DK161197B

DK161197B - 1alfa-hydroxy-2-substituerede vitamin d3 derivater samt fremgangsmaade til fremstilling af disse

Info

Publication number: DK161197B
Application number: DK561485A
Authority: DK
Inventors: Katsuhito Miyamoto; Noboru Kubodera; Kiyoshige Ochi; Isao Matsunaga; Eigoro Murayama
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1984-12-05
Filing date: 1985-12-04
Publication date: 1991-06-10
Also published as: ATE41924T1; JPS61267549A; CA1330806C; IL77122A; JPH0623185B2; DK161197C; EP0184206A3; US4666634A; CN85108857A; DE3569238D1; DK561485A; KR940002981B1; DK561485D0; EP0184206A2; IL77122A0; CN1008368B; KR860004850A; EP0184206B1

Description

• · »

DK 161197B

t* - —-

Opfindelsen angår hidtil ukendte 1 a-hydroxy-2-substitue-rede vitamin D3 derivater, der har calcium-kontrollerende aktivitet og evnen til at inducere differentiering i tumorceller, og som er anvendelige både som anti-tumormidler og som medicin ved 5 behandling af sygdomme forårsaget af forstyrrelser i calcium-stofskiftet, såsom osteoporosis og osteomalacia, samt en fremgangsmåde til fremstilling af disse.

Mange vitamin Dø-forbindelser er allerede kendt, de klassificeres generelt som naturligt forekommende 10 vitamin D3 metaboliter (f.eks.25-hydroxy vitamin D3, la,25-dihydroxy vitamin D3 og la, 24,25-trihydroxy vitamin D3), endvidere deres syntetiske analoge (f.eks. la-hydroxy vitamin D3, la,24-dihydroxy vitamin D3, og en række fluorinerede vitamin Dg-forbindelser). Blandt 15 disse kendte vitamin D3-forbindelser har det naturligt forekommende la,25-dihydroxy vitamin D3 og en syntetisk analog, hvori sidekæden på 17-stillingen i vitamin D3 er fluorineret såsom 24,24-difluor-la,25-dihydroxy vitamin D3, en kraftig calcium-kontrollerende 20 aktivitet og er anvendelige ved behandling af forskellige knoglesygdomme.

US patentskrift nr. 4.011.250 beskriver forbindelsen 1a,2a-dihydroxy vitamin D^, og det nævnes, at forsøg med unge rotter har bekræftet, at denne forbindelse 25 opviser tydelige D-vitaminaktiviteter.

WO offentliggørelsesskrift nr. 81/03023 beskriver forbindelsen 1a-hydroxy-2$-fluor vitamin D^. På baggrund af en række in vivo forsøg med rotter hævdes det, at 30 denne forbindelse opviser en tydelig D-vitaminagtig aktivitet, tilsyneladende sammenlignelig med aktiviteten af 1a-hydroxy vitamin D^.

WO offentliggørelsesskrift nr. 82/02893 beskriver forbindelsen 1 α, 25-dihydroxy-28-fluor vitamin D3 samt 1-, 3- og 35 25-acylater deraf. Det hævdes, med baggrund i in vivo rotteforsøg over tarmcalciumtransport og mobilisering af calcium fra knoglerne, at denne forbindelse i denne henseende er ligeså kraftigt virkende som 1a,25-dihy-

DK 161197 B

2 droxy vitamin D3.

Under studiet af forskellige vitamin D3 derivater har opfinderne fundet, at visse vitamin D3 derivater med en substituent i 23-stillingen, med hensyn til 5 den calcium-kontrollerende aktivitet jln vivo udviser en aktivitet, der er større end aktiviteten af den kendte forbindelse 1a,2α-dihydroxy-vitamin .

Derivaterne ifølge opfindelsen er ejendommelige ved følgende formel (I}: 10 F" ά

HO-V^OH

OR, 20 hvori R, er en hydroxysubstitueret alkylgruppe med 1-7 carbon-atomer; og R3 er hydrogen eller en hydroxygruppe.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig 25 ved det i krav 4's kendetegnende del angivne.

De ία-hydroxy vitamin D3-forbindelser, der beskrives ved formel (I), er hidtil ukendte og kan syntetiseres ved følgende fremgangsmåder: 1) et ringdannet additionsprodukt af 1,5,7-chole-30 statrien-3B-ol og- 4-phenyl-l,2,4-triazolin-3,5-dion fremstilles af cholesterol eller 25-hydroxy-cholesterol ifølge beskrivelsen i Unexamined Published Japanese Patent Application Nos.84555/1975 og 84560/1975; 2) Den ringdannede additionsforbindelse omdannes til 35 la, 2a-epoxid (forbindelsen), der besidder nedennævnte formel:

DK 161197 B

3

»O*. I I

i#XLAvJ-1 di) 5 o -‘»w o*^-Nv

Ph 10 (hvor R2 er et hydrogenatom eller en hydroxy gruppe; og Ph er en phenylgruppe;

3) Epoxidet (forbindelse II) lader man reagere med et nucleophilt reagens med formlen; R^OH

15 (hvor Rj er defineret ovenfor) i et inert solvent i nærværelse af en sur katalysator, som p-toluensulfonsyre, hvorved en forbindelse med formel (13¾ tilvejebringes:

20 ^ X

OH

- (III) H0 25 L— 'Ph (hvor R^, R2 og Ph er defineret ovenfor); 4) Man lader forbindelse (III) reagere ifølge frem-30 gangsmåde vist i Unexamined Published Japanese Patent

Application No. 84555/1975, denne fremgangsmåde består af eliminering af triazolin-3,5-dion-ringen, strålebehandling og isomerisering, hvorved en forbindelse med formel I tilvejebringes.

Forbindelse I - farmakologisk virkning;

Man fandt, at forbindelserne ifølge opfindelsen havde calcium-kontrollerende aktivitet og evnen til at 35

DK 161197 B

4 inducere differentiering i tumor-celler ved følgende eksperimenter.

(A) Calcium-kontrollerende aktivitet, i) Nyligt fra vænnede Sprague Dawley lianrotter, der 5 vejer 45-50 g, fodredes med diæt 11 og ionbyttet vand under en glødelampe i 3 uger. Forbindelse ifølge opfindelsen (som fremstillet i eks.4) og som kontrol la, 25-dihydroxy vitamin D3 (la,25-(OH)2D3), begge opløst i ethanol, blev tilført dyrene intravenøst. Bagefter lod 10 man dyrene sulte i 24 timer og udtog blodprøver fra hjertet af alle r'otterne. Fra hver blodprøve isolerer man plasma og indholdet af calcium og uorganisk fosfor blev målt ved OCPC-metoden beskrevet i Am. J.Clin.

Path., 45, 290 (1966) og Biochem. J., 65, 709 (1957).

15 Resultaterne vises i tabel 1.

Tabel 1

Calcium .Uorganisk 20 Forbindelse Dosis i plasma P i plasma (mg/dl) (mg/dl)

EtOH alenié 0,5 ml/kg 4,796±0,207 9,403±1,517 _ __ ***

Forbindelse 6'25 W/0,5 Bl/kg 5,935+0,323 8,53310,687 ifølge eks. 4 -—--- irieit 25 12,5 yg/0,5 ml/kg 6r058±0f551 8,503±1,387 1,25 Ug/0,5 ml/kg 5f463±of29ø 7,561±0,477 la, 25- (OH) 2_d3----- - 2f5 ug/0,5 ml/kg g 50g+o,324 9r066±1r906 30 ***. p<0,001, **: p<0,01, *: p<0,05 På lignende måde vurderede..man to yderligere kontrolforbindelser, nemlig 1a,2a-dihydroxy vitamin og 1α-hydroxy vitamin D2. Resultatet ses i nedenstående 35 Tabel 2.

_Tabel 2__ 5

DK 161197B

Calcium i

Forbindelse Dosis plasma t-test ___(mg/dl)__ 5

EtOH alene 0,5 ml/kg 4,968 ±0,143 1a,2a-(OH)2-D3 125rø43,5n0/1«g 5,764 ± 0,382 p < 0,01 1a-(OH)-D3 6,25 ijgÆ,5 ml/kg 5,728 ± 0,512 p < 0,001 10 ii) Samme rotter som beskrevet i i) blev fodret på tilsvarende måde.

To forbindelser ifølge opfindelsen (som frem-15 stillet i eksemplerne 4) og 6), og to kontrol forbindelser, la-hydroxy vitamin D3 (I01-OH-D3) og 25-hydroxy vitamin D3 (25-OH-D3), blev indgivet rotterne oralt 5 dage i træk efter opløsning i et triglycerid af en ali-phatisk syre af middel kædelængde (MCT).

20 Bagefter lod man rotterne sulte i 24 timer, og man udtog blodprøver fra hjertet af hver rotte. Indholdet af calcium og uorganisk fosfor i plasmaet blev målt på samme måde som i i). Resultaterne vises i tabel 3.

25

Tabel 3

Calcium Uorganisk

Forbindelse Dosis i plasma P i plasma 30 (mg/dl) (mg/dl) MCT alene 1 ml/kg 4,263±0,235 7,488±0,933

Forbindelse 6,25 yg/ml/kg 5,552±0,912* 8,713±1,648 ifølge eks.4

Forbindelse 35 ifølge eks.6 6,25 yg/ml/kg 8,093±0,648*** 7,040±0,595 lct-OH-D3 6,25 yg/ml/kg 4,798±0,582 7,776+0,682 25-OH-D3 6,25 yg/ml/kg 5,682±0,364*** 9,115±0,647** ***: p<0,001, **: p<0,01, *: p<0,05

DK 161197 B

6

Der ses, at forbindelserne ifølge eksemplerne 4 og 6 har kraftigere calciumkontrollerende virkning end Ία-OH-D-j og en med 25-OH-D^ sammenlignelig virkning.

Endvidere ses det af tabel 2 sammenholdt med tabel 1, 5 at forbindelsen ifølge US patentskrift nr. 4.011.250 kun er ca. 1/20 så kraftigt virkende som forbindelsen ifølge Eksempel 4.

(B) Inducering af differentiering 10 i) Morfologiske ændringer

Humane promyelocytiske leukæmi-celler (HL-60 celle-linie) blev dyrket i et RPMI-1640 medium tilsat 10% varme-inaktiveret kalvefosterserum under 5% C02/95% luft ved 37°C. Til dette medium satte man ethanolop-15 løsninger af forbindelsen ifølge Eksenpel 4 og son kontrol la-hydroxy vitamin D3 i en mængde, så ethanol-koncen-trationen i det flydende medium var 0,1%. Efter tilsætningen af forbindelsen ifølge eksempel 4 og kontrolforbindelsen fandt man, at HL-60-cellerne differenti-20 erede til macrophag-agtige celler i løbet af 3 dage ved hjælp af morphologisk undersøgelse. Man talte cellerne for at finde procenten af HL-60 celler, der undergik differentiering.

Mindst 60% af de HL-60 celler, der var behandlet 25 med forbindelsen ifølge eksempel 4 i koncentrationer af størrelsesorden 10“6 - 10“7 m differentierede til macrophager, hvilket tyder på, at nævnte forbindelse har en evne til at inducere differentiering, der kan sammenlignes med kontrolforbindelsen la-hydroxy vitamin D3.

O Λ ii) Inducering af differentiering i NBT-reducerede celler.

Forbindelsen, fremstillet ifølge eksempel 4, blev sat til HL-60 celler over en periode på 4-5 dage. Derefter tilsatte man til de behandlede celler TPA (12-0-

O C

tetradecanoylphorbol-13-acetat) og NBT (nitro-blå te-trazolium), så slutkoncentrationerne var henholdsvis 100 ng/mg og 0,1%. Efter 20 minutter ved 30°C bestemte man procentindholdet af HL-60-celler, der differentie-

DK 161197 B

7 rede til macrophager og reducerede NBT under formazan-dannelse. Både forbindelsen ifølge eksempel 4 og kontrol la-hydroxy vitamin D3 udviste en evne til at inducere differentiering på over 90% ved en koncentration på 5 10~6 M.

De følgende eksempler 4, 6, 7, 10, 13 og 14 angår forbindelser ifølge opfindelsen.

DK 161197B

8

Eksempel 1

Fremstilling af la-hydroxy-2 β-methoxy vitamin D3.

a) Fremstilling af en Diels-Alder additionsforbindelse af 2f5-methoxy-5,7-cholestadien-la, 3(3-diol og 5 4-pbenyl-l/2,4-triazolin-3/5-dion:

Man opløste 500 mg (0,871 mmol) af la,2a-epoxy forbindelse 1 (R2=H) i 4 ml tør tetrahydrofuran. Til denne opløsning satte man 10 ml methanol og 35 mg (0,184 mmol) p-toluensulfonsyre og ophedede under tilbagesva-10 ling i 5 timer. Blandingen afkøledes, der tilsattes ethylacetat, og det organiske lag blev vasket i rækkefølge med vand, en vandig opløsning af natriumhydrogen-carbonat og vand. Man tørrede over magnesiumsulfat og bortdestillerede opløsningsmidlet. Residuet behandle-15 des med silicagel søjle-chromatografi under eluering med chloroform med et indhold af 20% (v/v) acetone, hvorved 240,2 mg af den ønskede forbindelse tilvejebragtes.

NMR spectrum 6(CDCl3): 0,80 (3H,s), 0,90 (3H,s), 3,43 (3H,s), 4,65 (lH,m), 6,20 (2H,AB,J=15,6, 20 7,0Hz), 7,28 (5H,m) b) Fremstilling af 23-methoxy-5,7-cholestadien-la, 33-diol:

En portion (229 mg, 0,378 mmol) af Diels-Alder additionsforbindelsen af 23-methoxy-5,7-cholestadien-2^ la, 33-diol og 4 phenyl-1,2,4-triazolin-3,5-dion fremstillet under a) opløstes i 10 ml tør tetrahydrofuran under argon-atmosfære, og opløsningen holdtes under omrøring ved stuetemperatur. Efter tilsætning i små portioner af 60 mg (1,58 mmol) lithiumaluminumhydrid holdt 30 man blandingen under tilbagesvaling i 1 time. Man satte under omrøring dråbevis til den isafkølede reaktionsblanding en mættet vandig opløsning af natriumsulfat for at fjerne overskud af lithiumaluminiumhydrid. Man fjernede gelen ved filtrering under sugning og fradestille-2^ rede tetrahydrofuran. Residuet ekstraheredes med ethylacetat, vaskedes i rækkefølge med fortyndet saltsyre og

DK 161197 B

9 vand og tørredes over magnesiumsulfat. Man bortdestil-lerede opløsningsmidlet og underkastede residuet silica-gel søjlechromatografi. Ved eluering med chloroform tilvejebragte man 86 mg af den ønskede forbindelse.

5 UV-spektrum λ^°Η (nm) ; 292, 281, 270, 262 (sh) c) Fremstilling af la-hydroxy-2 3-methoxy vitamin 03; 86 mg (0,20 mmol) af 23-methoxy-5,7-cholestadien-10 la,33-diol tilvejebragt under b) opløstes i 400 ml ethanol af garanteret kvalitet. Opløsningen holdtes under isafkøling i en argonatmosfære og bestråledes i 3 minutter med en 200 W kviksølvlampe gennem et Vycor glasfilter. Opløsningsmidlet fjernedes i vakuum og residuet 15 opløstes i 10 ml tør tetrahydrofuran, hvorefter man holdt blandingen under tilbagesvaling i 1 time. Efter afkøling bortdestilierede man opløsningsmidlet og underkastede residuet søjlechromatografi på Sephadex LH-20 (Pharmacia Fine Chemicals). Ved eluering med en 65:35 20 blanding af chloroform og hexan tilvejebragte man 14,0 mg af den ønskede forbindelse ifølge opfindelsen som en olie.

UV-spektrum (nm) : 263,5 25

Massespektrum (m/e): 430 (M+), 412, 398, 380, 150.

Eksempel 2 30 1α-hydroxy-23-ethoxy vitamin D3.

a) Fremstilling af en Diels-Alder additionsforbindelse af 23-ethoxy-5,7-cholestadien-la, 33-diol og 4-phe-nyl-1,2,4-triazolin-3,5-dion:

En portion (506 mg, 0,882 mmol) forbindelse 1 35 (R2=H) anvendt i eksempel la) opløstes i tør tetrahy drofuran (6 ml). Til denne opløsning tilsatte man 12 ml ethanol og 68 mg (0,357 mmol) p-toluensulfonsyre og holdt blandingen under omrøring ved stuetemperatur i 2

DK 161197 B

10 dage. Den omrørte blanding blev i rækkefølge behandlet som i eksempel la), hvorved tilvejebragtes 172 mg af den ønskede forbindelse.

NMR spektrum 6(CDCl3): 0,80 (3H,s) 5 b) Fremstilling af 23-ethoxy-5,7-cholestadien-la, 3&-diol:

Forbindelsen (172 mg, 0,277 mmol) tilvejebragt i a) opløstes i 15 ml tør tetrahydrofuran under argonatmosfære, og man holdt opløsningen under omrøring ved 10 stuetemperatur. Efter tilsætning i små portioner af 154 mg (4,06 mmol) lithiumaluminiumhydrid holdt man blandingen under tilbagesvaling i 1 time. Til den omrørte isafkølede reaktionsblanding tilsatte man dråbevis

en opløsning af natriumhydroxyd for at destruere over-1 R

skud af lithiumaluminiumhydrid. Derefter behandlede man blandingen i rækkefølge som i eksempel lb), hvorved tilvejebragtes 60,1 mg af den ønskede forbindelse.

UV-spektrum XEt0H (nm) ; 293, 281, 271, 262 (sh) max 20 NMR spektrum (CDCI3): 0,62 (3H,s), 0,81 (3H,s), 1,05 (3H,t), 3,68 (2H,q), 5,49 (2H,AB,J—21,06, 6,0Hz) c) Fremstilling af 2β-ethoxy-la-hydroxy vitamin D3: 2£-ethoxy-5,7-cholestadien-la, 3 $-diol (60,1 mg, 0,135 mmol) tilvejebragt i b) behandledes som i eksempel lc), hvorved tilvejebragtes 10,5 mg af den ønskede forbindelse .

30 UV-spektrum (nm) : 264 * max

Massespektrum (m/e): 444 (M+), 426, 398, 380, 150.

DK 161197 B

11

Eksempel 3 la-hydroxy-2p-isobutoxy vitamin D3

Denne forbindelse blev tilvejebragt ved hjælp af fremgangsmåden i eksempel la) indtil lc) med den undta-5 gelse, at methanolen, anvendt i eksempel la), blev erstattet med isobutylalkohol.

UV-spektrum . 255 . max 10 Massespektrum (m/e): 416 (M+), 398, 380, 150

Eksempel 4 la-hydroxy-23-(2-hydroxyethoxy) vitamin D3 15 a) Fremstilling af en Diels-Alder additionsforbindelse af 23-(2-hydroxyethoxy)-5,7-cholestadien-la-3$-diol og 4-phenyl-l,2,4-triazolin-3,5-dion: i) Ved hjælp af ethylenglycol:

En portion (265 mg, 0,462 mmol) af forbindelse II 20 (R2=h) anvendt i eksempel la), 5 ml tør tetrahydrofuran, 10 ml ethylenglycol, og 37 mg (0,195 mmol) p-toluensul-fonsyre behandledes som i eksempel la), hvorved den ønskede forbindelse tilvejebragtes.

NMR spektrum 6(CDCl3): 0,86 (3H,s), 0,96 (3H,s), 25 3,62 (2H,m), 3,80 (2H,m), 4,63 (lH,m), 6,25 (2H,AB, J=12,0, 9,0Hz), 7,35 (5H,m) ii) Ved hjælp af en dioxolan-forbindelse:

30 En portion (102 mg, 0,178 mmol) af forbindelse II

..... anvendt i eksempel la) blev opløst i 2 ml tør tetrahydrofuran. Til denne opløsning satte man 1,0 ml (9,30 mmol) 2,2-dimethyl-l,3-dioxolan og 100 μΐ bortrifluorid-etherat og holdt blandingen under omrøring 20 timer ved 35 stuetemperatur. Man tilsatte ethylacetat, vaskede blandingen med vand og tørrede over magnesiumsulfat, hvorefter man bortdestillerede opløsningsmidlet. Residuet t 12

DK 161197 B

blev underkastet silicagel søjlechromatografi og elue-ret med chloroform, der indeholdt 20% (v/v) acetone, hvorved tilvejebragtes 21,3 mg af den ønskede forbindelse, som havde samme fysiske egenskaber som den for-5 bindelse, der tilvejebragtes i i).

b) Fremstilling af 28-(2-hydroxyethoxy)-5,7-cholesta-dien-ΐα, 38-diol:

En portion (398,5 mg, 0,627 mmol) af Diels-Alder additionsforbindelsen tilvejebragt i i) eller ii) under 10 a) ovenfor behandledes som i eksempel lb), idet der anvendtes 40 ml tør tetrahydrofuran og 333 mg (8,77 mmol) lithiumaluminiumhydrid. Man tilvejebragte 173,2 mg af den ønskede forbindelse.

m UV-spektrum (nm) : 293,5, 281,5, 271, 262,

I 3 Iuq.X

(sh) NMR spektrum (CDCI3): 0,61 (3H,s), 0,89 (3H,s), 0,97 (6H,s), 5,52 (2H,AB, J=19,2, 6,0Hz) 20 c) Fremstilling af la-hydroxy-2 β- (2-hydroxyethoxy) vitamin D3.

En portion (173 mg, 0,376 mmol) af 2β-(2-hydroxyethoxy )-5,7-cholestadien-la, 3 β-diol tilvejebragt i b) behandledes som i eksempel lc), hvorved man tilveje- 25 bragte 39,9 mg af den ønskede forbindelse.

UV-spektrum χΕ^Η (nm) : 262,5 max

Massespektrum (m/e): 460 (M+), 442, 398, 380, .30 150

DK 161197 B

13 FT-NMR spektrum (CDCI3): 0,55 (3H,s), 0,86 (6H,d,J=l,0Hz), 0,92 (3H,d,J=l,0Hz), 3,33 (lH,dd), 3,65-3,90 5 (lH,m), 4,23 (lH,m), 4,37 (IH,d,J=l,4Hz), 5,09 (IH,s), 5,49 (IH,s), 6,04 (lH,d, J=l,9Hz), 6,37 (lH,d, 1 0 J=1.9Hz)

Eksempel 5-10

De nedenfor opregnede forbindelser tilvejebragtes ved hjælp af fremgangsmåden i eksempel la) til c) med 15 undtagelse af, at methanol anvendt i eksempel la) erstattedes af ethylenbromhydrin (eksempel 5), trimethy-lenglycol (eksempel 6), 4-methyl-l,4-pentandiol (eksempel 7), ethylencyanhydrin (eksempel 8), vand (eksempel 9) og 1,4-butandiol (eksempel 10).

20

Eksempel 5 20-(2-bromethoxy)-la-hydroxy vitamin D3 UV-spektrum xft0H (nm): 264

luclX

25

Massespektrum (m/e): 446 (M+-Br), 428, 400, 382, 134

Eksempel 6 30 lot-hydroxy-20-(3-hydroxypropoxy) vitamin D3 UV-spektrum (nm) : 263

Massespektrum (m/e): 474 (M+), 456, 398, 380, 35 150

DK 161197 B

14

Eksempel 7 la-hydroxy-2 β- (4-hydroxy-4-methy lpentoxy) vitamin D3 UV-spektrum (nm) : 263

D lUaX

Massespektrum (m/e): 517 (M++l), 500, 398, 380, 150, 83, 59 10 Eksempel 8 2 β- (2-cyanethoxy)-la-hydroxy vitamin D3 UV-spektrum λ (11111)'· 262 max

Massespektrum (m/e) s 469 (M*), 416, 398, 380, 15 150

Eksempel 9 la, 23-dihydroxy vitamin D3 20 UV-spektrum (nm) : 263

IlldX

Massespektrum (m/e): 416 (M+), 398, 380, 150

Eksempel 10 25 la-hydroxy-2 β-(4-hydroxybutoxy) vitamin D3 UV-spektrum (nm) : 263,5

Massespektrum (m/e): 488 (M+), 470', 452, 150 30

Eksempel 11 2 β- (2-N-acetylaminoethoxy)-1α-hydroxy vitamin D3 a) Fremstilling af la, 2a-epoxy-5,7-cholestadien-33-ol: 35 En portion (2,05 g, 3,57 mmol) af forbindelse 1 (R2=H) anvendt i eksempel la) opløstes i 100 ml tørt dimethyl formamid. Man tilsatte 0,92 g (3,51 mmol) triphe-

DK 161197B

15 nylphosphin og ophedede under omrøring opløsningen på vandbad (90-100°C) i 10 timer. Derefter udhældtes reaktionsblandingen i isvand og ekstraheredes med ethyl-acetat. Det organiske lag blev vasket med vand og tør-5 redes over magnesiumsulfat, hvorefter man bortdestille-rede opløsningsmidlet. Residuet blev underkastet sili-cagel søjlechromatografi og elueret med chloroform, der indeholdt 20% (v/v) acetone, hvorved man tilvejebragte 1,29 g af den ønskede forbindelse.

10 UV-spektrum λ 5 tQii u®): 290, 279, 269, 261 (sh) max NMR-spektrum (CDCI3): 0,63 (3H,s), 0,82 (3H,s), 0,91 (6H,s), 5,51 (2H,AB, 1 5 J=18,0, 6,0Hz) b) Fremstilling af 23-(2-N-acetylaminoethoxy)-5,7-choles tadien-1 a, 3 β-diol s

En portion (397 mg, 0,006 mmol) af la,2a-epoxy-^ 5,7-cholestadien-33-ol tilvejebragt under a) opløstes i 8 ml tør tetrahydrofuran under argon-atmosfære. Man tilsatte 2-N-acetylaminoethanol (3 ml), og holdt blandingen under omrøring ved stuetemperatur. Hertil satte man dråbevis 0,2 ml bortrifluoridetherat og holdt den ^ resulterende blanding under omrøring i 10 timer ved stuetemperatur fulgt af 10 timer under tilbagesvaling.

Man afkølede og satte ethylacetat til reaktionsblandingen. Det organiske lag blev vasket med vand og tørret over magnesiumsulfat, hvorefter man bortdestillerede ^ opløsningsmidlet. Residuet blev underkastet silicagel søjlechromatografi og elueret med chloroform, der indeholdt 20% (v/v) acetone, hvorved man tilvejebragte 32,6 mg af den ønskede forbindelse.

• I

16

DK 161197 B

NMR spektrum 6(CDCl3:CD30D=3sl): 0,64 (3H,s), 0,81 (3H,s), 0,90 (6H,s), 2,07 (3H,s), 3,34 (2H,m), 3,68 (2H,m), 5,44 (2H,AB,J=19,2, 5 6,0Hz) c) Fremstilling af 23-(2-N-acetylaminoethoxy) -1 α- hydroxy vitamin D3: 2 3-(2-N-acetylaminoethoxy)-5,7-cholestadien-la, 33-diol (32,6 mg, eller 6,50 x 10~2 mmol) tilvejebragt i 10 b) behandledes som i eksempel lc, hvorved man tilvejebragte 6,96 mg af den ønskede forbindelse.

UV-spektrum (nm) : 262,5

Massespektrum (m/e): 458 (M+-CH3CO), 440, 398, 383, 150, 43

Eksempel 12 23-amino-la-hydroxy vitamin D3.

20 a) Fremstilling af Diels-Alder additionsprodukt af 23-azido-5,7-cholestadien-la,3 3-diol og 4-phenyl-l,2,4-triazolin-3,5-dion:

En portion (501 mg, 0,873 mmol) af forbindelse 1 (R2=H) anvendt i eksempel la) opløstes i 10 ml dioxan 25 under argonatmosfasre og man holdt opløsningen under tilbagesvaling. Hertil satte man dråbevis 102 mg (1,57 mmol) natriumazid opløst i 2,6 ml vand, hvorefter man holdt blandingen under tilbagesvaling i 10 timer. Man afkølede og ekstraherede blandingen med ethylacetat, 30 vaskede med vand og tørrede over magnesiumsulfat. Man bortdestillerede opløsningsmidlet og residuet blev underkastet silicagel søjlechromatografi og elueret med chloroform, der indeholdt 20% (v/v) acetone, hvorved man tilvejebragte 81,9 mg af den ønskede forbindelse.

17 DK 1611978 IR spektrum vmax (cm-1): 2250 NMR spektrum 6(CDCl3): 0,81 (3H,s), 0,90 (3H s), 6,24 (2H,AB,J=10,8, 8,0Hz), 7,33 (5H,m) 5 b) Fremstilling af 2p-amino-5,7-cholestadien-la,33-diol:

Diels-Alder-additionsproduktet (81,9 mg, 0,133 mmol) tilvejebragt i a), 10 ml tør tetrabydrofuran og 94 mg (2,48 mmol) lithiumaluminiumhydrid behandledes som 10 i eksempel lb), hvorved man tilvejebragte 39,5 mg af den ønskede forbindelse.

UV-spektrum λΕ^°Η (nm): 292,5, 281, 271, 262 max (sh) 15 IR spektrum vmax (cm-1: 3500, 3320, 3210 NMR spektrum δ(CDC13:CD3oD=3;i). o,62 (3H,s), 0,83 (3H,s), 0,92 (6H,s), 5,48 (2H, AB,J=13,2, 6,0Hz) c) Fremstilling af 23-amino-la-hydroxy vitamin D3: 20 26-amino-5,7-cholestadien-3f5-ol (39,5 mg, eller 0,0095 mmol) tilvejebragt i b) behandledes som i eksempel lc), hvorved man tilvejebragte 6,28 mg af den Ønskede forbindelse.

25 UV-spektrum (nm) : 266

Massespektrum (m/e): 416 (M++1)' 400' 382' 367' 134 30 Eksempel 13-14

Forbindelse II (R2=OH) fremstillet ud fra 25-hy-droxycholesterol behandledes analogt som i eksempel 1a), b) og c), hvorved følgende forbindelser tilvejebragtes.

Claims

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendeteg-35 n e t ved R2 er hydrogen.
3. Forbindelse ifølge krav 1 kendetegnet ved, at R2 er en hydroxygruppe. DK 161197 B
4. Fremgangsmåde til fremstilling af et Ία-hydroxy vitamin derivat med formlen: OR hvori 15 er en hydroxysubstitueret alkylgruppe med 1-7 carbon-atomer; og R2 er hydrogen eller en hydroxygruppe, kendetegnet ved at man belyser et provitamin derivat med formlen: 20 T I r2 OH Rl° J^aJ ‘ 25 (hvor Ri og R2 er defineret ovenfor) med ultraviolet stråling og underkaster det bestrålede derivat termisk isomerisering.