JPH0873422A - 新規アミノ酸エステルおよび白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法 - Google Patents
新規アミノ酸エステルおよび白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法Info
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- JPH0873422A JPH0873422A JP6214040A JP21404094A JPH0873422A JP H0873422 A JPH0873422 A JP H0873422A JP 6214040 A JP6214040 A JP 6214040A JP 21404094 A JP21404094 A JP 21404094A JP H0873422 A JPH0873422 A JP H0873422A
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- acid ester
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 一般式：Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂまたは
Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ ［式中、Ｚは
酸素原子又は硫黄原子、Ｘは脂肪族炭化水素基、Ｘ'は
置換又は不置換の芳香族基又は複素環基若しくは炭化珪
素基、Ａはアミノ酸又はペプチド化合物から誘導される
基、Ｂは基Ａ中のアミノ基の保護基、ｎは０〜８の整数
を示す。］で表されるアミノ酸エステル。このアミノ酸
エステルは、液体試料中の白血球、エステラーゼ又はプ
ロテアーゼの検出に用いることができる。 【効果】 このアミノ酸エステルを白血球、エステラー
ゼ又はプロテアーゼに作用させるとホルムアルデヒドが
発生する。このホルムアルデヒドを検出することによ
り、白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼを検出でき
るので、測定の自由度が増す。
Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ ［式中、Ｚは
酸素原子又は硫黄原子、Ｘは脂肪族炭化水素基、Ｘ'は
置換又は不置換の芳香族基又は複素環基若しくは炭化珪
素基、Ａはアミノ酸又はペプチド化合物から誘導される
基、Ｂは基Ａ中のアミノ基の保護基、ｎは０〜８の整数
を示す。］で表されるアミノ酸エステル。このアミノ酸
エステルは、液体試料中の白血球、エステラーゼ又はプ
ロテアーゼの検出に用いることができる。 【効果】 このアミノ酸エステルを白血球、エステラー
ゼ又はプロテアーゼに作用させるとホルムアルデヒドが
発生する。このホルムアルデヒドを検出することによ
り、白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼを検出でき
るので、測定の自由度が増す。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なアミノ酸エステ
ル、及び該アミノ酸エステルを使用する液体試料、特に
尿中の白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼを検出す
る方法に関する。
ル、及び該アミノ酸エステルを使用する液体試料、特に
尿中の白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼを検出す
る方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】腎臓及び泌尿生殖器の疾病を診断する場
合、尿中白血球の検出・測定は非常に重要である。従
来、尿中白血球の検出は、顕微鏡と血球測定板とを用
い、一定量の尿中に含まれる白血球の数を数えて行って
いた。しかし、顕微鏡により白血球数を数える方法は、
作業量が多いために時間がかかる上に、熟練者でなけれ
ば精度の高い計数が行えるとは言い難い。
合、尿中白血球の検出・測定は非常に重要である。従
来、尿中白血球の検出は、顕微鏡と血球測定板とを用
い、一定量の尿中に含まれる白血球の数を数えて行って
いた。しかし、顕微鏡により白血球数を数える方法は、
作業量が多いために時間がかかる上に、熟練者でなけれ
ば精度の高い計数が行えるとは言い難い。
【０００３】顕微鏡による計数に代わる簡便且つ精度の
良い方法として、白血球中に存在する「エステル分解活
性」や、「蛋白質分解活性」を利用した方法が開発され
た。 例えば、特公昭６１−４５９８２号公報に記載の方法で
は、基質として置換フェノキシ−アミノ酸エステルを用
い、白血球の作用で遊離した置換フェノールをジアゾニ
ウム塩により検出する。特公昭６２−４１７１０号公報
に記載の方法では、基質として５−フェニルピロールア
ミノ酸エステルを用い、白血球の作用で遊離した５−フ
ェニルピロールをジアゾニウム塩により検出する。特公
平２−４３４８０号公報に記載の方法では、基質として
インドキシルアミノ酸エステルを用い、遊離したインド
キシルをジアゾニウム塩により検出している。
良い方法として、白血球中に存在する「エステル分解活
性」や、「蛋白質分解活性」を利用した方法が開発され
た。 例えば、特公昭６１−４５９８２号公報に記載の方法で
は、基質として置換フェノキシ−アミノ酸エステルを用
い、白血球の作用で遊離した置換フェノールをジアゾニ
ウム塩により検出する。特公昭６２−４１７１０号公報
に記載の方法では、基質として５−フェニルピロールア
ミノ酸エステルを用い、白血球の作用で遊離した５−フ
ェニルピロールをジアゾニウム塩により検出する。特公
平２−４３４８０号公報に記載の方法では、基質として
インドキシルアミノ酸エステルを用い、遊離したインド
キシルをジアゾニウム塩により検出している。
【０００４】上記の特許公報に記載の方法はいずれも、
尿中白血球中に存在する「エステル分解活性」や、「蛋
白質分解活性」を利用しているが、上記方法に用いられ
ている各基質類はいずれも非常に高価であり、また、遊
離してきた物質が、ジアゾニウム塩や分光光度計によっ
てのみ検出可能であるので、検出手段の自由度が限られ
る。
尿中白血球中に存在する「エステル分解活性」や、「蛋
白質分解活性」を利用しているが、上記方法に用いられ
ている各基質類はいずれも非常に高価であり、また、遊
離してきた物質が、ジアゾニウム塩や分光光度計によっ
てのみ検出可能であるので、検出手段の自由度が限られ
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の第１の目的
は、液体試料中の白血球、エステラーゼ又はプロテアー
ゼを検出するため、白血球、エステラーゼ又はプロテア
ーゼによって加水分解を受けて、検出可能な物質を遊離
させる基質として有用な新規なアミノ酸エステルを提供
することである。本発明の第２の目的は、そのような新
規アミノ酸エステルを基質として使用する、白血球、エ
ステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法を提供すること
である。
は、液体試料中の白血球、エステラーゼ又はプロテアー
ゼを検出するため、白血球、エステラーゼ又はプロテア
ーゼによって加水分解を受けて、検出可能な物質を遊離
させる基質として有用な新規なアミノ酸エステルを提供
することである。本発明の第２の目的は、そのような新
規アミノ酸エステルを基質として使用する、白血球、エ
ステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法を提供すること
である。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するた
め、本発明は、一般式： Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ （Ｉ） または Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ （II） ［式中、Ｚは酸素原子又は硫黄原子、Ｘは脂肪族炭化水
素基、Ｘ'は置換又は不置換の芳香族基又は複素環基若
しくは炭化珪素基、Ａはアミノ酸又はペプチド化合物か
ら誘導される基、Ｂは基Ａ中のアミノ基の保護基を示
す。］で表されるアミノ酸エステル、及びpＨ７．０〜
８．５のアルカリ性緩衝液の存在下、白血球、エステラ
ーゼ又はプロテアーゼを含む液体試料に、該アミノ酸エ
ステルを作用させ、発生したホルムアルデヒドを検出す
ることを特徴とする白血球、エステラーゼ又はプロテア
ーゼの検出方法を提供する。また、本方法では、検出す
るホルムアルデヒドを、既知濃度のホルムアルデヒドと
発色の程度を比較することにより比色定量することが可
能である。
め、本発明は、一般式： Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ （Ｉ） または Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ （II） ［式中、Ｚは酸素原子又は硫黄原子、Ｘは脂肪族炭化水
素基、Ｘ'は置換又は不置換の芳香族基又は複素環基若
しくは炭化珪素基、Ａはアミノ酸又はペプチド化合物か
ら誘導される基、Ｂは基Ａ中のアミノ基の保護基を示
す。］で表されるアミノ酸エステル、及びpＨ７．０〜
８．５のアルカリ性緩衝液の存在下、白血球、エステラ
ーゼ又はプロテアーゼを含む液体試料に、該アミノ酸エ
ステルを作用させ、発生したホルムアルデヒドを検出す
ることを特徴とする白血球、エステラーゼ又はプロテア
ーゼの検出方法を提供する。また、本方法では、検出す
るホルムアルデヒドを、既知濃度のホルムアルデヒドと
発色の程度を比較することにより比色定量することが可
能である。
【０００７】式（Ｉ）及び（II）中、基Ｘの脂肪族炭化
水素基は、一般に１〜１８個、好ましくは１〜８個の炭
素原子を有しており、例えばメチル基、エチル基、プロ
ピル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチ
ル基などの基が挙げられる。
水素基は、一般に１〜１８個、好ましくは１〜８個の炭
素原子を有しており、例えばメチル基、エチル基、プロ
ピル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチ
ル基などの基が挙げられる。
【０００８】基Ｘ'の芳香族基又は複素環基の例として
は、フェニル基、ベンジル基、ピリジン基、ナフチル基
などが挙げられる。また、これらの基は、置換基により
置換されていてもよく、置換基の例としては、炭素数１
〜４の直鎖又は分岐アルキル基、アルコキシ基、フェニ
ル基、ニトロ基、スルホン基、Ｎ−アシルアミノ基、
Ｎ,Ｎ−ジアルキルアミノ基が挙げられる。
は、フェニル基、ベンジル基、ピリジン基、ナフチル基
などが挙げられる。また、これらの基は、置換基により
置換されていてもよく、置換基の例としては、炭素数１
〜４の直鎖又は分岐アルキル基、アルコキシ基、フェニ
ル基、ニトロ基、スルホン基、Ｎ−アシルアミノ基、
Ｎ,Ｎ−ジアルキルアミノ基が挙げられる。
【０００９】炭化珪素基の例としては、（２ークロロメ
トキシエチル）−トリメチルシランが挙げられる。
トキシエチル）−トリメチルシランが挙げられる。
【００１０】基Ａは、アミノ酸又はペプチド化合物から
誘導され、それらのカルボン酸部分において、−ＣＨ2
−Ｏ−の酸素原子とエステル結合を形成している。アミ
ノ酸の例としては、Ｌ−アラニン、Ｌ−ロイシン、フェ
ニルアラニン、バリン、イソロイシンが挙げられ、ペプ
チド化合物としては上記のアミノ酸が２〜１０個結合し
たオリゴペプチドが好ましく、例としてはＬ−アラニル
Ｌ−ロイシン等が挙げられる。
誘導され、それらのカルボン酸部分において、−ＣＨ2
−Ｏ−の酸素原子とエステル結合を形成している。アミ
ノ酸の例としては、Ｌ−アラニン、Ｌ−ロイシン、フェ
ニルアラニン、バリン、イソロイシンが挙げられ、ペプ
チド化合物としては上記のアミノ酸が２〜１０個結合し
たオリゴペプチドが好ましく、例としてはＬ−アラニル
Ｌ−ロイシン等が挙げられる。
【００１１】アミノ酸の保護基としては従来既知のもの
がいずれも使用できるが、好ましい保護基の例は、アセ
チル基、t−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）基、トシル
基、カルボベンゾキシ（ＣＢＺ）基、１−ジメチルアミ
ノナフタレン−５−スルホニル(ダンシル)基である。
がいずれも使用できるが、好ましい保護基の例は、アセ
チル基、t−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）基、トシル
基、カルボベンゾキシ（ＣＢＺ）基、１−ジメチルアミ
ノナフタレン−５−スルホニル(ダンシル)基である。
【００１２】本発明のアミノ酸エチルを白血球を含む液
体試料に作用させると、まず、式中の「Ｏ−Ａ」部分の
エステル結合が、白血球のエステラーゼ活性により加水
分解され、「Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−ＯＨ」又は「Ｘ'−(Ｃ
Ｈ2)n−Ｚ−ＣＨ2−ＯＨ」と「ＨＯＯＣ−Ａ'−Ｂ」
（−ＯＣ−Ａ'＝−Ａ）とに分解される。次に、アルカ
リ性緩衝液の作用でアルカリ性条件下にすることで、
「Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−ＯＨ」又は「Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−Ｃ
Ｈ2−ＯＨ」の「Ｚ−ＣＨ2」部分の結合が切られる。そ
うして、「Ｘ−Ｚ−Ｈ」又は「Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−
Ｈ」と「Ｈ−ＣＨＯ」が遊離し、この「Ｈ−ＣＨＯ」
（ホルムアルデヒド、ホルマリン）を検出する。
体試料に作用させると、まず、式中の「Ｏ−Ａ」部分の
エステル結合が、白血球のエステラーゼ活性により加水
分解され、「Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−ＯＨ」又は「Ｘ'−(Ｃ
Ｈ2)n−Ｚ−ＣＨ2−ＯＨ」と「ＨＯＯＣ−Ａ'−Ｂ」
（−ＯＣ−Ａ'＝−Ａ）とに分解される。次に、アルカ
リ性緩衝液の作用でアルカリ性条件下にすることで、
「Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−ＯＨ」又は「Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−Ｃ
Ｈ2−ＯＨ」の「Ｚ−ＣＨ2」部分の結合が切られる。そ
うして、「Ｘ−Ｚ−Ｈ」又は「Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−
Ｈ」と「Ｈ−ＣＨＯ」が遊離し、この「Ｈ−ＣＨＯ」
（ホルムアルデヒド、ホルマリン）を検出する。
【００１３】アルカリ性緩衝液としては、クラーク−ラ
ブス(Ｃlark−Ｌubs)緩衝液、マッキルベイン(Ｍcllvai
ne)緩衝液、セーレンセン(Ｓorensen)緩衝液、コルトフ
(Ｋolthoff)緩衝液などが例示できる。このアルカリ性
緩衝液は、白血球の酵素的反応や、エステラーゼ、プロ
テアーゼの活性を促進する働きもある。
ブス(Ｃlark−Ｌubs)緩衝液、マッキルベイン(Ｍcllvai
ne)緩衝液、セーレンセン(Ｓorensen)緩衝液、コルトフ
(Ｋolthoff)緩衝液などが例示できる。このアルカリ性
緩衝液は、白血球の酵素的反応や、エステラーゼ、プロ
テアーゼの活性を促進する働きもある。
【００１４】ホルマリンの検出は、様々な既知の方法で
行なえる。現在知られているホルマリンの検出方法とし
ては、エミッヒ（Ｅmich）法、ナッシュ（Ｎash）法、
グリオキシム法、エチレンジアミン法、ジメドン法、リ
ミニ（Ｒimini）法、卵白鉄反応法、ＡＯＡＣ法（クロ
モトープ法、Ｈ2Ｏ2法及びＫＣＮ法）、亜硫酸ナトリウ
ム法、ジニトロフェニルヒドラゾン重量法、ＭＢＴＨ
法、ハンツシュ（Ｈantzsch）反応法、ＤＡＢＡ蛍光
法、ＤＴＡＮ蛍光法、ＤＡＮ蛍光法、フクシン亜硫酸塩
法、４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−
１,２,４−トリアゾール法、ペンタシアノアミン鉄塩−
硫化水素法、プロピオンアルデヒド(３−フェニル−２
−キノキザリニル)ヒドラゾン法、アゾベンゼン−p−フ
ェニルヒドラジンスルホン酸法、２,３−ジメチル−２,
３−ビス(ヒドロキシアミノ)ブタン法、ヒドロキシアミ
ン塩酸塩試験法、p−フェニレンジアミンＨ2Ｏ2法、銀
鏡反応法、アンジェリ（Ａngeli）反応法、ネスラー試
薬法、テトラゾリウム塩試験法。感度の大小はあるもの
の、これらのいずれのホルマリン検出方法も、試料の状
態及び目的に応じて使用できる。
行なえる。現在知られているホルマリンの検出方法とし
ては、エミッヒ（Ｅmich）法、ナッシュ（Ｎash）法、
グリオキシム法、エチレンジアミン法、ジメドン法、リ
ミニ（Ｒimini）法、卵白鉄反応法、ＡＯＡＣ法（クロ
モトープ法、Ｈ2Ｏ2法及びＫＣＮ法）、亜硫酸ナトリウ
ム法、ジニトロフェニルヒドラゾン重量法、ＭＢＴＨ
法、ハンツシュ（Ｈantzsch）反応法、ＤＡＢＡ蛍光
法、ＤＴＡＮ蛍光法、ＤＡＮ蛍光法、フクシン亜硫酸塩
法、４−アミノ−３−ヒドラジノ−５−メルカプト−
１,２,４−トリアゾール法、ペンタシアノアミン鉄塩−
硫化水素法、プロピオンアルデヒド(３−フェニル−２
−キノキザリニル)ヒドラゾン法、アゾベンゼン−p−フ
ェニルヒドラジンスルホン酸法、２,３−ジメチル−２,
３−ビス(ヒドロキシアミノ)ブタン法、ヒドロキシアミ
ン塩酸塩試験法、p−フェニレンジアミンＨ2Ｏ2法、銀
鏡反応法、アンジェリ（Ａngeli）反応法、ネスラー試
薬法、テトラゾリウム塩試験法。感度の大小はあるもの
の、これらのいずれのホルマリン検出方法も、試料の状
態及び目的に応じて使用できる。
【００１５】
【実施例】以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明
するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではな
い。
するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではな
い。
【００１６】アミノ酸エステルの合成 実施例１ Ｎ−トシル−Ｌ−アラニンの合成 ：
【化１】
【００１７】Ｌ−アラニン１１．５gを１Ｎ水酸化ナト
リウム溶液２６０mlに溶解し、５℃以下に冷却した。溶
液を撹拌しながら、p−トルエンスルホニルクロリド２
５．０gをトルエン６０mlに溶解した溶液を、５℃以上
にならないように徐々に加え、室温下２０時間撹拌し
た。反応液を水層とトルエン層とに分離し、水層を冷却
しながら５Ｎ ＨＣlによりpＨ１．０にし、析出した白
色結晶を濾取し、水洗して乾燥した。
リウム溶液２６０mlに溶解し、５℃以下に冷却した。溶
液を撹拌しながら、p−トルエンスルホニルクロリド２
５．０gをトルエン６０mlに溶解した溶液を、５℃以上
にならないように徐々に加え、室温下２０時間撹拌し
た。反応液を水層とトルエン層とに分離し、水層を冷却
しながら５Ｎ ＨＣlによりpＨ１．０にし、析出した白
色結晶を濾取し、水洗して乾燥した。
【００１８】
【化２】
【００１９】Ｎ-トシル-Ｌ-アラニルオキシメチルエチ
ルエーテルの合成：
ルエーテルの合成：
【化３】
【００２０】ジメチルホルムアミド３０mlに、Ｎ−トシ
ル−Ｌ−アラニン２．５g及びトリエチルアミン１．１g
を加えて、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、ク
ロロメチルエチルエーテル１．０gを滴下し、室温下１
８時間撹拌した。反応液にクロロホルム１００mlを加
え、水、飽和重曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−
シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して目的
物を得た。
ル−Ｌ−アラニン２．５g及びトリエチルアミン１．１g
を加えて、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、ク
ロロメチルエチルエーテル１．０gを滴下し、室温下１
８時間撹拌した。反応液にクロロホルム１００mlを加
え、水、飽和重曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−
シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して目的
物を得た。
【００２１】ＩＲ(neat) ３６２２(ＮＨ)、１７４４(Ｃ
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3):１．７１(t、ＣＨ2−ＣＨ3 )、
１．４０(d、ＣＨＣＨ3)２．４０(s、トシル基のＭe)、
３．５５(q、ＣＨ 2ＣＨ3)、４．０１(q、ＣＨ−Ｍe)、
５．１５(d、ＣＨ2)、５．６５(d、ＣＨ2)、７．２８、
７．３０、７．７４、７．７６(Ｐh)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１４．９(ＣＨ 2ＣＨ3)、１９．７(ＣＨ
−ＣＨ3 )、２１．５(トシル基のＭe)、５１．５(ＣＨ−
Ｍe)、６６．２(ＣＨ2ＣＨ3)、９０．２(ＣＨ2)、１２
７．２、１２９．７、１３６．９、１４３．６、(Ｐ
h)、１７１．９(Ｃ＝Ｏ)．
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3):１．７１(t、ＣＨ2−ＣＨ3 )、
１．４０(d、ＣＨＣＨ3)２．４０(s、トシル基のＭe)、
３．５５(q、ＣＨ 2ＣＨ3)、４．０１(q、ＣＨ−Ｍe)、
５．１５(d、ＣＨ2)、５．６５(d、ＣＨ2)、７．２８、
７．３０、７．７４、７．７６(Ｐh)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１４．９(ＣＨ 2ＣＨ3)、１９．７(ＣＨ
−ＣＨ3 )、２１．５(トシル基のＭe)、５１．５(ＣＨ−
Ｍe)、６６．２(ＣＨ2ＣＨ3)、９０．２(ＣＨ2)、１２
７．２、１２９．７、１３６．９、１４３．６、(Ｐ
h)、１７１．９(Ｃ＝Ｏ)．
【００２２】
【化４】
【００２３】実施例２ Ｎ-トシル-Ｌ-アラニルオキシメチルメチルスルフィド
の合成 ：
の合成 ：
【化５】
【００２４】ジメチルホルムアミド３０ｍｌに、Ｎ−ト
シル−Ｌ−アラニン２．５g及びトリエチルアミン１．
１gを加え、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、
クロロメチルメチルスルフィド１．０gを滴下し、室温
下１８時間撹拌した。反応液にクロロホルム１００mlを
加え、水、飽和重曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル
−シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して目
的物を得た。融点１５．２〜１５．８℃（常温で液
体）。
シル−Ｌ−アラニン２．５g及びトリエチルアミン１．
１gを加え、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、
クロロメチルメチルスルフィド１．０gを滴下し、室温
下１８時間撹拌した。反応液にクロロホルム１００mlを
加え、水、飽和重曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、
無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル
−シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して目
的物を得た。融点１５．２〜１５．８℃（常温で液
体）。
【００２５】
【化６】
【００２６】実施例３ Ｎ−トシル-Ｌ-アラニルオキシメチルフェニルスルフィ
ドの合成 ：
ドの合成 ：
【化７】
【００２７】ジメチルホルムアミド３０ｍｌに、Ｎ−ト
シル−Ｌ−アラニン２．５g及びトリエチルアミン１．
１gを加え、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、ク
ロロメチルメチルスルフィド１．６gを滴下し、室温下
１８時間撹拌した。反応液にクロロホルム１００mlを加
え、水、飽和重曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−
シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して目的
物を得た。
シル−Ｌ−アラニン２．５g及びトリエチルアミン１．
１gを加え、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、ク
ロロメチルメチルスルフィド１．６gを滴下し、室温下
１８時間撹拌した。反応液にクロロホルム１００mlを加
え、水、飽和重曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無
水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−
シリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製して目的
物を得た。
【００２８】ＩＲ(neat) ３２８０(ＮＨ)、１８０６(Ｃ
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)：１．５５(d、ＣＨ−ＣＨ3 )、
２．４５(s、トシル基のＭe)、３．９９(q、ＣＨ−Ｍ
e)、５．２７(d、ＣＨ2)、５．３６(d、ＣＨ2)、７．２
２−７．８０(Ｐh、m、９Ｈ)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１６．８(ＣＨ−ＣＨ3 )、２１．７(トシ
ル基のＭe)、５３．０(ＣＨ−Ｍe)、７８．４(ＣＨ2)、
１２７．７、１２９．０、１２９．１、１２９．７、１
３０．５、１３１．５、１３２．５、１４５．５(Ｐh、
トシル)、１７２．３(Ｃ＝Ｏ）．
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)：１．５５(d、ＣＨ−ＣＨ3 )、
２．４５(s、トシル基のＭe)、３．９９(q、ＣＨ−Ｍ
e)、５．２７(d、ＣＨ2)、５．３６(d、ＣＨ2)、７．２
２−７．８０(Ｐh、m、９Ｈ)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１６．８(ＣＨ−ＣＨ3 )、２１．７(トシ
ル基のＭe)、５３．０(ＣＨ−Ｍe)、７８．４(ＣＨ2)、
１２７．７、１２９．０、１２９．１、１２９．７、１
３０．５、１３１．５、１３２．５、１４５．５(Ｐh、
トシル)、１７２．３(Ｃ＝Ｏ）．
【００２９】
【化８】
【００３０】実施例４ Ｎ−トシル-Ｌ-アラニルオキシメチルベンジルエーテル
の合成 ：
の合成 ：
【化９】 ジメチルホルムアミド３０mlに、Ｎ−トシル−Ｌ−アラ
ニン２．５g及びトリエチルアミン１．１gを加え、３０
分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、クロロメチルベン
ジルエーテル１．６gを滴下し、室温下１８時間撹拌し
た。反応液にクロロホルム１００mlを加え、水、飽和重
曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィにより精製して目的物を得た。
ニン２．５g及びトリエチルアミン１．１gを加え、３０
分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、クロロメチルベン
ジルエーテル１．６gを滴下し、室温下１８時間撹拌し
た。反応液にクロロホルム１００mlを加え、水、飽和重
曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィにより精製して目的物を得た。
【００３１】ＩＲ(neat) ３５５４(ＮＨ)、１８０２(Ｃ
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)：１．３５(d、ＣＨ−ＣＨ3 )、
２．３４(s、トシル基のＭe)、４．００(q、ＣＨ−Ｍ
e)、４．５５(ＣＨ2)、５．２０(ＣＨ2)、７．２４−
７．７６(Ｐh、m、９Ｈ)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１９．６(ＣＨ−ＣＨ3 )、２１．５(トシ
ル基のＭe)、５２．９(ＣＨ−Ｍe)、７２．０、８９．
４(ＣＨ2)、１２７．２、１２７．６、１２７．８、１
２８．１、１２８．５、１２９．７、１３０．５、１３
６．５(Ｐh、トシル)、１７１．８(Ｃ＝Ｏ)．
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)：１．３５(d、ＣＨ−ＣＨ3 )、
２．３４(s、トシル基のＭe)、４．００(q、ＣＨ−Ｍ
e)、４．５５(ＣＨ2)、５．２０(ＣＨ2)、７．２４−
７．７６(Ｐh、m、９Ｈ)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１９．６(ＣＨ−ＣＨ3 )、２１．５(トシ
ル基のＭe)、５２．９(ＣＨ−Ｍe)、７２．０、８９．
４(ＣＨ2)、１２７．２、１２７．６、１２７．８、１
２８．１、１２８．５、１２９．７、１３０．５、１３
６．５(Ｐh、トシル)、１７１．８(Ｃ＝Ｏ)．
【００３２】
【化１０】
【００３３】実施例５ Ｎ−トシル−Ｌ−バリンの合成 ：
【化１１】 Ｌ−バリン１５．２gを１Ｎ水酸化ナトリウム溶液２６
０mlに溶解し、５℃以下に冷却した。溶液を撹拌しなが
ら、p−トルエンスルホンニルクロリド２５．０gをトル
エン６０mlに溶解した溶液を、５℃以上にならないよう
に徐々に加え、室温下２０時間撹拌した。反応液を、水
層とトルエン層とに分離し、水層を冷却しながら５Ｎ
ＨＣlによりpＨ１．０にし、析出した白色結晶を濾取
し、水洗して乾燥した。
０mlに溶解し、５℃以下に冷却した。溶液を撹拌しなが
ら、p−トルエンスルホンニルクロリド２５．０gをトル
エン６０mlに溶解した溶液を、５℃以上にならないよう
に徐々に加え、室温下２０時間撹拌した。反応液を、水
層とトルエン層とに分離し、水層を冷却しながら５Ｎ
ＨＣlによりpＨ１．０にし、析出した白色結晶を濾取
し、水洗して乾燥した。
【００３４】
【化１２】
【００３５】Ｎ-トシル-Ｌ-バリルオキシメチルベンジ
ルエーテルの合成：
ルエーテルの合成：
【化１３】 ジメチルホルムアミド３０mlに、Ｎ−トシル−Ｌ−バリ
ン２．７g及びトリエチルアミン１．１gを加え、３０分
撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、クロロメチルベンジ
ルエーテル１．６gを滴下し、室温下１８時間撹拌し
た。反応液にクロロホルム１００mlを加え、水、飽和重
曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィにより精製して目的物を得た。融点
７３．８〜７５．２℃。
ン２．７g及びトリエチルアミン１．１gを加え、３０分
撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、クロロメチルベンジ
ルエーテル１．６gを滴下し、室温下１８時間撹拌し
た。反応液にクロロホルム１００mlを加え、水、飽和重
曹水、飽和食塩水により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィにより精製して目的物を得た。融点
７３．８〜７５．２℃。
【００３６】
【化１４】
【００３７】実施例６ Ｎ−トシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−アラニンの合成 ：
【化１５】
【００３８】Ｌ−ロイシン−Ｌ−アラニン２０．２gを
１Ｎ水酸化ナトリウム溶液２６０mlに溶解し、５℃以下
に冷却した。溶液を撹拌しながら、p−トルエンスルホ
ンニルクロリド２５．０gをトルエン６０mlに溶解した
溶液を、５℃以上にならないように徐々に加え、室温下
２０時間撹拌した。反応液を、水層とトルエン層とに分
離し、水層を冷却しながら５Ｎ ＨＣlによりpＨ１．０
にし、析出した白色結晶を濾取し、水洗して乾燥した。
１Ｎ水酸化ナトリウム溶液２６０mlに溶解し、５℃以下
に冷却した。溶液を撹拌しながら、p−トルエンスルホ
ンニルクロリド２５．０gをトルエン６０mlに溶解した
溶液を、５℃以上にならないように徐々に加え、室温下
２０時間撹拌した。反応液を、水層とトルエン層とに分
離し、水層を冷却しながら５Ｎ ＨＣlによりpＨ１．０
にし、析出した白色結晶を濾取し、水洗して乾燥した。
【００３９】
【化１６】
【００４０】Ｎ-トシル-Ｌ-ロイシル-Ｌ-アラニルオキ
シメチルベンジルエーテルの合成：
シメチルベンジルエーテルの合成：
【化１７】 ジメチルホルムアミド３０mlに、Ｎ−トシル−Ｌ−ロイ
シル−Ｌ−アラニン３．２g及びトリエチルアミン１．
１gを加え、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、
クロロメチルベンジルエーテル１．６gを滴下し、室温
下１８時間撹拌した。 反応液にクロロホルム１００mlを加え、水、飽和重曹
水、飽和食塩水により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−シリカゲルカラム
クロマトグラフィにより精製して目的物を得た。融点７
４．５〜７５．８℃。
シル−Ｌ−アラニン３．２g及びトリエチルアミン１．
１gを加え、３０分撹拌した後、氷冷し、窒素気流下、
クロロメチルベンジルエーテル１．６gを滴下し、室温
下１８時間撹拌した。 反応液にクロロホルム１００mlを加え、水、飽和重曹
水、飽和食塩水により順次洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥し、減圧濃縮し、酢酸エチル−シリカゲルカラム
クロマトグラフィにより精製して目的物を得た。融点７
４．５〜７５．８℃。
【００４１】
【化１８】
【００４２】実施例７ クロロメタンスルホン酸ナトリウムの合成 ：二口フラス
コにメチレンクロライド１９．４g、エタノール８８c
c、水３２ccを加え、攪拌下、還流加熱した。水３２cc
に亜硫酸ナトリウム８．８gを溶解した液を、シリンジ
にて注入した。２４時間反応後、反応液を、エバポレー
タにて濃縮し、白色結晶を得た。さらに、エタノール５
００ccを加え、２時間攪拌下、還流加熱した。熱時瀘過
し、瀘液をエバポレータにて濃縮し、白色結晶クロロメ
タンスルホン酸ナトリウム（２．５g）を得た。
コにメチレンクロライド１９．４g、エタノール８８c
c、水３２ccを加え、攪拌下、還流加熱した。水３２cc
に亜硫酸ナトリウム８．８gを溶解した液を、シリンジ
にて注入した。２４時間反応後、反応液を、エバポレー
タにて濃縮し、白色結晶を得た。さらに、エタノール５
００ccを加え、２時間攪拌下、還流加熱した。熱時瀘過
し、瀘液をエバポレータにて濃縮し、白色結晶クロロメ
タンスルホン酸ナトリウム（２．５g）を得た。
【００４３】フェノキシメタンスルホン酸ナトリウムの
合成：ナスフラスコに、フェノール４７０mg、ＮaＯＨ
４００mg、水４００mgを加え撹拌する。その後クロロメ
タンスルホン酸ナトリウム８７０mgを加え、２時間２０
０度にて還流加熱した。反応後、ベンゼンを加え濃縮し
白色結晶を得た。真空ポンプにて完全に水分を除去し、
フェノキシメタンスルホン酸ナトリウム（１１００mg）
を得た。
合成：ナスフラスコに、フェノール４７０mg、ＮaＯＨ
４００mg、水４００mgを加え撹拌する。その後クロロメ
タンスルホン酸ナトリウム８７０mgを加え、２時間２０
０度にて還流加熱した。反応後、ベンゼンを加え濃縮し
白色結晶を得た。真空ポンプにて完全に水分を除去し、
フェノキシメタンスルホン酸ナトリウム（１１００mg）
を得た。
【００４４】フェノキシメチルクロリドの合成：ナスフ
ラスコに、フェノキシメタンスルホン酸ナトリウム２５
０mg、ＰＣl5４９５mgを加え撹拌した。１時間室温下反
応後、ＰＯＣl3をエバポレートにて除去し、さらに、真
空ポンプにて完全にＰＯＣl3を除去した。乾燥メチルク
ロリトリを加え、結晶を瀘去し、瀘液を減圧下、濃縮
し、フェノキシメチルクロリド（１８０mg）を得た。
ラスコに、フェノキシメタンスルホン酸ナトリウム２５
０mg、ＰＣl5４９５mgを加え撹拌した。１時間室温下反
応後、ＰＯＣl3をエバポレートにて除去し、さらに、真
空ポンプにて完全にＰＯＣl3を除去した。乾燥メチルク
ロリトリを加え、結晶を瀘去し、瀘液を減圧下、濃縮
し、フェノキシメチルクロリド（１８０mg）を得た。
【００４５】Ｎ−トシル−Ｌ−アラニン（４８６mg）の
ジメチルホルムアミド溶液に、アルゴン気流下、攪拌
下、氷冷下にて、６０％油性水素下ナトリウム（１２４
mg）を加えた。３０分攪拌後、氷冷下、フェノルキシメ
チルクロリド（２８４mg）を滴下し室温下１８時間撹拌
した。反応液に酢酸を加え中和後、メチルクロリトリに
て希釈後、水、飽和重曹水、飽和食塩水にて洗い、硫酸
マグネシウムで乾燥した。 メチルクロリトリを減圧濃縮し、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィ（酢酸エチル）より精製して下記化合物
を得た。
ジメチルホルムアミド溶液に、アルゴン気流下、攪拌
下、氷冷下にて、６０％油性水素下ナトリウム（１２４
mg）を加えた。３０分攪拌後、氷冷下、フェノルキシメ
チルクロリド（２８４mg）を滴下し室温下１８時間撹拌
した。反応液に酢酸を加え中和後、メチルクロリトリに
て希釈後、水、飽和重曹水、飽和食塩水にて洗い、硫酸
マグネシウムで乾燥した。 メチルクロリトリを減圧濃縮し、シリカゲルカラムク
ロマトグラフィ（酢酸エチル）より精製して下記化合物
を得た。
【００４６】
【化１９】
【００４７】ＩＲ(neat) ３２２８(ＮＨ)、１８０１(Ｃ
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)：１．３５(d、ＣＨ−ＣＨ3 )、
２．３７(s、トシル基のＭe)、４．０３(q、ＣＨ−Ｍ
e)、５．６０(dd、ＣＨ2)、６．９１−７．９３(Ｐh、
m、９Ｈ)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１９．６(ＣＨ−ＣＨ3)、２１．５(トシ
ル基のＭe)、５１．４(ＣＨ−Ｍe)、８６．６(ＣＨ2)、
１２３．１、１２７．０、１２９．３、１２９．６、１
３４．５、１４６．１、１５６．４、１６５．４(Ｐh、
tosyl)、１７１．３(Ｃ＝Ｏ)．
Ｏ)1 Ｈ−ＮＭＲ(ＣＤＣl3)：１．３５(d、ＣＨ−ＣＨ3 )、
２．３７(s、トシル基のＭe)、４．０３(q、ＣＨ−Ｍ
e)、５．６０(dd、ＣＨ2)、６．９１−７．９３(Ｐh、
m、９Ｈ)．13 Ｃ−ＮＭＲ：１９．６(ＣＨ−ＣＨ3)、２１．５(トシ
ル基のＭe)、５１．４(ＣＨ−Ｍe)、８６．６(ＣＨ2)、
１２３．１、１２７．０、１２９．３、１２９．６、１
３４．５、１４６．１、１５６．４、１６５．４(Ｐh、
tosyl)、１７１．３(Ｃ＝Ｏ)．
【００４８】実施例８ ホリマリン検出用試薬の調製 ホルマリン検出方法としてフクシン亜硫酸塩法を採用す
るホルマリン検出試薬用試薬（以下、「フクシン試薬」
と言う。）を以下の通り調製した。塩基性フクシン０．
２gを蒸留水１５０mlに加熱溶解し、冷却後、無水亜硫
酸ナトリウム２．０gを蒸留水２０mlに溶解したものを
加え、１０分間撹拌した後、濃塩酸２．０mlを加えて、
更に３０分間撹拌した。この溶液に活性炭を加えて瀘過
し、透明なフクシン亜硫酸塩水溶液を得た。この溶液の
pＨを水酸化ナトリウムで７．６に調整し、全量を水に
より２００mlとした。
るホルマリン検出試薬用試薬（以下、「フクシン試薬」
と言う。）を以下の通り調製した。塩基性フクシン０．
２gを蒸留水１５０mlに加熱溶解し、冷却後、無水亜硫
酸ナトリウム２．０gを蒸留水２０mlに溶解したものを
加え、１０分間撹拌した後、濃塩酸２．０mlを加えて、
更に３０分間撹拌した。この溶液に活性炭を加えて瀘過
し、透明なフクシン亜硫酸塩水溶液を得た。この溶液の
pＨを水酸化ナトリウムで７．６に調整し、全量を水に
より２００mlとした。
【００４９】アルカリ性緩衝液の調製 Ｎa2Ｂ4Ｏ7・１０Ｈ2Ｏ ０．９９７gを１００mlの蒸留
水に溶解したものに、０．１Ｎ ＨＣl４７．８mlを加え
て、全量を水により２００mlとした。pＨは７．６であ
った。この緩衝液を、以下「ボレート緩衝液」と言う。
水に溶解したものに、０．１Ｎ ＨＣl４７．８mlを加え
て、全量を水により２００mlとした。pＨは７．６であ
った。この緩衝液を、以下「ボレート緩衝液」と言う。
【００５０】化合物溶液の調製（以下、「基質溶液」と
言う。) 実施例１〜６で調製した各化合物１０μモルをメタノー
ル１．０mlに溶かし、これをボレート緩衝液２mlに溶か
し、更にボレート緩衝液を加えて正確に１０mlにした。
言う。) 実施例１〜６で調製した各化合物１０μモルをメタノー
ル１．０mlに溶かし、これをボレート緩衝液２mlに溶か
し、更にボレート緩衝液を加えて正確に１０mlにした。
【００５１】白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼ溶
液の調製（以下、「試料溶液」と言う。) ・白血球溶液：ボレート緩衝液中白血球２００個／μl ・エステラーゼ溶液：ボレート緩衝液中ズブチリシン３
０mg／l ・プロテアーゼ溶液：ボレート緩衝液中プロティナーゼ
Ｋ３０mg／l
液の調製（以下、「試料溶液」と言う。) ・白血球溶液：ボレート緩衝液中白血球２００個／μl ・エステラーゼ溶液：ボレート緩衝液中ズブチリシン３
０mg／l ・プロテアーゼ溶液：ボレート緩衝液中プロティナーゼ
Ｋ３０mg／l
【００５２】対照用ホルマリン溶液の調製 ホルマリン濃度が、ボレート緩衝液中１００ppmになる
様に調製した。
様に調製した。
【００５３】活性測定方法 試験管にボレート緩衝液１．２６mlと基質溶液０．７０
mlを入れ、十分に 混合し、５分間３７℃の恒温槽に入
れた。ここへ、試料溶液０．０２mlを加えて十分に混合
し、３分後フクシン溶液０．０２mlを加えて撹拌し、３
０秒後に 色相を比較した。対照試験は、上記試料溶液
の代わりに対照用ホルマリン溶液０．０２mlを加える以
外は、同様の手順で行った。結果を表１に示す
mlを入れ、十分に 混合し、５分間３７℃の恒温槽に入
れた。ここへ、試料溶液０．０２mlを加えて十分に混合
し、３分後フクシン溶液０．０２mlを加えて撹拌し、３
０秒後に 色相を比較した。対照試験は、上記試料溶液
の代わりに対照用ホルマリン溶液０．０２mlを加える以
外は、同様の手順で行った。結果を表１に示す
【００５４】
【表１】
フロントページの続き (72)発明者 阿知波 一雄 静岡県静岡市上沓谷町15−５
Claims (3)
- 【請求項１】 一般式: Ｘ−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ （Ｉ） または Ｘ'−(ＣＨ2)n−Ｚ−ＣＨ2−Ｏ−Ａ−Ｂ （II） ［式中、Ｚは酸素原子又は硫黄原子、Ｘは脂肪族炭化水
素基、Ｘ'は置換又は不置換の芳香族基又は複素環基若
しくは炭化珪素基、Ａはアミノ酸又はペプチド化合物か
ら誘導される基、Ｂは基Ａ中のアミノ基の保護基、ｎは
０〜８の整数を示す。］で表されるアミノ酸エステル。 - 【請求項２】 基Ｘ'の置換基が、炭素数１〜４の直鎖
又は分岐アルキル基、アルコキシ基、フェニル基、ニト
ロ基、スルホン基、Ｎ−アシルアミノ基又はＮ,Ｎ−ジ
アルキルアミノ基である請求項１に記載のアミノ酸エス
テル。 - 【請求項３】 pＨ７．０〜８．５のアルカリ性緩衝液
の存在下、白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼを含
む液体試料に、請求項１又は２に記載のアミノ酸エステ
ルを作用させ、発生したホルムアルデヒドを検出するこ
とを特徴とする白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼ
の検出方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6214040A JPH0873422A (ja) | 1994-09-07 | 1994-09-07 | 新規アミノ酸エステルおよび白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6214040A JPH0873422A (ja) | 1994-09-07 | 1994-09-07 | 新規アミノ酸エステルおよび白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0873422A true JPH0873422A (ja) | 1996-03-19 |
Family
ID=16649288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6214040A Pending JPH0873422A (ja) | 1994-09-07 | 1994-09-07 | 新規アミノ酸エステルおよび白血球、エステラーゼ又はプロテアーゼの検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0873422A (ja) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999006433A1 (en) * | 1997-07-31 | 1999-02-11 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4 |
| WO1999006437A1 (en) * | 1997-07-31 | 1999-02-11 | Elan Pharmaceuticals Inc. | Sulfonylated dipeptide compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4 |
| WO1999006432A1 (en) * | 1997-07-31 | 1999-02-11 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Dipeptide and related compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by vla-4 |
| US6291453B1 (en) | 1997-07-31 | 2001-09-18 | Athena Neurosciences, Inc. | 4-amino-phenylalanine type compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
| US6362341B1 (en) | 1997-07-31 | 2002-03-26 | Athena Neurosciences, Inc. | Benzyl compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
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| US6423688B1 (en) | 1997-07-31 | 2002-07-23 | Athena Neurosciences, Inc. | Dipeptide and related compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
| US6489300B1 (en) | 1997-07-31 | 2002-12-03 | Eugene D. Thorsett | Carbamyloxy compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
| US6492421B1 (en) | 1997-07-31 | 2002-12-10 | Athena Neurosciences, Inc. | Substituted phenylalanine type compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
| US6559127B1 (en) | 1997-07-31 | 2003-05-06 | Athena Neurosciences, Inc. | Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
| US6583139B1 (en) | 1997-07-31 | 2003-06-24 | Eugene D. Thorsett | Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
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| US7030114B1 (en) | 1997-07-31 | 2006-04-18 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Compounds which inhibit leukocyte adhesion mediated by VLA-4 |
-
1994
- 1994-09-07 JP JP6214040A patent/JPH0873422A/ja active Pending
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