DE926085C

DE926085C - Verfahren zur Herstellung von Hemmstoffen des Blutgerinnungssystems

Info

Publication number: DE926085C
Application number: DESCH9804A
Authority: DE
Inventors: Gerhard Dr Bratfisch
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1952-06-22
Filing date: 1952-06-22
Publication date: 1955-04-07

Description

Verfahren zur Herstellung von Hemmstoffen des Blutgerinnungssystems Es .ist iseit längerer Zeit bekannt, daß Heparin die Bildung des B:lutgerinnungsfermentes Thirombin blockiert und die Wirkung von vorhandenen Thrombmn :aufhebt. Heparin wurde mit großem Erfolg zur Tfhrombosebek'ämpfung verwendet. Die Heparinproduktion ,aus Lunge, Leber usw. vermag indessen wegen der Unengiebigkeit des nur in begrenzten Mengen verfügbaren Ausgangsmaterials den Bedarf nicht voll zu .decken, so daß :man gezwungen war, nach Ersatzstoffen für das Heparin zu :suchen.
Durch Veresterung der Hyaluromsäure mit Schwefelsäure erhielt man eine Hyaluronschwefelsäure, der bei genügender Veresterung die gleichen Eigenschaften wie dem Heparin zukommen. Aber auch die Produktion der Hyaluronsäure aus Nabelschnüren ist :unzureichend. Bissher gefundene synthetische Produkte erwiesen sich bei der klinischen Erforschung als weit weniger wirksam.
Es wurde nun gefunden, daß aus dem Hepa-rin oder heparinoider M:ucopoilysacchani,d@säure durch eine bestimmte Vorbehand:lung mit gewi,ss@en Fermenten nach Art der Hyalu @ronidase Präparate mit größerer Hemmwirkung hergestellt werden können, wodurch eine erhebliche Ersparnis an wertvoller Substanz und damit eine bessere Abdeckung des Bedarfs ermöglicht wird.
So werden durch Einwirkung vom Testelsextraktenauf Heparin oder heparinoide Mucopolysaccharidsäuren, wie z. B. Hyaluronschwefelsäüre, im pH-Bereich von q. bis 8 diese so verändert, d@aß ihre Hemmwirkung auf Thrombin nach vorübergehendem Nachlassen wieder zunimmt und diejenige der Ausgangsstoffe nach einer bestimmten Einwirkungsdauer sogar erheblich übertrifft. (Erst bei weiterer Einwirkung der Fermenelösungen auf die Substrate verlieren diese dann langsam ihre Wirkung als Anticoagulans.) Bei fortlaufender Testung der Hemmwirkung während der Einwirkung des Fermentes (z. B. nach K. Lenggenhager, »Weitere Fortschritte in der Bl.utgerinn@u.naslehre«, S. '112, Georg Thieme VerJag-Stuttgart, 1949, Kapitel: Thrombin-Standardisierung) hat man es in der Hand, dessen Einwirkung im optimalen Zeitpunkt durch Zerstörung der Fermentaktivität, z. B. durch kurzes Erwärmen auf 90'°', abzubrechen.
Die Isolierung des so behandelten Heparins oder heparinoider Mucopolysaccharidsäure erfolgt nach bekannten Methoden für Polysaccharidsäuren (z. B. Char1eis und S.cott, J. biol. Chemiskry, 1023, 125, 437 [1933]) Bei der Gewinnung von Heparin aus Lunge, Leber oder Muskelfleisch bzw. bei der Reinigung von rohen Heparinlösungen hat man sich zum Abbau von störenden Begleitstoffen auch schon der Einwirkung von eiweißspaltenden Fermenten wie Trypsin, Pepsin oder Papayotin .bedient (vgl. deutsche Patentschrift 712 564 und USA.-Patentschrift 2 410 o84). Hierdurch wurde das in den genannten Ausgangsmaterialien vorliegende Heparin zwar besser erfaßt, seine spezifische Hemmwirkung jedoch nicht erhöht. Beispiel i Zu einer Lösung von Hepärin in n/io-Acetatpuffer pH 6,5 wird ein großer Überschuß eines Hyaluro,n!i.dasep.räparateis hinzugesetzt. Einwirlcurng bei 30' über 6 Stunden. Durch kurzes Erwärm-en auf 9o° wird die Fermentaktivität zerstört. Isolierumg nachbekannten Methoden von Polysaccharidsäuren. Setzt man das so behandelte Heparin zu einer Thrombinlösung zu, so wird die Aktivität dlieser Thram@hinlösung gegen Pferdeplaisrna weit mehr gemindert als durch das Ausgangsheparin..
Beispiele Zu einer Lösung von Hyaluronschwefelsäure in n/io-Acetatpuffer PH 4,5 -f- 3 % Na CL wird ein Hya,lurorni,dasepräp.arat zugesetzt. EinwiTk.ung bei 3o'°' bis etwa 2o Stunden. Durch laufendes Testen wird der Punkt, an dem größte Hemmwirkung auf Thrombin beobachtet wird, festgestellt. Durch Erwärmen ,der Lösung auf 90° wird die Reaktion abgeibrochen. Im übrigen wird wie im Beispiel i weitergearbelitet.
Die so behandelte Hyaluonschwefelsäur#, mindert die Aktivität einer Throm@binlösung ebenfalls weit mehr als die Ausgangshyaluronschwefel,säure.

Claims

PATENTANSPRÜCHE: i. Verfahren zur Herstellung von Hemmstoffen des Blutgerinnungssystems, dadurch gekennzeichnet, daß mnan Hepatin oder heparinoide M@ucopo@lysaccharidsäuren, wie z. B. Hyalu:ronschwefelsäure, mit Fermenten nach Art der Hyaluronidase, wie Testesextrakten, behandelt.
2. Verfahren nach Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, daß die Einwirkung des Ferrnentes durch Testung kontrolliert und in dem Zeitpunkt, an dem die optimale Hemmwirkung erreicht wird, durch Zerstörung der Fermentaktivität,beispielsweise ,durch kurzes Erhitzen auf 9o°, abgebrochen wird. Angezogene Druckschriften: Deutsche Patentschrift Nr. 712 564; USA.-Patentschrift Nr. 2 410 o84.