RU2223497C1 - Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции - Google Patents
Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2223497C1 RU2223497C1 RU2002118807/15A RU2002118807A RU2223497C1 RU 2223497 C1 RU2223497 C1 RU 2223497C1 RU 2002118807/15 A RU2002118807/15 A RU 2002118807/15A RU 2002118807 A RU2002118807 A RU 2002118807A RU 2223497 C1 RU2223497 C1 RU 2223497C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- chlamydia
- temperature
- chlamydial
- antigens
- corpuscles
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для серологической диагностики хламидийных инфекций человека и животных. Сущностью изобретения является дифференциальное центрифугирование инактивированной суспензии из гомогенизированных желточных мешков, инфицированных хламидиями, при 150 g и 500 g в течение 10 мин при температуре (3±1)oС, фильтрация среднего слоя через мембрану с размерами пор 3 мкм под давлением (0,3±0,1) МПа при температуре (13±3)oС, концентрации и стандартизации фильтрата. Техническим результатом является повышение специфической активности, растворимости, гомогенности и адгезивности антигенов хламидий. 2 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для серологической диагностики хламидийных инфекций человека и животных.
Известен способ получения инфекционных антигенов хламидий из овокультур путем многократного дифференциального центрифугирования гомогенизированной суспензии желточных мешков на солевом растворе с последующей инактивацией возбудителя формалином в конечной концентрации 0,25% (J Clinical micrcob., 1980, 12, 3, 409-412).
Однако известный способ не обеспечивает достаточного качества полученных антигенов. Обработка возбудителя высокой концентрацией формалина существенно снижает специфическую активность поверхностных антигенов хламидий. Как следствие, снижается эффективность их специфического свечения при взаимодействии с гомологичными антителами, уменьшается чувствительность реакции. Жидкие антигены хламидий имеют ограниченный срок годности (9-12 мес).
Наиболее близким аналогом к предлагаемому способу является получение неинфекционных антигенов хламидий из овокультур возбудителя путем центрифугирования при 500 g в течение 10 мин гомогенизированной 20% суспензии желточных мешков на среде 199, после предварительной инактивации 0,05% формалином и 0,1% азида натрия в конечной концентрации в течение 72 часов при температуре от 4 до 6oС с последующей лиофилизацией (Авторское свидетельство SU 1711898, кл. А 61 К 39/02, 39/118, G 01 N 33/531, 1992 г.).
Недостатком данного способа является то, что он не обеспечивает достаточной дисперсности среды, в которой взвешены корпускулы хламидий, и полного освобождения от липидов, что снижает растворимость препарата после лиофильного высушивания и его адгезивные свойства на стекле при приготовлении слайдов для проведения реакции и соответственно специфическую активность.
Техническим результатом изобретения является повышение специфической активности, растворимости и адгезивности на стекле антигенов хламидий.
Сущность изобретения заключается в следующем: 20%-ную инактивированную суспензию, приготовленную из гомогенизированных инфицированных желточных мешков на среде 199 подвергают дифференциальному центрифугированию при 150 g и 500 g в течение 10 мин при температуре (3±1)oС, средний слой (целевой продукт) фильтруют через мембрану с размерами пор 3 мкм под давлением (0,3±0,1) МПа при температуре (13±3)oС, концентрируют, фильтрат стандартизуют, доводя средой 199 до содержания 100 корпускул в поле зрения препарата.
Причинно-следственная связь между существенными признаками и техническим результатом заключается в следующем.
Дифференциальное центрифугирование, проводимое после инактивации суспензии инфицированных желточных мешков куриных эмбрионов, при 150 g и 500 g в течение 10 мин при температуре (3±1)oС повышает степень адгезивности и гомогенности за счет удаления крупнодисперсного дебриса. Мембранное разделение на мембранах с размерами пор 3 мкм при температуре (13±3)oС под давлением (0,3±0,1) МПа повышает растворимость целевого продукта за счет удаления нерастворимых клеточных компонентов и липидов. Фильтрация на мембране с размерами пор 0,2 мкм под давлением (0,3±0,1) МПа при температуре (13±3)oС позволяет провести концентрацию антигенов, что повышает специфическую активность целевого продукта за счет стандартизации до концентрации 100 корпускул в поле зрения.
Все это приводит к повышению специфической активности, растворимости, гомогенности и адгезивных свойств антигенов хламидий.
Изобретение осуществляется следующим образом.
Пример 1. Куриные эмбрионы, инфицированные Chlamydia psittaci (штамм Лори), погибшие на 4-7 сутки после заражения, вскрывают в стерильных условиях. Желточные мешки гомогенизируют, затем на среде 199 готовят 20%-ную маточную суспензию. В суспензию добавляют азид натрия 0,1% и формалин 0,05% и выдерживают в течение 72 часов при температуре от 2 до 8oС. После этого суспензию подвергают дифференциальному центрифугированию при 150 g в течение 10 мин при температуре (3±1)oС. Средний слой вновь центрифугируют при 500 g в течение 10 мин при температуре (3±1)oС. Полученный средний слой подвергают мембранной фильтрации с величиной пор 3 мкм под давлением (0,3±0,1) МПа при температуре (13±3)oС с последующей концентрацией целевого продукта на мембране с порами 0,2 мкм под давлением (0,3±0,1) МПа при температуре (13±3)oС, фильтрат - целевой продукт - стандартизуют методом прямого подсчета и доводят средой 199 до содержания 100 хламидийных корпускул в поле зрения препарата. В пермеате остаются крупнодисперсный дебрис и липиды, являющиеся отходом.
Полученный таким образом хламидийный антиген смешивают со стабилизатором состава, мас. %: среда 199 - 99; сахароза - 1, разливают по ампулам по 0,2 мл, ампулы помещают в металлические кассеты и лиофилизируют на сублимационных установках. Рабочий вакуум в течение цикла не более 13,33 Па. Температура конденсатора в начале высушивания не выше минус 50oС, в течение цикла не выше минус 47oС. Начальная температура материала в период сублимации минус (45±10)oС. Конечная температура досушивания (20±2)oС. По окончании высушивания кассеты с препаратом немедленно закрывают крышками, помещают в эксикатор с сухим силикагелем и герметизируют запайкой.
Пример 2. Получение неинфекционных антигенов из Chlamydia pecorum возбудителя энзоотического аборта овец (штамм ЕАЕ). Способ осуществляется так, как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов, инфицированных штаммом ЕАЕ.
Пример 3. Получение неинфекционных антигенов из Chlamydia trachomatis, возбудителя уретрита (штамм ЛБ-1). Способ осуществляется так, как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов, инфицированных штаммом ЛБ-1.
Пример 4. Получение неинфекционных антигенов из Chlamydia trachomatis возбудителя венерической лимфогранулемы (штамм Л-2). Способ осуществляется так, как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов, зараженных штаммом Л-2.
Пример 5. Получение неинфекционных антигенов из Chlamydia pneunoniae возбудителя респираторной патологии человека (штамм TW-183). Способ осуществляется так, как указано в примере 1, но в качестве исходного материала используют желточные мешки куриных эмбрионов, зараженных штаммом TW-183.
Дополнительная очистка полуфабрикатов антигенов хламидий с помощью мембранной фильтрации в фильтрационных ячейках под давлением, отделяющая антиген от крупнодисперсного дебриса и липидов, с последующей концентрацией позволила не только усилить флуоресценцию корпускул хламидий в темном поле препарата, повысить растворимость, гомогенность и адгезивность на стекле антигенов хламидий, но и оптимизировать условия стандартизации хламидийных корпускул. Стандартизацию проводили методом прямого подсчета в РНИФ до концентрации 100 корпускул в поле зрения, при интенсивности флуоресценции не менее чем +++.
Оценка растворимости, гомогенности и адгезивности различных серий антигенов хламидий представлена в табл 1.
Как видно из материалов, представленных в табл. 1, все серии антигенов обладают хорошей растворимостью в течение 10-30 с, гомогенностью, т.е. при растворении не образуют хлопьев, и высокой степенью адгезивности на стекле (+++, ++++).
Специфическую активность полученных антигенов хламидий, очищенных с помощью мембранной фильтрации и стандартизованных методом прямого подсчета в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ) определяли путем титрования гомологичных иммунных сывороток в реакции непрямой иммунофлуоресценции (см. табл.2).
Как видно из данных табл. 2, все серии антигенов хламидий обладают выраженной видоспецифической активностью с высокой интенсивностью специфического свечения.
Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет повысить специфическую активность хламидийных антигенов, их растворимость и гомогенность, адгезивность на стекле, что способствует стандартизации условий проведения реакции и объективизации получаемых результатов.
Claims (1)
- Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции, включающий культивирование хламидий в куриных эмбрионах, гомогенизацию инфицированных желточных мешков, суспендирование корпускул в среде 199 с последующей инактивацией формалином в смеси с азидом натрия в конечной концентрации 0,05% и 0,1% на объем суспензии соответственно, отделением целевого продукта центрифугированием, смешиванием со стабилизатором состава, мас.%: среда 199 - 98-99,5; сахароза 0,5-2, и лиофилизацией, отличающийся тем, что после инактивации проводят дифференциальное центрифугирование при 150 g и 500 g в течение 10 мин при температуре (3±1)°С, средний слой (целевой продукт) фильтруют через мембрану с размерами пор 3 мкм под давлением (0,3±0,1) МПа при температуре (13±3)°С, концентрируют, фильтрат стандартизуют, доводя средой 199 до содержания 100 корпускул в поле зрения препарата.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002118807/15A RU2223497C1 (ru) | 2002-07-12 | 2002-07-12 | Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002118807/15A RU2223497C1 (ru) | 2002-07-12 | 2002-07-12 | Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2223497C1 true RU2223497C1 (ru) | 2004-02-10 |
RU2002118807A RU2002118807A (ru) | 2004-02-27 |
Family
ID=32173003
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2002118807/15A RU2223497C1 (ru) | 2002-07-12 | 2002-07-12 | Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2223497C1 (ru) |
-
2002
- 2002-07-12 RU RU2002118807/15A patent/RU2223497C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
HANNAL et al. Chlamidial antigens stabilized with formalin for use in the mucroimmunofluorescence test. Journal of Clinical Microbiology. 1980, 12, № 3, р. 409-412. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2002118807A (ru) | 2004-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA1293190C (en) | Antiviral immunotherapeutic agent and preparation thereof | |
DK154841B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af membranproteiner ud fra neisseria meningitidis | |
Horta-Barbosa et al. | Some characteristics of SSPE measles virus | |
RU2223497C1 (ru) | Способ получения хламидийного антигена для реакции непрямой иммунофлуоресценции | |
JP4259758B2 (ja) | タンパク質溶液から伝ぱん性海綿状エンセファロパシーの原因物質を除去する方法 | |
Shepard et al. | The nature of the soluble antigen from typhus rickettsiae | |
US11617789B2 (en) | Process for the preparation of allergenic extracts | |
Humphries | Enzymic activity of bacteriophage-culture lysates: I. A capsule lysin active against Klebsiella pneumoniae type A | |
NL8104979A (nl) | Werkwijze voor de bereiding van immunobiologische preparaten, toe te passen bij de diagnose , het voorkomen en/of het behandelen van candida guilliermondii infecties. | |
Yogeswari et al. | Persistence of T. pallidum and its significance in penicillin-treated seropositive late syphilis. | |
WO1989005657A1 (en) | Lymphokine activation of cells for adoptive immunotherapy, e.g. of hiv infection | |
AU2003276848B2 (en) | Culturing anaplasma | |
Abrahamsohn et al. | Presence of Trypanosoma cruzi antigen on the surface of both infected and uninfected cells in tissue culture | |
RU2798283C1 (ru) | Штамм Chlamydia abortus "Chlamydia VNITIBP-21" для производства иммунобиологических лекарственных препаратов | |
RU2802251C1 (ru) | Вакцинная композиция для профилактики энзоотического аборта у овец | |
Rogers et al. | IMMUNOLOGY AND SEROLOGY OF ANAPLASMA MARGINALE I: Fractionation of the Complement-Fixing Antigen | |
Bagla et al. | Elimination of toxicity and enhanced detection of lumpy skin disease virus on cell culture from experimentally infected bovine semen samples | |
RU2665781C1 (ru) | Способ получения чистой жизнеспособной культуры протосколексов Echinococcus multilocularis | |
RU2431675C1 (ru) | Способ получения антигенного препарата из mycobacterium tuberculosis с расширенным спектром серопозитивных фракций в реакции иммуноблотинга | |
RU2122427C1 (ru) | Способ получения диагностикума риккетсиального сибирика корпускулярного | |
RU2663133C1 (ru) | Способ дифференциации штаммов Yersinia pestis на токсически активные и неактивные | |
Agrawal et al. | A comparative analysis of the mitogenic response of intestinal intraepithelial lymphocytes in various age groups of turkeys | |
FR2507478A1 (fr) | Procede pour preparer l'antigene de surface de l'hepatite b pur a partir du plasma humain | |
RU2624504C1 (ru) | Способ получения трансфер-фактора для профилактики вирусных болезней птиц | |
RU2045959C1 (ru) | Аллерген для диагностики туберкулеза и способ его получения |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20070713 |