DE69936150T2

DE69936150T2 - Indomethacin-amidderivate zur antiangiogenen und/oder antitumorigen verwendung

Info

Publication number: DE69936150T2
Application number: DE69936150T
Authority: DE
Inventors: Amit S. Groton KALGUTKAR; Lawrence J. Nashville MARNETT
Original assignee: Vanderbilt University
Current assignee: Vanderbilt University
Priority date: 1999-01-07
Filing date: 1999-12-16
Publication date: 2008-01-31
Anticipated expiration: 2019-12-17
Also published as: EP1146788A4; CA2358289C; US20010034361A1; CA2358289A1; JP2002534362A; WO2000040088A1; BR9916800A; IL144127A0; CN1337850A; EP1146788A1; EP1146788B1; AU2369800A; ATE362758T1; DE69936150D1; AU760555B2; US6399647B2; CN1195515C; US6207700B1; IL144127A; ES2288039T3

Description

Diese Forschungsarbeit wurde mit einem Forschungszuschuss der Staatlichen Gesundheitsbehörde (National Institutes of Health, Forschungszuschuss Nr. CA47479) gefördert. Aus diesem Grund hält die Regierung der Vereinigten Staaten Rechte an dieser Erfindung.
Technisches Gebiet

Die vorliegende Erfindung betrifft sekundäre Amidderivate von Indomethacin (einem NSAID) gemäß Anspruch 1, die eine Inhibierung von Cyclooxygenase-2 (COX-2) zeigen, die weit größer ist als eine Inhibierung von Cyclooxygenase-1 (COX-1), und ebenso die analgetische, entzündungshemmende und/oder antipyretische Wirkung der Verbindung, d.h. des NSAID besitzen und ferner auch eine Inhibierung von Krebs, d.h. eine anti-antiogene und/oder antitumorgene Wirkung in warmblütigen Vertebraten, einschließlich Menschen zeigen. Tabelle der Abkürzungen

Abkürzung	Definition
NSAID	nicht-steroides, entzündungshemmendes Arzneimittel
COOH	Carbonsäurerest
COX	Cyclooxygenase
PGH₂	Prostaglandin H₂
PGD₂	Prostaglandin D₂
PGHS	Prostaglandinendoperoxidsynthase
PER	Peroxidase
SAR	Beziehung zwischen der Struktur und der Aktivität
GI	gastrointestinal
IC₅₀	Konzentration von Indomethacin (oder dem Indomethacinderivat) in Mikromol, bei der 50 % der COX-Aktivität inhibiert sind – je kleiner der IC₅₀-Wet ist, desto wirksamer ist das Arzneimittel

DMSO	Dimethylsulfoxid
¹⁴C-AA	[1-¹⁴C]-Arachidonsäure
HPLC	Hochleistungsflüssigkeitschromatographie
TCL	Dünnschichtchromatographie
mg	Milligramm
kg	Kilogramm
ml	Milliliter
μM	Mikromol/Liter
μl	Mikroliter
N	Normal (wenn es in Verbindung mit Säurekonzentrationen verwendet wird)

NMR	Kernmagnetische Resonanz
Et₂O	Diethylether
EtOAc	Ethylacetat
Et₃N	Triethylamin
AcOH	Essigsäure
CDCl₃	deuteriertes Chloroform
rt	Raumtemperatur (ungefähr 72 °F, 22 °C)
BOP-Cl	Bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)phosphonchlorid (verkauft von Aldrich in Wisconsin), und siehe ebenso den Beitrag in der Zeitschrift, Diago-Meseguer, Palomo-Coll, Fernandez-Lizarbe und Zugaza-Bilbao, „New Reagent for Activating Carboxyl Groups; Preparation an Reactions of N,N-Bis[2-oxo-3-oxazolidinyl]phosphorodiamidic Chloride", Synthesis (1980), S. 547-551




mp	Schmelzpunkt
FBS	Fötales Kälberserum
DMEM	Dulbeccos modifiziertes essentielles Medium
LPS	Lipopolysaccharid
PBS	phosphatgepufferte Kochsalzlösung
IFN-g	Interferon gamma

Hintergrund der Erfindung
Wie nachfolgend ausführlich erläutert werden wird, besteht das COX-Enzym in Wirklichkeit aus zwei Enzymen, COX-1 und COX-2, die verschiedene physiologische und pathophysiologische Funktionen ausüben. Wie allgemein bekannt ist, bewirkt Indomethacin in entzündungshemmenden und/oder analgetischen Dosen eine starke Inhibierung von COX-1, was die Auskleidung des Magens vor Säure schützt, und daneben eine relativ geringe Inhibierung von COX-2, was eine Entzündung als Reaktion auf Gelenkverletzungen oder eine Erkrankung der Gelenke, wie beispielsweise Arthritis, auslöst. Arzneimittelforscher haben daher seit mehreren Jahren auf eine Inhibierung der COX-2 alleine abgezielt, um so die Reizung des GI-Trakts, die bei einer Inhibierung der COX-1 verursacht wird, zu reduzieren oder aufzuheben.
Wie bei Smith, Garavito und DeWitt, „D.L. Prostaglandin Endoperoxide H Synthases (Cyclooxygenases) -1 and -2", J. Biol. Chem., (1996) Ausg. 271, S. 33157-33160 erörtert wird, schließt der relevante Schritt bei der Biosynthese von Prostaglandin und Thromboxan die Umwandlung von Arachidonsäure zu PGH₂ ein, die von der sequentiellen Wirkung der Aktivitäten von COX und PER der PGHS katalysiert wird, wie in dem folgenden Reaktionsschema gezeigt ist:
Dass die COX-Aktivität von zwei verschiedenen und unabhängig voneinander regulierten Enzymen stammt, die COX-1 und COX-2 genannt werden, ist bei DeWitt und Smith, „Primary Structure of Prostaglandin G/H Synthase from Sheep Vesicular Gland Determined from the Complementary DNA Sequence", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1988), Ausg. 85, S. 1412-1416; Yokoyama und Tanabe, „Cloning of Human Gene Encoding Prostaglandin Endoperoxide Synthase and Primary Structure of the Enzyme", Biochem. Biophys. Res. Commun., (1989), Ausg. 165, S. 888-894; und Hla und Neilson, "Human Cyclooxygenase-2-cDNA", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. (1992), Ausg. 89, S. 7384-7388 beschrieben.
COX-1 ist die konstitutive Isoform und ist in erster Linie für die Synthese der zytoprotektiven Prostaglandine in dem GI-Trakt und für die Synthese von Thromboxan, das die Plättchenaggregation von Blutplättchen auslöst, verantwortlich. Siehe Allison, Howatson, Torrence, Lee und Russell, „Gastrointestinal Damage Associated with the Use of Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs", N. Engl. J. Med., (1992), Ausg. 327, S. 749-754.
Zum anderen ist COX-2 induzierbar und kurzlebig. Ihre Expression wird als Reaktion auf Endotoxine, Cytokine und Mitogene stimuliert. Siehe Kujubu, Fletcher, Varnum, Lim und Herschman, „TIS10, A Phorbol Ester Tumor Promotor Inducible mRNA from Swiss 3T3 Cells, Encodes a Novel Prostaglandin Synthase/Cyclooxygenase Homologue", J. Biol. Chem., (1991), Ausg. 226, S. 12866-12872; Lee, Soyoola, Chanmugam, Hart, Sun, Zhong, Liou, Simmons und Hwang, "Selective Expression of Mitogen-Inducible Cyclooxygenase in Macrophages Stimulated with Lipopolysaccharide", J. Biol. Chem., (1992), Ausg. 267, S. 25934-25938; und O'Sullivan, Huggins, Jr. und Mccall, "Lipopolysaccharide-Induced Expression of Prostaglandin H Synthase-2 in Aveolar Macrophages is Inhibited by Dexamethasone by not by Aspirin", Biochem. Biophys. Res. Commun., (1993), Ausg. 191, S. 1294-1300.
Wesentlich ist die Hauptrolle, die COX-2 in der Biosynthese von Prostaglandin in Entzündungszellen (Monozyten/Makrophagen) und im zentralen Nervensystem spielt. Siehe Masferrer, Zweifel, Manning, Hauser, Leahy, Smith, Isakson und Seibert, „Selective Inhibition of Inducible Cyclooxygenase-2 in vivo is Antiinflammatory and Nonulcerogenic", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1994), Ausg. 91, S. 3228-3232; Vane, Mitchell, Appleton, Tomlinson, Bishop-Bailey, Croxtall and Willoughby, „Inducible Isoforms of Cyclooxygenase and Nitric Oxid Synthase in Inflammation", Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., (1994), Ausg. 91, S. 2046-2050; Harada, Hatanaka, Saito, Majima, Ogino, Kawamura, Ohno, Yang, Katori und Yamamoto, "Detection of Inducible Prostaglandin H Synthase-2 in Cells in the Exudate of Rat Carrageenin-Induced Pleurisy", Biomed. Res., (1994), Ausg. 15, S. 127-130; Katori, Harada, Hatanaka, Kawamura, Ohno, Aizawa und Yamamoto, "Induction of Prostaglandin H Synthase-2 in Rat Carrageenin-Induced Pleurisy and Effect of a Selective COX-2 Inhibitor", Advances in Prostaglandin, Thromboxane, and Leukotriene Research, (1995), Ausg. 23, S. 345-347; und Kennedy, Chan, Culp und Cromlish, "Cloning and Expression of Rat Prostaglandin Endoperoxide Synthase (Cyclooxygenase-2) cDNA", Biochem. Biophys. Res. Commun., (1994), Ausg. 197, S. 494-500.
Die unterschiedliche Verteilung von COX-1 und COX-2 in den Geweben stellt daher eine Grundlage für die Entwicklung von Arzneimitteln, die selektive COX-2-Inhibitoren sind (d.h. Spezifität für die Inhibierung der COX-2 besitzen, die weit größer ist als die für die Inhibierung der COX-1), als entzündungshemmende, analgetische und/oder antipyretische Mittel bereit, die minimal oder gar nicht dazu beitragen, dass eine GI oder hämatologische Anfälligkeit bei einer Inhibierung der COX-1 auftritt, wie es bei meisten der derzeit vermarkteten NSAID der Fall ist, da diese NSAID sowohl die COX-1 als auch die COX-2 inhibieren und ihre Spezifität zur Inhibierung der COX-1 weit größer ist als diejenige zur Inhibierung der COX-2, obwohl manche eine im Wesentlichen ähnliche inhibierende Aktivität gegen sowohl die COX-1 als auch die COX-2 haben. Siehe beispielsweise Meade, Smith und DeWitt, „Differential Inhibition of Prostaglandin Indoperoxide Synthase (Cyclooxygenase) Isozymes by Aspirin and Other Non-Steroidal Antiinflammatory Drugs", J. Biol. Che., (1993), Ausg. 268, S. 6610-6614.
Für zwei allgemeine Strukturklassen von selektiven COX-2-Inhibitoren (Spezifität weit größer als die Spezifität für die Inhibierung der COX-1), einschließlich bestimmter saurer Sulfonamide und Diarylheterozyklen wurden ausführliche Untersuchungen der SAR berichtet. Die in vivo-Aktivitäten dieser selektiven COX-2-Inhibitoren bestätigen die Auffassung, dass eine selektive COX-2-Inhibierung entzündungshemmend und nicht ulzerogen ist, wie in den folgenden Zeitschriftenartikeln erörtert wird. Gans, Galbraith, Roman, Haber, Kerr, Schmidt, Smith, Hewes und Ackerman, „Anti-Inflammatory and Safety Profile of DuP 697, a Novel Orally Effective Prostaglandin Synthesis Inhibitor", J. Pharmacol. Ex. Ther., (1990), Ausg. 254, S. 180-187; Penning, Talley, Bertenshaw, Carter, Collins, Docter, Graneto, Lee, Malecha, Miyashiro, Rogers, Rogier, Yu, Anderson, Burton, Cogburn, Gregory, Kobolt, Perkins, Seibert, Veenhuizen, Zhang und Isakson, "Synthesis and Biological Evaluation of the 1,5-Diarylpyrazole Class of Cyclooxygenase-2 Inhibitors: Identification of 4-[5-(4-Methylphenyl)-3-(trifluoromethyl)-1H-pyrazol-1-yl]benzenesulfonamide (SC-58635, Celecoxib)", J. Med. Chem., (1997), Ausg. 40, S. 1347- 1365; Khanna, Weier, Yu, Xu, Koszyk, Collins, Kobolt, Veenhuizen, Perkins, Casler Masferrer, Zhang, Gregory, Seibert und Isakson, "1,2-Diarylimidazoles as Potent Cyclooxygenase-2 Selective, and Orally Active Antiinflammatory Agents", J. Med. Chem., (1997), Ausg. 40., S. 1634-1647; Khanna, Weier, Yu Collins, Miyashiro, Kobolt, Veenhuizen, Curie, Siebert und Isakson, "1,2-Diralpyrroles as Potent and Selective Inhibitors of Cyclooxygenase-2", J. Med. Chem., (1997), Ausg. 40, S. 1619-1633; Tsuji, Nakamura, Konishi, Tojo, Ochi, Senoh und Matsuo, "Synthesis and Pharmacological Properties of 1,5-Diarylyrazoles and Related Derivatives", Chem. Pharm. Bull., (1997), Ausg. 45, S 987-995; Riendeau, Percival, Boyce, Brideau, Charleson, Cromlish Ethier, Evans, Falgueyret, Ford-Hutchinson, Gordon, Greig, Gresser, Guay, Kargman, Léger, Mancini, O'Neill, Quellet, Rodger, Thérien, Wang, Webb, Wong, Xu, Young, Zamboni, Prasit und Chan, "Biochemical and Pharmacological Profile of a Tetrasubstituted Furanone as a Highly Selective COX-2 Inhibitor", Br. J. Pharmacol., (1997), Ausg. 121, S. 105-117; Roy, Leblanc, Ball, Brideau, Chan, Charet, Cromlish, Ethier, Gauthier, Gordon, Greig, Guay, Kargman, Lau, O'Neill, Silva, Thérien, Van Staden, Wong, Xu und Prasit, "A New Series of Selective COX-2 Inhibitors: 5,6-Diarylthiazolo[3,2b][1,2,4]-triazoles", Bioorg. Med. Chem. Lett., (1997), Ausg. 7, S. 57-62; Thérien, Brideau, Chan, Cromlish, Gauthier, Gordon, Greig, Kargman, Lau, Leblanc, Li, O'Neil, Riendeau, Roy, Wang, Xu und Prasit, "Synthesis and Biological Evaluation of 5,6-Diarylimidazo[2.1-b]thiazoles as Selective COX-2 Inhibitors", Bioorg. Med. Chem. Lett., (1997), Ausg. 7, S. 47-52; Li, Norton, Reinhard, Anderson, Gregory, Isakson, Kobolt, Masferrer, Perkins, Seibert, Zhang, Zweifel und Reitz, "Novel Terphenyls as Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitors and Orally Active Anti-Inflammatory Agents", J. Med. Chem., (1996), Ausg. 39, S. 1846-1856; Li, Anderson, Burton, Cogburn, Collins, Garland, Gregory, Huang, Isakson, Kobolt, Logusch, Norton, Perkins, Reinhard, Seibert, Veenhuizen, Zhang und Reitz, "1,2-Diarylcyclopentenes as Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitors and Orally Active Anti-Inflammatory Agents", J. Med. Chem., (1995), Ausg. 38, S. 4570-4578; Reitz, Li, Norton, Reinhard, Huang, Penick, Collins und Garland, "Novel 1,2-Diarylcyclopentenes are Selective Potent and Orally Active Cyclooxygenase Inhibitors", Med. Chem. Res., (1995), Ausg. 5, S. 351-363; Futaki, Yoshikawa, Hamasaka, Arai, Higuchi, Iizuka und Otomo, "NS398, A Novel Nonsteroidal Antiinflammatory Drug with Potent Analgesic and Antipyretic Effects, which Causes Minimal Stomach Lesions", Gen. Pharmacol., (1993), Ausg. 24, S. 105-110; Wiesenberg-Boetcher, Schweizer, Green, Muller, Maerki und Pfeilschifter, "The Pharmacological Profile of CGP 28238, A Novel Highly Potent Anti-Inflammatory Compound", Drugs Exptl. Clin. Res., (1989), Ausg. XV, S. 501- 509; Futaki, Takahashi, Yokoyama, Arai, Higuchi und Otomo, "NS-398, A New Anti-Inflammatory Agent, Selectively Inhibits Prostaglandin G/H Synthase/Cyclooxygenase (COX-2) Activity in vitro", Prostaglandins (1994), Ausg. 47, S. 55-59; Klein, Nusing, Pfeilschifter und Ullrich, "Selective Inhibition of Cyclooxygenase-2", Biochem. Pharmacol., (1994), Ausg. 48, S. 1605-1610; Li, Black, Chan, Ford-Hutchinson, Gauthier, Gordon, Guay, Kargman, Lau, Mancini, Quimet, Roy, Vickers, Wong, Young, Zamboni und Prasit, "Cyclooxygenase-2 Inhibitors. Synthesis and Pharmacological Activities of 5-Methanesulfonamido-1-indanone Derivatives", J. Med. Chem., (1995), Ausg. 38, S. 4897-8905; Prasit, Black, Chan, Ford-Hutchinson, Gauthier, Gordon, Guay, Kargman, Lau, Li, Mancini, Quimet, Roy, Tagari, Vickers, Wong, Young und Zamboni, "L-745,337: A Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitor", Med. Chem. Res., (1995), Ausg. 5, S. 364-374; Tanaka, Shimotoro, Makino, Aikawa, Inaba, Yoshida und Takano, "Pharmacological Studies of the New Antiinflammatory Agent 3-Formylamino-7-methylsulfonylamino-6-phenoxy-4H-1-benzopyran-4-one. 1st Communication: Antiinflammatory, Analgesic and Other Related Properties", Arzneim.-Forsch./Drug Res., (1992), Ausg. 42, S. 935-944; Nakamura, Tsuji, Konishi, Okumura und Matsuo, "Studies an Anti-Inflammatory Agents, I. Synthesis and Pharmacological Properties of 2'-(phenylthio)methanesulfonamides and Related Derivatives", Chem. Pharm. Bull, (1993), Ausg. 41, S. 894-906; Chan, Boyce, Brideau, Ford-Hutchinson, Gordon, Guay, Hill, Li, Mancini, Penneton, Prasit, Rasori, Riendeau, Roy, Tagari, Vickers, Wong und Rodger, "Pharmacology of a Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitor, L-745,337: A Novel Nonsteroidal Anti-Inflammatory Agent with an Ulcerogenic Sparing Effect in Rat and Nonhuman Primate Stomach", J. Pharmacol. Exp. Ther., (1995), Ausg. 274, S. 1531-1537; und Graedon und Graedon, "Pills Promise Relief without Ulcers", The Raleigh, North Carolina News and Observer, S. 8D (13. September 1998), das allgemein gesagt die Entwicklung von Celecoxib, Meloxicam und Vioxx als selektive COX-2-Inhibitoren anspricht.
Charakteristische saure Sulfonamide und Diarylheterozyklen, die als selektive COX-2-Inhibitoren in dem vorstehenden Absatz berichtete wurden, sind:
Obwohl saure Sulfonamide und Diarylheterozyklen umfassend als selektive COX-2-Inhibitoren untersucht wurden, existieren nur wenige Berichte über die Umwandlung von NSAID, die selektive COX-1-Inhibitoren sind, in selektive COX-2-Inhibitoren. Siehe Black, Bayly, Belley, Chan, Charleson, Denis, Gauthier, Gordon, Guay, Kargman, Lau, Leblanc Mancini, Quellet, Percival, Roy, Skorey, Tagari, Vickers, Wog, Xu und Prasit, „From Indomethacin to a Selective COX-2-Inhibitor: Development of Indolalkanoic Acids as Potent and Selective Cyclooxygenase-2 Inhibitors", Bioorg. Med. Chem. Lett., (1996), Ausg. 6, S 725-730; Luong, Miller, Barnett, Chow, Ramesha und Browner, "Flexibility of the NSAID Binding Site in the Structure of Human Cyclooxygenase-2", Nature Structural Biol., (1996), Ausg. 3, S. 927-933; und Kalgutkar, Crews, Rowlinson, Garner, Seibert und Marnett, "Aspirin-Like Molecules that Covalently Inactive Cyclooxygenase-2", Science, (1998), Ausg. 280, S. 1268-1270. Das U.S. Patent Nr. 5,360,925 lehrt die Zubereitung von α-Aminosäurederivaten von Indomethacin und dass diese Verbindungen eine wirksame Behandlung von Krebs bereitstellen.
Auch interessant ist das U.S. Patent Nr. 5,681,964 (ausgegeben im Jahre 1997) von Ashton et al., die von der University of Kentucky Research Foundation beauftragt wurden, in welchem die Umwandlung von Indomethacin (einem NSAID) in bestimmte Esterderivate mit gleichzeitiger Verringerung der Reizung des GI-Trakts gezeigt wird (zur Struktur der Esterderivate siehe 1 des U.S: Patents Nr. 5,681,964 ). Daneben zeigen die U.S: Patente Nr. 5,607,966 (Parent) (ausgegeben im Jahre 1997) und Nr. 5,811,438 (CIP) (ausgegeben im Jahre 1998), beide von Hellberg et al., die von Alcon Laboratories beauftragt wurden, die Umwandlung von verschiedenen NSAID (wie beispielsweise Indomethacin) in bestimmte Esterderivate und Amidderivate (die als Antioxidationsmittel und Inhibitoren der 5-Lipoxygenase nützlich sind), die selektive Inhibierung der COX-2 wird darin jedoch nicht angesprochen.
Obwohl die U.S. Patent Nr. 3,285,908 (ausgegeben im Jahre 1966) und Nr. 3,336,194 (ausgegeben im Jahre 1967), beide an Shen, der von Merck & Co, Inc., beauftragt wurde, verschiedene sekundäre und tertiäre Amidderivate von Indomethacin beschreiben, sprechen die Patentschriften dennoch nicht die Inhibierung der COX an, wahrscheinlich deshalb, weil die Inhibierung der COX (sowohl von COX-1 als auch COX-2) in den 1960er Jahren noch nicht entdeckt war und daher konnte noch nicht erkannt werden, dass tertiäre Amidderivate weder die COX-1 noch die COX-2 inhibieren. (Siehe auch die Vergleichsverbindungen 9 und 10 in den nachstehenden Beispielen.) Die U.S: Patent Nr. 5,436,265 (ausgegebenen im Jahre 1995) an Black et al., und Nr. 5,510,368 (ausgegeben im Jahre 1996) an Lau et al., beide Patentschriften wurden von Merck Frosst Canada, Inc., in Auftrag gegeben, beschreiben entsprechend 1-Aroyl-3-indolylalkanoinsäuren und N-Benzyl-3-indolessigsäuren als selektive COX-2-Inhibitoren.
In der vorliegenden Untersuchung wurde die Möglichkeit untersucht, selektive COX-2-Inhibitoren unter Verwenden von verschiedenen Verbindungen, wie beispielsweise NSAID, die (1) selektive COX-1-Inhibitoren sind oder (2) im Wesentlichen die gleiche inhibierende Aktivität für sowohl COX-1 als auch COX-2 besitzen, als Vorlagen zu konstruieren. Diese beiden Arten von Verbindungen werden im Gesamten als Verbindungen, die keine selektiven COX-2-Inhibtoren sind, bezeichnet.
Insbesondere gibt eine Analyse der Kristallstruktur von humanem COX-2, das mit von Zomepirac abgeleiteten, selektiven COX-2-Inhibitoren als Komplex vorliegt, an, dass sich die strukturelle Basis für die Selektivität bei von Zomepirac abgeleiteten Verbindungen von derjenigen der Diarylheterozyklen unterscheidet. Siehe Luong et al., oben angegeben. Anders als Diarylheterozyklen verwenden Zomepirac-Analoga nicht die Seitentasche; stattdessen breche sie die Engstelle an der Öffnung des aktiven Zentrums von COX auf, die von Arg106 und Tyr341 besetzt ist und lassen den Eingangsbereich nach unten hervorstehen. Dieser Überhang in dem sterisch gesehen lockeren Bereich des aktiven Zentrums von COX-2 eröffnet die Möglichkeit, dass das Erzeugen eines breiten Bereichs an Analoga von COOH enthaltenden NSAID, jedes mit einer verschiedenen, angehängten, funktionellen Gruppe, die das OH von COOH ersetzt, viele Zwecke erfüllen würde, die mit der Entdeckung oder Entwicklung von Arzneimitteln in Zusammenhang stehen. Beispielsweise könnten bestimmte angehängte Gruppen die Wasserlöslichkeit, die Bioverfügbarkeit oder die pharmakokinetischen Eigenschaften verbessern Eine weitere Möglichkeit wäre, ein angehängtes Pharmacophor anzuhängen, um auf ein vollständig unterschiedliches Protein abzuzielen, was zu Verbindungen mit doppelten, pharmakologischen Funktionen führt.
Versuche zu einem Ansatz mit Pharmacophoren wurde von Abbott Laborstories und Parke-Davis unternommen. Siehe entsprechend Kolasa, Brooks, Rodriques, Summers, Dellaria, Hulkower, Bouska, Bell und Carter, „Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs as Scaffolds for the Design of 5-Lipoxygenase Inhibitors" J. Med. Chem., (1997), Ausg. 40, S. 819-824; und Flynn, Capiris, Cetenko, Connor, Dyer, Kostlan, Niese, Schrier und Sircar, „Nonsteroidal Antiinflammatory Drug Hydroxamic Acids. Dual Inhibitors of Both Cyclooxygenase und 5-Lipoxygenase", J. Med. Chem., (1990), Ausg. 33, S. 2070-2072. Sowohl Kolasa et al. als auch Flynn et al. berichteten, dass der Austausch der Carbonsäuregruppe in den NSAID mit einem Hydroxaminsäurerest oder einem Hydroxyharnstoffrest Doppelinhibitoren von COX und 5-Lipoxygenase bereitstellten. Nichtsdestotrotz zeigte keines der Analoga irgendeine signifikante selektive Inhibierung der COX-2 und zudem durchliefen die Hydroxamate eine leichte Hydrolyse.
Dennoch deutet in der vorstehend erörterten Literatur nichts darauf hin, dass das Umwandeln von Indomethacin, einem COOH enthaltenden NSAID, das nicht selektiv für die Inhibierung der COX-2 ist, in ein Derivat, dass für die Inhibierung der COX-2 selektiv ist, auch dazu führen würde, dass das Derivat ein Inhibitor für Krebs ist.
Zusammenfassung und Ziele der Erfindung
Mit der vorliegenden Erfindung wurde überraschender Weise gefunden, dass die Derivatisierung des Carbonsäurerests von Indomethacin in sekundäre Amidanaloga gemäß Anspruch 1 eine Isozymspezifität für COX-2 erzeugt. Des Weiteren ist das resultierende sekundäre Amidderivat nicht nur ein selektiver COX-2-Inhibitor, sondern ebenso ein Inhibitor für Krebs, d.h. es zeigt anti-angiogene und/oder antitumorgene Aktivität und behält auch die analgetische, entzündungshemmende und/oder antipyretische Aktivität der Verbindung bei.
Die vorliegende Erfindung stellt daher die Verwendung eines sekundären Amidderivats von Indomethacin gemäß Anspruch 1 zur Zubereitung eines Arzneimittels zum Inhibieren von Krebs in einem warmblütigen Vertebraten bereit. Die Verwendung umfasst das Verabreichen einer für eine Behandlung wirksamen Menge, die zur Inhibierung von Krebs ausreichend ist, des sekundären Carbonsäureamidderivats des Indomethacins an das Tier. Das Derivat ist für die Inhibierung der Cyclooxygenase-2 selektiv.
Es ist daher eine Aufgabe der Erfindung, eine Behandlung von Krebs bereitzustellen, die die Reizung des GI-Trakts minimiert oder ausschließt.
Es ist zudem ein Vorteil der vorliegenden Erfindung, dass die Behandlung von Krebs auch analgetisch, entzündungshemmend und/oder antipyretisch ist, ohne dass gleichzeitig damit ein analgetisches, entzündungshemmendes und/oder antipyretisches Arzneimittel, wie beispielsweise ein NSAID oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon verabreicht werden müssen.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung beinhaltet die Verwendung gemäß Anspruch 1 in einem Tier, das ein warmblütiger Vertebrat ist. Die Erfindung betrifft daher Säugetiere und Vögel.
Es wird die Behandlung von Säugetieren, wie beispielsweise Menschen, sowie jenen Säugetieren, die wichtig sind, da sie vom Aussterben bedroht sind (wie beispielsweise Sibirische Tiger), jenen Säugetieren, die ökologisch gesehen wichtig sind (Tiere, die für den menschlichen Verzehr auf Bauernhöfen angezüchtet werden) und/oder jenen Säugetieren, die sozial gesehen für Menschen wichtig sind (Tiere, die als Haustiere oder in einem Zoo gehalten werden), wie beispielsweise andere Fleischfresser als der Mensch (wie beispielsweise Katzen und Hunde), Schweine (Hausschweine, Mastschweine und Wildschweine), Wiederkäuer (wie beispielsweise Rinder, Ochsen, Schafe, Giraffen, Rehe, Ziegen, Bisons und Kamele) und Pferde, in Betracht gezogen. Es wird auch die Behandlung von Vögeln, einschließlich der Behandlung jener Vögel, die vom Aussterben bedroht sind, die in Zoos gehalten werden, wie beispielsweise Geflügel, und insbesondere domestiziertem Geflügel, d.h. Federvieh, wie beispielsweise Truthähnen, Hühnern, Enten, Gänsen, Perlhühnern und Ähnlichen, in Betracht gezogen, da sie für den Menschen in ökologischer Hinsicht ebenso wichtig sind.
Es wird daher die Behandlung von Viehbeständen, einschließlich, aber nicht beschränkt auf domestizierten Schweinen (Hausschweinen und Mastschweinen), Wiederkäuern, Pferden, Federvieh und Ähnlichen in Betracht gezogen.
Genauer gesagt wird eine für eine Behandlung wirksame Menge eines sekundären Amidderivats von Indomethacin gemäß Anspruch 1 an einen warmblütigen Vertebraten verabreicht. Die Erfindung umfasst daher die Verabreichung dieses sekundären Amidderivats in Konzentrationen, die so berechnet sind, dass sie dem behandelten Tier eine geeignete Umgebung zum Bereitstellen einer Prophylaxe, Kontrolle oder eines Rückgangs des Krebses bereitstellen. Zudem besitzt dieses sekundäre Amidderivat analgetische, entzündungshemmende und/oder antipyretische Eigenschaften, wie sie von der Carbonsäure enthaltenden Verbindung vor der Derivatisierung besessen wurden, und daher stellt die Behandlung von Krens eine analgetische, entzündungshemmende und antipyretische Wirkung in dem Tier bereit und ist frei von einer gleichzeitigen Verabreichung eines anderen Arzneimittels um diese Wirkung bereitzustellen.
Wie es hierin in Verbindung mit der vorliegenden Erfindung verwendet wird, wird angestrebt, pharmazeutisch verträgliche Salze von Indomethacin mit einzuschließen. Daher schließt der COOH-Rest beispielsweise COOM ein, wo M Na oder Ähnliches ist.
Die sekundären Amidderivate von Indomethacin schließen Indomethacin-N-methylamid, Indomethacin-N-ethan-2-olamid, Indomethacin-N-octylaid, IndomethacinN-nonylamid, Indomethacin-N-(2-methylbenzyl)amid, Indomethacin-N-(4-methylbenzyl)amid, Indomethacin-N-((R)-,4-dimethylbenzyl)amid, Indomethacin-N-((S)-,4-dimethylbenzyl)amid, Indomethacin-N-(2-phenethyl)amid, Indomethacin-N-(4-fluorphenyl)amid, Indomethacin-N-(4-chlorphenyl)amid, Indomethacin-N-(4-acetamidophenyl)amid, Indomethacin-N-(4-methylmercapto)phenylamid, Indomethacin-N-(3-methylmercaptophenyl)amid, Indomethacin-N-(4-methoxyphenyl)amid, Indomethacin-N-(3-ethoxyphenyl)amid, Indomethacin-N-(3,4,5-trimethoxyphenyl)amid), Indomethacin-N-(3-pyridyl)amid, Indomethacin-N-5-((2-chlor)pyridyl)amid, Indomethacin-N-5-((1-ethyl)pyrazol)amid, Indomethacin-N-(3-chlorpropyl)amid, Indomethacin-N-methoxycarbonylmethylamid, Indomethacin-N-2-(2-L-methoxycarbonylethyl)amid, Indomethacin-N-2-(2-D-methoxycarbonylethyl)amid), Indomethacin-N-(4-methoxycarbonylbenzyl)amid, Indomethacin-N-(4-methoxycarbonylmethylphenyl)amid, Indomethacin-N-(2-pyrazinyl)amid, Indomethacin-N-2-(4-methylthiazolyl)amid, Indomethacin-N-(4-biphenyl)amid und deren Kombinationen ein.
Dieses sekundäre Amidderivat kann einem Tier als Zäpfchen oder als Präparat in Flüssigkeiten, die intern oder parenteral verabreicht werden, wie beispielsweise Nährstoffflüssigkeiten, wie zum Beispiel intravenöse Sucroselösungen, verabreicht werden. Des Weiteren wird auch eine intraorale (wie beispielsweise bukkale oder sublinguale) Verabreichung oder eine transdermale (wie beispielsweise mit einem Hautpflaster) Verabreichung an das Tier in Betracht gezogen. Eine allgemeine Diskussion einer intraoralen Verabreichung kann dem U.S: Patent Nr. 4,229,447 , das am 21. Oktober 1980 an Porter ausgegeben wurde, und dem U.S. Patent Nr. 5,504,086 , das am 2. April 1996 an Ellinwood und Gupta ausgegeben wurde, entnommen werden. Eine allgemeine Diskussion einer transdermalen Verabreichung kann dem U.S. Patent Nr. 5,016,652 , das am 21. Mai 1991 an Rose und Jarvik ausgegeben wurde, entnommen werden.
Daneben kann die Verabreichung an das Tier über verschiedene orale Verfahren, wie beispielsweise in Form einer Tablette, einer Kapsel oder einem Pulver (in kristalliner Form), die geschluckt werden, erfolgen. Eine orale Verabreichung kann ebenso beinhalten, dass das sekundäre Amidderivat so einer dafür geeigneten Trägerflüssigkeit beigemischt ist, dass es wie eine Flüssigkeit (Lösung oder Suspension), die getrunken wird, verabreicht wird. Wenn das sekundäre Amidderivat von Indomethacin einer Trägerflüssigkeit beigemischt ist, schließen geeignete Flüssigkeiten Wasser, Rehydrierungslösungen (d.h. Wasser mit Elektrolyten, wie beispielsweise Kaliumcitrat und Natriumchlorid, wie zum Beispiel die Lösung, die unter dem Handelsnamen RESOL^® von Wyeth Laborstories erhältlich ist), Nährstoffflüssigkeiten (d.h. Milch, Fruchtsaft) und deren Kombinationen ein, sind jedoch nicht auf diese beschränkt. Die orale Verabreichung kann somit Bestandteil einer Diät, wie beispielsweise Nahrung für Menschen, Futter für Tiere und deren Kombinationen sein.
Neben der oralen Verabreichung, wie beispielsweise durch den Mund, wird auch die Verabreichung einer Lösung oder Suspension über die Speiseröhre, den Magen und/oder den Zwölffingerdarm, wie zum Beispiel mit Hilfe einer Sondenernährung, d.h. über eine Ernährungssonde, in Betracht gezogen. Eine Verabreichung mittels Sondenernährung ist bei fortgeschrittenem Krebs, wenn das Tier die Nahrung, die Arzneimittel usw. nicht länger über den Mund schlucken kann, nützlich.
Es wird daher auch in Betracht gezogen, dass weitere Bestandteile, wie beispielsweise verschiedene Hilfsstoffe, Trägersubstanzen, oberflächenaktive Stoffe, Nährstoffe und Ähnliches, sowie verschiedene andere Arzneimittel als ein sekundäres Amidderivat oder deren Kombinationen zusammen mit dem sekundären Amidderivat gemäß Anspruch 1, unabhängig von der Form des Derivats, vorhanden sein können. Andere Arzneimittel als ein sekundäres Amidderivat können osmolytische Polyole und osmolytische Aminosäuren (d.h. Myoinositol, Sorbitol, Glycin, Alanin, Glutamin, Glutamat, Aspartat, Prolin und Taurin), herzstärkende Substanzen (d.h. Glycocyamine), Analgetika, Antibiotika, Elektrolyte (d.h. organische oder mineralische Elektrolyten, wie beispielsweise Salze) und deren Kombinationen einschließen, sind jedoch nicht auf diese beschränkt.
Eine geeignete Dosierungsmenge des sekundären Amidderivats zur Verabreichung an das Tier sollte in einem Bereich von ungefähr 0,5 mg bis ungefähr 7,0 mg pro kg Körpergewicht des Tieres pro Tag, besonders bevorzugt von ungefähr 1,5 mg bis 6,0 mg pro kg Körpergewicht des Tieres pro Tag, und ganz besonders bevorzugt von ungefähr 2,0 mg bis ungefähr 5,0 mg pro kg Körpergewicht des Tieres pro Tag liegen. Um die gewünschte, tägliche Gesamtdosis zu erreichen, kann die Verabreichung einmal oder mehrmals am Tag erfolgen. Natürlich kann die Menge in Abhängigkeit von der Schwere des Krebses und/oder dem Alter des Tieres, variieren.
Die vorliegende Erfindung sollte bei der Behandlung von Krebs in Tieren nützlich sein, bei denen der Krebs durch Pathogene (d.h. Parasiten, Bakterien, Protozoen und Viren, einschließlich toxischen Substanzen in Lebensmitteln), nahrungstechnischen Faktoren (d.h. übermäßig vielen Mineralsalzen, übermäßig vielen Proteinen, allergenen Substanzen in Lebensmitteln, unverdaubaren Bestandteilen in den Lebensmitteln, Bestandteilen in dem Lebensmittel, die eine schlechte Qualität aufweisen), umwelttechnischen Faktoren, die als Stressoren oder Schadstoffe wirken (d.h. Hitze, Abkühlung, Tiertransport, oder Toxine, wie beispielsweise Toxinen aus der Verschmutzung der Luft und/oder des Wassers) und/oder physiologischen Erkrankungen, wie beispielsweise Erkrankungen des Verdauungstrakts, des Lungen-/Blutkreislaufs, der Leber, den Nieren, des Dickdarms und/des Pankreas verursacht werden.
Die vorliegende Erfindung gibt an, dass das COOH enthaltende Arzneimittel, das kein selektiver COX-2-Inhibitor, Indomethacin, ist, dann, wenn es in sekundäre Amidderivate gemäß Anspruch 1 umgewandelt wird, in einem Isozym mit Spezifität für COX-2 resultiert und damit eine effiziente Strategie für die Erzeugung wirksamer und selektiver COX-2-Inhibitoren darstellt. Die nachstehend erörterten, umfassenden Untersuchungen der SAR, die mit Indomethacin durchgeführt wurden, lassen vermuten, dass eine Vielfalt von sekundären Amidsubstituenten für den Austausch des OH in dem COOH-Rest von Indomethacin zugelassen sind, und dass diese resultierenden Derivate als COX-2-Inhibitoren wirksam und selektiv sind.
Versuchsbeispiele
Die folgenden Ausführungen sind in Verbindung mit den nachstehend aufgeführten Materialien und Vorgehensweisen angegeben.
Die hergestellten Amide und ihre Eigenschaften der selektiven Inhibierung der COX-2 sind in der nachstehenden Tabelle aufgeführt. Es wurden insgesamt 31 Analoga (31 Amidderivate) von Indomethacin zubereitet. Verschiedene Stickstoff enthaltende Substituenten (d.h. Amine), die das OH des COOH ersetzten, um ein Amid zu erzeugen, schlossen Aminoalkyl-, Aminoaryl-, Aminoarylalkyl-, Aminoether- oder Aminopyridinylreste als Teil des Stickstoff enthaltenden Substituenten ein. Die wirksamsten Amidanaloga in der Reihe von Indomethacinderivaten zeigten IC₅-Werte für eine Inhibierung von gereinigtem COX-2 innerhalb des niedermolekularen Bereichs, wobei die Verhältnisse der Selektivität für COX-2 zwischen >1.000 bis 4.000 lagen.
Bei der Synthese von Amidderivaten von Indomethacin wurde eine allgemein bekannte Methodik verwendet, bei der das Indomethacin mit einem geeigneten Amid (als R bezeichnet) unter Verwenden von BOP-Cl als Carbonsäure-Aktivator zum Austauschen des OH des COOH gegen R behandelt wurde und ein Amid erzeugt wurde. Wenn R ein primäres Amin war, war das resultierende Derivat ein sekundäres Amid und wenn R ein sekundäres Amin war, war das resultierende Derivat ein tertiäres Amid.
Genauer gesagt wurde eine Reaktionsmischung, die Indomethacin (300 mg, 0,84 mmol) und BOP-Cl (218 mg, 0,84 mmol) in 5 ml wasserfreiem CH₂Cl₂ enthielt, mit Et₃N (167 mg, 0,84 mmol) behandelt und 10 Minuten bei rt rühren gelassen. Anschließend wurde die Mischung mit dem geeigneten Amin (0,94 mmol), das mit R bezeichnet wird, behandelt und bei rt über Nacht gerührt. Nach einer Verdünnung mit CH₂Cl₂ (30 ml) wurde die resultierende Lösung mit Wasser (2 × 25 ml), 3 N NaOH (2 × 25 ml), Wasser (2 × 30 ml) gewaschen, getrocknet (in der Gegenwart von MgSO₄), filtriert und das Lösungsmittel in vacuo eingeengt. Das Roh-Amid wurde mittels Chromatographie auf Silicagel oder Umkristallisieren in dem geeigneten Lösungsmittel gereinigt. Das Reaktionsschema war wie folgt:
Die IC₅₀-Werte für die Inhibierung der gereinigten, humanen COX-2 oder der COX-1 von Schafen mit Hilfe von Testverbindungen wurde anhand des nachstehend erörterten TLC-Tests bestimmt. Es wurde die COX-1 von Schafen verwendet, da es sehr einfach ist, das Enzym aus den Samenblasen der Schafe zu isolieren, während humane COX-1 normalerweise durch Überexpression in einem Insektenzellsystem erhalten wird und sehr schwer zu handhaben ist und auf besondere Weise zu reinigen ist. Die COX-1 von Schafen ähnelt der COX-1 von Menschen um >90 %. Die Inhibierung der COX-1 von diesen beiden Quellen durch NSAID wurde in der veröffentlichten Literatur beschrieben und die IC₅₀-Werte sind ähnlich, was keine drastischen Unterschiede in den Nebenwirkungen vermuten last. Die COX-1 wurde aus Samenblasen von Schafsböcken gereinigt, die von Oxford Biomedical Research, Inc. (Oxford, Michigan) erhalten wurden. Die spezifische Aktivität des Proteins betrug 20 (μMO₂/Minute)/mg und der Prozentanteil des Holoproteins lag bei 1,5 %. Die Proben der humanen COX-2 (1,62 μg/μl) wurden durch Expression der in Insektenzellen klonierten COX-2, die von Baculovirus-Vekoren getragen wurden, und anschließende Reinigung erhalten.
Die nach der Reinigung erhaltenen Enzyme waren Apoenzyme (d.h. ihnen fehlte die häm-prostethische Gruppe). In den Tests wurden sie mit Hämatin, das von Sigma Chemical Co. (St. Louis, Missouri) erworben wurde, wiederhergestellt, um sie in ihrem natürlichen Zustand, dem Zustand als Holoenzym, wiederzugeben (d.h. das natürliche COX-1 und das natürliche COX-2 enthalten die häm-prosthetische Gruppe), so dass die Inhibierung durch die Testverbindungen von physiologischer Relevanz war.
HoloCOX-2 (66 nM) oder holoCOX-1 (44 nM) in 100 mM Tris-HCl, pH 8,0, das 500 μM Phenol enthielt, wurde bei 25 °C 20 Minuten lang mit verschiedenen Konzentrationen von Indomethacin oder einem Amidderivat von Indomethacin behandelt. Da die rekombinante COX-2 eine geringere spezifische Aktivität als die COX-1 von Schafen besaß, wurden die Proteinkonzentrationen so eingestellt, dass die Prozentanteile der Gesamtprodukte, die aus der Katalyse von Arachidonsäure (erworben bei Nu Chek Prep, Elysian, Minnesota) von den beiden Isoformen erhalten wurden, vergleichbar waren.
Insbesondere wurde die zeit- und konzentrationsabhängige Inhibierung der Cyclooxygenase-Aktivität für COX-1 von Schafen (44 nM) und humaner COX-2 (66 nM) unter Verwenden des TLC-Tests wie folgt bestimmt. Reaktionsmischungen von 200 μl enthielten mit Hämatin wiederhergestelltes Protein in 100 mM Tris-HCl, pH 8,0, 500 μM Phenol und [1-¹⁴C]-Arachidonsäure (50 μm, ~ 55-57 mCi/mmol). Für den Test der zeitabhängigen Inhibierung wurde die mit Hämatin wiederhergestellte COX-1 (44 nM) oder COX-2 (66 nM) bei rt 20 Minuten lang unter Variieren der Inhibitorkonzentrationen in DMSO vor-inkubiert, worauf die Zugabe von [1-¹⁴C]-Arachidonsäure (50 μM) für 30 Sekunden bei 37 °C folgte. Die [1-¹⁴C]-Arachidonsäure (~ 55-57 mCi/mmol) wurde bei New England Nuclear, Dupont oder American Radiolabeled Chemicals (St. Louis, Missouri) erworben.
Die Reaktionen wurden mittels Lösungsmittelextraktion in Et₂O/CH₃OH/1 M Citrat pH 4,0 (30:4:1) bestimmt. Die Phasen wurden 2 Minuten lang mittels Zentrifugation bei 2.000 g Beschleunigungskraft aufgetrennt und die organischen Phasen wurden auf eine TLC-Platte (erhalten bei J.T. Baker, Phillipsburg, New Jersey) platziert. Die Platte wurde in EtOAc/CH₂Cl₂/Eis-AcOH (75:25:1) bei 4 °C erhalten. Die radiomarkierten Prostanoid-Produkte wurden quantitativ mit einem Radioaktivitätsscanner (erhalten von Bioscan, Inc., Washington, D.C.) bestimmt. Der Prozentanteil an Gesamtprodukten, die bei verschiedenen Inibitorkonzentrationen beobachtet wurde, wurde durch den Prozentanteil von Produkten, die für verschiedene Proteinproben, die für die gleiche Zeitdauer mit DMSO vorinkubiert worden waren, beobachtet wurde, geteilt.
Kontrollversuche in Abwesenheit von Indomethacin zeigten eine ~ 25-30 Umwandlung von Fettsäuresubstrat in Produkte, das dafür ausreichte, die inhibitorischen Eigenschaften aller Testverbindungen zu bewerten. Unter diesen Bedingungen zeigte Indomethacin eine selektive, zeit- und konzentrationsabhängige Inhibierung der COX-1 (d.h. IC₅₀ (COX-1) ~ 0,050 μM; IC₅₀ (COX-2) ~ 0,75 μm), während die sekundären Amidderivate eine selektive COX-2-Inhibierung und die tertiären Amidderivate weder COX-1 noch COX-2 inhibierten (d.h. die Messung von COX-2 wurde bei einem extrem hohen IC₅₀ gestoppt und es blieben >80 % COX-2-Aktivität zurück). Es wird auch folgendes für NS-398 und 2-Methyl-4-phenyl-5-sulfoamidophenyloxazol, zwei der vorstehend genannten sauren Sulfonamide, angemerkt: und zwar NS-398; IC₅₀ (COX-2) ~ 0,12 μM; IC₅₀ (COX-1) > 66 μM; und 2-Methyl-4-phenyl-5-sulfamidophenyloxazol: IC₅₀ (COX-2) ~ 0,06 μM; IC₅₀ (COX-1) > 66 μM.
Für bestimmte Vergleichsversuche wurde die Inhibierung der COX-2-Aktivität in aktivierten, murinen RAW264.7-Zellen wie folgt bestimmt. Murine RAW264.7-Zellen mit einer geringen Anzahl an Zellpassagen wurden in DMEM, das 10 % hitzeinaktiviertes FBS enthielt, angezüchtet. Die Zellen (6,2 × 10⁶ Zellen/T25-Flasche) wurden mit 500 ng/ml LPS und 10 Einheiten(ml IFN-g in serum-freiem DMEM 7 Stunden lang aktiviert. Ein Vehikel (DMSO) oder ein Inhibitor in DMSO (0 bis 1 μm) wurde 30 Minuten lang bei 37 °C dazugegeben. Die Inhibierung des Metabolismus der exogenen Arachidonsäure oder die Inhibierung der PGD₂-Synthese wurde mittels Inkubieren der entsprechenden Zellen mit 20 μm ¹⁴C-AA für 15 Minuten bei 25 °C bestimmt. Aliquots (200 μl) wurden in Stopplösung übertragen und die Gesamtprodukte wurden quantitativ durch den vorstehend beschriebenen TLC-Test bestimmt.
Die Schmelzpunkte wurden unter Verwenden eines Schmelzpunktapparats von Gallenkamp bestimmt und wurden nicht korrigiert. Die NSAID (d.h. Indomethacin) wurden bei Sigma (St. Louis, Missouri) erworben. Alle anderen Chemikalien wurden von Aldrich (Milwaukee, Wisconsin) erworben. Methylenchlorid wurde als wasserfreies Methylenchlorid erworben und wurde so verwendet, wie es erhalten wurde. Alle anderen Lösungsmittel waren HPLC-Grad. Um den Ablauf der Reaktionen zu verfolgen, wurde eine analytische TLC (Analtech uniplates^TM) verwendet. Silicagel (Fisher, Maschenweite 60-100) wurde für die Säulenchromatographie verwendet. Die ¹H-NMR- und ¹³C-NMR-Spektren in CDCl₃ wurden auf einem Bruker WP-360-Spektrometer oder einem AM-400-Spektrometer aufgezeichnet. Die chemischen Verschiebungen wurden als Parts per Million (ppm) bezogen auf Tetramethylsilan as interner Standard ausgedrückt. Die Spinmultiplizitäten wurden als s (Singlett), d (Dublett), dd (Dublett von Dubletts), t (Triplett), q (Quartett) und m (Multiplett) angezeigt. Die Kopplungskonstanten (J) wurden in Hertz (Hz) angegeben.
Beispiel I
Die folgenden Carbonsäureamidderivate von Indomethacin, die als Verbindungen 1 bis 31 bezeichnet sind, wurden hergestellt. (Anmerkung: Die Verbindungen 1, 2 und 9 bis 13 sind auch in den oben genannten U.S. Patenten Nr. 3,285,908 und Nr. 3,336,194 , bei an Shen, im Auftrag von Merck & Co., Inc. offenbart.)
Indomethacin-N-methylamid (Verbindung 1) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 10:90, dann 50:50) als hellgelber Feststoff (271 mg, 79 %) erhalten. mp = 187-189 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,64-7,67 (dd, 2H, J = 6,6 Hz und 1,9 Hz, ArH), 7,47-7,50 (dd, 2H, J = 6,7 Hz und 1,9 Hz, ArH), 6,88-6,89 (dd, 1H, J = 9,1 Hz und 2,5 Hz, ArH), 6,84-6,87 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,68-6,72 (dd, 1H, J = 9,1 Hz und 2,5 Hz, ArH), 5,22 (bs, 1H, NH), 3,83 (s, 3H, CH₃), 3,65 (s, 2H, CH₂), 2,75-2,76 (d, 3H, J = 4,8 Hz, CH₃), 2,39 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-ethan-2-olamid (Verbindung 2) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc) als schwach gelber Feststoff (143 mg, 39 %) erhalten. mp = 162-164 °C; ¹H-NMR CDCl₃) δ 7,66-7,68 (dd, 2H, J = 6,7 Hz und 1,7 Hz, ArH), 7,47-7,50 (dd, 2H, J = 6,9 Hz und 1,9 Hz, ArH), 6,85-6,89 (d und s, 2H, J = 9,2 Hz, ArH), 6,68-6,72 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,5 Hz, ArH), 6,03 (bs, 1H, NH), 3,82 (s, 3H, CH₃), 3,67 (bs, 4H, 2CH₂), 3,35-3,40 (q, 2H, J = 4,8 Hz, CH₂), 2,44 (bs, 1H, OH), 2,39 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-octylamid (Verbindung 3) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70) als gelber Feststoff (164 mg, 42 %) erhalten. mp = 109- 111 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,62-7,65 (d, 2H, J = 8,2 Hz, ArH), 7,46-7,49 (d, 2H, J = 8,2 Hz, ArH), 6,85-6,89 (m, 2H, ArH), 6,68-6,71 (d, 1H, J = 8,9 Hz, ArH), 5,67 (s, 1H, NH), 3,82 (s, 3H, CH₃), 3,64 (s, 2H, CH₂), 3,16-3,22 (m, 2H, CH₂), 2,38 (s, 3H, CH₃), 1,39 (m, 2H, CH₂), 1,19 (m, 10H, 5CH₂), 0,83-0,88 (t, J = 6,2 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-nonylamid (Verbindung 4) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70) als gelber Feststoff (191 mg, 47 %) erhalten. mp = 128-130 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,64-7,67 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,47-7,50 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 6,89 (s, 1H, ArH), 6,854-6,88 (d, J = 8,9 Hz, ArH), 6,68-6,72 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz, ArH), 5,60-5,63 (bt, J = 5,3 Hz, NH), 3,82 (s, 3H, CH₃), 3,64 (s, 2H, CH₂), 3,16-3,22 (m, 2H, CH₂), 2,38 (s, 3H, CH₃), 1,36-1,41 (m, 2H, CH₂), 1,19-1,28 (m, 12H, 6 CH₂), 0,84-0,89 (t, J = 6,5 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-(2-methylbenzyl)amid (Verbindung 5) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 50:50) als gelber Feststoff (218 mg, 56 %) erhalten. mp = 177-179 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,60-7,61 (d, 2H, J = 8,1 Hz, ArH), 7,44-7,46 (d, 2H, J = 8,1 Hz, ArH), 7,06-7,15 (m, 4H, ArH), 6,83-6,89 (m, 2H, ArH), 6,67-6,70 (d, 1H, J = 8,1 Hz, ArH), 5,84 (s, 1H, NH), 4,40-4,41 (d, 2H, J = 5,3 Hz, CH₂), 3,79 (s, 3H, CH₃), 3,70 (s, 2H, CH₂), 2,37 (s, 3H, CH₃), 2,19 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-methylbenzyl)amid (Verbindung 6) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol als gelber Feststoff (142 mg, 37 %) erhalten. mp = 191-192 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,63-7,60 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,46-7,44 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,08-7,01 (m, 4H, ArH), 6,88 (s, 1H, ArH), 6,87-6,85 (d, 1H, J = 6,3 Hz, ArH), 6,71-6,67 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz, ArH), 5,89 (bt, 1H, NH), 4,38-4,36 (d, 2H, J = 5,9 Hz, CH₂), 3,78 (s, 3H, CH₃), 3,69 (s, 2H, CH₂), 2,35 (s, 3H, CH₃), 2,30 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-((R)-4-dimethylbenzyl)amid (Verbindung 7) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol, um einen schwach gelben Feststoff (124 mg, 31 %) zu liefern, erhalten. mp = 201-202 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,62-7,64 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J = 8,6 Hz, ArH), 7,01-7,08 (m, 4H, ArH), 6,87-6,90 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,83-6,84 (d, 1H, J = 2,3 Hz, ArH), 6,68-6,72 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz, ArH), 5,76-5,78 (bd, 1H, J = 8,0 Hz, NH), 5,09-5,14 (m, 1H, CH), 3,76 (s, 3H, CH₃), 3,63-3,64 (d, 2H, J = 2,8 Hz, CH₂), 2,34 (s, 3H, CH₃), 2,30 (s, 3H, CH₃), 1,35-1,38 (d, 3H, J = 6,8 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-((S)-4-dimethylbenzyl)amid (Verbindung 8) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol als schwach gelber Feststoff (163 mg, 41 %) erhalten. mp = 200-201 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,53-7,55 (d, 2H, J = 8,3 Hz, ArH), 7,37-7,40 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 6,94-7,01 (m, 4H, ArH), 6,76-6,82 (m, 2H, ArH), 6,61-6,64 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,5 Hz, ArH), 5,77-5,79 (bd, 1H, J = 7,8 Hz, NH), 5,02-5,07 (m, 1H, CH), 3,69 (s, 3H, CH₃), 3,58-3,59 (d, 2H, J = 2,9 Hz, CH₂), 2,27 (s, 3H, CH₃), 2,23 (s, 3H, CH₃), 1,28-1,30 (d, 3H, J = 6,9 Hz, CH₃).
Vergleich. Indomethacin-N-methylphenethylamid (Verbindung 9) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 50:50) als gelber Feststoff (288 mg, 72 %) erhalten. mp = 61-63 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,64-7,67 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,02 (d, 1H, J = 2,4 Hz, ArH), 6,81-6,84 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,63-6,66 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,5 Hz, ArH), 3,82 (s, 3H, CH₃), 3,71 (s, 2H, CH₂), 3,57-3,60 (t, 2H, J = 5,4 Hz, CH₂), 3,43-3,46 (t, 2H, J = 5,3 Hz, CH₂), 2,38 (s, 3H, CH₃), 1,59-1,61 (m, 2H, CH₂), 1,52-1,53 (m, 2H, CH₂), 1,42-1,43 (m, 2H, CH₂).
Vergleich. Indomethacin-N-piperidinylamid (Verbindung 10) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 40:60) als schwach gelber Feststoff (146 mg, 41 %) erhalten. mp = 161-163 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,64-7,67 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,02 (d, 1H, J = 2,4 Hz, ArH), 6,81-6,84 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,63-6,66 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,5 Hz, ArH), 3,82 (s, 3H, CH₃), 3,71 (s, 2H, CH₂), 3,57-3,60 (t, 2H, J = 5,4 Hz, CH₂), 3,43-3,46 (t, 2H, J = 5,3 Hz, CH₂), 2,38 (s, 3H, CH₃), 1,59-1,61 (m, 2H, CH₂), 1,52-1,53 (m, 2H, CH₂), 1,42-1,43 (m, 2H, CH₂).
Indomethacin-N-(2-phenethyl)amid (Verbindung 11) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70) als hellgelber Feststoff (169 mg, 44 %) erhalten. mp = 148-150 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,58-7,60 (d, J = 8,4 Hz, ArH), 7,46-7,48 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,12-7,14 (m, 3H, ArH), 6,85-6,95 (m, 4H, ArH), 6,69-6,73 (dd, 1H, J = 8,9 Hz und 2,4 Hz, ArH), 5,61 (s, 1H, NH), 3,81 (s, 3H, CH₂), 3,59 (s, 2H, CH₂), 3,43-3,49 (m, 2H, CH₂), 2,68-2,72 (t, 2H, J = 6,7 Hz, CH₂), 2,04 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-fluorphenyl)amid (Verbindung 12) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 5:95 bis 20:80) als orangefarbener Feststoff (217 mg, 57 %) erhalten. mp = 200-202 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,65-7,67 (d, 2H, J = 8,3 Hz, ArH), 7,47-7,50 (d, 2H, J = 8,3 Hz, ArH), 7,32-7,35 (m, 3H, ArH), 6,94-6,99 (m, 3H, ArH, NH), 6,85-6,88 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,70-6,73 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,0 Hz, ArH), 3,81 (s, 3H, CH₃), 3,79 (s, 2H, CH₂), 2,45 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-chlorphenyl)amid (Verbindung 13) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol als schwach gelber Feststoff (234 mg, 56 %) erhalten. mp = 209-210 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,58-7,61 (d, 2H, J = 8,2 Hz, ArH), 7,40-7,42 (d, 2H, J = 8,2 Hz, ArH), 7,13-7,27 (m, 5H, ArH), 6,84 (s, 1H, NH), 6,77-6,80 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,62-6,65 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 3,72 (s, 2H, CH₂), 3,72 (s, 3H, CH₃), 2,37 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-acetamidophenyl)amid (Verbindung 14) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol als schwach gelber Feststoff (221 mg, 54 %) erhalten. mp = 256-257 °C; ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 10,14 (s, 1H, NH), 9,86 (s, 1H, NH), 7,62-7,70 (m, 4H, ArH), 7,48 (s, 4H, ArH), 7,18 (d, 1H, J = 2,3 Hz, ArH), 6,90-6,93 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,68-6,72 (dd, 1H, J = 9,1 Hz und 2,5 Hz, ArH), 3,73 (s, 3H, CH₃), 3,71 (s, 2H, CH₂), 2,27 (s, 3H, CH₃), 1,99 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-methylmercapto)phenylamid (Verbindung 15) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 50:50) als hellgelber Feststoff (162 mg, 40 %) erhalten. mp = 195-196 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,67-7,70 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,48-7,50 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,30-7,33 (d, 2H, J = 8,6 Hz, ArH), 7,17-7,22 (m, 3H, 2 ArH und NH), 6,92-6,93 (d, 1H, J = 2,3 Hz, ArH), 6,85-6,88 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,69-6,73 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz, ArH), 3,80 (s, 3H, CH₃), 3,79 (s, 2H, CH₂), 2,45 (s, 3H, C₃), 2,44 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(3-methylmercaptophenyl)amid (Verbindung 16) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 15:85) als gelber Feststoff (218 mg, 54 %) erhalten. mp = 129-131 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,62-7,64 (d, 2H, J = 8,2 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,39 (s, 1H, NH), 7,09-7,18 (m, 2H, ArH), 6,94-6,96 (m, 3H, ArH), 6,86-6,89 (d, 1H, J = 9,0 Hz), 6,69-6,72 (d, 1H, J = 8,9 Hz, ArH), 3,80 (s, 3H, CH₃), 3,78 (s, 2H, CH₂), 2,42 (s, 3H, C₃).
Indomethacin-N-(4-methoxyphenyl)amid (Verbindung 17) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 10:90 bis 25:75) als orangefarbener Feststoff (239 mg, 61 %) erhalten. mp = 201-202 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,67-7,70 (dd, 2H, J = 6,8 Hz und 1,8 Hz, ArH), 7,48-7,51 (d, 2H, J = 7,1 Hz, ArH), 7,28-7,29 (d, 1H, J = 2,0 Hz, ArH), 7,20 (s, 1H, NH), 6,94-6,95 (d, 1H, J = 2,4 Hz, ArH), 6,86-6,89 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,78-6,84 (m, 2H, ArH), 6,69-6,73 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz, ArH), 3,81 (s, 3H, CH₃), 3,79 (s, 2H, CH₂), 3,76 (s, 3H, CH₃), 2,45 (s, 3H, C₃).
Indomethacin-N-(3-ethoxyphenyl)amid (Verbindung 18) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol als hellgelber Feststoff (297 mg, 74 %) erhalten. mp = 152-154 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,68-7,70 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,48-7,51 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,24 (s, 1H, NH), 7,13-7,18 (m, 2H, ArH), 6,94-6,82 (m, 3H, ArH), 6,70-6,73 (dd, 1H, nd 2,4 Hz), 6,61-6,65 (dd, 1H, J = 8,2 Hz und 1,7 Hz, ArH), 3,96-4,03 (q, 2H, J = 7,0 Hz, CH₂), 3,81 (s, 3H, CH₃), 3,80 (s, 2H, CH₂), 2,45 (s, 3H, C₃), 1,36-1,40 (t, 3H, J = 7,0 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-(3,4,5-trimethoxyphenyl)amid (Verbindung 19) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 10:90 bis 30:70) als hell orangefarbener Feststoff (191 mg, 44 %) erhalten. mp = 239-241 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,67-7,69 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,48-7,51 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,20 (s, 1H, NH), 6,94 (d, 1H, J = 8,9 Hz, ArH), 6,70-6,74 (m, 3H, ArH), 3,78-3,81 (m, 14H, 3CH₃ & CH₂), 2,45 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(3-pyridyl)amid (Verbindung 20) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 10:90 bis 75:25) als gelber Feststoff (190 mg, 52 %) erhalten. mp = 204-205 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 8,39-8,40 (d, 1H, J = 2,1 Hz, ArH), 8,32-8,34 (d, 1H, J = 4,4 Hz, ArH), 8,04-8,08 (m, 1H, ArH), 7,66-7,70 (m, 2H, ArH), 7,48-7,52 (m, 2H, ArH), 7,38 (s, 1H, NH), 7,22-7,25 (m, 1H, ArH), 6,93-6,94 (d, 1H, J = 2,4 Hz, ArH), 6,85-6,88 (d, 1H, J = 9,1 Hz, ArH), 6,70-6,74 (dd, 1H, J = 9,1 Hz und 2,5 Hz, ArH), 3,84 (s, 2H, CH₂), 3,81 (s, 3H, CH₃), 2,47 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-5-((2-chlor)pyridyl)amid (Verbindung 21) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 5:95 bis 50:50) als schwach gelber Feststoff (221 mg, 56 %) erhalten. mp = 196-198 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 8,19-8,20 (d, 1H, J = 2,8 Hz, ArH), 8,03-8,06 (dd, 1H, J = 8,7 Hz und 2,9 Hz, ArH), 7,59-7,63 (m, 2H, ArH), 7,46-7,51 (m, 3H, ArH), 7,24 (s, 1H, NH), 6,92-6,93 (d, 1H, J = 2,4 Hz, ArH), 6,84-6,87 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,70-6,74 (dd, 1H, J = 9,1 Hz und 2,5 Hz, ArH), 3,84 (s, 2H, CH₂), 3,82 (s, 3H, CH₃), 2,46 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-5-((1-ethyl)pyrazol)amid (Verbindung 22) wurde nach Umkristallisierung aus Methanol als schwach gelber Feststoff (153 mg, 40 %) erhalten. mp = 193-194 °C; ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,99 (bs, 1H, NH), 7,66-7,68 (d, 2H, J = 8,2 Hz, ArH), 7,47-7,50 (m, 3H, ArH), 7,00 (s, 1H, ArH), 6,83-6,86 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,69-6,72 (d, 1H, J = 8,9 Hz, ArH), 6,35 (s, 1H, ArH), 4,01-4,04 (bd, 2H, J = 6,8 Hz, CH₂), 3,90 (s, 2H, CH₂), 3,82 (s, 3H, CH₃), 2,47 (s, 3H, CH₃), 1,24-1,29 (t, 3H, J = 7,1 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-(3-chlorpropyl)amid (Verbindung 23) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70) als cremefarbener Feststoff (153 mg, 40 %) erhalten. ¹H-NMR (DMSO-d₆) δ 8,11 (bs, 1H, NH), 7,62-7,69 (m, 4H, ArH), 7,09 (s, 1H, ArH), 6,92-6,95 (d, 1H, J = 8,9 Hz, ArH), 6,68-6,71 (d, 1H, J = 8,8 Hz, ArH), 3,80 (s, 3H, CH₃), 3,58-3,67 (t, 2H, J = 6,3 Hz, CH₂), 3,52 (s, 2H. CH₂), 3,15-3,17 (m, 2H, CH₂), 2,20 (s, 3H, CH₃), 1,81-1,85 (t, 2H, J = 6,5 Hz, CH₂).
Indomethacin-N-methoxycarbonylmethylamid (Verbindung 24) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70) als gelber Feststoff (265 mg, 76 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,66-7,68 (dd, 2H, J = 6,7 Hz und 1,7 Hz, ArH), 7,47-7,50 (dd, 2H, J = 6,9 Hz und 1,9 Hz, ArH), 6,92-6,95 (m, 2H, ArH), 6,70-6,73 (m, 1H, ArH), 6,03 (bs, 1H, NH), 3,98-4,00 (d, 2H, J = 5,5 Hz, CH₂), 3,84 (s, 3H, CH₃), 3,71 (s, 3H, CH₃), 3,69 (s, 2H, CH₂), 2,38 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-2-(2-L-methoxycarbonylethyl)amid (Verbindung 25) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70 und 50:50) als gelber Feststoff (300 mg, 84 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,67-7,70 (dd, 2H, J = 8,5 Hz und 1,85 Hz, ArH), 7,47-7,50 (dd, 2H, J = 8,4 Hz und 1,9 Hz, ArH), 6,91-6,96 (m, 2H, ArH), 6,69-6,73 (m, 1H, ArH), 6,16-6,18 (d, 1H, J = 7,4 Hz, NH), 4,57-4,62 (m, 1H, CH), 3,83 (s, 3H, CH₃), 3,70 (s, 3H, CH₃), 3,65 (s, 2H, CH₂), 2,37 (s, 3H, CH₃), 1,32-1,34 (d, 3H, J = 7,2 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-2-(2-D-methoxycarbonylethyl)amid (Verbindung 26) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 40:60) als gelber Feststoff (803 mg, 67 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,67-7,70 (dd, 2H, J = 8,5 Hz und 1,85 Hz, ArH), 7,47-7,50 (dd, 2H, J = 8,4 Hz und 1,9 Hz, ArH), 6,91-6,96 (m, 2H, ArH), 6,69-6,73 (m, 1H, ArH), 6,16-6,18 (d, 1H, J = 7,4 Hz, NH), 4,57-4,62 (m, 1H, CH), 3,83 (s, 3H, CH₃), 3,70 (s, 3H, CH₃), 3,65 (s, 2H, CH₂), 2,36 (s, 3H, CH₃), 1,32-1,34 (d, 3H, J = 7,2 Hz, CH₃).
Indomethacin-N-(4-methoxycarbonylbenzyl)amid (Verbindung 27) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 40:60) als gelber Feststoff (198 mg, 47 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,91-7,94 (d, 2H, J = 6,8 Hz, ArH), 7,61-7,65 (d, 2H, J = 8,7 Hz, ArH), 7,45-7,48 (d, 2H, J = 9,0 Hz, ArH), 7,19-7,21 (d 2H, J = 8,3 Hz, ArH), 6,83-6,88 (m, 2H, ArH), 6,68-6,72 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz), 5,97-5,99 (bt, 1H, J = 5,9 Hz, NH), 4,45-4,47 (d, 2H, J = 6,1 Hz, CH₂), 3,90 (s, 3H, CH₃), 3,83 (s, 3H, CH₃), 3,72 (s, 2H, CH₂), 2,38 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-methoxycarbonylmethylphenyl)amid (Verbindung 28) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 20:80) als gelber Feststoff (100 mg, 23 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,67-7,70 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,48-7,51 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,33-7,36 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,18-7,23 (d und bs, 3H, ArH und NH), 6,92-6,93 (d, 1H, J = 2,3 Hz, ArH), 6,85-6,88 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,70-6,73 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,0 Hz, ArH), 3,81 (s, 5H, CH₂ und CH₃), 3,67 (s, 3H, CH₃), 3,56 (s, 3H, CH₂), 2,45 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(2-pyrazinyl)amid (Verbindung 29) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70 bis 50:50) als hellgelber Feststoff (251 mg, 69 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 9,58 (d, 1H, J = 1,4 Hz, ArH), 8,33-8,34 (d, 1H, J = 2,5 Hz, ArH), 8,16-8,17 (m 1H, ArH), 7,86 (bs, 1H, NH), 7,69-7,71 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 7,49-7,51 (d, 2H, J = 8,5 Hz, ArH), 6,92-6,93 (d, 1H, J = 2,4 Hz, ArH), 6,84-6,87 (d, 1H, J = 8,9 Hz, ArH), 6,70-6,72 (dd, 1H, J = 9,0 Hz und 2,5 Hz, ArH), 3,86 (s, 2H, CH₂), 3,81 (s, 3H, CH₃), 2,47 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-2-(4-methylthiazolyl)amid (Verbindung 30) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70 und dann 70:30), erhalten, um das Reinprodukt als schwach gelben Feststoff zu liefern, der aus Ethylether umkristallisiert wurde (241 mg, 63 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 8,68 (bs, 1H, NH), 7,70-7,74 (d, 2H, J = 9,0 Hz, ArH), 7,48-7,52 (d, 2H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,79-6,85 (m, 2H, ArH), 6,67-6,71 (dd, 1 H, J = 9,0 Hz und 2,4 Hz, ArH), 6,52 (s, 1H, Thiazol-H), 3,88 (s, 2H, CH₂), 3,79 (s, 3H, CH₃), 2,45 (s, 3H, CH₃), 2,27 (s, 3H, CH₃).
Indomethacin-N-(4-biphenyl)amid (Verbindung 31) wurde nach Chromatographie auf Silicagel (EtOAc:Hexane; 30:70) erhalten, um das Reinprodukt als schwach gelben Feststoff zu liefern (421 mg, 59 %) erhalten. ¹H-NMR (CDCl₃) δ 7,68-7,71 (d, 2H, J = 8,4 Hz, ArH), 7,32-7,55 (m, 11H, ArH), 6,95-6,96 (d, 1H, J = 2,0 Hz, ArH) 6,86-6,89 (d, 1H, J = 9,0 Hz, ArH), 6,73-6,74 (dd, 1H, J = 1,7 Hz, ArH), 3,83 (s, 2H, CH₂), 3,81 (s, 3H, CH₃), 2,47 (s, 3H, CH₃).
Die Strukturen und IC₅₀-Werte für Indomethacin und die Verbindungen 1 bis 31 sind in der nachstehenden Tabelle angegeben.
Tabelle Selektive COX-2-Inhibierung durch Amidderivate von Indomethacin

^aDie IC₅₀-Werte wurden durch Inkubieren verschiedener Inhibitorkonzentrationen in DMSO mit humaner OX-2 (66 nM) oder COX-1 von Schafen (44 nM) für 20 Minuten und anschließender Behandlung mit 1-¹⁴C-AA (50 μM) bei 37 °C für 30 sec. bestimmt. Die Tests wurden mit Zweifachbestimmung durchgeführt.^bVerhältnis von IC₅₀(COX-1):IC₅₀(COX-2). ^c> 80 % Restaktivität der COX-1 bei dieser Konzentration.

Fortsetzung der Tabelle Selektive COX-2-Inhibierung durch Amidderivate von Indomethacin

^aDie IC₅₀-Werte wurden durch Inkubieren verschiedener Inhibitorkonzentrationen in DMSO mit humaner OX-2 (66 nM) oder COX-1 von Schafen (44 nM) für 20 Minuten und anschließender Behandlung mit 1-¹⁴C-AA (50 μM) bei 37 °C für 30 sec. bestimmt. Die Tests wurden mit Zweifachbestimmung durchgeführt. ^bVerhältnis von IC₅₀(COX-1):IC₅₀(COX-2). ^c> 80 % Restaktivität der COX-1 bei dieser Konzentration.

Diskussion der sekundären Amidderivate von Indomethacin
Aliphatische, sekundäre Carbonsäurederivate von Indomethacin.
Das N-Methylamidderivat (Verbindung 1) zeigte eine selektive Inhibierung der COX-2 (IC₅₀(COX-2) ~ 0,70 μM; IC₅₀ (COX-1) > 66 μM). Eine Zunahme der Wirksamkeit und Selektivität der Inhibierung von COX-2 wurde bei dem höheren Octylhomologon (Verbindung 3) beobachtet; eine weitere Zunahme der Kettenlänge zu dem Nonylderivat hin (Verbindung 4) führt jedoch zu einem geringen Verlust der Selektivität für COX-2 (Verbindung 3: IC₅₀ (COX-2) ~ 37,5 nM; IC₅₀ (COX-1) 66 μM; Verbindung 4: IC₅₀ (COX-2) 40 nM; IC₅₀ (COX-1) ~ 16,5 μM).
Aromatische, sekundäre Carbonsäureamidderivate von Indomethacin.
Der Einbau von Methylen-Spacereinheiten (Verbindung 11) zwischen den Amid-Stickstoff und den Phenylring erzeugte auch wirksame und selektive COX-2-Inhibitoren.
Beispielsweise war das 4-Methylbenzylamidderivat (Verbindung 6) 133-mal selektiver für COX-2, während das entsprechende 2-Methylbenzylisomer (Verbindung 5) als COX-2-Inhibitor > 440-mal selektiver war. Des Weiteren war das R--Methyl-(4-methylbenzyl)enantiomer (Verbindung 7) ein besserer Inhibitor von COX-2 als das entsprechende S-Methylenantiomer (Verbindung 8).
Daneben zeigten aromatische Amide, die den 4-Fluor- (Verbindung 12), den 4-Methylmercapto- (Verbindung 15) oder dem 3-Pyridylsubstituenten (Verbindung 20) eine wirksamere und selektivere Inhibierung der COX-2, wie unten angegeben ist.
Tertiäre Amide (Vergleichsverbindungen 9 und 10).
Ein weiterer interessanter Aspekt in der Untersuchung der SAR bei den Indomethacinamiden war, dass N,N-Methyl-2-phenethyl- (Verbindung 9) und das Piperidinyl-(Verbindung 10) amidderivat, beides tertiäre Amide, gegen COX-2 unwirksam waren. Anders ausgedrückt waren nur die sekundären Amide selektive COX-2-Inhibitoren, während die tertiären Amide ohne jeglichen inhibitorischen Effekt auf entweder das Isozym waren, d.h. eine Messung der COX-2-Inhibierung bei den tertiären Amiden wurde bei einem extrem hohen IC-Wert (siehe den Wert von 33 bei den beiden Verbindungen 9 und 10) gestoppt und es blieben noch > 80 % COX-1-Aktivitt zurück.
Beispiel II
Vergleich mit Sulfonamiden aus einer anderen Untersuchung.
In dem oben angegebenen Zeitschriftenartikel von Li et al. wurde vorher eine ähnliche SAR-Untersuchung für saure Sulfonamide beschrieben. (Siehe die Strukturen, die oben für die Verbindungen L-745,337 und NS-398 gezeichnet sind). Li et al. haben insbesondere gefunden, dass der Austausch des NH-Protons in dem NHSO₂CH₃-Rest von L-745,337 oder NS-398 gegen eine Methylgruppe zu einem Verlust der inhibitorischen Wirksamkeit gegen entweder das COX-1- oder das COX-2-Isozym führt.
Dieses Verhalten kann anhand kürzlich aufgelöster Kristallstrukturen muriner COX-2, als Komplex mit NS-398 vorliegt, erklärt werden. Siehe Kurumbail et al., Zusammenfassung 197, Eicosanoids and Other Bioactive Lipids in Cancer, Inflammation and Related Diseases, Fifth International Conference, La Jolla, California (17.-20. September 1997). Anders als die Diarylheterozyklen verwendet NS-398 nicht die Seitentasche, obwohl es eine Sulfonamidgruppe enthält. Stattdessen bindet das Sulfonamid auf eine Weise, die derjenigen der Carbonsäure enthaltenden NSAID ähnelt, an Arg106.
Obwohl die sekundären Carbonsäureamidderivate von Indomethacin in der vorliegenden Erfindung keine elektronenziehenden Substituenten enthalten, lassen die oben diskutierten SAR-Beobachtungen bezüglich der fehlenden Inhibierung bei den tertiären Carbonsäureamidderivaten vermuten, dass die -CONH-R₁-Gruppe wahrscheinlich an eine Gruppe auf dem Enzym bindet (siehe unten). Dies kann anhand einer Gegenüberstellung der Daten, wie unmittelbar im Anschluss für das erfindungsgemäße, sekundäre Amidderivat (Verbindung 11) zu sehen ist, in einem Vergleich mit den tertiären Amidderivaten (Verbindungen 9 und 10) und dem Vergleichsderivat der Verbindung aus dem Stand der Technik NS-398, in der das NH-Proton in dem HNSO₂CH₃-Rest gegen Methyl ausgetauscht war, gesehen werden.
Beispiel III
Weitere Tests der inhibitorischen Aktivität mit muriner COX.
Verbindung 11. Die strukturelle Basis einer COX-2-Selektivität bei der Verbindung 11 wurde mittels ortsspezifischer Mutagenese getestet. Insbesondere wurde die inhibitorische Wirksamkeit von Indomethacin im Vergleich zu derjenigen von Indomethacin-N-phenethylamid (Verbindung 11) gegen ortsspezifische, murine COX-2-Mutanten (Arg106Gln und Tyr341Ala), die Reste mit einer Schlüsselrolle, die an der Bindung der Carbonsäure enthaltenden NSAID beteiligt sind, darstellen, beurteilt. Arg106 ist der einzige, positiv geladene Rest in der Fettsäurebindungsstelle und ist wichtig für die Bindung des Carbonsäurerest eines NSAID mit Tyr341Ala, das neben Arg106 an der Stelle der Verendung angeordnet ist und für die selektive Bindung der S-Enantiomere, jedoch nicht für diejenigen der R-Enantiomere in der 2-Phenylpropionat-Klasse von NSAID, einschließlich Flurbiprofen, verantwortlich ist. Neben diesen Mutanten wurde auch das Inhibierungsprofil der Val509IleArg499HisVal420Ile-Mutante (auch als VRV-Mutante bekannt) analysiert, die die hauptsächlichen Aminosäureänderungen zwischen der COX-2 und der COX-1 in dem Bereich der Seitentasche einschließt und für die Bindung der Diarylheterozyklen verantwortlich ist. Die Ergebnissen waren die, dass Indomethacin eine etwas bessere Wirksamkeit gegen murine Wildtyp-COX-2 zeigte als die Verbindung 11 (Indomethacin: IC₅₀ (murine COX-2) ~ 25 nM; Verbindung 11: IC₅₀ (murine COX-2) ~ 35 nM). Des Weiteren waren das Tyr341Ala und die Dreifach-Mutante VRV gegen eine Inhibierung von sowohl durch Indomethacin als auch durch die Verbindung 11 resistent, während die Ag106Gln-Mutante gegen eine Inhibierung durch Indomethacin resistent war, jedoch effektiv von der Verbindung 11 inhibiert wurde (IC₅₀ ~ 25 nM).
Verbindung 17. Die Inhibierung der COX-2-Aktivität in intakten Mauszellen durch die Verbindung 17 wurde in murinen RAW264.7-Makrophagen untersucht, in denen die COX-2-Aktivität durch pathologische Impulse induziert wurde. Die Makrophagen wurden 7,5 Stunden lang mit LPS (500 ng/ml) und Interferon-g (10 U/ml) behandelt, um die COX-2 zu induzieren und dann bei 37 °C 30 Minuten lang mit verschiedenen Konzentrationen des 4-Methoxyphenylamidderivats von Indomethacin (Verbindung 17) behandelt. Der IC₅₀-Wert für PGD₂ mit der Verbindung 17 betrug 62,5 nM. Unter diesen Bedingungen war Indomethacin ein besserer Inhibitor der COX-2-Aktivität in intakten Mauszellen (IC₅₀ ~ 10 nM) als die Verbindung 17.
In der Tat offenbarte ein Vergleich der Wirksamkeit von Indomethacin als Inhibitor von gereinigter, muriner COX-2 gegenüber gereinigter, humaner COX-2, dass Indomethacin eine größere Inhibierung des murinen Enzyms als der humanen Isoform zeigte (IC₅₀ (murine COX-2) ~ 350 nM; IC₅₀ (humane COX-2) ~ 1 μM). Andererseits war ein Indomethacinamidderivat (Verbindung 11) ein besserer Inhibitor für humane COX-2 als für murine COX-2 (Verbindung 11: IC₅₀ murine COX-2) ~ 120 mM; IC₅₀ (humane COX-2) ~ 75 nM),
Diese Ergebnisse bekräftigen auch die anderen bereits erhaltenen Beobachtungen der Forscher, die vermuten lassen, dass sich die COX-Enzyme aus der Ratte pharmakologisch gesehen von denjenigen von Menschen unterscheiden, wie bei Ramesha, „Human and Rat Cyclooxygenases are Pharmacologically Distinct", Adv. Exp. Med. Biol., (1997), Ausg. 407, S. 67-71 beschrieben ist.
Beispiel IV
Testen der Verringerung einer Entzündung.
Die Verbindung 14 wurde in einem standardisierten in vivo-Test für Entzündungen, einem Modell mit Rattenpfotenödemen überprüft. Dieser Test wird in der pharmazeutischen Industrie weithin zur Bewertung entzündungshemmender Verbindungen verwendet. Den Ratten wurde Carrageen injiziert, wodurch innerhalb von 3 Stunden ein schnelles Ödem (Schwellung) ausgelöst wurde, das quantitativ anhand der Verschiebung des Volumens gemessen werden kann. Eine einzelne Dosis der Verbindung 14 (2 mg/kg), die oral 1 Stunde nach der Injektion des Carrageens gegeben worden war, verursachte eine drastische Verringerung der Schwellung.
Bei diesen Versuchen lag das injizierte Carrageen in 0,1 ml wässriger Kochsalzlösung vor, so dass aufgrund der Injektion allein die Volumenzunahme 0,1 ml betrug. Unter Berücksichtigung dieser Angabe war eine ungefähr 80-85%-ige Verringerung der Entzündung infolge der Behandlung mit der Verbindung 14 zu finden. Zu Vergleichzwecken wurde auch Indomethacin in diesem Test mit einer oralen Dosis von 2 mg/kg gemessen und es wurde eine vergleichbare Verringerung der Entzündung festgestellt.
Insbesondere empfingen männliche Sprague-Dawley-Ratten (150 g) eine subplantare Injektion von Carrageen (0,1 ml einer 1%-igen Suspension von Carrageen in steriler, wässriger Kochsalzlösung) in die rechte Hinterpfote, wobei sie leicht mit Methoxyfluran betäubt waren. 1 Stunde nach der Injektion wurden die Ratten mit 0,5 ml Maisöl, das entweder 90 μl DMSO oder 90 μl der Verbindung 14 in den unten angegebenen Dosen über eine Sonde ernährt. Für die Berechnungen des Ödems wurde das Volumen der ipsilateralen Pfote (ml) mit einem Plethysmometer über den Austausch von Wasser zum Zeitpunkt = 3 Stunden nach der Injektion gemessen und mit dem Pfotenvolumen zum Zeitpunkt = 0 vor der Injektion gemessen.
Jede Dosis wurde jeweils 6 Ratten injiziert und die Ergebnisse sind unten zusammengefasst.

Verbindung 14
Konzentration (mg/ml)	Ödem nach 3 Stunden (ml)	Standardabweichung
0	0,87	0,1
0,2	0,55	0,04
0,5	0,47	0,07
1,0	0,39	0,03
2,0	0,38	0,07

Beispiel V
Testen auf die Inhibierung von Tumoren.
Die Fähigkeit der Verbindung 11, das Wachstum einer humanen Dickdarmkrebs-Zelllinie in Nacktmäusen (humaner Tumor-Heterotransplantat-Test) zu inhibieren, wurde bestimmt. Nach der subcutanen Animpfung der Mäuse mit den humanen Tumorzellen wurde den Tieren 3-mal pro Woche intraperitoneal ein Vehikel allein oder ein Vehikel, das 5 mg/kg der Verbindung 11 enthielt, injiziert.
Genauer gesagt wurde männlichen, athymischen Nackt-nu (nu/nu)-Mäusen (25 g, 6-8 Wochen alt, Harlan Sprague-Dawley) unmittelbar vor der subcutanen Implantation von 5 × 10⁶ HCA-7- (humanem Dickdarmadenokarzinom-, Kolonie 29) Zellen intraperitoneal 100 μl des Vehikels (5 % Ethanol, 5 % Tween 80 in sterilem wässrigen PBS) oder 100 μl der Verbindung 11 in einem Vehikel in PBS in die Oberseite des Rückens injiziert. Den Mäusen, 5 Tiere pro Gruppe, wurde 3-mal pro Woche das Vehikel oder das Vehikel, das die Verbindung 11 (5 mg/kg) enthielt, injiziert. Das Volumen des Tumors wurde durch externe Messung mit einem elektronischen Messschieber bestimmt.
Bei einem Vergleich des Wachstums der Tumore, wie er unten zusammengefasst ist, kann gesehen werden, dass die Verbindung 11 das Tumorwachstum signifikant inhibierte.

Tag des Explantats Kontrolltumor (Vol. cm³) Verbindung 11 (Vol. des Tumors cm³)

22 0,34 0,10

25 0,47 0,11

27 0,62 0,13

29 0,70 0,14

31 0,76 0,17
Es versteht sich von selbst, dass verschiedene Details der Erfindung verändert werden können, ohne dabei vom Umfang der vorliegenden Erfindung abzuweichen. Des Weiteren dient die obige Beschreibung lediglich zu Veranschaulichungszwecken und soll den Umfang der Erfindung, wie er in den Ansprüchen definiert ist, in keinster Weise einschränken.

Claims

Verwendung eines sekundären Amidderivats von Indomethacin, wobei das Derivat: a) selektiv ist zur Inhibierung der Cyclooxygenase-2; und b) ein sekundäres Amidderivat von Aminoalkyl, Aminoaryl, Aminoaralkyl, Aminoether oder Aminopyridinyl der Carbonsäuregruppe von Indomethacin ist, zur Herstellung eines Medikaments, welches eine wirksame Menge dieses Derivats enthält, die ausreichend ist, um Krebs in einem Vertebraten-Warmblüter, einschließlich der Menschen, zu inhibieren.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Derivat eine anti-angiogene Aktivität besitzt.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das Derivat das Wachstum von Tumoren hemmt.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei das Derivat weiterhin eine analgetische, antiinflammatorische oder antipyretische Eigenschaft im Tier besitzt.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei das sekundäre Amidderivat ausgewählt wird aus der Gruppe, bestehend aus Indomethacin-N-methylamid, Indomethacin-N-ethan-2-ol-amid, Indomethacin-N-octylamid, Indomethacin-N-nonylamid, Indomethacin-N-(2-methylbenzyl)amid, Indomethacin-N-(4-methylbenzyl)amid, Indomethacin-N-((R)-,4-dimethylbenzyl)amid, Indomethacin-N-((S)-,4-dimethylbenzyl)amid, Indomethacin-N-(2-phenethyl)amid, Indomethacin-N-(4-fluorphenyl)amid, Indomethacin-N-(4-chlorophenyl)amid, Indomethacin-N-(4-acetamidphenyl)amid, Indomethacin-N-(4-methylmercapto)phenylamid, Indomethacin-N-(3-methylmercaptophenyl)amid, Indomethacin-N-(4-methoxyphenyl)amid, Indomethacin-N-(3-ethoxyphenyl)amid, Indomethacin-N-(3,4,5-trimethoxyphenyl)amid, Indomethacin-n-(3-pyridyl)amid, Indomethacin-N-((2-chlor)pyridyl)amid, Indomethacin-N-5-((1-ethyl)pyrazol)amid, Indomethacin-N-(3-chlorpropyl)amid, Indomethacin-N-methoxycarbonylmethylamid, Indomethacin-N-2-(2-L-methoxycarbonylethyl)amid, Indomethacin-N-2-(2-D-methoxycarbonylethyl)amid, Indomethacin-N-(4-methoxycarbonylbenzyl)amid, Indomethacin-N-(4-methoxycarbonylmethylphenyl)amid, Indomethacin-N-(2-pyrazinyl)amid, Indomethacin-N-2-(4-methylthiazolyl)amid, Indomethacin-N-(4-biphenyl)amid, und Kombinationen hiervon.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die wirksame Menge zur Behandlung, die ausreichend ist, um Krebs zu inhibieren, etwa 0,5 Milligramm bis etwa 7,0 Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht des Tieres pro Tag beträgt.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die wirksame Menge zur Behandlung, die ausreichend ist, um Krebs zu inhibieren, etwa 1,5 Milligramm bis etwa 6,0 Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht des Tieres pro Tag beträgt.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei die wirksame Menge zur Behandlung, die ausreichend ist, um Krebs zu inhibieren, etwa 2,0 Milligramm bis etwa 5,0 Milligramm pro Kilogramm Körpergewicht des Tieres pro Tag beträgt.