DE69824201T2

DE69824201T2 - Neue 9a-azalide

Info

Publication number: DE69824201T2
Application number: DE69824201T
Authority: DE
Inventors: Gabrijela Kobrehel; Gorjana Lazarevski; Mladen Vinkovic
Original assignee: Pliva Istrazivacki Institut doo
Current assignee: Fidelta doo
Priority date: 1997-10-16
Filing date: 1998-10-13
Publication date: 2005-09-22
Anticipated expiration: 2018-10-14
Also published as: PT1036083E; DK1437359T3; ATE348836T1; PL340372A1; EP1437359A2; WO1999020639A3; HK1032785A1; DK1036083T3; JP2001520234A; PT1437359E; SK5522000A3; SI1036083T1; EP1036083B1; EP1437359A3; WO1999020639A2; EE200000226A; ES2222610T3; EP1036083B9; DE69836697D1; NO20001871L

Description

Die Erfindung betrifft neue Verbindungen aus der Klasse der Makrolid-Antibiotika. Insbesondere betrifft sie neue Zwischenebindungen aus der Klasse der 9a-Azalide, ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren, ein Verfahren zur ihrer Herstellung und deren Verwendung als Antibiotika oder als Zwischenverbindungen zur Herstellung von anderen Makrolid-Antibiotika.
Das Makrolid-Antibotikum Erythromycin A gilt seit mehr als 40 Jahren als ein bewährtes und wirksames Mittel zur Behandlung von durch grampositive und einige gramnegative Bakterien, bestimmte Spezies von Legionella, Mycoplasma, Chlamidia und Helicobacter, verursachten respiratorischen und genitalen Krankheiten. Die bemerkten Änderungen in biologischer Verfügbarkeit nach der oralen Verabreichung, gastrische Unverträglichkeit bei vielen Patienten und Verlust der Aktivität in saurem Medium, wobei inaktiver Metabolit Anhydroerythromycin gebildet wurde, sind die Grundmängel in der klinischen Verwendung von Erythromycin. Die Spirocyclisierung des Aglykonringes wird jedoch durch chemische Umwandlung von C-9-Keton oder von Hydroxylgruppen in C-6- und/oder C-12-Stellungen erfolgreich verhindert. Auf diese Weise, z.B. durch Oximierung von C-9-Keton und anschließende Beckmannsche Umlagerung und Reduktion, erhält man 9-Deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A, das erste 15-gliedrige Makrolid-Antibiotikum mit einer in den Aglykonring eingeschlossenen 9a-Aminogruppe (Kobrehel G. et al., US 4,328,334 ; 5/1982). Durch reduzierende Methylierung von 9-Aminen nach dem Eschweiler-Clark-Verfahren synthetisiert man 9-Deoxo-9a-methyl-9a-aza-9a-homoerythromycin (AZITHROMYCIN), einen Prototyp der neuen Klasse von Makrolid-Antibiotika, nämlich Azaliden (Kobrehel G. et al., BE 892357; 7/1982). Neben einem breiten antimikrobiellen Spektrum, das auch gramnegative Bakterien umfasst, ist Azithromycin auch durch eine lange biologische Halbwertszeit, einen spezifischen Transportmechanismus zum Anwendungspunkt und eine kurze Therapieperiode charakterisiert. Azitrhomycin penetriert leicht und wird innerhalb der menschlichen Phagozytzellen akkumuliert, was eine verbesserte Wirkung auf intrazelluläre pathogene Mikroorganismen aus den Klassen Legionella, Chlamidia und Helicobacter zur Folge hat.
Weiterhin ist es bekannt, dass die C-6/C-12 Spirocyclisierung von Erythromycin A mittels O-Methylierung der C-6-Hydroxylgruppe des Aglykonringes (Watanabe Y. et al., US 4,331,803 ; 5/1982) erfolgreich inhibiert wird. Die Reaktion von Erythromycin mit Benzyloxycarbonylchlorid und anschließende Methylierung des erhaltenen 2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-Derivats, Eliminierung der Schutzgruppen und 3'-N-Methylierung ergeben neben 6-O-Methylerythromycin (CLARITHROMYCIN) auch bedeutende Mengen von 11-O-Methylerythromycin und von mehrfach substituierten Analogen (Morimoto S., et al., J. Antibiotics, 1984, 37, 187). Im Vergleich zu Erythromycin A ist Clarithromycin wesentlich stabiler in saurem Medium und weist eine bessere in vitro Wirkung gegen grampositive Bakterienstämme auf (Kirst H. A. et al., Antimicrobial Agents and Chemoter., 1989, 1419). Auf ähnliche Weise wurde auch eine Reihe von O-Methylderivaten von Azithromycin (Kobrehel G. et al., US 5,250,518 ; 10/1993) synthetisiert. Obwohl die Hauptprodukte von O-Methylierung von Azithromycin, nämlich 11-O-Methyl-azithromycin (Beispiel 8) und 6-O-Methylazithromycin (Beispiel 6) eine bedeutende Wirkung gegen Standard-Bakterienstämme und klinische Isolate und azythromycin-ähnliche pharmakokinetische Eigenschaften aufweisen, stellt die Gewinnung der Produkte in größeren Mengen wegen der Unselektivität der O-Methylierung ein zusätzliches technisches Problem dar. Die Bestimmung der Struktur der O-Methylderivate von Azithromycin basierte auf der Analyse von ¹H-¹H and ¹H-¹³C 2D NMR Spektren (300 MHz). Nachträglich wurde mittels NMR-Spektroskopie langer Reichweite zusätzlich bestimmt, dass die Substitution an C-6 Hydroxylgruppe irrtümlicherweise Azithromycin zugeschrieben wurde und dass es sich eigentlich um 12-O-Methylazithromycin handelt. Weiterhin wurde festgestellt, dass die Verwendung von geeigneten Schutzgruppen an den Hydroxylgruppen in 4''- und 11-Stellungen (besonders von Silylschutzgruppen wie Trimethylsilylgruppen) eine selektive O-Methylierung zur Folge hat und eine einfache Herstellung von 12-O-Methylazithromycin ermöglicht (HR 970051 A; 10/97). Nachträglich bestätigten Waddell S.T. et al. (Biorg. Med. Chem. Letters 8 (1998), 549-555) unabhängig von der letzterwähnten Patentanmeldung die O-Methylierung der Hydroxylgruppe in C-12-Stellung.
Der Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind neue Zwischenverbindungen und ein Verfahren zu deren Herstellung zwecks einer alternativen Synthese von O-Methylderivaten von Azithromycin.
Gegenstände der vorliegenden Erfindung sind auch pharmazeutisch annehmbare Additionssalze von O-Methylderivaten des Azithromycins mit organischen und anorganischen Säuren, die Methoden und Zwischenverbindungen zu ihrer Herstellung sowie die Methoden der Herstellung und Verwendung von pharmazeutischen Zubereitungen.
Neue Zwischenverbindungen aus der Klasse der 9a-Azalide der allgemeinen Formel (I)
dadurch gekennzeichnet, dass
R¹ jeweils für L-Cladinosylgruppe der Formel (II)
steht, worin
R² jeweils für Silylgruppe steht,
R³ jeweils für Wasserstoff steht,
R⁴ jeweils für Wasserstoff oder -COO-(CH₂)_n-Ar-Gruppe steht, worin n 1-7 ist und Ar jeweils für eine nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppe mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht,
R⁵ jeweils für Wasserstoff, Methylgruppe oder -COO-(CH₂)_n-Ar-Gruppe steht, worin n 1-7 ist und Ar jeweils für eine nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppe mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht,
R⁶ jeweils für Hydroxylgruppe steht,
R⁷ jeweils für Wasserstoff, (C₁-C₁₂)-Alkylgruppe, Silylgruppe steht,
R⁸ jeweils für Wasserstoff, (C₁-C₁₂)-Alkylgruppe steht,
und ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren werden mittels folgender Schritte erhalten:
Schritt 1:
Azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht und R², R³, R⁴, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ Methyl ist und R⁶ Hydroxylgruppe ist, wird mit organischen Carbonsäurechloriden der Formel (III) ClCOO(CH₂)_n-Ar (III)worin n 1-7 ist und Ar jeweils für nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppe mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht, vorzugsweise mit Benzyloxycarbonylchlorid, in Anwesenheit von Basen, vorzugsweise von Natriumhydrogencarbonat, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, vorzugsweise in Benzol oder Toluol, umgesetzt, wobei 2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (Kobrehel G. et al., US 5,250,518 ; 5/1993) der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, welche Verbindung anschließend einer selektiven Silylierung der Hydroxylgruppen in

A/ 4''- und 11-Stellungen mit einem 2-5-äquimolaren Überschuß des Silylierungsmittels in einem organischen inerten Lösungsmittel bei einer Temperatur von 0-5°C während 5-8 Stunden unterworfen wird, wobei neues 4''-11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppe stehen, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, oder in
B/ 4''-Stellung mit einem 1,1-2-äquimolaren Überschuß des Silylierungsmittels in einem organischen inerten Lösungsmittel bei einer Temperatur von 0-5°C während 1 Stunde unterworfen wird, wobei neues 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ fr L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ für Hydroxylgruppe steht, erhalten wird.

Als Silylierungsmittel werden 1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisilazan, Trimethylsilylchlorid, Bis(trimethylsilyl)acetamid und ähnliche Mittel für Einführung der Trimethylsilylgruppe, vorzugsweise ein Gemisch von Trimethylsilylchlorid und Trimethylsilylimidazol verwendet. Als geeignetes Lösungsmittel werden Pyridin, Ethylacetat, N,N-Dimethylformamid, Methylenchlorid und ähnliches, vorzugsweise Pyridin verwendet.
Schritt 2:
Durch Umsetzung von 4''-11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin aus dem Schritt 1A/ bzw. 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin aus dem Schritt 1B/ mit 1,3 bis 10 Mol eines entsprechenden Alkylierungs-, vorzugsweise eines Methylierungsmittels, in Anwesenheit von 1,1 bis 8,5 Mol einer geeigneten Base, bei einer Temperatur von –15°C bis Raumtemperatur, vorzugsweise bei 0-5°C, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel kommt es

A/ zu einer selektiven Alkylierung, vorzugsweise Methylierung der C-12-Hydroxylgruppe, wobei neues 4''-11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppe stehen, R³ für Wasserstoff steht, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, oder
B/ zu einer Alkylierung, vorzugsweise Methylierung der C-11- oder C-12-Hydroxylgruppe, wobei ein Gemisch von neuen 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-11-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ für Hydroxylgruppe steht und R⁷ Methyl ist, und 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ für Hydroxylgruppe steht und R⁸ Methyl ist, erhalten wird,

Als geeignete Alkylierungsmittel werden (C₁-C₂₁)-Alkylhalogenide, vorzugsweise Methyljodid, Dimethylsulfat, Methylmethansulfonat oder Methyl-p-toluolsulfonat, vorzugsweise Methyljodid verwendet. Geeignete Basen sind Alkalimetallhydrid, (Lithiumhydrid, Natriumhydrid oder Kaliumhydrid), Alkalimetallhydroxid (Kaliumhydroxid oder Natriumhydroxid) oder Alkalimetallmethylamid (Lithiumamid, Natriumamid oder Kaliumamid), vorzugsweise Natriumhydrid. Geeignete reaktionsinerte Lösungsmittel sind Dimethylsulfoxid, N,N-Dimethylformamid, N,N-Dimethylacetamid oder Hexamethylphosphorsäuretriamid, vorzugsweise N,N-Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder ein Gemisch davon mit Tetrahydrofuran.
Schritt 3:
4''-11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-l2-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 2A/ oder das erhaltene Gemisch von 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-11-O-methyl-azithromycin und 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 2B/ unterwirft man einer Hydrogenolysereaktion gemäss der Methode von E.H. Flynn et al. (Journal of American Chemical Society, 77, 3104, 1950), um die Schutzgruppen in 2'- und 3'-Stellung zu entschützen, und anschließend einer Entsilylierung gemäss dem üblichen Verfahren in niedrigen Alkoholen, vorzugsweise Isopropanol, in Anwesenheit von Ameisensäure in

A/ 4''- und 11-Stellung im Schritt 2A, wobei 3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, oder in
B/ 4''-Stellung im Schritt 2B/, wobei ein Gemisch von 3'-N-Demethyl-11-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist, R⁷ Methyl ist, und 3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist, R⁸ Methyl ist, erhalten wird.

Die Hydrogenolyse wird in einer Lösung von niedrigeren Alkoholen, vorzugsweise Ethanol, in Anwesenheit des NaOAc/HOAc Puffers (pH 5), mit einem Katalysator wie Palladiumschwarz oder Palladium an der Kohle, bei einem Druck von 1 bis 20 Bar und bei Raumtemperatur durchgeführt.
Schritt 4:
3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 3A/ oder das erhaltene Gemisch von 3'-N-Demethyl-ll-O-methyl-azithromycin und 3'-N-Demethyl-l2-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 3B/ unterwirft man einer reduktiven 3'-N-Methylierung mit 1 – 3 Äquivalenten von Formaldehyd (37%) in Anwesenheit einer gleichen oder zweifachen Menge von Ameisensäure (98-100%) und eines Hydrierungskatalysators oder einer anderen Wasserstoffquelle, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel wie Halogenkohlenwasserstoffen, niedrigeren Alkoholen oder niedrigeren Ketonen, vorzugsweise Chloroform, bei Rückflusstemperatur der Reaktionsmischung, wobei – im Fall der Verbindung aus dem Schritt 3A/ – 12-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, oder – im Fall von Produkten aus dem Schritt 3B/ – ein Gemisch von 11-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, und 12-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), worin R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ und R⁸ die für 3'-N-Methylierung von Verbindungen aus dem Schritt 3A/ angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird.
Pharmazeutisch annehmbare Additionssalze, die ein weiterer Gegenstand der Erfindung sind, werden durch Umsetzung von neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) mit einer wenigstens äquimolaren Menge einer entsprechenden anorganischen oder organischen Säure wie Chlorwasserstoffsäure, Jodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Propionsäure, Trifluoressigsäure, Maleinsäure, Zitronensäure, Stearinsäure, Bernsteinsäure, Ethylbernsteinsäure, Methansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Laurylsulfonsäure und ähnlicher Säuren, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel erhalten. Die Additionssalze werden durch Filtration, falls sie im reaktionsinerten Lösungsmittel unlöslich sind, durch Ausfällen mit einem Nichtlösungsmittel oder durch Verdampfung des Lösungsmittels, am häufigsten durch Gefriertrocknung, isoliert.
Antibakterielle in vitro Wirksamkeit der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und ihrer pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren wurde an einer Reihe von Standardtestmikroorganismen im Mueller-Hinton-Medium (Difco-Laboratories, Detroit MI) durch die übliche Methode der zweifachen Verdünnung gemäss Empfehlung von NCCLS (The National Commitee for Clinical Laboratory Standards) bestimmt. Jeder Testmikroorganismus wurde auf Endinokulumgrösse von 5 × 10⁵ cfu/ml inokuliert und die Inkubation wurde auf anaerobische Weise bei 37°C während 18 Stunden durchgeführt. MIK im flüssigen Medium wurde als die niedrigste Konzentration des antibakteriellen Mittels, die ein sichtbares Wachstum in Mikroverdünnungsbehältern inhibierte, bestimmt. Kontrollorganismen wurden von ATCC (The American Type Culture Collection) erhalten. Alle Standards wurden mittels einer Standardprozedur identifiziert und bei – 70°C gelagert. Die Ergebnise von 12-O-Methyl-azithromycin auf Standardtestmikroorganismen und klinischen Isolaten im Vergleich zu Azithromycin werden in Tabelle 1 und Tabelle 2 dargestellt.
Durch Bestimmung der Konzentration von 12-O-Methyl-azithromycin im Serum nach einer einzelnen oralen Dosis von 20 mg/kg an einer Gruppe von 36 männlichen Ratten in Zeitintervalen von 0,25 bis 24 Stunden wurde gefunden, dass das neue Antibiotikum im Serum sehr schnell absorbiert wurde. Die Analyse von Peaks legte das Bestehen einer enterohepatischen Zirkulation nahe. Zwischen 0,5 und 1 Stunde fiel die Konzentration sehr schnell ab, wonach sie wiederholt anstieg. Die maximale Konzentration der Substanz wurde nach 2 Stunden erreicht (Cmax 248,8 ng/ml). Ein sekundäres Maximum wurde 4 Stunden nach Verabreichung erreicht. Die Halbwertzeit betrug 5,2 Stunden und totales AUC betrug 1993.4 h ng/ml.
Verfahren zur Herstellung der neuen 2,6-Hemiketale aus der Klasse von 9a-Azaliden wird durch nachfolgende Beispiele illustriert, jedoch in keiner Hinsicht eingeschränkt.
Herstellung 1
2'-O,3'-N-Bis(bezyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin A
Nach der Zugabe von NaHCO₃ (74,8 g, 0.890 Mol) zu einer Lösung von Azithromycin (17 g, 0,0227 Mol) in Toluol (170 ml) wurde die Reaktionsmischung unter Rühren auf Ruckflusstemperatur (80-85°C) erhitzt. Danach wurden zu der Reaktionssuspension innerhalb 1 Stunde unter Rühren 102 ml von 50% Benzyloxycarbonylchlorid (104,04 g, 0,305 Mol) in Toluol zugetropft. Die Reaktionsmischung wurde bei gleicher Temperatur weitere 2 Stunden gerührt und über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen. Nach der Filtration wurde der Niederschlag mit Toluol (85 ml) gewaschen und die Toluollösung wurde zweimal mit 0,25 N HCl (170 ml) und zweimal mit 1,5% wässeriger NaCl Lösung (170 ml) extrahiert. Zu Toluol wurde Wasser (340 ml) (pH 3,1) zugegeben, der pH der Reaktionsmischung wurde mit 6 N HCl auf 2,0 eingestellt, die Schichten wurden getrennt und die organische Schicht wurde noch dreimal mit Wasser (340 ml) extrahiert, wobei der pH von 2,0 aufrechterhalten wurde. Zu den vereinigten Wasserextrakten wurde CH₂Cl₂ (125m1) zugegeben, der pH wurde mit wässeriger NaOH-Lösung (20%) auf 10 eingestellt, die Schichten wurden getrennt und die wässerige Schicht wurde wieder mit CH₂Cl₂ (125ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über K₂CO₃ getrocknet, filtriert und bei vermindertem Druck eingedampft, wobei 16,5 g eines dicken Ölrückstands erhalten wurden, das gegebenenfalls mit Niederdruckchromatographie auf Silikagelsäule 60 (230-400 mesh ASTM) gereinigt wurde. Dazu wurde das Rohprodukt in CH₂Cl₂ (20 ml) gelöst und auf eine Silikagelsäule (50 g) unter Stickstoffdruck von 0,5 Bar angebracht. Um restliches Benzylchloroformiat und seine Zerfallprodukte zu entfernen, wurde CH₂Cl₂ (150 ml) durch der Säule geführt, wonach durch Verwendung des Lösungssystems Methylenchlorid-Methanol, 9:1 (200 ml) und Verdampfung von Fraktionen, die das chromatographisch homogene Titelprodukt enthielten, 11,53 g des TLC reinen 2'-O,3'-N-Bis-(benzyloxycarbonyl)-N-demethyl-azithromycins mit physikalischchemischen Konstanten, wie sie in US Patent 5,250,518 von 10/1993 beschrieben sind, erhalten wurden.
Beispiel 1
4'',11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin
Zu einer auf 0-5°C gekühlten Lösung von 2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (5,0 g, 0,005 Mol) in Pyridin (50 ml) wurden unter Stickstoffströmung Trimethylsilylimidazol (3,3 ml, 0,0226 Mol) und Trimethylsilylchlorid (3,0 ml, 0,0179 Mol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 6 Stunden bei gleicher Temperatur gerührt, n-Hexan (60 ml) und Wasser (100 ml) wurden zugegeben, die Schichten wurden getrennt und die organische Schicht wurde mit gesättigter NaHCO₃-Lösung (60 ml) und Wasser (60 ml) gewaschen. Nach der Trocknung über MgSO₄, Filtration und Verdampfung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck wurden 5,48 g eines weißen amorphen Niederschlags erhalten, der gegebenenfalls durch Niederdruckchromatographie auf Silikagelsäule unter Verwendung des Systems CH₂Cl₂-CH₃OH, 9:1, gereinigt wurde. Die Vereinigung und Verdampfung von chromatographisch homogenen Fraktionen ergab das Titelprodukt mit folgenden physikalisch-chemischen Konstanten:
(IR (KBr) cm^–1: 3524, 2969, 2692, 1754, 1732, 1708, 1498, 1456, 1382, 1335, 1252, 1168, 1116, 1060, 1005, 895, 841, 754, 696.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃;) δ: 7,32-7,23 (Ph), 5,12, 4,98 (CH₂-Ph), 4,85 (H-1''), 4,70 (H-1'), 4,65 (H-2'), 4,46 (H-3'), 4,26 (H-5''), 4,42 (H-3), 3,72 (H-5'), 3,66 (H-11), 3,49, 3,47 (H-5), 3,20 (H-4''), 3,32, 3,18 (3''-OCH₃), 2,83, 2,79 (3'-NCH₃), 2,78 (H-2), 2,64 (H-10), 2,35 (H-9a), 2,33 (H-2''a), 2,11 (9a-NCH₃), 1,94 (H-9b), 1,91 (H-8), 1,64 (H-14a), 1,94 (H-4), 1,50 (H-2''b), 1,50 (H-14b), 1,27, 1,25 (6-CH₃), 1,24 (5''-CH₃), 1,19 (5'-CH₃), 1,12 (3''-CH₃), 1,16 (12-CH₃), 1,26 (2-CH₃), 0,89 (10-CH₃), 0,95 (8-CH₃), 0,85 (14-CH₃), 1,02 (4-CH₃), 1,02 (4-CH₃), 0,16 (11-OSi(CH₃)₃, und 0,13 /4''-OSi(CH₃)₃/.
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 176,2 (C-1), 156,2, 156,4 (OCO), 154,5, 154,4 (NCO), 136,7-127,5 (Ph), 100,2 (C-1'), 97,3 (C-1''), 83,9 (C-5), 80,7 (C-4''), 75,0 (C-3), 75,0 (C-2'), 75,3 (C-6), 73,2 (C-3''), 69,4, 69,2, 67,1, 66,8 (CH₂-Ph), 64,8 (C-5''), 62,3 (C-10), 54,8 (C-3'), 49,4, 49,2 (3''-OCH₃), 46,2 (C-2), 38,5 (C-7), 39,4 (C-4), 34,2 (9a-NCH₃), 35,9, 35,6 (C-2''), 36,2, 36,1 (C-4'), 29,0 (3'-NCH₃), 25,6 (C-8), 27,8 (6-CH₃), 21,9 (3''-CH₃), 21,5 (8-CH₃), 20,7 (5'-CH₃), 23,4 (C-14), 18,4 (5''-CH₃), 16,0 (2-CH₃), 11,6 (14-CH₃), 9,6, 9,5 (4-CH₃), 8,3 (10-CH₃), 1,2 /11-OSi(CH₃)/₃ und 0,67 /4''-OSi(CH₃)₃/.
ES-MS 1147
Beispiel 2
3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin
Zu einer Lösung des Produktes aus Beispiel 1 (1,0 g, 0,0009 Mol) in N,N-Dimethylformamid (20 ml) wurden Methyljodid (0,43 ml, 0,0069 Mol) und 60% Natriumhydrid (0,23 g, 0,0058 Mol) schrittweise innerhalb 3 Stunden bei Raumtemperatur zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei der gleichen Temperatur weitere 30 Minuten gerührt, die Reaktion wurde durch Zugabe von Triethylamin (2 ml) unterbrochen, danach wurde es in eine Mischung von 10% wässriger NaHCO₃-Lösung (50 ml) und Wasser (50 ml) transferiert und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit gesättigter NaCl-Lösung und Wasser gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und bei vermindertem Druck eingedampft, wobei 0,93 g eines gelben Niederschlags erhalten wurden [Rf 0,832, Methylenchlorid-Methanol, 90:1; IR (KBr) cm^–1: 3516, 1752, 1732, 1705, 1456, 1382, 1336, 1253, 1169, 1116, 1062, 1004, 896, 840, 754, 696]. Das Produkt wurde in Ethanol (20 ml) gelöst, es wurden NaOAc/HOAc Puffer mit pH 5 (0,17 ml Essigsäure, 0,263 g Natriumacetat, 0,22 ml Ethanol und 1 ml Wasser) und Pd/C 10% (0,6 g) zugegeben und die Reaktionsmischung wurde unter Rühren 5 Stunden in einem Autoklav bei Wasserstoffdruck von 5 Bar hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat wurde bis zu einem dicken Sirup eingedampft und es wurden CH₂Cl₂ (10 ml) und Wasser (15 ml) zugegeben, der pH der Mischung wurde mit 2 N HCl auf 4 eingestellt, die Schichten wurden getrennt und, nach der Einstellung des pH auf 9,5 mit 20% NaOH, wurde die wässerige Schicht mit CH₂Cl₂ (3 × 10 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über K₂CO₃ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Niederschlag wurde in Isopropanol (10 ml) gelöst, Wasser (10 ml) und einige Tropfen von Ameisensäure wurden zugegeben und es wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, mit Isopropylacetat bei pH 9,5 extrahiert, was nach der Eindampfen bei vermindertem Druck 0,43 g des Titelproduktes mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten ergab:
IR (KBr) cm^–1: 3672, 3496, 2962, 1727, 1458, 1375, 1343, 1280, 1263, 1118, 1085, 1048, 1005, 998.
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 177,4 (C-1), 102,7 (C-1'), 95,5 (C-1''), 83,4 (C-5), 79,7 (C-12), 78,0 (C-3), 76,6 (C-11), 74,0 (C-13), 73,9 (C-6), 74,3 (C-2'), 73,0 (C-3''), 68,8 (C-9), 65,7 (C-5''), 60,1 (C-3'), 61,2 (C-10), 52,8 (12-OCH₃), 49,8 (3''-OCH₃), 45,5 (C-2), 41,5 (C-4), 33,1, 3'-NCH₃, 36,8 (9a-NCH₃), 35,1 (C-2''), 28,8 (C-4'), 27,0 (C-8).
EI-MS m/z 748.
Beispiel 3
12-O-Methyl-azithromycin
Zu einer Lösung von 3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus Beispiel 2 (0,43 g, 0,0006 Mol) in CHCl₃ (20 ml) wurden Formaldehyd (37%) (0,047 ml, 0,0006 Mol) und Ameisensäure (98-100%) (0,042 ml, 0,0011 Mol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 3 Stunden unter Rückfluss gerührt, auf Raumtemperatur abgekühlt, auf Wasser (20 ml) gegossen und nach der Einstellung des pH auf 4,0 wurden die Schichten getrennt und die wässerige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Zu der wässerigen Schicht wurde CHCl₃ zugegeben, der pH wurde auf 9,5 eingestellt (2N NaOH), die Schichten wurden getrennt und die wässerige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,5 wurden getrocknet (K₂CO₃) und eingedampft, wobei 0,38 g des Titelproduktes erhalten wurde, das gegebenenfalls durch Chromatographie auf Silikagelsäule unter Verwendung des Systems CH₂Cl₂-CH₃OH-konz. NH₄OH, 90:9:1 gereinigt wurde.
IR (KBr) cm^–1: 3499, 2972, 2940, 1736, 1633, 1460, 1381, 1259, 1168, 1110, 1059, 1082, 1054, 1013, 999.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 5,39 (H-13), 5,00 (H-1''), 4,43 (H-1'), 4,32 (H-3), 4,06 (H-5''), 3,68 (H-11), 3,65 (H-5), 3,51 (H-5'), 3,38 (12-OCH₃), 3,32 (3''-OCH₃), 3,24 (H-2'), 3,02 (H-4''), 2,73 (N-2), 2,69 (H-10), 2,49 (H-3'), 2,34 (H-2''a), 2,31 (H-9a), 2,29 /3'N(CH₃)₂/, 2,30 (9a-NCH₃), 2,12 (H-9b), 2,04 (H-4), 2,01 (H-8), 1,73 (H-14a), 1,68 (H-4'a), 1,66 (H-7a), 1,56 (H-2''b), 1,52 (H-14b), 1,36 (H-7b), 1,29 (6-CH₃), 1,21 (2-CH₃), 1,30 (5''-CH₃), 1,24 (H-4'b), 1,23 (3''-CH₃), 1,22 (5'-CH₃), 1,09 (12-CH₃), 1,29 (4-CH₃), 1,09 (10-CH₃), 0,92 (8-CH₃), 0,93 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ 177,5 (C-1), 103,1 (C-1'), 95,2 (C-1''), 83,6 (C-5), 79,2 (C-12), 78,1 (C-3), 76,6 (C-11), 74,7 (C-13), 73,8 (C-6), 70,9 (C-2'), 68,8 (C-9), 65,6 (C-5''), 65,7 (C-3'), 61,6 (C-10), 52,8 (12-OCH₃), 49,4 (3''-OCH₃), 45,1 (C-2), 43,0 (C-7), 41,8 (C-4), 40,4 /3'N(CH₃)₂/, 36,8 (9a-NCH₃), 35,0 (C-2''), 29,0 (C-4'), 26,9 (C-8), 26,9 (6-CH₃), 22,0 (8-CH₃), 22,0 (C-14), 21,6 (3''-CH₃), 21,3 (5'-CH₃), 18,1 (5''-CH₃), 16,9 (12-CH₃), 14,6 (2-CH₃), 11,0 (14-CH₃), 9,6 (4-CH₃), 9,4 (10-CH₃).
Beispiel 4
4''-O-Trimethylsilyl-2'-O-3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin
Zu einer auf 0-5°C gekühlten Lösung von 2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (5 g, 0,005 Mol) in Pyridin (30 ml) wurden Trimethylsilylimidazol (1,46 ml, 0,01 Mol) und Trimethylsilylchlorid (1,64 ml, 0,01 Mol) unter Stickstoffströmung zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 1 Stunde bei der gleichen Temperatur gerührt, es wurden n-Hexan (50 ml) und Wasser (25 ml) zugegeben, die Schichten wurden getrennt und die organische Schicht wurde mit gesättigter NaHCO₃-Lösung (25 ml) und Wasser (25 ml) gewaschen. Nach der Trocknung über MgSO₄, Filtration und Verdampfung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck wurde eine amorpher Niederschlag (3,65 g) erhalten, der gegebenenfalls mittels Niederdruckchromatographie auf Silikagelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5, gereinigt wurde. Durch Vereinigung und Eindampfiang der chromatagraphisch homogenen Fraktionen mit Rf 0,670 wurde das Titelprodukt mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten erhalten:
IR (KBr) cm^–1: 3502, 2969, 2938, 1753, 1732, 1708, 1454, 1383, 1365, 1254, 1169, 1118, 1063, 1001, 897, 839, 754, 696.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7,34-7,26 (Ph), 5,13, 5,09, (CH₂-Ph), 5,07 (H-1''), 4,78 (H-1'), 4,68 (H-13), 4,66 (N-2'), 4,55 (H-3'), 4,22 (H-5''), 4,13 (H-3), 3,96 (H-5'), 3,65 (H-11), 3,58, 3,54 (H-5), 3,15 (H-4''), 3,37, 2,99 (3''-OCH₃), 2,85, 2,81 (3'-NCH₃), 2,70 (H-2), 2,68 (H-10), 2,54 (H-9a), 2,35 (H-2''a), 2,31 (9a-NCH₃), 2,04 (H-9b), 1,97 (H-8), 1,90 (H-14a), 1,85 (H-4), 1,62 (H-7a), 1,50 (H-2''b), 1,44 (H-14b), 1,28, 1,27 (6-CH₃), 1,23 (5''-CH₃), 1,16 (5'-CH₃), 1,15 (H-7b), 1,04 (3''-CH₃), 1,15 (12-CH₃), 1,10 (2-CH₃), 1,10 (10-CH₃), 0,92 (8-CH₃), 0,89 (14-CH₃), 1,10 (4-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 178,8 (C-1), 156,6, 156,3 (OCO), 154,7, 154,6 (NCO), 136,8-127-5 (Ph), 99,2 (C-1'), 94,8 (C-1'''), 83,2, 83,1 (C-5), 80,5, 80,4 (C-4''), 77,3 (C-3), 75,1, 75,0 (C-2'), 74,1 (C-12), 73,8 (C-11), 73,2 (C-6), 73,2 (C-3''), 69,2, 69,0, 67,2, 66,8 (CH₂-Ph), 64,8 (C-5''), 62,2 (C-10), 54,6 (C-3'), 49,3, 48,8 (3''-OCH₃), 44,7 (C-2), 41,5 (C-7), 41,1 (C-4), 36,1 (9a-NCH₃), 35,1, 35,0 (C-2''), 36,3, 35,7 (C-4'), 28,4 (3'-NCH₃), 26,3 (C-8), 26,8 (6-CH₃), 22,1 (3''-CH₃), 21,6 (8-CH₃), 21,4 (5'-CH₃), 21,0 (C-14), 18,7 (5''-CH₃), 15,9 (2-CH₃), 14,5 (12-CH₃), 11,0 (14-CH₃), 8,5 (4-CH₃), 7,1 (10-CH₃), 0,63/4''-OSi(CH₃)₃/.
ES-MS 1075.
Beispiel 5
11-O-Methyl-azithromycin and 12-O-Methyl-azithromycin
Zu einer Lösung des Produktes aus Beispiel 4 (3,0 g, 0,0028 Mol) in N,N-Dimethylformamid (50 ml) wurden Methyljodid (1,29 ml, 0,0207 Mol) und 60% Natriumydrid (0,69 g, 0,0174 Mol) schrittweise über 3 Stunden bei Raumtemperatur zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei der gleichen Temperatur gerührt, die Reaktion wurde durch Zugabe von Triethylamin (5 ml) unterbrochen, danach wurde es in eine Mischung von 10% wässeriger NaHCO₃-Lösung (100 ml) und Wasser (100 ml) transferiert und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit gesättigter NaCl-Lösung und Wasser gewaschen und über MgSO₄ getrocknet, filtriert und bei vermindertem Druck eingedampft, wobei 2,9 g einer Produktmischung erhalten wurden, die gegebenenfalls mittels Niederdruckchromatographie auf einer Silikagelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol, 90:1 gereinigt wurde, wobei chromatographisch homogenes 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O-3'-N-bis(benzyloxy-carbonyl)-3'-N-demethyl-11-O-methyl-azithromycin mit Rf 0,745 [IR (KBr): 3452, 2969, 1752, 1736, 1706, 1455, 1382, 1332, 1254, 1169, 1117, 1063, 1002, 914, 897, 840, 754, 697] und 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O-3'-N-bis(benzyloxy-carbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin mit Rf 0,485 [IR (KBr): 3450, 2958, 1754, 1718, 1708, 1458, 1383, 1252, 1168, 1068, 1010, 896, 842, 753, 695] erhalten wurden.
Die erhaltene Mischung wurde in Ethanol (50 ml) gelöst, es wurden NaOAc/HOAc Puffer mit pH 5 (0,51 ml HOAc, 0,789 g NaOAc, 0,66 ml Ethanol und 3 ml Wasser) und 10% Pd/C (1,5 g) zugegeben und die Mischung wurde unter Rühren 8 Stunden in einem Autoklav bei Wasserstoffdruck von 5 Bar hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat wurde zu einem dicken Sirup eingedampft, es wurden Wasser (50 ml) und CHCl₃ (50 ml) zugegeben und das Produkt wurde mittels pH-Gradient-Extraktion bei pH 4,0 und 9,5 isoliert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,5 wurden über K₂CO₃ getrocknet und bis zu einem amorphen Niederschlag eingedampft. Der Niederschlag wurde in Isopropanol (20 ml) gelöst, Wasser (20 ml) und einige Tropfen von Ameisensäure wurden zugegeben und es wurde weitere 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, mit Isopropylacetat bei pH 9,5 extrahiert, über Natriumsulfat getrocknet und bei vermindertem Druck eingedampft. Das erhaltene Produkt wurde in CHCl₃ (50 ml) gelöst, es wurden Formaldehyd (37%) (0,24 ml) und Ameisensäure (98-100%) (0,22 ml) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 3 Stunden unter Rückfluss gerührt, auf Raumtemperatur abgekühlt, auf Wasser (20 ml) gegossen und nach der Einstellung von pH auf 4,0 wurden die Schichten getrennt und die wässerige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Zu der wässerigen Schicht wurde CHCl₃ zugegeben, pH wurde auf 9,5 (2 N NaOH) eingestellt, die Schichten wurden getrennt und die wässerige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,5 wurden getrocknet (K₂CO₃) und eingedampft, wobei 1,25 g eines Niederschlags erhalten wurden, der auf Silikagelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:1 chromatographiert wurde, wobei 0,40 g chromatographisch homogenes 11-O-Methyl-azithromycin mit physikalisch-chemischen Konstanten wie im US Patent 5,250,518 vom 10/1993 und 0,52 g 12-O-Methyl-azithromycin mit physikalisch-chemischen Konstanten wie in Beispiel 3 erhalten wurden.

Claims

Verbindung der allgemeinen Formel (I)
dadurch gekennzeichnet, dass R¹ jeweils für L-Cladinosylgruppe der Formel (II)
steht, worin R² jeweils für Silylgruppe steht, R³ jeweils für Wasserstoff steht, R⁴ jeweils für Wasserstoff oder -COO-(CH₂)_n-Ar-Gruppe steht, worin n 1-7 ist und Ar jeweils für eine nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppe mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht, R⁵ jeweils für Wasserstoff, Methylgruppe oder -COO-(CH₂)_n-Ar-Gruppe steht, worin n 1-7 ist und Ar jeweils für eine nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppe mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht, R⁶ jeweils für Hydroxylgruppe steht, R⁷ jeweils für Wasserstoff, (C₁-C₁₂)-Alkylgruppe, Silylgruppe steht, R⁸ jeweils für Wasserstoff, (C₁-C₁₂)-Alkylgruppe steht, und ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren.
Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für L-Cladinosylgruppe steht und R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppe stehen, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für L-Cladinosylgruppe steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für L-Cladinosylgruppe steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppe stehen, R³ für Wasserstoff steht, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für L-Cladinosylgruppe steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ für Hydroxylgruppe steht und R⁷ Methyl ist.
Verbindung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für L-Cladinosylgruppe steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist.
Verfahren zur Herstellung von 12-O-Methylazithromycin und/oder 11-O-Methylazithromycin und ihren pharmazeutisch annehmbaren Additionssalzen mit anorganischen oder organischen Säuren, dadurch gekennzeichnet, dass Azithromycin der Formel (I)
worin R¹ jeweils für L-Cladinosylgruppe der Formel (II)
steht, und R², R³, R⁴, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ Methyl ist und R⁶ Hydroxylgruppe ist, einer Umsetzung mit organischen Carbonsäurechloriden der Formel (III) ClCOO(CH₂)_n-Ar (III)worin n 1-7 ist und Ar jeweils für nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppe mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht, vorzugsweise mit Benzyloxycarbonylchlorid, in Anwesenheit von Basen, vorzugsweise von Natriumhydrogencarbonat, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, vorzugsweise in Benzol oder Toluol, unterworfen wird, wobei eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, welche Verbindung anschließend einer selektiven Silylierung der Hydroxylgruppen in A/ 4''- und 11-Stellungen mit einem 2-5-äquimolaren Überschuß des Silylierungsmittels, vorzugsweise mit einem Gemisch von Trimethylsilylchlorid und Trimethylsilylimidazol, in einem organischen inerten Lösungsmittel wie Pyridin, Ethylacetat, NN-Dimethylformamid oder Methylenchlorid, vorzugsweise in Pyridin, bei einer Temperatur von 0-5°C während 5-8 Stunden unterworfen wird, wobei eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppe stehen, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, oder in B/ 4''-Stellung mit einem 1,1-2-äquimolaren Überschuß des Silylierungsmittels in einem organischen inerten Lösungsmittel, vorzugsweise in Pyridin, bei einer Temperatur von 0-5°C während 1 Stunde unterworfen wird, wobei eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen und R⁶ für Hydroxylgruppe steht, erhalten wird, welche Verbindungen anschließend einer O-Alkylierung mit einem 1,3- bis 10-molaren Überschuß eines entsprechenden Alkylierungsmittels, vorzugsweise eines Methylierungsmittels, vorzugsweise Methyljodid, in Anwesenheit von 1,1 – 8,5 Mol einer geeigneter Base wie Alkalimetallhydriden, vorzugsweise Natriumhydrid, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel wie Dimethylsulfoxid, Tetrahydrofuran, N,N-Dimethylformamid oder einem Gemisch davon, bei einer Temperatur von –15°C bis Raumtemperatur, vorzugsweise bei 0-5°C, unterworfen werden, wobei im Fall von A/ eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppe stehen, R³ für Wasserstoff steht, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, oder im Fall von B/ ein Gemisch einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ für Hydroxylgruppe steht und R⁷ Methyl ist, und einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppe stehen, R⁶ für Hydroxylgruppe steht und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, welche anschließend der Entschützung von Schutzgruppen in 2'- und 3'-Stellungen in einer Lösung von niedrigen Alkoholen, vorzugsweise Ethanol, in Anwesenheit des NaOAc/HOAc Puffer (pH 5) und eines Katalysators in Wasserstoffatmosphäre bei einem Druck von 1-20 Bar und dann, nach der Isolierung, einer Entsilylierung in 4''- und 11-Stellungen in niedrigen Alkoholen, vorzugsweise Isopropanol, in Anwesenheit von Ameisensäure unterworfen werden, wobei im Fall von A/ eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, oder im Fall von B/ ein Gemisch einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ für Hydroxylgruppe steht und R⁷ Methyl ist, und einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁷ und R⁸ die für die Entschützung im Fall von A/ angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird, welche anschließend einer reduktiven 3'-N-Methylierung mit 1–3 Äquivalenten von Formaldehyd (37 %) in Anwesenheit einer gleichen oder zweifachen Menge von Ameisensäure (98-100 %) und eines Hydrierungskatalysators oder einer anderen Wasserstoffquelle, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, vorzugsweise Chloroform, bei erhöhter Temperatur, vorzugsweise bei Rückflusstemperatur, unterworfen werden, wobei im Fall von A/ eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, oder im Fall von B/ ein Gemisch einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ Hydroxylgruppe ist, und einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁷ und R⁸ die für 3'-N-Methylierung im Fall von A/ angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird, das dann gegebenenfalls einer Trennung auf einer Silikagelsäule unterworfen wird, wobei eine chromatographisch homogene Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹ für L-Cladinosylgruppe steht, R², R³, R⁴ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ für Hydroxylgruppe steht (11-O-Methylazithromycin), und eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), worin R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ und R⁸ die für 3'-N-Methylierung im Fall von A/ angegebenen Bedeutungen haben (12-O-Methylazithromycin), erhalten werden.
Pharmazeutische Zubereitung, anwendbar bei der Behandlung von bakteriellen Infektionen bei Menschen und Tieren, die antibakteriell wirksame Mengen der Verbindung der allgemeinen Formel (I) oder deren pharmazeutisch annehmbarer Additionssalze gemäß Anspruch 1 in einer Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.