DE69925994T2

DE69925994T2 - Neue verwendung von antifungalen, antibakteriellen und/oder antiviralen zusammensetzungen

Info

Publication number: DE69925994T2
Application number: DE69925994T
Authority: DE
Inventors: Bernard Fritig; Marguerite Kopp; Patrick Saindrenan; Marie-Pascale Latorse; Gilbert Labourdette
Original assignee: Bayer CropScience SA
Current assignee: Bayer SAS
Priority date: 1998-04-16
Filing date: 1999-04-12
Publication date: 2006-05-11
Anticipated expiration: 2019-04-13
Also published as: DE69925994D1; BR9909722B1; PT1071332E; JP2002511495A; WO1999053761A1; HU230184B1; ATE298508T1; AR019079A1; JP4922484B2; AU3152699A; MX230294B; HRP20000693B1; HUP0101671A2; US6770303B1; EP1071332A1; EP1071332B1; HRP20000693B8; KR100580898B1; CA2328300A1; HUP0101671A3

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die neuartige Verwendung von einer oder mehreren antifungalen und/oder antibakteriellen und/oder antiviralen Verbindungen als Verstärkungsmittel (Potenzierungsmittel) für physiologische Reaktionen von Pflanzen, zum Beispiel Abwehrreaktionen von Pflanzen gegen Pathogene. Die Mechanismen der induzierten natürlichen Abwehr bei Pflanzen, bei denen die Überempfindlichkeitsreaktion (Hypersensitivity Reaction, HR) dargestellt ist, bestehen aus einer komplexen Abfolge von Ereignissen, an denen die Wahrnehmung des Mikroorganismus oder einer mikrobiellen Verbindung („Elicitor") durch die Pflanze, der Tod der betroffenen Zellen- und die Produktion von unterschiedlichen chemischen Signal- und Botenstoffen beteiligt sind. Diese chemischen Signal- und Botenstoffe werden mit der aktiven Abwehr assoziierte Stoffwechselveränderungen induzieren, nämlich die Aktivierung der Phenylalanin-Ammoniaklyase (PAL), eines Schlüsselenzyms des Phenylpropanoidwegs, der zur Biosynthese von antibiotisch wirksamen aromatischen Verbindungen (Phytoalexinen), von Signalmolekülen, wie Salicylsäure (SA) oder auch von Strukturmolekülen (Lignin) führt; Aktivierung des Octadecansäurewegs, insbesondere der Lipoxygenase (LOX), die zur Erzeugung von Hydroperoxiden und Freien Radikalen, die am Zelltod beteiligt sind, oder von Signalmolekülen, wie Jasmonsäure, fähig ist.
Unter Potenzierungseffekt versteht man eine Aktivität, bei der die Pflanze oder Zellen empfindlich gemacht werden, um wesentlich verstärkt auf einen später folgenden Reiz, zum Beispiel eine Behandlung mit einem Elicitor, zu reagieren. Ein Potenzierungsmittel wird daher eine Verbindung (ein Molekül) und/oder eine Mischung von Verbindungen, die die Pflanze bei Ausbringung von einem (oder mehreren) anderen Elicitormolekülen für eine verstärkte Reaktion empfindlich macht, sein. Es wurde gefunden, daß dieses Potenzierungsmittel selbst Elicitoreigenschaften aufweisen kann.
Aus einer Arbeit in Biological Abstracts, Band 1998, Philadelphia, PA, USA; Abstract Nr. 186010, B. Kaestner et al., wird eine gleichzeitige Ausbringung von gewissen Elicitoren mit einem „resistenzinduzierenden Mittel" wie Isonicotinsäure, Salicylsäure, oder einer Benzothiadiazol (BTH)-Verbindung beschrieben. In dieser Arbeit wird erwähnt, daß solch eine Ausbringung die Chitinaseproduktion bei der Gurke, also eine pflanzliche Abwehrreaktion, gestattet. In dieser Schrift ist auch die Potenzierungswirkung der Isonicotinsäure auf die physiologische Reaktion der Gurkenpflanze beschrieben. Trotzdem wird in dieser Schrift in Bezug auf eine Potenzierungswirkung von anderen Verbindungen als der Isonicotinsäure nichts erwähnt.
Es wurde nun gefunden, daß die Verwendung von bestimmten antifungalen und/oder bakteriellen und/oder antiviralen Verbindungen B eine Verstärkung der durch die alleinige Verwendung der Elicitoren A erzielten Reaktionen gestattet.
Das Ziel der vorliegenden Erfindung besteht daher in der Verwendung von einem oder mehreren antifungalen und/oder antibakteriellen und/oder antiviralen Derivat(en) B aus der Reihe umfassend phosphorige Säure oder ihre Derivate und ihre Alkali- oder Erdalkalisalze, Acibenzolar-S-Methyl, Chitosan und Aminobuttersäure als Verstärkungsmittel (Potenzierungsmittel) für physiologische Reaktionen von Pflanzen, die nach Ausbringung von einem oder mehreren Elicitor(en) A erzielt wurden, wobei dieser Elicitor nicht gleichzeitig als Potenzierungsmittel verwendet werden kann.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung kann die Isonicotinsäure auch mit INA und die Aminobuttersäure auch mit BABA bezeichnet werden.
Acibenzolar-S-Methyl ist auch unter der Bezeichnung Bion^TM oder BTH oder CGA 245704 bekannt.
Chitosan ist auch unter der Bezeichnung Elexa^TM bekannt.
Die Potenzierungsmittelverbindung B wird aus der Reihe phosphorige Säure oder ihre Derivate und ihre Alkali- oder Erdalkalisalze, Acibenzolar-S-Methyl, Chitosan und Aminobuttersäure gewählt.
Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere die neue Verwendung der phosphorigen Säure und/oder eines ihrer Derivate als Verstärkungsmittel (Potenzierungsmittel) für Abwehrreaktionen von Pflanzen.
Bevorzugt handelt es sich bei den Derivaten der phosphorigen Säure um Metallphosphite, wobei bevorzugt Fosetyl-Al oder Fosetyl-Na gewählt werden.
Die Elicitorverbindung A wird bevorzugt aus der Reihe der Verbindungen umfassend Proteine, Oligosaccharide (wie zum Beispiel Trehalose), Polysaccharide (wie zum Beispiel Chitosan), Lipide, Glycolipide, Glycoproteine, Peptide, Wandextrakte von Pflanzenmaterial oder Pilzen, Pilze, Acibenzolar-S-Methyl oder eines seiner Analoge, Hefeextrakte, Salicylsäure und/oder einen oder mehrere ihrer Ester und einen oder mehrere Algenextrakte gewählt.
Vorzugsweise handelt es sich bei der Elicitorverbindung A um einen (oder mehrere) Algenextrakt(e) (Hydrolysate), wie zum Beispiel die in der Schrift WO 98/47375, die hier durch Bezugnahme aufgenommen ist, beschriebenen Oligopectine.
Noch stärker bevorzugt handelt es sich bei der nicht einschränkenden Reihe von Algen, die für die Zwecke der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, um Algen, die gegebenenfalls von der Firma Agrocean vorgelegt werden, wie zum Beispiel Agrimer 540, CAL, Agrotonic, Laminaria sp. (Laminaria digitalis, Laminaria saccharina, Laminaria hyperborea), Ascophyllum sp. (Ascophyllum nodosum), Himanthalla sp. (Himanthalla elongata), Undaria sp. (Undaria pinnatifida), Fucus sp. (Fucus vesiculum), Ulva sp., Chondrus sp., Enteromorphe sp.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch insbesondere die Potenzierungswirkung der phosphorigen Säure (H₃PO₃) und von Fosetyl-Na, jedoch auch von Bion^TM, auf die Abwehrreaktionen von Tabak (Induktion der PAL- und LOX-Aktivität, Produktion von SA) nach Ausbringung von Elicitoren unterschiedlicher Art, wie i) β-glucanartigen Oligosacchariden, die aus der Wand von Phytophthora megasperma (Pmg) isoliert wurden, ii) Pectinoligomeren, iii) β-Megaspermin, einem Protein, das von P. megasperma H20 sezerniert wird.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch insbesondere die Potenzierungswirkung der phosphorigen Säure (H₃PO₃) und von Fosetyl-Al, jedoch auch von Elexa^TM, auf die erzielten Reaktionen im Rahmen von biologischen Tests durch Ausbringung von Elicitoren verschiedener Art (Algenextrakt, Elexa^TM, Bion^TM, Salicylsäure und/oder -ester, Hefeextrakt, Trehalose, abgetötete oder nicht abgetötete Sporen eines Nicht-Wirts-Pilzes (Sporen des Gerstenmehltaus)).
Natürlich kann die oben beschriebene Verwendung gegebenenfalls durch eine traditionelle Fungizidbehandlung mit einem bekannten Fungizid vervollständigt werden, wobei diese Behandlung gleichzeitig bzw. getrennt von den Behandlungen mit A und/oder B stattfinden kann;
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur vorbeugenden Bekämpfung von pflanzenpathogenen Pilzen und/oder von Bakterien und/oder von Viren, dadurch gekennzeichnet, daß man eine wirksame, nichtphytotoxische Menge einer Kombination von einer oder mehreren Verbindungen A und mindestens einer Verbindung B auf die oberirdischen Teile von Pflanzen ausbringt, zum Beispiel in einer antifungalen und/oder antibakteriellen und/oder antiviralen erfindungsgemäßen Zusammensetzung. Das Gesamtverfahren kann weiterhin gegebenenfalls eine ergänzende Behandlung mit einem bekannten Fungizid vorsehen, wobei dieses Fungizid zugleich mit bzw. getrennt von den Verbindungen A und/oder B ausgebracht wird.
Die pflanzenpathogenen Pilze von Kulturen, die mit dieser Vorgehensweise bekämpft werden können, sind insbesondere die folgenden:

– von der Gruppe der Oomyceten:
– der Gattung Phytophthora, wie Phytophthora phaseoli, Phytophthora citrophthora, Phytophthora capsici, Phytophthora cactorum, Phytophthora palmivora, Phytophthora cinnamoni, Phytophthora megasperma, Phytophthora parasitica, Phytophthora fragariae, Phytophthora cryptogea, Phytophthora porri, Phytophthora nicotianae, Phytophthora infestans (Kraut- und Knollenfäule der Kartoffel bzw. Krautfäule der Tomate);
– der Familie der Peronosporanaceen, insbesondere Plasmopara viticola (Falscher Mehltau der Weinrebe), Plasmopara halstedei (Falscher Mehltau der Sonnenblume), Pseudoperonospora sp. (insbesondere Falscher Mehltau der Gurke (Pseudoperonospora cubensis) und des Hopfens (Pseudoperonospora humuli)), Bremia lactucae (Falscher Mehltau des Salats), Peronospora tabacinae (Blauschimmel des Tabaks), Peronospora destructor (Falscher Mehltau der Zwiebel), Peronospora parasitica (Falscher Mehltau der Kreuzblütler), Peronospora farinosa (Falscher Mehltau des Mangolds und Falscher Mehltau der Beta-Rübe).
– von der Gruppe der Adelomyceten (Ascomyceten):
– der Gattung Alternaria, zum Beispiel Alternaria solani (Blattfleckenkrankheit der Eierfrucht und der Tomate sowie Dürrfleckenkrankheit der Kartoffel, insbesondere Blattfleckenkrankheit der Tomate und Dürrfleckenkrankheit der Kartoffel),
– der Gattung Guignardia, insbesondere Guignardia bidwellii (Schwarzfäule der Traube),
– der Gattung Venturia, zum Beispiel Venturia inaequalis, Venturia pirina (Apfel- oder Birnenschorf),
– der Gattung Oidium, zum Beispiel Echter Mehltau der Rebe (Uncinula necator); Oidium an Gemüsekulturen, zum Beispiel Erysiphe polygoni (Kreuzblütlermehltau); Leveillula taurica, Erysiphe cichoracearum, Sphaerotheca fuligena (Mehltau der Kürbisgewächse, der Korbblütler, der Tomate); Erysiphe communis (Mehltau der Beta-Rübe und des Kohls); Erysiphe pisi (Mehltau der Erbse und der Luzerne); Erysiphe polyphaga (Mehltau der Bohne und der Gurke); Erysiphe umbelliferarum (Mehltau der Umbelliferen, insbesondere der Karotte); Sphaerotheca humuli (Mehltau des Hopfens); Echter Mehltau des Weizens und der Gerste (Erysiphe graminis forma specie tritici und Erysiphe graminis forma specie hordei),
– der Gattung Taphrina, zum Beispiel Taphrina deformans (Kreiselkrankheit des Pfirsichs);
– der Gattung Septoria, zum Beispiel Septoria nodorum oder Septoria tritici (Blattfleckenkrankheit des Weizens),
– der Gattung Sclerotinia, zum Beispiel Sclerotinia sclerotirium,
– der Gattung Pseudocercosporella, zum Beispiel P. herpotrichoides (Umfallkrankheit des Getreides),
– der Gattung Botrytis cinerea (Rebe, Gemüsekulturen, gartenbauliche Kulturen, Erbse usw.),
– der Gattung Phomopsis viticola (Triebnekrose der Rebe),
– von der Gruppe der Basidiomyceten:
– der Gattung Puccinia, zum Beispiel Puccinia recondita oder striiformis (Weizenrost), Puccinia triticina, Puccinia hordei,
– der Gattung Rhizoctonia spp., zum Beispiel Rhizoctonia solani.

Die Krankheiten bakteriellen und viralen Ursprungs, die mit dem Verfahren bekämpft werden können, sind insbesondere:

– der Feuerbrand, Erwinia amylovora;
– die bakterielle Blattfleckenkrankheit des Steinobsts, Xanthomonas campestris;
– der Bakterienbrand der Birne, Pseudomonas syringae;
– der Bakterienbrand des Reises und des Getreides;
– Viren, die an Reis und an Gemüse- und Getreidekulturen auftreten.

Bei den Kulturen, die im Rahmen der vorliegenden Erfindung betrachtet werden, handelt es sich vorzugsweise um Getreidekulturen (Weizen, Gerste, Mais, Reis) und um Gemüsekulturen (Bohne, Zwiebel, Kürbisgewächse, Kohl, Kartoffel, Tomate, Paprikaschote, Spinat, Erbse, Salat, Sellerie, Endivie), Obstkulturen (Himbeerstauden, Erdbeerstauden), Baumkulturen (Apfelbäume, Birnbäume, Kirschbäume, Ginseng, Zitronenbäume, Kokosnußpalmen, Pecanußbäume, Kakaosträucher, Nußbäume, Gummibäume, Olivenbäume, Pappeln, Bananenstauden), Rebe, Sonnenblume, Beta-Rübe, Tabak und Zierpflanzen.
Eine Einteilung, die nicht anhand der in Frage kommenden Pilze oder Bakterien, sondern anhand der Zielkulturen durchgeführt wird, läßt sich wie folgt veranschaulichen:

– Rebe: Echter Mehltau (Uncinula necator), Falscher Mehltau (Plasmopara viticola), Graufäule(Botrytis cinerea), Triebnekrose (Phomopsis viticola) und Schwarzfäule (Guignardia bidwellii);
– Kartoffelgewächse: Kraut- und Knollenfäule (Phytophthora infestans), Dürrfleckenkrankheit (Alternaria solani) und Grauschimmel (Botrytis cinerea),
– Gemüsekulturen: Falscher Mehltau (Peronospora sp., Bremia lactucae, Pseudoperonospora sp.),
– Gemüsekulturen: Mehltaupilze (Peronospora sp., Bremia lactucae, Pseudoperonospora sp), Dürrfleckenkrankheit (Alternaria sp.), Rapskrebs (Sclerotinia sp.), Grauschimmel (Botrytis cinerea), Fußfäule oder Wurzelfäule (Rhizoctonia spp.), Echter Mehltau (Erysiphe sp.; Sphaerotheca fuliginea),
– Baumkultur: Kreiselkrankheit (Venturia inaequalis, V. pirina), bakterielle Krankheiten (Erwinia amylovora, Xanthomonas campestris, Pseudomonas syringae), Echter Mehltau (Podosphaera leucotricha) und Monilia-Fäule (Monilia fructigena),
– Zitrusfrüchte: Zitrusschorf (Elsinoe fawcetti), Melanose (Phomopsis citri) und Krankheiten, die von Phytophthora sp. verursacht werden,
– Weizen für die Bekämpfung der folgenden Samenkrankheiten: Fusariosen (Microdochium nivale und Fusarium roseum), Brandkrankheiten (Tilletia caries, Tilletia controversa oder Tilletia indica), Spelzenbräune (Septoria nodorum),
– Weizen für die Bekämpfung der folgenden Krankheiten der oberirdischen Teile der Pflanze: Umfallkrankheit (Pseudocercosporella herpotricoides), Schwarzbeinigkeit (Gaeumannomyces graminis), Fußkrankheit (F. culmorum, F. graminearum), Wurzeltöter (Rhizoctonia cerealis), Echter Mehltau (Erysiphe graminis forma specie tritici), Rostkrankheiten (Puccinia striiformis und Puccinia recondita) sowie Blattfleckenkrankheiten (Septoria tritici und Septoria nodorum),
– Weizen und Gerste für die Bekämpfung von bakteriellen Krankheiten und Viruskrankheiten, zum Beispiel die Gelbverzwergung der Gerste,
– Gerste für die Bekämpfung der folgenden Samenkrankheiten: Helminthosporium-Krankheiten (Pyrenophora graminea, Bipolaris, Pyrenophora teres und Cochliobolus sativus), Flugbrand (Ustilago nuda) sowie Fusariumkrankheiten (Microdochium nivale und Fusarium roseum),
– Gerste für die Bekämpfung der folgenden Krankheiten der oberirdischen Teile der Pflanze: Umfallkrankheit (Pseudocercosporella herpotrichoides), Helminthosporium-Krankheiten (Pyrenophora teres und Cochliobolus sativus), Echter Mehltau (Erysiphe graminis forma specie hordei), Zwergrost (Puccinia hordei) und Blattfleckenkrankheit (Rhynchosporium secalis);
– Kartoffel für die Bekämpfung von Knollenkrankheiten (insbesondere Helminthosporium solani, Phoma tuberosa, Rhizoctonia solani, Fusarium solani) und gewisse Viruskrankheiten (Y-Virus);
– Baumwolle für die Bekämpfung der folgenden samenbürtigen Jungpflanzenkrankheiten: Wurzelfäule und Fusarium-Welke (Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum), Wurzelschwarzfäule (Thielaviopsis basicola),
– Erbse für die Bekämpfung der folgenden Samenkrankheiten: Brennfleckenkrankheit (Ascochyta pisi, Mycosphaerella pinodes), Fusarium-Welke (Fusarium oxysporum), Graufäule (Botrytis cinerea), Rost (Uromyces pisi),
– Raps für die Bekämpfung der folgenden Samenkrankheiten: Phoma lingam und Alternaria brassicae, Botrytis-Fäule (Botrytis cinerea), und Rapskrebs (Sclerotinia sclerotirium),
– Mais für die Bekämpfung der Samenkrankheiten (Rhizopus sp., Penicillium sp., Trichoderma sp., Aspergillus sp. und Gibberella fujikuroi), Helminthosporium-Krankheiten (Bipolaris), Fusarium-Krankheit (Fusarium oxysporum),
– Reis: Fußfäule, Wurzelfäule (Rhizoctonia spp.),
– Lein für die Bekämpfung von Samenkrankheiten (Alternaria linicola),
– Banane: Black Sigatoka (Mycosphaerella figiensis),
– Rasen: Rost, Echter Mehltau, Helminthosporium-Krankheit, bodenbartige Krankheiten (Microdochium nivale, Pythium sp., Rhizoctonia solani, Sclerotinia homeocarpa ...),
– Forstbäume für die Bekämpfung gegen Auflaufkrankheiten (Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani).

Die folgenden Beispiele dienen lediglich der Veranschaulichung der Erfindung, die sie auf keinerlei Art und Weise einschränken.
Über die physiologischen Auswirkungen, die bei den Abwehrreaktionen in Tabakzellkulturen induziert wurden, wurden Versuche durchgeführt, und zwar durch Bestimmung der Produktion von Enzymen wie PAL und LOX und Salicylsäure, sowie über die antifungalen Schutzwirkungen bei den Kombinationen Echter Mehltau des Weizens und Falscher Mehltau der Rebe.
Fosetyl-Al und phosphorige Säure sind zuvor in biologischen Versuchen als Potenzierungsmittel ausgewählt worden, da jedoch Fosetyl-Al auf die Tabakzellkultur eine toxische Wirkung ausübt, wurde es in den Zelltests durch Fosetyl-Natrium ersetzt.
Dadurch, daß man vereinfachte Modellsysteme, wie Zellkulturen, die mit unterschiedlichen Elicitoren behandelt werden, verwendet, kann man die Überempfindlichkeitsreaktion sehr gut nachahmen und kann dabei völlig die räumliche Komponente, die mit der ganzen Pflanze einhergeht, vernachlässigen, und frühere Ereignisse der intrazellulären Signalleitung beobachten. Die Problematik der Verstärkung der Abwehrreaktionen durch Chemikalien wird von uns bei dieser Erfindung nicht angesprochen.
Die gewählten Elicitoren A gehören zu unterschiedlichen Gruppen von Proteinen und Sacchariden, es handelt sich jedoch bei den Zelltests und bei den Biotests an Pflanzen nicht um die gleichen Elicitoren.
Als Referenzprodukt für einen Elicitor wurde Acibenzolar-S-Methyl gewählt; dieses ist der Grund dafür, daß die Kombination Echter Mehltau/Weizen in den zuvor durchgeführten biologischen Behandlungen mitgeführt wurde.
Um die Erscheinungen, die durch die Behandlung mit dem Potenzierungsmittel B einerseits und dem Elicitor A andererseits induziert wurden, zu trennen, betreffen die Vorversuche insgesamt aufeinanderfolgende Behandlungen (zeitlich getrennte Behandlungen) mit Potenzierungsmittel und Elicitoren. Dies schließt nicht aus, daß die beiden Produkttypen gemischt werden oder daß sie gleichzeitig verwendet werden (in Form von Mischungen oder nicht).
Die verschiedenen Elicitoren (Wandfragmente von Phytophthora megasperma H20, Pectinoligomere, ein von P. megasperma produziertes Elicitin, β-Megaspermin) werden mit Wasser aufbereitet. Der pH der Lösungen wird gegebenenfalls auf einen Wert um 5,5 eingestellt.
Die phosphorige Säure, Fosetyl-Na, Fosetyl-Al, der Salicylsäureester und das Chitosan werden mit Wasser aufbereitet. Das Acibenzolar-S-Methyl wird für die Tests an Tabakzellen mit DMSO aufbereitet und für die Tests an Pflanzen in der Handelsform Bion^TM verwendet.
Beispiel 1: Physiologische Auswirkungen.
1) Auswahl von biochemischen Markern von Tabakzellen.

• Bestimmung der PAL (Phenylalanin-Ammoniaklyase-Aktivität): Schlüsselenzym des Phenylpropanoidwegs, insbesondere der an pflanzlichen Abwehrreaktionen beteiligten Lignifizierung (ganz besonders bei den einkeimblättrigen Pflanzen).
• Bestimmung der Salicylsäure: Signalmolekül.
• Bestimmung der LOX (Lipoxygenase)-Aktivität: Schlüsselenzym bei der Synthese von Jasmonsäure, einem anderen Signalmolekül.

2) Pflanzenmaterial
Bei den verwendeten Zellsuspensionen handelt es sich um Suspensionen Nicotiana tabacum BY (Bright Yellow) von der Washington State University (Pullman, USA). Sie werden im Dunkeln bei 24°C unter Rühren (120 U/min) kultiviert und alle 7 Tage dadurch umgesetzt, daß man 10 ml Kultur zu 70 ml frischem Medium gibt.
Die Zusammensetzung des Kulturmediums wird pro Liter angegeben:

– Murashige-Skoog-Salze (Duchefa) 4,3
– Saccharose 30 g
– B1 (Thiamin) 1 mg
– Inosit 100 mg
– KH₂PO₄ 1,47 mM

Der pH wird auf 5,8 eingestellt.
Die Zellen werden 5 Tage nach dem Umsetzen (Ende der exponentiellen Wachstumsphase) vorbehandelt und am 6. Tag mit dem Elicitor behandelt. Zwei Stunden vor der Vorbehandlung werden 10 ml Zellen in 25-ml-Erlenmeyerkolben gegeben. Für die Untersuchung der Aktivität der Phenylalanin-Ammoniaklyase (PAL), der Lipoxygenase (LOX) und der Bestimmung der Salicylsäure (SA) werden die Zellen zum gewünschten Zeitpunkt durch Filtration durch Papier des Typs Whatman 3M geerntet, in flüssigem Stickstoff tiefgefroren und bis zur Untersuchung bei –80°C aufbewahrt.
3) Aktivität der Phenylalanin-Ammoniaklyase (PAL)
Die Zellen (0,5 g) werden in Boratpuffer 0,1 M, pH 8,8, in Gegenwart von Aktivkohle und Quarz zerkleinert. Das Zerkleinerungsverhältnis beträgt 1/5 (w/v). Nach dem Zentrifugieren wurden 100 μl Zellextrakt in Gegenwart von 200 μl Boratpuffer 0,1 M, pH 8,8, und 100 μl einer Mischung aus Boratpuffer 0,1 M pH 8,8, und 300 μM L-Phenylalanin (markierte kalte Mischung) 1 Stunde bei 37°C im Dunkeln inkubiert, wobei die zum Schluß erhaltene Lösung eine spezifische Aktivität von 810.000 cpm/ml aufweist.
Die Reaktion wird durch Zugabe von einigen Tropfen 9 N H₂SO₄ gestoppt. Man gibt noch 2 ml H₂O hinzu. Die Reaktionsprodukte werden dadurch extrahiert, daß man 2 ml einer Ether-Cyclohexan-Mischung (1/1, v/v) zugibt. Da das Phenylalanin in dieser Mischung nicht löslich ist, wird die Zählung mit 1 ml Reaktionsmischung in Gegenwart von „multi-purpose"-Szintillationscocktail durchgeführt.
4) Lipoxygenase (LOX)-Aktivität
Die Zellen (250 mg) werden in 0,5 ml Extraktionspuffer in Gegenwart von Quarz zerkleinert.
Extraktionspuffer:

– Tris-Puffer 0,1 M, pH 6,8
– PVP 1% w/v
– Na₂S₂O₅ 0,04
– PMSF 0,5 mM
– EDTA 3 mM
– Triton 0,1% v/v

Das Zerkleinerungsprodukt wird 15 Minuten bei 4°C bei 13.000 U/min zentrifugiert. Der Zellextrakt wird mit 2,87 ml Tris-Puffer 0,1 M, pH 6,8, und anschließend 30 μl 10 mM Linolensäure versetzt. Nach dem Rühren erfolgt die Bestimmung der OD bei 234 nm.
5) Extraktion und quantitative Bestimmung der Salicylsäure (SA).
Die Proben (0,5 g) der Zellen oder Blätter von Tabak werden im flüssigen Stickstoff verkleinert und anschließend wird noch in Gegenwart von 0,8 ml 90%igem Methanol weiterzerkleinert. Anschließend wird mit einer bekannten Menge 14C-markierter SA (1 nCi, 54 mCi/mol, Sigma) versetzt, um die Wiederfindungsrate an endogener SA zu schätzen. Die zugesetzte Menge an markierter SA liegt unterhalb der Nachweisgrenze. Die Methanolextrakte werden kräftig geschüttelt und 20 min bei 13.000 U/m zentrifugiert. Der Überstand wird gewonnen und das Pellet wird nochmals mit 100%igem Methanol extrahiert. Nach dem Zentrifugieren werden die beiden Überstände vereinigt. Die Proben werden anschließend am Rotationsverdampfer zur Trockne eingeengt. Die trockenen Extrakte werden in 0,5 ml Wasser mit einer Temperatur von 80°C aufgenommen.
Die Proben werden durch Zugabe von 2 M HCl auf pH 2 gebracht und anschließend eine Stunde lang auf 80°C erhitzt. Anschließend werden die Proben zweimal nacheinander mit 2 Volumina Ether extrahiert. Nach der Extraktion werden die Etherphasen vereinigt und der Ether wird in einem Stickstoffstrom abgedampft. Die Trockenrückstände werden in ungefähr 150 μl Ladepuffer (20 mM Natriumacetat pH 5: Acetonitril im Verhältnis 9:1 (v/v)) gelöst. 20 ml, die mit 3 ml Szintillationsflüssigkeit (Ready Gel, Beckmann) versetzt werden, werden für die Bestimmung der Restradioaktivität entnommen, wodurch man die SA-Wiederfindungsrate berechnen kann. Die bestimmten SA-Gesamtgehalte entsprechen der Summe der Gehalte an SA in freier Form und der Gehalte an SA in konjugierter Form, wobei die SA während der Hydrolyse freigesetzt wird.
Quantitative HCLP-Analyse
50 μl der Proben, die in dem Ladepuffer aufgenommen wurden, werden auf eine C18-Umkehrphasensäule (Novak Pak Waters, 3,9 × 150 mm), die mit der Puffermischung 97% Natriumacetat (20 mM, pH 5)/3% Acetonitril equilibriert wurde, mit einer Durchflußmenge von 1 ml/min injiziert. Die Elution wird mit einem HPLC-System von Waters mit einem isokratischen System für einen Zeitraum von 10 min programmiert. Anschließend erhöht sich im Verlauf von 2 min der Acetonitrilanteil auf 80%, und dieses Verhältnis wird 10 Minuten lang beibehalten, was ein Waschen der Säule gestattet, wobei die Säule anschließend wieder 5 Minuten lang mit der Ausgangsmischung equilibriert wird, bevor eine neue Einspritzung durchgeführt wird. Die SA wird fluorimetrisch quantifiziert (Anregungs-λ = 315 nm, Emissions-λ = 405 nm). Der Peak, der diesem Molekül entspricht, wird mittels eines Vergleichs der Retentionszeit mit der Retentionszeit der Bezugs-SA (50 ng) identifiziert. Die Mengen an eingespritzter SA werden aufgrund eines Vergleichs der Peak-Fläche, die der SA entspricht, mit derjenigen des eingespritzten Molekülstandards berechnet. Die SA-Gehalte in den Proben werden anschließend unter Einbeziehung der Wiederfindungsrate berechnet.
6) Behandlungskinetik
In allen Fällen wird die Vorbehandlung mit dem Verstärkungsmittel 18 Stunden vor der Behandlung mit dem Elicitor durchgeführt.
Die Probennahmen für die Untersuchung der physiologischen Wirkungen finden 4 Stunden, 12 Stunden bzw. 24 Stunden nach der Elicitorbehandlung statt. Die Kontrollen, die nur einer Verstärkerbehandlung bzw. einer Elicitorbehandlung entsprechen, liegen systematisch bei jeder Probennahme vor.
Ergebnisse: Siehe die 1 bis 9 nach den Beschreibungen, wobei die Abbildungen wie folgt kommentiert werden:
1. Einfluß der Konditionierung der Tabakzellkulturen mit H₃PO₃ auf die Induktion der PAL-Aktivität nach Elicitorbehandlung mit einem isolierten Pmg-Oligosaccharid-Elicitor.
Die Zellkulturen wurden 18 Stunden lang mit 5 mM H₃PO₃ konditioniert (Vorbehandlung) und mit 10 μg/ml Oligosaccharid-Elicitor des β-Glucan-Typs induziert. Die Elicitorbehandlung selbst führt zu einer vorübergehenden Erhöhung der PAL-Aktivität, die 8 Stunden nach Behandlung mit dem Elicitor wieder auf ihren ursprünglichen Wert absinkt. Eine Vorbehandlung der Zellen mit H₃PO₃ (5 mM) verstärkt die Reaktion auf den Elicitor (Ansprechen auf den Elicitor) stark und verlängert die Dauer dieser Erscheinung.
2. Einfluß von H₃PO₃ auf Lipoxygenase (LOX)-Aktivität von Tabakzellkulturen nach Induktion mit einem aus Pmg isolierten Oligosaccharid-Elicitor.
Die LOX-Aktivität wurde 21 Stunden nach Elicitorbehandlung mit 10 μg/ml Oligosaccharid-Elicitor des β-Glucan-Typs gemessen. Die Auswirkung der Vorbehandlung der Zellen mit H₃PO₃ auf das Ansprechen der Zellen auf den Elicitor ist stark, da sich dazu eine Induktion der LOX-Aktivität erzielen läßt, die ungefähr 4mal höher als diejenige der entsprechenden Kontrolle ist. 39 Stunden (18 Stunden Vorbehandlung plus 21-Stunden) nach Behandlung mit H₃PO₃ alleine läßt sich eine leichte Induktionswirkung auf die LOX-Aktivität beobachten.
3. Einfluß der Konditionierung von Tabakzellkulturen mit H₃PO₃ auf die Induktion der PAL-Aktivität nach Behandlung mit Pectin-Oligomer-Elicitoren.
Die Zellkulturen wurden 18 Stunden lang mit 5 mM H₃PO₃ konditioniert und dann wurde eine Elicitorbehandlung mit 20 μg/ml Pectin-Oligomeren durchgeführt. Die Behandlung der Zellen mit dem Elicitor führt zu einer vorübergehenden Verstärkung der PAL-Aktivität, die 8 Stunden nach der Behandlung mit dem Elicitor wieder auf ihren ursprünglichen Wert absinkt. Die Konditionierung der Zellen mit H₃PO₃ führt nach der Elicitorbehandlung zu einer starken Stimulation der PAL-Aktivität, die während der gesamten Versuchsdauer auf einem erhöhten Wert verbleibt. Nach Behandlung mit H₃PO₃ alleine ist keinerlei wesentliche Induktionswirkung auf die PAL-Aktivität nachzuweisen.
4. Anhäufung von SA in Tabakzellkulturen, die mit H₃PO₃ vorkonditioniert wurden oder unbehandelt blieben und die mit Pectin-Oligomer-Elicitoren behandelt wurden.
SA häuft sich als Reaktion auf Elicitorbehandlung mit 20 μg/ml Pectin-Oligomeren sehr vorübergehend und schwach an. Die Konditionierung der Zellen mit H₃PO₃ 18 Stunden vor der Elicitorbehandlung führt zu einer starken Erhöhung der SA-Syntheserate im Bezug auf nicht konditionierte Zellen.
5. Einfluß der Konditionierung von Tabakzellkulturen mit H₃PO₃ und Fosetyl-Na auf die Induktion der PAL-Aktivität nach Behandlung mit Pectin-Oligomer-Elicitoren.
Die Zellkulturen wurden 18 Stunden lang mit 5 mM H₃PO₃ oder Fosetyl-Na konditioniert und mit 20 μg/ml Pectin-Oligomer-Elicitoren behandelt. Die Behandlung der Zellen mit dem Elicitor führt zu einer vorübergehenden Erhöhung der PAL-Aktivität, die 11 Stunden nach der Elicitorbehandlung wieder auf ihren ursprünglichen Wert absinkt. Die Konditionierung der Zellen mit H₃PO₃ führt nach Elicitorbehandlung zu einer Stimulierung der PAL-Aktivität, die über derjenigen liegt, die für nicht konditionierte Zellen beobachtet wird. Das Fosetyl-Na hält die PAL-Aktivität 11 Stunden nach Elicitorbehandlung auf einem erhöhten Wert (Dauerwirkung). Nach Anwendung von Fosetyl-Na alleine wird keinerlei wesentliche Induktionswirkung auf die PAL-Aktivität beobachtet.
6. Einfluß der Konditionierung von Tabakzellkulturen mit H₃PO₃ auf die Induktion der PAL-Aktivität nach Elicitorbehandlung mit 2 nM β-Megaspermin.
Die Zellkulturen wurden 18 Stunden lang mit 5 mM H₃PO₃ konditioniert und mit 2 nM β-Megaspermin als Elicitor behandelt. Die Anwendung des Elicitors alleine führt zu einer Vermehrung der PAL-Aktivität, die sich 8 Stunden nach der Elicitorbehandlung stabilisiert. Die PAL-Aktivität von mit H₃PO₃ vorbehandelten Zellen steigt linear nach der Elicitorbehandlung und erreicht einen Wert, der 4mal höher ist als der von nicht konditionierten Zellen.
7. Einfluß von H₃PO₃ auf die Lipoxygenase (LOX)-Aktivität von Tabakzellkulturen nach Induktion mit 2 nM β-Megaspermien.
Die LOX-Aktivität wurde 12 Stunden nach Elicitorbehandlung mit 2 nM β-Megaspermien gemessen. Die Auswirkung der Vorbehandlung der Zellen (18 Stunden) mit H₃PO₃ auf das Ansprechen der Zellen auf den Elicitor ist sehr stark, da sich dadurch eine LOX-Aktivität induzieren läßt, die ungefähr 28mal höher ist als die der entsprechenden Kontrolle. 30 Stunden (18 Stunden Vorbehandlung plus 12 Stunden) nach Behandlung mit H₃PO₃ alleine ist keinerlei Induktionswirkung auf die LOX-Aktivität zu beobachten.
8. Anhäufung von SA in Tabakzellkulturen, die mit H₃PO₃ vorkonditioniert wurden oder unbehandelt blieben und mit 5 nM β-Megaspermien als Elicitor behandelt wurden.
SA häuft sich vorübergehend als Reaktion auf Behandlung mit 5 nM β-Megaspermien als Elicitor an. Die Konditionierung der Zellen mit H₃PO₃ 18 Stunden vor der Elicitor-behandlung führt zu einer starken Erhöhung der SA-Syntheserate im Vergleich zu nicht konditionierten Zellen und zu einer Persistenz der Wirkung.
9. Einfluß der Konditionierung von Tabakzellkulturen mit H₃PO₃ und Fosetyl-Na auf die Induktion der PAL-Aktivität nach Behandlung mit 2 nM β-Megaspermien als Elicitor.
Die Zellkulturen wurden 18 Stunden mit 5 mM H₃PO₃ oder Fosetyl-Na konditioniert und mit 2 nM β-Megaspermien als Elicitor behandelt. Die Elicitorbehandlung alleine führt zu einer Erhöhung der PAL-Aktivität, die sich 8 Stunden nach Anwendung des Elicitors stabilisiert. Die PAL-Aktivität von mit H₃PO₃ oder mit Fosetyl-Na vorbehandelten Zellen ist immer höher als diejenige, die bei nicht konditionierten Zellen beobachtet wird.
Schlußfolgerung: Diese Versuche zeigen die Verstärkerwirkung von H₃PO₃ und Fosetyl-Na auf die Abwehrreaktionen von Tabak. H₃PO₃ und Fosetyl-Na selbst haben keinerlei Wirkung auf die PAL-Aktivität, die LOX-Aktivität oder die SA-Synthese. Die Konditionierung sensibilisiert die Zellkulturen dazu, um auf niedrige Elicitorkonzentrationen zu reagieren, oder erhöht die Empfindlichkeit der Zellen gegenüber Elicitoren.
Beispiel 2: Schutz gegen Pilze.
1) Echter Mehltau/Weizen (Erysiphe graminis f. sp. tritici)
Weizenpflanzen der Sorte Victo (von Pioneer genetique) werden in der Kühlkammer bei 10°C mit einer relativen Feuchtigkeit von 90% und einem Licht-Dunkel-Rhythmus von 12 Stunden kultiviert.
Die ungefähr 3 Wochen alten Pflanzen (die sich in dem Stadium mit 2 gut entwickelten Blättern befinden) werden vor der Behandlung einen Tag im Gewächshaus bei 20°C konditioniert und gegossen.
Die Produkte werden entweder nacheinander oder in Form einer Mischung aufgebracht.
Die verdünnten Suspensionen, die einem Spritzvolumen von 250 Litern Spritzflüssigkeit pro Hektar entsprechen, werden ausgehend von unterschiedlichen Verbindungen durch Verdünnen mit Wasser hergestellt.
Das Potenzierungsmittel wird im Fall einer aufeinanderfolgenden Behandlung 24 Stunden oder 48 Stunden vor dem Elicitor ausgebracht.
2 Tage, 4 Tage oder 5 Tage nach der Behandlung mit dem Elicitor wird inokuliert. Dies wird dadurch gewährleistet, daß man die Pflanzen mit Weizenpflanzen, die zuvor 1 Woche früher kontaminiert worden sind, und die einen pulverförmigen Konidienrasen aufweisen (obligatorischer Parasit, der für seine Etablierung kein freies Wasser verträgt), abbürstet.
Nach dieser Inokulation werden die Weizenpflanzen 7 Tage bei 20°C in einer Atmosphäre mit 85% relativer Luftfeuchtigkeit inkubiert.
2) Falscher Mehltau der Rebe (Plasmopara viticola)
Rebenstecklinge (Vitis vinifera) der Sorte Chardonnay werden in Töpfen im Gewächshaus kultiviert. Sobald diese Pflanzen ein Alter von 2 Monaten (4–5-Blattstadium) erreicht haben, werden sie 1 Woche vor der Behandlung im Gewächshaus bei 20°C vom Boden her bewässert, um jegliche Stresserscheinungen zu vermeiden.
Die Produkte werden entweder der Reihe nach oder in Form einer Mischung ausgebracht.
Die verdünnten Suspensionen, die einem Spritzvolumen von 500 Litern Spritzflüssigkeit pro Hektar entsprechen, werden ausgehend von unterschiedlichen Verbindungen durch Verdünnen mit Wasser hergestellt.
Das Potenzierungsmittel wird im Fall einer aufeinanderfolgenden Behandlung 6 Tage vor dem Elicitor ausgebracht.
6 Tage nach der Behandlung mit dem Elicitor wird inokuliert. Dies wird dadurch gewährleistet, daß man eine wässrige Sporensuspension von Plasmopara viticola verspritzt, die man von sporulierenden Blättern, die 7 Tage zuvor inokuliert worden sind, erhält. Diese Sporen werden in einer Konzentration von 100.000 Einheiten pro cm³ suspendiert.
Die inokulierten Pflanzen werden anschließend 7 Tage in einer nebelartigen feuchten Atmosphäre bei 18–20°C inkubiert.
Die Auswertung wurde 7 Tage nach der Inokulation im Vergleich mit unbehandelten, jedoch inokulierten, Kontrollpflanzen durchgeführt. Die Blattfläche, die auf ihrer Unterseite einen weißlichen Bewuchs, der der Sporulation des Pilzes entspricht, aufweist, wird visuell geschätzt.
Ausgehend von der Größe der sporulierenden Blattfläche wird mittels der Abbott-Formel die Wirksamkeit des Behandlungsprodukts bzw. der Behandlungsprodukte berechnet, und zwar auf Basis von drei Blättern pro Pflanze und drei Pflanzen pro Versuchsglied.
Ein gegebenenfalls vorhandener Synergismus wird anschließend durch Anwendung der von Limpel, L. E., P. H. Schuldt und D. Lammont, 1962, Proc. NEWCC 16: 48–53, definierten Methode mit Hilfe der folgenden Formel, die auch als Colby-Formel bezeichnet wird, nachgewiesen: E = X + Y – X·Y/100wobei die Symbole folgendes bedeuten:

– E ist die mit einer Mischung der beiden antifungalen Mittel A und B in definierten Dosen, die mit a bzw. b bezeichnet werden, erzielte prozentuale Wachstumshemmung des Pilzes;
– X bedeutet die für die antifungale und/oder antibakterielle und/oder antivirale Verbindung A bei einer Dosis a beobachtete prozentuale Hemmung,
– Y bedeutet die für die antifungale und/oder antibakterielle und/oder antivirale Verbindung B bei einer Dosis b beobachtete prozentuale Hemmung.

Ist die für die Mischung beobachtete prozentuale Hemmung größer als E, liegt Synergismus vor.
Ergebnisse: Siehe 10 bis 20 am Ende der Beschreibungen, die folgendermaßen zu kommentieren sind:
10. Einfluß der Konditionierung von Weizenpflanzen mit Fosetyl-Al in einer Aufwandmenge von 1 kg/ha (Aliette WG 80%) auf die Entwicklung von Echtem Mehltau nach Induktion mit einem Elicitor des Kohlenhydrattyps, nämlich Elexa^TM, in einer Aufwandmenge von 1% in der Spritzbrühe unter Zusatz des Netzmittels R56 in einer Aufwandmenge von 0,1%.
Die Colby-Analyse zeigt, daß unter den Versuchsbedingungen zwischen Fosetyl-Al und Elexa^TM mit Zusatz von R56 ein Synergismus gegen den Echten Mehltau des Weizens (Erysiphe graminis f. sp. tritici) vorliegt.
11. Synergismus zwischen Fosetyl-Al in einer Aufwandmenge von 1 kg/ha oder H₂PHO₃ in einer Aufwandmenge 1 oder 2 kg/ha und dem Produkt Elexa^TM, das in einer Aufwandmenge von 0,1% in Elicitor ausgebracht wird, wobei die Spritzbrühe einen Zusatz von 0,1% R56 enthält, gegen den Echten Mehltau des Weizens.
In diesem Versuch wurde die Auswertung der Symptome an den ersten, zweiten und dritten Blättern von 24 Weizenpflanzen, die auf drei Töpfe aufgeteilt waren, durchgeführt; zwischen der Ausbringung des Potenzierungsmittels (Fosetyl-Al oder H₂PHO₃) und der Ausbringung des Elicitors Elexa^TM in einer Aufwandmenge von 0,1% mit einem Zusatz von R56 in einer Aufwandmenge von 0,1% lagen 48 Stunden.
12. Potenzierungseinfluß von Fosetyl-Al in einer Aufwandmenge von 1 oder 2 kg/ha nach Elicitorbehandlung mit Elexa^TM in einer Aufwandmenge von 0,1% mit einem Zusatz von 0,1% R56 in der Spritzbrühe gegen den Falschen Mehltau der Rebe.
In zwei unabhängigen Versuchen wird bei Kombination Fosetyl-Al × Elexa^TM 0,1% (+0,1% R56) ein Colby-Synergismus festgestellt.
13. Einfluß von Fosetyl-Al (fosl in einer Aufwandmenge von 1 kg/ha) auf den Schutz von Weizen gegen den Echten Mehltau nach Induktion mit einem Elicitor des Hefeextrakttyps in einer Aufwandmenge von 1 g/l (yeast 1E).
Für die Kombination Fosetyl-Al/Hefeextrakt ergibt sich gegen den Echten Mehltau des Weizens ein Colby-Synergismus.
Abbildung 14. Einfluß einer Konditionierung von Weizenpflanzen mit Fosetyl-Al oder phosphoriger Säure (H₂PHO₃) gegen den Echten Mehltau des Weizens nach Elicitorbehandlung mit einem Elicitor des Typs gegebenenfalls abgetötete Sporen eines Nichtwirtspilzes (Erysiphe graminis f. sp. hordei), der für den Echten Mehltau der Gerste verantwortlich ist.
In den beiden Fällen, wo es sich bei dem Potenzierungsmittel entweder um Fosetyl-Al oder um H₂PHO₃ und bei dem Elicitor um Sporen eines Nichtwirtspilzes im Bezug auf Weizen handelt, ergibt sich ein Colby-Synergismus.
Abbildung 15. Einfluß von H₂PHO₃ (1 kg/ha) auf den Schutz gegen den Echten Mehltau von Weizenpflanzen nach Induktion mit einem Oligosaccharid-Elicitor wie Trehalose in einer Aufwandmenge von 15 g/l (Prolabo).
Durch Kombinieren der Potenzierungswirkung der phosphorigen Säure und Elicitorwirkung der Trehalose ergibt sich ein synergistischer Colby-Effekt gegen den Echten Mehltau des Weizens.
Abbildung 16. Einfluß von Fosetyl-Al (2 kg/ha) auf den Falschen Mehltau der Rebe nach Induktion mit einem Oligosaccharid-Elicitor, nämlich Trehalose in einer Aufwandmenge von 15 g/l (Prolabo).
Durch Kombinieren der Potenzierungswirkung von Fosetyl-Al und der Elicitorwirkung der Trehalose ergibt sich ein synergistischer Colby-Effekt gegen den Falschen Mehltau der Rebe.
Abbildung 17. Einfluß von Fosetyl-Al (1 oder 2 kg/ha) oder von H₂PHO₃ (1 oder 2 kg/ha) auf den Echten Mehltau des Weizens nach Induktion durch Salicylsäure in einer Aufwandmenge von 1 g/l 48 Stunden nach dem Potenzierungsmittel und 4 Tage vor der Inokulation.
Fosetyl-Al oder H₂PHO₃ verstärken auf synergistische Weise die Elicitorwirkung der Salicylsäure.
Abbildung 18. Einfluß von H₂PHO₃ (1 kg/ha) oder Fosetyl-Al (1 oder 2 kg/ha) auf den Echten Mehltau des Weizens nach Induktion mit einem Elicitor des Bion^TM-Typs (BTH) in einer Dosierungsmenge von 30 g/ha 48 Stunden nach Potenzierungsmittel und 48 Stunden oder 4 oder 5 Tage vor der Inokulation.
Bei den verschiedenen Kombinationen, in denen Fosetyl-Al oder H₂PHO₃ gemeinsam mit Bion^TM verwendet werden, wird ein Colby-Synergismus gegen den Echten Mehltau des Weizens beobachtet.
Abbildung 19. Einfluß von Fosetyl-Al (2 kg/ha) auf den Falschen Mehltau der Rebe in Assoziation mit einem Elicitor des Bion^TM-Typs (BTH in einer Aufwandmenge von 30 g/ha).
Durch die Kombination der Potenzierungswirkung von Fosetyl-Al und Elicitor des Bion^TM ergibt sich ein synergistischer Colby-Effekt gegen den Falschen Mehltau der Rebe.
20. Einfluß von Elexa^TM (hier als Potenzierungsmittel) in einer Aufwandmenge von 0,1% mit einem Zusatz von 0,1% R56 in der Spritzbrühe gegen den Echten Mehltau des Weizens in Kombination mit einer Behandlung mit einem Elicitor des Bion^TM-Typs (BTH in einer Aufwandmenge von 30 g/ha) oder von Salicylsäureester (in einer Aufwandmenge von 1 g/l).
Beim 1. Versuch liegen 4 Tage zwischen der Elicitorbehandlung und der Inokulation, während beim 2. Versuch der Zeitabstand zwischen Elicitor und Inokulation 48 Stunden bzw. 5 Tage beträgt. In beiden Fällen beträgt der Abstand zwischen der Potenzierungsmittelbehandlung und der Elicitorbehandlung 48 Stunden.
Bei jedem Fall ergibt sich ein synergistischer Colby-Effekt. In allen Fällen verstärkt Elexa^TM die Elicitorreaktion von BTH oder Salicylsäure.
Schlußfolgerungen: Es wurden synergistische Colby-Effekte zwischen Fosetyl-Al und seinen Derivaten und unterschiedlichen Arten von Elicitoren, bei denen es sich um Polysaccharide (Elexa^TM), einfache Zucker (Trehalose), Verbindungen wie Salicylsäure und/oder ihre Ester, Bion^TM (BTH) oder Sporen von Nichtwirtspilzen (Erysiphe graminis hordei) handeln kann, in Biotests an Weizen und Rebe nachgewiesen. Ebenso wurden synergistische Wirkungen zwischen Elexa^TM und Elicitoren wie Bion^TM oder Salicylsäure und/oder ihren Estern nachgewiesen.
In diesen Beispielen wurden die an Tabakzellen gezeigten physiologischen Wirkungen vervollständigt und korreliert. Außerdem wurde für Tabak eine Potenzierung durch Bion^TM (BTH) bei Elicitorbehandlung mit einem Pectin-Oligomer nachgewiesen (vgl. 21).
Beispiel 3: Freilandversuch am Echten Mehltau (Erysiphe cichoracerum) der Melone (Cucumis melo, Sorte Rochet) mittels Blattbehandlung
Die Kombination Fosetyl- + Algenextrakt trägt signifikant zu einer starken Verringerung des Befalls im Vergleich zur Verwendung der allein in den gleichen Dosierungen ausgebrachten Produkte bei, wie aus den Ergebnissen der folgenden Tabelle ersichtlich ist.
Bei dem verwendeten Fungizid handelt es sich um Fosetyl-Al (WG in einer Aufwandmenge von 1,25 kg/ha bzw. 1.000 g/ha Wirkstoff) und bei dem Algenextrakt (LC-Lösung, 1 l/ha) um Agrimer 540 von der Fa. Agrimer.
Alle diese Produkte werden in einer Aufwandmenge von 1.000 g/ha verwendet, und der Prozentsatz der befallenen Pflanzen wird 15 Tage nach den zwei Behandlungen T1 und T2 (die im Abstand von 7 Tagen durchgeführt werden) bestimmt.
Beispiel 4: Freilandversuch am Echten Mehltau (Erysiphe graminis) des Weizens (Triticum aestivum, Sorte Winter) mittels Blattbehandlung.
Die Kombination Fosetyl- + Algenextrakt trägt signifikant zu einer Verringerung des Befalls im Vergleich zur Verwendung der allein in den gleichen Dosierungen ausgebrachten Produkte bei, wie aus den Ergebnissen der folgenden Tabelle ersichtlich ist.
Bei dem verwendeten Fungizid handelt es sich um Fosetyl-Al (WG in einer Aufwandmenge von 1,25 kg/ha bzw. 1.000 g/ha Wirkstoff) und bei dem Algenextrakt (LC-Lösung, 1 l/ha) um Agrimer 540 von der Fa. Agrimer.
Alle diese Produkte werden in einer Aufwandmenge von 1.000 g/ha eingesetzt, und der Prozentsatz an befallenen Pflanzen (% zerstörte Blätter) wird einerseits an einer halbkurativ behandelten Blattetage (Auswertung 22 Tage nach der Behandlung T) und andererseits an einer kurativ behandelten Blattetage (Auswertung 27 Tage nach der Behandlung T) bestimmt.

Claims

Verwendung von einem oder mehreren antifungalen und/oder antibakteriellen und/oder antiviralen Derivat(en) B aus der Reihe phoshorige Säure oder ihre Derivate und ihre Alkali- oder Erdalkalisalze, Acibenzolar-S-Methyl, Chitosan und Aminobuttersäure als Potenzierungsmittel für physiologische Reaktionen von Pflanzen, die nach Ausbringung von einem oder mehreren Elicitor(en) A erzielt wurden, wobei dieser Elicitor nicht gleichzeitig als Potenzierungsmittel verwendet werden kann.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Elicitorverbindung A aus der Reihe Proteine, Oligosaccharide, Polysaccharide, Lipide, Glycolipide, Glycoproteine, Peptide, Wandextrakte von Pflanzenmaterial oder Pilzen, Pilze, Acibenzolar-S-Methyl oder eines seiner Analoge, Hefeextrakte, Salicylsäure und/oder ein oder mehrere ihrer Ester und ein oder mehrere Algenextrakt(e) stammt.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei der Potenzierungsmittelverbindung B um ein Metallphosphit handelt.
Verwendung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei dem Potenzierungsmittel B um Fosetyl-Al oder Fosetyl-Na handelt.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei B um die phosphorige Säure handelt.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei B um Acibenzolar- S-Methyl handelt.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei B um Chitosan handelt.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei A um i) ein Oligosaccharid des β-Glucan-Typs, das aus der Wand von Phytophthora megasperma (Pmg) isoliert wurde, oder um ii) ein Pektinoligomer oder um iii) β-Megaspermin handelt.
Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß es sich bei A um Chitosan, Acibenzolar-S-Methyl, Salicylsäure oder einen oder mehrere ihrer Ester, einen Hefeextrakt, Trehalose oder Sporen eines Nichtwirtspilzes handelt.
Verwendung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie durch eine traditionelle Fungizidbehandlung mit einem bekannten Fungizid ergänzt werden kann, wobei diese Behandlung gleichzeitig mit der Ausbringung von A und B oder separat erfolgen kann.
Verfahren zur vorbeugenden Bekämpfung von pflanzenpathogenen Pilzen und/oder von Bakterien und/oder von Viren, dadurch gekennzeichnet, daß man eine wirksame, nichtphytotoxische Menge einer Kombination von einer oder mehreren Verbindungen A und mindestens einer Verbindung B auf die oberirdischen Teile von Pflanzen ausbringt, wobei A und B wie in den Ansprüchen 1 bis 9 definiert sind.
Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man Getreidekulturen (Weizen, Gerste, Mais, Reis), Gemüsekulturen (Bohne, Zwiebel, Kürbisgewächse, Kohl, Kartoffel, Tomate, Paprika, Spinat, Erbse, Salat, Sellerie, Endivie), Obstkulturen (Erdbeerpflanzen, Himbeerstauden), Baumkulturen (Apfel-, Birn-, Kirschbäume, Ginseng, Zitronenbäume, Kokospalmen, Pecannußbäume, Kakaobäume, Walnußbäume, Kautschukbäume, Olivenbäume, Pappeln, Bananenstauden), Weinrebe, Sonnenblume, Zuckerrübe, Tabak oder Zierpflanzenkulturen behandelt.