

Also Published As

Publication number Publication date
HK15285A (en) 1985-03-15
ATE543T1 (de) 1982-01-15
DE3060134D1 (en) 1982-02-25
RU1784097C (ru) 1992-12-23
AU519912B2 (en) 1982-01-07
JPS581920B2 (ja) 1983-01-13
JPS55108300A (en) 1980-08-20
US4299917A (en) 1981-11-10
DE2905531A1 (de) 1981-01-08
ES8102726A1 (es) 1981-02-16
ES488402A0 (es) 1981-02-16
EP0014929B1 (de) 1982-01-06
SG79484G (en) 1985-08-16
YU45527B (en) 1992-05-28
DD149121A5 (de) 1981-06-24
EP0014929A1 (de) 1980-09-03
HU182102B (en) 1983-12-28
DK161340B (da) 1991-06-24
AR223025A1 (es) 1981-07-15
PL125796B1 (en) 1983-06-30
FI800444A (fi) 1980-08-15
PT70813A (de) 1980-03-01
AU5535980A (en) 1981-01-15
ZA80765B (en) 1981-03-25
FI69869C (fi) 1986-05-26
YU212888A (en) 1990-04-30
BR8000886A (pt) 1980-10-21
YU38680A (en) 1989-02-28
CA1148073A (en) 1983-06-14
DK161340C (da) 1991-12-02
DK63480A (da) 1980-08-15
PL221884A1 (fi) 1980-11-03
CS216523B2 (en) 1982-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
FI69869B (fi) Diagnostiskt medel foer paovisande av leukosyter i kroppsvaetskor foerfarande foer framstaellning av detsamma och anvaendning av detsamma
Martínez-Máñez et al. New advances in fluorogenic anion chemosensors
JP2922003B2 (ja) 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法の改良
Santos-Figueroa et al. Chromogenic and fluorogenic chemosensors and reagents for anions. A comprehensive review of the years 2010–2011
CA1045012A (en) Diagnostic test strips
Anbu et al. Recent developments in molecular sensor designs for inorganic pyrophosphate detection and biological imaging
US3850576A (en) Diagnostic composition for the detection of urobilinogen
JPS583680B2 (ja) タイエキチユウノ カサンカセイサヨウブツシツオ ケンシユツスルタメノ シケンヘン
AU617097B2 (en) Compounds, reagents and procedures for determining cations
HU187334B (en) Composition for the detection of esterase and/or protease enzymes and process for the preparation of corresponding substrates
US6057120A (en) Redox-active compounds and their use
Wen et al. Highly selective turn-on fluorogenic chemosensor for Zn (II) detection based on aggregation-induced emission
US4442033A (en) Azo dyestuff for use as a chromogen in detecting leukocytes
US20140147876A1 (en) Multi-layer device for selectively determining magnesium ion
US5141855A (en) Signal amplifying cobalt (III) redox reagents and methods for the determination of analytes in aqueous fluids
CA1309930C (en) Reagent and procedure for determining cations
US3880588A (en) Diagnostic agent for detecting bilirubin
US4853090A (en) Lithium ion-selective compositions, electrodes and a method of use
US4879243A (en) Use of substituted ortho-quinones as electron transfer agents in analytical determinations
EP0255679B1 (en) Composition and method using substituted ortho-quinones as electron transfer agents in analytical determinations
US4670402A (en) Use of benzimidazole derivatives for the detection of blood and other peroxidatically active substances in body fluids and excretion products
US6660529B2 (en) Heteroaryl substituted benzothiazole dioxetanes
CA1273023A (en) Hydrolyzable fluorescent substrates for phosphatases and analytical use thereof
US20060024762A1 (en) Heteroaryl substituted benzothiazole dioxetanes
JPH03282259A (ja) レドックス反応に基づく過酸化活性物質測定用組成物及びそれを用いた試験片

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH