CS216523B2 - Diagnostic agent for the proof of esterolytic enzyms particularly leucocytic esterases in the body fluids - Google Patents

Diagnostic agent for the proof of esterolytic enzyms particularly leucocytic esterases in the body fluids Download PDF

Info

Publication number
CS216523B2
CS216523B2 CS80973A CS97380A CS216523B2 CS 216523 B2 CS216523 B2 CS 216523B2 CS 80973 A CS80973 A CS 80973A CS 97380 A CS97380 A CS 97380A CS 216523 B2 CS216523 B2 CS 216523B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
optionally
alkyl
activators
group
solution
Prior art date
Application number
CS80973A
Other languages
English (en)
Inventor
Dieter Berger
Guenter Frey
Manfred Kuhr
Wolfgang Werner
Original Assignee
Boehringer Mannheim Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=6062854&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CS216523(B2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Mannheim Gmbh filed Critical Boehringer Mannheim Gmbh
Publication of CS216523B2 publication Critical patent/CS216523B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B11/00—Diaryl- or thriarylmethane dyes
    • C09B11/04—Diaryl- or thriarylmethane dyes derived from triarylmethanes, i.e. central C-atom is substituted by amino, cyano, alkyl
    • C09B11/06—Hydroxy derivatives of triarylmethanes in which at least one OH group is bound to an aryl nucleus and their ethers or esters
    • C09B11/08—Phthaleins; Phenolphthaleins; Fluorescein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09B—ORGANIC DYES OR CLOSELY-RELATED COMPOUNDS FOR PRODUCING DYES, e.g. PIGMENTS; MORDANTS; LAKES
    • C09B43/00—Preparation of azo dyes from other azo compounds
    • C09B43/18—Preparation of azo dyes from other azo compounds by acylation of hydroxyl group or of mercapto group
    • C09B43/20—Preparation of azo dyes from other azo compounds by acylation of hydroxyl group or of mercapto group with monocarboxylic acids, carbamic acid esters or halides, mono- isocyanates or haloformic acid esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/40—Triphenylmethane dye chromogens, e.g. fluorescein derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/50—Indoles

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)

Description

Vynález se týká diagnostického činidla k důkazu esterolytických enzymů, zejména leukocytových esteráz, v tělesných tekutinách.
Důkaz leukocytů v tělesných tekutinách, zejména v moči, zaujímá významné místo v diagnostice onemocnění ledvin a urogenitálního traktu.
Až dosud se tento důkaz prováděl mikroskopickým sčítáním leukocytů v neodstředěné moči nebo v močovém sedimentu.
Oběma metodám je přirozeně společné, že do součtu jsou zahrnuty jen intaktní leukocyty. Naproti tomu je známo, že rychlost lýze leukocytů je vystavena enormním výkyvům podle prostředí, v jakém moč je; tak je nutno například v silně alkalických močích počítat s leukocytovým poločasem v trvání jen 60 minut. Následek jsou příliš nízké počty leukocytů, popřípadě při delších dobách stání moče nesprávné negativní výsledky.
Nehledě k chybě způsobené lýzí skýtá kvantitativní ' mikroskopické určení leukocytů v neodstředěné, homogenizované moči v počítací komůrce značně spolehlivé hodnoty. V praxi se však této metody používá jen zřídka, poněvadž je namáhavá, únavná a časově náročná a vyžaduje školený personál.
Převážná většina stanovení leukocytů v moči se v lékařské praxi provádí tak zvanou metodou zorného pole v močovém sedimentu. K tomu je nejprve nutno^ získat zkoumaný sediment odstředěním. Přitom však dochází k obohacení i jiných složek moče, které — jako- například soli a buňky epithelu — mohou ztížit mikroskopické sčítání leukocytů.
Kolísající obsah sedimentu, nehomogenity sedimentu, jakož i případná různá mikroskopická zvětšení nebo různé optické vybavení mikroskopu vedou k tomu, že obvyklý údaj o počtu leukocytů vztažený na mikroskopické zorné pole, může být zatížen chybami ve výši několika set procent.
V poslední době bylo proto vynakládáno značné úsilí poskytnout diagnostické činidlo, pomocí něhož by bylo možno dokázat leukocyty v tělesných tekutinách jednoduše a snadno, jakož i co možná rychle a úplně. Jako princip důkazu pro takovýto leukocytový test se ukázaly vhodné enzymatické reakce, poněvadž leukocyty mají široké enzymové spektrum.
Jsou známa například diagnostická činidla, která sestávají ze savého nosiče, který je napuštěn vhodnou pufrovou látkou, obvyklými pomocnými látkami a chromogenem. Jako chromogeny jsou zde použity estery sulfonftaleinu obecného vzorce X,
kde znamená
R1( zbytek karboxylové kyseliny, popřípadě substituovaný halogenem nebo nižší alkoxylovou skupinou, zbytek aminokyseliny, opatřené dusíkatou ochrannou skupinou běžnou v chemii peptidů, nebo peptidový zbytek,
R12 atom halogenu nebo nižší alkylovou skupinu, a každý ze symbolů R13 a R14, které jsou shodné nebo různé, atom vodíku nebo atom halogenu, estery azobarviv obecného vzorce XI,
A1-N=N-B1(OR)„ (XI) kde znamená
Aj pěti- nebo šestičlenný zbytek, popřípadě s anelovaným benzenovým jádrem, s jedním až dvěma heteroatomy ze skupiny zahrnující dusík, síru a kyslík, který je popřípadě substituován jednou nebo několikrát halogenem, nižší alkylovou skupinou a/nebo nižší alkoxyskupinou, nebo fenylový zbytek, jednou až třikrát substituovaný nižší alkylovou skupinou, nižší alkoxyskupinou, nitroskupinou, sulfonátoskupinou a/ /nebo acylaminoskupinou,
Bt benzenový, naftalenový nebo chinolinový zbytek, popřípadě jednou až dvakrát substituovaný sulfonátoskupinou, nižší alkoxyskupinou a/nebo nižší alkoxypolyalkylenoxyskupinou,
R zbytek karboxylové kyseliny nebo zbytek aminokyseliny, opatřené dusíkatou ochrannou skupinou běžnou v chemii peptidů, nebo peptidový zbytek, a n číslo 1 nebo 2, a indoxylové estery obecného vzorce XII,
o~a2bz (XII) kde znamená každý ze symbolů R21, R22> R23 a R24, které jsou shodné nebo různé, vodík nebo halogen, nižší alkylovou skupinu, nižší alkoxyskupinu, azylovou skupinu, aralkylovou skupinu, aralkoxyskupinu, hydroxyskupinu, karboxyskupinu, karboxy- nižší alkoxyskupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonyl- nižší alkoxyskupinu, nitroskupinu nebo nižší acylaminoskupinu, nebo vždy dva sousední substituenty tvoří benzenový anelovaný zbytek, popřípadě substituovaný halogenem, ;
X atom síry nebo iminbskupinu popřípadě substituovanou nižším: alkylovým, arylovým, aralkylovým nebo acylovým zbytkem,
A2 zbytek aminokyseliny nebo peptidový zbytek a
B2 dusíkatou Ochrannou skupinu běžnou v chemii peptidů nebo od ní odvozenou skupinu.
Těmito diagnostickými činidly je možno jednoduše a rychle pomocí barevného přesmyku dokázat esterolytické, popřípadě proteolytické enzymy, zejména esterázy, popřípadě proteázy přítomné v leukocytech, v tělesných tekutinách, zejména v moči.
Bylo nyní úkolem vynálezu, hledat možnosti jak tuto důkazovou reakci, na níž je založen tento enzymatický test, urychlit.
Překvapivě bylo zjištěno, že je možno reakční dobu těchto enzymaticky vedených leukocytových testů značně zkrátit, když se kromě až dosud obvyklých pomocných prostředků a chromogenů použije alespoň jednoho aktivátoru.
Předmětem vynálezu je tedy diagnostické činidlo к důkazu esterolytických enzymů, zejména leukocytových esteráz v tělesných tekutinách, obsahující kromě obvyklých pomocných látek obvyklý esterázový substrát , ze skupiny zahrnující estery sulfonftaleinu, estery azobarviv nebo estery indoxylu, pufr a popřípadě pomocné přídavné látky ze skupiny zahrnující komplexotvorné látky, smáčedla, oxidační činidla, filmotvorné látky, galenické přísady a látky vytvářející kostru, kteréžto diagnostické činidlo se vyznačuje tím, že kromě toho obsahuje alespoň jeden aktivátor ze skupiny zahrnující deriváty pyridinu obecného vzorce I,
kde každý ze symbolů Rb R2, R3, R4 a R5, které
216523 5 mají stejný nebo různý význam, znamená vodík nebo halogen, alkylový zbytek · s 1 až 5 atomy uhlíku nebo alkoxylový zbytek s 1 až 5 atomy uhlíku nebo vinylový zbytek, které jsou substituovány fenylovou nebo naftylovou skupinou, na níž je popřípadě vázána alkoxyskupina s 1 až 5 atomy uhlíku, aminoskupina, alkylaminoskupina s 1 až 5 atomy uhlíku, di( alkyl jaminoskupina s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z obou alkylových částí, nebo pyridylovou nebo thienylovou skupinou, vždy dva sousedící symboly mohou znamenat indenový nebo benzenový anelovaný zbytek, který je popřípadě jednou až třikrát substituován halogenem, hydroxyskupinou, alkylovými skupinami s 1 až 5 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinami s 1 až 5 atomy uhlíku a na který je popřípadě vázán benzenový nebo pyridinový anelovaný zbytek, popřípadě substituovaný alkylovou skupinou s 1 až 5 atomy uhlíku, a
R3 kromě toho může znamenat vinyl-chinuklidyl-karbinolovou ' skupinu, deriváty imidazolu obecného vzorce II !4 I (II) kde znamená
R6 vodík, alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku nebo fenylový zbytek, popřípadě substituovaný hydroxyskupinou nebo acetylovou skupinou, a
R7 vodík, popřípadě N-acetylový aminoalkylový zbytek s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části, karboxyalkylový zbytek s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylové části nebo· . karboxyvinylový zbytek nebo popřípadě N-acetylovaný alaninový zbytek, alkoholy obecného vzorce III,
X—A—OH '(III) kde znamená
X vodík nebo hydroxylovou skupinu a
A nasycený nebo. nenasycený, cyklický nebo otevřený uhlovodíkový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci, a komplexy kovů obecného vzorce IV,
Dm[B(GNIn (NOIpI (IV) kde znamená
D ion sodíku nebo draslíku,
B ion železa, niklu, chrómu, manganu, kobaltu, molybdenu nebo vanadu, m celé číslo· od 2 do 5, n celé číslo od 4 do 8 a p číslo 0 nebo 1, přičemž číslo m v.vyplýrá z mocenství iontu těžkého kovu a z čísla n.
Halogenem se v definici symbolů Rlr R2, R3, R4 a R5 rozumí fluor, chlor, brom' a )0ύ, s výhodou chlor a brom.
Alkylové skupiny a alko.x.yskuplny v definici symbolů Rb R2, R3, R4 a R5, jakož i v definici symbolů R6 a R7 mohou být přímé nebo rozvětvené a mohou obsahovat 1 až 5, s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku. Zejménavýhodné jsou methylová, ethylová, n-propylová a isopropylová skupina, popřípadě methoxyskupina a ethcxyskupina.
Uhlovodíkový zbytek A může být přímý nebo rozvětvený, nasycený nebo^ nenasycený, cyklický nebo acyklický a obsahuje 1 až 30, s výhodou 5 až 22 atomů uhlíku u acyklických sloučenin a 3 až 20, s výhodou 6 až 17 atomů uhlíku u cyklických sloučenin.
Jako acylové zbytky v definici symbolů R/ a R2‘ přicházejí v úvahu zbytky - alifatických karboxylových kyselin s 1 až 5, s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku, přičemž je výhodný acetylový zbytek.
Arylovým zbytkem v definici symbolů Rb R2, R3, R4, r5 a Ri4 je s výhodou fenylový nebo naftylový zbytek. Jako symbol je obzvláště výhodný fenylový zbytek.
Heterocyklickým zbytkem v definici symbolů Rb R2, R3, R4 a R5 jsou pěti- nebo šestičlenné zbytky s 1 až 3 heteroatomy, přičemž jako heteroatomy přicházejí v úvahu atomy dusíku, síry a kyslíku. Obzvlášť výhodný je pyridylový, furylový a thienylový zbytek.
Jako „zbytek nižší alifatické, popřípadě’ nenasycené karboxylové kyseliny“ a „zbytek nižší alifatické «-aminokyseliny, popřípadě acylované na dusíku“ ve významu symbolu R2‘ přicházejí v úvahu karboxylové kyseliny s 1 až 5, s výhodou 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě jejich a-aminoderiváty. Obzvlášť výhodné jsou kyselina octová, kyselina propionová a kyselina akrylová, popřípadě L-alanin a N-acetyl-L-alanin.
Z aktivátorů obecného vzorce IV^ přicházejí jako ionty alkalických kovů D v úvahu s výhodou ionty sodíku a draslíku a jako ionty těžkých kovů B s výhodou ionty -železa, niklu, chrómu, manganu, kobaltu, molybdenu a vanadia.
Jakožto aktivátory, použitelné ve smyslu; vynálezu, buďtéž například uvedeny:
pyridin,
2- methylpyridin,
3- ethylpyridin, 2-brompyridin,
3.5- dichlorpyridin,
4- methoxypyridin,
2.6- dimethyl-4-ethoxypyridin, chinolin,
2-methylchinolin,
218523
8-methylchinolin, 7-isopropylchinolin,
2- chlorchinolin,
4-bromchinolin,
3- methoxychinolin,
6- ethoxychinolin, 2-methyl-b-bromcninolin,
2- methyl-4-methoxychinolin,
5.7- dibrbm-8-methoxychinolini ísochinolin,
1-methylisochinolin,
3- propylisochinolin,
7- methylisbchinblini 1-chlorisochinolin,
4- bromisochinolin, 7-methoxyisochinolini l-methoxy-3-chlorίsbchinbИni
1- chlor-4-methtl-5-methoxyisochinolini benzolblchinolin [=akridin[, benzole ] chinolin (=f enanthridin),
2- methylfenanthridin,
2-ethylf enanthridin, 2-propylf enanthridin, 2-methoxyf enanthridin, benzoff] chinolin,
2- isopropylbenzo [ f ] chinolin,
3- methylbenzo [ f ] chinolin,
2.4- dimethylbenzof f ] chinolin, benzolglchinolin,
4- methylbenzo [ g ] chinolin,
2.4- dimethyl-benzo [íg ] chinolin, benzo[h ] chinolin,
1.7- fenanthrolin,
2- m&thyl-li7-fenanthrblini
2.8- dimethtl-l,7-fenanthrblini
4.7- fenanthrblini
3- methyl-4,7--enanth-’blmi
3.8- dimethyl-4,7--enanthrblin, 1,10--enanthrolin,
2.9- dimethyl-li10-fenanthrolin,
4- azafluoren, chinin, chinidin, cinchonin, cinchonidin, cuprein,
2- [ fenyl ] -vinylpyridin- (2‘),
2- [ 4“-methoxyf enyl ] -vinylpyridin- (2*),
2- [ 4“- (ΝiΝ-dimethylamiπb) -fenyl ] -vinylpyridin-^*), bis- ·[ 2- (fenyl ) -vinyl ] -pyridin-2^*), 2- [ naf tyl- (1“) ] -vinylpyridin- (2‘), 2- [ pyridyl- [ 2“) ] -vinylpyridin- (2*.), 2- [pyridyl- (3“ j ] -vinylpyridin- (2‘), 2- [ pyridyl- (4“} ] -vinylpyridin- (2‘), 2- [ furyl- (2“) ] -vinylpyridin- (2 *), 2- [ pyridyl- (3“) ] -vinylpyridin- (3*), 2- [ pyridyl- (3“ ) ] -vinylpyridin- (4*), 2- [ pyridyl- [ 4“ j ] -vinylpyridin- {4*), 2- [ thienyl- (2“) ] -vinylpyridin- (4‘ j, imidazol,
1-ethylimidazbli
1-fenylimidazol,
1- [ 4‘-hy dr oxyf enyl) imidazol,
1- (4‘-acetylf enyl j imidazol, histamin,
N-a-acetylhistamin, kyselina (imidazolyl^ [octová, kyselina β- (imidazolyl-4 ) propionová, kyselina β- [imidazolyl-4[akrylová, L-histidin,
N-b-aaetyt-L-histidmi hexanoHl), heptanool^-l), oktanoll-l), nonanoll-lf, dekanc^l-l), d-odeRanoH-ll, ' tetradekanol-fl), pentadekanoHl), hexadekanoMl), · heptadekanoMl), bktadekanoil-l[i nonadekanoll-l), eikosanoll-lf, dbkosanoll-l[, cyklohexanol, cyklohexen- (1) -ol- (1 [, cykloheptanol, cyklooktanol, cyklononanol, cyklodekanol, cyklododekanol, cyklbheptadekanbli cykloheptadecen- (9 j -ol- [ 1 j, citronellol, geraniol, nerol, linalool, farnesol, nerolidol, cis-oktadecen- (9 ] -ol- (1), fytol, pentandidl-f^b hexaπdiol-(li6)i heptaπdibl-(li7[i bktandiol-(li8)i mand^H^), · dekandibl-(li10)i dodekandiol- (1,12 trlkalшmhexakyaπbferrát-III, tetrakaliumhexakyaπbferrát-IIi dlkaliumtetrakyano-nikelát-II, trinatriumoktakyanomolybdát-V, dmatriumpeπtakyaπomtrbsylferrát-II, trikaИumpentakyanbmtrbsylmanganát-Ii trikaliumpentakyanomtrosylchrbmát-Ii trikalшmpeπtakyanomtrbsylkbbaltát-Ii pentakaliumpentakyanonitrosylvanadát-I.
Veškeré aktivátory jsou známé sloučeniny nebo je možno· vyrobit je analogicky ke známým sloučeninám.
Sloučenin obecných vzorců I, II a IV, použitých podle vynálezu jako aktivátorů, se používá v koncentracích od 10_4 do 1 mol/ /1, s výhodou od 10~3 do 101 mol/1 napouštěciho roztoku, aktivátory obecného vzorce III se k napouštěcimu roztoku přidávají v množství od 0,5 do · 10 % (hmot/obj.), s výhodou od 1 do 5 % (hmot./obj.).
Diagnostická činidla podle vynálezu obsahují kromě aktivátorů další obvykle po216523 užívané - složky, jako. - jsou například . Obvyklé-. : esterázové nebo prcteázové substráty; - puf-; ry, - - smáčedla, - popřípadě komplexotvorné látky a - oxidační' . činidla. Tyto látky -se -přidávají způsobem a v koncentracích, jak. - jsou popsány v německých patentových spisech (patentové přihlášky P - 28 26 965.0,- . P 28 36 644.1 a P 28 54 987.3).
Tak se chromogeny, ' používané jako esterázcvé - -nebo - - 'proteážové - substráty, . přidávají obvykle v koncentracích od 10~4 do - 1 mol/1, s výhodou od 10~3 do 10“1 mol/1 napouštěcího - roztoku, . nanášené -' hmoty . - - nebo zkoušené -tekutiny.
Další složkou diagnostického činidla k důkazu esterolytických - a/nebo proteolytických enzymů, - zejména - leukocytových - proteáz,;- je vhodná pufrovací soustava. Zde přicházejí v úvahu například - pufry -na· - bázi . fosfátu, - borátu, - - barbiturátu, tris-(hydroxymethyl)aminowethanu. (= Trisj, 2-ammo--2-methylpro-pandiolu-1,3 (= Amedicl) nebo aminokyseliny; - přičemž - - je nutno volit:. - hodnotu - pH - a kapacitu tak, - že se v měřeném -roztoku, popřípadě - ua zkušebním - proužku ustaví .pH v rozmezí od 6 do 10, s - výhodou od 7 do' - 9.
Další·; i složkou - - diagnostického . prostředku k - důkazu esterolytických a/nebo proteolytických enzymů, zejména leukocytových esteráz nebo- proteáz, může být smáčedlo. S výhodou se používá neionogenních, ale . i amfoterních, kationtcvě nebo aniontově aktivních smáčedel - v koncentracích - od - O,05 do 2 %, s výhodou od 0,1 do 1 %.
Další složkou diagnostického činidla podle vynálezu může být vhodná komplexotvorná - látka. S výhodou se používá solí kovů, například solí železa, mědi, chrómu, kobaltu, niklu, manganu - a zinku. Přidávají se v koncentracích od- 10-4 do 10“1 mol/1, - s výhodou - ed 103 do 10_2 mol/1 napouštěcího· roztoku.
Dále - je - možno při - - výrobě diagnostického činidla podle vynálezu navíc použití - oxidačního - činidla, jako - je například - - hexakyanoželezitan draselný, - bromičnan - draselný, chroman - draselný, fenazinmethosulfát nebo triazoliové soli. Tyto se přidávají v koncentracích od 10~4 do - 1 - mol/l, s výhodou - od 103 do 101 mol/1 napouštěcího - roztoku, nanášené- - hmoty nebo- - zkoušené tekutiny.
K výrobě diagnostického činidla - podle vynálezu se napouštějí - například savé nosiče, s výhodou filtrační papír, celulóza- nebo rouna ze syntetických vláken, roztoky potřebných, obvykle k výrobě zkoušecích proužků používaných reagencií - (substrát, pufr, aktivátory, - popřípadě smáčedla, komplexotvorné látky, - oxidační činidla atd.) ve snadno těkajících rozpouštědlech, jako je voda, methanol, ethanol nebo aceton. To -se provádí účelně - ve dvou stupních:
Nejprve se napouští vodným roztokem, který obsahuje pufr a popřípadě vodorozpustné - aktivátory. Pak se napouští roztokem, který obsahuje- esterázové nebo proteázové - - substráty, popřípadě aktivátory nerozpustné.. ve vodě,--jakož i jiné - .přísady -nerozpustné -. ve vodě. Ve speciálních případech je -možno- . použít - - při napouštění . i opačného - . pořadí.
Hotovfrctestovací - papírky se mohou - - používat jako takové nebo- se mohou známým způsobem nalepit na nosný podklad nebo s výhodou zalít mezi plastickou hmotu a -jemnou mřížku. podle německého patentového spisu - DBP -21 18 455.
K - výrobě testovacích - - proužků - s - tenkou nanesenou vrstvou se - veškeré reagencie vnesou do roztoku nebo disperze filmotvorné látky, jako je například polyvinylester nebo·polyamid, načež se homogenně promísí. Směs se - - pak - nanese - v tenké - vrstvě na nosič - z plastické - hmoty a vysuší. Testovací -proužky s nanesenou tenkou vrstvou podle - - vynálezu se po vysušení rozřežou a mohou se používat jako takové nebo· se známým způsobem nalepí na nosný podklad nebo se například - zalijí - mezi - plastickou hmotu a - jemnou mřížku podle německého patentového, spisu DBP - f21 18 455.
Diagnostické - činidlo podle - vynálezu k důkazu - esterolytických a/nebo proteolytických enzymů, - -. mající - podobu- práškových směsí . nebo - reagenčních -tabletek, je možno připravit - - tak;·, že se - výše - uvedené -složky potřebné, pro test smísí s obvyklými galenickými přísadami a směs se granuluje. Přísadami tohoto druhu jsou například uhlohydráty, . jako jsou monosacharídy, oligosacharidy - nebo polysacharidy, nebo cukrové alkoholy, . jako je mannit, -.sorbit - nebo- xylit, nebo. . jiné. rozpustné inertní sloučeniny, jako jsou polyethylenglykoly nebo polyvinylpyrrolidon. Práškové směsi nebo reagenční tablety - mají obvykle konečnou hmotnost v rozmezí. - asi od 50 do 200 mg, s výhodou od - 50 do - - 80 mg.
K výrobě lyofilizátů o celkové · hmotnosti vždy asi 5 až 20 mg, s výhodou . asi - 10 - mg, se lyofilizuje roztok, který kromě - veškerých pro test nutných reagencií obsahuje obvyklé látky k - vytvoření. kostry činidla, jako. - je například polyvinylpyrrolidon,- a - případná další plniva, jako je například mannit, - sorbit nebo xylit.
Diagnostické činidlo podle vynálezu - v podobě roztoku obsahuje s výhodou- - veškeré . pro test potřebné reagencie. - jako - rozpouštědlo přicházejí v úvahu voda - nebo . -směsi vody s vodorozpustným organickým - rozpouštědlem, jako je například - - methanol, - ethanol, aceton nebo- dimethylformamid. - Z důvodu životnosti může být výhodné - rozdělit reagencie potřebné pro· test . - do- -dvou nebo více - roztoků, které se spolu spojí - - až při vlastním testu.
Takto vyrobené diagnostické - činidlo - umožňuje, dokázat - jednoduše - - a rychle leukocyty ve zkoumaných - tělesných - tekutinách tím, - - že vznikne zbarvení, - popřípadě - se - - zbarvení změní. Ve srovnání s diagnostickými činidly podle německých patentových spisů- (ně218523 mecké patentové přihlášky P 28 26 965.0, P 28 36 644.1 a P 28 54 987.3) jsou přitom při použití aktivátorů podle vynálezu zřetelně kratší reakční doby.
Vynález je blíže objasněn dále uvedenými příklady.
Přikladl
Filtrační papír se po sobě napustí níže uvedenými roztoky, načež se vysuší při teplotě 60 °C, resp. při teplotě místnosti.
Roztok 1:
Puf г na bázi hydrochloridu tris-(hydroxymethyljaminomethanu, 0,2 mol/1, pH 9,0, ve vodě.
Roztok 2:
Substrátové roztoky, 10_3 mol/1 v acetonu.
Aktivátory podle vynálezu se — podle své rozpustnosti — přidají do roztoku 1 nebo do roztoku 2, takže u aktivátorů obecných vzorců I, II а IV se dosáhne konečných koncentrací 102 mol/1 napouštěcího roztoku, u aktivátorů obecného vzorce III konečné koncentrace 2 % (hmot./obj.) napouštěcího roztoku.
V tabulce 1 jsou sestaveny výsledky pokusů s těmito esterázovými nebo proteázovými substráty:
A: diacetyl-3‘,3“-dibrom-5‘,5“-dichlorfenolsulfonftalein,
B: dlacetyl-4,5,6,7,3‘,5‘,3“,5“-oktabromfenolsulfonftalein,
C:di-(N-benzylkarbpnyl-L-alanyl)-3‘,5‘,3“,5“-tetrabromfenolsulfonftalein,
D: di-(N-benzyloxykarbonyl-L-fenylalanyl)-3‘,5‘,3“,5“-tetrabromfenolsulfonftaIein.
V tabulce 1 jsou uvedeny reakční doby, které uplynou od vnoření testovacích proužků do standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/,αΐ isotonického roztoku chloridu sodného až do první zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnoty slouží reakční doby příslušných receptur bez přídavku aktivátoru. Barevný přesmyk u čtyř zde testovaných sloučenin probíhá od bezbarvého do tmavě modrého zbarvení.
Tabulka 1
Aktivátory Reakční A doby pro substrát (sekundy)
В C D
srovnávací receptura bez aktivátoru 210 90 600 550
1. pyridin 110 70 410 450
2. 3-ethylpyridin 95 65 440 470
3. 4-methoxypyridin 110 65 470 450
4. chinolin 75 50 320 340
5. 2-methylchinolin 45 55 300 350
6. 4-bromchinolin 60 60 370 330
7. 3-methoxychinolin 50 50 310 380
8. isochinolin 85 55 350 380
9. benzo[b]chinolin = akridin 90 65 280 330
10. benzo[c]chinolin — fenanthridin 75 60 260 360
11. 2-methylfenanthridin 100 65 250 370
12. 2-ethylfenanthridin 80 70 300 360
13. 2-propylfenanthridin 80 60 280 330
14, 2-methoxyfenanthridin 85 60 260 350
15; benzoff] chinolin 90 40 310 310
16. benzojhjchinolin 90 55 290 340
17. 1,7-fenanthrolin 75 65 340 410
18. 4,7-fenanthrolin 80 70 270 380
19. 4-azafluoren 120 50 240 290
20. chinin 110 70 350 330
21. chinidin 70 65 375 280
22. cinchonin 60 50 340 300
23. cinchonidin 65 55 390 320
24. kuprein 70 60 400 305
25. 2-[fenyl]-vinylpyridin-(2‘) 115 70 370 270
26. 2-[ pyridyl-(3“) ] -vinylpyridin-( 2‘) 145 65 430 250
27. 2-[pyridyl-(4“) ]-vinylpyridin-(4‘) 140 55 350 280
28. 2- [ furyl- (2“) ] -vinylpyridin- [ 2‘) 150 70 410 250
29. imidazol 90 55 380 210
30. histamin 110 60 440 290
31. kyselina (imidazolyl-4)octová 150 75 450 350
Aktivátory Reakční A doby pro substrát (sekundy)
e C D
32. - kyselina ,jH(midazolyl-4-)propionová 170 70 490 380
33. L-histidin 130 80 465 320
34. oktanoHl) 150 75 500 460
35. dekanoHlj 130 70 480 420
36. tetradekanol-(l) 105 60 420 400
37. cyklooktanol 125 80 530 480
38. cyklododekanol 90 55 490 470
39. citronellol 100 40 430 440
40. farnesol 130 50 440 410
41. fytol 135 55 430 450
42. trl-kalium-hexakyanoferrát-II 160 70 550 480
43. di-kalium-tetrakyanoniklát-II 160 80 530 450
44. di-natrium-pentakyano-
nitrosylferrát-II 150 65 470 460
Podobných výsledků při zkouškách se dosáhne, když se místo substrátů A, B, C a D použije esterů sulfonftaleinu -- z - německého patentového spisu (německá patentová přihláška P 28 26 965.0) a/nebo - místo standardního; roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného se - použije močí obsahujících leukocyty.
Příklad 2
Filtrační papír se po sobě napustí níže uvedenými roztoky, načež se vysuší při teplotě 60 °C, resp. při teplotě místnosti.
Roztok 1:
Pufr - na bázi hydrochloridu tr.is-(hydroxymethyl-.jaminomethanu, 0,2/mol/l, pH 7,0, ve vodě (pro- substráty E, F a G), popřípadě pufr na bázi hydrochloridu tris-(hydroxymethyl.jaminomethanu, 0,2 mol/1, pH 8,0, ve vodě (pro- substrát H).
Roztok 2:
Roztoky substrátu, 10-3 mol/1, v acetonu.
Přísada aktivátoru a provedení pokusu jsou stejné jako v příkladu 1.
V tabulce 2 jsou sestaveny - výsledky pokusů s těmito proteázovými substráty:
E: thiazol-2-azo-4‘-[l‘-(N-benzyloxykarbonyl-L-alanyloxy)-5‘-methoxynaftalen]·, (barevný přesmyk testovacích - papírků z růžové na- červenou);
F: 6-methoxybenzothiazol-2-azo-2‘-[ -1‘- (N-benzyloxykarbonyl-L-alanyloxyjnaftalen], (barevný přesmyk testovacích papírků z růžové na červenou)
G: 2,4-dinitrobenzen-aza-4‘-[l‘-(N-benzyloxykarbonyl-L-alanyloxy) benzen (barevný přesmyk testovacích . papírků ze žluté na červenofialovou),
H: 2,5-dimethoxybenzen-azo-4‘-[ l‘-(N-benzyloxykarbonyl-L-alanyloxy) naf talen], (barevný -- přesmyk testovacích papírků . ze světle oranžové na červenouj.
V tabulce 2 jsou uvedeny .reakční .doby, které uplynou od vnoření testovacích proužků do - standardního - roztoku s obsahem . 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného až do první zřetelné barevné reakce.- Jako- referenční hodnoty slouží reakční doby příslušných receptur bez přídavku - aktivátoru.
Aktivátory srovnávací receptura bez aktivátoru
1. pyridin
2. 2-methylpyridin
3. 2-brompyridin
4. 3,5-dichlorpyridin
5. chinolin
6. 8-methylchinolin
7. 2-chlorchinolin
8. 6-ethoxychinolin
9. 2-methyl-4-methoxychinolin
10. isochinolin
11. 1-methyl-isochinolin
12. 4-bromisochinolin
13. 7-methoxyisochinolin
14. benzo [b] chinolin = akridln
15. benzo[c]chinolin = fenanthridin
16. 2-methylfenanthridin
17. benzo(f) chinolin
18. 2-isopropylbenzo[f]chinolin
19. 3-methylbenzo[f]chinolin
20. 2,4-dimethylbenzo[f ]chinolin
21. benzo['g]chinolln
22. 4-methylbenzo[g]chinolin
23. benzo(h)chinolin
24. 1,7-fenanthrolin
25. 4,7-fenanthrolin
26. 1,10-fenanthrolin
27. chinin
28. cinchonin
29. kuprein
30. 2-[fenyl]-vinylpyridin-(2“)
31. bis- [ 2- (fenvl) -vinyl] -pyridin-(2‘,4‘)
32. 2-[ furyl- (2“) ] -vinylpyridin- (2‘)
33. imidazol
34. 1-ethylimidazol
35. 1-fenylimidazol
36. l-(4‘-hydroxyfenyl)imidazol
37. histamin
38. kyselina /3-(imldazolyl-4)propíonová
39. kyselina ,/3-( imidazolyl-4)akrylová
40. L-histidin
41. Ν-,α-acetyl-L-histidin
42. heptanol-(l)
43. oktanol-(l)
44. dekanol-(l)
45. dodekanol-(l)
46. hexadekanol-(l)
47. eikosanol-(l)
48. cyklohexanol
49. cyklodekanol
50. cyklododekanol
51. cykloheptadekanol
52. cykloheptadecen-(9)-ol-(l)
53. citronellol
54. linalool
55. farnesol
56. cis-oktadecen-(9)-ol-(l)
57. fytol
58. pentadiol-(l,5)
59. heptandiol-(l,7)
60. dekandiol-(l,10)
61. do-dekandiol-(l,12)
Tabulka 2
Reakční doby pro substrát (sekundy)
E F G H
60 180 160 70
50 150 130 55
45 140 135 50
50 150 125 45
45 160 130 50
50 110 95 45
45 130 110 40
40 130 110 35
35 150 120 40
40 120 105 40
40 130 110 40
45 100 120 35
45 140 115 40
50 130 130 45
30 150 60 45
35 120 80 40
40 140 90 40
50 130 70 30
45 130 95 35
40 125 80 40
40 110 90 40
40 90 70 35
40 100 80 40
35 70 50 30
45 120 120 40
40 105 105 45
45 130 110 45
40 120 60 35
45 100 90 30
40 140 105 30
35 125 120 50
30 150 140 60
30 120 90 55
45 140 120 40
40 130 130 45
35 120 120 40
45 140 135 50
50 130 140 55
50 150 140 50
50 160 135 55
45 150 125 50
45 140 130 40
30 130 100 40
30 120 95 35
20 90 80 30
20 80 70 30
25 105 80 40
30 120 110 45
35 110 105 40
25 95 85 30
25 120 90 25
30 130 120 30
30 110 100 35
25 100 70 25
20 105 60 30
30 110 75 25
25 90 85 40
30 80 65 30
35 130 120 45
40 150 125 40
30 135 140 50
40 160 130 50
Aktivátory
62. trikaliumhexakyanoferrát-III
63. tetrakaliumhexakyanoferrát-II
64. dinatriumpentakyanonitrosylferrát-II
65. trikaliumpentakyanonitrosylchromát-I
66. trikaliumpentakyanonitrosylkobaltát-I
Podobných výsledků při zkouškách se dosáhne, když se místo substrátů E, F, G a H použije jiných esterů azobarviv z německého patentového spisu (německá patentová přihláška P 28 36 644.1) a/nebo: se místo standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ , isotonického roztoku chloridu sodného použije močí obsahujících leukocyty.
Příklad 3
Filtrační papír se po sobě napustí následujícími roztoky, načež se vysuší při teplotě 60 °C, resp. při teplotě místnosti
Roztok 1:
Pufr na ’ bázi hydrochloridu natriumtetraborátu, 0,2 mol/1, pH 8,0, ve vodě.
Roztok 2:
Roztok substrátu, 10“3 mol/1, v acetonu.
Přísada aktivátorů a provedení pokusu jsou stejné jako v příkladu 1.
16
E Reakční doby pro substrát (sekundy)
F G H
45 160 135 55
40 160 140 50
40 140 130 40
50 145 130 50
50 160 145 45
V tabulce 3 jsou sestaveny výsledky pokusů, dosažené při použití těchto proteázových substrátů:
I: 3-[N- (difenylkarbamoyl) -L-alanyloxy ] -indol,
J: 3-[ N-(5‘,5‘-dímethyl-3‘-oxo-cyklohexen-Γ-yl) -L-alanyloxy ] -indol,
K: 3-[N-( benzyloxykarbonyl) -L-alanyloxy ] -indol.
V tabulce 3 jsou uvedeny reakční doby, které uplynou od ' vnoření testovacích proužků do standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného až do první zřetelné barevné reakce. Jako referenční , hodnoty slouží reakční doby příslušných receptur bez přídavku aktivátoru.
Testovací papírky, připravené za použití uvedených tří substrátů, skýtají po vnoření do* roztoků s obsahem leukocytů barevné přesmyky z bezbarvého, na temně modré zbarvení.
bulka 3
Aktivátory Reakční doby pro substrát (sekundy)
I J K
srovnávací receptura bez aktivátoru 300 180 60
1. pyridin 220 140 45
2. 2-brompyridin 205 130 40
3. 2,6--dimethyl-4-ethoxypyridin 160 110 40
4. chinolin 185 90 35
5. 2-methylchinolin 190 105 40
6. 7-ísopropyIchinolin 165 80 35
7. 3-mcthoxychinolin 150 75 30
8. 2-methyl-6-bromchinolin 170 80 40
9. 5,7-dibroin-8-methoxychinolin 195 90 40
10. isochinolin 150 80 40
11. 3-propylisochinolin 170 75 35
12. 7-methylisochinolin 145 105 30
13. 1-chlorisochinolin 180 90 35
14. l-methoxy-3-chlorisochinolin 155 95 40
15. l-chlor-4-methyl-5-methoxyisochinolin 190 80 35
16. benzo[h ] chinolin — akridln 170 90 40
17. benzo.lejchinolin = fenanthridin 130 110 35
18. 2-ethylfenanthridin 160 100 30
19. 2-methoxy-fenanthridin 145 120 35
20. benzo[f] chinolin 130 105 35
21. benzo[g] chinolin 140 130 45
22. 2,4-dimethylbenzo.· [g ] chinolin 135 110 40
23. benzojh] chinolin 110 70 40
24. 1,7-fenanthrolin 165 130 45
25. 2-methyl-l,7-fenanthrolin 130 110 45
26. 2,8--dimethyl-l,7-feIlanthrolin 145 105 40
216 523
Aktivátory
27. 4,7-fenanthrolin
28. 3-methyl-4,7-fenanthrolin
29. 3,8-dimethyl-4,7-fenanthrolin
30. 1,10-fenanthrolin
31. 2,9-dimethyl-l,10-fenanthrolin
32. 4-azafluoren
33. chinin
34. ·. cinchonidln
35. kuprein
36. 2- [ 4“-methoxyfenyl ] -vinylpyridin-(2‘)
37. 2- [ 4“- (Ν,Ν-dimethy lamino)fenyl ] -vinylpyridin-(2‘)
38. bis- [ 2 - (fenyl) vinyl ] pyridin- (2',4‘)
39. · 2-[ntí1ty-(l“) ]-vinylpyridin-(2‘)
40. 2- [ pyridyl- (2“) ] -vinylpyridin- (2‘)
41. 2-[pyridyl- (4“ ) ] -vinylpyridin- (2')
42. 2-[ pyridyl-(3“ ) ] -vinylpyridin- (3‘)
43. 2-[pyridyl-(3“) ] -vinylpyridin-(4*)
44. 2- [ thienyl- (2“) ] -vinylpyridin- [ 4‘)
45. imidazol
46. 1-fenylimidazol
47. histamin
48. N-(acetylhistamin)
49. kyselina (imidazolyl-4)-octová
50. L-histidin
51. N-wacetyl-L-histidin
52. · hexanoll-l)
53. oktanob-l)
54. nonanoHl)
55. děkanob-l)
56. dodekanoHl)
57. pentadekanoHl)
58. hepta-dekanob-l]
59. oktadekanco--!)
60. · nonadekanoHl')
61. ' dokosanoHl)
62. cyklohexen-(1 )-ol-( 1)
63. cyklononanol
64. cyklodekanol
65. cykloheptadekanol
66. geraniol
67. nerol
68. linalool
69. nerolidol
70. ciS(0kta-deeee-(9))Oll(l)
71. hexandioHl^)
72. oktandioHl.e)
73. nonandioHl.O)
74. dekan-diol-(l10)
75. tetrakaliumhexakyanoferrát-II
76. trinatriumoktakyanomolybdát-V
77. trikaliumpentakyanonitrosylferrát-II
78. trikaliumpentakyanonltrosylmanganát-I
79. pentakaliumpentakyanonitrosylvanadát-I-
Reakční doby pro substrát (sekundy)
I J K
120 120 35
145 95 40
160 80 35
170 90 35
145 120 45
90 60 35
150 90 30
125 95 30
160 95 35
95 90 45
110 110 45
120 95 40
105 90 40
80 80 30
60 50 25
75 70 . 30
95 90 25
80 75 35
175 120 35
180 140 40
230 150 45
205 130 40
220 150 50
195 120 45
165 110 40
95 95 30
90 100 30
90 80 30
80 60 '' ·25
75 90 25
100 80 30
80 105 35
90 95 40
85 120 40
85 110 40
95 130 35
80 120 35
80 115 40
90 130 40
75 85 30
90 70 35
80 80 30
105 90 25
110 115 25
130 130 45
115 125 40
140 130 - ‘45
130 115 50
230 160 50
205 150 50
180 150 45
210 145 40
220 155 '65
Podobných výsledků při zkouškách · za použití jiných esterů indoxylu z německého· patentového · spisu ' [německá patentová přihláška P 28 54 '987.3] a/nebo močí obsahujících leukocyty místo standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného.
Příklad 4
Filtrační papír se po sobě napustí níže uvedenými roztoky, načež se vysuší . při teplotě 60 °C, popřípadě při teplotě. ·místnosti.
Rhzťok · 1: ’ ’ ' ; ’ ·’’ ’ '
Pufr · · ha bázi hydrochloridu tris-(hydroxymethyl)-aminomethanu, 0,2 mol/1, pH 9,0, ve vodě.
Roztok 2:
Diácótyl-3‘;5\3u,5“-tetrabromfenylsulf.onftaléin, 10“3 · mol/1, v acetonu.
Aktivátory podle vynálezu se jednotlivě nebo jako směsi přidají podle rozpustnosti k roztoku 1 a/nebo roztoku 2, takže se u jednotlivých aktivátorů obecných vzorců I, II · á · · IV · dosáhne .. vždy ' ''konečně koncentrace 10~2 mol/1 napbuštěcího ·· roztoku, u aktivátorů obecného· vzorce III konečných koncentrací 2 % (hmot./obj.) napouštěcího roztoku.
V tabulce ··.'IV·· jsou · uvedeny · reakční doby, které uplynou . od · vnoření testovacích proužků do standardního roztoku, obsahujícího 5000 · · reukocytů/,αΐ· isotonického roztoku · · chloridu sodného, · · až do první zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnota · Slouží reakční · doba · příslušné receptury bez · přísady aktivátoru.
Testovací· papírky · se při vnoření do roztoků · s obsahem · leukocytů zbarví od bezbarvého '-do · tmavě modrého zabarvení.
T abuTk’a · 4
Aktivátory Reakční doby (v sekundách) srovnávací receptura bez · '· aktivátorů·160
1. · 2-methylchinolin110
2. tetradekanol-(l)90 aktivátory 1. a 2.60
3. ' 1,7-fcnanthrolin80
4. tetrakaliumhexaky.anoferrát-II140 aktivátory 3. a 4.70
5. 'činchonin90
6.72- [ fenyl ] fvinylpyridinf [ 2‘)105 aktivátory 5. a 6.65
Příklad 5
Postupem popsaným v příkladu 4 se vyrobí testovací papírky za použití těchto roztoků:
Roztok 1:
Pufr · na bázi hydrochloridu trisf(hydrof xymethyl) aminomethanu, 0,2 mol/1, pH 8,0, ve vodě.
Roztok 2:
24iicthoxy-4-nitrobenzenfazaf4‘f [l‘-(Nfbenzyloxykarbonyl-L-alanyloxyjnaftalen, 10~3 mol/1 v acetonu.
Po vnoření do roztoků obsahujících leukocyty se zkušební papírky zbarví ze světle oranžova na červeno.
V tabulce 5 jsou sestaveny výsledky pokusů. Jsou v ní uvedeny reakční doby, které uplynou od vnoření testovacích proužků do standardního· roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného až do· první zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnota slouží reakční doba receptury bez přísady aktivátoru.
Tabulka 5
Aktivátor · Reakční doby [v sekundách) srovnávací receptura bez aktivátorů80
1. benzo[b]chinolin — akridin60
2. cis-oktadecen-(9)-01-(1)40 aktivátory 1. a 2.30
3. benzo[h]chinolin-50
4. chinin55 aktivátory 3. a 4.35
5. 1,7-fenanihгolin45
6. farnesol30 aktivátory 5. a 6.25
Podobných výsledků při pokusech se dosáhne, když se místo standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/ul isotonického roztoku chloridu sodného použije močí obsahujících leukocyty.
Příklad 6
Postupem, · popsaným v příkladu 4, se vyrobí testovací papírky za použití těchto roztoků: _
Roztok 1:
pufr na bázi hydrochloridu natriumtetraborátu, 0,2 mol/1, pH 8,0, ve vodě.
Roztok 2: .
3- [ N- (2‘-nitr obenzensulf enyl) -L-alanyloxy]-indol, 103 mol/1, v acetonu.
Podobných výsledků při zkouškách se dosáhne, použije-li se místo standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/ul isotonického roztoku chloridu sodného močí obsahujících leukocyty.
21652319
V
Po vnoření do roztoků obsahujících leukocyty se testovací papírky zbarví ze žlutá na zeleno.
Výsledky pokusů jsou sestaveny v tabulce VI, kde jsou uvedeny reakční doby,' které uplynou od vnoření testovacích proužků do standardního roztoku s obsahem §000 leukocytů/μΙ isotonického roztoku chloridu sodného · až do · první zřetelné barevné · · reakce.· Jako referenční hodnota slouží reakční doba receptury bez přísady aktivátoru.
Tabulka 6
Aktivátory Reakční doby · (v · sekundách]
srovnávací receptura bez aktivátoru 100
1. chinolin 80
2. cyklododekanol 70
aktivátory 1. a 2. 55
3 ·2-( f ur yl- (2 %) ] - vinylpyridin- (2‘) 75
4. fytol 50
aktivátory 3. a 4. 40
5. 4,7-fenanthrolin 85
6. tetrakaliumhexakyanoferrát-II 90
aktivátory 5. a 6. 70
Podobných výsledků při zkouškách se dosáhne, použije-li se močí obsahujících · leukocyty místo standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného.
Příklad 7
Postupem, popsaným v příkladu 4, · se vyrobí testovací papírky za použití těchto roztoků:
Roztok 1:
pufr na bázi hydrochloridu natriumtetraborátu, 0,2 mol/1, pH 8,0, ve vodě.
Roztok 2:
3- [ N-N-benzoyl) -D,L-alanyloxy ] -indol, 10 ~ 3 mol/1, v acetonu.
Testovací papírky se po vnoření do roztoků obsahujících leukocyty zbarví z · bezbarvá do modra.
Výsledky pokusů jsou uvedeny · v tabulce 7, kde jsou uvedeny reakční doby, které uplynou od vnoření testovacích ' proužků 'do standardního roztoku s obsahem 5000 · leukocytů/ul isotonického roztoku chloridu sodného až· do první zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnota slouží reakční · doba receptury bez přísady aktivátoru.
T a b u 1 k 'a · · 7
Aktivátory ·· Reakční·'doby · Jv · sekundách) j srovnávací receptura bez · aktivátoru90
1. 2-[fenyl]-vinylpyridin-(2‘)70
2. hexadekanoh-l)55 aktivátory 1. a 2. 40í·<
3. 2-[pyridyl-( 4“)]-vinylpyridin-(4‘)40
4. linalool·50 aktivátory · 3. · a ·4.
5. cinchonin75
6. dinatriumpentakyanonitrosylferrát-II 60·..
aktivátory 5. a 6.40
Podobné výsledky se získají při pokusech ! s močemi obsahujícími leukocyty místo standardního · roztoků · s · obsahem 5000 leukocyty/μΐ isotonického · roztoka. · · chloridu · · sodného.
Příklad 7a
Postupem· popsaným - v ·příkladu ·4 · se· > vyrobí testovací papírky · za · použití •těchto 'roztoků:
Roztok 1:
pufr na · bázi · hydrochltíridu 'natriumtetraborátu, 0,2 mol/1, ' pH· 8,0, ' ve vodě.'
Roztok 2:
3- [ N- (toluen-4‘-sulf opyl·) -indol,' T0* 2 3 moli^1, ' v 'acetonu.
Testovací papírky se· · při· · ponoření . do roztoků · · obsahujících leukocyty. · · · zbarví- · · z · · bezbarvá · do modra.
Výsledky pokusů · jsouisestaveny· ύ tabulce ·.· 7a, kde jsou · uvedeny reakční ·doby,^ které uplynou · od· vnoření testovacích · proužků ''do standardního · roztoku · s · 'obsahem: ·5000 ..leukocytů/ul isotonického·. roztoku, chloridusodá · ného až do první zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnota slouží · · reakčnídoba receptury bez přísady aktivátoru.
Tabulka 7a
Aktivátory Reakční doby (v sekundách)· i srovnávací receptura bez · aktivátoru 24 '-e
l.i. chinin 22 i
2. dinatriumpentakyanonitrosylferrát-II 15,.'í
3. · dekanol-(l) 18?
aktivátory 1., 2. a ·3. 6
21'
Podobných výsledků se dosáhne s * močemi * .'obsahujícími. ..leukocyty místo standardního' * * * roztoku * * s obsahem’ * *5000 leukocytů/μΐ isotohickeho.' roztoku chloridu * sodného.
Příklad 8
Filtrační papír .*** * se .* * po * sobě napustí níže uvedenými roztoky, načež se * · vysuší při tep60 °C, resp. při teplotě místnosti.
Roztoei: * * ' л-: ; :
laurylpyridiniumchlorid, 0,2 %, v · pufru na bázi hydrochloridu tris-(hydroxymethyl)aminomethanuŤQ,2* * · tool^/l, pH * 7,0, ve * vodě.
Roztok 2:
thiazol-'2-ážo-4‘-[ l‘-(N-benzyloxykarbonyl-^--h3^í^]^3^1t^}^X^)i^(^1^1^ia’l'eiQjj 10-3 · mol/1 v acetonu/ ι-Χ-·- ·ύ ' ;
Přídavek aktivátorů a provedení pokusů * je stejné jako v příkladu 1.
Testovací papírky změní po* ponoření do roztoků obsahujících leukocyty své zbarvení z růžového . na fialové.
V *tabulce* 8 .jsou* sestaveny * výsledky pokusů; jsou * * uvedeny * * reakční * doby, * které * uplynou * * od * * vnoření testovacích * proužků * do* standardního * : * * roztoku s * obsahem 5000 * leukocýtů/ul * isotomckého roztoku chloridu sodného * * *až * * * do * * prvé * zřetelné * * -barevné reakce. Jako * referenční· hodnoty * * slouží reakční doby příslušných * * receptur bez * přídavku aktivátoru.
Tabulka 8
Aktivátory Reakční doby (v sekundách) srovnávací receptura bez aktivátoru70
1. pyridin45
2. chinolin40
3. benzojb] chinolin = akridin35
4. 1,10-fenanthrolin40
5. 4-aza-fluoren30
6. chinin35
7. 2- [pyridyl- (4“)]-vinylpyridin- (4‘]30
8. imidazol50
9. dodekanol30
10. fyťol * ? .25
11. dihatriumpentákyanonitřosyl- ferřát-II60
Podobných : *výsled:ků * * se * dosáhne* s* ostatními Substráty' a *: ''aktivátory, uvedenými v příkladech * * * * T* až * 7, * a/nebo * *s * * jinými* obvyklými smáčédly. ’’ ‘
P ř í *k* lá * d* 9' ‘ ' J
Filtrační papír se po sobě napustí dále uvedenými roztoky, načež se vysuší při teplotě 60 °C, resp. při teplotě místnosti.
Roztok 1:
pufr na bázi * * hydrochloridu tris-(hydroxymethyljaminomethanu, 0,2 mol/1, pH 7,0, ve vodě.
Roztok 2:
thiazo^-azo-T- [ 2‘- (N-benzyloxykarbonyl-L-aaanyloxy )naftalen]-, 10-3 mol/1 a dihydrát oc-tanu zinečnatého, 10-3 * mol/1, v acetonu.
Přídavek aktivátorů a provedení pokusů je stejné jako v příkladu 1.
Po ponoření testovacích papírků * do roztoků obsahujících leukocyty se jejich barva změní * z růžové na modrofialovou.
V tabulce 9 jsou sestaveny výsledky získané při pokusech. Jsou tam uvedeny reakční doby, které uplynou od ponoření testovacích proužků do standardního·· roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu * sodného až do prvé zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnoty slouží reakční doby příslušných receptur * bez přísady aktivátoru.
Tabulka 9
Aktivátory Reakční doby (v * sekundách) srovnávací receptura bez * aktivátorů *65
1. pyridin50
2. chinolin45
3. benzo[b ] chinolin — akridin40
4. 1,10-fenanthroliň30
5. 4-aza-fluoren *35
6. chinin30
7. 2-[pyridyl-(4“) ]-vinylpyridinf(4‘)35
8. imidazol45
9. dodekanol25
10. fytol30
11. dinatriumpentakyanonitrosylf ferrát-II50
Podobné výsledky při pokusech se získají s jinými estery azobarviv z německého patentového spisu (německá patentová přihláška P 28 36 644.1), s jinými aktivátory uvedenými v příkladech 1 až 7 a/nebo jinými obvyklými komplexotvornými sloučeninami.
Příklad 10
Filtrační papír, se po sobě napustí níže uvedenými roztoky, načež se vysuší při tep * lotě 60 °C, resp. při * teplotě místnosti:
Roztok 1:
kaliumbromát, * 10“2 mol/I v pufru na bázi hydrochloridu natriumtetraborátu, 0,2 mol^/1, pH * 8,0, ve vodě.
218Л23 ί
T a bul. к a 10
Aktivátory Reakční doby (v sekundách.) .
Roztok 2:
3-[N-formyl-L-alanyloxy]-indol, 103 mol/ /1, v acetonu.
Přídavek aktivátorů a provedení pokusů jsou stejné jako v příkladu 1.
Při ponoření testovacích papírků do roztoků obsahujících leukocyty se jejich barva změní z bezbarvé na modrou.
V tabulce 10 jsou sestaveny výsledky pokusů. Jsou tam uvedeny reakční doby, které uplynou od vnoření testovacích proužků' do standardního roztoku s obsahem 5000 leukocytů/μΐ isotonického roztoku chloridu sodného až do první zřetelné barevné reakce. Jako referenční hodnoty slouží reakční doby příslušných receptur bez přídavku aktivátorů.
srovnávací receptura bez aktivátorů120
1. pyridin89
2. chinolin70
3. benzofb] chinolin:— akrldln100?
4. 1,10-fénánthrolin -OSs::
5. 4-aza-fluoren50»;.
6. chinin75
7. 2-[pyridyl-(4“)]-vinylpyridin-(4‘)70
8. imidazol83
9. dodekanol35.
10. fytoH 40 ··
11. dinatriumpentakyanonltrosyl- ferrát-II90
Podobných výsledků se dosáhne i při pokusech s jinými in.doxyjovýmt-'nstery, · $ ^JLnými .aktivátory, popsanými. pv příkladech 1 až 7, a s jinými běžnými oxidačními či’ nidly;

Claims (1)

  1. P R E DM ьΤ V Y N A LEZU
    Diagnostické činidlo к důkazu esterolytických enzymů, zejména leukocytových esteráz v tělesných tekutinách, obsahující esterázový substrát ze skupiny zahrnující estery .sulfonftaleinu, estery azobarviv nebo estery indoxylu, pufr a popřípadě pomocné přídavné látky ze skupiny zahrnující komplexotvorné látky, smáčedla, oxidační činidla, filmotvorné látky, galenlcké přísady, a látky vytvářející kostru, vyznačující se -tím, že kromě toho obsahuje alespoň jeden aktivátor ze skupiny zahrnující deriváty pyridinu obecného vzorce I, nový nebo ben^nový. anel-owaný- zbytoJc,-^te*! rý je popřípadě .jednou, až třikrát iaub^iiuován halogenem, hydrnxy^kupinQd,,^ al|čylór. vými skupinami,,s 1 5 át®my,.uhUku nabQ; alkoKyskupinami s 1 až 5'дЬэдцУ·< na který je -popřípadě vázán henzánovýme* · bo pyridinový anetovaný zbytok^^^WMS.substituováný alkylovou -skupinou-s 1 až: 5 atomy uhlíku, a
    R3 kromě toho popřípadě znamená vinylchinuklidylkarbinolovou skupinu, deriváty imidazolu obecného vzorce II, R6 (in kde každý ze symbolů Rt, R2, R3, R4 a R5, které mají stejný nebo různý význam, znamená vodík nebo halogen, alkylový zbytek s 1 až 5 atomy uhlíku nebo alkoxylový zbytek s 1 až 5 atomy uhlíku nebo vinylový zbytek, které jsou substituovány fenylovou nebo naftylovou skupinou, na niž je popřípadě vázána alkoxyskupina s 1 až 5 atomy uhlíku^ aminoskupina, alkylaminoskupina s 1 až 5 atomy uhlíku, di-( alkyl) aminoskupina s 1 až 5 atomy uhlíku v každé z obou alkylových částí, nebo pyridylovou nebo thienylovou skupinou, přičemž vždy dva sousedící substituenty znamenají popřípadě indekde znamená
    R6 vodík, alkylovou skupinu s 1 až 5 ator my uhlíku nebo. íenyAový abytoky •ρθρίίέΜ' dě substituovaný hydroxyskupinou neboacer tylovou skupinou, a
    R7 vodík, popňípadě.,N-acety)lovai^fámihQ’ alkylový zbytek s 1 až(5 atomyijuhiíku v akylové části, karboxyalkylový zbytek s l až 5 atomy uhlíku v alkylové Části nebo kar.boxyvinylový zbytek nebo popřípadě N-acetylový alaninový zbytek, alkoholy· obecná*· ho vzorce III,
    X—A—OH . (IUJ kde znamená
    X vodík nebo hydroxylovou skupinu a
    A nasycený nebo nenasycený, · cyklický nebo otevřený uhlovodíkový zbytek s 1 až 30 atomy uhlíku v přímém nebo rozvětveném řetězci, a komplexy kovů obecného vzorce IV,
    Dm[B(CN)n (NO)p] (IV) kde znamená
    D ion sodíku nebo draslíku,
    B ion železa, niklu, chrómu, manganu, kobaltu, molybdenu nebo vanadu, m celé číslo od 2 do 5, n celé číslo od 4 do 8 a p nulu nebo 1, přičemž číslo m vyplývá z mocenství iontu těžkého· kovu a z čísla n.
CS80973A 1979-02-14 1980-02-13 Diagnostic agent for the proof of esterolytic enzyms particularly leucocytic esterases in the body fluids CS216523B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19792905531 DE2905531A1 (de) 1979-02-14 1979-02-14 Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS216523B2 true CS216523B2 (en) 1982-11-26

Family

ID=6062854

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS80973A CS216523B2 (en) 1979-02-14 1980-02-13 Diagnostic agent for the proof of esterolytic enzyms particularly leucocytic esterases in the body fluids

Country Status (22)

Country Link
US (1) US4299917A (cs)
EP (1) EP0014929B1 (cs)
JP (1) JPS581920B2 (cs)
AR (1) AR223025A1 (cs)
AT (1) ATE543T1 (cs)
AU (1) AU519912B2 (cs)
BR (1) BR8000886A (cs)
CA (1) CA1148073A (cs)
CS (1) CS216523B2 (cs)
DD (1) DD149121A5 (cs)
DE (2) DE2905531A1 (cs)
DK (1) DK161340C (cs)
ES (1) ES8102726A1 (cs)
FI (1) FI69869C (cs)
HK (1) HK15285A (cs)
HU (1) HU182102B (cs)
PL (1) PL125796B1 (cs)
PT (1) PT70813A (cs)
RU (1) RU1784097C (cs)
SG (1) SG79484G (cs)
YU (2) YU45527B (cs)
ZA (1) ZA80765B (cs)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3005845A1 (de) * 1980-02-16 1981-09-03 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Aminosaeure- und peptidester von leuko-indoanilinen, verfahren zu deren herstellung sowie diese verbindungen enthaltende mittel zum nachweis proteolytischer enzyme
DE3017721A1 (de) * 1980-05-09 1981-11-26 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate
DE3118381A1 (de) * 1981-05-09 1982-11-25 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Mehrschichtiges testmittel zum nachweis einer komponente einer fluessigen probe
DE3211254A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens
US4499185A (en) * 1982-05-17 1985-02-12 Miles Laboratories, Inc. Test for esterase activity in a liquid sample
DE3309544A1 (de) * 1983-03-17 1984-09-20 Macherey-Nagel & Co Chemikalienhandel, 5160 Düren Teststreifen zum nachweis von leukozyten im harn
US4657855A (en) * 1984-04-06 1987-04-14 Miles Laboratories, Inc. Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample
US4645842A (en) * 1984-04-06 1987-02-24 Miles Laboratories, Inc. Pyrrole compounds for detecting the presence of hydrolytic analytes
DE3413119A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
US4637979A (en) * 1984-04-06 1987-01-20 Miles Laboratories, Inc. Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent
DE3413118A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
DE3413120A1 (de) * 1984-04-06 1985-10-24 Miles Laboratories, Inc., Elkhart, Ind. Analysenverfahren und mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme
DD247808C2 (de) * 1984-04-09 1989-01-11 Dresden Arzneimittel Teststreifen zur aufnahme von blutzuckertagesprofilen und verfahren zu seiner herstellung
AU4406185A (en) * 1984-05-31 1985-12-31 Coulter Electronics Inc. A reagent system and method for identification, enumeration and examination of classes and subclasses of blood leukocytes
US4672029A (en) * 1984-12-06 1987-06-09 Eastman Kodak Company Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes
US5051358A (en) * 1987-05-07 1991-09-24 The Procter & Gamble Company Diagnostic methods for detecting periodontal diseases
GB8713951D0 (en) * 1987-06-15 1987-07-22 Dewar M H Enhanced chemiluminescent reaction
DE3732871A1 (de) * 1987-09-30 1989-04-20 Behringwerke Ag Chromogene substrate
US5192688A (en) * 1988-08-15 1993-03-09 Switzer Iii Robert C Histological analysis method
FR2657895A1 (fr) * 1990-02-05 1991-08-09 Inst Textile De France Materiau antiseptique a greffons complexes par des ions metalliques et procede de preparation.
US6046019A (en) * 1991-07-09 2000-04-04 Goumeniouk; Alexander P. Diagnostic kits and methods for making granulocyte cell counts
DE19500768C2 (de) * 1994-01-17 2003-11-20 Aventis Res & Tech Gmbh & Co Phenanthren-Derivate und ihre Verwendung in flüssigkristallinen Mischungen
US5464739A (en) * 1994-08-22 1995-11-07 Bayer Corporation Composition method for determining the presence of leukocyte cells, esterase or protease in a test sample
CA2161574A1 (en) 1994-11-15 1996-05-16 James Noffsinger Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid
DE19651886A1 (de) * 1996-12-13 1998-06-18 Merck Patent Gmbh Mittel und Verfahren zur Bestimmung von hydrolytischen Enzymen
US6528652B1 (en) 1999-01-21 2003-03-04 Chronimed Composition and device for detecting leukocytes in urine
US6348324B1 (en) 1999-01-21 2002-02-19 Hypoguard America Limited Composition and device for detecting leukocytes in urine
US7781396B2 (en) * 2002-01-31 2010-08-24 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Peptides directed for diagnosis and treatment of amyloid-associated disease
US20070021345A1 (en) * 2003-06-30 2007-01-25 Ehud Gazit Peptides antibodies directed thereagainst and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
US20040052928A1 (en) * 2002-09-06 2004-03-18 Ehud Gazit Peptides and methods using same for diagnosing and treating amyloid-associated diseases
US6709868B2 (en) * 2002-05-20 2004-03-23 Portascience Inc. Method and apparatus for measuring white blood cell count
US20050260126A1 (en) * 2002-08-30 2005-11-24 Yukitsuka Kudo Diagnostic probes and remedies for diseases with accumulation of prion protein, and stains for prion protein
US7491699B2 (en) 2002-12-09 2009-02-17 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures and methods of generating and using the same
US20040126897A1 (en) 2002-12-19 2004-07-01 3M Innovative Properties Company Colorimetric sensors constructed of diacetylene materials
US6963007B2 (en) * 2002-12-19 2005-11-08 3M Innovative Properties Company Diacetylenic materials for sensing applications
WO2004060791A1 (en) * 2003-01-07 2004-07-22 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures encapsulating a foreign material and method of manufacturing same
CA2540407A1 (en) * 2003-09-25 2005-03-31 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Compositions and methods using same for treating amyloid-associated diseases
WO2005031362A2 (en) * 2003-10-02 2005-04-07 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Novel antibacterial agents and methods of identifying and utilizing same
WO2006006172A2 (en) * 2004-07-15 2006-01-19 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Use of anti-amyloid agents for treating and typing pathogen infections
EP1781310B1 (en) 2004-08-02 2015-10-14 Ramot at Tel Aviv University Ltd. Articles of peptide nanostructures and method of forming the same
WO2006018850A2 (en) * 2004-08-19 2006-02-23 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Compositions for treating amyloid associated diseases
WO2006027780A2 (en) * 2004-09-08 2006-03-16 Ramot At Tel Aviv University Ltd. Peptide nanostructures containing end-capping modified peptides and methods of generating and using the same
TW200636245A (en) * 2004-12-17 2006-10-16 3M Innovative Properties Co Colorimetric sensors constructed of diacetylene materials
GB2426334A (en) * 2005-05-20 2006-11-22 Orion Diagnostica Oy Application of a reagent to a matrix material
US8003399B2 (en) * 2005-08-31 2011-08-23 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Nitrite detection technique
US7504235B2 (en) * 2005-08-31 2009-03-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzyme detection technique
US10004828B2 (en) * 2005-10-11 2018-06-26 Romat at Tel-Aviv University Ltd. Self-assembled Fmoc-ff hydrogels
US7879212B2 (en) * 2005-11-03 2011-02-01 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Peptide nanostructure-coated electrodes
US20110091903A1 (en) * 2007-11-20 2011-04-21 Bommarito G Marco Method of analyzing a sample for a bacterium using diacetylene-containing polymer sensor
US9103796B2 (en) * 2007-12-14 2015-08-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Multi-layered devices for analyte detection
US11104933B1 (en) 2016-03-22 2021-08-31 Cleu Diagnostics, Llc Compositions and methods for determining the presence of active leukocyte cells using an electrochemical assay
JP2019513238A (ja) * 2016-03-30 2019-05-23 クオリザイム・ダイアグノスティクス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング・ウント・コムパニー・コマンディットゲゼルシャフトＱｕａｌｉｚｙｍｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｇｍｂｈ Ａｎｄ Ｃｏ． Ｋｇ 創傷における微生物感染の検出
JP6902416B2 (ja) * 2016-07-05 2021-07-14 ライオン株式会社 睡眠評価用マーカー及びその用途

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3087794A (en) * 1960-05-23 1963-04-30 Miles Lab Chemical test for differentiating leucocytes from erythrocytes
NL126365C (cs) * 1963-06-24
US3378463A (en) * 1965-06-22 1968-04-16 Army Usa Method of measuring enzyme activity
GB1128371A (en) * 1965-10-04 1968-09-25 Miles Lab Diagnostic composition
CH506792A (de) * 1968-09-20 1971-04-30 Merck Ag E Neues Mittel und Verfahren zur Lipasebestimmung
US3715325A (en) * 1970-10-02 1973-02-06 Miles Lab Insoluble polymeric diazonium salt chromogen
CA1007555A (en) * 1971-08-16 1977-03-29 Robert E. Smith Carbobenzoxydiglycyl-1-arginyl-4-methoxy-2-naphthylamide and process for determining enzyme concentrations
DE2235152C2 (de) * 1972-07-18 1975-07-10 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Diagnostisches Mittel zum Nachweis von Blut und anderen peroxidatisch wirksamen Substanzen in Körperflüssigkeiten
AR204182A1 (es) * 1973-12-20 1975-11-28 Boehringer Mannheim Gmbh Tira de ensayo para la comprobacion de substancias de actividad peroxidica en los liquidos del cuerpo
JPS5342438B2 (cs) * 1974-05-20 1978-11-11
US3874852A (en) * 1974-07-05 1975-04-01 Coulter Diagnostics Inc Reagent and method for determining leukocytes and hemoglobin in the blood
CS176664B1 (cs) * 1975-02-14 1977-06-30
US4045290A (en) * 1975-02-28 1977-08-30 Princeton Biomedix Incorporated Diagnostic method and compounds for use therewith
JPS6010261B2 (ja) * 1975-07-31 1985-03-15 和光純薬工業株式会社 潜血検出用組成物
JPS5263794A (en) * 1975-11-21 1977-05-26 Shionogi Seiyaku Kk Test piece for latent blood
US4206280A (en) * 1975-12-24 1980-06-03 Hoffmann-La Roche Inc. Determination of acid phosphatase
GB1530238A (en) * 1976-05-04 1978-10-25 Du Pont Method of determining lipase activity using a triglyceride reagent and method for preparing that reagent
JPS584560B2 (ja) * 1976-06-01 1983-01-26 三共株式会社 鉄錯塩を用いた酵素活性測定法
JPS5389492A (en) * 1977-01-13 1978-08-07 Uni Arabama Method and reagent for determination of carxylic esterhydrolase
JPS6058746B2 (ja) * 1977-09-22 1985-12-21 中外製薬株式会社 高級脂肪酸エステル
US4184923A (en) * 1977-11-03 1980-01-22 Eastman Kodak Company Reduction of gentisic acid interference in analytical elements
US4212939A (en) * 1977-11-22 1980-07-15 The University Of Alabama Substrate solution for carboxylic ester hydrolase determination
DE2826965A1 (de) * 1978-06-20 1980-01-17 Boehringer Mannheim Gmbh Diagnostisches mittel zum nachweis von leukozyten in koerperfluessigkeiten und dafuer geeignete chromogene
US4251223A (en) * 1979-12-17 1981-02-17 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests
US4251222A (en) * 1979-12-17 1981-02-17 Miles Laboratories, Inc. Sensitizers for peroxidative activity tests

Also Published As

Publication number Publication date
FI69869B (fi) 1985-12-31
YU45527B (en) 1992-05-28
AU5535980A (en) 1981-01-15
PL125796B1 (en) 1983-06-30
BR8000886A (pt) 1980-10-21
ATE543T1 (de) 1982-01-15
CA1148073A (en) 1983-06-14
ES488402A0 (es) 1981-02-16
HK15285A (en) 1985-03-15
DK161340B (da) 1991-06-24
EP0014929B1 (de) 1982-01-06
FI800444A7 (fi) 1980-08-15
DE2905531A1 (de) 1981-01-08
DK63480A (da) 1980-08-15
DK161340C (da) 1991-12-02
ZA80765B (en) 1981-03-25
PL221884A1 (cs) 1980-11-03
AR223025A1 (es) 1981-07-15
DE3060134D1 (en) 1982-02-25
YU212888A (en) 1990-04-30
JPS55108300A (en) 1980-08-20
RU1784097C (ru) 1992-12-23
SG79484G (en) 1985-08-16
FI69869C (fi) 1986-05-26
YU38680A (en) 1989-02-28
AU519912B2 (en) 1982-01-07
HU182102B (en) 1983-12-28
DD149121A5 (de) 1981-06-24
ES8102726A1 (es) 1981-02-16
EP0014929A1 (de) 1980-09-03
JPS581920B2 (ja) 1983-01-13
US4299917A (en) 1981-11-10
PT70813A (de) 1980-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS216523B2 (en) Diagnostic agent for the proof of esterolytic enzyms particularly leucocytic esterases in the body fluids
JP2922003B2 (ja) 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法の改良
US5457200A (en) 3-aminopyrazolo heterocyclic derivatives, and use for colorimetric determinations
CA1130801A (en) Agent for the detection of leukocytes in body fluids
HU187334B (en) Composition for the detection of esterase and/or protease enzymes and process for the preparation of corresponding substrates
US4814271A (en) Method for detecting esterolytic and proteolytic enzymes
US4442033A (en) Azo dyestuff for use as a chromogen in detecting leukocytes
JPH10130247A (ja) レドックス活性化合物およびその使用
JPS62215400A (ja) 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解及び／又は蛋白分解酵素の検出試薬
AU592440B2 (en) New derivatives as redox indicators, and the use thereof
CA1309930C (en) Reagent and procedure for determining cations
JP2017530098A (ja) レドックス指示薬
US3880588A (en) Diagnostic agent for detecting bilirubin
KR100557899B1 (ko) 비색 분석 방법 및 이것에 이용하는 시약
JPS61138163A (ja) 発色性カップラー及び過酸化水素又は他の被分析物の測定へのその使用
US4879243A (en) Use of substituted ortho-quinones as electron transfer agents in analytical determinations
KR100567432B1 (ko) 비색분석방법 및 이에 사용하는 시약
JPS63100376A (ja) 分析測定における電子移動剤として置換オルト−キノン類を使用する組成物および方法
EP0750197B1 (en) Dry analytical element for acetaminophen assay
JP2000241425A (ja) 水溶性比色用指示薬を用いた乾式分析素子
JPS6255560A (ja) ４−アミノフエノ−ル類の定量法
CS273302B2 (en) Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation