JPS62215400A - 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬 - Google Patents
色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬Info
- Publication number
- JPS62215400A JPS62215400A JP62048995A JP4899587A JPS62215400A JP S62215400 A JPS62215400 A JP S62215400A JP 62048995 A JP62048995 A JP 62048995A JP 4899587 A JP4899587 A JP 4899587A JP S62215400 A JPS62215400 A JP S62215400A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- ester
- general formula
- detection reagent
- alkyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 27
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 23
- -1 amino acid ester Chemical class 0.000 title claims description 16
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 title claims description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 10
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 title description 13
- 239000004365 Protease Substances 0.000 title description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 title description 3
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 title description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 title 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 14
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 14
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 12
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 12
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 10
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 claims description 10
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 claims description 9
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 claims description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004472 Lysine Chemical group 0.000 claims description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Chemical group NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 5
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 5
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000005098 aryl alkoxy carbonyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical group C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical group CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical group CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Chemical group CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical group CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000005140 aralkylsulfonyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Chemical group CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004474 valine Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 230000000058 esterolytic effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 35
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 11
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 11
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 8
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 8
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 7
- PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N indoxyl Chemical group C1=CC=C2C(O)=CNC2=C1 PCKPVGOLPKLUHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000004422 alkyl sulphonamide group Chemical group 0.000 description 5
- 125000004421 aryl sulphonamide group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 5
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 description 5
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 5
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical group NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 4
- 125000005362 aryl sulfone group Chemical group 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 4
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N thionyl chloride Chemical compound ClS(Cl)=O FYSNRJHAOHDILO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SWEICGMKXPNXNU-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydroindazol-3-one Chemical compound C1=CC=C2C(O)=NNC2=C1 SWEICGMKXPNXNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5-hydroxy-7-methoxychromen-4-one Chemical compound C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(OC)C(OC)=C1 HIXDQWDOVZUNNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N Naphthalene Chemical compound C1=CC=CC2=CC=CC=C21 UFWIBTONFRDIAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 125000002490 anilino group Chemical group [H]N(*)C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 2
- 230000000093 cytochemical effect Effects 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 2
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 2
- 108010000849 leukocyte esterase Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- KJIOQYGWTQBHNH-UHFFFAOYSA-N undecanol Chemical compound CCCCCCCCCCCO KJIOQYGWTQBHNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N (2R,6R)-form-2.6-Diaminoheptanedioic acid Natural products OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQXKHFZRJYXXFA-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 LQXKHFZRJYXXFA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- XHQBIYCRFVVHFD-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophen-3-ol Chemical group C1=CC=C2C(O)=CSC2=C1 XHQBIYCRFVVHFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical group C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZHDXWEPRYNHNDC-UHFFFAOYSA-N 1h-indazol-5-ol Chemical compound OC1=CC=C2NN=CC2=C1 ZHDXWEPRYNHNDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 2,2-diaminobutanoic acid Chemical compound CCC(N)(N)C(O)=O BLCJBICVQSYOIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SKWCZPYWFRTSDD-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(azaniumyl)propanoate;chloride Chemical compound Cl.NCC(N)C(O)=O SKWCZPYWFRTSDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 6-(4-aminophenyl)sulfonylpyridin-3-amine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=N1 XVMSFILGAMDHEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- REUKGNXLKLMNPH-UHFFFAOYSA-N CN(C)c1ccc(NC2C=CC(=O)C=C2)cc1 Chemical compound CN(C)c1ccc(NC2C=CC(=O)C=C2)cc1 REUKGNXLKLMNPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 229920001499 Heparinoid Polymers 0.000 description 1
- 235000000177 Indigofera tinctoria Nutrition 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001342 alkaline earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 125000004390 alkyl sulfonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000000987 azo dye Chemical class 0.000 description 1
- 150000001555 benzenes Chemical group 0.000 description 1
- OCBHHZMJRVXXQK-UHFFFAOYSA-M benzyl-dimethyl-tetradecylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 OCBHHZMJRVXXQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 150000001642 boronic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940089960 chloroacetate Drugs 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010779 crude oil Substances 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-O diazynium Chemical compound [NH+]#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogenphosphate dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O KDQPSPMLNJTZAL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N ethyl chloroformate Chemical compound CCOC(Cl)=O RIFGWPKJUGCATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000002554 heparinoid Substances 0.000 description 1
- 229940025770 heparinoids Drugs 0.000 description 1
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 1
- COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N indigo powder Natural products N1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=C1C(=O)C2=CC=CC=C2N1 COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079865 intestinal antiinfectives imidazole derivative Drugs 0.000 description 1
- 150000003854 isothiazoles Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N l-alanyl ester Chemical compound COC(=O)[C@H](C)N DWKPPFQULDPWHX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N meso-2,6-diaminopimelic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCC[C@@H]([NH3+])C([O-])=O GMKMEZVLHJARHF-SYDPRGILSA-N 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 125000000587 piperidin-1-yl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920001290 polyvinyl ester Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical group 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N sulfuryl dichloride Chemical compound ClS(Cl)(=O)=O YBBRCQOCSYXUOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
- C07D231/54—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D231/56—Benzopyrazoles; Hydrogenated benzopyrazoles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D275/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-thiazole or hydrogenated 1,2-thiazole rings
- C07D275/04—Heterocyclic compounds containing 1,2-thiazole or hydrogenated 1,2-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/70—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases the product, e.g. phenol, naphthol being diazotised in situ, e.g. with Fast Red
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規色原体であるヒドロキシベンゾ(イソ)
チアゾール及びヒドロキシベンゾピラゾールのアミノ酸
エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解/
又は蛋白分解酵素の検出試薬に関する。本発明の検出試
薬は、特に尿中の白血球の検出に好適に使用される。
チアゾール及びヒドロキシベンゾピラゾールのアミノ酸
エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解/
又は蛋白分解酵素の検出試薬に関する。本発明の検出試
薬は、特に尿中の白血球の検出に好適に使用される。
体液、特に尿中の白血球の検出は、腎臓及び尿生殖路の
病気の診断に極めて重要である。この検出は、元来、非
遠心分離法又は原油積物中の白血球を計数することによ
って実施された0両方の方法において、完全な白血球だ
けを記録することができる。しかしながら、白血球分解
速度が尿媒体に応じて広範に変動することは公知である
0例えば、強アルカリ性尿中では、白血球の半減期はわ
ずか60分である。このことは、測定される白血球数が
低すぎることを意味する。この溶解誤差を別にして、遠
心分離していない均質化尿中の白血球の定量的顕微鏡測
定は、計数室中で極めて正確な数値を与える。それにも
かかわらず、この方法は煩雑で1時間がかかり、熟練者
を要するので。
病気の診断に極めて重要である。この検出は、元来、非
遠心分離法又は原油積物中の白血球を計数することによ
って実施された0両方の方法において、完全な白血球だ
けを記録することができる。しかしながら、白血球分解
速度が尿媒体に応じて広範に変動することは公知である
0例えば、強アルカリ性尿中では、白血球の半減期はわ
ずか60分である。このことは、測定される白血球数が
低すぎることを意味する。この溶解誤差を別にして、遠
心分離していない均質化尿中の白血球の定量的顕微鏡測
定は、計数室中で極めて正確な数値を与える。それにも
かかわらず、この方法は煩雑で1時間がかかり、熟練者
を要するので。
実際にはほとんど使用されていない。
従って、医療実務において、尿中の白血球の好ましい測
定方法は、原油植物中のいわゆる視野法であった。この
方法には、まず、試料(沈積物)を遠心分離によって得
なければならない。しかし、尿の他の成分もそれによっ
て儂縮され、他の成分1例えば塩及び上皮細胞が白血球
の顕微鏡計数を著しく困難にする。沈積物含有量の変動
、不均一な沈積物及び光学的設計の異なる顕微鏡により
、白血球数に比較的大きい誤差(数百%まで)が生じた
。
定方法は、原油植物中のいわゆる視野法であった。この
方法には、まず、試料(沈積物)を遠心分離によって得
なければならない。しかし、尿の他の成分もそれによっ
て儂縮され、他の成分1例えば塩及び上皮細胞が白血球
の顕微鏡計数を著しく困難にする。沈積物含有量の変動
、不均一な沈積物及び光学的設計の異なる顕微鏡により
、白血球数に比較的大きい誤差(数百%まで)が生じた
。
これらの困難を回避するには、白血球は広い酵素スペク
トルを有するので、種々の体液中の白血球の検出原理と
して、酵素反応を使用する試みが既になされていた。
トルを有するので、種々の体液中の白血球の検出原理と
して、酵素反応を使用する試みが既になされていた。
例えば、体液中の白血球の検出試薬は西ドイツ特許出願
公開第28 26 965号及び同第28 36 64
4号公報から公知であり、これらの公報では、白血球中
に存在するエステル分解及び/又は蛋白分解活性が分析
に利用されている。スルホンフタレインエステル又はア
ゾ色素エステルは、白血球エステラーゼ及び/又はプロ
テアーゼ用基質として使用されている。酵素反応におい
て放出される色素を次に、公知方法で測定する。しかし
ながら、これらの公報に記載されている試薬は、白血球
濃度が低い場合に、反応時間が長ずざるので、なお実用
するには鋭敏でない。
公開第28 26 965号及び同第28 36 64
4号公報から公知であり、これらの公報では、白血球中
に存在するエステル分解及び/又は蛋白分解活性が分析
に利用されている。スルホンフタレインエステル又はア
ゾ色素エステルは、白血球エステラーゼ及び/又はプロ
テアーゼ用基質として使用されている。酵素反応におい
て放出される色素を次に、公知方法で測定する。しかし
ながら、これらの公報に記載されている試薬は、白血球
濃度が低い場合に、反応時間が長ずざるので、なお実用
するには鋭敏でない。
プロテアーゼ及びエステラーゼを検出する種々の方法は
、組織化学的及び細胞化学的酵素学からも知られている
[例えば、ピアース(A、 G、 E。
、組織化学的及び細胞化学的酵素学からも知られている
[例えば、ピアース(A、 G、 E。
Pearse)著、ヒストケミストリイ、セオレティカ
ル・アンド・アプライド(H4stochμm1コニT
heoretical and A 1ied 、第
3版、チャーチル・リビングストーン(churchi
ll Livinggtone)Q行、ニブインバラ−
ロンドン−ニューヨーク、1968年参照]、一般に、
無色又はわずかに着色したエステルを検出に使用するが
、これらは酵素によって無色の酸と同様に無色のアルコ
ール(フェノール)成分に分解される0次に、フェノー
ル成分をその後の反応で、例えばジアゾニウム塩とカッ
プリングさせるか、又は酸化によって無色の生成物に変
える0例えば、エフφシュマルツ(F、 Scb++a
lzl)及びエイチ拳ブラウンシュタイナ−(H,Br
aunsteiner)は、クリソ・つ゛シュル(Kl
in、 Wschr、)第46巻、642頁(1968
年)に、基質としてす7トールーAs−D−クロロアセ
テート及び遊離されるナフトールと共に着色アゾ化合物
を形成するジアゾニウム塩を用いる特殊な細胞化学的白
血球エステラーゼ検出法を記載している。
ル・アンド・アプライド(H4stochμm1コニT
heoretical and A 1ied 、第
3版、チャーチル・リビングストーン(churchi
ll Livinggtone)Q行、ニブインバラ−
ロンドン−ニューヨーク、1968年参照]、一般に、
無色又はわずかに着色したエステルを検出に使用するが
、これらは酵素によって無色の酸と同様に無色のアルコ
ール(フェノール)成分に分解される0次に、フェノー
ル成分をその後の反応で、例えばジアゾニウム塩とカッ
プリングさせるか、又は酸化によって無色の生成物に変
える0例えば、エフφシュマルツ(F、 Scb++a
lzl)及びエイチ拳ブラウンシュタイナ−(H,Br
aunsteiner)は、クリソ・つ゛シュル(Kl
in、 Wschr、)第46巻、642頁(1968
年)に、基質としてす7トールーAs−D−クロロアセ
テート及び遊離されるナフトールと共に着色アゾ化合物
を形成するジアゾニウム塩を用いる特殊な細胞化学的白
血球エステラーゼ検出法を記載している。
しかし、この種の2次分系は、極めて感度が低い(白血
球5000/piを含む試料でも、まだ、反応しない)
ので、体液、例えば尿中での白血球の迅速かつ簡単な検
出には不適当であることが判った。
球5000/piを含む試料でも、まだ、反応しない)
ので、体液、例えば尿中での白血球の迅速かつ簡単な検
出には不適当であることが判った。
英国特許第A−1,128,371号及びヨーロッパ特
許第A−12,957号は、体液中の加水分解酵素を検
出するため色原体基質としてインドキシル及びチオイン
ドキシルエステルを使用することを記載している。基質
が酵素分解されると、遊離インドキシルが形成され、こ
れをその後、酸化して、容易に検出しうる青色色素イン
ジゴにする。ヨーロッパ特許第A−12,957号に基
づく重版の試験手段は、N−トシル−L−アラニンL−
インドキシルエステルを含浸した濾紙ストリップから成
る。試験ストリップを白血球を含む尿試料中に浸漬する
と、ストリップは青色に変わる。しかしながら、最終的
呈色を達成し、試験を評価できるようになるまでの長い
待ち時間が、この製品の顕著な欠点である。
許第A−12,957号は、体液中の加水分解酵素を検
出するため色原体基質としてインドキシル及びチオイン
ドキシルエステルを使用することを記載している。基質
が酵素分解されると、遊離インドキシルが形成され、こ
れをその後、酸化して、容易に検出しうる青色色素イン
ジゴにする。ヨーロッパ特許第A−12,957号に基
づく重版の試験手段は、N−トシル−L−アラニンL−
インドキシルエステルを含浸した濾紙ストリップから成
る。試験ストリップを白血球を含む尿試料中に浸漬する
と、ストリップは青色に変わる。しかしながら、最終的
呈色を達成し、試験を評価できるようになるまでの長い
待ち時間が、この製品の顕著な欠点である。
ヨーロッパ特許第A−14,929号は、酵素分解反応
のため種々の促進剤(ピリジン誘導体、イミダゾール誘
導体、アルカリ土類金属錯体)について記載している。
のため種々の促進剤(ピリジン誘導体、イミダゾール誘
導体、アルカリ土類金属錯体)について記載している。
しかしながら、インドキシルが完全に酸化されるまでに
比較的長い時間を要し、試験感度が低いこと(検出限界
二数千白血球/p−1)が、なお欠点である。同じこと
は、ヨーロッパ特許第A−34,323号により白血球
酵素の基質としてロイコ−インドアニリンのエステルを
使用する場合にも当てはまる。
比較的長い時間を要し、試験感度が低いこと(検出限界
二数千白血球/p−1)が、なお欠点である。同じこと
は、ヨーロッパ特許第A−34,323号により白血球
酵素の基質としてロイコ−インドアニリンのエステルを
使用する場合にも当てはまる。
ヨーロッパ特許第A−39,880号明細書はヨーロッ
パ特許第A−12,957号及び同第14.929号に
よる基質と、前記のジアゾニウム塩とカップリングさせ
る検出原理との組み合わせを提供している。この方法で
白血球の検出限界を著しく低減することができるが、実
際に使用するのに望まれる15〜20白血球/ル立の検
出感度はまだ達成されない。
パ特許第A−12,957号及び同第14.929号に
よる基質と、前記のジアゾニウム塩とカップリングさせ
る検出原理との組み合わせを提供している。この方法で
白血球の検出限界を著しく低減することができるが、実
際に使用するのに望まれる15〜20白血球/ル立の検
出感度はまだ達成されない。
従って1本発明の目的は、高い検出感度と白血球酵素に
よる迅速な分解及びジアゾニウム塩との迅速かつ強い呈
色反応とを合わせもつ、エステル分解酵素の新規色原体
基質を見いだすことであった。この目的は1本発明によ
るエステルによって達成される。
よる迅速な分解及びジアゾニウム塩との迅速かつ強い呈
色反応とを合わせもつ、エステル分解酵素の新規色原体
基質を見いだすことであった。この目的は1本発明によ
るエステルによって達成される。
本発明は、一般式(1):
[式中x1は窒素又は硫黄を表し;x2は窒素を表し;
R,、R2及びR3は水素を表し;Aはグリシン、アラ
ニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラ
ニン、チロシン及びリジンから選ばれるアミノ酸基又は
該アミノ酸2〜8個からなるペプチド基を表し;Gは水
素又はアルキル−、アリール−及びアルアルキル−オキ
シカルボニル基、アルキル−及びアルアルキル−オキシ
チオカルボニル基、アルキル−、アリール−及びアルア
ルキル−スルホニルもしくは−スルフェニル基、ビニル
オキシカルボニル基、シクロヘキセニルオキシカルボニ
ル基、ホスホリル基並びにカルバミル基から選ばれる窒
素保護基を表す]の化合物を色原体酵素基質として用い
るエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬に関
する。
R,、R2及びR3は水素を表し;Aはグリシン、アラ
ニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラ
ニン、チロシン及びリジンから選ばれるアミノ酸基又は
該アミノ酸2〜8個からなるペプチド基を表し;Gは水
素又はアルキル−、アリール−及びアルアルキル−オキ
シカルボニル基、アルキル−及びアルアルキル−オキシ
チオカルボニル基、アルキル−、アリール−及びアルア
ルキル−スルホニルもしくは−スルフェニル基、ビニル
オキシカルボニル基、シクロヘキセニルオキシカルボニ
ル基、ホスホリル基並びにカルバミル基から選ばれる窒
素保護基を表す]の化合物を色原体酵素基質として用い
るエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬に関
する。
前記化合物(I)は、一般式(II):R9
[式中XI 、X2 、Rt 、R2及びR3は前記の
ものを表す]のフェノールを一般式(m):G −A−
OH(III) [式中G及びAは前記のものを表す]のアミノ酸若しく
はペプチド又はその適当な反応性誘導体とペプチド化学
に常用の方法で反応させることにより製造することがで
きる。
ものを表す]のフェノールを一般式(m):G −A−
OH(III) [式中G及びAは前記のものを表す]のアミノ酸若しく
はペプチド又はその適当な反応性誘導体とペプチド化学
に常用の方法で反応させることにより製造することがで
きる。
適当な反応性誘導体は、酸ハライド及びペプチド合成に
常用の混成無水物、例えばクロロギ酸エチルとの無水物
、又は活性エステル、例えばペンタクロロフェニルエス
テル又はN−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルで
ある。
常用の混成無水物、例えばクロロギ酸エチルとの無水物
、又は活性エステル、例えばペンタクロロフェニルエス
テル又はN−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステルで
ある。
本発明は、(a)色原体酵素基質、(b)ジアゾニウム
塩、必要に応じて(c)緩衝剤及び必要に応じて(d)
担体及び/又は常用の添加剤を含むエステル分解及び/
又は蛋白分解酵素の検出試薬において、色原体酵素基質
が前記化合物(I)であることを特徴とするエステル分
解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬に関する。
塩、必要に応じて(c)緩衝剤及び必要に応じて(d)
担体及び/又は常用の添加剤を含むエステル分解及び/
又は蛋白分解酵素の検出試薬において、色原体酵素基質
が前記化合物(I)であることを特徴とするエステル分
解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬に関する。
試料を本発明による試薬と接触させ、起こった呈色反応
を測定することにより液体試料、殊に体液中のエステル
分解及び/又は蛋白分解酵素を検出することができる。
を測定することにより液体試料、殊に体液中のエステル
分解及び/又は蛋白分解酵素を検出することができる。
本発明において、一般式(I)の好ましい化合物は、x
lが硫黄を表す化合物である。
lが硫黄を表す化合物である。
基G−A−0−が一般式(I)の化合物において5位に
存在するのが好ましい。
存在するのが好ましい。
最後に、G−A−は、一般式(■):
[式中R4は水素、又は場合により分岐したアルキル基
、シクロアルキル基、アルアルキル基を表し、これらの
基は1〜15個、好ましくは1〜9個の炭素原子を有し
、場合により1個又は2個、特に1個のヒドロキシル基
、メルカプト基、カルボキシル基、アミノ基又はグアニ
ド基で置換されており、R,は水素又は好ましくは−0
00−アルキル基、−COO−アルアルキル基、−C0
〇−7リール基、−5O2−アルキル基又は−502−
7リール基を表し、アルキル基は1〜9個の炭素原子、
好ましくは1〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖
の基であり、アリール基は好ましくは6〜12個の炭素
原子、好ましくは6個の炭素原子を含み、場合により炭
素原子a1〜4のアルコキシ基又はハロゲンで置換され
ている]の基を表すのが好ましい。
、シクロアルキル基、アルアルキル基を表し、これらの
基は1〜15個、好ましくは1〜9個の炭素原子を有し
、場合により1個又は2個、特に1個のヒドロキシル基
、メルカプト基、カルボキシル基、アミノ基又はグアニ
ド基で置換されており、R,は水素又は好ましくは−0
00−アルキル基、−COO−アルアルキル基、−C0
〇−7リール基、−5O2−アルキル基又は−502−
7リール基を表し、アルキル基は1〜9個の炭素原子、
好ましくは1〜6個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖
の基であり、アリール基は好ましくは6〜12個の炭素
原子、好ましくは6個の炭素原子を含み、場合により炭
素原子a1〜4のアルコキシ基又はハロゲンで置換され
ている]の基を表すのが好ましい。
G−A−は、特に好ましくは、天然に存在するアミノ酸
又はこのような酸2〜8個のペプチドの、前記窒素保護
基を有する基を表す。
又はこのような酸2〜8個のペプチドの、前記窒素保護
基を有する基を表す。
アミノ酸基は、そのL−又はD−形又はそのラセミ形で
存在しうる。特に好ま、しい基は、グリシン、アラニン
、バリン、リジン、ロイシン、イソロイシン、フェニル
アラニン及びチロシンの基であり、それぞれの場合にL
−形が特に好ましい。
存在しうる。特に好ま、しい基は、グリシン、アラニン
、バリン、リジン、ロイシン、イソロイシン、フェニル
アラニン及びチロシンの基であり、それぞれの場合にL
−形が特に好ましい。
存在する遊離ヒドロキシル基をアシル化、好ましくはア
セチル化することができる。
セチル化することができる。
Aの定義におけるペプチド基は1例えばジー。
トリー、テトラ−及びペンタ−ペプチド、好ましくはジ
ー及びトリペプチドを表す。
ー及びトリペプチドを表す。
一般式(■)のフェノール類は、自体公知であるか、又
は公知方法で製造される。
は公知方法で製造される。
一般式(II)のフェノール類の製造方法は、例えば下
記の参照文献に記載されている。フラツグ(Frank
e)ら著、アルツナイミッテルーフォルシュング(虹…
旦虹旦虹三匹胚胞」)亀ユ旦遷(11頁)1831 N
1838年;ドイツ特許第A−2704793号公報、
ディピース(navies)、ツク(囲)1955.2
412;クラーク(c1arke)ら著、縮合したイソ
チアゾール類(condensed l5othiaz
oles)第7部、ジェイ・ケム”L/ス・シップ(J
、 Chew、 Res、 S no 、 )(第6
巻)197頁(1980年)及びヒドロキシインダゾー
ル・イン・ザ・ケミストリイΦオブ・ヘテロサイクリッ
ク・コンパウンズ(Hdraw 1ndazole i
n The Che+5istr of)1eter
oc clic Cow ounds)第22巻336
〜340頁、アール・エイチ・ウィリイ(R,H。
記の参照文献に記載されている。フラツグ(Frank
e)ら著、アルツナイミッテルーフォルシュング(虹…
旦虹旦虹三匹胚胞」)亀ユ旦遷(11頁)1831 N
1838年;ドイツ特許第A−2704793号公報、
ディピース(navies)、ツク(囲)1955.2
412;クラーク(c1arke)ら著、縮合したイソ
チアゾール類(condensed l5othiaz
oles)第7部、ジェイ・ケム”L/ス・シップ(J
、 Chew、 Res、 S no 、 )(第6
巻)197頁(1980年)及びヒドロキシインダゾー
ル・イン・ザ・ケミストリイΦオブ・ヘテロサイクリッ
ク・コンパウンズ(Hdraw 1ndazole i
n The Che+5istr of)1eter
oc clic Cow ounds)第22巻336
〜340頁、アール・エイチ・ウィリイ(R,H。
留日ey )編。
本発明による化合物は、一般式(II)のフェノール類
及び一般式(III)のアミノ酸若しくはペプチド又は
それらの反応性誘導体(特に酸ハライド又は活性エステ
ル)から、ペプチド化学から自体公知の合成方法によっ
て製造することができる。この種の方法は1例えば、下
記の刊行物(及び本明細書に引用する文献)、即ち、ジ
ャノッフ(Janoff)ら著、ブロク・ツク・イクス
ペル・ビオル・メト(Proc、 Sac、 Ex e
r、 Biol、 Wed、)第136巻、1045〜
1049頁(1971年);スィートマン(Sweet
wan)ら著、ジェイ・ヒスト・ツク(J、旧st、
Sac、 )第22巻327〜339頁;ヤクブヶ(J
akubke)ら著、ケム・ベル(chew、 Her
、) 100.2267〜2372頁(19674F)
及ヒ特に、ツーベン−ワイル(Houben−Weyl
)著、メトーデン会デルφオルガニツシェン・ヘミ−(
Method且」肛ユ」組n■胚Che+5ie) 、
第XV/1巻及びXV/2巻に記載されている。
及び一般式(III)のアミノ酸若しくはペプチド又は
それらの反応性誘導体(特に酸ハライド又は活性エステ
ル)から、ペプチド化学から自体公知の合成方法によっ
て製造することができる。この種の方法は1例えば、下
記の刊行物(及び本明細書に引用する文献)、即ち、ジ
ャノッフ(Janoff)ら著、ブロク・ツク・イクス
ペル・ビオル・メト(Proc、 Sac、 Ex e
r、 Biol、 Wed、)第136巻、1045〜
1049頁(1971年);スィートマン(Sweet
wan)ら著、ジェイ・ヒスト・ツク(J、旧st、
Sac、 )第22巻327〜339頁;ヤクブヶ(J
akubke)ら著、ケム・ベル(chew、 Her
、) 100.2267〜2372頁(19674F)
及ヒ特に、ツーベン−ワイル(Houben−Weyl
)著、メトーデン会デルφオルガニツシェン・ヘミ−(
Method且」肛ユ」組n■胚Che+5ie) 、
第XV/1巻及びXV/2巻に記載されている。
本発明による、ニスエル分解及び/又は蛋白分解酵素の
検出用試薬は、前記化合物(I)の他に、一般式(V)
: [式中Klは低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級
アルキルメルカプト基、ヒドロキシ基、ニトロ基、シア
ノ基、トリフルオロメチル基、炭素原子数1〜8のアル
キルスルホンアミド基、アリールスルホンアミド基、炭
素原子数1〜8のアルキルスルホン基、アリールスルホ
ン基、スルホン酸又はカルボン酸、N−モルホリノ基、
N−チオモルホリノ基、N−ピロリジノ基、場合により
N′−アルキル化N−ピペラジノ基又はN−ピペリジノ
基、ハロゲン又は水素を表し、R′3は低級アルキル基
、低級アルコキシ基、アリールオキシ基、低級アルキル
メルカプト基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基
、ヒドロキシル基、ニトロ基、シアノ基、炭素原子数1
〜8のアルキルスルホンアミド基、アリールスルホンア
ミド基、炭素原子数1〜8のフルキルスルホン基、アリ
ールスルホン基、スルホン酸又はカルボン酸、N−モル
ホリノ基、N−チオモルホリノ基又はN−ピロリジノ基
、場合によりN′−アルキル化N−ピペラジノ基又はN
−ピペリジノ基又はフェニルアミノ基、場合により低級
アルキル基若しくは低級アルコキシ基で置換されたフェ
ニル基、ハロゲン又は水素を表し、R′2、R′4及び
R′5は、同−又は異なり、それぞれ低級アルキル基、
低級アルコキシ基、ニトロ基、炭素原子数1〜8のアル
キルスルホンアミド基、アリールスルホンアミド基、炭
素原子数1〜8のフルキルスルホン基、アリールスルホ
ン基、スルホン酸基又はカルボン酸基又は低級アルキル
メルカプト基、ハロゲン又は水素を表し、Xは安定化陰
イオンを表し、それぞれの場合に2個の隣接する基R1
〜R,が閉環して、場合によりハロゲン、炭素原子数1
〜6のアルキル基、炭素原子数1〜6のアルコキシ基又
はニトロ基、スルホン酸基又はカルボン酸基で置換され
たベンゼン環を形成することができ、ナフタリン系のジ
アゾニウム塩を形成する]のジアゾニウム塩を含む。
検出用試薬は、前記化合物(I)の他に、一般式(V)
: [式中Klは低級アルキル基、低級アルコキシ基、低級
アルキルメルカプト基、ヒドロキシ基、ニトロ基、シア
ノ基、トリフルオロメチル基、炭素原子数1〜8のアル
キルスルホンアミド基、アリールスルホンアミド基、炭
素原子数1〜8のアルキルスルホン基、アリールスルホ
ン基、スルホン酸又はカルボン酸、N−モルホリノ基、
N−チオモルホリノ基、N−ピロリジノ基、場合により
N′−アルキル化N−ピペラジノ基又はN−ピペリジノ
基、ハロゲン又は水素を表し、R′3は低級アルキル基
、低級アルコキシ基、アリールオキシ基、低級アルキル
メルカプト基、アルキルアミノ基、ジアルキルアミノ基
、ヒドロキシル基、ニトロ基、シアノ基、炭素原子数1
〜8のアルキルスルホンアミド基、アリールスルホンア
ミド基、炭素原子数1〜8のフルキルスルホン基、アリ
ールスルホン基、スルホン酸又はカルボン酸、N−モル
ホリノ基、N−チオモルホリノ基又はN−ピロリジノ基
、場合によりN′−アルキル化N−ピペラジノ基又はN
−ピペリジノ基又はフェニルアミノ基、場合により低級
アルキル基若しくは低級アルコキシ基で置換されたフェ
ニル基、ハロゲン又は水素を表し、R′2、R′4及び
R′5は、同−又は異なり、それぞれ低級アルキル基、
低級アルコキシ基、ニトロ基、炭素原子数1〜8のアル
キルスルホンアミド基、アリールスルホンアミド基、炭
素原子数1〜8のフルキルスルホン基、アリールスルホ
ン基、スルホン酸基又はカルボン酸基又は低級アルキル
メルカプト基、ハロゲン又は水素を表し、Xは安定化陰
イオンを表し、それぞれの場合に2個の隣接する基R1
〜R,が閉環して、場合によりハロゲン、炭素原子数1
〜6のアルキル基、炭素原子数1〜6のアルコキシ基又
はニトロ基、スルホン酸基又はカルボン酸基で置換され
たベンゼン環を形成することができ、ナフタリン系のジ
アゾニウム塩を形成する]のジアゾニウム塩を含む。
一般式(V)において、好ましくは、に1は炭素原子数
1〜4のアルキル基、炭素原子数1〜4のアルコキシ基
、ヒドロキシル基、ニトロ基、/\ロゲン又は水素を表
し、Ksは炭素原子数1〜4のアルキル基、炭素原子数
1〜4のアルコキシ基、アリールオキシ基、炭素原子数
1〜4のアルキルアミノ基、炭素原子数1〜4のジアル
キルアミノ基、ニトロ基、炭素原子数1〜4のアルキル
スルホンアミド基、アリールスルホンアミド基、炭素原
子数1〜4のアルキルスルホン基、アリールスルホン基
、N−モルホリノ基、N−ピロリシフ基、フェニルアミ
ノ基又はスルホン酸基又は水素を表し、R’2 、 K
4及びR’5は同−又は異なり、炭素原子数1〜4のア
ルキル基、炭素原子数1〜4のアルコキシ基、炭素原子
数1〜4のアルキルアミノ基、炭素原子数1〜4のジア
ルキルアミノ基、ニトロ基、炭素原子数1〜4のアルキ
ルスルホンアミド基、アリールスルホンアミド基又はス
ルホン酸基、/\ロゲン又は水素を表す。
1〜4のアルキル基、炭素原子数1〜4のアルコキシ基
、ヒドロキシル基、ニトロ基、/\ロゲン又は水素を表
し、Ksは炭素原子数1〜4のアルキル基、炭素原子数
1〜4のアルコキシ基、アリールオキシ基、炭素原子数
1〜4のアルキルアミノ基、炭素原子数1〜4のジアル
キルアミノ基、ニトロ基、炭素原子数1〜4のアルキル
スルホンアミド基、アリールスルホンアミド基、炭素原
子数1〜4のアルキルスルホン基、アリールスルホン基
、N−モルホリノ基、N−ピロリシフ基、フェニルアミ
ノ基又はスルホン酸基又は水素を表し、R’2 、 K
4及びR’5は同−又は異なり、炭素原子数1〜4のア
ルキル基、炭素原子数1〜4のアルコキシ基、炭素原子
数1〜4のアルキルアミノ基、炭素原子数1〜4のジア
ルキルアミノ基、ニトロ基、炭素原子数1〜4のアルキ
ルスルホンアミド基、アリールスルホンアミド基又はス
ルホン酸基、/\ロゲン又は水素を表す。
それぞれの場合に、2個の隣接する基R′□〜R′sは
閉環して、ベンゼン環を形成することができ、これは場
合によりハロゲン又は炭素原子数1〜4のアルキル基又
は炭素原子数1〜4のアルコキシ基又はニトロ基又はス
ルホン酸基で置換されていてもよい。
閉環して、ベンゼン環を形成することができ、これは場
合によりハロゲン又は炭素原子数1〜4のアルキル基又
は炭素原子数1〜4のアルコキシ基又はニトロ基又はス
ルホン酸基で置換されていてもよい。
一般式(V)において、アリール基はそれぞれ6〜12
個の炭素原子、好ましくは6個の炭素原子を含む芳香族
基を表し、場合によりハロゲン又は炭素原子数1〜4の
アルキル基又は炭素原子数1〜4のアルコキシ基で置換
されている。
個の炭素原子、好ましくは6個の炭素原子を含む芳香族
基を表し、場合によりハロゲン又は炭素原子数1〜4の
アルキル基又は炭素原子数1〜4のアルコキシ基で置換
されている。
一般式(V)のジアゾニウム塩は、自体公知であるか又
は自体公知の方法によって製造することができる[ツー
ベン−ワイル(Houben−Weyl)著、メソッド
−オブ・オーガニック・ケミストリー(Methods
af Or anic Che+1istr ) 、
第X/3巻参照]。
は自体公知の方法によって製造することができる[ツー
ベン−ワイル(Houben−Weyl)著、メソッド
−オブ・オーガニック・ケミストリー(Methods
af Or anic Che+1istr ) 、
第X/3巻参照]。
本発明による試薬は、検出すべき酵素による色原体基質
(E)の分解を促進する物質を含むのが好ましい、可能
な、このような促進剤は1例えばヨーロッパ特許第A−
14,929号に記載されている化合物であり、炭素原
子数8〜25、好ましくは炭素原子a10〜20の脂肪
族アルコール(場合により不悠和であってもよい)が好
ましい。このような好ましい促進剤は、例えばn−デカ
ノール、n−ドデカメール及び特にn−ウンデカノール
である。特に好ましい促進剤は、塩基性アミノ酸を含む
ホモポリアミノ酸又はコポリアミノ酸[イー・カチアル
スキイ(E、Katchalski)著、アドバンシイ
ズ・オブ魯プロティン・ケミストリ4 (Advanc
es of Protein Chemistr )
第13巻、243〜493頁(1958年);及びシー
ービーOアンフィンゼン(c,B、 Anfinsen
)、エム・エル・アンソン(M、 L、 Ansan)
、ジエイ・ティ豐ニドサル(J、T、 Edsall
)及びケイOバイリイ(K、 Ba1ley) (編集
者);アカデミツク・プレス・インコーホレイテッド(
Academic Press。
(E)の分解を促進する物質を含むのが好ましい、可能
な、このような促進剤は1例えばヨーロッパ特許第A−
14,929号に記載されている化合物であり、炭素原
子数8〜25、好ましくは炭素原子a10〜20の脂肪
族アルコール(場合により不悠和であってもよい)が好
ましい。このような好ましい促進剤は、例えばn−デカ
ノール、n−ドデカメール及び特にn−ウンデカノール
である。特に好ましい促進剤は、塩基性アミノ酸を含む
ホモポリアミノ酸又はコポリアミノ酸[イー・カチアル
スキイ(E、Katchalski)著、アドバンシイ
ズ・オブ魯プロティン・ケミストリ4 (Advanc
es of Protein Chemistr )
第13巻、243〜493頁(1958年);及びシー
ービーOアンフィンゼン(c,B、 Anfinsen
)、エム・エル・アンソン(M、 L、 Ansan)
、ジエイ・ティ豐ニドサル(J、T、 Edsall
)及びケイOバイリイ(K、 Ba1ley) (編集
者);アカデミツク・プレス・インコーホレイテッド(
Academic Press。
TJIC,) :ニューヨーク州ニューヨーク市発行
]及び逐次ポリアミノ酸である。可能な塩基性アミノ酸
は、側鎖にアミノ基又はグアニド基を有するアミノ酸で
ある。これらは特に、リジン及びオルニチン、並びにア
ルギニン、及び更に天然に存在しない塩基性アミノ酸、
例えばジアミノ酪酸、ジアミノプロピオン酸又はジアミ
ノピメリン酸である。構成アミノ酸は、ポリアミノ酸中
にラセミ形又は光学活性り一又はL−形で存在すること
ができる。ポリアミノ酸の分子量(数平均)は1.00
0〜2,000,000 であり、好ましくは 5,
000〜500.000である。塩基性アミノ酸の含有
率は、5〜100モル%、好ましくは20〜100モル
%である。
]及び逐次ポリアミノ酸である。可能な塩基性アミノ酸
は、側鎖にアミノ基又はグアニド基を有するアミノ酸で
ある。これらは特に、リジン及びオルニチン、並びにア
ルギニン、及び更に天然に存在しない塩基性アミノ酸、
例えばジアミノ酪酸、ジアミノプロピオン酸又はジアミ
ノピメリン酸である。構成アミノ酸は、ポリアミノ酸中
にラセミ形又は光学活性り一又はL−形で存在すること
ができる。ポリアミノ酸の分子量(数平均)は1.00
0〜2,000,000 であり、好ましくは 5,
000〜500.000である。塩基性アミノ酸の含有
率は、5〜100モル%、好ましくは20〜100モル
%である。
促進剤は、下記の試験具を製造する際の含浸液の0,5
〜10重量%、好ましくは1〜5重量%の量で使用する
のが好ましい。
〜10重量%、好ましくは1〜5重量%の量で使用する
のが好ましい。
蛋白分解酵素及び特に白血球酵素の検出用の本発明の試
薬は、適当な緩衝剤系を含むのが好ましい。この目的で
可能な系は、例えば燐酸塩、硼酸塩、炭酸塩/重度酸塩
、炭酸塩、バルビッール酸塩、トリス−(ヒドロキシメ
チル)−7ミノメタン(=トリス)、2−アミノ−2−
メチル−プロパン−1,3−ジオール(=アメジオール
)又はアミノ酸緩衝剤であり、pH値及び容量は原則と
して測定溶液又は試薬ストリップにおいてpH値が6〜
10、好ましくは7〜9になるように選択する。
薬は、適当な緩衝剤系を含むのが好ましい。この目的で
可能な系は、例えば燐酸塩、硼酸塩、炭酸塩/重度酸塩
、炭酸塩、バルビッール酸塩、トリス−(ヒドロキシメ
チル)−7ミノメタン(=トリス)、2−アミノ−2−
メチル−プロパン−1,3−ジオール(=アメジオール
)又はアミノ酸緩衝剤であり、pH値及び容量は原則と
して測定溶液又は試薬ストリップにおいてpH値が6〜
10、好ましくは7〜9になるように選択する。
本発明の試薬は、自体公知の洗浄剤を含んで1/〜てよ
い、なぜならば、これにより一層均質な色素分布及び一
層強い呈色が達成されるからである。
い、なぜならば、これにより一層均質な色素分布及び一
層強い呈色が達成されるからである。
可能な洗浄剤は゛陽イオン性及び陰イオン性洗浄剤、並
びに両性及び非イオン性洗浄剤である。これらの洗浄剤
としては、例えば、ベンジル−ジメチル−テトラデシル
アンモニウムクロリド、ドデシル硫酸ナトリウム、ゼフ
イロール、ポリビニルピロリドン、活性剤として前記の
ポリアミノ酸、ヘパリノイド及びこれらの化合物の混合
物が挙げられる。
びに両性及び非イオン性洗浄剤である。これらの洗浄剤
としては、例えば、ベンジル−ジメチル−テトラデシル
アンモニウムクロリド、ドデシル硫酸ナトリウム、ゼフ
イロール、ポリビニルピロリドン、活性剤として前記の
ポリアミノ酸、ヘパリノイド及びこれらの化合物の混合
物が挙げられる。
本発明の試薬において、前記の試薬を自体公知の不活性
担体に組み込むのが好ましく、特に好ましい担体マトリ
ックスは多孔性物質、例えば特に7戸紙、及びプラスチ
ック製膜、ガラス繊維マット(米国特許第3,846,
247号明細書)、多孔性セラミックストリップ、合成
不織布、スポンジ状物質(米国特許第3.552,92
8号明細書)、フェルト、繊維、木材、セルロース又は
シリカゲルである。
担体に組み込むのが好ましく、特に好ましい担体マトリ
ックスは多孔性物質、例えば特に7戸紙、及びプラスチ
ック製膜、ガラス繊維マット(米国特許第3,846,
247号明細書)、多孔性セラミックストリップ、合成
不織布、スポンジ状物質(米国特許第3.552,92
8号明細書)、フェルト、繊維、木材、セルロース又は
シリカゲルである。
この目的で、前記の担体を、容易に除去しうる適当な溶
剤、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、
ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシド中の前
記試薬の溶液で含浸する。
剤、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、
ジメチルホルムアミド又はジメチルスルホキシド中の前
記試薬の溶液で含浸する。
これは2つの別工程で行うのが好ましい、即ち。
まず、材料を緩衝剤及び他の水溶性添加剤を含む水溶液
で含浸する0次いで、これを一般式(V)の色原体酵素
基質及び活性剤の溶液で含浸する。
で含浸する0次いで、これを一般式(V)の色原体酵素
基質及び活性剤の溶液で含浸する。
しかしながら、含浸を別の順序で又は組成の異なる2種
の含浸溶液を用いて実施することもできる。含浸溶液又
は試験すべき液体が前記化合物(1)及びジアゾニウム
塩を104〜10−’%ル/文、特に10−3〜10’
モル/文の濃度で含むのが好ましい。
の含浸溶液を用いて実施することもできる。含浸溶液又
は試験すべき液体が前記化合物(1)及びジアゾニウム
塩を104〜10−’%ル/文、特に10−3〜10’
モル/文の濃度で含むのが好ましい。
濾紙をマトリックスとして使用する場合には、完成試験
紙をそのまま使用するか、又は自体公知の方法で把手に
接着させるか、又は好ましくは、例えば西ドイツ特許出
願公開第2.118,455号公報によりプラスチック
と微細なメツシュ網との間に封入することができる。
紙をそのまま使用するか、又は自体公知の方法で把手に
接着させるか、又は好ましくは、例えば西ドイツ特許出
願公開第2.118,455号公報によりプラスチック
と微細なメツシュ網との間に封入することができる。
フィルムを被覆した試験ストリップを製造するため、好
ましくはすべての試薬をフィルム形成物質、例えばポリ
ビニルエステル又はポリアミドの溶液又は分散液中に入
れ、均質に混合する。この混合物をプラスチック製担体
上に薄い層を形成するようにブラシで塗布し、乾燥する
。乾燥後、こうして製造したフィルムを被覆した試験ス
トリップを切断し、そのまま使用するか、又は自体公知
の方法で把手に接着させるか、又は例えば西ドイツ特許
出願公開第2 118 455号公報によりプラスチッ
クと微細なメツシュ網との間に封入することができる。
ましくはすべての試薬をフィルム形成物質、例えばポリ
ビニルエステル又はポリアミドの溶液又は分散液中に入
れ、均質に混合する。この混合物をプラスチック製担体
上に薄い層を形成するようにブラシで塗布し、乾燥する
。乾燥後、こうして製造したフィルムを被覆した試験ス
トリップを切断し、そのまま使用するか、又は自体公知
の方法で把手に接着させるか、又は例えば西ドイツ特許
出願公開第2 118 455号公報によりプラスチッ
クと微細なメツシュ網との間に封入することができる。
エステル分解及び/又は蛋白分解酵素、特に白血球酵素
を検出するための本発明の診断剤は、試験試薬の前記成
分に常用の薬品添加剤を添加し、混合物を造粒すること
によって粉末混合物又は試薬錠剤の形で製造することが
できる。この種の添加剤は、例えば炭水化物(例えば単
糖類、オリゴ糖若しくは多糖類)、又は糖アルコール(
例えばマンニット、ソルビット若しくはキシリット)、
又は他の可溶性不活性化合物1例えばポリエチレングリ
コール若しくはポリビニルピロリドンである。粉末混合
物又は試薬錠剤は、例えば、約50〜200I1g、好
ましくは50〜80mg(7)最終重量を有する。
を検出するための本発明の診断剤は、試験試薬の前記成
分に常用の薬品添加剤を添加し、混合物を造粒すること
によって粉末混合物又は試薬錠剤の形で製造することが
できる。この種の添加剤は、例えば炭水化物(例えば単
糖類、オリゴ糖若しくは多糖類)、又は糖アルコール(
例えばマンニット、ソルビット若しくはキシリット)、
又は他の可溶性不活性化合物1例えばポリエチレングリ
コール若しくはポリビニルピロリドンである。粉末混合
物又は試薬錠剤は、例えば、約50〜200I1g、好
ましくは50〜80mg(7)最終重量を有する。
それぞれの場合に、約5〜20mg、好ましくは約10
mgの合計重量を有する凍結乾燥物を製造するには、試
験に必要なすべての試薬の他に、常用の構造形成剤1例
えばポリビニルピロリドン及び必要に応じて他の充填剤
、例えばマンニット、ソルビット若しくはキシリットを
含む溶液を凍結乾燥する。
mgの合計重量を有する凍結乾燥物を製造するには、試
験に必要なすべての試薬の他に、常用の構造形成剤1例
えばポリビニルピロリドン及び必要に応じて他の充填剤
、例えばマンニット、ソルビット若しくはキシリットを
含む溶液を凍結乾燥する。
溶液の形の本発明の診断剤は、試験に必要なすべての試
薬を含むのが好ましい、可能な溶剤は、水及び水と水溶
性有機溶剤、例えばメタノール、エタノール、アセトン
若しくはジメチルホルムアミドとの混合物である。貯蔵
上の理由では、試験に必要な試薬を2以上の溶液に分割
し、これを実際の試験の間に一緒にするのが有利である
。
薬を含むのが好ましい、可能な溶剤は、水及び水と水溶
性有機溶剤、例えばメタノール、エタノール、アセトン
若しくはジメチルホルムアミドとの混合物である。貯蔵
上の理由では、試験に必要な試薬を2以上の溶液に分割
し、これを実際の試験の間に一緒にするのが有利である
。
こうして製造した診断剤は、試験すべき体液中に浸漬す
るか又は試験すべき体液に添加した後、エステル分解及
び/又は蛋白分解酵素、特に白血球酵素の存在を、発色
により迅速かつ簡単に検出することができ、その発色は
肉眼又は分光光度計で、例えば反射測光法で、すなわち
、キュベツト中で測定することができる。−細胞当たり
の白血球酵素の活性はほぼ一定のパラメータと見なされ
るので、試験する体液の白血球濃度を発色の強度から測
定することができる。これにより、本発明の診断剤を用
いて完全な白血球及び溶解した白血球を記録する。なぜ
ならば白血球酵素の活性は、白血球の溶解後でも完全に
保持されるからである。従って、溶解現象による誤差は
生じない。
るか又は試験すべき体液に添加した後、エステル分解及
び/又は蛋白分解酵素、特に白血球酵素の存在を、発色
により迅速かつ簡単に検出することができ、その発色は
肉眼又は分光光度計で、例えば反射測光法で、すなわち
、キュベツト中で測定することができる。−細胞当たり
の白血球酵素の活性はほぼ一定のパラメータと見なされ
るので、試験する体液の白血球濃度を発色の強度から測
定することができる。これにより、本発明の診断剤を用
いて完全な白血球及び溶解した白血球を記録する。なぜ
ならば白血球酵素の活性は、白血球の溶解後でも完全に
保持されるからである。従って、溶解現象による誤差は
生じない。
下記の実施例は本発明を説明するためのものである。特
に断らない限り、量は重量部又は重量%を表すものとす
る。
に断らない限り、量は重量部又は重量%を表すものとす
る。
合成例!
N−)シルーL−アラニルエステル
このエステルは、それぞれの場合に、例えばN−トシル
−L−7ラニルクロリドを無水メチルエチルケトン又は
無水トルエン中で粉末炭酸カリウムの存在下でフェノー
ル類と反応させることによって製造した。約55℃で6
〜12時間攪拌した後、40〜70%のフェノールが反
応していた。フェノール:に2CO3:酸クロリドのモ
ル比は、通常1:1.5:1.5であった。 pH値は
、全反応期間を通じて約7であった。後処理のため、炭
酸カリウムを50℃で枦去し、次に溶剤を真空中で蒸発
させた。生成物をシリカゲル−溶離剤(例えば石油エー
テル:アセトン−約9=1)を用いてカラムクロマトグ
ラフィーし、その後、再結晶させることによって精製し
た。
−L−7ラニルクロリドを無水メチルエチルケトン又は
無水トルエン中で粉末炭酸カリウムの存在下でフェノー
ル類と反応させることによって製造した。約55℃で6
〜12時間攪拌した後、40〜70%のフェノールが反
応していた。フェノール:に2CO3:酸クロリドのモ
ル比は、通常1:1.5:1.5であった。 pH値は
、全反応期間を通じて約7であった。後処理のため、炭
酸カリウムを50℃で枦去し、次に溶剤を真空中で蒸発
させた。生成物をシリカゲル−溶離剤(例えば石油エー
テル:アセトン−約9=1)を用いてカラムクロマトグ
ラフィーし、その後、再結晶させることによって精製し
た。
−トシル−L−アラニン
文献;イーΦフィッシャー(E、 Fischer)及
びダブリュー・リップシッツ(W、 Lipschit
z)著。
びダブリュー・リップシッツ(W、 Lipschit
z)著。
ビイ(B、)第48巻、362頁(1915年)L−ア
ラニア83.7g (0,93モル)を約2Nの水酸化
ナトリウム溶液465m1に溶かす、この溶液にp−)
ルエンスルホニルクロリド186g (0,976モル
)を70〜72℃で20分かけて少量ずつ添加する。ス
ルホニルクロリドの添加の間、自動滴定装置を用いて約
2Nの水酸化ナトリウム溶液で反応混合物をpH10に
保持する。ここにおいて、2N水酸化ナトリウム溶液5
60−が消費される0反応混合物のpHがもはや変化し
なくなったら、混合物を15〜5℃に冷却し、37%強
度の塩酸でpH3にする0分離した生成物を吸引濾過し
、湿ったフィルターケーキを水2350−から再結晶さ
せる。
ラニア83.7g (0,93モル)を約2Nの水酸化
ナトリウム溶液465m1に溶かす、この溶液にp−)
ルエンスルホニルクロリド186g (0,976モル
)を70〜72℃で20分かけて少量ずつ添加する。ス
ルホニルクロリドの添加の間、自動滴定装置を用いて約
2Nの水酸化ナトリウム溶液で反応混合物をpH10に
保持する。ここにおいて、2N水酸化ナトリウム溶液5
60−が消費される0反応混合物のpHがもはや変化し
なくなったら、混合物を15〜5℃に冷却し、37%強
度の塩酸でpH3にする0分離した生成物を吸引濾過し
、湿ったフィルターケーキを水2350−から再結晶さ
せる。
収量:融点132〜135℃のL −p −トシルアラ
ニンt85.5g(理論量の82%)。
ニンt85.5g(理論量の82%)。
−トシル−L−アラニル ロリド
p−トシル−L−アラニン158.1g(0,65モル
)を40℃の塩化チオニル35〇−中で、澄明な溶液が
形成するまで、攪拌する。
)を40℃の塩化チオニル35〇−中で、澄明な溶液が
形成するまで、攪拌する。
過剰の塩化チオニルを水流ポンプの真空下に溜去する。
フラスコ内の残渣を蒸溜したトルエン300−に取る。
得られる澄明で、わずかに黄色の溶液を攪拌したりプロ
イン900−中に注ぐ。
イン900−中に注ぐ。
酸クロリドが沈澱する。翌日、吸引濾過し、軽質ガソリ
ンで洗浄し、真空デシケータ中で塩化カルシウム/水酸
化カリウム上で乾燥した。
ンで洗浄し、真空デシケータ中で塩化カルシウム/水酸
化カリウム上で乾燥した。
収量:融点81〜83℃のほとんど無色の結晶155g
(理論量の91%)。
(理論量の91%)。
古
5−ヒドロキシ−1,2−ベンゾイソチアゾール3.0
2gを無水メチルエチルケトン150−中で無水に20
033gと共に攪拌しながら55℃に加温する0合計6
gのN−1−シル−し一7ラニルクロリドを55℃で6
時間かけて、充分攪拌しながら少量ずつ添加する。混合
物をその後、更に2時間55℃で攪拌する。冷却後、K
、CO3を枦去し、次いで溶剤を回転蒸発器で蒸発させ
る。粗製生成物をシリカゲルカラムで高速液体クロマト
グラフィーによって精製した。溶離剤:ヘキサン:塩化
メチレン:n−ブタノール−40,8:1.所望の生成
物の検出:254nmでのUV、3X100mg(7)
適用量に対して、合計100mgの5− [N−()ル
x7−4”−スルホニル)−L−アラニルオキシ]−1
,2−ベンゾイソチアゾールが単離された。
2gを無水メチルエチルケトン150−中で無水に20
033gと共に攪拌しながら55℃に加温する0合計6
gのN−1−シル−し一7ラニルクロリドを55℃で6
時間かけて、充分攪拌しながら少量ずつ添加する。混合
物をその後、更に2時間55℃で攪拌する。冷却後、K
、CO3を枦去し、次いで溶剤を回転蒸発器で蒸発させ
る。粗製生成物をシリカゲルカラムで高速液体クロマト
グラフィーによって精製した。溶離剤:ヘキサン:塩化
メチレン:n−ブタノール−40,8:1.所望の生成
物の検出:254nmでのUV、3X100mg(7)
適用量に対して、合計100mgの5− [N−()ル
x7−4”−スルホニル)−L−アラニルオキシ]−1
,2−ベンゾイソチアゾールが単離された。
5−ヒドロキシ−インダゾール0.6gを40℃で無水
ピリジン1.2gと一緒に無水塩化メチレン50−に取
る。無水塩化メチレン25sJ中に溶解したN−1シル
−L−7ラニルクロリド1.5gを40℃で3時間かけ
て滴加する。その後、混合物を40℃で更に2時間攪拌
する。冷却後、塩化メチレン溶液を、2%クエン酸を毎
回10〇−用いて3回洗浄する。th!!化メチレン相
を硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を枦去した後、室温
で真空中で蒸発させる。こうして得た残渣をシリカゲル
上でカラムクロマトグラフィーによって精製する。溶離
剤二石油エーテル:アセトン6二4゜溶剤を所望のフラ
クシ覆ンから蒸発させた後、0.4gの5− [N−D
ルエンー4″−スルホニル)−L−7ラニルオキシ]−
インダゾールが得られる。
ピリジン1.2gと一緒に無水塩化メチレン50−に取
る。無水塩化メチレン25sJ中に溶解したN−1シル
−L−7ラニルクロリド1.5gを40℃で3時間かけ
て滴加する。その後、混合物を40℃で更に2時間攪拌
する。冷却後、塩化メチレン溶液を、2%クエン酸を毎
回10〇−用いて3回洗浄する。th!!化メチレン相
を硫酸ナトリウムで乾燥し、乾燥剤を枦去した後、室温
で真空中で蒸発させる。こうして得た残渣をシリカゲル
上でカラムクロマトグラフィーによって精製する。溶離
剤二石油エーテル:アセトン6二4゜溶剤を所望のフラ
クシ覆ンから蒸発させた後、0.4gの5− [N−D
ルエンー4″−スルホニル)−L−7ラニルオキシ]−
インダゾールが得られる。
同様の方法で、一般式(■)の対応するヒドロキシベン
ゾイソチアゾール及びヒドロキシインダゾールを特定の
N−保護アミノ酸又は反応性アミノ酸誘導体と反応させ
ることによって下記の基質が得られる: 4− [N−
()ルエンー4″−スルホニル)−L−アラニルオキシ
]−1,2−ベンゾイソチアゾール、4− [N−(ト
ルエン−4″−スルホニル)−L−バリルオキシ] −
1、2−ベンゾイソチアゾール、5−[N−(t−ブチ
ルオキシカルボニル)−L−7ラニルオキシ]−1,2
−ベンゾイソチアゾール、6−[N−ベンジルオキシカ
ルボニル−L−アラニルオキシ]−インダゾール、5−
[N−メチルスルホニル−し−リジルオキシ]−インダ
ゾール、4− [N−(4”−メトキシベンゼンスルホ
ニル)−L−アラニルオキシ]−インダゾール、5−[
N−ベンジルオキシカルボニル−〇−アセチルーL−チ
ロシルオキシ]−2,1−ベンゾイソチアゾール、5−
[N−ベンゼンスルホニル−L−フェニルアラニルオキ
シ] −1、2−ベンゾイソチアゾール及び6−[N−
ベンジルオキシカルボニル−L−バリルオキシ]−イン
ダゾール。
ゾイソチアゾール及びヒドロキシインダゾールを特定の
N−保護アミノ酸又は反応性アミノ酸誘導体と反応させ
ることによって下記の基質が得られる: 4− [N−
()ルエンー4″−スルホニル)−L−アラニルオキシ
]−1,2−ベンゾイソチアゾール、4− [N−(ト
ルエン−4″−スルホニル)−L−バリルオキシ] −
1、2−ベンゾイソチアゾール、5−[N−(t−ブチ
ルオキシカルボニル)−L−7ラニルオキシ]−1,2
−ベンゾイソチアゾール、6−[N−ベンジルオキシカ
ルボニル−L−アラニルオキシ]−インダゾール、5−
[N−メチルスルホニル−し−リジルオキシ]−インダ
ゾール、4− [N−(4”−メトキシベンゼンスルホ
ニル)−L−アラニルオキシ]−インダゾール、5−[
N−ベンジルオキシカルボニル−〇−アセチルーL−チ
ロシルオキシ]−2,1−ベンゾイソチアゾール、5−
[N−ベンゼンスルホニル−L−フェニルアラニルオキ
シ] −1、2−ベンゾイソチアゾール及び6−[N−
ベンジルオキシカルボニル−L−バリルオキシ]−イン
ダゾール。
実施例1
7戸紙[例えばイートン拳アンド・ダイクマン(Eat
on and Dikeman) 205 ]を下記の
溶液で順次含浸し、次いで60℃で乾燥する。
on and Dikeman) 205 ]を下記の
溶液で順次含浸し、次いで60℃で乾燥する。
症痙ユ
0.1モルのトリス−(ヒドロキシメチル)−アミノメ
タン緩衝液(pH8,4)、3%のポリビニルピロリド
ン及び2.5%のポリーL−フルギニン。
タン緩衝液(pH8,4)、3%のポリビニルピロリド
ン及び2.5%のポリーL−フルギニン。
溶剤:水
症亘」
7.5xlO’モル/lの5− [N−()ルzンー4
″−スルホニル)−L−7ラニルオキシ]−1,2−ベ
ンゾイソチアゾール及びlXl0−2モル/見の2.4
−ジメトキシーベンゼンジアゾニウムテトラヒドロフル
オボレート。
″−スルホニル)−L−7ラニルオキシ]−1,2−ベ
ンゾイソチアゾール及びlXl0−2モル/見の2.4
−ジメトキシーベンゼンジアゾニウムテトラヒドロフル
オボレート。
溶剤:無水アセトン
淡黄色試験紙が得られ、この濾紙は白血球を含む尿中に
浸漬したときに赤褐色に変色する。
浸漬したときに赤褐色に変色する。
実施例2
5− [N−(トルエン−4″−スルホニル)−L−7
ラニルオキシ]−1,2−ベンゾイソチアゾール5II
g、2.4−ジメトキシーベンゼンジアゾニウムテトラ
ヒドロフルオボレート5mg、燐酸二水素カリウム4履
g、燐酸水素二ナトリウム2水和物80鳳g、ポリーL
−リジン6I1g及びマンニット110mgを含む錠剤
を、白血球を含む尿5−と混合する。尿試料は、赤褐色
に変色する。
ラニルオキシ]−1,2−ベンゾイソチアゾール5II
g、2.4−ジメトキシーベンゼンジアゾニウムテトラ
ヒドロフルオボレート5mg、燐酸二水素カリウム4履
g、燐酸水素二ナトリウム2水和物80鳳g、ポリーL
−リジン6I1g及びマンニット110mgを含む錠剤
を、白血球を含む尿5−と混合する。尿試料は、赤褐色
に変色する。
Claims (3)
- (1)(a)色原体酵素基質、(b)ジアゾニウム塩、
必要に応じて(c)緩衝剤及び必要に応じて(d)担体
及び/又は常用の添加剤を含むエステル分解及び/又は
蛋白分解酵素の検出試薬において、色原体酵素基質が 一般式: ▲数式、化学式、表等があります▼ [式中X_1は窒素又は硫黄を表し;X_2は窒素を表
し;R_1、R_2及びR_3は水素を表し;Aはグリ
シン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フ
ェニルアラニン、チロシン及びリジンから選ばれるアミ
ノ酸基又は該アミノ酸2〜8個からなるペプチド基を表
し;Gは水素又はアルキル−、アリール−及びアルアル
キル−オキシカルボニル基、アルキル−及びアルアルキ
ル−オキシチオカルボニル基、アルキル−、アリール−
及びアルアルキル−スルホニルもしくは−スルフェニル
基、ビニルオキシカルボニル基、シクロヘキセニルオキ
シカルボニル基、ホスホリル基並びにカルバミル基から
選ばれる窒素保護基を表す]の化合物の少なくとも一つ
であることを特徴とするエステル分解及び/又は蛋白分
解酵素の検出試薬。 - (2)一般式におけるX_1が硫黄を表す特許請求の範
囲第1項記載の検出試薬。 - (3)一般式におけるエステル基が5位に存在する特許
請求の範囲第1項又は第2項記載の検出試薬。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3413077.2 | 1984-04-06 | ||
DE19843413077 DE3413077A1 (de) | 1984-04-06 | 1984-04-06 | Chromogene aminosaeure- und peptidester, verfahren zu deren herstellung, verwendung dieser verbindungen in analysenverfahren sowie mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62215400A true JPS62215400A (ja) | 1987-09-22 |
JPH0244517B2 JPH0244517B2 (ja) | 1990-10-04 |
Family
ID=6232916
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60070161A Granted JPS60231658A (ja) | 1984-04-06 | 1985-04-04 | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステル及びその製造法 |
JP62048995A Granted JPS62215400A (ja) | 1984-04-06 | 1987-03-05 | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP60070161A Granted JPS60231658A (ja) | 1984-04-06 | 1985-04-04 | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステル及びその製造法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US4723020A (ja) |
EP (1) | EP0157360B1 (ja) |
JP (2) | JPS60231658A (ja) |
AU (1) | AU556832B2 (ja) |
DE (2) | DE3413077A1 (ja) |
ES (1) | ES8607262A1 (ja) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE3629175A1 (de) * | 1986-08-28 | 1988-03-17 | Behringwerke Ag | Chromogene verbindungen, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung |
EP0661280A1 (en) * | 1993-12-29 | 1995-07-05 | Kyoto Daiichi Kagaku Co., Ltd. | Novel amino acid ester and reagent composition for detecting leucocytes or elastase in body liquid |
US5464739A (en) | 1994-08-22 | 1995-11-07 | Bayer Corporation | Composition method for determining the presence of leukocyte cells, esterase or protease in a test sample |
CA2161574A1 (en) * | 1994-11-15 | 1996-05-16 | James Noffsinger | Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid |
US6348324B1 (en) | 1999-01-21 | 2002-02-19 | Hypoguard America Limited | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
US6528652B1 (en) * | 1999-01-21 | 2003-03-04 | Chronimed | Composition and device for detecting leukocytes in urine |
US6709868B2 (en) * | 2002-05-20 | 2004-03-23 | Portascience Inc. | Method and apparatus for measuring white blood cell count |
US7611863B2 (en) * | 2004-01-08 | 2009-11-03 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. | Selective staining of biomembranes using voltage-sensitive dyes |
EP1553396A3 (en) * | 2004-01-08 | 2005-09-21 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Selective staining of biomembranes using voltage-sensitive dyes |
US7504235B2 (en) | 2005-08-31 | 2009-03-17 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzyme detection technique |
WO2007027353A2 (en) * | 2005-08-31 | 2007-03-08 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Detection of proteases secreted from pathogenic microorganisms |
US8003399B2 (en) * | 2005-08-31 | 2011-08-23 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Nitrite detection technique |
US8758989B2 (en) * | 2006-04-06 | 2014-06-24 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzymatic detection techniques |
US8044257B2 (en) * | 2006-10-30 | 2011-10-25 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Absorbent article containing lateral flow assay device |
US7897360B2 (en) | 2006-12-15 | 2011-03-01 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Enzyme detection techniques |
US7935538B2 (en) * | 2006-12-15 | 2011-05-03 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Indicator immobilization on assay devices |
US20080269707A1 (en) | 2007-04-30 | 2008-10-30 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Lateral Flow Device for Attachment to an Absorbent Article |
US8043272B2 (en) * | 2007-04-30 | 2011-10-25 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Collection and testing of infant urine using an absorbent article |
US9103796B2 (en) | 2007-12-14 | 2015-08-11 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Multi-layered devices for analyte detection |
US20100290948A1 (en) * | 2009-05-15 | 2010-11-18 | Xuedong Song | Absorbent articles capable of indicating the presence of urinary tract infections |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1128371A (en) * | 1965-10-04 | 1968-09-25 | Miles Lab | Diagnostic composition |
US3929815A (en) * | 1973-12-19 | 1975-12-30 | Gulf Research Development Co | Hydroxy-, alkoxy-, and alkylcarbamoyloxy-2,1-benzisothiazoles |
DE2854987A1 (de) * | 1978-12-20 | 1980-06-26 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostische mittel zum nachweis proteolytischer enzyme und dafuer geeignete chromogene |
DE3017721A1 (de) * | 1980-05-09 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel zum nachweis esterolytischer und/oder proteolytischer enzyme und dafuer geeignete substrate |
US4704460A (en) * | 1984-04-06 | 1987-11-03 | Miles Laboratories, Inc. | Novel compounds for detecting the presence of hydrolytic analytes in a test sample |
-
1984
- 1984-04-06 DE DE19843413077 patent/DE3413077A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-03-11 US US06/710,623 patent/US4723020A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-20 AU AU40142/85A patent/AU556832B2/en not_active Ceased
- 1985-03-27 DE DE8585103667T patent/DE3583761D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-03-27 EP EP85103667A patent/EP0157360B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-29 ES ES541774A patent/ES8607262A1/es not_active Expired
- 1985-04-04 JP JP60070161A patent/JPS60231658A/ja active Granted
-
1987
- 1987-03-05 JP JP62048995A patent/JPS62215400A/ja active Granted
- 1987-08-27 US US07/090,009 patent/US4806423A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES541774A0 (es) | 1986-06-01 |
DE3583761D1 (de) | 1991-09-19 |
AU4014285A (en) | 1985-10-10 |
DE3413077A1 (de) | 1985-10-17 |
US4723020A (en) | 1988-02-02 |
EP0157360A2 (de) | 1985-10-09 |
JPS6245227B2 (ja) | 1987-09-25 |
EP0157360B1 (de) | 1991-08-14 |
AU556832B2 (en) | 1986-11-20 |
ES8607262A1 (es) | 1986-06-01 |
EP0157360A3 (en) | 1988-05-04 |
US4806423A (en) | 1989-02-21 |
JPS60231658A (ja) | 1985-11-18 |
JPH0244517B2 (ja) | 1990-10-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPS62215400A (ja) | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステルを用いたエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬 | |
EP0046742B1 (en) | Peptide substrates for determination of protease activity | |
US4278763A (en) | Diagnostic agents for the detection of proteolytic enzymes | |
US4551428A (en) | Agent for the determination of esterolytic and/or proteolytic enzymes | |
US4657855A (en) | Composition and test device for determining the presence of leukocytes, esterase and protease in a test sample | |
JPS60231654A (ja) | 色原体アミノ酸エステル及びペプチドエステル及びその製造法並びにこれらの化合物を用いたエステル分解及び/又は蛋白分解酵素の検出試薬及び分析方法 | |
US4637979A (en) | Composition and test device for determining the presence of leukocytes containing a zwitterion coupling agent | |
US5663044A (en) | Methodology for colorimetrically determining the concentration of white blood cells in a biological fluid | |
US4758508A (en) | Analytical process and agents for the detection of esterolytic and/or proteolytic enzymes | |
JPH0873422A (ja) | 新規アミノ酸エステルおよび白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法 | |
US4755462A (en) | Analytical process and agents for the detection of esterolytic and/or proteolytic enzymes | |
US5220029A (en) | Synthetic proteolytic substrate | |
JPS60224500A (ja) | エステル分解酵素及び/又はタンパク質分解酵素の検出用試薬 | |
JPH04182469A (ja) | 新規なチオエステル化合物 | |
CA1248697A (en) | Phenoxyamino acid esters and peptide esters | |
JPH03244396A (ja) | 加水分解酵素の検出方法およびそれに使用する検出器具 | |
Chen | (PART I) COMPARATIVE KINETICS OF ANCROD, REPTILASE, CROTALASE, BOVINE THROMBIN AND BOVINE TRYPSIN, ON ESTER AND OLIGOPEPTIDE SUBSTRATES.(PART II) KINETIC STUDIES OF HUMAN FIBRINOLIGASE AND GUINEA PIG LIVER TRANSGLUTAMINASE, ON THIOCHOLINE ESTER (THIOLESTER) SUBSTRATES. | |
JPH03246285A (ja) | アゾレゾルシノールエステル誘導体および加水分解酵素基質 | |
SI8311124A8 (sl) | Sredstvo in postopek za dokaz ekterolitskih in/ali proteolitskih encimov |