DE69928131T2

DE69928131T2 - Verfahren zur extraktion organischer salze aus pflanzen, das salz und ähnliche salze

Info

Publication number: DE69928131T2
Application number: DE69928131T
Authority: DE
Inventors: Rena Reznik
Original assignee: RAD Natural Technologies Ltd
Current assignee: RAD Natural Technologies Ltd
Priority date: 1998-12-24
Filing date: 1999-12-22
Publication date: 2006-08-03
Anticipated expiration: 2019-12-23
Also published as: ATE308504T1; EP1156995B1; CA2395599A1; CA2395599C; US6383543B1; WO2000039066A1; DE69928131D1; ES2252989T3; EP1156995A1; AU1678600A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft einen Stoff, der anitoxidative Eigenschaften hat, und ein Verfahren zur Herstellung eines solchen Stoffes.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Synthetische Antioxidantien, wie etwa Butylhydroxyanisol (BHA), Butylhydroxytoluol (BHT), tertiäres Butylhydroxychinon (TBHQ) und Propylgallat (PG) sind bekannt. In den letzten Jahren hat sich jedoch eine Tendenz zur Vermeidung synthetischer Zusatzstoffe entwickelt, insbesondere im Zusammenhang mit Lebensmitteln und Medikamenten. Große Anstrengungen wurden daher unternommen, um Antioxidantien aus Pflanzen zu gewinnen und insbesondere aus der Familie der Labiatae.
So wird in US 3 950 266 (Chang et al.) ein Verfahren zur Extraktion eines Antioxidans aus Rosmarin oder Salbei beschrieben, das mit organischen Lösungsmitteln arbeitet, die bei bis zu 100°C sieden (Beispiele dafür sind Hexan, Benzen, Ethylether, Chloroform, Ethylendichlorid, Dioxan und Methanol), und anschließender Ausführung verschiedener Reinigungsschritte. In allen praktischen Beispielen ist zu erkennen, das das rohe Antioxidans vor weiterer Reinigung mit Wasser gewaschen und dann mit Aktivkohle gebleicht wurde. Es ist verständlich, dass in dieser Weise hergestelltes Antioxidans in Lösungsmitteln löslich und in Wasser unlöslich sein wird.
Dagegen erfolgt nach US 4 012 531 (Viani) eine Extraktion von Pflanzenmaterial in Abwesenheit organischer Lösungsmittel in leicht alkalischem Milieu unter Verwendung eines basischen, wässrigen Puffers mit einem pH-Wert von 7 bis ungefähr 11,5, vorzugsweise in inerter Atmosphäre. Beispiele beschreiben die Extraktion von Rosmarin, Salbei und Petersilie bei einem pH-Wert von 8,6–9,3 und 55–90°C.
In US 4 450 097 (Nakatani et al.) wird ein Antioxidans aus Rosmarin durch Extraktion mit einem unpolaren Lösungsmittel, Entfernen des Lösungsmittels und Dampfdestillation isoliert, wodurch eine wässrige Dispersion entsteht, die filtriert wurde, wobei das Antioxidans aus dem festen Stoff durch weitere Verarbeitung einschließlich Extraktion mit wässrigem Alkali mit einem pH-Wert von mindestens 10,5 gewonnen wurde. Ein isoliertes Antioxidans ist 7β,11,12-trihydroxy-6,10-(epoxymethano)abieta-8,11,13-trien-20-on.
US 4 638 095 (Chang et al.) beschreibt die Isolierung aus Rosmarin des Antioxidans „Rosmarin-Diphenol", wobei es sich von der Struktur her um ein Derivat von Dibenzocyclohepten handelt. Diese Verbindung wurde durch chromatographische Trennung (und erschien in der 75:25-Fraktion von Diethylether/Hexan) aus einem Produkt erhalten, das durch ein Verfahren hergestellt wurde, das Extraktion mit Lösungsmittel und Dampfdestillation umfasste.
US 4 877 635 (Todd) beschreibt ein Verfahren zur Herstellung eines öllöslichen Extraktes eines Krautes der Familie der Labiatae, von dem beansprucht wird, dass er im Wesentlichen alle der antioxidativen Substanzen des Krautes enthält, in dessen Verlauf in Azeton oder Methylethylketon unlösliche Substanzen, die als prooxidative Substanzen definiert werden, so weit, wie möglich durch Ausfällen entfernt werden. US 5 023 017 (Todd) bezieht sich auf eine stabile Lösung von Labiatae-Antioxidantien mit einem pH-Wert von 8,4–11,8, die aus einem ersten Lösungsmittel-Extrakt des Krautes bereitet wird, und von der beansprucht wird, dass sie (neben <75% Wasser und einem essbaren Alkohol und/oder Polyol) im Wesentlichen alle der antioxidativen Substanzen des Krautes enthält, bei dem es sich vorzugsweise um Rosmarin, Salbei oder Thymian handelt.
US 5 433 949 (Kahleyss et al.) schlägt vor, nach Hinweis auf US 5 017 397 , die die Präparation von Antioxidantien durch Extraktion von Labiatae-Arten mit CO₂ bei 350–1000 bar und anschließende Fraktionierung beschreibt, Antioxidantien aus einer ähnlichen Quelle durch ein Mehrschrittverfahren zu präparieren, das Extraktion mit CO₂ bei 80–300 bar anwendet, Behandlung des Extraktionsrückstandes mit einem C_1-4-Alkohol oder C_5-7-Kohlenwasserstoff, gefolgt von Aktivkohle und Auswaschen des erhaltenen Lösungsmittelextraktes mit Wasser zur Entfernung von Farb- und Duftstoffen und Lösungsmittelrückständen.
Es ist offensichtlich, dass die verschiedenen Verfahren, die nach dem Stand der Technik zur Bereitung von Antioxidantien aus Pflanzen der Familie der Labiatae bekannt sind, größtenteils auf der Vermutung beruhen, dass die gewünschten Substanzen sich in wasserunlöslichen Extrakten befinden, die durch Extraktion mit anderen Lösungsmitteln, als Wasser, und insbesondere mit mit Wasser unmischbaren Lösungsmitteln gewonnen werden, und in vielen der betreffenden Patente werden wässrige Fraktionen verworfen. Außerdem werden in Todd '635 in Azeton unlösliche Substanzen entfernt, die als unerwünschte Prooxidantien enthaltend angesehen werden, und in Todd '017 wird wieder hervorgehoben, dass die in Azeton unlöslichen Stoffe keine Antioxidantien enthalten. Dagegen beschreibt, wie oben erwähnt wurde, das Viani-Patent direkte Extraktion der Pflanzen mit gepuffertem, wässrigem Alkali; das Produkt ergibt nach Eindampfen ein Gemisch aus dem gewünschten Stoff mit anorganischen Stoffen, deren Abtrennung mindestens zu einem weiteren, Auskristallisierung, Ionenaustauscherbehandlung oder Ansäuerung umfassenden Schritt führt. Außerdem hat der gegenwärtige Erfinder festgestellt, dass das bei Ansäuerung aus Vianis alkalischer Lösung ausgefällte Produkt im Wesentlichen wasserunlöslich ist.
In US 4 354 035 (Christ et al.) wird ein Verfahren zur Isolierung von Rosmarinsäure (der unten dargestellten Formel) aus Extrak
ten mit im Wesentlichen mit Wasser unmischbaren organischen Lösungsmitteln eines wässrigen Extraktes beschrieben, der durch Extraktion von Melissa officinalis mit Wasser bei 80–100°C und Ansäuern auf einen pH-Wert von 2–2,5 gewonnen wird. Dieses Patent legt nicht nahe, dass ein industriell verwendbares, wasserlösliches Produkt direkt aus wässrigen Extrakten von Melissa officinalis hergestellt werden könnte, ohne die Verwendung von Extrakten durch mit Wasser unmischbare organische Lösungsmittel.
Nach dem Patent von Christ et al. ist Rosmarinsäure durch ihre entzündungshemmenden Eigenschaften wertvoll, siehe z.B. US 4 329 361 (Zenk et al.). Rosmarinsäure ist jedoch auch bekannt für ihre Verwendung in der Hautbehandlung oder in Kosmetikgemischen, siehe beispielsweise JP 63162611 und US 5 393 526 (Castro). Außerdem wird beansprucht, dass Rosmarinsäure in einem Gemisch zum Schutz vor Erythem und entzündlichen Reaktionen nützlich ist, die durch Einwirkung von UV-Strahlung verursacht werden, und dass sie antioxidativ, antibakteriell und fungizid wirksam ist, siehe FR 2 652 001 . Die Wirkung von Rosmarinsäure als 5-Lipoxygenase-Inhibitor wird in JP 1121217 herausgestellt, wo sie, aus Perillaarten extrahiert, als Bestandteil eines antiallergischen Lebensmittels verwendet wird. In FR 2 652 001 wird Rosmarinsäure aus pulverisierten Pflanzen (nach Entfetten und Entfärben durch Petroleum-Ether-Extraktion) mit 80%-igem (wasserhaltigem) Alkohol extrahiert und mit Wasser in einer Zellulosesäule eluiert. Wenn auch Viani Rosmarinsäure, Karnosinsäure und prooxidative Flavone als aus Rosmarin bei einem pH-Wert von 8,5 extrahiert erwähnt, so gab es doch keine Folgerungen in dieser oder anderen vorbekannten Schriften, wonach die Pflanzen ein extrahierbares Salz der Rosmarinsäure enthielten, oder dass diese Säure (oder ihre Derivate) per se für Anwendungen als Antioxidans geeignet wären, d. h. für die Inhibition der Oxidation anderer Substanzen.
Erwähnt seien auch die Patente von Albeck et al. und Grossman et al. (siehe US 4 857 325 , 4 923 697, 4 986 985, 4 997 666 und 5 124 167), die sich auf die Präparation von Antioxidantien durch wässrige Extraktion von Pflanzenmaterial beziehen, indem sie bestimmte Pflanzenfamilien und -arten angeben, und die Anwendung derartiger Antioxidantien. Diese Patente offenbaren weder, noch fegen sie nahe, dass Antioxidantien erhalten werden könnten, indem in ähnlicher Weise Pflanzen der Familie der Labiatae extrahiert werden, noch identifizieren sie die chemische Struktur der Antioxidantien.
Der gesamte Inhalt der oben genannten US-Patente ist hier durch Bezugnahme eingefügt.
Im Gegensatz zu dem, was nach dem Stand der Technik zu erwarten ist, wurde überraschenderweise vom gegenwärtigen Erfinder festgestellt, das nützliches, wasserlösliches und in Azeton unlösliches Antioxidans aus Pflanzen der Familie der Labiatae durch Extraktion, die bei Raumtemperatur erfolgen kann, mit wässrigem Extraktionsmittel nach einem Verfahren erfolgen kann, in dem der Gebrauch von gepuffertem Alkali und ein Schritt der Abtrennung von beigemischten Salzen nicht vorkommen müssen.
Es ist also ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur direkten Extraktion eines wasserlöslichen Antioxidans aus den fraglichen Pflanzen zu schaffen, in dem Pflanzenmaterial unter Verwendung eines schwach sauren, neutralen oder alkalischen, wässrigen Extraktionsmittels extrahiert wird.
Es ist ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung, einen Stoff zu schaffen, der in Hinsicht auf antioxidative Aktivität sehr wirksam ist, verglichen mit vielen bekannten, in der Industrie angewandten Antioxidantien.
Auch hat der Erfinder im Gegensatz zu einem großen Teil der vorbekannten Schriften zu diesem Gegenstand unerwarteterweise festgestellt, dass herkömmlicherweise verworfene wasserlösliche Rückstände des fraglichen Pflanzenmaterials, das bereits mit Lösungsmittel extrahiert wurde, um wasserunlösliche Lösungsprodukte (einschließlich von Antioxidantien, wie Karnosinsäure) zu entfernen, trotzdem im vorliegenden Verfahren verwendet werden und auf diese Weise verwendbares Antioxidans liefern können. Es ist also ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung, ein Verfahren zur Extraktion von wasserlöslichem Antioxidans aus wasserhaltigen Rückständen bekannter Extraktionsverfahren zu schaffen, in denen Pflanzen der Familie der Labiatae bereits einer Extraktion zur Entfernung wasserunlöslicher Lösungsprodukte unterworfen wurden.
Ein anderer Gegenstand der Erfindung besteht darin, ein Verfahren zu schaffen, das erlaubt, eine maximale Ausbeute an industriell verwendbaren Bestandteilen aus Pflanzen der Familie der Labiatae zu erzielen, einschließlich ätherischer Öle, vollständig wasserlöslicher Antioxidantien und bekannter Bestandteile, die sowohl wasserunlöslich sind, als auch löslich in organischen Lösungsmitteln, wie Vitamin E und Karnosinsäure.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung besteht in der Schaffung eines Verfahrens zur Extraktion eines wasserlöslichen Antioxidans aus natürlichen Pflanzenmaterialien, die keine Berührung mit wasserunlöslichen Lösungsmitteln hatten und in denen derartige Lösungsmittel im Extraktionsverfahren oder danach nicht verwendet werden. Ander gesagt wird als wichtiger Gegenstand der Erfindung betrachtet, ein derartiges Verfahren zu schaffen, in dem nur Pflanzenmaterialien und Wasser und optional Ethanol verwendet werden, um Antioxidantien zu schaffen, die hervorragend als Zusatzstoff zum Verzehr durch Mensch und Tier geeignet sind.
Andere Gegenstände der Erfindung werden aus der folgenden Beschreibung deutlich werden.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Es wird angenommen, dass der gegenwärtige Erfinder der Erste ist, der die Anwesenheit von Natriumrosmarinat in wässrigen Extrakten aus Pflanzengeweben der Familie der Labiatae erkannt hat und es daraus extrahiert hat. Die vorliegende Erfindung schafft also (A) ein Antioxidans, im Wesentlichen unlöslich in Azeton, Natriumrosmarinat enthaltend, das aus Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae extrahiert wurde, ohne Notwendigkeit, fremde Natriumionen zuzusetzen, welches Antioxidans unter sauren, neutralen und basischen Bedingungen vollständig wasserlöslich ist und bei Umgebungstemperaturen lange lagerfähig ist, und (B) wässrige Lösungen, die das genannte Antioxidans enthalten, sowie – vorzugsweise chromatographisch gereinigtes – Natriumrosmarinat, das aus dem genannten Antioxidans isoliert wird, und wässrige Lösungen davon. Außerdem erstreckt sich die Erfindung auf andere Salze der Rosmarinsäure, als das Natriumsalz, oder Beimischungen der genannten anderen Salze zum Natriumsalz, wobei die anderen Salze oder Beimengungen die sind, die durch Kationenaustausch mit dem genannten isolierten Natriumrosmarinat erhalten werden, und wässrige Lösungen der genannten anderen Salze oder Beimengungen.
Es wurde festgestellt, dass das erfindungsgemäße Antioxidans in Pulverform eine Lagerfähigkeit bei Raumtemperatur von mindestens zwei Jahren hat. Außerdem stellt ein erfindungsgemäßes Salz, das chromatographisch gereinigt wurde, eine besondere Ausführungsform der Erfindung dar.
In anderen Aspekten umfasst die Erfindung ein Gemisch, das eine Substanz enthält, die zu oxidativer Qualitätsminderung neigt, ausgewählt aus Sojabohnenöl, β-Karotin und ätherischen Ölen, und einen Oxidationsinhibitor, der unter dem Antioxidans und dem isolierten Natriumrosmarinat der Erfindung ausgewählt wurde; sowie ein Gemisch, das Ascorbinsäure und einen Oxidationsinhibitor in einer Menge von 0,35–0,7 Gewichtsprozent umfasst, berechnet als Verhältnis von Natriumrosmarinat zum Gewicht der Ascorbinsäure, wobei der genannte Oxidationsinhibitor unter dem Antioxidans und dem isolierten Natriumrosmarinat ausgewählt wurde, wie sie oben definiert wurden.
KURZE BESCHREIBUNG DER FIGUREN
1 stellt die chromatographische Fraktionierung von Antioxidans aus Rosmarin nach einer Ausführungsform der Erfindung dar.
2 stellt die chromatographische Fraktionierung von Antioxidans aus Oregano nach einer Ausführungsform der Erfindung dar.
BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG IM EINZELNEN
Das erfindungsgemäße Antioxidans ist bei Raumtemperaturen vollständig in Wasser löslich un in im Wesentlichen 100%-igem Azeton und in Hexan unlöslich. Das Antioxidans, die wässrige Lösung und die Salze der Rosmarinsäure der Erfindung werden nach Verfahren gewonnen, die auch Bestandteil der vorliegenden Erfindung sind und die unten im Einzelnen beschrieben werden.
So besteht in einer bestimmten Ausführungsform ein Verfahren zur Präparation vollständig wasserlöslichen, das Natriumsalz der Rosmarinsäure enthaltenden Antioxidans und wässriger Lösungen, die als gelösten Stoff das genannte Antioxidans enthalten, darin, nacheinander die Schritte (a) und (b) auszuführen, gefolgt von irgendeinem der Schritte (c), (d) und (e):

(a) Extraktion von Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae mit einem ersten Extraktionsmittel, ausgewählt aus der Gruppe schwach saurer, neutraler oder basischer, wässriger Extraktionsmittel,
(b) Trennen der wässrigen Phase von unlöslichen Substanzen, und entweder
(c) Extraktion der genannten abgetrennten wässrigen Phase, falls gewünscht nach Konzentrierung, mit einem zweiten Extraktionsmittel, das wasserhaltiges Äthanol enthält, und Abtrennen der sich ergebenden wasserhaltigen organischen Phase, die das genannte Antioxidans enthält, oder
(d) Eindampfen der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten, oder
(e) chromatographische Trennung der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um einen Stoff zu erhalten, der mit dem genannten Natriumsalz der Rosmarinsäure angereichert ist, wobei
(α) wenn die genannte extrahierte wässrige Phase basisch ist, diese angesäuert wird und säureunlösliche Substanzen vor Ausführung von Schritt (c), (d) oder (e) entfernt werden,
(β) wenn basisches, wässriges Extraktionsmittel verwendet wird, dieses als Kationen im Wesentlichen nur Natriumionen enthält.

In einer anderen Ausführungsform besteht ein Verfahren zur Präparation vollständig wasserlöslichen, mindestens ein anderes Salz der Rosmarinsäure, als nur das Natriumsalz, enthaltenden Antioxidans und wässriger Lösungen, die als gelösten Stoff das genannte Antioxidans enthalten, darin, nacheinander die Schritte (a) und (b) auszuführen, gefolgt von irgendeinem der Schritte (c), (d) und (e):

(a) Extraktion von Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae mit einem ersten Extraktionsmittel, ausgewählt aus der Gruppe der basischen, wässrigen Extraktionsmittel,
(b) Trennen der wässrigen Phase von unlöslichen Substanzen, Ansäuern und Entfernen säureunlöslicher Stoffe, und entweder
(c) Extraktion der genannten abgetrennten wässrigen Phase, falls gewünscht nach Konzentrierung, mit einem zweiten Extraktionsmittel, das wasserhaltiges Äthanol enthält, und Abtrennen der sich ergebenden wasserhaltigen organischen Phase, die das genannte Antioxidans enthält, oder
(d) Eindampfen der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten, oder
(e) chromatographische Trennung der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um einen Stoff zu erhalten, der mit dem genannten mindestens einen Salz der Rosmarinsäure angereichert ist, wobei die Kationen im genannten basischen, wässrigen Extraktionsmittel den Kationen entsprechend ausgewählt werden, die im Produkt gewünscht werden, und nicht ausschließlich Natriumionen sind.

Die Kationen können unter beispielsweise Natrium, Lithium, Kalium, Ammonium, und substituierten Ammoniumkationen ausgewählt werden.
In der gerade beschriebenen Ausführungsform erfolgt ein Kationenaustausch zwischen Natriumionen des natürlich vorkommenden Natriumrosmarinats und anderen Kationen als Teil des Präparationsverfahrens. Dem Fachmann wird jedoch klar sein, dass andere, als Natrium salze auch durch chemisch äquivalente Verfahren erhalten werden könnten, wie etwa zunächst Isolierung des Natriumsalzes (als fester Stoff oder in Lösung) und anschließendes Durchleiten einer Lösung des Natriumsalzes durch eine Ionenaustauschersäule, die erwünschte andere Kationen enthält.
Zu optionalen Merkmalen des erfindungsgemäßen Verfahrens gehören Folgende:

(i) die genannten Pflanzen werden unter Oregano, Rosmarin, Salbei und Thymian ausgewählt;
(ii) das erste Extraktionsmittel ist ein ungepuffertes, basisches, wässriges Extraktionsmittel;
(iii) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und dann die abgetrennte wässrige Phase vor der Extraktion mit dem genannten zweiten Extraktionsmittel durch Eindampfen konzentriert wird, um den größten Teil des anwesenden Wassers zu entfernen;
(iv) wobei das Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und dann das zweite Extraktionsmittel Äthanol ist, das eine geringe Menge Wasser enthält;
(v) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und es dann den zusätzlichen Schritt des Eindampfens der organischen Phase aus Schritt (c) umfasst, um dadurch das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten;
(vi) das in Schritt (d) oder durch den zusätzlichen Schritt erhaltene feste Antioxidans wird einem weiteren Schritt chromatographischer Reinigung unterworfen;
(vii) vor Schritt (a) wurde das Gewebe mindestens einem der folgenden vorbereitenden Vorgänge unterworfen, nämlich: Trocknen, Verreiben, Dampfdestillation oder Extraktion mit mit Wasser unmischbaren, organischen Lösungsmitteln zur Gewinnung wasserunlöslicher Bestandteile;
(viii) abgetrennte unlösliche Stoffe aus Schritt (b) werden zur Gewinnung wasserunlöslicher Bestandteile mit mit Wasser unmischbaren, organischen Lösungsmitteln extrahiert.

In einer weiteren Ausführungsform umfasst das Verfahren zur Gewinnung nützlicher Bestandteile aus dem Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae, das Gewebe den aufeinander folgenden Schritten der Dampfdestillation zur Rückgewinnung ätherischer Öle, der Gewinnung vollständig wasserlöslichen Antioxidans nach dem erfindungsgemäßen Verfahren und der weiteren Extraktion der getrennten, wasserextrahierten, unlöslichen Stoffe aus Schritt (b) mit mindestens einem mit Wasser unmischbaren, organischen Lösungsmittel zur Rückgewinnung wasserunlöslicher und in organischen Lösungsmitteln löslicher Bestandteile, wie Vitamin E und Karnosinsäure, zu unterwerfen, was auf jeden Fall in großem Umfang in der Literatur dokumentiert wurde. Es wird klar sein, dass die oben genannten optionalen Merkmale (I) bis (VI) auch in dieser Ausführungsform des Verfahrens angewandt werden können.
Das erfindungsgemäß mit einem wässrigen Extraktionsmittel zu extrahierende Gewebe kann Pflanzengewebe von Labiatae sein und vorzugsweise (aber nicht notwendigerweise) getrocknete, oberirdische Teile der Pflanzen, d. h. Stiele, Blätter und Blüten. Das Gewebe kann sich in einem feinverteilten Zustand befinden, der durch Mahlen oder Homogenisieren des Gewebes erreicht werden kann, und es kann vorteilhaft sein, die erfindungsgemäße Extraktion in demselben Gefäß auszuführen, wie die Homogenisierung. Es wurde jedoch überraschenderweise entsprechend einer jetzt bevorzugten Ausführungsform der Erfindung festgestellt, dass in dem Fall, dass das Pflanzengewebe zunächst der Einwirkung von Dampf zum Abdestillieren von ätherischen Ölen unterworfen wird, dieser Vorgang offenbar gleichzeitig die Poren im Gewebe öffnet mit dem Ergebnis, dass ohne jegliches Zermahlen, Auslaugen oder Verreiben und sogar ohne Mischen, bloßes Stehenlassen des nach Dampfdestillation verbleibenden Gewebes mit Wasser für eine leicht ermittelbare, relativ kurze Zeit angemessen ist, um eine effektive Extraktion von erfindungsgemäßem wasserlöslichem Antioxidans zuzulassen.
Ohne Einschränkung der Allgemeinheit der Erfindung kann das extrahierte Pflanzengewebe beispielsweise von Oregano, Rosmarin, Salbei oder Thymian stammen.
Wie oben erwähnt, kann der Schritt (a) des erfindungsgemäßen Verfahrens in schwach saurer, neutraler oder alkalischer Lösung erfolgen, es wird jedoch jetzt bevorzugt, die Extraktion in einem im Wesentlichen neutralen Milieu auszuführen oder anders gesagt ohne Zusatz schwach saurer oder alkalischer Substanzen, die zu sich daraus ergebenden, zusätzlichen Abtrennungsschrit ten führen und so die Gesamtwirtschaftlichkeit des Verfahrens herabsetzen können. Im Gegensatz zu dem im Patent von Viani beschriebenen Verfahren (siehe oben), betrifft das vorliegende Verfahren nicht den im Wesentlichen wasserunlöslichen Stoff, der sich niederschlägt, wenn ein gepufferter alkalischer Extrakt angesäuert wird.
Schritt (a) kann bei zwischen Raumtemperatur und ungefähr 100°C ausgeführt werden.
In dem Verfahren, das die Schritte (a), (b) und (c) umfasst, ist das zweite Extraktionsmittel, das oben erwähnt wurde, vorzugsweise Ethanol, das eine geringe Menge Wasser enthält, und auf jeden Fall, was auch immer das zweite Extraktionsmittel ist, wird die abgetrennte wässrige Phase vorzugsweise durch Eindampfen konzentriert, um den größten Teil des vorhandenen Wassers vor Extraktion mit dem zweiten Extraktionsmittel zu entfernen.
Außerdem kann in einer bestimmten Ausführungsform des Verfahrens, die die Schritte (a), (b) und (c) umfasst, ein zusätzlicher Schritt zum Eindampfen der abgetrennten organischen Phase aus Schritt (c) zugefügt werden, um dadurch das vollständig wasserlösliche Antioxidans in fester Form zu erhalten. Dieser feste Stoff, oder der in Schritt (d) erhaltene feste Stoff, kann dem weiteren Schritt chromatographischer Reinigung in einer dem Fachmann im Allgemeinen bekannten Weise unterworfen werden, die aber in einer jetzt bevorzugten Ausführungsform unten mit weiteren Einzelheiten beschrieben wird.
Der hierin angegebene Eindampfschritt kann durch eine beliebige geeignete Methode, die dem Fachmann bekannt ist, ausgeführt werden, beispielsweise durch Lyophilisation oder Sprühtrocknen, und der erhaltene Rückstand in dieser Form verwendet werden.
Alternativ kann der Rückstand mit wässrigem Ethanol extrahiert und der Extrakt konzentriert und getrocknet werden, beispielsweise durch Lyophilisation oder Sprühtrocknen. Wie in den folgenden Beispielen gezeigt wird, kann das so erhaltene lyophilisierte, extrahierte Konzentrat eine relativ starke antioxidative Aktivität und Wirksamkeit haben, obwohl Analyse durch HPLC (Hochleistungs-Flüssigkeits-Chromatographie) zeigt, dass die antioxidative Aktivität in diesem Zustand nur ungefähr 50% des Stoffes ausmachen kann. Weitere Reinigung des Stoffes jedoch zur Erzielung eines höheren Reinheitsgrades kann durch chromatographische Mittel erfolgen, wodurch ein Stoff mit hoher antioxidativer Wirkung und einer dramatisch verbesserten Wirksamkeit der Oxidationshemmung erhalten werden kann.
Die Erfindung wird durch die folgenden nichteinschränkenden Beispiele erläutert.
BEISPIEL 1: Wässrige Extraktion von rohem Rosmarin-Pflanzengewebe

(a) Ein Gemisch der getrockneten oberirdischen Teile von Rosmarinpflanzen (d. h. Stiele, Blätter und Blüten), 2 g, wurde mit 10 ml Wasser homogenisiert und für eine Stunde bei Umgebungstemperatur (ungefähr 24°C) gehalten. Der pH-Wert des Gemisches während dieser Extraktion betrug ungefähr 6,5. Das Obenstehende wurde vom verbleibenden Pflanzengewebe getrennt und lyophilisiert, um 0,2 g (Ausbeute 10%) eines rohen, vollständig wasserlöslichen Stoffes zu erhalten, der ungefähr 10% antioxidative Substanzen enthält, wobei die Aktivität des Rohproduktes 430 Einheiten/mg beträgt.
(b) Wenn die Extraktion von (a) wiederholt wurde, außer das anfänglich Zitronensäure zugesetzt wurde, um einen pH-Wert von 2 zu erhalten, wurde festgestellt, dass das Obenstehende einen pH-Wert von ungefähr 7 hatte und dass der rohe, vollständig wasserlösliche, lyophilisierte Stoff ungefähr die gleiche antioxidative Aktivität hatte, wie vorher.
(c) Wenn die Extraktion von (a) wiederholt wurde, außer dass anfänglich NaOH zugesetzt wurde, um einen pN-Wert von 11 zu erhalten, wurde festgestellt, dass das erhaltene Obenstehende einen pH-Wert von ungefähr 7 hatte und dass der rohe, vollständig wasserlösliche, lyophilisierte Stoff ungefähr die gleiche antioxidative Aktivität hatte, wie vorher.
(d) Wenn die Extraktion von (a) wiederholt wurde, außer dass das Pflanzengewebe von Rosmarin vor der wässrigen Extraktion mit Dampf behandelt und mit Ether extrahiert worden war, wurde festgestellt, dass der rohe, vollständig wasserlösliche, lyophilisierte Stoff ungefähr die gleiche antioxidative Aktivität hatte, wie vorher.
(e) (Vergleichsbeispiel) Pflanzengewebe von Rosmarin (5 g) wurde mit 50 ml Na₂CO₃/NaHCO₃-Puffer mit pN-Wert 8,6 bei 90°C lebhaft gerührt, im Wesentlichen, wie in Beispiel 2 von US 4 012 531 (Viani) beschrieben. Extraktion eines Teils des Reaktionsgemisches mit wasserhaltigem Azeton und Lyophilisierung des Produktes (nach Verdampfen des Azetons) in diesem Zustand ergab einen Stoff, der nur 5% des Antioxidans der vorliegenden Erfindung enthielt (wie es durch ein scharfes Signal bei HPLC-Trennung und Elution mit wasserhaltigem Methanol bei einer Verweildauer von 14 bis 15 Minuten identifiziert wurde), was zeigt, dass der gewünschte Stoff im alkalischen Milieu gelöst blieb. Ein getrennter Teil des Reaktionsgemisches wurde dann angesäuert, wie von Viani angeregt und von Todd ausgeführt (siehe Beispiel 2 von US 5 023 017 ), wobei Viani und Todd nur den Niederschlag als „Antioxidans" verwenden. Der Niederschlag wurde abfiltriert und es wurde festgestellt, dass er fast vollständig wasserunlöslich war. Das Filtrat, nach Konzentrieren, Extraktion mit wasserhaltigem Azeton und Lyophilisierung des Produk tes (nach Verdampfen des Azetons) ergab ein vollständig wasserlösliches Antioxidans, nach HPLC zu 28% rein an gewünschtem Produkt. Dieses Experiment beweist unter anderem, dass Vianis wässriger alkalischer Extrakt kein vollständig wasserlösliches Lösungsprodukt enthielt.
(f) Pflanzengewebe von Rosmarin oder Oregano wurde zunächst der Einwirkung von Dampf bei 100°C für ungefähr eine Stunde ausgesetzt, um ätherische Öle durch Dampfdestillation zu gewinnen. Wasser wurde dem Rückstand zugesetzt und das Gemisch bei 60–100°C für ungefähr 2–45 Minuten stehengelassen, filtriert und das ungefähr 4% gelöste Stoffe enthaltende Filtrat auf ungefähr 40% gelöste Stoffe konzentriert, erneut filtriert und sprühgetrocknet. Das erhaltene gelbliche Pulver enthielt ungefähr 9,5% als Antioxidans aktive Substanzen und konnte als solches verwendet werden oder wurde chromatographischer Reinigung unterworfen. Es wurde festgestellt, dass eine relativ lange Einwirkungsdauer zwar zu einem dunkler gefärbten Produkt (hellbraun bis braun) führte, die hohe antioxidative Aktivität des Produktes jedoch (ungefähr 430 Einheiten/mg) war von seiner Farbe unabhängig. Als Ausbeute des Pulvers ergab sich:

Beispiel 1 zeigt unter anderem, dass die Praxis des Standes der Technik zur Gewinnung von antioxidativen Stoffen aus Pflanzen der Familie der Labiatae aus in Lösungsmitteln löslichen Extrakten bei Verwerfen wässriger Fraktionen und/oder Verwerfen von in Azeton unlöslichen Stoffen, zu einem erheblichen Verlust an potentiell wertvollem Antioxidans führt. Außerdem zeigt Beispiel 1 (c) überraschenderweise, dass im Widerspruch zu Viani und Todd nützliches vollständig wasserlösliches Antioxidans durch alkalische Extraktion erhalten werden kann.
BEISPIEL 2: Methode zur Bestimmung der antioxidativen Aktivität
Die Methode beruht auf der Rate der Oxidation von Linolsäure (LA) zu ihrem konjugierten Dienhydroperoxid (Pryor et al. in J. Org. Chem., 1993, 5B (13) 3521-3532) und 2,2'-Azobis(2-amidinopropan)·2HCl (ABAP) wird verwendet, um eine konstante Radikalproduktionsrate zu erreichen. Eine wässrige Emulsion von 1% LA wurde mit 1% Teeen 20 und 0,05M Natriumphosphatpuffer (pH 7,4) präpariert. Eine Kontrollprobe enthielt 0,025 ml der LA-Emulsion + 2,87 ml des Puffers + 0,1 ml 0,05M ABAP; eine Testprobe enthielt 0,05 ml der LA-Emulsion + 2,7–2,8 ml des Puffers + 0,1 ml 0,05M ABAP + 0,05–0,1 ml der getesteten Probe. Absorption bei 234 nm wird über 5 Minuten verfolgt, um die ungehinderte Autooxidationsrate zu ermitteln. Das zu testende Antioxidans in einer Konzentration von 1 mg/ml wird dann geprüft, bis 50% Inhibition erreicht sind, was eine Einheit definiert (wenn r. B. 20μl 50% inhibieren, ist dies eine Einheit und die antioxidative Aktivität beträgt 1000/20 = 50 Einheiten/mg). Das zu testende Antioxidans wurde zugesetzt und die inhibierte Reaktion verfolgt, bis das Antioxidans verbraucht war und die Absorptionsänderung bei 234 nm auf den Wert zurückkehrte, der zu Beginn beobachtet wurde.
BEISPIEL 3: Chromatographische Reinigung und Identifizierung des Antioxidans
Eine Säule von 8 cm × 1 cm wird mit MacroPrep-Methyl (hydrophobe Interaktion 40 μm, Bio-Rad) gepackt, gründlich mit Wasser und Ethanol gewaschen und dann zur Reinigung des Lyophilisates des wässrigen Extraktes verwendet (siehe Beispiel 1(f) oben). 200 mg des Lyophilisats wurden in 1 ml Wasser gelöst und die Lösung auf die MacroPrep-Säule aufgetragen, die mit Wasser äquilibriert worden war. Elution erfolgte unter Verwendung eines Gradienten aus 0,1% Essigsäure und 70:30 Ethanol in Wasser, der mit einem Verhältnis von 100:0 bei 0 Minuten begann und mit einem Verhältnis von 0:100 nach 220 Minuten endete, und bei einer Flussrate von 2,0 ml/min. Signale werden durch UV-Absorption bei 280 nm beobachtet. Der Säulenausfluss wurde nach 85 Minuten (193 ml) aufgefangen und es wurde festgestellt, dass der aktive Stoff zwischen 85 und 100 Minuten eluiert wurde (36 ml, 30–40% Ethanol (Rest Wasser)).
Die Zunahme der Reinheit in den oben genannten Vorgängen wurde durch HPLC auf RP-18 unter Verwendung eines Wasser-Methanol-Gradienten bestimmt, der mit einem Verhältnis von 100:0 bei 0 Minuten begann und mit einem Verhältnis von 30:70 nach 15 Minuten endete, bei einer Flussrate von 1 ml/min. Die Ergebnisse sind mit anderen betreffenden Reinigungsdaten, in den 1 und 2 dargestellt (in denen „RA" das Natriumsalz der Rosmarinsäure bezeichnet) und in der folgenden Tabelle, in der „% Reinheit" Gehalt des fraglichen Stoffes in % an Antioxidans bedeutet, das durch ein scharfes Signal bei HPLC-Trennung und Elution mit wasserhaltigem Methanol nach zwischen 10,68 und 10,72 Minuten Verweildauer identifiziert wurde:
Sowohl ¹H-, als auch ¹³C-Kernresonanzspektren wurden am chromatographisch gereinigten Antioxidans der Erfindung gemessen. Es wurde festgestellt, dass es nur sehr geringe Verschiebungsdifferenzen in den chemischen Verschiebungen bei einer DMSO-d₆-Lösung gab, verglichen mit entsprechenden Daten, die für Rosmarinsäure berichtet werden (Azeton-d₆ für ¹H und D₂O für ¹³C), siehe Kelley, C. J. et al., J. Org. Chem. 40:1804 (1975) und Ibid., 41:449 (1976). Diese Unterschiede, gemeinsam mit der Tatsache, dass Rosmarinsäure in Azeton löslich ist und die vorliegende Verbindung in Azeton praktisch unlöslich, sind konsistent mit der Identifizierung des vorliegenden Produktes als ein Karboxylat-Salz der Rosmarinsäure. Die Verbindung wurde als Natriumrosmarinat identifiziert und das Molekulargewicht (282) für C₁₈H₁₅NaO₈ durch Massenspektroskopie bestätigt.
BEISPIEL 4: Stabilität und relative Wirksamkeit der Antioxidantien

(a) Stabilität. Das aus dem wässrigen Extrakt erhaltene Lyophilisat hat eine Lagerbeständigkeit bei 24°C mit im Wesentlichen unveränderter antioxidativer Aktivität von mehr als zwei Jahren. Dieses Lyophilisat (6 mg) wurde in 0,5 g Glyzerin gelöst und 0,25 g der Lösung in ein Glas gebracht, das dann bei 180°C für 15 min inkubiert wurde. Als Kontrollprobe wurde ein zweites ähnliches Glas bei Raumtemperatur verwendet. Nach Inkubation wurden jedem Glas 1,5 ml Wasser zugesetzt und die Aktivität geprüft. Es wurde keine Veränderung in der Aktivität der Kontrollprobe und im bei 180°C inkubierten Glas festgestellt. Außerdem konnte ein wässriger Rosmarinextrakt mit einem pH-Wert von 4 bei Umgebungstemperatur für mindestens 12 Monate unter Erhaltung der antioxidativen Aktivität aufbewahrt werden.
(b) Relative Wirksamkeit. Ex. 2 wird durchgeführt, aber fortgesetzt, bis das Antioxidans verbraucht ist und die Absorptionsänderung bei 234 nm zu der zurückgekehrt ist, die bei der Kontrollprobe beobachtet wurde. Wirksamkeit wird als die Zeit berechnet, während derer 1 mg Antioxidans die Oxidation von Linolsäure inhibiert. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle dargestellt.

* wasserlöslich gemachtes Vitamin E

Aus den vorstehenden Ergebnissen kann geschlossen werden, dass das erfindungsgemäße Antioxidans erheblich wirksamer ist, als die bekannten Antioxidantien, im Vergleich zu denen es getestet wurde. Dies gilt sogar für das Lyophilisat, das aus dem wässrigen Extrakt in der oben beschriebenen Weise gewonnen wurde, und wie zu sehen ist, wächst die Wirksamkeit dramatisch bei weiterer Reinigung.
BEISPIEL 5: Antioxidative Wirkung in Emulsionen, die Sojabohnenöl enthalten

(a) Aus Sojabohnenöl (10%), Tween 80 (7%), Span 80 (3%), Wasser (80%) und Antioxidans (0,1 oder 0,02%) wurden Öl-in-Wasser-Emulsionen bereitet. Oxidationshemmung bei 50°C, gemessen durch Thiobarbitursäure-(TBA-)Test, ergab:

*Siehe unten

(b) Wasser-in-Öl-Emulsionen aus Sojabohnenöl (85%), PGPR-Emulgator (Croda, 5%), Wasser (10%) und Antioxidans (0,1 oder 0,02%) ergaben folgende Testergebnisse bei 100°C, gemessen mit Rancimat-(AOM)-Test:

* Wasserlöslich, 10% Natriumrosmarinat enthaltend; dessen Konzentration in den Emulsionen beträgt dementsprechend 0,002 und 0,01.

BEISPIEL 6: Antioxidative Wirkung in hauptsächlich reinem Öl
Zunächst wurde ein Konzentrat präpariert, das 40% Lecithin, 40% Öl (beispielsweise Sojabohnenöl), 20% Propylenglykol und 4% auf der Grundlage des vorangehenden Gemisches von 65% (= 2,6% reinem) Natriumrosmarinat enthält. Rosmarinsäure kann alternativ das Natriumsalz ersetzen.
Das so bereitete Konzentrat kann dann in einem Öl verwendet werden, das gegen oxidative Qualitätsminderung geschützt wer den soll. Mit Sojabohnenöl als diesem Öl ergaben sich folgende Testergebnisse bei 60°C:

Als 0,2% des oben genannten Konzentrates.
+ Als 0,5% des oben genannten Konzentrates.

BEISPIEL 7: Antioxidative Wirkung in Emulsionen. die β-Karotin enthalten
β-Karotin (6 mg), Linolsäure (1 ml) und Tween 40 (2 ml) wurden in Chloroform gelöst, das Gemisch wurde in einem Rotationsverdampfer konzentriert und die letzten Chloroform-Spuren mit Stickstoff entfernt. Eine Modellemulsion wurde dann durch Zusetzen zweifach destillierten Wassers (25 ml) zum Rückstand und Verdünnen auf 500 ml mit Phosphatpuffer (pH 7,0) bereitet. Eine Lösung (2 ml) des erfindungsgemäßen Antioxidans wurde mit Proben von 50 ml der Emulsion gemischt, derart, dass die Antioxidans-Konzentration 0,005, 0,01 oder 0,02% betrug. Vergleichsproben enthielten BHA in Konzentrationen von 0,01 und 0,02% und Ascorbinsäure (0,1%). Eine Vergleichsprobe enthielt kein Antioxidans, sondern stattdessen 95% Ethanol (2 ml). Es wurde festgestellt, dass das erfindungsgemäße Antioxidans über einen Zeitraum von 100 Stunden dem β-Karotin einen Schutz in ähnlicher Größenordnung bot, wie BHA, während Ascorbinsäure wenig Schutz bot.
BEISPIEL 8: Stabilisierung von Ascorbinsäure
Es ist bekannt, dass Ascorbinsäure oxidativer Qualitätsminderung ausgesetzt ist und dass insbesondere ihre wässrigen Lösungen durch Luft rasch oxidiert werden. Für dieses Beispiel wurde Ascorbinsäure in 50% Ethanol gelöst und die Lösung in einer geschlossenen Flasche für 24 Stunden in einen Ofen von 60°C gesetzt. Das Experiment wurde unter Zusatz von 0,035 mg oder 0,07 mg Natriumrosmarinat wiederholt. Jede Probe wurde im Verhältnis 1:10 verdünnt und die Ascorbinsäure durch HPLC in einer 250 cm × 4 mm RP-18-Säule und Elution mit 30:70 Acetonitril/Wasser bei einer Flussrate von 1 ml/min analysiert. Die Absorption bei 245 nm im Signalbereich, verglichen mit dem Ausgangsbereich, entsprach der Menge an Ascorbinsäure in jedem Fall; folgende Ergebnisse wurden erhalten:

* Natriumsalz

Diese Ergebnisse zeigen, dass Rosmarinsäure (und ihre Derivate) Ascorbinsäure unter den gegebenen Bedingungen wirksam vor Abbau schützen, insbesondere in der höheren Konzentration von 0,7%. Daraus kann geschlossen werden, dass der Umfang dieses Schutzes unter anderen Bedingungen, beispielsweise Umgebungstemperatur und/oder, wenn die Ascorbin säure nicht notwendigerweise in wässriger Lösung vorliegt, erheblich größer wäre.
BEISPIEL 9: Oxidationsinhibition ätherischer Öle
(a) Ätherisches Orangenöl
Unterschiedliche Konzentrationen von Rosmarinatlösung wurden 5 ml ätherischem Orangenöl zugesetzt. Die Proben wurden für 7 Tage bei 30°C gehalten und dann unter Verwendung des TBA-Tests auf Peroxid geprüft. Die Rosmarinatlösung („Organox os") enthielt 17% Propylenglykol, 65% Lecithin und 17% Natriumrosmarinat (50% rein). Zusätzlich wurde zum Vergleich die Oxidation bei 4°C ohne Antioxidans notiert. Die Ergebnisse lauten:
(b) Grapefruitöl
Dieser Test wurde in ähnlicher Weise ausgeführt, wie der von Teil (a) oben, außer, dass die Proben für 11 Tage aufbewahrt wurden. Die Ergebnisse lauteten:
(c) Orangenöl (farblos)
Dieser Test wurde in ähnlicher Weise ausgeführt, wie der von Teil (a) oben, außer, dass die Proben für 11 Tage aufbewahrt wurden. Folgendes waren die Ergebnisse:
Zusammenfassung: Durch Verwendung einer relativ geringen Menge von Antioxidans bei 30°C ist es bei der gegebenen Dauer möglich, bei ätherischen Ölen ungefähr gleich gute Oxidationsinhibition zu erreichen, wie durch Kühlung auf 4°C.
Wenn auch die vorliegende Erfindung unter Bezugnahme auf bestimmte Ausführungsformen besonders eingehend beschrieben wurde, so wird doch dem Fachmann naheliegen, dass viele Änderungen und Variationen möglich sind. Diese Erfindung darf daher nicht als in irgendeiner Weise durch solche Ausführungsformen eingeschränkt aufgefasst werden, vielmehr muss ihr Konzept entsprechend dem Geist und Umfang der folgenden Ansprüche aufgefasst werden.

Claims

Substanz, ausgewählt aus (A) einem Antioxidans, unlöslich in im Wesentlichen 100% Azeton und in Hexan, enthaltend Natriumrosmarinat, das aus dem Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae extrahiert wurde, ohne Notwendigkeit, fremde Natriumionen zuzusetzen, welches Antioxidans unter sauren, neutralen und basischen Bedingungen vollständig wasserlöslich ist und bei Umgebungstemperaturen lange lagerfähig ist, und (B) wässrigen Lösungen, die das genannte Antioxidans enthalten.
Substanz, ausgewählt aus Natriumrosmarinat, das aus dem in Patentanspruch 1 definierten, extrahierten Antioxidans isoliert wurde, und wässrigen Lösungen des derart isolierten Natriumrosmarinats.
Substanz, ausgewählt aus Natriumrosmarinat, das aus dem in Patentanspruch 1 definierten, extrahierten Antioxidans isoliert und anschließend chromatographisch gereinigt wurde, und wässrigen Lösungen des derart isolierten und chromatographisch gereinigten Natriumrosmarinats.
Verfahren zur Präparation einer wässrigen Lösung einer Substanz, ausgewählt aus anderen Salzen der Rosmarinsäure, als dem Natriumsalz, oder Beimischungen der genannten anderen Salze zum Natriumsalz, wobei das Verfahren den Schritt umfasst, eine wässrige Lösung, die Natriumrosmarinat nach Patentanspruch 2 oder 3 enthält, einem Kationenaustausch zu unterwerfen.
Verfahren zur Präparation vollständig wasserlöslichen, das Natriumsalz der Rosmarinsäure enthaltenden Antioxidans und wässriger Lösungen, die als gelösten Stoff das genannte Antioxi dans enthalten, wobei dieses Verfahren darin besteht, nacheinander die Schritte (a) und (b) auszuführen, gefolgt von irgendeinem der Schritte (c), (d) und (e): (a) Extraktion von Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae mit einem ersten Extraktionsmittel, ausgewählt aus der Gruppe schwach saurer, neutraler oder basischer, wässriger Extraktionsmittel, (b) Trennen der wässrigen Phase von unlöslichen Substanzen, und entweder (c) Extraktion der genannten abgetrennten wässrigen Phase, falls gewünscht nach Konzentrierung, mit einem zweiten Extraktionsmittel, das wasserhaltiges Äthanol enthält, und Abtrennen der sich ergebenden wasserhaltigen organischen Phase, die das genannte Antioxidans enthält, oder (d) Eindampfen der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten, oder (e) chromatographische Trennung der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um einen Stoff zu erhalten, der mit dem genannten Natriumsalz der Rosmarinsäure angereichert ist, wobei (α) wenn die genannte extrahierte wässrige Phase basisch ist, diese angesäuert wird und säureunlösliche Substanzen vor Ausführung von Schritt (c), (d) oder (e) entfernt werden, (β) wenn basisches, wässriges Extraktionsmittel verwendet wird, dieses als Kationen im Wesentlichen nur Natriumionen enthält.
Verfahren zur Präparation vollständig wasserlöslichen, mindestens ein anderes Salz der Rosmarinsäure, als nur das Natriumsalz, enthaltenden Antioxidans und wässriger Lösungen, die als gelösten Stoff das genannte Antioxidans enthalten, wobei dieses Verfahren darin besteht, nacheinander die Schritte (a) und (b) auszuführen, gefolgt von irgendeinem der Schritte (c), (d) und (e): (a) Extraktion von Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae mit einem ersten Extraktionsmittel, ausgewählt aus der Gruppe der basischen, wässrigen Extraktionsmittel, (b) Trennen der wässrigen Phase von unlöslichen Substanzen, Ansäuern und Entfernen säureunlöslicher Stoffe, und entweder (c) Extraktion der genannten abgetrennten wässrigen Phase, falls gewünscht nach Konzentrierung, mit einem zweiten Extraktionsmittel, das wasserhaltiges Äthanol enthält, und Abtrennen der sich ergebenden wasserhaltigen organischen Phase, die das genannte Antioxidans enthält, oder (d) Eindampfen der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten, oder (e) chromatographische Trennung der genannten abgetrennten wässrigen Phase, um einen Stoff zu erhalten, der mit dem genannten mindestens einen Salz der Rosmarinsäure angereichert ist, wobei die Kationen im genannten basischen, wässrigen Extraktionsmittel den Kationen entsprechend ausgewählt werden, die im Produkt gewünscht werden, und nicht ausschließlich Natriumionen sind.
Verfahren nach Patentanspruch 6, in dem die Kationen im genannten basischen wässrigen Extraktionsmittel unter Natrium, Lithium, Kalium, Ammonium, und substituierten Ammoniumkationen ausgewählt werden, aber nicht ausschließlich Natriumkationen sind.
Verfahren nach irgendeinem der Patentansprüche 5 bis 7, in dem mindestens eine der folgenden Bedingungen erfüllt ist: (i) die genannten Pflanzen werden unter Oregano, Rosmarin, Salbei und Thymian ausgewählt; (ii) das genannte erste Extraktionsmittel ist ein ungepuffertes, basisches, wässriges Extraktionsmittel; (iii) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und dann die genannte abgetrennte wässrige Phase vor der Extraktion mit dem genannten zweiten Extraktionsmittel durch Eindampfen konzentriert wird, um den größten Teil des anwesenden Wassers zu entfernen; (iv) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und dann das genannte zweite Extraktionsmittel Äthanol ist, das eine geringe Menge Wasser enthält; (v) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und das genannte Verfahren dann den zusätzlichen Schritt des Eindampfens der genannten organischen Phase aus Schritt (c) umfasst, um dadurch das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten; (vi) das in Schritt (d) oder durch den genannten zusätzlichen Schritt erhaltene feste Antioxidans einem weiteren Schritt chromatographischer Reinigung unterworfen wird; (vii) vor Schritt (a) wurde das genannte Gewebe mindestens einem der folgenden vorbereitenden Vorgänge unterworfen, nämlich: Trocknen, Verreiben, Dampfdestillation oder Extraktion mit mit Wasser unmischbaren, organischen Lösungsmitteln zur Gewinnung wasserunlöslicher Bestandteile; (viii) abgetrennte unlösliche Stoffe aus Schritt (b) werden zur Gewinnung wasserunlöslicher Bestandteile mit mit Wasser unmischbaren, organischen Lösungsmitteln extrahiert.
Verfahren zur Gewinnung nützlicher Bestandteile aus dem Gewebe von Pflanzen der Familie der Labiatae, das umfasst, das genannte Gewebe den aufeinanderfolgenden Schritten der Dampfdestillation zur Rückgewinnung ätherischer Öle, Gewinnung vollständig wasserlöslichen Antioxidans nach dem Verfahren eines der Patentansprüche 5 bis 7 und weitere Extraktion der getrennten, wasserextrahierten, unlöslichen Stoffe aus Schritt (b) mit mindestens einem mit Wasser unmischbaren, organischen Lösungsmittel zur Rückgewinnung wasserunlöslicher und in organischen Lösungsmitteln löslicher Bestandteile.
Verfahren nach Patentanspruch 9, in dem mindestens eine der folgenden Bedingungen erfüllt ist: (i) die genannten Pflanzen werden unter Oregano, Rosmarin, Salbei und Thymian ausgewählt; (ii) das genannte erste Extraktionsmittel ist ein ungepuffertes, basisches, wässriges Extraktionsmittel; (iii) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und dann die genannte abgetrennte wässrige Phase vor der Extraktion mit dem genannten zweiten Extraktionsmittel durch Eindampfen konzentriert wird, um den größten Teil des anwesenden Wassers zu entfernen; (iv) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und dann das genannte zweite Extraktionsmittel Äthanol ist, das eine geringe Menge Wasser enthält; (v) wobei das genannte Verfahren die aufeinander folgenden Schritte (a), (b) und (c) umfasst und das genannte Verfahren dann den zusätzlichen Schritt des Eindampfens der genannten organischen Phase aus Schritt (c) umfasst, um dadurch das genannte Antioxidans in fester Form zu erhalten; (vi) das in Schritt (d) oder durch den genannten zusätzlichen Schritt erhaltene feste Antioxidans einem weiteren Schritt chromatographischer Reinigung unterworfen wird.
Gemisch, das eine Substanz enthält, die zu oxidativer Qualitätsminderung neigt, ausgewählt aus Sojabohnenöl, β-Karotin und ätherischen Ölen, und einen Oxidationsinhibitor, der unter dem in Patentanspruch 1 definierten Antioxidans und dem in Patent anspruch 2 definierten isolierten Natriumrosmarinat ausgewählt wurde.
Gemisch, umfassend Ascorbinsäure und einen Oxidationsinhibitor in einer Menge von 0,35–0,7 Gewichtsprozent, berechnet als Verhältnis von Natriumrosmarinat zum Gewicht der Ascorbinsäure, wobei der genannte Oxidationsinhibitor unter dem in Patentanspruch 1 definierten Antioxidans und dem in Patentanspruch 2 definierten isolierten Natriumrosmarinat ausgewählt wurde.