RU2625793C2 - Способ синтеза терапевтических пептидов - Google Patents
Способ синтеза терапевтических пептидов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2625793C2 RU2625793C2 RU2014130277A RU2014130277A RU2625793C2 RU 2625793 C2 RU2625793 C2 RU 2625793C2 RU 2014130277 A RU2014130277 A RU 2014130277A RU 2014130277 A RU2014130277 A RU 2014130277A RU 2625793 C2 RU2625793 C2 RU 2625793C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- resin
- fmoc
- amino acid
- peptide
- dmf
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 163
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 81
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 63
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title abstract description 45
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title abstract description 45
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 180
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 180
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 45
- GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N ghrelin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)COC(=O)CCCCCCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 9
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 claims abstract description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical group CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 288
- -1 Fmoc amino acid Chemical class 0.000 claims description 113
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 52
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 52
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 52
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 42
- RDRBIXSNGAYLPT-UHFFFAOYSA-N CC1=CC=C(COC2=CC3=C(C=C2)C(NC(=O)OCC2C4=C(C=CC=C4)C4=C2C=CC=C4)C2=C(O3)C=CC=C2)C=C1 Chemical compound CC1=CC=C(COC2=CC3=C(C=C2)C(NC(=O)OCC2C4=C(C=CC=C4)C4=C2C=CC=C4)C2=C(O3)C=CC=C2)C=C1 RDRBIXSNGAYLPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 34
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 26
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical group CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 claims description 19
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 15
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 15
- ZZOKVYOCRSMTSS-UHFFFAOYSA-M 9h-fluoren-9-ylmethoxymethanimidate Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)[NH-])C3=CC=CC=C3C2=C1 ZZOKVYOCRSMTSS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 13
- JPZXHKDZASGCLU-GFCCVEGCSA-N 3-(2-Naphthyl)-D-Alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-GFCCVEGCSA-N 0.000 claims description 12
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 12
- ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N (2s,3r)-2-azaniumyl-3-phenylmethoxybutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 claims description 11
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 8
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 8
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 8
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 7
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 7
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 7
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 7
- AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N triethylsilane Substances CC[SiH](CC)CC AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 6
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- QXTIBZLKQPJVII-UHFFFAOYSA-N triethylsilicon Chemical compound CC[Si](CC)CC QXTIBZLKQPJVII-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims 1
- 102000012004 Ghrelin Human genes 0.000 claims 1
- ZOCLVGHDXBVATF-UHFFFAOYSA-N [4-(2-aminoethoxy)-3,5-diiodophenyl]-(2-butyl-1-benzofuran-3-yl)methanone Chemical compound CCCCC=1OC2=CC=CC=C2C=1C(=O)C1=CC(I)=C(OCCN)C(I)=C1 ZOCLVGHDXBVATF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 abstract description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 100
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 100
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 75
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 30
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 27
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 25
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 18
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 15
- FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(4-carboxyphenyl)phenyl]benzoic acid Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)C(O)=O)C=C1 FZTIWOBQQYPTCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 11
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 10
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical group NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101100387911 Caenorhabditis elegans dop-2 gene Proteins 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 5
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 description 4
- PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 3-aminoalanine Chemical compound [NH3+]CC(N)C([O-])=O PECYZEOJVXMISF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 4
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 229940121382 ghrelin analogues Drugs 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 3
- 239000012296 anti-solvent Substances 0.000 description 3
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 3
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 3
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 3
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- ADOHASQZJSJZBT-AREMUKBSSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-AREMUKBSSA-N 0.000 description 2
- CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N (2r)-3-(acetamidomethylsulfanyl)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CSCNC(=O)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CSMYOORPUGPKAP-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 2
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UXUOVYKDMGFUDU-UHFFFAOYSA-N 2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4-dihydrochromene-6-sulfonyl chloride Chemical compound C1CC(C)(C)OC2=C1C(C)=C(S(Cl)(=O)=O)C(C)=C2C UXUOVYKDMGFUDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZAAVUWIYUMVQJG-UHFFFAOYSA-N 2,3,5,6-tetramethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=C(C)N=C1C ZAAVUWIYUMVQJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-Trimethylpyridine Chemical compound CC1=CC(C)=NC(C)=C1 BWZVCCNYKMEVEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BJBUEDPLEOHJGE-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyproline Chemical compound OC1CCNC1C(O)=O BJBUEDPLEOHJGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylacetamide Chemical compound CN(C)C(C)=O FXHOOIRPVKKKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical compound CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000002952 polymeric resin Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical group C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 2
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- VQJGUUHKSTYEGE-GCYSTPHZSA-N (2S,4R)-4-hydroxypyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound N1[C@H](C(=O)O)C[C@@H](O)C1.N1[C@H](C(=O)O)C[C@@H](O)C1.N1[C@H](C(=O)O)C[C@@H](O)C1 VQJGUUHKSTYEGE-GCYSTPHZSA-N 0.000 description 1
- BMJRTKDVFXYEFS-MGBGTMOVSA-N (2r)-2,6-bis(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)hexanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@@H](C(=O)O)CCCCNC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 BMJRTKDVFXYEFS-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- FQRURPFZTFUXEZ-MRVPVSSYSA-N (2s)-2,3,3,3-tetrafluoro-2-(n-fluoroanilino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@](F)(C(F)(F)F)N(F)C1=CC=CC=C1 FQRURPFZTFUXEZ-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- YPJJGMCMOHDOFZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(1-benzothiophen-3-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CSC2=C1 YPJJGMCMOHDOFZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 1
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- XQIRYUNKLVPVRR-KRWDZBQOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 XQIRYUNKLVPVRR-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 1
- YPFNACALNKVZNK-MFNIMNRCSA-N (2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s,3r)-1-[[2-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-amino-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-hydroxy-1- Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 YPFNACALNKVZNK-MFNIMNRCSA-N 0.000 description 1
- DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-3-pyridin-3-ylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CN=C1 DFZVZEMNPGABKO-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-pyridin-4-ylpropanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=NC=C1 FQFVANSXYKWQOT-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- FMUMEWVNYMUECA-LURJTMIESA-N (2s)-2-azaniumyl-5-methylhexanoate Chemical compound CC(C)CC[C@H](N)C(O)=O FMUMEWVNYMUECA-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- CQYBNXGHMBNGCG-FXQIFTODSA-N (2s,3as,7as)-2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahydro-1h-indol-1-ium-2-carboxylate Chemical compound C1CCC[C@@H]2[NH2+][C@H](C(=O)[O-])C[C@@H]21 CQYBNXGHMBNGCG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OJYOOHSQOIDDOO-UHFFFAOYSA-N 1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C1CC(C(=O)O)CCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 OJYOOHSQOIDDOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVTVMQPGKVHSEY-UHFFFAOYSA-N 1-AMINOCYCLOBUTANE CARBOXYLIC ACID Chemical compound OC(=O)C1(N)CCC1 FVTVMQPGKVHSEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 1-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCCC1 WOXWUZCRWJWTRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NILQLFBWTXNUOE-UHFFFAOYSA-N 1-aminocyclopentanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCCC1 NILQLFBWTXNUOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 1-aminocyclopropanecarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CC1 PAJPWUMXBYXFCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1.C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 DFPYXQYWILNVAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 2,4-D Chemical compound OC(=O)COC1=CC=C(Cl)C=C1Cl OVSKIKFHRZPJSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMGHIGVFLOPEHJ-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydro-1h-pyrrol-1-ium-2-carboxylate Chemical compound OC(=O)C1NCC=C1 OMGHIGVFLOPEHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAUGUUNRDWGECM-UHFFFAOYSA-N 2,6-ditert-butyl-n,n-dimethylpyridin-4-amine Chemical compound CN(C)C1=CC(C(C)(C)C)=NC(C(C)(C)C)=C1 NAUGUUNRDWGECM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHXRLXSFXHFCPA-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-aminoethyl)piperazin-1-yl]acetic acid Chemical compound NCCN1CCN(CC(O)=O)CC1 PHXRLXSFXHFCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000022 2-aminoethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])N([H])[H] 0.000 description 1
- VRFJLUHAQPBTLE-UHFFFAOYSA-N 2-aminopiperidine-1-carboxylic acid Chemical compound NC1CCCCN1C(O)=O VRFJLUHAQPBTLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002941 2-furyl group Chemical group O1C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000004105 2-pyridyl group Chemical group N1=C([*])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000001541 3-thienyl group Chemical group S1C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- QASBCTGZKABPKX-UHFFFAOYSA-N 4-(methylsulfanyl)phenol Chemical compound CSC1=CC=C(O)C=C1 QASBCTGZKABPKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPDPQQHHTHKSRN-UHFFFAOYSA-N 4-aminooxane-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1(N)CCOCC1 DPDPQQHHTHKSRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFXAFXVXPMUQCQ-BYPYZUCNSA-N 4-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CC(=O)CN1 HFXAFXVXPMUQCQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 9h-fluoren-9-ylmethyl n-[[4-[2-[bis(4-methylphenyl)methylamino]-2-oxoethoxy]phenyl]-(2,4-dimethoxyphenyl)methyl]carbamate Chemical compound COC1=CC(OC)=CC=C1C(C=1C=CC(OCC(=O)NC(C=2C=CC(C)=CC=2)C=2C=CC(C)=CC=2)=CC=1)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JDDWRLPTKIOUOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000010444 Acidosis Diseases 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003347 Atropine Natural products 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102000013585 Bombesin Human genes 0.000 description 1
- 108010051479 Bombesin Proteins 0.000 description 1
- 102100024881 C3 and PZP-like alpha-2-macroglobulin domain-containing protein 8 Human genes 0.000 description 1
- 101100387915 Caenorhabditis elegans dop-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000055006 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025892 Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N Cys-Tyr Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 DSTWKJOBKSMVCV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N D-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 101710198884 GATA-type zinc finger protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010004460 Gastric Inhibitory Polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 102400000322 Glucagon-like peptide 1 Human genes 0.000 description 1
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 1
- 101001084254 Homo sapiens Peptidyl-tRNA hydrolase 2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000904173 Homo sapiens Progonadoliberin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000598103 Homo sapiens Tuberoinfundibular peptide of 39 residues Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N Hyosciamin-hydrochlorid Natural products CN1C(C2)CCC1CC2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N L-homophenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC1=CC=CC=C1 JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N L-pipecolic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]1CCCC[NH2+]1 HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010008364 Melanocortins Proteins 0.000 description 1
- 102400000740 Melanocyte-stimulating hormone alpha Human genes 0.000 description 1
- 101710151321 Melanostatin Proteins 0.000 description 1
- 101710200814 Melanotropin alpha Proteins 0.000 description 1
- 101710122877 Muellerian-inhibiting factor Proteins 0.000 description 1
- 101100297651 Mus musculus Pim2 gene Proteins 0.000 description 1
- DTERQYGMUDWYAZ-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-N-thioacetyl-Lysine Natural products CC(=O)NCCCCC(N)C(O)=O DTERQYGMUDWYAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100038819 Neuromedin-B Human genes 0.000 description 1
- 101800001639 Neuromedin-B Proteins 0.000 description 1
- 102400000064 Neuropeptide Y Human genes 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020797 Parathyroid Hormone-Related Proteins 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 1
- 102100030867 Peptidyl-tRNA hydrolase 2, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108010004684 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 102000002808 Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 102100036829 Probable peptidyl-tRNA hydrolase Human genes 0.000 description 1
- 102100024028 Progonadoliberin-1 Human genes 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 description 1
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 description 1
- 101000996723 Sus scrofa Gonadotropin-releasing hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007950 acidosis Effects 0.000 description 1
- 208000026545 acidosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000010976 amide bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N anhydrous collidine Natural products CC1=CC=NC(C)=C1C HOPRXXXSABQWAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- RKUNBYITZUJHSG-SPUOUPEWSA-N atropine Chemical compound O([C@H]1C[C@H]2CC[C@@H](C1)N2C)C(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 RKUNBYITZUJHSG-SPUOUPEWSA-N 0.000 description 1
- 229960000396 atropine Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WTOFYLAWDLQMBZ-LURJTMIESA-N beta(2-thienyl)alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CS1 WTOFYLAWDLQMBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N bombesin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1NC2=CC=CC=C2C=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C(C)C)C1=CN=CN1 DNDCVAGJPBKION-DOPDSADYSA-N 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N collidine Natural products CC1=CC=C(C)C(C)=N1 UTBIMNXEDGNJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- RBNPZEHAODHBPZ-UHFFFAOYSA-M dihydroxyaluminium Chemical compound O.O.NCC(=O)O[Al] RBNPZEHAODHBPZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150097115 dop-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- RKGLLHCSSVJTAN-YYICOITRSA-N glucagen Chemical compound Cl.C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 RKGLLHCSSVJTAN-YYICOITRSA-N 0.000 description 1
- 229940095886 glucagen Drugs 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N gonadorelin Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- QNRXNRGSOJZINA-UHFFFAOYSA-N indoline-2-carboxylic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C(=O)O)CC2=C1 QNRXNRGSOJZINA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRJOCJYGOFTFLH-UHFFFAOYSA-N isonipecotic acid Chemical compound OC(=O)C1CCNCC1 SRJOCJYGOFTFLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002865 melanocortin Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000000250 methylamino group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-propan-2-ylpropan-2-amine Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C.CCN(C(C)C)C(C)C WOOWBQQQJXZGIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N nucleopeptide y Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 URPYMXQQVHTUDU-OFGSCBOVSA-N 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- TVIDEEHSOPHZBR-AWEZNQCLSA-N para-(benzoyl)-phenylalanine Chemical compound C1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C1C(=O)C1=CC=CC=C1 TVIDEEHSOPHZBR-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 239000003930 superacid Substances 0.000 description 1
- GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N sym-collidine Natural products CC1=CN=C(C)C(C)=C1 GFYHSKONPJXCDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N tert-butylglycine Chemical compound CC(C)(C)C(N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DZLNHFMRPBPULJ-UHFFFAOYSA-N thioproline Chemical compound OC(=O)C1CSCN1 DZLNHFMRPBPULJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N trans-3-hydroxy-L-proline Chemical compound O[C@H]1CC[NH2+][C@@H]1C([O-])=O BJBUEDPLEOHJGE-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical group C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
- WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N α-msh Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(C)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WHNFPRLDDSXQCL-UAZQEYIDSA-N 0.000 description 1
- JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N β-(2-naphthyl)-alanine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C21 JPZXHKDZASGCLU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N β-cyclohexyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1CCCCC1 ORQXBVXKBGUSBA-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/655—Somatostatins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
- C07K1/042—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers characterised by the nature of the carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/063—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for alpha-amino functions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/08—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/10—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using coupling agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/001—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof by chemical synthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу крупномасштабного синтеза терапевтических пептидов, представляющих собой аналоги грелина, методом поэтапной твердофазной Fmoc-химии с использованием амидной смолы Зибера. 13 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к новому способу крупномасштабного синтеза терапевтических пептидов, содержащих неприродные или рукотворные аминокислоты. Указанный способ является масштабируемым до крупных объемов способом, и позволяет осуществлять эффективное по себестоимости производство пептидов высокой степени чистоты.
Твердофазный пептидный синтез (SPPS) представляет собой чрезвычайно успешный способ, впервые предложенный Меррифильдом в 1963 г. (Merrifield, R. B., J. Amer. Chem. Soc, 1963, 85:2149-54). С тех пор таким способом было синтезировано множество пептидов. Обзор способов, которые использовали до химического синтеза пептидов и белков, представлен у Кента, Kent, S. B. H., Ann. Rev. Biochem., 1988, 57:957-89. Твердофазный синтез позволяет синтезировать природные пептиды, которые трудно экспрессировать в бактериях, встраивать неприродные или синтетические аминокислоты, модифицировать пептидный остов и синтезировать D-белки, содержащие D-аминокислоты.
Используют две стратегии для сборки пептидных цепей способом твердофазного синтеза: 1) поэтапный твердофазный синтез и 2) способ твердофазной конденсации фрагментов. При поэтапном SPPS, C-концевая аминокислота в N-α-защищенной форме, и при необходимости, реакционноспособное производное с защищенными боковыми цепями, ковалентно связывают или непосредственно или с использованием подходящего линкера с ʺтвердымʺ носителем, например, полимерной смолой, обычно набухшей в органическом растворителе. N-α-защитную группу удаляют, и последующие защищенные аминокислоты добавляют поэтапно. По достижении необходимой длины пептидной цепи, защитные группы боковых цепей удаляют, и пептид отщепляют от смолы. Процесс отщепления/удаления защитных групп можно осуществить на отдельных этапах или одновременно. В способе твердофазной конденсации фрагментов, целевую последовательность собирают последовательной конденсацией фрагментов на твердом носителе, используя защищенные фрагменты, полученные поэтапным SPPS.
Одна из форм SPPS основана на использовании флуоренилметоксикарбонила (или ʺFmocʺ) для временной защиты α-аминогрупп. Используя такой способ, Fmoc группу ковалентно связывают с аминогруппой для подавления ее нуклеофильности. C-концевую аминокислоту ковалентно связывают со смолой, используя линкер. Затем Fmoc группу удаляют основанием, таким как пиперидин. Это высвобождает аминогруппу, которая затем оказывается доступной для реакции с активированной аминокислотой. Реакции ведут до завершения, используя избыток (обычно двух-четырех-кратный) активированной аминокислоты. После каждого этапа удаления защитных групп и присоединения, осуществляют одну или более из промывок для удаления избытка реагентов. Отщепление пептидов от смолы с удалением защитных групп боковых цепей можно осуществить, используя ацидолиз, используя раствор кислоты, такой как трифторуксусная кислота (TFA). Обычной практикой является добавление дополнительных химических соединений, называемых ʺакцепторамиʺ, таких как триизопропилсилан (TIPS), триэтилсилан (TES), фенол, анизол, тиоанизол, вода, 1,2-этандитиол (EDT), 1-додекантиол, дитиотреитол (DTT) и индол, с кислотой в отщепляющей смеси для взаимодействия с высвобожденными защитными группами боковых цепей, тем самым, препятствуя повторному присоединению указанных высвобожденных групп к отщепленным пептидам.
Аминокислоты содержат реакционноспособные фрагменты на N- и C-концах, что облегчает присоединение аминокислот во время синтеза. Кроме того, реакционноспособные функциональные группы боковых цепей, существующие у большинства аминокислот, могут взаимодействовать со свободными концами или группами других боковых цепей в процессе синтеза и удлинения пептидов и негативно влиять на выход и степень чистоты. Для облегчения синтеза соответствующих аминокислот с минимальной реакционной способностью боковых цепей, используют химические группы, именуемые как ʺзащитные группыʺ, для связывания со специфическими функциональными группами аминокислот для ʺблокированияʺ или ʺзащитыʺ указанных функциональных групп от неспецифических реакций. Защитные группы боковых цепей известны как постоянные или полупостоянные защитные группы, так как они могут выдержать множество циклов химических обработок в процессе синтеза, и обычно их удаляют сильными кислотами только после завершения синтеза пептида.
Вышеописанные существующие в настоящее время стратегии нежелательны для производства терапевтических пептидов в промышленных масштабах, так как используемые в них смолы требуют для удаления пептидов высоких концентраций кислоты для отщепления пептидов от полимерной смолы. Помимо проблем безопасности, связанных с использованием больших количеств крайне коррозивных материалов, для возможности их использования может потребоваться специальное оборудование. Кроме того, использование высоких концентраций сильных кислот для отщепления пептидов и удаления защитных групп может привести к значительной деградации целевых пептидов, приводя к низким выходам и/или к образованию новых примесей в результате экспонирования пептидов сильной кислоте в течение промежутка времени, необходимого для отщепления и обработки в нужном количестве. Такие примеси могут включать продукты дегидратации или окисления или примеси, образовавшиеся в результате присоединения всех или части смолы-линкеров к пептиду - так как указанные примеси затем будет трудно удалить. Таким образом, существует необходимость в создании эффективного крупномасштабного способа получения терапевтических пептидов.
Как было указано ранее, твердофазный пептидный синтез инициируют на ʺтвердомʺ носителе или ʺякореʺ. Такие ʺносителиʺ в промышленности называют ʺсмоламиʺ. Смолы могут быть получены из полистирола или других полимерных материалов, таких как полимеры этиленоксида, например, смолы на основе ПЕГ, или смеси обоих, например, ʺгибридныеʺ или ПЕГ-полистирольные смолы. Обычно используемые смолы для получения пептидных амидов способом Fmoc SPPS включают смолы на основе полистирола, комбинированные с линкерами, подходящими для высвобождения пептидных амидов с полностью удаленными защитными группами после обработки высококонцентрированными кислотами. Обычно используемые смолы включают амидные смолы Ринка, например, амидную смолу Ринка, амидную MBHA смолу Ринка и амидную AM смолу Ринка. Амидные смолы Ринка высвобождают пептидные амиды с полностью удаленными защитными группами после обработки отщепляющим коктейлем с высоким процентом об/об кислоты - например, обычно используют 80-95% об/об трифторуксусной кислоты (TFA).
В 1987, новую кислотно-лабильную смолу для твердофазного синтеза C-концевых амидов предложил Зибер (Tetrahedron Lett., 1987, 28(19):2107-10). В этой смоле используется 9-ксантенильная группа с -OCH2- группой, введенной между указанной ксантенильной группой и полистиролом, для повышения кислотной лабильности. Отщепление пептидных амидов от такой смолы осуществляют очень мягким ацидолизом. В статье раскрыт синтез двух пептидов на указанной смоле - первого без защитных групп боковых цепей (Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2), где отщепление от смолы в масштабе 0,5 г осуществляют, прокачивая кислотную отщепляющую смесь (TFA:l,2-дихлорэтан 2:98 об/об) через смолу в стеклянной колонке; второй пептид (α-MSH), пептид из 13 аминокислот, содержащий защитные группы боковых цепей (трет-бутил, Trt, Mtr и Boc), отщепляют от смолы, прокачивая кислотную отщепляющую смесь (TFA/l,2-дихлорэтан -/l,2-этандитиол 2:98:0,1) через колонку со смолой. Два следующих этапа с использованием высоких концентраций кислоты и нагревания (TFA/вода 9:1 при 30°C, затем 95% TFA с акцепторами при 50°C) требуют удаления всех защитных групп боковых цепей.
Хотя в вышеприведенной статье это и не указано непосредственно, основное преимущество амидной смолы Зибера (по мере того, как стала известна ксантенильная смола) состояло в получении пептидов с полностью защищенными боковыми цепями для последующего использования в реакциях конденсации фрагментов. Этого можно достичь, используя низкие проценты об/об кислоты в отщепляющем коктейле - обычно 1-5% об/об. По данным коммерческих поставщиков (Novabiochem®, Merck KGaA), смола Зибера представляет собой ʺ[a] гипер кислотно-лабильный линкер (смола) для FMOC SPPS защищенных пептидных амидов способом мягкого отщепления 1% TFA.ʺ
Было обнаружено, что используя амидную смолу Зибера скомбинированную с Fmoc химией и a отщепляющим раствором, используя определенные концентрации трифторуксусной кислоты (TFA) (например, выше 10% об/об), можно синтезировать пептидные амиды с полностью удаленными защитными группами практично и в крупном масштабе (масштаб кг). Этот способ получения пептидных амидов с полностью удаленными защитными группами превосходит способ с использованием амидных смол Ринка, так как:
(i) используя указанный способ, можно достигать больших выходов продукта
(ii) используя указанный способ, можно получать пептиды с более высокой степенью чистоты, что позволяет облегчить последующую очистку
(iii) способ позволяет снизить расход исходных материалов и растворителей, и поэтому является более стоимостно-эффективным способом производства
(iv) способ является надежным и воспроизводимым способом, как в малых, так и в крупных масштабах, что позволяет облегчить масштабирование процесса.
В настоящем изобретении предложен новый способ промышленного синтеза терапевтических пептидов, который включает поэтапную твердофазную Fmoc-химию. В одном аспекте в настоящем изобретении предложен способ синтеза терапевтических пептидов, включающий последовательные стадии:
(a) набухания Fmoc-смолы Зибера (называемой также амидной смолой Зибера или Fmoc амидной смолой Зибера) в диполярном апротонном растворителе;
(b) удаления защитных Fmoc групп, используя раствор пиперидина в диполярном апротонном растворителе;
(c) промывки указанной смолы после удаления Fmoc защитных групп диполярным апротонным растворителем;
(d) активации Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в диполярном апротонном растворителе и последующего добавления основания и перемешивания;
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения активированной Fmoc-аминокислоты, используя (2-(6-хлор-1H-бензотриазол-l-ил)-l,l,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфат) (HCTU) или 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторкорат (TBTU)/1-гидроксибензотриазол (HOBt) с основанием в диполярном апротонном растворителе в качестве связующего реагента;
(g) промывки смолы после каждого присоединения Fmoc-аминокислоты;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отщепления целевого пептида от смолы при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты, используя отщепляющий коктейль;
(j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы; и
(k) выпаривания фильтратов и осаждения и частичной очистки сырого продукта от концентрированного раствора органическим растворителем до получения частично очищенного пептида.
В соответствии со стадиями (a), (b), (c) и (f) способа настоящего изобретения, как раскрыто выше, используют диполярный апротонный растворитель. Такой диполярный апротонный растворитель может быть выбран из диметилформамида (ДМФ), диметилацетамида (DMA) или N-метилпирролидона (NMP), или их комбинаций. В предпочтительном варианте в качестве диполярного апротонного растворителя используют ДМФ.
В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ синтеза терапевтических пептидов, включающий последовательные стадии:
(a) набухания Fmoc-смолы Зибера (также именуемой как амидная смола Зибера или Fmoc амидная смола Зибера) в диметилформамиде (ДМФ);
(b) удаления защитных Fmoc групп, используя раствор пиперидина в ДМФ;
(c) промывки смолы после удаления защитных Fmoc групп с использованием ДМФ;
(d) активирования Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ с последующим добавлением основания и перемешиванием;
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения активированной Fmoc-аминокислоты, используя (2-(6-хлор-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфат) (HCTU) или 2-(lH-бензотриазол-l-ил)-l,l,3,3-тетраметилуроний тетрафторкорат (TBTU)/1-гидроксибензотриазол (HOBt) с основанием в ДМФ в качестве связующего реагента;
(g) промывки смолы после каждого присоединения Fmoc-аминокислоты;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отщепления целевого пептида от смолы, при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты, используя отщепляющий коктейль;
(j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы; и
(k) выпаривания фильтратов и осаждения и частичной очистки сырого продукта из концентрированного раствора органическим растворителем до получения частично очищенного пептида.
В соответствии со стадией (d) способа настоящего изобретения, как раскрыто выше, используют основание. Указанное основание может быть основанием третичного амина или их смесью, и может быть выбрано из N,N-диизопропилэтиламина (DIEA), триэтиламина (TEA), N-метилморфолина (NMM), 2,4,6-триметилпиридина (TMP, известного также как коллидин), 2,3,5,6-тетраметилпиридина (TEMP), 2,6-ди-трет-бутил-4-диметиламинопиридина (DBDMAP) или 4-диметиламинопиридина (DMAP). Предпочтительный вариант непосредственно вышеизложенного аспекта настоящего изобретения отличается тем, что основанием, используемым на стадии (d) является третичный амин, и что в более предпочтительном варианте, указанным основанием является N,N-диизопропилэтиламин (DIEA).
В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ синтеза терапевтических пептидов, включающий стадии:
(a) набухания Fmoc-смолы Зибера (именуемой также как амидная смола Зибера или Fmoc амидная смола Зибера) в диметилформамиде (ДМФ);
(b) удаления защитных Fmoc групп, используя раствор пиперидина в ДМФ;
(c) промывки смолы ДМФ после удаления защитных групп Fmoc;
(d) активации Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ с последующим добавлением основания и перемешиванием;
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения активированной Fmoc-аминокислоты, используя (2-(6-хлор-1H- бензотриазол-l-ил)-l,l,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфат) (HCTU) или 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторкорат (TBTU)/1-гидроксибензотриазол (HOBt) с N,N-диизопропилэтиламином (DIEA) в ДМФ в качестве связующего реагента;
(g) промывки смолы после каждого присоединения Fmoc-аминокислоты;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отделения целевого пептида от смолы при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты, используя отщепляющий коктейль;
(j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы; и
(k) выпаривания фильтратов и осаждения и частичной очистки сырого продукта от концентрированного раствора органическим антирастворителем до получения частично очищенного пептида.
В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ синтеза терапевтических пептидов, включающий последовательные стадии:
(a) набухания Fmoc-смолы Зибера (также именуемой как амидная смола Зибера или Fmoc амидная смола Зибера) в диметилформамиде (ДМФ);
(b) удаления защитных Fmoc групп, используя раствор пиперидина в ДМФ;
(c) промывки смолы ДМФ после удаления защитных Fmoc групп;
(d) активирования Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ, с последующим добавлением N,N-диизопропилэтиламина (DIEA) и перемешиванием;
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения активированной Fmoc-аминокислоты, используя (2-(6-хлор-1H-бензотриазол-l-ил)-l,l,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфат) (HCTU) или 2-(1H-бензотриазол- 1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторкорат (TBTU)/1-гидроксибензотриазол (HOBt) с N,N-диизопропилэтиламином (DIEA) в ДМФ в качестве связующего реагента;
(g) промывки смолы после каждого присоединения Fmoc-аминокислоты;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отщепления целевого пептида от смолы при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты, используя отщепляющий коктейль;
(j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы; и
(k) выпаривания фильтратов и осаждения и частичной очистки сырого продукта от концентрированного раствора органическим растворителем до получения частично очищенного пептида.
Другой предпочтительный вариант настоящего изобретения отличается тем, что указанный отщепляющий коктейль, использованный на стадии (i) способа настоящего изобретения, как раскрыто выше, состоит из TFA, одного или более из акцепторов и DCM, где указанный акцептор выбирают из группы, состоящей из триизопропилсилана (TIPS), триэтилсилана (TES), фенола, анизола, тиоанизола, воды, 1,2-этандитиола (EDT), 1-додекантиола, дитиотреитола (DTT) и индола, при условии, что процент TFA в указанном отщепляющем коктейле не превышает 25%.
Предпочтительный вариант непосредственно вышеизложенного аспекта настоящего изобретения отличается тем, что указанный акцептор выбирают из группы, состоящей из TIPS, TES, анизола и воды.
Другой предпочтительный вариант настоящего изобретения отличается тем, что указанный отщепляющий коктейль, использованный на стадии (i), как раскрыто выше, состоит из TFA, одного или более из акцепторов и DCM, где указанный акцептор выбирают из группы, состоящей из TIPS, TES, анизола и воды, при условии, что процент TFA в указанном отщепляющем коктейле не превышает 25%.
Для пептидов, у которых требуется удалить только Boc и tBu защитные группы боковых цепей, предпочтительный вариант настоящего изобретения отличается тем, что указанный отщепляющий коктейль состоит из 15-25% об/об TFA с 2,5-12% об/об TIPS и 62,5-82,5% об/об DCM; и еще более предпочтительно, если указанный отщепляющий коктейль состоит из 20% об/об TFA с 10% об/об TIPS и 70% об/об DCM.
Для пептидов, у которых требуется удалить только Boc и tBu защитные группы боковых цепей, предпочтительный вариант настоящего изобретения, как раскрыто выше, отличается тем, что: указанный отщепляющий коктейль, использованный на стадии (i), как раскрыто выше, состоит из 15-25% об/об TFA с 2,5-12% об/об TIPS и остальную часть отщепляющего коктейля составляет до 100% DCM; и еще более предпочтительно, если указанный отщепляющий коктейль, использованный на стадии (i), как раскрыто выше, состоит из приблизительно 20% об/об TFA с приблизительно 10% б/об TIPS и 70% об/об DCM.
Следующий предпочтительный вариант способа настоящего изобретения, как раскрыто выше, на стадиях (a)-(k) состоит в том, что полученный пептид отщепляют от амидной смолы Зибера одновременно с удалением защитных групп боковых цепей.
Другой предпочтительный вариант настоящего изобретения отличается тем, что Fmoc группы вначале удаляют со смолы, используя пиперидин в ДМФ. В более предпочтительном варианте Fmoc группу вначале удаляют со смолы, используя пиперидин в ДМФ, где концентрация указанного пиперидина в ДМФ меньше чем 20% (об/об) и более предпочтительно, около 15% (об/об).
В соответствии со стадией (f) способа настоящего изобретения, как раскрыто выше, присоединение активированной Fmoc-аминокислоты осуществляют, используя (2-(6-хлор-1H- бензотриазол-l-ил)-l,l,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфат) (HCTU) или 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторкорат (TBTU)/1-гидроксибензотриазол (HOBt) с основанием, таким как N,N-диизопропилэтиламин (DIEA) в диполярном апротонном растворителе, таком как ДМФ, отдельно или в комбинации. В предпочтительном варианте любого одного из предшествующих аспектов настоящего изобретения, остатки аминокислоты присоединяют, используя “комбинацию связующих реагентов”, выбранных из группы, состоящей из TBTU/HOBt/DIEA, HBTU/HOBt/DIEA, HATU DIEA, HCTU DIEA, DIC/HOBt, DIC/HOAt, HATU HOBt/DIEA и HCTU/HOBt/DEEA, более предпочтительно, выбранных из группы, состоящей из HCTU/DIEA и TBTU/HOBt/DIEA.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (a) (Fmoc-амидную смолу Зибера вначале набухают, используя от 1 до 3 обработок 7-12 объемами ДМФ в течение вплоть до 1 часа, еще более предпочтительно, 3 обработки 10 объемами ДМФ длительностью от 10 до 30 минут за обработку.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями от (a) до (j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (b), Fmoc группы у смолы Зибера удаляют, используя 1-2 обработки раствором пиперидина в ДМФ (10-20% об/об) длительностью от 5 до 20 минут, еще более предпочтительно 2 обработки 15% об/об пиперидина в ДМФ длительностью 10 минут.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (c), смолу с удаленными защитными группами промывают от 3 до 5 раз 7-12 объемами ДМФ, причем каждая промывка длится до 5 минут, еще более предпочтительны 3 промывки 10 объемами ДМФ, причем каждая промывка длится вплоть до 5 минут.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (d) от 1,2 до 2,0 молярных эквивалентов (относительно масштаба загрузки смолы) Fmoc-аминокислоты активируют для присоединения путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ, добавления DIEA, перемешивания в течение вплоть до 5 минут; и более предпочтительно 1,5 молярных эквивалентов (относительно масштаба загрузки смолы) Fmoc-аминокислоты активируют для присоединения путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагент (реагентов) в ДМФ, добавления DIEA, перемешивания в течение 1-2 минут.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (f), от 0,5 до 1,5 молярных эквивалентов (относительно Fmoc-аминокислоты) связующего реагента (реагентов) используют с 1,5-2,5 молярными эквивалентами (относительно Fmoc-аминокислоты) DIEA в 4-10 объемах ДМФ в течение 30-120 минут при комнатной температуре; и более предпочтительно, от 0,5 до 1,5 молярных эквивалентов (относительно Fmoc-аминокислоты) связующего реагента (реагентов) используют с 1,5-2,5 молярными эквивалентами (относительно Fmoc-аминокислоты) DIEA в 5-7 объемах ДМФ в течение 60 минут при температуре от 15 до 30°C.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (g), смолу промывают после каждого присоединения, от 2 до 4 раз в 7-12 объемах ДМФ в течение вплоть до 5 минут; и в более предпочтительном варианте, смолу после каждого присоединения промывают 2 раза в 10 объемах ДМФ в течение вплоть до 5 минут.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (i):
- указанную смолу погружают в отщепляющий коктейль и перемешивают в течение 2-3 часов при комнатной температуре, и более предпочтительно, указанную смолу погружают и перемешивают в течение 2,5 часа, и
- раствор смола/отщепляющий коктейль периодически барботируют газообразным азотом.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (j):
- отработанную смолу промывают небольшим объемом или свежего отщепляющего коктейля или смесью TFA/DCM (20:80 об/об) 1-2 раза;
- отработанную смолу необязательно промывают небольшим объемом MeOH.
Предпочтительный вариант способа настоящего изобретения с последовательными стадиями (a)-(j), как раскрыто выше, отличается тем, что на стадии (k), после комбинации объединения фильтратов и выпаривания:
- сырой пептид осаждают, используя от 5 до 15 объемов MtBE;
- выпавший в осадок пептид сушат до необходимого уровня сухости;
- выпавший в осадок пептид растворяют разбавленной кислотой, или разбавленной кислотой с органическим модификатором, чтобы использовать в последующем процессе хроматографической очистки
- пептид очищают и осуществляют стадию солевого обмена, используя препаративную хроматографию с обращенной фазой.
Другой предпочтительный вариант способа настоящего изобретения отличается тем, что включает следующие последовательные стадии (a)-(j):
(a) набухания Fmoc-амидной смолы Зибера, используя от 1 до 3 обработок в 7-12 объемах ДМФ в течение вплоть до 1 часа, еще более предпочтительно, 3 обработки 10 объемами ДМФ длительностью от 10 до 30 минут на обработку;
(b) удаления защитных Fmoc групп на смоле Зибера, используя от 1 до 2 обработок раствором пиперидина в ДМФ (10-20% об/об) длительностью от 5 до 20 минут, еще более предпочтительно, 2 обработки 15% об/об пиперидина в ДМФ длительностью 10 минут;
(c) промывки смолы, у которой удалены защитные группы, от 3 до 5 раз в 7-12 объемах ДМФ, причем каждая промывка длительностью вплоть до 5 минут, еще более предпочтительно, 3 промывки 10 объемами ДМФ, причем каждая промывка длительностью вплоть до 5 минут.
(d) активирования 1,2-2,0 молярных эквивалентов (относительно масштаба загрузки смолы) Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ, добавления DIEA, перемешивания в течение 1-2 минут; и более предпочтительно, активирования 1,5 молярных эквивалентов (относительно масштаба загрузки смолы) Fmoc-аминокислоты для присоединения путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ, добавления DIEA, перемешивания в течение 1-2 минут.
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения Fmoc-аминокислоты к смоле, у которой удалены защитные группы, путем погружения и перемешивания смолы, у которой удалены защитные группы, с раствором активированной Fmoc-аминокислоты в течение 30-120 минут при комнатной температуре; причем указанный раствор активированной Fmoc-аминокислоты состоит из Fmoc-аминокислоты, как раскрыто выше в (d), вместе с 0,5-1,5 молярными эквивалентами (относительно Fmoc-аминокислоты) связующего реагента (реагентов) с от 1,5 до 2,5 молярных эквивалентов (относительно Fmoc-аминокислоты) DIEA в 4-10 объемах ДМФ при комнатной температуре; и более предпочтительно, от 0,5 до 1,5 молярных эквивалентов (относительно Fmoc-аминокислоты) связующего реагента (реагентов) с 1,5 до 2,5 молярными эквивалентами (относительно Fmoc-аминокислоты) DIEA в 5-7 объемах ДМФ в течение 60 минут при температуре от 15 до 30°C.
(g) промывки смолы после каждого присоединения, от 2 до 4 раз в 7-12 объемах ДМФ в течение вплоть до 5 минут; и более предпочтительно 2 раза в 10 объемах ДМФ в течение вплоть до 5 минут;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отщепления целевого пептида от смолы при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты, используя отщепляющий коктейль, путем:
- погружения смолы в отщепляющий коктейль и перемешивания в течение 2-3 часов при комнатной температуре, и более предпочтительно, путем погружения и перемешивания в течение 2,5 часа, и
- периодического барботирования смеси смола/отщепляющий коктейль газообразным азотом.
(j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы, затем
- промывки отработанной смолы небольшим объемом или свежего отщепляющего коктейля или смеси TFA/DCM (20:80 об/об) 1-2 раза; и
- необязательной промывки отработанной смолы небольшим объемом MeOH.
(k) комбинации комбинирования фильтрата и промывок и выпаривания, затем
- осаждения сырого пептида из объединенных выпаренного фильтрата и промывок, используя от 5 до 15 объемов MtBE;
- сушки выпавшего в осадок пептида до необходимого уровня сухости;
- растворения выпавшего в осадок пептида разбавленной кислотой, или разбавленной кислотой с органическим модификатором для использования в последующей хроматографической очистке;
- очищения пептидов и осуществления стадии солевого обмена, используя препаративную хроматографию с обращенной фазой.
Предпочтительный вариант по любому одному из непосредственно вышеприведенных аспектов настоящего изобретения, который отличается тем, что стадии (a)-(j) (новые подстадии обозначают как -№) далее определяют следующим образом:
(a) набухания Fmoc-амидной смолы Зибера, вначале используя от 1 до 3 обработок 7-12 объемами ДМФ в течение вплоть до 1 часа, еще более предпочтительно, 3 обработки в 10 объемах ДМФ длительностью от 10 до 30 минут на обработку;
(b) удаления защитных Fmoc групп на смоле Зибера, используя от 1 до 2 обработок раствором пиперидина в ДМФ (10-20% об/об) длительностью от 5 до 20 минут, еще более предпочтительно, 2 обработки 15% об/об пиперидина в ДМФ длительностью 10 минут;
(c) промывки смолы, у которой удалены защитные группы, от 3 до 5 раз в 7-12 объемах ДМФ, причем каждая промывка длительностью вплоть до 5 минут, еще более предпочтительно, 3 промывки 10 объемами ДМФ, причем каждая промывка длительностью вплоть до 5 минут;
(d) активирования Fmoc-аминокислоты (1,2-2,0 молярных эквивалента, или более предпочтительно, 1,5 молярных эквивалента относительно масштаба загрузки смолы) для присоединения путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ, добавления DIEA, перемешивания в течение вплоть до 5 минут, еще более предпочтительно, перемешивания в течение от 1 до 2 минут;
(e) добавления связующего раствора к смоле в реакторе;
(f) использования от 0,5 до 1,5 молярных эквивалентов связующего реагента (реагентов) относительно Fmoc-аминокислоты с 1,5-2,5 молярными эквивалентами DIEA относительно Fmoc-аминокислоты в 4-10 объемах ДМФ в течение 30-120 минут при комнатной температуре, еще более предпочтительно, используя от 5 до 7 объемов ДМФ в течение 60 минут при температуре от 15 до 30°C;
(g) промывки смолы после каждого присоединения от 2 до 4 раз в 7-12 объемах ДМФ в течение вплоть до 5 минут, еще более предпочтительно, 2 промывки 10 объемами ДМФ в течение вплоть до 5 минут;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) погружения смолы в отщепляющий коктейль и перемешивания в течение от 2 до 3 часов при комнатной температуре, более предпочтительно, погружения и перемешивания смолы в течение 2,5 часа;
(i-1) периодического барботирования раствора смола/отщепляющий коктейль газообразным азотом;
(j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы;
(j-1) промывания отработанной смолы небольшим объемом или свежего отщепляющего коктейля, или смеси TFA/DCM (20:80 об/об) от 1 до 2 раз;
(j-2) промывки отработанной смолы небольшим объемом MeOH;
(k) комбинации комбинирования фильтратов и выпаривания
(k-1) осаждения сырого пептида, используя от 5 до 15 объемов MtBE;
(k-2) сушки выпавшего в осадок пептида до необходимого уровня сухости
(k-3) растворения выпавшего в осадок пептида разбавленной кислотой, или разбавленной кислотой с органическим модификатором для использования в последующей хроматографической очистке
(k-4) очистки пептида и осуществления стадии солевого обмена, используя препаративную хроматографию с обращенной фазой.
Известно, что некоторые защитные группы (например, 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил (Pbf), защитная группа боковой цепи Arg) требуют более высокого процента кислоты, обычно 50-80%, для удаления защитных групп боковых цепей в разумных для практики рамках времени, однако, все остальные аспекты настоящего изобретения остаются теми же самыми. Другие предполагаемые защитные группы боковых цепей, включают, но ими не ограничиваются, метокситриметилбензолсульфонил (Mtr), 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонилхлорид (Pmc), 4,4-диметилоксибензгидрил (Mbh) и 2,4,6-триметоксибензил (Tmob).
В настоящем изобретении также предложено решение для таких ситуаций, когда желательно сохранить некоторые защитные группы боковых цепей во время и после отщепления. Так, например, важно сохранить защитные группы боковых цепей ацетамидометила (Acm) на Cys с тем, чтобы полный пептид можно было очистить в его линейно форме, и после этого осуществить циклизацию, когда защитные группы удаляют и дисульфидный мостик образуется между двумя Cys остатками.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1: график, изображающий голова к голове сравнение пептидов, синтезированных с использованием амидной смолы Ринка с пептидами, синтезированными с использованием амидной смолы Зибера в аналогичных процедурах синтеза. Получены пептиды различной длины, от 5 аминокислот до 30 аминокислот, в соответствии с раскрытыми в описании процедурами, и определен выход продуктов синтеза. Для пептидов каждой длины (отложена по y-оси графика), процентный выход (определяется по x-осям) с использованием амидной смолы Ринка представлен верхними полосками, и процентный выход с использованием амидной смолы Зибера представлен нижними полосками. Для каждого синтезированного пептида, то есть, для последовательности из 5 аминокислот, двух последовательностей из 8 аминокислот, аминокислотной последовательности из 8 аминокислот, модифицированной одним или более из фрагментов дофамина, и 30 аминокислотной последовательности, использование амидной смолы Зибера привело к более высоким % выходов.
Фиг. 2: график, представляющий воспроизводимость выходов продуктов синтеза для масштабов от 2 г до 2200 г при использовании амидной смолы Зибера для синтеза 5 пептидов из 5 аминокислот. Сообщают, что выход синтеза, составляющий около 80%, неизменно достигается для каждого масштаба.
Фиг. 3: график, представляющий относительную стоимость в расчете на материал, используемый для синтеза пептида из 8 аминокислот и пептида из 30 аминокислот, с использованием амидной смолы Ринка по сравнению с амидной смолой Зибера. Относительные стоимости в расчете на материал, используемый для синтеза пептидов, синтезированных с использованием амидной смолы Ринка для пептида из 8 аминокислот и пептида из 30 аминокислот, представлены верхними полосками, тогда как относительная стоимость для тех же самых пептидов, но полученных с использованием амидной смолы Зибера, представлены нижними полосками для каждого пептида. Как сообщалось, относительная стоимость производства с использованием амидной смолы Зибера меньше, чем стоимость с использованием амидной смолы Ринка.
Большинство поэтапных твердофазных способов синтеза требует использования полистирольной смолы для синтеза пептидных амидов. Амидные смолы Ринка используют в твердофазном синтезе пептидов для получения пептидных амидов с использованием Fmoc-защищенных аминокислот. Присоединение первой аминокислоты можно обеспечить, используя типичные способы образования амидной связи. Пептидные последовательности собирают в основных или в нейтральных условиях на амидной смоле Ринка, затем законченный пептид отщепляют от смолы в кислотных условиях. Обычно пептид отщепляют от амидной смолы Ринка, используя более 80% TFA об/об. (Stathopoulos, P.; Papas, S.; и Tsikaris, V., J. Pept. Sci., 2006, 12:227-37). Более сильные кислоты или более высокие концентрации TFA иногда отщепляют часть линкеров Ринка от полистирольного носителя, и привносят окрашенные примеси в отщепленный продукт. Поэтому для некоторых пептидов выход продуктов синтеза при использовании амидной смолы Ринка традиционно низок. Примерами смол Ринка являются:
Лабильность линкеров ʺсупер кислотно-чувствительнойʺ или ʺгипер кислотно-чувствительнойʺ смолы к низкой концентрации кислоты позволяет отщеплять от смолы полностью защищенные пептиды. Обычно 1-5% об/об TFA требуется для отщепления пептида. За исключением более низкой силы кислоты, необходимой для отщепления, такие смолы аналогичны амидным смолами Ринка, а именно, они представляют собой полистирольную матрицу близкого размера шариков с аналогичной емкостью загрузки. Как таковые, указанные смолы пригодны для конвергентного синтеза, использующего ту же самую Fmoc-химию в отношении введения первого и присоединения последующих остатков.
Амидную смолу Зибера, как пример ʺсупер восприимчивой к кислотеʺ смолы (Sieber, P., Tetrahedron Lett., 1987, 28(19):2107-10), используют главным образом для синтеза пептидных амидов, сохраняющих защитные группы боковых цепей, включая, но ими не ограничиваясь, трет-бутилоксикарбонил (Boc) и трет-бутиловый эфир (tBu), если используют низкие концентрации трифторуксусной кислоты (TFA) (1-5% об/об) в отщепляющем коктейле.
Так как амидную смолу Зибера традиционно используют для Fmoc твердофазного синтеза, необходимо, чтобы аминокислоты были Fmoc-защищены. Соответственно, защитные группы, которые остаются после завершения пептидного синтеза, необходимо отщепить. Отщепление оставшихся защитных групп требует жестких ацидолитических условий, таких как вплоть до 95% TFA, содержащей вплоть до 5% этандиола и вплоть до 5% 4-(метилмеркапто)фенола (Sieber, P., Tetrahedron Lett., 1987, 28(19):2107-10).
Авторы изобретения предприняли попытки синтеза чувствительного к кислоте пептидного амида из 8 остатков, используя амидную смолу Зибера. Они обнаружили, что линейные SPPS можно получить, используя амидную смолу Зибера вместе с Fmoc-химией. Авторы обнаружили, что регулируя условия, высокие концентрации кислоты, т.е. TFA, не требуются для отщепления конечного продукта от смолы Зибера. Кроме того, было обнаружено, что защитные группы боковых цепей можно удалить одновременно с отщеплением полученного пептида от амидной смолы Зибера, если использовать ʺумереннойʺ силы TFA/TIPS/DCM отщепляющий коктейль. В результате некоторой оптимизации авторы изобретения обнаружили, что можно синтезировать полной длины пептиды с защищенными аминокислотами, особенно такие, у которых защитные группы представляет собой Boc, tBu и/или Trt, и затем отщепить от смолы пептидные амиды с полностью удаленными защитными группами, минимизируя при этом разложение пептидов.
Авторы настоящего изобретения также предприняли попытку использовать амидную смолу Зибера для синтеза других пептидов длиной от 5 до 30 аминокислот, и пептидов, содержащих искусственные аминокислоты, также как проблематичные природные аминокислоты, такие как триптофан, цистеин и аргинин. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что пептиды, содержащие искусственные или проблематичные аминокислоты, можно синтезировать, используя амидную смолу Зибера со средней концентрацией TFA в процессе отщепления. Было также обнаружено, что пептиды, содержащие аргинин, можно синтезировать, используя амидную смолу Зибера, хотя более высокие концентрации TFA необходимы в процессе отщепления, особенно, если присутствуют сульфонильные защитные группы боковых цепей.
Неожиданно оказалось, что, амидная смола Зибера, если ее использовать способом, противоположным тому, который раскрыт в литературе, обеспечивает более высокие выходы более чистого сырого продукта. Например, авторы изобретения обнаружили, что выход продуктов синтеза возрастает с 18-30% при использовании амидной смолы Ринка, до 78-83% при использовании амидной смолы Зибера для получения аналога грелина H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, как раскрыто в WO 2004/014415. Для других пептидов, таких как гибриды дофамин-соматостатина, авторы настоящего изобретения сообщают, что выход продуктов синтеза при использовании амидной смолы Зибера составляет 72,6-80,8% по сравнению с выходами 13-71% при использовании обычно используемых смол, таких как семейство амидных смол Ринка (например, амидной MBHA смолы Ринка, амидной AM смолы Ринка, амидной смолы Ринка) в идентичных условиях. Авторы изобретения обнаружили, что при использовании амидной смолы Зибера выход возрастает в среднем на вплоть до 50% по сравнению с выходом при использовании амидных смол Ринка. Кроме того, выходы являются воспроизводимыми от загрузки к загрузке и в масштабе от 2 г до вплоть до 2,2 кг. Сравнительные выходы продуктов с использованием амидной смолы Ринка против амидной смолы Зибера в идентичных условиях синтеза пептидов различной длины, т.е. 5 аминокислот в длину до 30 аминокислот в длину, представлены на Фиг. 1. При каждом сравнении использование амидной смолы Зибера приводит к более высоким выходам продуктов синтеза, 70% против 10%. В результате, относительный процент стоимости в расчете на длину пептидов оказывается меньше при использовании амидной смолы Зибера вместо традиционной амидной смолы Ринка. Фиг. 3. Авторы настоящего изобретения также продемонстрировали воспроизводимость выходов продукта синтеза с использованием амидной смолы Зибера на Фиг. 2.
Далее, обычно используемые амидные смолы Ринка требуют высоких концентраций TFA, обычно 80-95% об/об, для отщепления конечного пептида от смолы. Авторы изобретения обнаружили, что при использовании амидной смолы Зибера требуется только 10-25% TFA. Как было указано выше, более высокие концентрации TFA смогут привести к значительному разложению пептида с течением времени, также как присутствие примесей, таких которые образуются в результате присоединения всей или части линкеров смолы к пептиду, что впоследствии может быть трудно удалить. Кроме того, обработка после отщепления происходит быстрее при использовании заявленного процесса, так как во время финального отщепления требуется меньше кислоты. Кроме того, было обнаружено, что можно уменьшить количества Fmoc-аминокислоты, связующих реагентов и растворителей, если использовать амидную смолу Зибера, без влияния на выход или степень чистоты получаемого пептида.
Ряд аминокислот, присутствующих в соединениях настоящего изобретения представлены в описании следующим образом:
A3c | 1-амино-1-циклопропанкарбоновая кислота |
A4c | 1-амино-1-циклобутанкарбоновая кислота |
A5c | 1-амино-1-циклопентанкарбоновая кислота |
A6c | 1-амино-1-циклогексанкарбоновая кислота |
Abu | α-аминомасляная кислота |
Acc | 1-амино-l-цикло(C3-C9)алкилкарбоновая кислота |
Act | 4-амино-4-карбокситетрагидропиран, т.е.,: |
Aepa | 4-(2-аминоэтил)-l-карбоксиметилпиперазин, представленный структурой: |
Aib | α-аминоизомасляная кислота |
Ala или A | аланин |
β-Ala | бета-аланин |
Apc | аминопиперидинилкарбоновая кислота, т.е.: |
Arg или R | аргинин |
hArg | гомоаргинин |
Asn или N | аспарагин |
Asp или D | аспарагиновая кислота |
Bal | 3-бензотиенилаланин, т.е.: |
Bip | 4,4'-бифенилаланин, т.е.: |
Bpa | 4-бензоилфенилаланин, т.е. |
Caeg | N-(2-аминоэтил)-N-(2-цистосинил-l-оксоэтил)глицин, представленный структурой: |
Cha | B-циклогексилаланин; |
Cys или C | цистеин; |
Dab | 2,4-диаминомасляная кислота, (α,γ-диаминомасляная кислота); |
Dap | 2,3-диаминопропионовая кислота, (α,β-диаминопропионовая кислота); |
Dip | β,β-дифенилаланин, т.е.: |
Dhp | 3,4-дегидропролин |
Dmt | 5,5-диметилтиазолидин-4-карбоксил |
2-Fua | β-(2-фурил)аланин, т.е.: |
Gin или Q | глутамин |
Glu или E | глутамовая кислота |
Gly или G | глицин |
His или H | гистидин |
3-Hyp | транс-3-гидрокси-L-пролин, т.е., (2S,3S)-3-гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота; |
4-Hyp | 4-гидроксипролин, т.е., (2S,4R)-4-гидроксипирролидин-2-карбоновая кислота; |
Ile или I | изолейцин |
Inc | индолин-2-карбоновая кислота |
Inp | изонипекотиновая кислота, т.е.: |
Ktp | 4-кетопролин |
Leu или L | лейцин |
hLeu | гомолейцин |
Lys или K | лизин |
Lys(Ac) | лизин(ацетил) |
Met или M | метионин |
1-Nal | β-(l-нафтил)аланин: |
2-Nal | β-(2-нафтил)аланин; |
Nle | норлейцин |
Nva | норвалин |
Oic | октагидроиндол-2-карбоновая кислота; |
Orn | орнитин |
2-Pal | β-(2-пиридил)аланин, т.е., |
3-Pal | β-(3-пиридил)аланин, т.е.: |
4-Pal | β-(4-пиридил)аланин, т.е.: |
Pff | пентафторфенилаланин, т.е. |
Phe или F | фенилаланин |
hPhe | гомофенилаланин |
Pim | 2'-(4-фенил)имидазолил, т.е. |
Pip | пипеколиновая кислота |
Pro или P | пролин |
Ser или S | серин |
Ser(Bzl) | серин(O-бензил) |
Taz | 6-(4-тиазолил)аланин, т.е., |
2-Thi | β-(2-тиенил)аланин, т.е. |
3-Thi | β-(3-тиенил)аланин, т.е. |
Thr или T | треонин |
Thr(Bzl) | треонин(O-бензил) |
Thz | тиазолидин-4-карбоновая кислота |
Tic | l,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота |
Tle | трет-лейцин |
Trp или W | триптофан |
(N-Me)D-Trp | Na-метил-D-триптофан |
Tyr или Y | тирозин |
3-I-Tyr | 3-иодотирозин |
Val или V | валин |
ʺDop1ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop2ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop3ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop4ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop5ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop6ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop7ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop8ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop9ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop10ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop11ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop12ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
ʺDop13ʺ подразумевает соединение структурной формулы:
Lys(Dop2) имеет структуру:
Dop2-Lys(Dop2) имеет структуру:
Lys(Dop5) имеет структуру:
Dop5-Lys(Dop5) имеет структуру:
Греческую букву пси ʺψʺ используют в описании для указания на то, что пептидная связь была заменена псевдопептидной связью. В названии аминокислотной последовательности, формат термина Ψ представляет собой Α1-ψ-(Χ-Χ')Α2, где A1 представляет собой аминоацильный радикал, карбонильная группа которого была модифицирована до X, и A2 представляет собой аминоацильный радикал, α-аминогруппа которой была модифицирована до X'. X и X' изображены как цепочки элементарных символов элементов, разделенные связью, например, Tyr-ψ-(CH2-NH)Gly.
В заявке использованы следующие сокращения:
Ac | ацетил |
ACN | ацетонитрил |
Acm | ацетамидометил |
AM | аминометил |
Boc | трет-бутилоксикарбонил |
DCE | дихлорэтан |
DCM | дихлорметан |
DIC | N,N'-диизопропилкарбодиимид |
DIEA | N,N-диизопропилэтиламин |
ДМФ | N,N-диметилформамид |
DTT | дитиотреитол |
EDT | этандитиол |
Fmoc | 9-фторенилметилоксикарбонил |
HATU | O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат (или N-[(диметиламино)-1H-1,2,3-триазоло-[4,5-b]пиридин-1-илметилен]-N-метилметанаминий гексафторфосфат N-оксид) |
HBTU | 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний гексафторфосфат (или N-[(1H-бензотриазол-1-ил)-(диметиламино)метилен]-N-метилметанаминий гексафторфосфат N-оксид) |
HCTU | (2-(6-хлор-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3- тетраметиламиний гексафторфосфат) (или N-[(1H-6-хлорбензотриазол-1-ил)-(диметиламино)метилен]-N-метилметанаминий гексафторфосфат N-оксид) |
HJAt | 1-гидрокси-7-азабензотриазол |
HOBt | 1-гидроксибензотриазол |
HPLC | Высокоэффективная жидкостная хроматография |
LOD | Потери при сушке |
Mbh | 4,4-диметилоксибензгидрил |
MBHA | 4-метилбензгидриламин |
MtBE | метил трет-бутиловый эфир |
Mtr | метокситриметилбензолсульфонил |
OtBu | трет-бутиловый эфир |
Pbf | 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил |
PEG | полиэтилнгликоль |
Pmc | 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонилхлорид |
TBTU | 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторборат (или N-[(1H-бензотриазол-1-ил)-(диметиламино)метилен]-N-метилметанаминий тетрафторборат N-оксид) |
tBu | трет-бутиловый эфир |
TES | триэтилсилан |
TFA | трифторуксусная кислота |
TIPS | триизопропилсилан |
Tmob | 2,4,6-триметоксибензил |
Trt | тритил или трифенилметил |
Если не указано иначе, следующие определения представлены далее для иллюстрации и определения смысла и объема различных терминов, используемых для описания настоящего изобретения.
Термин ʺотщепляющий коктейльʺ в том смысле, как использован в описании, относится к смеси реагентов, использованных для удаления или отщепления, собранных пептидов от смолы. Кроме того, отщепляющий коктейль также служил для удаления всех защитных групп боковых цепей и N-концевых защитных групп.
Термин ʺоколоʺ (или ʺприблизительноʺ) в том смысле, как использован в описании, в отношении параметров или количеств, означает, что указанные параметры или количества составляют величину, отличающуюся на ±5% от указанного параметра или количества. Так, например, ʺоколо 20%ʺ означает (20±20*0,05)% что равно (20±0,1)%.
Термин ʺсмолаʺ в том смысле, как использован в описании, относится или к Fmoc-амидной смоле Зибера или амидной смоле Зибера, к которым присоединена одна или более из аминокислот.
Термин ʺкомнатная температураʺ (или температура окружающей среды) означает температурный интервал от 15 до 30°C.
Следующие примеры приведены с целями иллюстрации способа настоящего изобретения и никоим образом не ограничивают настоящее изобретение.
В настоящем изобретении раскрыт новый способ синтеза пептидов, включающий постадийную твердофазную химию.
В предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтического пептида, где указанный пептид выбирают из аналогов соматостатина, бомбезина, VIP, PACAP, GHRH, глюкагена, кальцитонина, пептида YY, нейромедина B, PTH, PTHrP, PTH2, GLP-1, уротензина-II, грелина, меланокортина, MIS, LHRH, атропина, GIP, нейропептида Y, IGF-1, гибридов дофамин-соматостатина и ACTH.
В более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды выбирают из аналогов грелина или гибридов дофамин-соматостатина.
В более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанный пептид выбирают из аналогов грелина.
В более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды выбирают из аналогов грелина формулы (I)
R1-A1-A2-A3-A4-A5-R2 (I),
где
A1 представляет собой Aib, Apc или Inp;
A2 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl) или D-Trp;
A3 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1 Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl) или D-Trp;
A4 представляет собой 2Fua, Orn, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi, 3Thi, Thr(Bzl);
A5 представляет собой Apc, Dab, Dap, Lys, Orn, или исключен;
R1 представляет собой водород; и
R2 представляет собой OH или NH;
при условии, что
если A5 представляет собой Dab, Dap, Lys, или Orn, тогда:
A2 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
A3 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-BaI; или
A4 представляет собой 2Thi, 3Thi, Taz, 2Fua, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Orn, Thr(Bzl) или Pff;
если A5 удален, тогда:
A3 представляет собой D-Bip, D-Bpa или D-Dip; или
A4 представляет собой 2Fua, Pff, Taz, или Thr(Bzl); или
A1 представляет собой Apc и -
A2 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
A3 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
A4 представляет собой 2Thi, 3Thi, Orn, 2Pal, 3Pal или 4Pal;
и более конкретно, соединение формулы (I), где
A1 представляет собой Aib, Apc или Inp;
A2 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl) или D-Trp;
A3 представляет собой D-Bal, D-Bpa, D-Dip, D-1 Nal, D-2Nal или D-Trp;
A4 представляет собой Orn, 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi или Thr(Bzl); и
A5 представляет собой Apc, Lys или удален.
В более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды представляют собой аналог грелина формулы (I), как раскрыто выше, где
A1 представляет собой Apc или Inp;
A2 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-1 Nal или D-2Nal;
A3 представляет собой D-Bal, D-1 Nal, D-2Nal или D-Trp;
A4 представляет собой 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi или Thr(Bzl); и
A5 представляет собой Apc или Lys.
В более предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды представляют собой аналоги грелина, выбранные из H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, H-Inp-D-2Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, H-Inp-D-Bal-D-Trp-2Thi-Apc-NH2 и H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH2, и более конкретно, H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2.
В более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды представляют собой аналоги гибридов дофамин-соматостатина, т.е. гибридные молекулы, включающие соматостатин или его аналоги и по меньшей мере один фрагмент дофамина.
В более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды представляют собой аналоги гибридов дофамин-соматостатина, включая структуры Dop A или DopA- Lys(DopA), где Lys представляет собой L-лизин, если только точно не указан как D-Lys, A представляет собой 1-13, например, Dop1, Dop2, Dop3, Dop4, Dop5, Dop6, Dop7, Dop8, Dop9, Dop10, Dop11, Dop12, Dop13.
В другом более предпочтительном варианте настоящее изобретение относится к способу синтеза терапевтических пептидов, где указанные пептиды представляют собой аналоги гибридов дофамин-соматостатина, включая структуру DopA-Lys(DopA), и соединение Dop2-D-Lys(Dop2)-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2.
Общий способ синтеза терапевтических пептидных амидов с полностью удаленными защитными группами по способу настоящего изобретения проиллюстрирован далее.
Вначале осуществляют набухание Fmoc-амидной смолы Зибера (Merck Chemicals, Darmstadt, Germany), используя от 1 до 3 обработок 7-12 объемами, 10 объемами предпочтительно, ДМФ (Samsung, Korea), в течение вплоть до 1 часа, хотя 3 обработки длительностью около 10-30 минут каждая предпочтительны.
Удаление Fmoc с амидной смолы Зибера осуществляют, используя от 1 до 2 обработок раствором пиперидина в ДМФ (около 10-20% об/об, 15% об/об предпочтительно) длительностью от 5 до 20 минут, хотя 2 обработки длительностью 10 минут каждая предпочтительны.
Смолу с удаленными защитными группами промывают от 3 до 5 раз в 7-12 объемах ДМФ в течение вплоть до 5 минут, хотя 3 промывки 10 объемами ДМФ длительностью вплоть до 5 минут для каждой промывки предпочтительны.
Fmoc-аминокислоты активируют для присоединения к смоле путем растворения Fmoc-аминокислоты вместе со связующим реагентом (реагентами) в ДМФ, добавления основания, такого как DIEA (SAFC, Gillingham, United Kingdom), перемешивания в течение вплоть до 5 минут (1-2 минут предпочтительно), и добавления к смоле в реакторе.
Присоединение Fmoc-аминокислоты осуществляют, используя от около 1,2 до 2,0 молярных эквивалентов (1,5 молярных эквивалентов предпочтительно) Fmoc-аминокислоты относительно смолы, используя HCTU (Merck Chemicals) или TBTU/HOBt (от 0,5 до 2,0 молярных эквивалентов относительно Fmoc-аминокислоты) (как TBTU так и HOBt получены из SAFC) с основанием, предпочтительно DIEA (от около 1,5 до 3,5 молярных эквивалентов относительно Fmoc-аминокислоты, хотя специфические эквиваленты предпочтительны для конкретных аминокислот), в ДМФ (от 4 до 10 объемов, от 5 до 7 объемов предпочтительно) длительностью от 30 до 120 минут (хотя длительность варьируется в зависимости от присоединяемой аминокислоты, однако, 60 минут предпочтительны для большинства аминокислот) при комнатной температуре (предпочтительно, от 15 до 30°C). Или HCTU (1,2 эквивалента относительно Fmoc-аминокислоты) или TBTU с HOBt (0,98 молярных эквивалентов) предпочтительны в зависимости от подлежащей к присоединению аминокислоты.
После каждого присоединения Fmoc-аминокислоты, смолу промывают от 2 до 4 раз в 7-12 объемах ДМФ (2 промывки в 10 объемах ДМФ предпочтительны) причем каждая промывка длительностью вплоть до 5 минут.
Целевой пептид отщепляют от смолы и все защитные группы боковых цепей ʺудаляютʺ, используя отщепляющий коктейль, состоящей из от около 15 до 25% об/об TFA (Rhodia, Lyon, France) (хотя предпочтительно от 15 до 20% об/об, и приблизительно 20% об/об более предпочтительно) с около 2,5 до 12% об/об TIPS (SAFC, Gillingham, United Kingdom) (хотя предпочтительны 5-10% об/об, и около 10% об/об более предпочтительны) используют в качестве акцепторов, причем остальная часть отщепляющего коктейля включает от 62,5 до 82,5% об/об DCM (INEOS Chlor, Runcorn, UK) (в зависимости от процента используемых TFA и TIPS). Указанную смолу добавляют и перемешивают с отщепляющим коктейлем в течение от 2 до 3 часов (2,5 часа предпочтительны) при приблизительно комнатной температуре (от около 15 до 30°C). Периодически реакционную смесь барботируют газообразным азотом или поддерживают в атмосфере газообразного азота. Отщепляющую смесь, содержащую целевой пептид и ʺотработаннуюʺ смолу, отфильтровывают. ʺОтработаннуюʺ смолу промывают небольшим объемом или свежего отщепляющего коктейля или смеси TFA/DCM (15-20:80-85 об/об) (от 1 до 2 раз, используя от 1 до 2 объемов больше массы смолы). После этого может следовать необязательная промывка небольшим объемом MeOH (от 1 до 2 раз, используя от около 1 до 2 объемов больше массы смолы) (Univar, Dublin, Ireland).
Обогащенные пептидами фильтраты объединяют и выпаривают до <20% исходной массы фильтрата (<15% предпочтительно). Сырой пептид осаждают из концентрированного раствора, используя органический анти-растворитель, такой как MtBE (Univar, Dublin, Ireland) (от около 5 до 15 объемов, предпочтительно, от 6,5 до 10 объемов), фильтруют и промывают небольшими объемами того же самого органического анти-растворителя (вплоть до 3 раз, используя от около 1 до 2 объемов). Выпавший в осадок пептид можно высушить. Растворение сухого или полувлажного пептидного осадка для последующей очистки осуществляют, используя разбавленную кислоту, такую как уксусная кислота вместе с органическим растворителем, таким как ACN (INEOS Nitriles, Rolle, Switzerland) (около % об/об в зависимости от растворимости пептида и %, при котором он элюируется во время хроматографической очистки).
Очистку пептида до очень высокой степени чистоты (> 99%) вместе с солевым обменом (например, обменом соли TFA на ацетат) обеспечивают, используя препаративную ВЭЖХ с обращенной фазой (на C18 или C8 силикагеле, или на другой подходящей набивке) хорошо известную специалистам в данной области. Выделение очищенного пептида путем лиофилизации или другими способами выделения пептидного порошка из раствора (например, сушкой распылением, осаждением или кристаллизацией с последующей сушкой) хорошо известно специалистам в данной области.
При синтезе гибридных соединений, таких как гибриды дофамин-соматостатина, способ включает дополнительные стадии. Общую схему таких дополнительных стадий можно проиллюстрировать следующим образом: перед стадией (i),
Стадия h-1: дофамин активируют для присоединения путем растворения в HCTU и HOBt в ДМФ;
Стадия h-2: - основание добавляют к раствору со стадии (h-1);
Стадия h-3: раствор со стадии (h-2) перемешивают в течение 1 минуты, затем указанную смолу перемешивают в течение около 1,5 часа;
Стадия h-4: полученную смолу промывают ДМФ; и
Стадия h-5: указанную смолу дополнительно промывают 1-3 объемами MeOH.
Смесь TFA, TIPS и DCM используют для отщепления пептида от смолы и одновременного удаления защитных группы боковых цепей аминокислот, и предпочтительно, отношение TFA:TIPS:DCM составляет 15:5:80. Затем осадок промывают MtBE. И наконец, полученный осадок циклизуют.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Пример 1: Синтез аналога грелина H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2 (как раскрыто в международной патентной заявке WO 2004/014415, которая включена для ссылки во всей полноте). В раскрытом далее способе все эквиваленты даны относительно масштаба загрузки смолы.
Указанный в заголовке пептид синтезируют в 50-литровом фильтр-реакторе (Buchi, Flawil, Switzerland).
Синтез осуществляют в масштабе 1,04 моля (1,4 кг загрузка смолы).
Приблизительно 1,41 кг Fmoc-амидной смолы Зибера набухают в ДМФ (3 раза по 10 объемов). Fmoc группы удаляют, используя две обработки 15% об/об раствором пиперидина (BASF, Schwarheide, Germany) в ДМФ (2×10 объемов, 10 минут каждая). Затем смолу промывают ДМФ (3×10 объемов).
Некоторые из используемых Fmoc-аминокислот (Apc, D-Trp) требуют Boc-защиты боковых цепей, другие Fmoc-аминокислоты (Phe, D-Bal, Inp) не требуют защиты боковых цепей.
Вводимый в реактор раствор 1,5 эквивалентов Fmoc-Apc(Boc)-OH, предварительно активируют 1,8 эквивалентами HCTU и 3 эквивалентами DIEA в ДМФ (6 объемов). Раствор и смолу перемешивают в течение приблизительно 90 минут. Смолу осушают и промывают ДМФ (2×10 объемов). Fmoc группы удаляют, как раскрыто выше, и присоединяют вторую аминокислоту, Fmoc-Phe-OH, используя те же самые условия, которые были указаны для Fmoc-Apc(Boc)-OH. Цикл удаления Fmoc, промывки и присоединения Fmoc-аминокислоты и промывки повторяют для Fmoc-D-Trp(Boc)-OH, Fmoc-D-Bal-OH и Fmoc-Inp-OH на стадиях присоединения Fmoc-аминокислоты, используя 1,45 эквивалентов TBTU, 1,45 эквивалента HOBt и 2,25 эквивалента DIEA в ДМФ (6-7 объемов). Время присоединения составляет 60 минут.
После завершения сборки пептида на амидной смоле Зибера, смолу промывают ДМФ и затем дополнительно дважды промывают 10 литрами метанола и сушат.
Пептид отщепляют от смолы, и защитные группы его боковых цепей удаляют, используя 10 объемов отщепляющего коктейля, включающего TFA/TIPS/DCM (20/10/70% об/об), в течение 2,5 часа. Пептид-содержащий фильтрат выпаривают при пониженном давлении, осаждают и промывают MtBE перед тем, как растворяют в разбавленной уксусной кислоте и ацетонитриле для последующей очистки. Выход продукта синтеза составляет 80,8%, степень чистоты по данным ВЭЖХ составляет 90,0%.
Пептид очищают, используя колонку препаративной ВЭЖХ с обращенной фазой (Novasep, Pompey, France), набитую C18 стационарной фазой (EKA Chemicals AB, Bohus, Sweden). Очистку и солевой обмен осуществляют, используя градиентное элюирование, используя в качестве буферов ацетат аммония и уксусную кислоту и ацетонитрил в качестве органического модификатора.
Пример 2: Синтез гибрида дофамин-соматостатина формулы
(т.e. Dop2-D-Lys(Dop2)-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH2, как раскрыто в международной патентной заявке WO 2004/091490, которая включена в описание по ссылке во всей своей полноте).
В раскрытом далее способе все эквиваленты приведены относительно масштаба загрузки смолы.
Указанный в заголовке пептид синтезируют в 50-литровом фильтр-реакторе.
Синтез осуществляют в масштабе 0,72 моля (1,2 кг загрузка смолы).
Используемые защищенные аминокислоты можно получить из Synthetech, Inc., Albany, Oregon, USA или Senn Chemicals, Dielsdorf, Switzerland
Около 1,2 кг Fmoc-амидной смолы Зибера набухают в ДМФ (3×10 объемов) в реакторе и Fmoc группы удаляют, используя две обработки 15% об/об раствором пиперидина в ДМФ (10 объемов на обработку длительностью 10 минут). Смолу промывают ДМФ (4×10 объемов).
Первую аминокислоту, которую необходимо присоединить к смоле, Fmoc-Thr(tBu)-OH (2,0 эквивалента, TBTU (1,96 эквивалента), HOBt (1,96 эквивалента) и DIEA (3,0 эквивалента в ДМФ (5,5 объемов) перемешивают со смолой в течение 60 минут. Смолу выделяют, и Fmoc-Thr(tBu)-OH снова присоединяют, используя Fmoc-Thr(tBu)-OH (1,0 эквивалент), TBTU (0,98 эквивалента), HOBt (0,98 эквивалента) и DIEA (1,5 эквивалента) в ДМФ (2,8 объема) в течение 60 минут.
Смолу промывают ДМФ (4×10 объемов).
Fmoc группы удаляют, как раскрыто выше, и вторую аминокислоту, Fmoc-Cys(Acm)-OH, присоединяют, используя те же самые условия, что указаны для Fmoc-Thr(tBu)-OH. Цикл удаления Fmoc, промывки, присоединения Fmoc-аминокислоты и промывки повторяют для Fmoc-Abu-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH и Fmoc-D- Lys(Fmoc)-OH в указанном порядке. Стадии присоединения Fmoc-аминокислот осуществляют, используя TBTU (1,96 эквивалента), HOBt (1,96 эквивалента) и DIEA (3,0 эквивалента) в ДМФ (5,8-7 объемов) в течение 60 минут. Дофаминовая часть указанной в заголовке молекулы, т.е.
(Biomeasure, Inc., Milford, MA, USA) активируют для присоединения путем растворения ее (2,75 молярных эквивалентов относительно смолы), HCTU (2,79 эквивалента) и HOBt (3,3 эквивалента) в ДМФ (12,3 объема на грамм смолы), добавления DIEA (6,27 эквивалента) и перемешивания в течение 1 минуты перед перемешиванием со смолой в течение 1,5 часа.
После окончательной промывки пептидильной смолы, используя ДМФ, смолу дополнительно промывают MeOH (2×10 объемов) и сушат.
Отщепление гибридного пептида от смолы и удаление защитных групп боковых цепей осуществляют в одном реакторе, используя смесь TFA:TIPS:DCM (15:5:80, 12 объемов, 34,3 л) в течение 2,0 часов. Используют периодическое барботирование отщепляющей реакционной смеси газообразным азотом (длительностью 1-2 минуты каждые 30 минут). После отфильтровывания отщепляющей смеси (которая содержит целевой пептид) от смолы, ʺотработаннуюʺ смолу промывают смесью TFA/DCM (15:85) (1,3 объема от массы смолы, 3 раза). Фильтраты с большим содержанием пептидов объединяют и упаривают до 10,4% (6,2 кг) от исходной массы фильтрата. Сырой пептид осаждают из концентрированного раствора, добавляя к перемешиваемой MtBE (6,5 объемов относительно массы остатка после упаривания, 40 л), фильтруют и промывают MtBE (1 объем на массу, оставшуюся после упаривания, 6,2 л, один раз). Растворение полусухого осадка пептида для последующей циклизации осуществляют, используя 38 объемов (45 л) относительно массы смолы 0,1% об/об TFA/вода, с ACN (30% об/об).
В результате синтеза/отщепления выход составляет 72,6%, степень чистоты по данным ВЭЖХ составляет 79,1%.
Примеры терапевтических пептидов, которые можно синтезировать, используя раскрытый в описании новый процесс, включают, но ими не ограничиваются, следующие:
Гибриды дофамин-соматостатина, которые можно синтезировать, используя заявленный способ, включают, но ими не ограничиваются, те молекулы, которые раскрыты в WO 02/100888 и WO 04/091490, а именно:
ДРУГИЕ ВАРИАНТЫ
Из вышеприведенного описания специалисты в указанной области могут легко понять существенные характеристики настоящего изобретения, и, не выходя за рамки сути и объема изобретения, смогут внести в изобретение различные изменения и модификации, чтобы адаптировать его к различным использованиям и условиям. Таким образом, другие варианты также попадают в объем формулы изобретения.
Claims (67)
1. Способ синтеза терапевтического пептида с использованием поэтапной твердофазной Fmoc-химии, включающий следующие стадии:
(a) набухания Fmoc-смолы Зибера (также именуемой как амидная смола Зибера или Fmoc амидная смола Зибера) в диполярном апротонном растворителе;
(b) удаления защитных Fmoc групп с использованием раствора пиперидина в диполярном апротонном растворителе;
(c) промывки смолы после удаления защитных Fmoc групп диполярным апротонным растворителем;
(d) активирования Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в диполярном апротонном растворителе с последующим добавлением основания и перемешиванием;
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения активированной Fmoc-аминокислоты с использованием (2-(6-хлор-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфата) (HCTU) или 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторкората (TBTU)/1-гидроксибензотриазол (HOBt) с основанием в диполярном апротонном растворителе в качестве связующего реагента;
(g) промывки смолы после каждого присоединения Fmoc-аминокислоты;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отщепления целевого пептида от смолы при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты, используя отщепляющий коктейль;
j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы; и
(k) выпаривания фильтратов и осаждения и частичной очистки сырого продукта от концентрированного раствора органическим растворителем до получения частично очищенного пептида, где указанный пептид представляет собой аналог грелина формулы (I)
где
А1 представляет собой Aib, Apc или Inp;
А2 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl) или D-Trp;
А3 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl) или D-Trp;
А4 представляет собой 2Fua, Orn, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi, 3Thi, Thr(Bzl);
А5 представляет собой Apc, Dab, Dap, Lys, Orn, или исключен;
R1 представляет собой водород; и
R2 представляет собой ОН или NH;
при условии, что
если А5 представляет собой Dab, Dap, Lys, или Orn, тогда:
А2 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
А3 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
А4 представляет собой 2Thi, 3Thi, Taz, 2Fua, 2Pal, 3Pal, 4Pal, Orn, Thr(Bzl) или Pff;
если А5 удален, тогда:
А3 представляет собой D-Bip, D-Bpa или D-Dip; или
А4 представляет собой 2Fua, Pff, Taz, или Thr(Bzl); или
А1 представляет собой Apc и
А2 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
А3 представляет собой D-Bip, D-Bpa, D-Dip или D-Bal; или
А4 представляет собой 2Thi, 3Thi, Orn, 2Pal, 3Pal или 4Pal.
2. Способ по п. 1, где диполярным апротонным растворителем является диметилформамид (ДМФ).
3. Способ по любому из предшествующих пунктов, где указанное основание представляет собой основание третичного амина и, предпочтительно, N,N-диизопропилэтиламин (DDEA).
4. Способ по п. 1 или 2, где указанный отщепляющий коктейль включает раствор TFA, один или более из акцепторов и дихлорметан (DCM), где указанный акцептор выбирают из группы, состоящей из триизопропилсилана (TIPS), триэтилсилана (TES), фенола, анизола, тиоанизола, воды, этандитиола (EDT), 1-додекантиола, дитиотреитола (DTT) и индола, при условии, что процент TFA в указанном отщепляющем коктейле не превышает 25%.
5. Способ по п. 4, где указанный акцептор выбирают из группы, состоящей из TIPS, TES, анизола и воды.
6. Способ по п. 5, в котором, если должны быть удалены Boc и tBu защитные группы боковых цепей, указанный отщепляющий коктейль включает от 15 до 25% об/об TFA с 2,5-12% об/об TIPS и остальную часть отщепляющего коктейля дополняют до 100%, используя DCM.
7. Способ по любому из пп. 1, 2, 5 или 6, где Fmoc группы вначале удаляют из смолы, используя пиперидин в ДМФ при концентрации указанного пиперидина в ДМФ менее чем 20% (об/об).
8. Способ по любому из пп. 1, 2, 5 или 6, где на стадии f аминокислотные остатки присоединяют, используя комбинацию связующих реагентов, где компоненты указанной комбинации связующих реагентов выбирают из группы, состоящей из TBTU/HOBt/DIEA, HCTU/DIEA, и HCTU/HOBt/DIEA, и более предпочтительно выбирают из группы, состоящей из HCTU/DIEA и TBTU/HOBt/DIEA.
9. Способ по любому из пп. 1, 2, 5 или 6, включающий последовательные стадии:
(a) набухания Fmoc-смолы Зибера (также именуемой как амидная смола Зибера или Fmoc амидная смола Зибера) в диметилформамиде (ДМФ);
(b) удаления защитных Fmoc групп, с использованием раствора пиперидина в ДМФ;
(c) промывки смолы после удаления защитных Fmoc групп с использованием ДМФ;
(d) активирования Fmoc-аминокислоты для присоединения к смоле, у которой удалены защитные группы, путем растворения Fmoc-аминокислоты и связующего реагента (реагентов) в ДМФ, с последующим добавлением N,N-диизопропилэтиламина (DIEA) и перемешиванием;
(e) добавления раствора активированной Fmoc-аминокислоты к смоле в реакторе;
(f) присоединения активированной Fmoc-аминокислоты с использованием (2-(6-хлор-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметиламиний гексафторфосфата) (HCTU) или 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторкорат (TBTU)/1-гидроксибензотриазола (HOBt) с N,N-диизопропилэтиламином (DIEA) в ДМФ в качестве связующего реагента;
(g) промывки смолы после каждого присоединения Fmoc-аминокислоты;
(h) повторения стадий (b)-(g) до образования пептида;
(i) отщепления целевого пептида от смолы при одновременном удалении защитных групп боковых цепей аминокислоты с использованием отщепляющего коктейля;
j) отфильтровывания отщепляющей смеси от смолы; и
(k) выпаривания фильтратов и осаждения и частичной очистки сырого продукта от концентрированного раствора органическим растворителем до получения частично очищенного пептида.
10. Способ по любому из пп. 1, 2, 5 или 6, где указанный пептид представляет собой аналог грелина формулы (I), где
А1 представляет собой Aib, Apc или Inp;
А2 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal, D-Ser(Bzl) или D-Trp;
А3 представляет собой D-Bal, D-Bpa, D-Dip, D-1Nal, D-2Nal или D-Trp;
А4 представляет собой Orn, 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi или Thr(Bzl); и
А5 представляет собой Apc, Lys или удален.
11. Способ по любому из пп. 1, 2, 5 или 6, где указанный пептид представляет собой аналог грелина формулы (I), где
А1 представляет собой Apc или Inp;
А2 представляет собой D-Bal, D-Bip, D-1Nal или D-2Nal;
А3 представляет собой D-Bal, D-1Nal, D-2Nal или D-Trp;
А4 представляет собой 3Pal, 4Pal, Pff, Phe, Pim, Taz, 2Thi или Thr(Bzl); и
А5 представляет собой Apc или Lys.
12. Способ по любому из пп. 1, 2, 5 или 6, где указанный пептид представляет собой аналог грелина, выбранный из H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, H-Inp-D-2Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2, H-Inp-D-Bal-D-Trp-2Thi-Ape-NH2 и H-Inp-D-Bal-D-Trp-Taz-Apc-NH.
13. Способ по п. 12, где указанный аналог грелина представляет собой H-Inp-D-Bal-D-Trp-Phe-Apc-NH2.
14. Способ по п. 1, где указанный аналог грелина представляет собой H-Inp-D-2-Nal-D-Trp-Phe-Apc-NH2.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201161580089P | 2011-12-23 | 2011-12-23 | |
US61/580,089 | 2011-12-23 | ||
PCT/IB2012/003056 WO2013093639A1 (en) | 2011-12-23 | 2012-12-21 | Process for the synthesis of therapeutic peptides |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014130277A RU2014130277A (ru) | 2016-02-20 |
RU2625793C2 true RU2625793C2 (ru) | 2017-07-19 |
Family
ID=48095921
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014130277A RU2625793C2 (ru) | 2011-12-23 | 2012-12-21 | Способ синтеза терапевтических пептидов |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9475837B2 (ru) |
EP (1) | EP2794634B1 (ru) |
JP (1) | JP6192657B2 (ru) |
KR (1) | KR101996700B1 (ru) |
CN (1) | CN104080795A (ru) |
AU (1) | AU2012356321B2 (ru) |
BR (1) | BR112014015275A8 (ru) |
CA (1) | CA2856257A1 (ru) |
ES (1) | ES2663869T3 (ru) |
HK (1) | HK1202125A1 (ru) |
MX (1) | MX350536B (ru) |
RU (1) | RU2625793C2 (ru) |
UA (1) | UA115542C2 (ru) |
WO (1) | WO2013093639A1 (ru) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103251933A (zh) | 2005-09-29 | 2013-08-21 | 益普生制药股份有限公司 | 用于刺激胃肠运动性的组合物和方法 |
WO2014147124A1 (en) | 2013-03-21 | 2014-09-25 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of hydantoin containing peptide products |
US10450343B2 (en) | 2013-03-21 | 2019-10-22 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of cyclic imide containing peptide products |
CN106459149A (zh) * | 2014-03-04 | 2017-02-22 | 莫图斯治疗公司 | H‑inp‑(d)bal‑(d)trp‑phe‑apc‑nh2及其可药用盐的液相合成的方法 |
CN110294789A (zh) * | 2018-03-21 | 2019-10-01 | 海南大学 | 含多巴寡肽的合成方法及其在抗帕金森病前药方面的应用 |
CN110317188B (zh) * | 2018-03-29 | 2023-01-17 | 深圳翰宇药业股份有限公司 | 化合物及其制备方法和应用 |
WO2020017919A1 (ko) * | 2018-07-19 | 2020-01-23 | 한미정밀화학주식회사 | 생리활성 폴리펩타이드에 사용되는 신규한 중간체 및 이의 제조방법 |
EP3914605B1 (en) | 2019-01-24 | 2022-12-07 | DSM IP Assets B.V. | Peptide precipitation method |
EP3939990A4 (en) * | 2019-02-15 | 2023-05-24 | Hanmi Fine Chemical Co., Ltd. | NEW INTERMEDIATE USED FOR A BIOLOGICALLY ACTIVE POLYPEPTIDE AND METHOD FOR PREPARING IT |
GB2590341A (en) * | 2019-10-04 | 2021-06-23 | Tiburio Therapeutics Inc | Storage stable somatostatin-dopamine chimeric compounds and salt forms thereof |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0473411A1 (en) * | 1990-08-31 | 1992-03-04 | Regents Of The University Of Minnesota | Xanthenylamide handle for use in peptide synthesis and methods of producing said handle and support incorporating it |
WO2007139589A1 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Sustained release glp-1 receptor modulators |
CN101538316A (zh) * | 2009-01-13 | 2009-09-23 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种固相法制备Eptifibatide的方法 |
WO2010141276A1 (en) * | 2009-06-03 | 2010-12-09 | Mallinckrodt Inc. | Solid phase peptide synthesis process for the production of goserelin |
RU2404189C9 (ru) * | 2002-01-18 | 2011-05-10 | Шеринг Корпорейшн | Новые пептиды как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита c |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002100888A1 (en) | 2001-06-08 | 2002-12-19 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. | Somatostatin-dopamine chimeric analogs |
JP4276462B2 (ja) * | 2002-04-11 | 2009-06-10 | アスビオファーマ株式会社 | 修飾ペプチドの製造方法 |
TWI331922B (en) * | 2002-08-09 | 2010-10-21 | Ipsen Pharma Sas | Growth hormone releasing peptides |
JP4579235B2 (ja) | 2003-04-11 | 2010-11-10 | イプセン ファルマ ソシエテ パール アクシオン サンプリフィエ | ソマトスタチン−ドーパミンキメラ類似体 |
JP4879265B2 (ja) * | 2005-07-22 | 2012-02-22 | イプセン ファルマ ソシエテ パール アクシオン サンプリフィエ | 成長ホルモン分泌促進薬 |
WO2007106385A2 (en) * | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques S.A.S. | Use of a ghrelin agonist to improve the catabolic effects of glucocorticoid treatment |
-
2012
- 2012-12-21 RU RU2014130277A patent/RU2625793C2/ru active
- 2012-12-21 BR BR112014015275A patent/BR112014015275A8/pt active Search and Examination
- 2012-12-21 EP EP12840868.9A patent/EP2794634B1/en not_active Not-in-force
- 2012-12-21 CN CN201280062490.7A patent/CN104080795A/zh active Pending
- 2012-12-21 ES ES12840868.9T patent/ES2663869T3/es active Active
- 2012-12-21 WO PCT/IB2012/003056 patent/WO2013093639A1/en active Application Filing
- 2012-12-21 US US14/368,154 patent/US9475837B2/en active Active
- 2012-12-21 AU AU2012356321A patent/AU2012356321B2/en not_active Ceased
- 2012-12-21 MX MX2014007263A patent/MX350536B/es active IP Right Grant
- 2012-12-21 JP JP2014548246A patent/JP6192657B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-12-21 KR KR1020147020136A patent/KR101996700B1/ko active IP Right Grant
- 2012-12-21 CA CA2856257A patent/CA2856257A1/en not_active Abandoned
- 2012-12-21 UA UAA201408394A patent/UA115542C2/uk unknown
-
2015
- 2015-03-16 HK HK15102654.6A patent/HK1202125A1/xx unknown
-
2016
- 2016-10-24 US US15/332,208 patent/US20170137489A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0473411A1 (en) * | 1990-08-31 | 1992-03-04 | Regents Of The University Of Minnesota | Xanthenylamide handle for use in peptide synthesis and methods of producing said handle and support incorporating it |
RU2404189C9 (ru) * | 2002-01-18 | 2011-05-10 | Шеринг Корпорейшн | Новые пептиды как ингибиторы ns3-серинпротеазы вируса гепатита c |
WO2007139589A1 (en) * | 2006-05-26 | 2007-12-06 | Bristol-Myers Squibb Company | Sustained release glp-1 receptor modulators |
CN101538316A (zh) * | 2009-01-13 | 2009-09-23 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种固相法制备Eptifibatide的方法 |
WO2010141276A1 (en) * | 2009-06-03 | 2010-12-09 | Mallinckrodt Inc. | Solid phase peptide synthesis process for the production of goserelin |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ES2663869T3 (es) | 2018-04-17 |
BR112014015275A2 (pt) | 2017-06-13 |
CN104080795A (zh) | 2014-10-01 |
AU2012356321B2 (en) | 2015-09-17 |
EP2794634B1 (en) | 2018-01-24 |
MX2014007263A (es) | 2014-08-01 |
US20170137489A1 (en) | 2017-05-18 |
BR112014015275A8 (pt) | 2017-06-13 |
WO2013093639A1 (en) | 2013-06-27 |
KR101996700B1 (ko) | 2019-07-04 |
MX350536B (es) | 2017-09-08 |
CA2856257A1 (en) | 2013-06-27 |
RU2014130277A (ru) | 2016-02-20 |
AU2012356321A1 (en) | 2014-07-17 |
HK1202125A1 (en) | 2015-09-18 |
US9475837B2 (en) | 2016-10-25 |
EP2794634A1 (en) | 2014-10-29 |
US20150045534A1 (en) | 2015-02-12 |
UA115542C2 (uk) | 2017-11-27 |
JP2015504045A (ja) | 2015-02-05 |
KR20140113696A (ko) | 2014-09-24 |
JP6192657B2 (ja) | 2017-09-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2625793C2 (ru) | Способ синтеза терапевтических пептидов | |
KR101087859B1 (ko) | 인슐린친화성 펩타이드 합성법 | |
JP5199126B2 (ja) | グルカゴン様ペプチドの合成 | |
US20080287650A1 (en) | High purity peptides | |
EP3398960A1 (en) | Method for preparing sermaglutide | |
CN113330024A (zh) | 制备gip/glp1双重激动剂的方法 | |
KR20170026326A (ko) | Amg 416의 제조 방법 | |
WO2011066386A1 (en) | Process for production of degarelix | |
AU2020334993B2 (en) | Methods of making incretin analogs | |
US20200317721A1 (en) | A process for preparing a glucagon-like peptide | |
PT1511761E (pt) | Processo para produção peptídeos cíclicos | |
CN104428310A (zh) | 细胞穿透肽和鉴定细胞穿透肽的方法 | |
JP3407260B2 (ja) | ランチオニン架橋ペプチド | |
CN114401981A (zh) | 胰高血糖素制造方法 | |
CN109306366B (zh) | 一种合成pt141的方法 | |
WO2023196765A1 (en) | Process for preparing a glp-1/glucagon dual agonist | |
WO2020202182A1 (en) | Process for the preparation of abaloparatide | |
EP4201951B1 (en) | Method for peptide synthesis | |
CN114945580B (zh) | 用于合成南吉博肽的方法 |