DK150146B

DK150146B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af somatostatinanaloge hepta- eller octapeptider eller salte eller complexer deraf

Info

Publication number: DK150146B
Application number: DK501980AA
Authority: DK
Inventors: Wilfried Bauer; Janos Pless
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1979-11-27
Filing date: 1980-11-25
Publication date: 1986-12-15
Also published as: IL61561A; CY1327A; NL930137I2; ES8305701A1; PH22841A; KE3606A; ES510751A0; IE50571B1; AU543198B2; JPS6351159B2; PT72103A; DK501980A; NL930137I1; ES497113A0; DE3062075D1; HU185920B; DK150146C; HK30686A; JPS5690048A; CS228140B2

Description

150146 i

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte somatostatinanaloge hepta- eller octapeptider, hvilke peptider kan anvendes til fremstilling af farmaceutiske præparater og som farmaceutisk aktive midler.

5 De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede peptider har den almene formel I

A. CH2-S-Y1 Y2-S"CH2

^>N-CH-CO-B-C-D-E-NH-CH-F I

k'·^ 1 2345 6 hvor A betegner en gruppe med formlen RCO-, hvor i) R betegner Cy_^Q-phenylalkyl, eller ii) RCO- betegner en L- eller D-phenylalaninrest, som eventuelt 10 er monosubstitueret i ringen med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^g-alkyl eller Cj_g-alkoxy, idet α-aminogruppen i aminosyreresten eventuelt er mono- eller di-Cjig-alkyleret, A' betegner hydrogen, 15 B betegner -Phe-, eventuelt monosubstitueret i benzenringen med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^ g-alkyl eller C^ g-alkoxy, C betegner -(L)- eller -(D)-Trp-, eventuelt a-N-methyleret og eventuelt monosubstitueret i benzenringen med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^ g-alkyl eller C^ g-alkoxy, 20 D betegner -Lys-, eventuelt α-N-methyleret og eventuelt ε-N-C^ g-alkyleret, 150146 2 E .betegner eventuelt α-N-methyleret -Thr-, F betegner en gruppe med formlen -COOR.J, -CI-^ORy, ^R3 <^)

-CO-N eller -CO-N—I-X

5 \R4 hvor Rj betegner hydrogen eller C-jg-alkyl, R2 betegner hydrogen, HCO, Cy^y^^ylcarbonyl, Cg ^"Phen-ylalkylcarbonyl eller benzoyl,

Rg betegner hydrogen, C^ ^-alkyl, phenyl eller Cy_^Q-phenyl-1Q alkyl, R^ betegner hydrogen eller C-j g-elkyl eller, når Rg betegner hydrogen eller methyl, da også en gruppe med formlen -CH(Rg) -X, R^ betegner hydrogen, -(CHyi^-OH eller -(CHylg-OH eller 15 betegner substituenten knyttet til o-carbonatomet i en naturlig o-aminosyre, og X betegner en gruppe med formlen -COOR^, -CH2OR2 eller -CO-N^^ 20 ^SsR7 hvor R.j og Rj har den ovenfor angivne betydning,

Rg betegner hydrogen eller C^-alkyl, og

Ry betegner hydrogen, C^ g-alkyl, phenyl eller Cy .jQ-phenyl-alkyl, idet gruppen -CH(Rg)-X har D- eller L-konfiguration, og 25 Yj og Yy hver betegner hydrogen eller sammen betegner en direkte binding, idet resterne i l- og 6-stillingen uafhængigt af hinanden hver har L-eller D-konfiguration, med det forbehold, at D- og/eller L-cysteinrester kun er til stede i 30 1- og 6-stillingerne, eller er farmaceutisk acceptable saltformer eller complexer deraf, 3 150146

Udtrykket "halogen" betegner her fluor, chlor og brom.

I polypeptiderne med formlen I foretrækkes følgende betydninger eller kombinationer deraf: 1 Fortrinsvis betegner R som Cy .jQ-phenylalkyl, phenethyl.

5 1.1. Når RCO har betydningen ii) er a-aminogruppen i aminosyreres- ten fortrinsvis ikke-alkyleret eller mono-Cj .^-alkyleret, især C^_g-al-kyleret, specielt -methyleret. Mest foretrukket er N-terminalen ikke-alkyleret.

1.2. Når RCO har betydningen ii), er denne fortrinsvis a') en L-10 eller D-phenylalanin- eller -tyrosinrest, eventuelt mono-N-C^_^2_alky-leret. Mere foretrukket betegner a’) en L- eller D-phenylalaninrest eller en L- eller D-N-(C^_g-alkyl)-phenylalaninrest. Mest foretrukket betegner a’) en D-phenylalanin- eller D-N-(C^_g-alkyl)-phenylalanin-rest, især en D-phenylalanin eller D-(N-methyl)-phenylalaninrest.

15 2. B betegner -Phe-.

3. C betegner -(D)Trp-.

4. D betegner -Lys-, -MeLys- eller -Lys(s-Me)-, især -Lys-.

5. E betegner -Thr-.

/R3 20 6. F betegner en gruppe med formlen -CO-N.

^R4 XR3 især en gruppe med formlen -CO-N x xch(r5)-x 25 (i hvilket tilfælde Rg betegner hydrogen eller methyl). I sidstnævnte tilfælde har -CH(R5)-X-delen fortrinsvis L-konfiguration.

6.1. Rg betegner fortrinsvis hydrogen.

4 150146 6.2. Som substituent knyttet til α-carbonatomet i en naturlig aminosyre, dvs. med formlen F^N-CHCRgJ-COOl-l), betegner R^ fortrinsvis -CF^OH, -CHtCHgJ-OH, isobutyl eller benzyl, eller betegner eller (Ch^lgOH. Det betegner især -CH2OH eller 5 -CH(CH3)OH.

^R6

6.3. X betegner fortrinsvis en gruppe med formlen -CO-N

\r7 eller -CH2-OR2, især med formlen -CH2-OR2, og R3 betegner for-10 trinsvis hydrogen.

7. Resterne i 2- og 7-stillingen har fortrinsvis L-konfiguration.

8. Fortrinsvis betegner og Y2 sammen en direkte binding.

En klasse af de her omhandlede forbindelser er polypeptider med den ovenfor angivne formel I, hvor 15 A betegner en gruppe med formlen RCO-, A' betegner hydrogen, R betegner Cy ^Q-phenylalkyl, eller RCO betegner en L- eller D-phenylalaninrest, eventuelt mono- eller ringsub-20 stitueret med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^^-alkyl eller C^_3-alkoxy, idet aminogruppen i aminosyreresteren eventuelt er mono-C^ ^-al ky leret, F betegner en gruppe med formlen -COOR-j, -CH2OR2 eller 25 R3

-CO-N

nr R4 R3 betegner hydrogen, R3 betegner hydrogen eller C^_3-aIkyl, 30 Ry betegner hydrogen eller C^_3-alkyl, og ΥΊ og Y3 betegner sammen en direkte binding, samt farmaceutisk acceptable syreadditionssalte og complexer deraf.

5 150146

De omhandlede polypeptider kan eksistere i saltform eller i form af complexer deraf. Syreadditionssalte kan f.eks. dannes med organiske syrer, polymere syrer og uorganiske syrer. Sådanne syreadditions-saltformer omfatter f.eks. hydrochloriderne og acetaterne. Med com-5 plexer forstås forbindelser af kendt type dannet ud fra forbindelserne med formlen I ved addition af uorganiske stoffer, f.eks. uorganiske salte eller hydroxider såsom calcium- eller zinksalte og/eller addition af polymere organiske stoffer.

De omhandlede forbindelser fremstilles ved en fremgangsmåde, som er 10 ejendommelig ved, at a) beskyttelsesgruppen eller -grupperne fjernes fra et beskyttet ligekædet eller monocyclisk polypeptid, der omfatter en hexapeptidrest som beskrevet ovenfor ved formlen I, i hvilken mindst én af de funktionelle grupper er beskyttet, 15 b) to peptidenheder, som hver indeholder mindst én aminosyre eller aminoalkoholrest i beskyttet eller ubeskyttet form, idet peptidenhederne er sådanne, at der fås et beskyttet· eller ubeskyttet ligekædet eller monocyclisk polypeptid som indeholder en hexapeptidrest som angivet ovenfor ved formlen I, bindes sammen med en amidbinding, 20 og, om nødvendigt, trin a) udføres, c) en funktionel gruppe ved N- eller C-terminalen af et beskyttet eller ubeskyttet ligekædet eller monocyclisk polypeptid, som indeholder en hexapeptidrest som angivet ovenfor ved formlen I, omdannes til en anden funktionel N- eller C-terminalgruppe, og, om nødvendigt, 25 trin a) udføres, eller

d) et ligekædet polypeptid, som indeholder en hexapeptidrest som beskrevet ovenfor, oxideres til dannelse af et monocyclisk polypeptid som beskrevet ovenfor ved formlen I

og, om ønsket, et således vundet polypeptid omdannes til en farma-30 ceutisk acceptabel saltform eller complex deraf.

6 150146

Den ovenfor anførte fremgangsmåde kan f.eks. udføres i analogi med de i nedenstående eksempler beskrevne fremgangsmåder. For så vidt fremstillingen af udgangsmaterialerne ikke beskrives særskilt, er forbindelserne kendte eller kan fremstilles og renses ved i og for sig 5 kendte fremgangsmåder.

Fra dansk patentansøgning nr. 4284/78 og USA-patentskrift nr.

4.225.472 og 4.105.603 kendes visse somatostatinderivater eller -analoge, som imidlertid er strukturelt forskellige for de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede somatostatinanaloge, idet de her 10 omhandlede forbindelser bl.a. indeholder færre aminosyrerester end de kendte og derfor er enklere og billigere at fremstille.

De her omhandlede polypeptider samt de farmaceutisk tolerable salte deraf og complexer udviser værdifulde farmakologiske egenskaber, som det indiceres ved dyreforsøg. De udviser især en GH-sekretions-15 inhiberende virkning, som det f.eks. indiceres ved sænkning af GH-serumniveauer hos rotten, hvilken virkning er langt overlegen i forhold til det naturlige somatostatin.

Denne test udføres under anvendelse af hanrotter under nembutal-narkose. Teststoffet administreres ved forskellige logaritmisk ændrede 20 doser under anvendelse af mindst 4 rotter pr. dosis. Rotterne dekapi-teres 15 minutter efter administrationen, blodet opsamles, og GH-se-rumniveauet bestemmes ved radioimmunoassay. Resultaterne er vist i følgende tabel, i hvilken der er angivet den relative aktivitet regnet ud fra somatostatin (=100), som er standardforbindelsen inden for om-25 rådet, og er angivet for et repræsentativt udvalg af de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser.

7 150146

TABEL

Forbindelser Relativ GH-sænkende virkning

Somatostatin 100 5 Eksempel nr.

1 6700 2 680 3 165 10 4 650 5 1100 6 760 7 7300 8 2800 15 9 5000 10 4300 13 240 14 10800 15 7300 20 _

De i tabellen viste virkninger blev, som anført, målt efter 15 minutter. De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelsers fordele i forhold til somatostatin er imidlertid endnu gunstigere efter 1 time, eftersom det naturlige somatostatins virkning 25 efter 1 time er mere end 100 gange svagere end efter 5 minutter, hvorimod de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelsers virkning inden for det samme tidsrum kun bliver 3-10 gange svagere. De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser er derfor ikke kun stærkere GH-sekretionsinhibitorer end 30 det naturlige somatostatin, men de har også en meget længere varende virkning.

Polypeptiderne, saltene og complexerne deraf er således indiceret til anvendelse ved behandlingen af sygdomme med en ætiologi, som om- 8 150146 fatter eller er forbundet med for høj GH-sekretion, f.eks. ved behandlingen af diabetis mellitus og angiopati samt af acromegali.

Polypeptiderne, saltene og complexerne deraf inhiberer også mave- og pancreassekretion, som det indiceres ved standarddy retests, f.eks. i 5 overensstemmelse med den i Scand. J. Gastroent. 6, 423 (1971) af Kouturek et al. beskrevne fremgangsmåde for pancreassekretionen og i overensstemmelse med nedenstående fremgangsmåde til måling af mavesekretionen:

Hanrotter (220 - 280 g) holdes i laboratoriet i individuelle bure i 10 adskillige dage (14 timers lys/dag) med 48 timers fastning (men med fri adgang til vand) umiddelbart før forsøget. Ved forsøgets start underbindes pylorus under etheranæstesi, og 100 jig/kg pentagastrin injiceres subcutant for at stimulere mavesyresekretionen. Testforbindelserne injiceres simultant intramuskulært. 30 minutter senere dræbes 15 dyrene, mavesaftvolumenet måles, og syrekoncentrationen· beregnes (ved titrering med thymolblåt). Syreproduktionen beregnes, og den procentvise inhibering beregnes i forhold til de ubehandlede kontroller.

Polypeptiderne, saltene og complexerne er således yderligere indiceret 20 til anvendelse ved behandlingen af gastrointestinale sygdomme, f.eks. ved behandlingen af mavesår, gastrointestinal blødning og akut pancreatitis. Til de ovenfor nævnte anvendelser er en indiceret daglig dosis fra ca. 0,002, f.eks. fra ca. 0,07, til ca. 20 mg polypeptid, hensigtsmæssigt administreret i delte doser 2-4 gange daglig i 25 enhedsdosis- eller retardform. Egnede enhedsdosisformer indeholder fra ca. 0,0005, f.eks. fra ca. 0,02, til ca. 10 mg af et her omhandlet polypeptid eller en ækvivalent mængde af et farmaceutisk tolerabelt salt eller complex deraf sammen med fast eller flydende farmaceutisk fortyndingsmiddel eller bærer derfor.

30 Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse belyses nærmere ved nedenstående eksempler, i hvilke alle temperaturangivelser og 2 0 [o]p -værdier er ukorrigerede. Der anvendes følgende forkortelser: 9 150146

Asp-diol = asparaginsyre-diol-resten .NH-

HO-CH0-CH0-CH

2 2 X

X ch2oh 5 Boc = tert.butoxycarbonyl BTFA = bor-tris-trifluoracetat HOBT = N-hydroxybenzotriazol

Hy = -NHNH2

Leu-ol = leucinol-resten 10 NH- CH3-CH(CH3)-CH2-Cil ^ΟΗ2ΟΗ MBzl = p-methoxybenzyl

Me = methyl 15 MePhe = -(N-methyl)-Phe- ONP = 4-nitrophenoxy

Phe(pF) = -p-F-Phe- ==\

Phe-ol = phenylalaninol-resten Λ Λ-ΟΗ2-ΟΗ 20 χ—ϊ ^Ν:η2οη

Ser-ol = seri nol-resten -NH-CH(CH2OH)2

Thr-ol = threon i nol-resten CH3-CH(OH)-C.tl ^m:h2oh 25 Z = benzyloxycarbonyl.

Eksempel 1A.

H-(D)Phe-Cys-Phe-(D)T rp-Lys-Thr-C^s-Thr-ol.

0,70 g Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-Cys-(MBzl)-Thr-ol og 6,0 ml thioanisol opløses i 9 ml trifluoreddikesyre ved 0°C.

30 Opløsningen afkøles til -10°C, og der tilsættes under omrøring 12 ml ca. 2M BTFA i trifluoreddikesyre. Omrøringen fortsættes i 1 1/2 time ved -5 - -10°C, og der tilsættes 50 ml kold (-70°C) absolut methanol.

10 150146

Efter yderligere 5 minutter tilsættes 1 liter absolut ether og 5 ml ca.

5N hydrogenchlorid i ether under omrøring. Det udfældede produkt frafiltreres og vaskes kort med ether, og remanensen opløses straks i 2.5 liter dioxan/vand (7:3). pH-Værdien indstilles til pH-værdi 7 -5 7,5 ved tilsætning af fortyndet ammoniakopløsning. Blandingen omrøres i en åben beholder ved stuetemperatur, indtil testen for -SH-gruppen (f.eks. ElImann-testen) er negativ. pH-Værdien indstilles til 3-4 ved tilsætning af saltsyre, den vundne opløsning inddampes i vakuum, og produktet lyofiliseres. Lyofilisatet opløses i en lille mæng- 10 de 10%'s eddikesyre og renses ved gelchromatografi (Bio-Rad P4) under anvendelse af 10%’s eddikesyre. Fraktioner, som indeholder det ønskede produkt, isoleres og lyofiliseres, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, [a]^ = -42° (c = 0,5 i 95%'s eddikesyre).

Udgangsmaterialet kan fremstilles som følger: 15 a) Z-Lys(Boc)-Thr-OMe.

13.5 ml chlormyresyreisobutylester sættes under omrøring til 56 g Z-Lys(Boc)-OH i form af dicyclohexylaminsaltet opløst i 1200 ml tetra-hydrofuran, der i forvejen er afkølet til -20°C. Omrøringen fortsættes i yderligere 20 minutter ved -15°C, og derefter tilsættes en kold 20 opløsning (-21°C) af 21 g HCI.H-Thr-OMe i 600 ml tetrahydrofuran.

Der tilsættes dråbevis ved -15°C 17 ml triethylamin, reaktionsblandingen omrøres i 18 timer ved 0°C, og produktet underkastes kraftig inddampning i vakuum. Der fortyndes med ether/ethylacetat (1:1), og det udfældede dicyclohexylaminsalt frafiltreres. Filtratet vaskes med 25 vand, 2N citronsyre, 10%'s kaliumhydrogencarbonat og vand. Den organiske fase tørres over natriumsulfat og inddampes til tørhed, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse i form af en har-20 piks, [«]q = “14° (c = 1 i dimethylformamid).

b) Z-Phe-(D)Trp-OH.

30 9,0 g Z-Phe-OH i 150 ml acetonitril afkøles til -18°C, og der tilsættes 3,4 ml N-methylmorpholin efterfulgt af 4,1 ml chlormyresyreisobutylester. Opløsningen omrøres i 15 minutter ved -15°C, og der tilsættes en 150146 π kold opløsning af 6,2 g H-(D)Trp-OH i 30 ml IN natriumhydroxid og 100 ml acetonitril, og omrøringen fortsættes i yderligere 18 timer ved -5 - 0°C. Reaktionsblandingen inddampes i vakuum, fortyndes med vand og ekstraheres tre gange med en lille mængde ether. Den van-5 dige fase indstilles til pH-værdi ca. 2 ved tilsætning af 4N svovlsyre, og bundfaldet ekstraheres med ether/eddikesyre. Den organiske fase vaskes med vand og tørres over natriumsulfat.

Efter inddampning i vakuum krystalliseres remanensen af ether/pe-troleumsether, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, 10 smeltepunkt 113°C, [a]^* = "5° (c = 0,9 i dimethylformamid).

c) Z-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe.

6,0 g Z-Lys(Boc)-Thr-OMe i 150 ml methanol' hydrogeneres i nærværelse af palladium/kul. Produktet filtreres og vaskes med methanol, og filtratet inddampes i vakuum. Remanensen opløses sammen med 4,8 15 g Z-Phe-(D)Trp-OH og 2,0 g HOBT i 50 ml dimethylformamid. Opløsningen afkøles til -15°C, og der tilsættes 2,1 g dicyclohexylcarbodi-imid i 15 ml dimethylformamid under omrøring. Opløsningen omrøres i yderligere 2 dage ved 0°C, inddampes i vakuum og fortyndes med eddikesyre/ether (1:1), og det udfældede dicyclohexylurinstof frafil-20 treres. Filtratet vaskes med 2N citronsyre, 10%'s kaliumhydrogencar-bonat og vand. Den organiske fase tørres over natriumsulfat og inddampes. Remanensen chromatograferes over silicagel med methylen-chlorid/methanol som elueringsmiddel. De fraktioner, der indeholder det ønskede produkt, isoleres og inddampes i vakuum, hvorved fås 2 0 25· den i overskriften nævnte forbindelse, [α]^ = -7° (c = 0,9 i dimethylformamid) .

d) H-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe.

1,2 g Z-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe i 50 ml methanol hydrogeners i nærværelse af 10%'s palladium/kul, og opløsningen filtreres og ind-30 dampes i vakuum, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse i 7 Π form af et skum, [a]p = "18° (c = 1 i methanol).

12 150146 e) Boc- (D) Phe-Cys (MBzI) -OH.

Til 16 g Boc-(D)Phe-OH j 300 ml tetrahydrofuran forafkølet til -20°C sættes 8,4 ml triethylamin efterfulgt af 8,3 ml chlormyresyreisobutyl-ester. Den vundne blanding omrøres i 10 minutter ved -15°C, og der 5 tilsættes derefter dråbevis en kold opløsning af H-Cys-(MBzl)-OH og 11,5 ml triethylamin i 400 ml tetrahydrofuran/vand (5:1). Reaktionsblandingen omrøres i ca. 2 dage ved 0°C, inddampes i vakuum, fortyndes med 1,3 liter vand og ekstraheres med ether. Den vandige fase indstilles til pH-værdi 2,0 ved tilsætning af 4N svovlsyre, og 10 bundfaldet ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatekstrakten vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddampes i vakuum. Remanensen renses ved chromatografi over silicagel med ether/1%'s eddikesyre som elueringsmiddel. De fraktioner, der indeholder det ønskede produkt, forenes og inddampes i vakuum, hvorved fås den i 15 overskriften nævnte forbindelse, [a]^ = -18° (c = 1,1 i dimethyl- formamid).

f) Boc- (D) Phe-Cys (MBzI) - Phe- (D)Trp- Lys ( Boc) -Thr-OMe.

0,30 g dicyclohexylcarbodiimid sættes under omrøring til 0,67 g Boc-(D) Phe-Cys (MBzI)-OH, 1,0 g H-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-OMe 20 og 0,5 g HOBT opløst i 30 ml dimethylformamid, der er forafkølet til -20°C. Reaktionsblandingen omrøres i ca. 12 timer ved fra -5°C til 0°C og i ca. 4 timer ved stuetemperatur. Det udfældede dicyclo-hexylurinstof frafiltreres, og filtratet vaskes med 2N citronsyre, 10%'s kaiiumhydrogencarbonat og vand. Den organiske fase tørres over 25 natriumsulfat, renses og inddampes. Produktet udfældes ved tilsætning af ether, frafiltreres og tørres, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 160°C, [<x]^ = -30° (c = 1 i methanol.

g) Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-NHNH2.

30 1,5 ml hydrazin hydrat sættes til 0,9 g Boc-(D)Phe-Cys-(MBzl)-Phe- (D)Trp-Lys (Boc)-Thr-OMe opløst i 15 ml dimethylformamid. Opløsningen lades henstå i 5 timer ved stuetemperatur, og der tilsættes van 13 150146 digt methanol. Bundfaldet frafiltreres, vaskes med methanol/vand (1:9) og tørres, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, smeltepunkt 160°C, [a]p^ = -19° (c = 1 i dimethylformamid).

h) H-Cys(MBzl)-Thr-ol-trifluoracetat.

5 En opløsning af 7,1 g Boc-Cys(MBzl)-Thr-ol og 5 ml thioanisol i 25 ml methylenchlorid sættes til 50 ml trifluoreddikesyre og lades henstå i 20 minutter ved stuetemperatur. Opløsningen fortyndes med ca. 1 ± liter ether, og bundfaldet frafiltreres, vaskes med ether og tørres, 20 hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, [ot]j-j = 8,3° (c = 10 1,1 i 95%'s eddikesyre).

i) Boc-Cys(MBzl)-Thr-ol.

2,1 ml N-methylmorpholin sættes under omrøring til G,3 g Boc-Cys-(MBzl)-OH i 50 ml tetrahyd rof uran, der er forafkølet til -20°C, efterfulgt af dråbevis tilsætning ved -15°C af 2,4 ml chlormyresyreisobu-15 tylester. Efter omrøring i 5 minutter ved -15°C tilsættes en kold opløsning (-10°C), som indeholder 3,3 g H-Thr-ol-hydrochlorid og 4,1 ml N-methylmorpholin i 30 ml dimethylformamid. Blandingen omrøres i 2 timer ved 0°C og i yderligere 2 timer ved stuetemperatur. Der tilsættes 50 ml 10%'s kaliumhydrogencarbonat, og reaktionsblandingen 20 inddampes i vakuum, fortyndes med ethylacetat og vaskes tre gange med 2N citronsyre, 3 gange med 10%'s kaliumhydrogencarbonat og derefter med 30%'s natriumchloridopløsning. Den organiske fase tørres over natriumsulfat og inddampes i vakuum, hvorved der fås den i 2 0 overskriften nævnte forbindelse i form af en olie, [a]D = -31° (c = 25 1,3 i dimethylformamid).

j) Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-Cys(MBzl)-Thr-ol.

0,7 ml ca. 5N hydrogenchlorid i ether sættes under omrøring til 0,82 g Boc-(D)Phe-Cys(MBzl)-Phe-(D)Trp-Lys(Boc)-Thr-NH-NH2 i 30 ml 30 dimethylformamid, der er afkølet til -20°C, efterfulgt in toto af 0,8 ml 10%'s tert.butylnitrit i dimethylformamid. Blandingen omrøres i 15 14 150146 minutter ved -20 - -15°C. Der tilsættes ved -25°C 0,56 ml triethyl-amin efterfulgt af en opløsning af 0,51 g H-Cys(MBzl)-Thr-ol-hydro-chlorid i 3 ml dimethylformamid, forafkølet til -15°C, og det hele omrøres i 20 timer ved fra -5°C til 0°C og i yderligere 3 timer ved 5 stuetemperatur. Reaktionsblandingen fortyndes med ca. 100 ml methanol, og produktet udfældes ved tilsætning af ca. 40 ml vand. Bundfaldet frafiltreres, vaskes med vandig methanol og tørres, hvorved fås den i overskriften nævnte forbindelse, sønderdeling ved 170°C, [o]p® = -20° (c = 1 i dimethylformamid).

1501-46 15

Eksempel IB.

Det i eksempel 1A fremstillede produkt kan også fremstilles ifølge nedenstående syntesesekvens: H - (D)Phe - Cys~- Phe - (D)Trp - Lys - Thr - Cys - Thr-ol 5 MBzl Z MBzl Z-ONP H-^OH Boc - OH Η-We Boc-fc>H H-ol MBzl Z MBzl Z-^OH Boc-/oMe Boc--ol Z MBzl 10 Boc-OH H—/oMe Boc-OH H —i-- ol Z MBzl — Boc-^-OMe Boc---ol Z MBzl

Boc-^OH H -L-ol 15 Z MBzl

Boc--ί-ol Z MBzl —^Boc-/sy H--L-ol Z MBzl 20 Boc-L-i-_ol Z MBzl H-L-L-ol MBzl Z MBzl Z -L-^---L-ol

25 MBzl Z

Z-/OH H--^OMe

MBzl Z

Z-L-/oMe Z MBzl 30 z .-^HY H-L-ol MBzl Z MBzl z-ί-/-/-oi 16 150146

Tabel fortsat

BTFA i trifluoreddikesyre elle Na/NHg Η H

Η»..................L-1--ol 5 Atmosfærisk O- eller H-O- h-£-~ 2 ......: /-0i

De nedenstående forbindelser kan fremstilles i analogi med de ovenfor beskrevne fremgangsmåder (alle forbindelser i form af acetat medmindre andet angives): 10 A-Cys-Phe-(D)Trp-Lys-E-Cys-F' . 1 6

Eksem- A EF’ ' 95%'s eddikesyre pel nr.

15 2 H-(D)Phe- -Thr- -(D)Ser-NH2 -48° (c = 1,0) 3 H-(D)Phe- -Thr- -NH2 -35° (c = 1,0) 4 H-(D)Phe- -Thr- -Phe-ol -41° (c = 1,0) 5 H-(D)Phe- -Thr- -Leu-ol -41° (c = 1,0) 6 H-(D)Phe- -Thr- -Asp-diol -42° (c = 1,0) 20 7 H-(D)MePhe- -Thr- -Thr-ol -63° (c = 1,0) 8 H-(D)Phe- -Thr- -Ser-ol -43° (c = 1,1) 9 ^-(CH2)2-CO~Thr- -Thr-ol -25° (c = 0,9) 10 H-(D)Phe(pF)- -Thr- -Thr-ol -41° (c = 0,5)

Eksempel 11.

25 H-(D)Phe-CVs-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-(D)Cys-(D)Ser-NH2 1 6 HCI-salt: [o]q^ = "85° (c = 0,4 i 95%'s eddikesyre).

17 150146

Eksempel 12.

H-(D)Phe-(D)c|s-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-(D)Cys-(D)Ser-NH2 1 6 [α]ρ® = -102° (c = 1,0 i 95%'s eddikesyre).

5 Eksempel 13.

H-(D)Phe-(D)Cys-Phe-(D)Trp-Lys-Thr-Cys-(D)Ser-NH2 1 6 [a]p^ = -30° (c = 1,0 i 95%'s eddikesyre).

Eksempel 14.

10 H-(D)Phe-Cys-Phe(pF)-(D)T rp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol 1 6 [a]p^ = -42° (c = 1,0 i 95%'s eddikesyre).

Eksempel 15.

Ved at gå frem i analogi med eksempel 1-14 men udelade det sidste 15 oxidationstrin, fremstilles ligekædede polypeptider svarende til hver af de nævnte individuelle monocycliske polypeptider (dvs. forbindelser, hvor -Cys-resterne i 1- og 6-stillingerne ikke er forbundne).

Ved således at udelade det endelige oxidationstrin fra den i eksempel 1 A beskrevne fremgangsmåde, fremstilles det ligekædede polypeptid 20 med formlen: H-(D)Phe-Cys-Phe(D)Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol (hydrochlorid) [a]2D° = -35° (c = 0,5 i 95%'s eddikesyre).

Claims

150146 Analogifremgangsmåde til fremstilling af somatostatinanaloge hepta-eller octapeptider med den almene formel I A\ P*2-S-Yi Vs-f": J^N-CH-CO-B-C-D-E-NH-CH-F 1 A'^- 1 2 3 4 5 6 5 hvor A betegner en gruppe med formlen RCO-, hvor i) R betegner C7-10 -phenylalkyl, eller ii) RCO- betegner en L- eller D-phenylalaninrest, som eventuelt er monosubstitueret i ringen med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^g-alkyl eller C.j_g-10 alkoxy, idet a-aminogruppen i aminosyreresten eventuelt er mono- eller di-C^ ^“alkyleret, A' betegner hydrogen, B betegner -Phe-, eventuelt monosubstitueret i benzenringen med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^ ^-alkyl eller C^-alkoxy, 15. betegner -(U- eller -(D)-Trp-, eventuelt a-N-methy leret og eventuelt monosubstitueret i benzenringen med halogen, nitro, amino, hydroxy, C^g-alkyl eller C^-alkoxy, D betegner -Lys-, eventuelt a-N-methyleret og eventuelt s-N-C^ g-alkyleret. 150146 E betegner eventuelt o-N-methyleret -Thr-, F betegner en gruppe med formlen -COOR^, -CHgORg, /¾ O -CO-nC eller -CO-N-1-X

5 XR4 hvor R.| betegner hydrogen eller C^-alkyl, R2 betegner hydrogen, HCO, Cg.^'^kylcarbonyl, ^8-12"p^e" nylalkylcarbonyl eller benzoyl, Rg betegner hydrogen, C^ g-alkyl, phenyl eller Cy_^Q-phenyl-10 alkyl, R^ betegner hydrogen eller C^_g-alkyl eller, når Rg betegner hydrogen eller methyl, da også en gruppe med formlen -CH(R5)-X, Rjj betegner hydrogen, -(CHgig’OH eller -(CHgig-OH eller 15 betegner substituenten knyttet til o-carbonatomet i en naturlig ο-aminosyre, og X betegner en gruppe med formlen -COORj, -CHgORg eller /R6 -co-ncT 20 hvor R^ og Rg har den ovenfor angivne betydning, Rg betegner hydrogen eller C^ g-alkyl, og Ry betegner hydrogen, C^_g-alkyl, phenyl eller Cy .jQ-phenyl-alkyl, idet gruppen -CH(Rg)-X har D- eller L-konfiguration, og 25 Y.| og Yg hver betegner hydrogen eller sammen betegner en direkte binding, idet resterne i 1- og 6-stillingen uafhængigt af hinanden hver har L-eller D-konfiguration, med det forbehold, at D- og/eller L-cysteinrester kun er til stede i 30 1- og 6-stillingerne, eller farmaceutisk acceptable saltformer eller complexer deraf,