DK154841B - Fremgangsmaade til fremstilling af membranproteiner ud fra neisseria meningitidis - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af membranproteiner ud fra neisseria meningitidis Download PDFInfo
- Publication number
- DK154841B DK154841B DK475779AA DK475779A DK154841B DK 154841 B DK154841 B DK 154841B DK 475779A A DK475779A A DK 475779AA DK 475779 A DK475779 A DK 475779A DK 154841 B DK154841 B DK 154841B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- neisseria meningitidis
- membrane proteins
- detergent
- minutes
- procedure
- Prior art date
Links
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 18
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 title claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 claims description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 238000013019 agitation Methods 0.000 abstract 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 13
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 7
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- DTPCFIHYWYONMD-UHFFFAOYSA-N decaethylene glycol Polymers OCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO DTPCFIHYWYONMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- CSHOPPGMNYULAD-UHFFFAOYSA-N 1-tridecoxytridecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCCC CSHOPPGMNYULAD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CVSDWRGWBWLCLS-UHFFFAOYSA-N 4-(2-hydroxyethyl)piperazine-1-sulfonic acid Chemical compound OCCN1CCN(S(O)(=O)=O)CC1 CVSDWRGWBWLCLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001478240 Coccus Species 0.000 description 1
- 101710164702 Major outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000588677 Neisseria meningitidis serogroup B Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
Opfindelsen angår en forbedret fremgangsmåde til.fremstilling af membranproteiner ud fra Neisseria meningi¬tidis.
Fremkalderen af meningitis cerebrospinalisepidemica er Neisseria meningitidis, også kaldet Meningo¬coccus. Den ved dråbeinfektion overførbare nakkestivhedeller hjernehindebetændelse optræder først og fremmesthos børn og andre personer i tæt beboede områder. Derer således et behov for at kunne immunisere udsatte per¬songrupper.
Ifølge foreliggende erkendelser er det vigtig¬ste membranprotein ("Major outer Membrans protein") fraNeisseria meningitidis i stand til at inducere bacteri¬cide antistoffer. Disse frembyder en serologisk typespeci¬fik beskyttelse mod sygdommen. Andre bestanddele afNeisseriae, især kapselpolysacchariderne af Neisseriaeaf gruppe A og C, kan tilvejebringe en gruppespecifikbeskyttelse. De inducerer imidlertid ikke en virksombeskyttelse mod Neisseriae af gruppe B. Der findes hel¬ler ingen angivelser om, at kapselpolysaccharidet afgruppe B kan inducere en sådan beskyttelse. Herefterer membranproteinerne af Neisseria meningitidis af grup¬pe B af særlig interesse.
Til fremstilling af en vaccine er det nødven¬digt at udvinde membranprotein fra Neisseria meningi¬tidis gruppe B i tilstrækkelig mængde. Den af Frasch iBact., 127, 973-981 (1976) beskrevne metode fører tilet brugbart præparat. Udbyttet ved denne metode liggerimidlertid ved den nedre, økonomisk forsvarlige grænse.Metoden ifølge Frasch består i, at man først vaskerkim af Neisseria meningitidis med saltopløsninger(CaC^- eller LiCl-opløsninger) , hvorpå ekstrakten be¬handles med desoxychol'at. Som allerede nævnt fører den¬ne metode imidlertid til et dårligt udbytte.
Ifølge en i.J. Infect. Dis., 137,728-739 (1978)beskreven fremgangsmåde frigøres det ydre membrankompleksved indvirkning af forskydningskræfter fra kimene ogrenses derpå yderligere ved gelchromatografi i nærværelseaf desoxycholat. Denne besværlige fremgangsmåde giverligeledes kun et dårligt udbytte af membranproteiner.
Det har nu ifølge opfindelsen overraskende vistsig, at udbyttet kan forøges væsentligt, når kimmassenunderkastes en direkte behandling med detergenter.
Eftersom indvirkningen af detergenter på kimene afNeisseria meningitidis fører til en opbrydning af kimene,måtte fagmanden forvente, at man på denne måde ville få etvæsentligt mere urent produkt, som endnu gennem yderligeretrin måtte renses. For fagmanden var det derfor på ingen mådenærliggende, men derimod udtalt overraskende, at man vedden direkte indvirkning af en detergent på kimene kunneopnå et produkt med væsentligt forøget udbytte (mere end5 gange bedre) og i samme renhed og med de samme egenskaber,uden at yderligere rensningstrin er nødvendige.
En behandling af kim af Neisseria meningitidis meddesoxycholat til udvinding af cellevægge er allerede beskreveti J. Bacteriol., 91, 1992-1997 (1966). I dette litteratur¬sted er der beskrevet udvinding af cellevægge fra Neisseriameningitidis med serogruppe-specificitet, medens man.ifølge opfindelsen udvinder membranproteiner med serotype--specificitet. Den her beskrevne metode ("cell suspensionwere ruptured by treatment with sodium deoxycholate(0,5% final concentration) for 10 min. while shakingat 37°C") er ganske vist identisk med det første trin inærværende ansøgnings fremgangsmåde for så vidt som kimenebehandles direkte med desoxycholat. Der er imidlertid væ¬sentlige forskelle med hensyn til formålet med behandlin¬gen og med hensyn til den videre oparbejdning af behand¬lingsblandingen. I trykskriftet videreforarbejdes det efterdetergentbehandling og centrifugering opnåede sediment afcellevæggene, og den ovenstående væske bortkastes, hvori¬mod man ved nærværende fremgangsmåde bortkaster sedimentet og videreoparbejder den ovenstående væske indeholdendemembranproteinerne.
Der findes imidlertid ingen angivelser om anvendel¬sen af fremgangsmåden til udvinding af membranproteiner.Eftersom indvirkningen af detergenter på kimene afNeisseria meningitidis fører til en opbrydning af kimene,måtte det forventes, at man ville få et væsentligt mereurent membranprotein-præparat, som yderligere måtte rensesved hjælp af flere fremgangsmådetrin. Det har imidlertidoverraskende vist sig, at det ved fremgangsmåden ifølgeopfindelsen udvundne materiale ikke adskiller sig erkende¬ligt fra membranproteiner som beskrevet i Bact., 127,973-981 (1976) eller J. Infect. Dis., 137, 738-739 (1978).Materialet har de samme elektroforetiske egenskaber iSDS-holdige pufferopløsninger. Dets endotoksinindhold erligeledes sammenligneligt med indholdet i det ifølgedenne kendte teknik opnåede materiale, og dette gælderogså dets evne til at inducere beskyttende antistoffer idyr.
Opfindelsen angår således en fremgangsmåde tilfremstilling af membranproteiner ud fra Neisseria meningi¬tidis, især en stamme af gruppe B, og denne fremgangsmådeer ejendommelig ved, at man henstiller Neisseria meningi¬tidis med en vandig opløsning af en detergent i en koncen¬tration fra 0,1% til 2% (vægt pr. rumfangsenhed) i fra 15minutter til 24 timer, eventuelt under bevægelse, skillerekstrakten fra bakterieremanensen og renser eventueltekstrakten yderligere.
Som detergent anvendes der fortrinsvis desoxy-cholat, især i dets forholdsvis let vandopløselige formsom natriumsaltet. Koncentrationen af detergenten påfra 0,1% til 2% henfører sig til vægten af detergenteni gram pr. rumfang i ml'. Forholdet mellem fugtig bak¬teriemasse og detergentopløsning ligger med fordel fra1:3 til 1:20, fortrinsvis på 1:5 (vægt pr. rumfangsen¬hed) .
Såfremt der anvendes natriumdesoxycholat somdetergent, anvendes dette i en koncentration på fra0,1% til 1% i en vandig opløsning. Som vandige opløs¬ninger kommer først og fremmest de i den biokemiskeeller mikrobiologiske praksis gængse pufferopløsningerpå tale.
Som udgangsmateriale udvindes en efter kendtemetoder fremstillelig kultur af Neisseria meningitidis,og cellemassen adskilles fra det ovenstående nærings¬medium. Det er herved fordelagtigt at anvende centri¬fugering. Centrifugeringsremanensen suspenderes i dendetergentholdige opløsning og henstilles i overensstem¬melse med opfindelsen i et vist tidsrum. Derefter skil¬les ekstrakten, der indeholder det ønskede produkt, fracelleremanensen. Det er her ligeledes fordelagtigt at gen¬nemføre en centrifugering.
Den temperatur, ved hvilken ekstraktionen udføres,begrænses nedadtil ved de anvendte opløsningers frysepunkt.Den øvre grænse bestemmes af tabet af membranproteinernesimmunogenitet ved varmedenaturering. Det er således anbe¬fal el ses værdigt at arbejde i temperaturområdet mellem stue¬temperatur og ca. 60°C.
Ekstrakten kan om ønsket renses yderligere..Tilyderligere rensning (dette trin indgår ikke i kravene)sedimenteres de højmolekylære membranproteiner ved ultra-centrifugering (f.eks. i en Beckmann-'centrifuge, 45-Ti-Rotor,60 min. ved 40.000 ο/min.). Det ønskede produkt findes nu isedimentet. Dette sediment suspenderes i detergentopløsning..De efter en ultralydbehandling uopløste partikler fraskillesved centrifugering, f.eks. i en Sorvall-centrifuge,SS-34-Rotor, 20 min. ved 20.000 o/min. Det ønskede produktbefinder sig herefter i den ovenstående væske, og ved til¬sætning af ethanol udfældes membranproteinerne. Således kanNeisseria meningitidis-antigenet fældes‘ved tilsætning aff.eks. 4 rumfangsdele ethanol, og fældningen kan genoptagesi vandig opløsning.
Det sterilfiltrerede og eventuelt frysetørredeNeisseria meningitidis-antigen er egnet til at inducerebeskyttende antistoffer mod sygdomsfremkalderen.
Dette antigen kan tilsættes adjuvanser, stabili¬serende tilsætninger, fyldstoffer og lignende stoffer,således som de almindeligvis anvendes ved vaccinefrem¬stilling.
Membranproteinerne udyiser en immunogen virkning.Der kan fremstilles en vaccine, der indeholder de ifølgeopfindelsen fremstillelige membranproteiner i en immunisa-torisk aktiv mængde. Vaccinen.kan indgives i en doseringpå fra ca. 10 til ca. 200 pr. dosis.
Opfindelsen belyses nærmere i de følgende udfø¬relseseksempler .
Eksempel 1 300 g kimmasse (fugtig vægt) af Neisseria menin¬gitidis, gruppe B, stamme 986, suspenderes i 1500 mlnatriumdesoxycho’latopløsning (0,5% natriumdesoxycholati 0,01 M Tris-HCl (tris-(hydroxymethyl)-aminomethan-hydro-chlorid), pH 8,5, 0,01 M EDTA (ethylendiamintetraacetat)),der forinden er bragt op på en temperatur på 60°C, og hol¬des i 15 minutter i et vandbad (56°C). Derefter følger encentrifugering til fraskillelse af kimmassen (Sorvall GSARotor, 10.000 o/m). Remanensen behandles derpå som ovenforendnu en gang med natriumdesoxycholatopløsning i 15 minut¬ter, og den anden ovenstående væske forenes efter fornyetcentrifugering med den første ovenstående væske, og rema¬nensen bortkastes. De forenede ovenstående væsker centri¬fugeres derefter i 60 minutter i en Beckman L 75 centri¬fuge ved 40.000 o/min i en 45 Ti Rotor. Sedimentet, derindeholder det ønskede produkt, suspenderes i 150 ml na¬triumdesoxycholatopløsning og omrøres natten over ved4vC.
Til yderligere rensning opvarmes suspensionenden næste dag i et vandbad (56°C, 15 min) og centrifuge¬res på ny i en ultracentrifuge som ovenfor (Rotor 45 Ti,40.000 o/min, 60 min.)f og sedimentet, der indeholder detønskede produkt, gensuspenderes i 150 ml natriumdesoxy-cholatopløsning. Til gensuspenderingen anvendes der enUltrasonic Cleaner fra firmaet Laboratory Supplies Co., Inc.,Hicksville, N.Y. USA. Al.iquoter på hver 50 ml udsættesfor ultralyd i hver 3 minutter og forenes derpå. Partikel-formigt materiale skilles fra ved en gentagen centrifuge¬ring (Sorvall, SS-34 Rotor, 20.000 o/min., 20 min.), ogden ovenstående væske, der indeholder det ønskede produkt,filtreres. Membranproteinet udfældes derefter sterilt vedtilsætning af 600 ml 96%'s ethanol og henstilles i 60minutter. Fældningen udvindes ved centrifugering (Sorvall, GSA Rotor), vaskes én gang med 100 ml ethanol og optagesderpå i 150 ml 5%'s raffinose under sterile betingelserog omrøres natten over ved 4°C.
Den optiske tæthed af materialet (OD) ved 280 nmbestemmes og indstilles ved tilsætning af 5%'s raffinosepå O°280 = -*-'2· Dette koncentrat forarbejdes derpå pågængs måde til en vaccine. Til bestemmelse af den op¬tiske tæthed udtages der en aliquot del under sterilebetingelser, der fældes med 1 rumfang trichloreddike-syre (TCA) (10%'s), fældningen vaskes i 5%’s TCA, ogden optages i 1 Μ KOH.
Eksempel 2 50 g kimmasse oparbejdes som beskrevet i eksem¬pel 1, men i stedet for 0,5% natriumdesoxycholat an¬vendes der en opløsning med 0,1% natriumdesoxycholat.
Udbyttet andrager 0,8 mg pr. g cellemasse, medens ud¬byttet ifølge eksempel 1 er 2,3 mg pr. g.
Eksempel 3 50 g kimmasse oparbejdes som beskrevet i eksem¬pel 1, men i stedet for 0r5% natriumdesoxycholat an¬vendes der en opløsning med 2,0% natriumdesoxycholat.Udbyttet andrager 2,2 mg pr. g cellemasse, medens ud¬byttet ifølge eksempel 1 er 2,3 mg pr. g.
Eksempel 4
50 g kimmasse oparbejdes som beskrevet i eksem¬pel 1, men i stedet for 0,5% natriumdesoxycholat i 0,01 M
Tris-HCl-0,01 M EDTA anvendes der 0,5% natriumdesoxy¬cholat i a) 0,1 M phosphatpuffer, pH 7,8, i b) Hepe'spuffer (4-(2-hydroxyethyl)-piperazin-l-sulfonat) (0,1 M, pH 7,8) eller i c) 0,1 M natriumcarbonatpuffer,pH 8,5. Udbytterne varierer mellem 1,8 mg pr. g og 2,5 mgpr. g.
Eksempel 5
Svarende til eksempel 1 udføres ekstraktionen medandre detergenter. Udbytterne fremqår af den følgendetabel:
[Emulphogene ®BC-720 (GAF Corp.) = polyoxyethylen(10)-tridecylether; Tween ®20 (Atlas Chemical Industries,Inc.) = Dolyoxyethylen (20)-sorbitanmonolauratjTriton ®X 100 (Rohn & Haas Comp.) = polyoxyethylen(10)-p-isooctylphenylether].
Claims (3)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af membranpro¬teiner ud fra Neisseria meningitidis, kendeteg¬net ved, at man henstiller Neisseria meningitidis meden vandig opløsning af en detergent i en koncentration på fra 0,1 til 2% (vægt pr. rumfangsenhed) i fra 15 minut¬ter til 24 timer, eventuelt under bevægelse, skillerekstrakten fra bakterieremanensen og renser eventueltekstrakten yderligere.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg¬net ved, at der som Neisseria meningitidis anvendes en stamme af gruppe B.
3· Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg¬net ved, at der som detergent anvendes desoxycholat.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2848965 | 1978-11-11 | ||
| DE19782848965 DE2848965A1 (de) | 1978-11-11 | 1978-11-11 | Verfahren zur herstellung von membranproteinen aus neisseria meningitidis und diese enthaltende vaccine |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK475779A DK475779A (da) | 1980-05-12 |
| DK154841B true DK154841B (da) | 1988-12-27 |
| DK154841C DK154841C (da) | 1989-06-05 |
Family
ID=6054405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK475779A DK154841C (da) | 1978-11-11 | 1979-11-09 | Fremgangsmaade til fremstilling af membranproteiner ud fra neisseria meningitidis |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0011243B1 (da) |
| JP (1) | JPS5566519A (da) |
| AT (1) | ATE857T1 (da) |
| AU (1) | AU533386B2 (da) |
| CA (1) | CA1142083A (da) |
| DE (2) | DE2848965A1 (da) |
| DK (1) | DK154841C (da) |
| ES (1) | ES485715A1 (da) |
| IL (1) | IL58673A (da) |
Families Citing this family (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4317811A (en) | 1980-09-11 | 1982-03-02 | Merck & Co., Inc. | Herpes simplex type 1 subunit vaccine |
| JPH074267B1 (da) * | 1982-12-02 | 1995-01-25 | Univ Rockefeller | |
| US7118757B1 (en) | 1988-12-19 | 2006-10-10 | Wyeth Holdings Corporation | Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine |
| AU761495B2 (en) | 1998-05-29 | 2003-06-05 | Chiron Corporation | Combination meningitidis B/C vaccines |
| CA2838395C (en) | 1999-05-19 | 2016-07-19 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Combination neisserial compositions |
| GB9918319D0 (en) | 1999-08-03 | 1999-10-06 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| GB9928196D0 (en) | 1999-11-29 | 2000-01-26 | Chiron Spa | Combinations of B, C and other antigens |
| CN102172398A (zh) | 2000-01-17 | 2011-09-07 | 诺华疫苗和诊断有限公司 | 含有脑膜炎奈瑟球菌b血清群外膜蛋白质的外膜囊(omv)疫苗 |
| GB0103171D0 (en) * | 2001-02-08 | 2001-03-28 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine composition |
| AU2003260357B2 (en) | 2002-08-02 | 2009-10-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine compositions comprising L2 and/or L3 immunotype lipooligosaccharides from lgtB- Neisseria minigitidis |
| GB0220194D0 (en) | 2002-08-30 | 2002-10-09 | Chiron Spa | Improved vesicles |
| CU23313A1 (es) | 2002-11-27 | 2008-09-25 | Inst Finlay Ct De Investigacia | Mã0/00todo de obtenciã"n de estructuras cocleares. composiciones vacunales y adyuvantes basados en estructuras cocleares y sus intermediarios |
| GB0316560D0 (en) | 2003-07-15 | 2003-08-20 | Chiron Srl | Vesicle filtration |
| CA2550927A1 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | A gram negative bacterium with reduced lps level in the outer membrane and use thereof for treating gram negative bacterial infection |
| GB0419627D0 (en) | 2004-09-03 | 2004-10-06 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
| GB0424092D0 (en) | 2004-10-29 | 2004-12-01 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
| EP2032161B1 (en) | 2006-06-12 | 2012-07-11 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | L3v los vaccines |
| PT2200642E (pt) | 2007-10-19 | 2012-05-30 | Novartis Ag | Formulações de vacinas meningocócicas |
| RU2475496C2 (ru) | 2008-02-21 | 2013-02-20 | Новартис Аг | МЕНИНГОКОККОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ fHBP |
| GB0822634D0 (en) | 2008-12-11 | 2009-01-21 | Novartis Ag | Meningitis vaccines |
| EP2367568A2 (en) | 2008-12-17 | 2011-09-28 | Novartis AG | Meningococcal vaccines including hemoglobin receptor |
| AU2010258677B2 (en) | 2009-06-10 | 2016-10-06 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Benzonaphthyridine-containing vaccines |
| EP2470205A1 (en) | 2009-08-27 | 2012-07-04 | Novartis AG | Adjuvant comprising aluminium, oligonucleotide and polycation |
| BR112012004275A2 (pt) | 2009-08-27 | 2016-11-16 | Novartis Ag | polipeptídios híbridos incluindo sequências meningocócicas de fhbp |
| TWI445708B (zh) | 2009-09-02 | 2014-07-21 | Irm Llc | 作為ｔｌｒ活性調節劑之化合物及組合物 |
| GB0917003D0 (en) | 2009-09-28 | 2009-11-11 | Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl | Purification of bacterial vesicles |
| EP2483390A2 (en) | 2009-09-30 | 2012-08-08 | Novartis AG | Expression of meningococcal fhbp polypeptides |
| CA2779816A1 (en) | 2009-10-27 | 2011-05-05 | Novartis Ag | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| WO2011057148A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-12 | Irm Llc | Compounds and compositions as tlr-7 activity modulators |
| WO2011084549A1 (en) | 2009-12-15 | 2011-07-14 | Novartis Ag | Homogeneous suspension of immunopotentiating compounds and uses thereof |
| BR112012022669A2 (pt) | 2010-03-10 | 2017-02-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | composição imunogênica, método de tratamento ou prevenção de infecção ou doença, uso de um antígeno, kit, métodos para a fabricação de uma composição imunogênica e para melhorar uma vacina. |
| WO2012020326A1 (en) | 2010-03-18 | 2012-02-16 | Novartis Ag | Adjuvanted vaccines for serogroup b meningococcus |
| EA031379B1 (ru) | 2010-03-23 | 2018-12-28 | Новартис Аг | Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний |
| GB201015132D0 (en) | 2010-09-10 | 2010-10-27 | Univ Bristol | Vaccine composition |
| CA2810971C (en) | 2010-09-10 | 2020-11-03 | Novartis Ag | Developments in meningococcal outer membrane vesicles |
| WO2012153302A1 (en) | 2011-05-12 | 2012-11-15 | Novartis Ag | Antipyretics to enhance tolerability of vesicle-based vaccines |
| MX2014008988A (es) | 2012-02-02 | 2014-08-27 | Novartis Ag | Promotores para aumento de expresion de proteinas en meningococo. |
| EP2823312B1 (en) | 2012-03-08 | 2019-08-07 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | In vitro potency assay for protein-based meningococcal vaccines |
| EP2861247B1 (en) | 2012-06-14 | 2020-12-09 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Vaccines for serogroup x meningococcus |
| CN104602705A (zh) | 2012-09-06 | 2015-05-06 | 诺华股份有限公司 | 血清组b脑膜炎球菌和d/t/p的联合疫苗 |
| EP3400960A1 (en) | 2012-09-18 | 2018-11-14 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Outer membrane vesicles |
| SG10201907875TA (en) | 2014-02-28 | 2019-09-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| US12109259B2 (en) | 2016-09-02 | 2024-10-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines for Neisseria gonorrhoeae |
| JP7369690B2 (ja) | 2017-09-08 | 2023-10-26 | エヴェロ バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド | 細菌の細胞外小胞 |
| EP3607967A1 (en) | 2018-08-09 | 2020-02-12 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| KR102852282B1 (ko) | 2018-11-06 | 2025-09-01 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 면역원성 조성물 |
| EP3799884A1 (en) | 2019-10-01 | 2021-04-07 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic compositions |
| GB202115077D0 (en) | 2021-10-21 | 2021-12-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Assay |
| GB202115072D0 (en) | 2021-10-21 | 2021-12-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Assay |
| GB202211033D0 (en) | 2022-07-28 | 2022-09-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Purification process |
-
1978
- 1978-11-11 DE DE19782848965 patent/DE2848965A1/de not_active Withdrawn
-
1979
- 1979-11-06 ES ES485715A patent/ES485715A1/es not_active Expired
- 1979-11-08 DE DE7979104391T patent/DE2962526D1/de not_active Expired
- 1979-11-08 EP EP79104391A patent/EP0011243B1/de not_active Expired
- 1979-11-08 AT AT79104391T patent/ATE857T1/de not_active IP Right Cessation
- 1979-11-09 JP JP14456179A patent/JPS5566519A/ja active Granted
- 1979-11-09 IL IL58673A patent/IL58673A/xx unknown
- 1979-11-09 CA CA000339541A patent/CA1142083A/en not_active Expired
- 1979-11-09 DK DK475779A patent/DK154841C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-11-09 AU AU52682/79A patent/AU533386B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK475779A (da) | 1980-05-12 |
| ATE857T1 (de) | 1982-04-15 |
| EP0011243B1 (de) | 1982-04-14 |
| ES485715A1 (es) | 1980-05-16 |
| AU533386B2 (en) | 1983-11-24 |
| CA1142083A (en) | 1983-03-01 |
| AU5268279A (en) | 1980-05-15 |
| JPS6350332B2 (da) | 1988-10-07 |
| IL58673A (en) | 1983-02-23 |
| DE2962526D1 (en) | 1982-05-27 |
| DK154841C (da) | 1989-06-05 |
| JPS5566519A (en) | 1980-05-20 |
| EP0011243A1 (de) | 1980-05-28 |
| DE2848965A1 (de) | 1980-05-22 |
| IL58673A0 (en) | 1980-02-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK154841B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af membranproteiner ud fra neisseria meningitidis | |
| US4271147A (en) | Process for the isolation of membrane proteins from Neisseria meningitidis and vaccines containing same | |
| JP3711289B2 (ja) | グラム−陰性球菌のリポオリゴ糖が除去された外膜蛋白質の製造および使用 | |
| JP6002763B2 (ja) | グラム陰性細菌の外膜小胞を、洗浄剤を含まずに生産するためのプロセス | |
| RU2475496C2 (ru) | МЕНИНГОКОККОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ fHBP | |
| US20110262484A1 (en) | Outer membrane vesicle prime-protein boost vaccine | |
| DK172936B1 (da) | Fremgangsmåde til samtidig fremstilling af lymphocytosefremkaldende faktor (LPF), filamentøst hæmagglutinin (FHA) og mindst | |
| DK145347B (da) | Fremgangsmaade til rensning af hepatitis b antigen | |
| KR20090057442A (ko) | Ｉｐｖ―ｄｐｔ 백신 | |
| NL8104979A (nl) | Werkwijze voor de bereiding van immunobiologische preparaten, toe te passen bij de diagnose , het voorkomen en/of het behandelen van candida guilliermondii infecties. | |
| IE901136L (en) | A method for purifying an outer membrane protein of¹haemophilus influenzae | |
| CN100571774C (zh) | 伤寒、副伤寒外膜蛋白疫苗 | |
| US6106842A (en) | Extraction of cell-bound protein from bordetella | |
| RU2255766C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций, иммуноглобулиновый препарат для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций (варианты) и суппозитории на основе иммуноглобулинового препарата | |
| CN114807059A (zh) | 新型pcv3病毒株及pcv3基因工程亚单位疫苗 | |
| RU2798283C1 (ru) | Штамм Chlamydia abortus "Chlamydia VNITIBP-21" для производства иммунобиологических лекарственных препаратов | |
| RU2802251C1 (ru) | Вакцинная композиция для профилактики энзоотического аборта у овец | |
| AU2005253864B2 (en) | Q fever vaccine preparation and method of producing the vaccine | |
| NO118229B (da) | ||
| Tachibana et al. | Purification of complement-fixing antigens of Rickettsia sennetsu by ether treatment | |
| RU2415941C1 (ru) | Способ получения диагностического сибиреязвенного аллергена | |
| RU2223497C1 (ru) | Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции | |
| RU2652889C1 (ru) | Способ изготовления вакцины инактивированной эмульсионной против ящура и вакцина инактивированная эмульсионная против ящура | |
| Hazlett | A comparison of six methods for the concentration of a porcine enterovirus | |
| CN118813478A (zh) | 一种副猪嗜血杆菌外膜囊泡及其疫苗、制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |