DE3010040C2

DE3010040C2 - Verfahren zur Gewinnung von Rosmarinsäure aus Melisse

Info

Publication number: DE3010040C2
Application number: DE3010040A
Authority: DE
Inventors: Bruno Dr. 5000 Köln Christ; Kurt Dr. 5042 Köttingen Kesselring
Original assignee: A Nattermann & Cie 5000 Koeln De GmbH
Current assignee: A Nattermann & Cie 5000 Koeln De GmbH
Priority date: 1980-03-15
Filing date: 1980-03-15
Publication date: 1985-05-02
Also published as: DK115881A; DE3010040A1; IE810316L; US4354035A; EP0036087A3; IE50925B1; EP0036087B1; ATE3540T1; ZA811084B; JPS56154436A; EP0036087A2

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung von Rosmarinsäure durch Extraktion bestimmter Pflanzen, nämlich solchen der Melisse (Melissa officinalis), nach der vorstehenden Anspruchsfassung.

Rosmarinsäure (3,4-Dihydroxy-«-[[3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1 -oxo-2-propenyl]-oxy]-phenylpropionsäure) konnte in verschiedenen Pflanzenarten nachgewiesen werden. Aufgrund der entzündungshemmenden Eigenschaft der Rosmarinsäure (eigene Anmeldung P 2? 52 114.0) war es Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Rosmarinsäure nach einfachen Verfahren in größeren Ausbeuten in reiner Form zu erhalten.

Die bisher bekannten Verfahren zur Isolierung von Rosmarinsäure haben den Nachteil, daß sie viele aufwendige Verfahrensschritte benötigen.

So isolierten Scarpati und Oriente, Ricera Sei 1958,28, 2392-93 und Tetrahedron 1958,4,43—48, Rosmarinsäure aus Rosmarinus officinalis und Chicory (Cichorium intybus) durch Extraktion mit Wasser. Bevor hier die Rosmarinsäure mit Ether extrahiert werden kann, muß der wäßrige Extrakt mit einem Bleisalz gefällt und anschließend mit Schwefelwasserstoff zugesetzt werden.

Bei Gestirner und Schiemenz, Sei. Pharm. 1969, 37, 40—47, muß die Droge erst mit Petrolether entfettet werden, und nach mehreren Extraktionsstufen kann die Rosmarinsäure-haltige Fraktion erst nach Chromatographie über ein Polyamid erhalten werden. Auch nach dem Verfahren von K. Hiller, Pharmazie 1965, 20, 574—579, muß die Droge erst entfettet werden.

Es wurde nun überraschend gefunden, daß man Rosmarinsäure in hoher Reinheit und guter Ausbeute aus Melissa officinalis erhalten kann. Zur Gewinnung der Rosmarinsäure wird das gemahlene Drogenmaterial, z. B. Blätter, Wurzeln, Stengel, Blüten oder Samen von Melisse, insbesondere jedoch Melisseblätter, die vorher nicht entfettet werden müssen, 1— 3mal mit der 10=30fachen, bevorzugt mit der 20faehen Menge Wasser, bei 80- 100°C30-60 Min. unter Rühren extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit einer anorganischen Säure, vorzugsweise Salzsäure, auf pH 2 bis 2,5 angesäuert und die ausgefallenen Begleitstoffe abgetrennt, z. B. durch Zentrifugieren oder Filtrieren. Die von den Begleitstoffen befreiten Extrakte werden mit einem Alkylether. z. B. Diethylether, Diisopropylether

Beispiel 1

100 g gemahlene Melissenblätter (Gehalt an Rosmarinsäure 2,1 %) werden zweimal mit je 2 1 Wasser von 80—100⁰C 45 Minuten unter Rühren extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 25%iger Salzsäure auf pH 2—23 gebracht. Man zentrifugiert von den ausgefallenen Begleitstoffen ab und schüttelt dreimal mit Diisopropylether aus, wobei für je 100 ml Extrakt 30 ml organisches Lösungsmittel eingesetzt werden. Hierbei werden etwa 80% der eingesetzten Rosmarinsäure extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über wasserfreiem CaCb getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer bei einer Badtemperatur von etwa 50° C zur Trockne gebracht.

Der Trockenrückstand (2,7 g) enthält 54% = 1,45 g Rosmarinsäure. Er wird fein gepulvert und unter intensivem Rühren in 75 ml Wasser von 50—60° eingetragen. Man rührt 30 Minuten und filtriert durch ein Faltenfilter. Das Filtrat läßt man 12 Stunden bei etwa +4° C stehen, dekantiert von den geringen Mengen an harzigen Bestandteilen ab, die sich am Boden des Gefäßes abgesetzt haben und engt auf 25 ml ein. Nach Animpfen der Lösung mit einigen Kristallen Rosmarinsäure läßt man bei +4⁰C stehen. Nach 3Tagen saugt man das gebildete Kristallisat durch einen Filtertiegel (1 D 3) ab, wäscht mit einigen ml eiskaltem Wasser nach und trocknet im Vakuum. Die Mutterlauge wird am Rotationsverdampfer auf etwa 10 ml eingeengt, mit Rosmarinsäure angeimpft und bei etwa +4⁰C aufgehoben. Es kristallisiert im Laufe von mehreren Tagen noch eine geringe Menge Rosmarinsäure aus, die mit dem ersten Kristallisat vereinigt wird. Zum Umkristallisieren wird die rohe Rosmarinsäure (135 g) in 60 ml etwa 5O⁰C warmem Wasser gelöst, die warme Lösung wird mit einer Spatelspitze Aktivkohle versetzt und durch ein Faltenfilter filtriert. Das Filter wird mit 5 ml heißem Wasser nachgewaschen. Nach Animpfen der Lösung mit einigen Rosmarinsäurekristallen kristallisiert die Substanz bei + 4⁰C innerhalb von 2 Tagen aus. Sie wird durch einen Glasfiltertiegel abgesaugt, mit wenig eiskaltem Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute 1.15 g = 55%.

Beispiel 2

100 g gemahlene Melissenblätter werden, wie unter Beispiel 1 angegeben, extrahiert und der Extrakt a;if pH 2—2J5 angesäuert. Die saure, wäßrige Lösung wird dreimal mit Diethylether ausgeschüttelt, wobei für je 100 ml wäßrige Phase 30 ml Ether eingesetzt werden. Die vereinigten organischen Phasen werden über CaCb getrocknet filtriert und am Rotationsverdampfer bei einer Badtemperatur von etwa 40⁰C zur Trockne gebracht

Der Trockenrückstand (4,8 g mit 32% = 1,54 g Rosmarinsäure) wird fein gepulvert und in 90 ml etwa 50°C warmes Wasser eingerührt Man rührt für weitere 30 Min. und filtriert von harzigen Rückständen ab. Die Lösung läßt man Ί2 Stunden bei etwa +4⁰C stehen und dekantiert die klare Lösung von den ausgefallenen harzigen Anteilen ab. Die Lösung wird am Rotationsverdampfer auf etwa 10 ml eingeengt und auf einer Säule gegeben (0 ca. 3 τη. Länge ca. 40 cm), die 65 g Sephadex LH-20 in 7fffeigem Methanol enthält Man eluiert mit 70%igem Methanol, vereinigt mit Rosmarinsäure enthaltenden Fraktionen und engt sie am Rotationsverdampfer aul etwa 35 ml ein. Nach Animpfen kristallisiert beim Stehen bei +4⁰C innerhalb von 2—3Tagen die Rosmarinsäure aus, die wie im Beispiel 1 weiter behandelt wird. Ausbeute 13g = 62%.

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Gewinnung von Rosmarinsäure aus Melisse (Melissa officinalis) durch Extraktion mit Wasser, dadurch gekennzeichnet. da3 man die zerkleinerte Droge ein- bis dreimal mit der 10—30fachen Menge Wasser 30 bis 60 Min. bei 80—100⁰C unter Rühren extrahiert, den wäßrigen Extrakt nach Ansäuern auf pH 2—Z5 mit einem Ether, einem mit Wasser nicht mischbaren höheren Alkohol oder einem Ester einer aliphatischen Carbonsäure extrahiert, das organische Lösungsmittel abzieht, den Rückstand mit Wasser bei 40—80⁰C 20—40 Min. rührt und die erhaltene Lösung nach Reinigung und Einengung zum Auskristallisieren der Rosmarinsäure bei 2—8°C stehen läßt.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als organisches Lösungsmittel Diethylether oder Diisopropylether einsetzt

oder Dipropylether. mit einem in Wasser nicht mischbaren höheren Alkohol, wie Butanol oder Isobutanol, oder mit einem Ester einer aliphatischen Carbonsäure, z. B. Ethylacetat, extrahiert wobei die Lösungsmittelmenge so gewählt wird, daß sie zwischen '/ic und dem 3fachen der wäßrigen Phase variiert. Bevorzugterweise wird mit Diethylether oder Diisopropylether extrahiert

Das Lösungsmittel wird abgezogen und der erhaltene Rückstand wird mit Wasser bei 40—80⁰C, bevorzugt bei 50—60⁰C, 20—40 Min. gerührt Die Lösung wird dann von harzartigen Rückständen abgetrennt und anschließend bei 2—8°C aufbewahrt Nach ca.4—14 Stunden werden evtL noch vorhandene harzartige Bestandteile abgetrennt und die Lösung im Vakuum auf etwa '/3 ihres Volumens eingeengt und bei 2—8⁰C stehengelassen. Die nach einiger Zeit auskristallisierende Rosmarinsäure kann durch nochmalige Umkristalüsation in reiner Form gewonnen werden. Schmelzpunkt 171—173°C. Die Kristallisation kann auch durch Animpfen mit Rosmarinsäurekristallen beschleunigt werden.