ES2237356T3 - Procedimiento para la produccion de peptidos ciclicos. - Google Patents
Procedimiento para la produccion de peptidos ciclicos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2237356T3 ES2237356T3 ES04759123T ES04759123T ES2237356T3 ES 2237356 T3 ES2237356 T3 ES 2237356T3 ES 04759123 T ES04759123 T ES 04759123T ES 04759123 T ES04759123 T ES 04759123T ES 2237356 T3 ES2237356 T3 ES 2237356T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- peptide
- thr
- cys
- protected
- gly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 73
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 title claims description 41
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 title claims description 41
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 135
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 66
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 66
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 43
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 claims description 25
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 claims description 24
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 claims description 24
- -1 acetamidomethyl Chemical group 0.000 claims description 21
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 18
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 18
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 17
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 15
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 13
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 10
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 108010056764 Eptifibatide Proteins 0.000 claims description 9
- GLGOPUHVAZCPRB-LROMGURASA-N eptifibatide Chemical compound N1C(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCCNC(=N)N)NC(=O)CCSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H]1CC1=CN=C2[C]1C=CC=C2 GLGOPUHVAZCPRB-LROMGURASA-N 0.000 claims description 9
- 229960004468 eptifibatide Drugs 0.000 claims description 9
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical class C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 claims description 9
- 108010000437 Deamino Arginine Vasopressin Proteins 0.000 claims description 8
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 claims description 8
- NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N desmopressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSCCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(N)=O)=O)CCC(=O)N)C1=CC=CC=C1 NFLWUMRGJYTJIN-NXBWRCJVSA-N 0.000 claims description 8
- 229960004281 desmopressin Drugs 0.000 claims description 8
- 229960003773 calcitonin (salmon synthetic) Drugs 0.000 claims description 7
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 claims description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N nesiritide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N 0.000 claims description 4
- 229960001267 nesiritide Drugs 0.000 claims description 4
- 125000004217 4-methoxybenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1OC([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 102400000050 Oxytocin Human genes 0.000 claims description 3
- 101800000989 Oxytocin Proteins 0.000 claims description 3
- XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N Oxytocin Natural products N1C(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N Vasopressin Natural products N1C(=O)C(CC=2C=C(O)C=CC=2)NC(=O)C(N)CSSCC(C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GXBMIBRIOWHPDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 claims description 3
- KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N argipressin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N1)=O)N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(N)=O)C1=CC=CC=C1 KBZOIRJILGZLEJ-LGYYRGKSSA-N 0.000 claims description 3
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N oxytocin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 XNOPRXBHLZRZKH-DSZYJQQASA-N 0.000 claims description 3
- 229960001723 oxytocin Drugs 0.000 claims description 3
- 229940075620 somatostatin analogue Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003726 vasopressin Drugs 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 claims description 2
- 230000001452 natriuretic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 claims 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 39
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 39
- 239000000047 product Substances 0.000 description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 28
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 23
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 19
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 19
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 19
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 13
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 8
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 8
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 8
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MUVQIIBPDFTEKM-IUYQGCFVSA-N (2r,3s)-2-aminobutane-1,3-diol Chemical compound C[C@H](O)[C@H](N)CO MUVQIIBPDFTEKM-IUYQGCFVSA-N 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 5
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 5
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 5
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N anhydrous collidine Natural products CC1=CC=NC(C)=C1C HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N collidine Natural products CC1=CC=C(C)C(C)=N1 UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 4
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 3
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 229940069428 antacid Drugs 0.000 description 3
- 239000003159 antacid agent Substances 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N (2r)-3-(acetamidomethylsulfanyl)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CSCNC(=O)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NCCCC[C@H](N)C(O)=O VVQIIIAZJXTLRE-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ZPGDWQNBZYOZTI-UHFFFAOYSA-N 1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZPGDWQNBZYOZTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(4-carboxyphenyl)phenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)C(O)=O)C=C1 FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical class [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N D-arginine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000003323 beak Anatomy 0.000 description 2
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002833 natriuretic agent Substances 0.000 description 2
- 239000000692 natriuretic peptide Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 108010068072 salmon calcitonin Proteins 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- HNICLNKVURBTKV-MUUNZHRXSA-N (2r)-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C HNICLNKVURBTKV-MUUNZHRXSA-N 0.000 description 1
- GVIXTVCDNCXXSH-AWEZNQCLSA-N (2s)-2-amino-5-[[amino-[(2,2,4,6,7-pentamethyl-3h-1-benzofuran-5-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C1=C(C)C(C)=C2OC(C)(C)CC2=C1C GVIXTVCDNCXXSH-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CNLWNYCFDMAZCB-HUVROIHYSA-N 2-[2-[[2-[[(2r)-1-[[(4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-16-benzyl-4-[[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]carbamoyl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicos-19-yl]amino]-1-oxo-3-phe Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)NC(=O)CN(CCN(CCN(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)C1=CC=CC=C1 CNLWNYCFDMAZCB-HUVROIHYSA-N 0.000 description 1
- 206010000599 Acromegaly Diseases 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 1
- 125000003941 D-tryptophan group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C(C([C@@](N([H])[H])(C(=O)[*])[H])([H])[H])=C([H])N([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical class [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001414 amino alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004202 aminomethyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/585—Calcitonins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/067—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for sulfur-containing functions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/655—Somatostatins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/655—Somatostatins
- C07K14/6555—Somatostatins at least 1 amino acid in D-form
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/75—Fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/50—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link
- C07K7/54—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring
- C07K7/56—Cyclic peptides containing at least one abnormal peptide link with at least one abnormal peptide link in the ring the cyclisation not occurring through 2,4-diamino-butanoic acid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Procedimiento para la preparación de péptidos cíclicos, que comprende las etapas siguientes: a) proporcionar un péptido lineal protegido que contiene por lo menos dos residuos protegidos que contienen tiol, de los cuales por lo menos un residuo que contiene tiol está protegido con un grupo protector ortogonal; b) hacer reaccionar el péptido lineal protegido con una composición acídica con el fin de preparar un péptido lineal semiprotegido en el que el grupo protector ortogonal se encuentra en uno de los residuos que contienen tiol; c) purificar el péptido lineal semiprotegido; d) tratar el péptido lineal semiprotegido purificado que se ha obtenido en la etapa (c) con un agente oxidante con el fin de preparar un péptido cíclico; y e) purificar el péptido cíclico con el fin de obtener un péptido cíclico purificado.
Description
Procedimiento para la producción de péptidos
cíclicos.
La presente solicitud reivindica los beneficios
de la solicitud provisional US nº de serie 60/461.222, presentada
el 7 de abril de 2003, cuyo contenido se incorpora a la presente
memoria.
La presente invención comprende procedimientos
para la preparación y purificación de péptidos cíclicos.
La somatostatina es conocida por poseer un
potencial terapéutico muy amplio y puede administrarse en una amplia
variedad de aplicaciones clínicas. La vida media de la
somatostatina en el plasma es sumamente corta, reduciendo por
consiguiente el número potencial de posibles aplicaciones de este
reactivo. Se realizaron investigaciones con el fin de desarrollar
análogos de somatostatina que presenten mayor estabilidad y
eficacia. Una serie de compuestos que se evaluaron con análogos de
somatostatina potencialmente útiles fueron los octapéptidos
cíclicos. La evaluación del octapéptido cíclico, octreótido,
demostró que el compuesto tenía actividad biológica excelente tanto
in vitro como in vivo (Pless J., Metabolism 41,
5-6 (1992)). El octreótido presenta la fórmula
básica siguien-
te:
te:
\vskip1.000000\baselineskip
- (SEC. ID nº: 1)
\vskip1.000000\baselineskip
en la que los átomos de azufre de
los residuos Cys en las posiciones 2 y 7 están unidos por un puente
disulfuro. El grupo carboxilo del aminoácido
C-terminal, treonina (Thr), se reduce al residuo
alcohólico Thr-ol
(treoninol).
La presencia de D-fenilalanina
(D-Phe) y el extremo N-terminal de
un aminoalcohol en el extremo C-terminal, junto con
el residuo D-triptófano (D-Trp) y el
puente disulfuro, hacen a la molécula muy resistente a la
degradación metabólica. El octreótido permite una incubación de 24
horas en medios agresivos, tales como en los jugos gástricos o en
la mucosa intestinal.
El octreótido inhibe la hormona del crecimiento
durante un periodo prolongado, inhibe la secreción del glucagón en
un grado menor e inhibe la secreción de insulina solamente de manera
transitoria. Por lo tanto, el octreótido es más selectivo que otros
análogos de somatostatina en la regulación de los niveles de la
hormona de crecimiento en el cuerpo y por consiguiente, actualmente
está indicada en la acromegalia para controlar y reducir las
concentraciones en el plasma de dicha hormona. Asimismo, el
octreótido es útil en el tratamiento de alteraciones celulares de
origen endocrino gastroenteropancreático y de determinados tipos de
tumores.
La síntesis de octreótido y sus derivados ha
sido descrita por dos métodos de síntesis general. El primer método
es un procedimiento en fase de solución, basado en la condensación
del fragmento, tal como es descrito por Bauer et al.
solicitud de patente europea nº 29.579 (1981) y patente U.S. nº
4.395.403. El procedimiento comprende generalmente la eliminación
de un grupo protector de un residuo de hexapéptido protegido;
enlazando junto con dos unidades peptídicas por un enlace amida, en
el que uno comprende un residuo de hexapéptido, un consumo de
tiempo, síntesis multietapa y presenta problemas adicionales durante
la separación del octreótido de las mezclas de reacción porque
todas las etapas de síntesis se realizan en fase de solución.
El segundo método para la síntesis de octreótido
sintetiza la cadena peptídica completa utilizando la síntesis del
péptido en fase sólida, utilizando la síntesis en el residuo de
treoninol. Este método requiere que el residuo de treoninol esté
protegido.
El segundo procedimiento de síntesis, utiliza
una resina de aminometilo en la que el residuo de treoninol se
incorpora con las dos funciones alcohólicas protegidas en forma de
acetal. Mergler et al., "Peptides: Chemistry and
Biology", Proceedings of the 12th American Peptide
Symposium, Poster 292 Presentation (Smith, J. A. y Rivier J.
E., eds. ESCOM, Leiden). La síntesis se realiza siguiendo un esquema
de protección Fmoc/t-Bu; formando el puente
disulfuro en una resina por oxidación de los grupos tiol de los
residuos de cisteína desprotegidos previamente; y liberando y
desprotegiendo el péptido con una mezcla de TFA/DCM al 20%.
Alsina et al. describieron la
incorporación del residuo de treoninol a resinas de carbonato
activas en las que el grupo amino protegido por un grupo Boc y la
cadena lateral protegida por un grupo Bzl. Alsina et al.,
Tetrahedron Letters, 38, 883-886 (1997). A
continuación, se continuó con la síntesis utilizando una estrategia
Boc/Bzl. La formación del puente disulfuro se realizó directamente
en la resina utilizando yodo, y el péptido se escindió de la resina
y sus grupos protectores de la cadena lateral se eliminaron
simultáneamente con HF/anisol (9/1). En la etapa final el grupo
formilo se eliminó con una solución de piperidina/DMF. Neugebauer
et al. describieron una síntesis lineal con un campo de
solamente 7%. Neugebauer et al., PEPTIDES: CHEMISTRY, STRUCTURE
AND BIOLOGY, pág. 1.017 (Marshal G. R. y Rivier J. E., eds.
ESCOM, Leiden, 1990).
Edwards et al. dio a conocer una
aproximación del tipo en fase sólida mediante la síntesis paso a
paso en una resina del péptido
D-Phe-Cys(Acm)-Phe-D-Trp(Boc)-Lys(Boc)-Thr(t-Bu)-Cys(Acm)-HMP-resina
(SEC. ID nº: 1). Edwards et al., J. Med. Chem. 37,
3749-3757 (1994). Posteriormente, se preparó el
disulfuro sobre la resina, y el producto resultante se liberó de la
resina por medio de aminolisis con treoninol. El rendimiento total
publicado fue solamente de 14%.
Arano et al. realizó otro método en fase
sólida para DTPA-octreótido. Arano et al.,
Bioconjugate Chem, 8, 442-446 (1997). La
oxidación en yodo del DTPA-péptido produjo
DTPA-D-Phe-octreótido
con un rendimiento general de 31,8% basado en la
Fmoc-Thr(tBu)-ol-resina
de partida.
Wu et al. desarrolló un método de
síntesis para octreótido, en el que se formó el puente disulfuro
mediante oxidación utilizando una solución diluida de octreótido
con aire durante 48 horas. Wu et al., Tetrahedron Letters,
39, 1783-1784 (1998). Lee et al., realizaron
recientemente un nuevo método para anclar Thr(ol) (o
Thr-ol) a una resina de síntesis en fase sólida para
la preparación de octreótido. Véase la patente U.S. nº 5.889.146.
Se cargó
Fmoc-Thr(ol)-tereftal-acetal
en la resina y tras la construcción de las cadenas peptídicas que
utilizan la química del Fmoc, se obtuvo la ciclación del péptido en
la resina por oxidación con yodo. La escisión de
péptido-resina con ácido trifluoroacético, produjo
octreótido con un rendimiento general de >70% a partir de la
Fmoc-Thr(ol)-tereftal-acetal-resina
de partida. Todos estos productos completaban la ciclación del
octreótido ya sea en el péptido totalmente desprotegido o en la
resina.
Más análogos cíclicos, cíclicos puenteados y de
cadena lineal de somatostatina y métodos para su preparación se
describen en las patentes U.S. nº 4.310.518 y nº 4.235.886; memorias
de las patentes europeas EP-A-1295;
70.021; 113.209; 215.171; 203.031; 214.872 y 143.307; y la memoria
de la patente belga
BE-A-900.089.
La presente invención comprende procedimientos
para la preparación y purificación de péptidos cíclicos. En una
forma de realización, los procedimientos comprenden (a) proporcionar
un péptido lineal protegido, en el que el péptido contiene por lo
menos dos residuos que contienen tiol protegido, de los cuales por
lo menos uno está protegido con un grupo protector ortogonal; (b)
hacer reaccionar el péptido lineal protegido con una composición
ácida para producir un péptido lineal semiprotegido protegido con el
grupo protector ortogonal en uno de los residuos que contienen
tiol; (c) purificar el péptido lineal semiprotegido por
cromatografía; (d) tratar el péptido lineal semiprotegido
purificado obtenido en la etapa (c) con un agente oxidante para
producir un péptido cíclico desprotegido; y (e) purificar el péptido
cíclico desprotegido por cromatografía. En una forma de
realización, el procedimiento comprende además la neutralización del
agente oxidante en exceso después de la etapa (d). En otra forma de
realización, el agente oxidante puede ser yodo.
En una forma de realización preferida de la
invención, el péptido cíclico se selecciona de entre el grupo
constituido por análogos de somatostatina, péptidos relacionados con
la vasopresina, factores/péptidos natriuréticos
\alpha-auriculares (ANF/ANP), calcitoninas y otros
péptidos que contienen disulfuro. En una forma de realización más
preferida, el péptido cíclico es octreótido, calcitonina (salmón),
desmopresina, oxitocina, nesiritida o eptifibatida.
En otra forma de realización todavía de la
invención, el péptido lineal de la etapa (a) se une a una resina o
en solución.
En otra forma de realización de la invención, el
grupo protector ortogonal es acetamidometilo, bencilo,
4-metoxibencilo, terc-butilo,
trimetilacetamidometilo, fenilacetamidometilo o
terc-butilmercapto. Preferentemente, el grupo
ortogonal es un grupo protector lábil no ácido tal como
acetamidometilo (AMC).
Una forma de realización de la invención
comprende un procedimiento para la preparación de un péptido cíclico
con una pureza de por lo menos aproximadamente 98,5% por HPLC y
preferentemente, por lo menos aproximadamente 99% por HPLC. Otra
forma de realización de la invención consiste en la preparación de
un péptido cíclico a alta pureza, mediante un procedimiento en el
que el producto de la reacción en la escisión en una resina soporte,
cuando se acopla a una resina soporte, está parcialmente
desprotegido y lleva por lo menos un grupo protector acoplado a un
residuo que contiene tiol.
Otra forma de realización de la invención
comprende un procedimiento que emplea ACM como grupo protector para
los residuos de cisteína.
La invención comprende métodos para la
preparación de polipéptidos. Más específicamente, la invención
comprende métodos para la preparación de polipéptidos cíclicos en
los que por lo menos un grupo protector acoplado a residuos que
contienen tiol, tales como residuos de cisteína, no se escinde o
desprotege de los residuos que contienen tiol en las condiciones
requeridas para la escisión de otros grupos protectores. Por lo
tanto, la cadena peptídica no está completamente desprotegida, pero
lleva por lo menos un grupo protector acoplado a un residuo que
contiene tiol. Específicamente, la invención comprende
procedimientos para la preparación de péptidos cíclicos
seleccionados de entre el grupo constituido por análogos de
somatostatina, péptidos relacionados con vasopresina,
factores/péptidos natriuréticos \alpha-auriculares
(ANF/ANP), calcitoninas y otros péptidos que contienen disulfuro.
Más específicamente, el péptido cíclico se selecciona de entre el
grupo constituido por octreótido, calcitonina (salmón),
desmopresina, oxitocina, nesiritida y eptifibatida.
La nesiritida presenta la secuencia peptídica
siguiente:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
La eptifibatida presenta la secuencia peptídica
siguiente:
El producto de reacción puede purificarse para
obtener un péptido cíclico de alta pureza. Tal como se utiliza en
la presente memoria, la expresión "alta pureza" se refiere a
una composición que comprende por lo menos aproximadamente el 98,5%
determinado por HPLC, y preferentemente por lo menos aproximadamente
el 99% determinado por HPLC. Tal como se utiliza en la presente
memoria, la expresión "péptido cíclico" se refiere a un péptido
que contiene por lo menos dos (2) residuos que contienen tiol
conectados por un puente disulfuro.
La síntesis del péptido semiprotegido puede
realizarse por métodos conocidos para la síntesis de péptidos, por
ejemplo, sobre un soporte sólido o en solución, entre otros. El
procedimiento de la invención para la preparación de péptidos
cíclicos es un procedimiento en el que por lo menos un residuo del
material de partida que contiene tiol está protegido por un grupo
protector ortogonal que no se escinde o desprotege de un residuo
que contiene tiol en las condiciones requeridas para la escisión de
otros grupos protectores o la escisión del péptido de la resina.
Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "grupo
protector ortogonal" se refiere a un grupo protector que es
químicamente resistente en una serie de condiciones seleccionadas,
pero es susceptible en otra serie de condiciones. Los grupos
protectores ortogonales comprenden, pero no se limitan a, por lo
menos uno de entre acetamidometilo (Acm), bencilo (Bzl),
4-metoxibencilo (Mob), terc-butilo
(Tbu o t-Bu), trimetilacetamidometilo (Tacm),
fenilacetamidometilo (Phacm) o terc-butilmercapto
(StBu). Preferentemente, el grupo protector ortogonal es un grupo
lábil no ácido tal como acetamidometilo. Por lo tanto, en el
procedimiento de la presente invención, la cadena peptídica no está
completamente desprotegida después de la desprotección o escisión,
pero lleva por lo menos un grupo protector unido a un residuo que
contiene tiol (un polipéptido semiprotegido). Opcionalmente, el
polipéptido semiprotegido puede purificarse utilizando alguno de los
métodos adecuados. Posteriormente, los grupos protectores restantes
en el polipéptido semiprotegido se eliminan y se forma un puente
disulfuro para obtener un péptido cíclico utilizando cualquier
método convencional. Por ejemplo, un método incluye, pero no se
limita a, la oxidación de tiol mediante un agente oxidante tal como
el yodo. El péptido cíclico se purifica por métodos adecuados para
obtener un péptido cíclico de alta pureza. Opcionalmente, si está
presente, el agente oxidante en exceso puede neutralizarse antes de
la purificación. Preferentemente, la purificación se realiza
utilizando HPLC.
Para una mayor claridad y como ayuda para la
comprensión de la invención, se definen a continuación los
siguientes términos y abreviaturas, dados a conocer y reivindicados
en la presente memoria:
- TIS -
- triisopropilsilano
- Trt -
- tritilo
- Mpa -
- ácido mercaptopropiónico.
En un polipéptido, uno o más de los residuos que
contienen tiol se protegen utilizando un grupo protector ortogonal
tal como acetamidometilo (Acm). Cuando se utiliza Acm como grupo
protector del residuo que contiene tiol, la escisión acidolítica
del péptido proporcionará una secuencia peptídica que lleva un grupo
Acm. Por ejemplo, en la preparación de octreótido, si se utiliza
Acm como grupo protector de un primer residuo que contiene tiol, p.
ej., el residuo cisteína acoplado a Thr-ol, la
escisión acidolítica del péptido proporcionará una secuencia
peptídica que lleva un grupo Acm, por ejemplo,
D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(Acm)-Thr(ol).
Los péptidos pueden ser caracterizados mediante un perfil
específico de impurezas relacionadas observadas por análisis de
HPLC. Algunas de estas impurezas se separan fácilmente del pico
principal mientras que otras eluyen más estrechamente con el pico
principal. La purificación burda por HPLC de preparación produce el
péptido parcialmente protegido con una pureza de por lo menos
aproximadamente el 95%, preferentemente de por lo menos
aproximadamente el 98,5% y más preferentemente, de por lo menos
aproximadamente el 99% determinadas por HPLC, y a una concentración
de aproximadamente 0,1 g/l a aproximadamente 10 g/l. La adición de
una cantidad aproximadamente equivalente de un agente oxidante, tal
como yodo, produce la desprotección del grupo protector ortogonal y
la ciclación simultánea de la molécula mediante un puente disulfuro.
Una evaluación del perfil cromatográfico en esta etapa demuestra
claramente que alguna de las impurezas que se eluyeron anteriormente
próximas al pico principal son ahora distintas del pico de
producto. Por lo tanto, el producto puede purificarse fácilmente
una segunda vez por métodos tales como HPLC u otros métodos
conocidos para obtener un péptido purificado tal como octreótido en
alta pureza. Por estos medios, el producto de alta pureza se obtiene
fácilmente con alto rendimiento sin necesidad de varios ciclos de
reciclado que requieren grandes volúmenes de disolventes, tiempo de
operación prolongado y producen una pureza menor y un rendimiento
menor del producto final en comparación con los métodos
convencionales utilizados actualmente.
El procedimiento para la síntesis del péptido
según una forma de realización de la invención se realiza mediante
el esquema siguiente:
- a)
- Proporcionar una secuencia peptídica que contiene por lo menos dos residuos que contienen tiol protegido, de los cuales por lo menos uno está protegido con un grupo protector lábil no ácido;
- b)
- Escisión de grupos protectores sensibles ácidos que utilizan una composición ácida que comprende varios antioxidantes para formar un péptido lineal semiprotegido;
- c)
- Purificación burda del péptido lineal semiprotegido por un método cromatográfico adecuado;
- d)
- Desprotección del grupo protector lábil no ácido residual del péptido lineal semiprotegido, y ciclación del péptido lineal mediante la formación de enlace disulfuro por un método adecuado para formar una solución del péptido cíclico en bruto; y
- e)
- Purificación de la solución del péptido cíclico en bruto por un método de separación adecuado para obtener un producto del péptido cíclico.
La solución del péptido resultante puede secarse
para obtener un producto del péptido cíclico anhidro. Cuando el
péptido se sintetiza en una fase sólida, dicha resina y los grupos
protectores ortogonales son grupos lábiles no ácidos, la
composición ácida utilizada para la desprotección de los grupos
protectores ácidos sensibles escinde asimismo el péptido
semiprotegido resultante de la resina.
Un ejemplo particular del procedimiento para la
síntesis del péptido descrita anteriormente comprende las etapas
siguientes:
- 1.
- Preparación de una secuencia del péptido protegido en una resina. Por ejemplo, en la preparación de octreótido, un material de partida adecuado puede ser la resina Thr(ol)(t-Bu)-2-clorotritilo. A continuación, se sintetiza un péptido lineal mediante un ciclo de operaciones repetitivas en el orden siguiente.
- 1.1.
- Acoplamiento de un aminoácido Fmoc-protegido adecuado con un reactivo de acoplamiento adecuado al grupo amino terminal acoplado a la resina para formar un fragmento del péptido Fmoc-protegido acoplado a la resina.
- 1.2.
- Lavado del producto de la etapa 1.1 con por lo menos un disolvente para eliminar todos los compuestos solubles de la resina.
- 1.3.
- Desprotección del grupo Fmoc.
- 1.4.
- Lavado con por lo menos un disolvente para eliminar todos los compuestos solubles de la resina.
- 1.5.
- Adición de residuos de aminoácidos adicionales según la secuencia requerida, seguido de lavado con por lo menos un disolvente y desprotección del grupo Fmoc si es necesario.
- 1.6.
- Acoplamiento del último aminoácido D-Phe (N-protegido).
- 1.7.
- Lavado y secado del péptido-resina.
- 2.
- Escisión del péptido lineal intermedio (protegido parcialmente) de la resina y desprotección simultánea de los grupos protectores sensibles al ácido utilizando una composición ácida que comprende ácido trifluomacético (TFA) y varios antiácidos para formar un péptido lineal semiprotegido.
- 3.
- Purificación burda del péptido lineal semiprotegido por un método cromatográfico adecuado.
- 4.
- Desprotección del grupo protector residual del péptido lineal semiprotegido.
- 5.
- Ciclación del péptido lineal mediante la formación del enlace disulfuro por un método adecuado para formar una solución del péptido cíclico en bruto.
- 6.
- Purificación de la solución del péptido cíclico en bruto por un método de separación adecuado.
Al sintetizar el péptido en un soporte sólido,
las resinas adecuadas para su utilización en el procedimiento
incluyen, pero no se limitan a, resinas de clorotritilo. Los agentes
de acoplamiento adecuado incluyen, pero no se limitan a,
tetrafluoroborato de
2-(1H-benzotriol-1-il)-1-1,3,3-tetrametiluronio
(TBTU). Los disolventes adecuados para su utilización en las etapas
de lavado del procedimiento incluyen, pero no se limitan a
dimetilformamida (DMF), diclorometano (DCM), metanol (MeOH) o
isopropanol (IPA). Los grupos protectores adecuados para el residuo
de aminoácido terminal incluyen, pero no se limitan a,
9-fluorenilmetoxicarbonilo (Fmoc) o Boc. Los grupos
protectores adecuados para los residuos de cisteína incluyen Acm. El
grupo protector del residuo aminoácido terminal se elimina por
cualquier método conocido, tal como la reacción con solución de
piperidina en DMF. Si bien un experto en la materia puede sustituir
los reactivos por otros reactivos adecuados.
La escisión del compuesto intermedio lineal
parcialmente protegido del soporte de resina puede efectuarse
mediante la adición de una composición ácida. La composición ácida
se basa preferentemente en un material ácido tal como TFA, y
contiene reactivos antioxidantes que incluyen, pero no se limitan a,
etanoditiol (EDT) y agua. La proporción relativa de material ácido
a antiácido a agua puede ser desde aproximadamente 85% a
aproximadamente 99% de material ácido, desde aproximadamente 0,1% a
aproximadamente 15% de antiácido, y desde aproximadamente 0,1% a
aproximadamente 15% de agua en peso. Una composición ácida preferida
comprende aproximadamente 95% de TFA, aproximadamente 2,5% de EDT y
aproximadamente 2,5% de agua.
El producto del péptido en bruto puede
purificarse por cualquier método conocido. Preferentemente, el
péptido se purifica utilizando HPLC en una columna en fase inversa
(RP). El producto purificado resultante se seca y puede
liofilizarse.
Las formas de realización particulares del
procedimiento de la presente invención incluyen, pero no se limitan
a, la síntesis de octreótido, eptifibatida, desmopresina y
calcitonina de salmón, como se ejemplifica a continuación.
Una forma de realización de la presente
invención proporciona un procedimiento para la preparación de
octreótido que comprende las etapas siguientes:
- a)
- proporcionar un péptido lineal protegido de fórmula X-D-Phe-Cys(X)-Phe-D-Trp-Lys(X)-Thr(X)-Cys (Acm)-Tbr(X)-ol en la que X es el mismo o diferentes grupos protectores;
- b)
- hacer reaccionar el péptido lineal de la etapa (a) con una composición ácida para producir D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(Acm)-Thr-ol;
- c)
- purificar el producto de la etapa b) por HPLC;
- d)
- tratar el péptido lineal resultante de la etapa (c) con un agente oxidante para producir D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol (2,7 cíclico) y
- e)
- purificar el producto de la etapa (d) por HPLC.
Otra forma de realización de la presente
invención proporciona un procedimiento para la preparación de
eptifibatida que comprende las etapas siguientes:
- a)
- proporcionar un péptido lineal protegido de fórmula Mpa(X)-Har(X)-Gly-Asp(X)-Trp-Pro-Cys(Acm) en la que X es el mismo o diferentes grupos protectores;
- b)
- hacer reaccionar el péptido lineal de la etapa (a) con una composición ácida para producir Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH_{2};
- c)
- purificar el producto de la etapa b) por HPLC;
- d)
- tratar el péptido lineal resultante de la etapa (c) con un agente oxidante para producir Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH_{2} (1,7 cíclico) y
- e)
- purificar el producto de la etapa (d) por HPLC.
Todavía otra forma de realización de la presente
invención proporciona un procedimiento para la preparación de
desmopresina que comprende las etapas siguientes:
- a)
- proporcionar un péptido lineal protegido de fórmula Mpa(X)-Tyr(X)-Phe-Gln(X)-Asn(X)- Cys(Acm)-Pro-D-Arg(X)-Gly en la que X es el mismo o diferentes grupos protectores;
- b)
- hacer reaccionar el péptido lineal de la etapa (a) con una composición ácida para producir Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn- Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2};
- c)
- purificar el producto de la etapa b) por HPLC;
- d)
- tratar el péptido lineal resultante de la etapa (c) con un agente oxidante para producir Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2} (1,6 cíclico) y
- e)
- purificar el producto de la etapa (d) por HPLC.
Otra forma de realización de la presente
invención proporciona un procedimiento para la preparación de
calcitonina (salmón) que comprende las etapas siguientes:
- a)
- proporcionar un péptido lineal protegido de fórmula Cys(X)-Ser(X)-Asn(X)-Leu-Ser(X)-Thr(X)-Cys (Acm)-Val-Leu-Gly-Lys(X)-Leu-Ser(X)-Gln(X)-Glu(X)-Leu-His(X)-Lys(X)-Leu-Gln(X)-Thr(X)-Tyr(X)-Pro-Arg(X)-Thr(X)-Asn(X)-Thr(X)-Gly-Ser(X)-Gly-Thr(X)-Pro en la que X es el mismo o diferentes grupos protectores;
- b)
- hacer reaccionar el péptido lineal de la etapa (a) con una composición ácida para producir Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH_{2};
- c)
- purificar el producto de la etapa b) por HPLC;
- d)
- tratar el péptido lineal resultante de la etapa (c) con un agente oxidante para producir Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH_{2} (1,7 cíclico) y
- e)
- purificar el producto de la etapa (d) por HPLC.
Aunque la presente invención se describe con
respecto a ejemplos particulares y formas de realización preferidas,
se entiende que la presente invención no se limita a estos ejemplos
y formas de realización. La presente invención tal como se
reivindica incluye por lo tanto variaciones de los ejemplos
particulares y de las formas de realización preferidas descritas en
la presente memoria, como resultará evidente para un experto en la
materia.
La síntesis del péptido se realizó por un
procedimiento SPPS (síntesis de péptido en fase sólida) con Fmoc
paso a paso partiendo de la resina
Thr(t-Bu)-ol-2-Cl-Trt
(100 g, carga de 0,7 mmoles en 1 g de resina precargada).
Tras el lavado de la resina se introdujo el segundo aminoácido
(Fmoc-Cys(Acm)) para comenzar la primera
etapa de acoplamiento. El aminoácido protegido por Fmoc se activó
in situ utilizando TBTU/HOBt
(N-hidroxibenzotriazol) y se acopló posteriormente a
la resina durante 50 minutos. Se utilizó diisopropiletilamina
durante el acoplamiento como base orgánica. La terminación del
acoplamiento fue indicada por la prueba de ninhidrina. Después del
lavado de la resina, el grupo protector Fmoc en la
\gamma-amina se eliminó con piperidina al 20% en
DMF durante 20 min. Estas etapas se repitieron cada vez con otro
aminoácido según la secuencia peptídica. Todos los aminoácidos
utilizados estaban protegidos por Fmoc-N^{V}
excepto el último aminoácido de la secuencia,
Boc-D-Phe. Los aminoácidos
trifuncionales eran cadenas laterales protegidas de la forma
siguiente: Thr(t-Bu), Cys(Trt),
Cys(Acm) y Lys(Boc). Se emplearon tres equivalentes de
los aminoácidos activados en las reacciones de acoplamiento. Al
final de la síntesis se lavó el péptido-resina con
DMF, seguido de DCM, y se secó al vacío para obtener 223 g de
péptido-resina seca.
El péptido, preparado tal como se describió
anteriormente, se escindió de la resina utilizando una solución de
TFA al 95%, TIS al 2,5%, EDT al 2,5% durante 2 horas a temperatura
ambiente. El producto se precipitó mediante la adición de 10
volúmenes de éter, se filtró y se secó al vacío para obtener 111,7 g
de polvo. Se identificó mediante LC/MS como
H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(Acm)-Thr-ol.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El péptido en bruto
H-D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(Acm)-Thr-ol
(SEC. ID nº: 1) (100 g, preparado como se describió en el
ejemplo (1) se purificó en una columna RP-HPLC
C_{18} de preparación. Las fracciones que contenían >95% de
producto puro se combinaron y diluyeron a concentraciones de
aproximadamente 1 g/l. Se añadió una cantidad equimolar de yodo en
ácido acético bajo mezclado intenso a temperatura ambiente y
posteriormente el yodo en exceso se neutralizó mediante una pequeña
cantidad de ácido ascórbico. La solución resultante se cargó en una
columna RP-HPLC C_{18} y se purificó para obtener
fracciones que contenían trifluoroacetato de octreótido a una
pureza de >98,5%. Después del tratamiento para sustituir el
trifluoroacetato, se recogieron las fracciones y se liofilizaron
para obtener el péptido anhidro final. El rendimiento fue de 33 g
(>98,5% puro).
\vskip1.000000\baselineskip
La síntesis del péptido se realizó por un
procedimiento SPPS (síntesis de péptido en fase sólida) con Fmoc
regular paso a paso partiendo de la resina
2-Cl-Trt (50 g). El primer
aminoácido (Fmoc-Cys(Acm)) se cargó en la
resina en una etapa preliminar para proporcionar la carga de
aproximadamente 0,7 mmoles/g. Tras el lavado de la resina, se
introdujo un segundo aminoácido (Fmoc-Pro) para
iniciar la primera etapa de acoplamiento. El aminoácido protegido
por Fmoc se activó in situ utilizando TBTU/HOBt y
posteriormente se acopló a la resina durante 50 minutos. Se utilizó
diisopropiletilamina o colidina durante el acoplamiento como base
orgánica. La terminación del acoplamiento fue indicada por la
prueba de ninhidrina. Después del lavado de la resina, el grupo
protector Fmoc en la \alpha-amina se eliminó con
piperidina al 20% en DMF durante 20 min. Estas etapas se repitieron
cada vez con otro aminoácido según la secuencia peptídica. Todos los
aminoácidos utilizados estaban protegidos con
Fmoc-N^{\alpha} excepto el último aminoácido de la
secuencia, Trt-Mpa. Los aminoácidos trifuncionales
eran cadenas laterales protegidas de la forma siguiente:
Asp(t-Bu), Har(Pbf) y Cys(Acm).
Se emplearon tres equivalentes de los aminoácidos activados en las
reacciones de acoplamiento. Al final de la síntesis se lavó el
péptido-resina con DMF, seguido de DCM, y se secó al
vacío para obtener 80 g de péptido-resina seca.
El péptido, preparado como se describió
anteriormente, se escindió de la resina lavando con una solución de
TFA al 1% en DCM. La solución resultante se neutralizó por adición
de DIPEA y se concentró hasta aproximadamente el 10% de contenido
en péptido. La amidación del terminal C se consiguió mediante la
activación del terminal carboxi con DCC/HOBt y acoplamiento con
solución de amoniaco en IPA. Tras la eliminación del disolvente se
precipitó el péptido protegido en éter y se secó. Los grupos
protectores se eliminaron utilizando una solución de TFA al 95%,
TIS al 2,5%, EDT al 2,5% durante 2 horas a temperatura ambiente. El
producto se precipitó mediante la adición de 10 volúmenes de éter,
se filtró y se secó al vacío para obtener 30 g de producto.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
El péptido
Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH_{2}
en bruto (30 g, preparado como se describe en el ejemplo 3) se
purificó en una columna RP-HPLC C_{18} de
preparación. Las fracciones que contenían >95% del producto puro
se combinaron y diluyeron a concentraciones de aproximadamente 1
g/l. Una cantidad equimolar de yodo en ácido acético se añadió en
mezclado intenso a temperatura ambiente y se neutralizó a
continuación el exceso de yodo mediante una cantidad pequeña de
ácido ascórbico. La solución resultante se cargó en una columna
RP-HPLC C_{18} y se purificó para obtener
fracciones que contenían trifluoroacetato de eptifibatida con una
pureza de >98,5%. Se recogieron las fracciones y se liofilizaron
para obtener 6,9 g de péptido anhidro final (>98,5% puro).
La síntesis del péptido se realizó por un
procedimiento SPPS con Fmoc regular paso a paso partiendo de la
resina amídica de Rink (50 g). Se cargó el primer aminoácido
(Fmoc-Gly) en la resina mediante un procedimiento
de acoplamiento regular tras la eliminación del grupo Fmoc de la
resina. Tras el lavado de la resina se introdujo el segundo
aminoácido (Fmoc-D-Arg(Pbf))
para continuar el alargamiento de la secuencia. Los aminoácidos
protegido por Fmoc se activaron in situ utilizando TBTU/HOBt
y posteriormente se acoplaron a continuación a la resina durante 50
minutos. Se utilizó diisopropiletilamina o colidina durante el
acoplamiento como base orgánica. La terminación del acoplamiento
fue indicada por la prueba de ninhidrina. Después del lavado de la
resina, el grupo protector Fmoc en la
\gamma-amina se eliminó con piperidina al 20% en
DMF durante 20 min. Estas etapas se repitieron cada vez con otro
aminoácido según la secuencia peptídica. Todos los aminoácidos
utilizados estaban protegidos por Fmoc-N^{\alpha}
excepto el último bloque de construcción en la secuencia,
Trt-Mpa. Los aminoácidos trifuncionales eran
cadenas laterales protegidas de la forma siguiente: Gln(Trt),
D-Arg(Pbf), Tyr(tBu) y
Cys(Acm). Se emplearon tres equivalentes de los aminoácidos
activados en las reacciones de acoplamiento. Al final de la
síntesis se lavó el péptido-resina con DMF, seguido
de DCM, y se secó al vacío para obtener 91 g de
péptido-resina seca.
El péptido, preparado tal como se describió
anteriormente, se escindió de la resina utilizando una solución de
TFA al 89%, fenol al 5,0%, TIS al 1,0%, EDT al 2,5%, solución acuosa
al 2,5% durante 1,5 horas a temperatura ambiente. El producto se
precipitó mediante la adición de 10 volúmenes de éter, se filtró y
se secó al vacío para obtener 49,0 g de polvo. Se identificó
mediante LC/MS como
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2}.
La síntesis del péptido se realiza por un método
regular de "síntesis en solución" paso a paso. Se disuelve el
segundo aminoácido
(Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH)
en DMF y se preactiva mediante la adición de TBTU/HOBt en presencia
de DIPEA. El primer aminoácido (Gly-NH_{2}) se
disuelve en DMF, se añade, y la reacción continua durante
aproximadamente 1 h a temperatura ambiente. Se elimina la DMF a baja
presión y el residuo se disuelve en acetato de etilo. Se lava la
solución orgánica varias veces con HCl acuoso (1 N), agua y
NaHCO_{3} (5%). Después se seca la solución sobre
Na_{2}SO_{4}, se evapora el disolvente para obtener
Fmoc-D-Arg(Pbf)-Gly-NH_{2}.
Se elimina el grupo Fmoc por disolución en piperidina/DMF (20%). La
solución se concentra y el dipéptido en bruto se precipita en éter
frío. Por un procedimiento similar se añaden sucesivamente el
residuo de aminoácidos para obtener el péptido lineal protegido
final. Los aminoácidos protegidos por Fmoc se activan in situ
utilizando TBTU/HOBt y se acoplan a continuación a la cadena del
péptido en crecimiento. Se utiliza disopropiletilamina o colidina
durante el acoplamiento como base orgánica. La terminación del
acoplamiento se determina por la prueba de HPLC o de TLC. Estas
etapas se repiten cada vez con otro aminoácido según la secuencia
del péptido. Todos los aminoácidos utilizados están protegidos con
Fmoc-N^{\alpha} excepto el último bloque de
construcción en la secuencia, Trt-Mpa. Los
aminoácidos trifuncionales están protegidos por la cadena lateral de
la forma siguiente: Gln(Trt),
D-Arg(Pbf), Tyr(tBu) y
Cys(Acm).
El péptido, preparado como se describió
anteriormente, se desprotege de sus grupos protectores
ácidos-lábiles utilizando un TFA al 91,5%, TIS al
1,0%, EDT al 2,5%, solución de agua al 5,0% durante 1,5 horas a
temperatura ambiente. El producto en bruto,
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2}
se precipita mediante la adición de 10 volúmenes de éter, se filtra
y se seca al vacío para obtener polvo fino. El producto se
identifica por LC/MS.
El péptido
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2}
(SEC. ID. nº: 3) en bruto (49 g, preparado como se describe en el
ejemplo 5) se purificó en una columna RP-HPLC
C_{18} de preparación. Las fracciones que contenían >95% del
producto puro se combinaron y diluyeron a concentraciones de
aproximadamente 1 g/l. Una cantidad equimolar de yodo en ácido
acético se añadió en mezclado intenso a temperatura ambiente y se
neutralizó a continuación el exceso de yodo mediante una cantidad
pequeña de ácido ascórbico. La solución resultante se cargó en una
columna RP-HPLC C_{18} y se purificó para obtener
fracciones que contenían trifluoroacetato de desmopresina con una
pureza de >98,5%. Tras el intercambio del contraión a acetato se
recogieron las fracciones y se liofilizaron para obtener 14,9 g de
péptido anhidro final (>99,0% puro).
La síntesis del péptido se realizó por un
procedimiento SPPS con Fmoc regular paso a paso partiendo de la
resina amídica de Rink (30 g). Se cargó el primer aminoácido
(Fmoc-Pro) en la resina mediante un procedimiento
de acoplamiento regular tras la eliminación del grupo Fmoc de la
resina. Tras el lavado de la resina se introdujo el segundo
aminoácido (Fmoc-Thr(tBu)) para continuar el
alargamiento de la secuencia. Los aminoácidos protegido por Fmoc se
activaron in situ utilizando TBTU/HOBt y se acoplaron a
continuación a la resina durante 60 minutos. Se utilizó
diisopropiletilamina o colidina durante el acoplamiento como base
orgánica. La terminación del acoplamiento fue indicada mediante la
prueba de ninhidrina. Después del lavado de la resina, el grupo
protector Fmoc en la \alpha-amina se eliminó con
piperidina al 20% en DMF durante 20 min. Estas etapas se repitieron
cada vez con otro aminoácido según la secuencia peptídica. Todos los
aminoácidos utilizados estaban protegidos por
Fmoc-N^{\alpha}. Los aminoácidos trifuncionales
eran cadenas laterales protegidas de la forma siguiente:
Cys(Trt), Ser(tBu), Asn(Trt), Gln(Trt),
Thr(tBu), Glu(tBu), His(Trt), Lys(Boc),
Arg(Pbf), Tyr(tBu) y Cys(Acm). Se emplearon
tres equivalentes de los aminoácidos activados en las reacciones de
acoplamiento. Al final de la síntesis se lavó el
péptido-resina con DMF, seguido de DCM, y se secó al
vacío para obtener 77 g de péptido-resina seca.
El péptido, preparado tal como se describió
anteriormente, se escindió de la resina utilizando una solución de
TFA al 94%, TIS al 1,0%, EDT al 2,5%, solución acuosa al 2,5%
durante 1,5 horas a temperatura ambiente. El producto se precipitó
mediante la adición de 10 volúmenes de éter, se filtró y se secó
al vacío para obtener 42,0 g de polvo. Se identificó por LC/MS como
Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH_{2}.
El péptido
Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH_{2}
en bruto (42 g, preparado como se describe en el ejemplo 7) se
purificó en una columna RP-HPLC C_{18} de
preparación. Las fracciones que contenían >95% del producto puro
se combinaron y diluyeron a concentraciones de aproximadamente 1
g/l. Una cantidad equimolar de yodo en ácido acético se añadió en
mezclado intenso a temperatura ambiente y se neutralizó a
continuación el exceso de yodo mediante una cantidad pequeña de
ácido ascórbico. La solución resultante se cargó en una columna
RP-HPLC C_{18} y se purificó para obtener
fracciones que contenían trifluoroacetato de calcitonina con una
pureza de >98,5%. Tras el intercambio del contraión a acetato se
recogieron las fracciones y se liofilizaron para obtener 8,8 g de
péptido anhidro final (>99,0% puro). El método analítico para la
cromatografía en fase inversa (HPLC) utilizó una columna C18 de 5
\mu, TFA al 0,05% en eluyente acetonitrilo/agua y un caudal de 1
ml/min.
Claims (20)
1. Procedimiento para la preparación de péptidos
cíclicos, que comprende las etapas siguientes:
a) proporcionar un péptido lineal protegido que
contiene por lo menos dos residuos protegidos que contienen tiol,
de los cuales por lo menos un residuo que contiene tiol está
protegido con un grupo protector ortogonal;
b) hacer reaccionar el péptido lineal protegido
con una composición acídica para producir un péptido lineal
semiprotegido con el grupo protector ortogonal en uno de los
residuos que contienen tiol;
c) purificar el péptido lineal
semiprotegido;
d) tratar el péptido lineal semiprotegido
purificado que se ha obtenido en la etapa (c) con un agente oxidante
con el fin de producir un péptido cíclico; y
e) purificar el péptido cíclico con el fin de
obtener un péptido cíclico purificado.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el péptido cíclico se selecciona de entre el grupo
constituido por análogos de somatostatina, péptidos relacionados
con la vasopresina, factores/péptidos
\alpha-atrial natriuréticos (ANF/ANP),
calcitoninas y otros péptidos que contienen disulfuro.
3. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el péptido cíclico se selecciona de entre el grupo
constituido por octreótido, calcitonina (salmón), desmopresina,
oxitocina, nesiritida y eptifibatida.
4. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el péptido lineal protegido proporcionado en la etapa (a) se
une a una resina.
5. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el péptido cíclico purificado de la etapa (e) posee una
pureza de por lo menos aproximadamente 98,5% por HPLC.
6. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el péptido cíclico purificado de la etapa (e) posee una
pureza de por lo menos aproximadamente 99% por HPLC.
7. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el grupo protector ortogonal es un grupo protector no ácido
lábil seleccionado de entre el grupo constituido por
acetamidometilo, bencilo, 4-metoxibencilo,
terc-butilo,
trimetil-acetamidometilo,
fenil-acetamidometilo y
terc-butilmercapto.
8. Procedimiento según la reivindicación 7, en
el que el grupo protector no ácido lábil es el acetamidometilo.
9. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende además neutralizar el agente oxidante que se encuentra en
exceso después de la etapa (d).
10. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende además secar el péptido cíclico purificado.
11. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que la composición acídica comprende ácido trifluoroacético.
12. Procedimiento según la reivindicación 11, en
el que la composición acídica comprende además triisopropilsilano y
etanoditiol.
13. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que el agente oxidante es yodo.
14. Procedimiento según la reivindicación 1, en
el que las etapas de purificación (d) y (e) se llevan a cabo
utilizando HPLC.
15. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende las etapas siguientes:
a) proporcionar un péptido lineal protegido que
presenta la fórmula
X-D-Phe-Cys(X)-Phe-D-Trp-Lys(X)-Thr(X)-Cys(Acm)-Thr(X)-ol,
en la que X es un mismo o diferente grupo protector;
b) hacer reaccionar el péptido lineal protegido
de la etapa (a) con una composición acídica con el fin de producir
un péptido lineal semiprotegido
D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys(Acm)-Thr-ol;
c) purificar el péptido lineal semiprotegido de
la etapa (b) utilizando HPLC;
d) tratar el péptido lineal semiprotegido
purificado de la etapa (c) con un agente oxidante con el fin de
producir un péptido cíclico
D-Phe-Cys-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Cys-Thr-ol
(2,7-cíclico); y
e) purificar el péptido cíclico de la etapa (d)
utilizando HPLC con el fin de obtener un péptido cíclico
purificado.
16. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende las etapas siguientes:
a) proporcionar un péptido lineal protegido que
presenta la fórmula
Mpa(X)-Har(X)-Gly-Asp(X)-Trp-Pro-Cys(Acm),
en la que X es un mismo o diferente grupo protector;
b) hacer reaccionar el péptido lineal protegido
de la etapa (a) con una composición acídica con el fin de producir
un péptido lineal semiprotegido
Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH_{2};
c) purificar el péptido lineal semiprotegido de
la etapa (b) utilizando HPLC;
d) tratar el péptido lineal semiprotegido
purificado de la etapa (c) con un agente oxidante con el fin de
producir un péptido cíclico
Mpa-Har-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys(Acm)-NH_{2}
(1,7-cíclico); y
e) purificar el péptido cíclico de la etapa (d)
utilizando HPLC con el fin de obtener un péptido cíclico
purificado.
17. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende las etapas siguientes:
a) proporcionar un péptido lineal protegido que
presenta la fórmula
Mpa(X)-Tyr(X)-Phe-Gln(X)-Asn(X)-Cys(Acm)-Pro-D-Arg(X)-Gly,
en la que X es un mismo o diferente grupo protector;
b) hacer reaccionar el péptido lineal protegido
de la etapa (a) con una composición acídica con el fin de producir
un péptido lineal semiprotegido
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2};
c) purificar el péptido lineal semiprotegido de
la etapa (b) utilizando HPLC;
d) tratar el péptido lineal semiprotegido
purificado de la etapa (c) con un agente oxidante con el fin de
producir un péptido cíclico
Mpa-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys(Acm)-Pro-D-Arg-Gly-NH_{2}
(1,6-cíclico); y
e) purificar el péptido cíclico de la etapa (d)
utilizando HPLC con el fin de obtener un péptido cíclico
purificado.
18. Procedimiento según la reivindicación 1, que
comprende las etapas siguientes:
a) proporcionar un péptido lineal protegido que
presenta la fórmula
Cys(X)-Ser(X)-Asn(X)-Leu-Ser(X)-Thr(X)-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys(X)-Leu-Ser(X)-Gln(X)-Glu(X)-Leu-His(X)-Lys(X)-Leu-Gln(X)-Thr(X)-Tyr(X)-Pro-
Arg(X)-Thr(X)-Asn(X)-Thr(X)-Gly-Ser(X)-Gly-Thr(X)-Pro-NH_{2}, en la que X es un mismo o diferente grupo protector;
Arg(X)-Thr(X)-Asn(X)-Thr(X)-Gly-Ser(X)-Gly-Thr(X)-Pro-NH_{2}, en la que X es un mismo o diferente grupo protector;
b) hacer reacionar el péptido lineal protegido
de la etapa (a) con una composición acídica con el fin de producir
un péptido lineal semiprotegido
Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH_{2};
c) purificar el péptido lineal semiprotegido de
la etapa (b) utilizando HPLC;
d) tratar el péptido lineal semiprotegido
purificado de la etapa (c) con un agente oxidante con el fin de
producir un péptido cíclico
Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Acm)-Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH_{2}
(1,7-cíclico); y
e) purificar el péptido cíclico de la etapa (d)
utilizando HPLC con el fin de obtener un péptido cíclico
purificado.
19. Procedimiento según la reivindicación 15,
16, 17 ó 18, en el que el péptido cíclico purificado de la etapa
(e) posee una pureza de por lo menos aproximadamente 98,5% por
HPLC.
20. Procedimiento según la reivindicación 15,
16, 17 ó 18, en el que el péptido cíclico purificado de la etapa
(e) posee una pureza de por lo menos aproximadamente 99% por
HPLC.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US46122203P | 2003-04-07 | 2003-04-07 | |
| US461222P | 2003-04-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2237356T1 ES2237356T1 (es) | 2005-08-01 |
| ES2237356T3 true ES2237356T3 (es) | 2007-04-01 |
Family
ID=33299783
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES04759123T Expired - Lifetime ES2237356T3 (es) | 2003-04-07 | 2004-04-05 | Procedimiento para la produccion de peptidos ciclicos. |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20040249121A1 (es) |
| EP (1) | EP1511761B1 (es) |
| AT (1) | ATE334998T1 (es) |
| DE (2) | DE04759123T1 (es) |
| DK (1) | DK1511761T3 (es) |
| ES (1) | ES2237356T3 (es) |
| PT (1) | PT1511761E (es) |
| TW (1) | TW200505939A (es) |
| WO (1) | WO2004092202A1 (es) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RS51182B (sr) * | 2004-04-08 | 2010-10-31 | Millennium Pharmaceuticals Inc. | Postupak za dobijanje eptifibatida i odgovarajućih intermedijernih jedinjenja |
| US7897724B2 (en) * | 2004-10-10 | 2011-03-01 | Usv, Ltd. | Solid phase Fmoc chemistry process to prepare peptides |
| ATE451384T1 (de) * | 2004-06-14 | 2009-12-15 | Usv Ltd | Verfahren zur herstellung von peptiden |
| WO2006041945A2 (en) * | 2004-10-04 | 2006-04-20 | Novetide, Ltd. | A counterion exchange process for peptides |
| AU2005298991B2 (en) * | 2004-10-19 | 2011-03-03 | Polypeptide Laboratories Holding (Ppl) Ab | On-resin peptide cyclization |
| US8226949B2 (en) * | 2006-06-23 | 2012-07-24 | Aegis Therapeutics Llc | Stabilizing alkylglycoside compositions and methods thereof |
| EP2057183A2 (en) * | 2007-03-01 | 2009-05-13 | Novetide Ltd. | High purity peptides |
| CN101372505B (zh) * | 2007-08-22 | 2011-03-30 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种制备醋酸去氨加压素的方法 |
| WO2009150657A1 (en) * | 2008-06-09 | 2009-12-17 | Natco Pharma Limited | Improved process for preparation of eptifibatide by fmoc solid phase synthesis |
| US8377891B2 (en) | 2008-11-07 | 2013-02-19 | Usv, Ltd. | Process for synthesis of cyclic octapeptide |
| WO2010119450A2 (en) | 2009-04-06 | 2010-10-21 | Matrix Laboratories Ltd | An improved process for the preparation of desmopressin or its pharmaceutically acceptable salts |
| WO2011011342A1 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-27 | Mallinckrodt Inc. | Synthesis of desmopressin |
| PL2464655T3 (pl) * | 2009-08-11 | 2017-08-31 | Biocon Limited | Procesy chromatograficzne |
| KR101831459B1 (ko) | 2010-03-03 | 2018-04-04 | 더 유니버시티 오브 브리티시 콜롬비아 | 올리고머 특이적 아밀로이드 베타 에피토프 및 항체 |
| WO2011156686A2 (en) * | 2010-06-11 | 2011-12-15 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | Method for synthesizing a cyclic multivalent peptide using a thiol-mediated reaction |
| RU2441018C1 (ru) * | 2010-09-28 | 2012-01-27 | Закрытое Акционерное Общество "Фарм-Синтез" | Способ хроматографической очистки октреотида |
| US9388212B2 (en) | 2013-02-21 | 2016-07-12 | Chemical & Biopharmaceutical Laboratories Of Patras S.A. | Solid phase peptide synthesis via side chain attachment |
| KR102159138B1 (ko) * | 2013-02-21 | 2020-09-24 | 케미컬 앤드 바이오파마슈티컬 라보라토리즈 오브 파트라스 에스.에이. | 측쇄 부착을 통한 고상 펩타이드 합성 방법 |
| CN104761619A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-07-08 | 苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司 | 醋酸去氨加压素的固相制备工艺 |
| CN108350052A (zh) | 2015-11-09 | 2018-07-31 | 英属哥伦比亚大学 | 淀粉样蛋白β中间区域中的表位及其构象选择性抗体 |
| EP3810168A1 (en) * | 2018-06-20 | 2021-04-28 | Axcella Health Inc. | Methods of manufacturing amino acid compositions |
| CN110016070B (zh) * | 2019-05-06 | 2021-07-20 | 上海上药第一生化药业有限公司 | 一种加压素[+Gly]杂质的精制方法 |
| CN109942686B (zh) * | 2019-05-06 | 2021-06-25 | 上海上药第一生化药业有限公司 | 一种加压素乙酰化杂质的精制方法 |
| CN112521482B (zh) * | 2019-08-28 | 2023-09-12 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 一种固液结合合成奈西立肽的制备方法 |
| CN114437233B (zh) * | 2020-11-06 | 2025-06-24 | 湖北健翔生物制药有限公司 | 一种多肽二聚体的定向合成方法 |
| CN115057913A (zh) * | 2022-06-20 | 2022-09-16 | 遵义医科大学珠海校区 | 一种短杆菌肽s类似物gs-5的制备方法 |
| WO2024112250A1 (en) * | 2022-11-23 | 2024-05-30 | Polypeptide Laboratories Holding (Ppl) Ab | Method of preparing vasopressin |
| CN116023441A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-04-28 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种制备纯化去氨加压素亚砜杂质的方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU78191A1 (de) * | 1977-09-28 | 1979-05-25 | Ciba Geigy Ag | Verfahren zur herstellung von neuen cyclopeptiden |
| DE2923787A1 (de) * | 1979-06-12 | 1980-12-18 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur selektiven bildung von disulfidbruecken in polypeptiden und die dabei erhaltenen produkte als wirkstoffe enthaltende arzneimittel |
| US4310518A (en) * | 1979-10-31 | 1982-01-12 | Merck & Co., Inc. | Cyclic hexapeptide somatostatin analogs |
| US4235886A (en) * | 1979-10-31 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Cyclic hexapeptide somatostatin analogs |
| DE3062075D1 (en) * | 1979-11-27 | 1983-03-24 | Sandoz Ag | Polypeptides, processes for their production, pharmaceutical compositions comprising said polypeptides and their use |
| US5770564A (en) * | 1989-06-16 | 1998-06-23 | Cor Therapeutics, Inc. | Platelet aggregation inhibitors |
| US5500413A (en) * | 1993-06-29 | 1996-03-19 | Ferring Ab | Process for manufacture of 1-deamino-8-D-arginine vasopressin |
| AU4400997A (en) * | 1997-09-18 | 1999-04-05 | Hyundai Pharm. Ind. Co., Ltd. | Process for the preparation of calcitonin |
| US5889146A (en) * | 1997-11-26 | 1999-03-30 | Institute Of Nuclear Energy Research | Method for synthesis of bifunctional chelating agents-peptides |
| ES2144357B1 (es) * | 1998-01-29 | 2000-12-16 | Lipotec Sa | Procedimiento para la obtencion del analogo de somatostatina octreotide. |
| JP4738683B2 (ja) * | 1999-07-19 | 2011-08-03 | ジーイー・ヘルスケア・アクスイェ・セルスカプ | 保護されたチオールを脱保護する方法 |
-
2004
- 2004-04-05 ES ES04759123T patent/ES2237356T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-05 PT PT04759123T patent/PT1511761E/pt unknown
- 2004-04-05 EP EP04759123A patent/EP1511761B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-05 DE DE04759123T patent/DE04759123T1/de active Pending
- 2004-04-05 US US10/818,246 patent/US20040249121A1/en not_active Abandoned
- 2004-04-05 DE DE602004001727T patent/DE602004001727T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2004-04-05 AT AT04759123T patent/ATE334998T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-04-05 DK DK04759123T patent/DK1511761T3/da active
- 2004-04-05 WO PCT/US2004/010426 patent/WO2004092202A1/en not_active Ceased
- 2004-04-06 TW TW093109527A patent/TW200505939A/zh unknown
-
2010
- 2010-02-04 US US12/700,334 patent/US20100137559A1/en not_active Abandoned
- 2010-02-04 US US12/700,373 patent/US20100240865A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20100240865A1 (en) | 2010-09-23 |
| EP1511761B1 (en) | 2006-08-02 |
| DE04759123T1 (de) | 2005-08-18 |
| DE602004001727T2 (de) | 2007-08-02 |
| WO2004092202A1 (en) | 2004-10-28 |
| US20040249121A1 (en) | 2004-12-09 |
| PT1511761E (pt) | 2006-11-30 |
| ES2237356T1 (es) | 2005-08-01 |
| ATE334998T1 (de) | 2006-08-15 |
| DE602004001727D1 (de) | 2006-09-14 |
| US20100137559A1 (en) | 2010-06-03 |
| EP1511761A1 (en) | 2005-03-09 |
| DK1511761T3 (da) | 2006-11-27 |
| TW200505939A (en) | 2005-02-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2237356T3 (es) | Procedimiento para la produccion de peptidos ciclicos. | |
| ES2344657T3 (es) | Procedimiento de intercambio de contraion para peptidos. | |
| EP3398960B1 (en) | Method for preparing semaglutide | |
| US20080287650A1 (en) | High purity peptides | |
| Andreu et al. | Solid‐phase synthesis of PYLa and isolation of its natural counterpart, PGLa [PYLa‐(4–24)] from skin secretion of Xenopus laevis | |
| Maerki et al. | Total solid-phase synthesis of porcine gut gastrin releasing peptide (GRP), a mammalian bombesin | |
| JP2008534628A (ja) | ペプチド誘導体の製造のための方法 | |
| RU2625793C2 (ru) | Способ синтеза терапевтических пептидов | |
| ES2217717T3 (es) | Procedimiento para la obtencion del analogo de somatostatina octreotide. | |
| KISO et al. | Efficient solid phase peptide synthesis: Use of methanesulfonic acid α‐amino deprotecting procedure and new coupling reagent, 2‐(benzotriazol‐1‐yl) oxy‐1, 3‐dimethylimidazolidinium hexafluorophosphate (BOI) | |
| BR112014026077B1 (pt) | Método de síntese em fase sólida de uma cadeia b de insulina protegida, parcialmente protegida ou desprotegida ou um derivado da cadeia b de insulina, e método para preparação de um peptídeo da cadeia b de insulina | |
| EP0193910A2 (en) | Synthesis of a derivative of GRF and intermediate peptides | |
| Nishiuchi et al. | Combined solid‐phase and solution approach for the synthesis of large peptides or proteins | |
| US5965526A (en) | Pentapeptide with specific conformation, its production and use | |
| Rekowski et al. | Synthesis, Antidiuretic and Pressor Activities of | |
| ITMI990777A1 (it) | Polipeptidi ad attivita' antiangiogenica | |
| US20020115823A1 (en) | Pentapeptide with specific conformation, its production and use | |
| Žertová et al. | Strong uterotonic inhibitors–analogs of 1-deamino-8-D-homoarginine-vasopressin with p-substituted phenylalanine in position 2 | |
| Žertová et al. | The Analogs of 8-D-Homoarginin-vasopressin with O-Substituted Phenylalanine in Position 2: Synthesis and Some Biological Properties | |
| EP0266170A2 (en) | Peptide derivative and its production | |
| Procházka et al. | The deamino-carba analogs of vasotocin. Synthesis and some biological properties | |
| Buku et al. | Effects of the substitution of photoreactive groups in positions 4 and 8 of vasopressin | |
| Ježek et al. | Sequence modification in neurohypophyseal hormones | |
| HU190207B (en) | Process for production of new gonadoliberine derivatives | |
| JPH0678356B2 (ja) | カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体 |