DE69812887T2

DE69812887T2 - Mikropartikel aus chitosan-gelatin a

Info

Publication number: DE69812887T2
Application number: DE69812887T
Authority: DE
Inventors: Lisbeth Illum; James Watts
Original assignee: West Pharmaceutical Services Drug Delivery and Clinical Research Center Ltd
Current assignee: Kyowa Kirin Services Ltd
Priority date: 1997-01-14
Filing date: 1998-01-14
Publication date: 2003-12-18
Anticipated expiration: 2018-01-15
Also published as: ES2200306T3; ZA98273B; EP0952822A1; CA2275717A1; US6465626B1; NO993195L; GB2335357A; GB9700624D0; DK0952822T3; AU725460B2; PT952822E; GB9916018D0; WO1998030207A1; CA2275717C; EP0952822B1; GB2335357B; NO993195D0; DE69812887D1; ATE235889T1; JP2001508061A

Description

Die Erfindung betrifft neue Medikamenten-Abgabe-Zusammensetzungen, die für eine verbesserte Aufnahme von therapeutischen Wirkstoffe durch Schleimhautoberflächen hindurch sorgen.
Polare Medikamente, die ein hohes Molekulargewicht besitzende Peptide, Proteine und Polysaccharide umfassen, werden typischerweise über Schleimhautmembranen, wie z. B. den Magendarmtrakt, das Auge, die Vagina, den Nasenhohlraum oder das Rektum nicht effektiv absorbiert. Solche Moleküle werden daher normalerweise nur durch Injektionen verabreicht, was unvermeidlich zu den allgemein bekannten Problemen führt, die mit der Akzeptanz durch den Patienten, den Behandlungskosten sowie den möglicherweise betastenden Effekten wie z. B. Venenentzündungen und Schmerzen bei der Injektion verbunden sind.
Es ist aus der Literatur allgemein bekannt, daß die Absorption von polaren Molekülen durch Schleimhautmembranen stark verbessert werden kann, wenn sie in Verbindung mit sogenannten "Absorptionsverstärkern" verabreicht werden. Beispiele für Absorptionsverstärker, die in der Literatur beschrieben worden sind, umfassen nichtionische oberflächenaktive Stoffe, Zyclodextrine, Phospholipide und Bile-Salze. (Für eine Übersicht siehe Davis et al. (Herausgeber), Delivery Systems for Peptide Drugs, Plenum Press, New York, 1987 und Lee (Herausgeber) Peptide and Protein Delivery, Marcel Dekker Inc., New York, 1991)
Die Druckschriften EP-A-023 359 und EP-A-122 023 beschreiben pulverförmige pharmazeutische Zusammensetzungen zur Anwendung auf die Nasenschleimhaut sowie Verfahren zur Verabreichung solcher Zusammensetzungen. Diese pharmazeutischen Zusammensetzungen ermöglichen es, daß Polypeptide und Derivate hiervon in wirksamer Weise durch die Nasenschleimhaut absorbiert werden. In ähnlicher Weise beschreibt das US-Patent 4,226,849 ein Verfahren zum Verabreichen eines pulverförmigen Medikaments an die Nasenschleimhaut, bei dem die bevorzugte Zusammensetzung schleimhautadhesive Eigenschaften besitzt.
Zubereitungen, die für eine Schleimhautverabreichung auf Mikrokügelchen basieren, wurden in WO 88/09163 beschrieben. Die Zubereitungen enthalten bestimmte Verstärker, um ein wirksames Durchdringen der Schleimhaut durch das Medikament zu unterstützen. WO 89/03207 beschreibt Mikrokügelchen-Zubereitungen, die keinen Verstärker benötigen.
Chitosan ist ein Derivat von Chitin oder Poly-N-Acetyl-D-Glucosamin, bei dem der größere Anteil der N-Acetyl-Gruppen durch Hydrolyse entfernt worden ist. Es steht von mehreren Lieferanten zur Verfügung, zu denen Pronova, Drammen, Norwegen gehört und ist, in Abhängigkeit von der ausgewählten Sorte in Wasser und/oder wäßriger Säure bis zu pH-Werten zwischen 6,0 und 7,0 löslich.
Chitosan wurde bisher verwendet, um proteinhaltiges Material auszufällen und chirurgische Nähte auszuführen. Es wurde auch bereits für orale Medikamenten-Zubereitungen verwendet, um die Lösung von schlecht löslichen Medikamenten zu verbessern (siehe Sawayanagi et al., Chem. Pharm. Bull., 31 (1983), 2062-2068), sowie für die über längere Zeit aufrechtzuerhaltende Freisetzung von Medikamenten durch einen Prozeß der langsamen Erosion aus einer hydrierten, komprimierten Matrix (Nagai et al., Proc. Jt. US Jpn. Semin. Adv. Chitin Chitosan Relat. Enzymes, 21-39, Zikakis J. P. (Herausgeber), Academic Press, Orlando, 1984).
Das Dokument WO 90/09780 beschreibt eine Zusammensetzung, die ein Medikament und eine polykationische Substanz (z. B. Chitosan) umfaßt, welche den Transport des Medikaments durch Schleimhautmembranen hindurch fördert. Die Zusammensetzung kann auch Mikrokügelchen der polykationischen Substanz umfassen.
WO 96/05810 beschreibt eine Zusammensetzung, die eine pharmakologisch wirksame Verbindung und Teilchen, vorzugsweise Pulver oder Mikrokügelchen aus Chitosan oder einem Chitosan-Derivat oder -Salz umfaßt, wobei die Teilchen entweder verfestigt oder teilweise quervernetzt sind, so daß sie ein Zeta-Potential zwischen +0,5 und +50 mV besitzen. Verfestigte Teilchen werden dadurch hergestellt, daß Teilchen, die aus einem wasserlöslichen Chitosan-Salz hergestellt wurden, mit einem alkalinen Wirkstoff, wie z. B. Natriumhydroxid in säurefreiem Wasser behandelt werden, um sie unlöslich zu machen.
Chitosan-Mikrokügelchen wurden auch für die Verwendung bei der verstärkten chromatographischen Trennung erzeugt (Li Q. et al., Biomater. Artif. Cells Immobilization Biotechnology, 21, (1993), 391-398), sowie für die örtliche Abgabe von Medikamenten (Machida Y., Yakugaku Zasshl., 113, (1993), 356-368), für die zielgerichtete Einwirkung nach einer Injektion (Ohya Y et al., J. Microencap., 10, (1993), 1-9) als implantierbares Abgabesystem für eine kontrollierte Freisetzung (Jameela und Jayakrishnan, Biomatenals, 16, (1995), 769-775), sowie für die kontrollierte Freisetzung von Medikamenten (siehe Bodmeier R. etai., Pharm. Res., 6, (1989), 413-417 und Chithambara et al., J. Pharm. Pharmacol., 44, (1992), 283-286).
Die Druckschriften EP 454 044 und EP 486 959 beschreiben Polyelektrolyt-Mikroteilchen oder Polysaccharid-Mikrokügelchen, einschließlich Chitosan-Mikrokügelchen zur Verwendung bei der kontrollierten Freisetzung von Medikamenten. Chitosan-Mikrokügelchen, die mit Glutaraldehyd quervernetzt sind, wurden auch in der Druckschrift JP 539149 beschrieben.
Gelatine ist ein gereinigtes Protein, das entweder durch teilweise Säurehydrolyse (Typ A) oder durch teilweise alkaline Hydrolyse (Typ B) von tierischem Collagen gewonnen wird. Gelatine vom Typ A ist kationisch mit einem isoelektrischen Punkt zwischen den pH-Werten 7 und 9, während Gelatine vom Typ B anionisch ist, mit einem isoelektrischen Punkt zwischen den pH-Werten 4,7 und 5. Es ist bekannt, daß Gelatine aufquillt und weich wird, wenn sie in kaltes Wasser eingetaucht wird, wobei sie schließlich das fünf- bis zehnfache ihres eigenen Gewichts an Wasser absorbiert. Sie ist in heißem Wasser löslich und bildet beim Abkühlen ein Gel. Gelatine wird bei Operationen als blutstillendes Mittel und als absorbierbarer Film oder Schwamm verwendet, der ein Vielfaches seines eigenen Gewichts an Blut absorbieren kann. Es wird auch als Plasmaersatz eingesetzt und kann bei der Zubereitung von Salben, Pastillen, Zäpfchen, Tabletten und harten und weichen Kapselhüllen für oral zu verabreichende Zubereitungen verwendet werden.
Die Herstellung von Gelatine-Mikrokügelchen wird in der Literatur vielfach beschrieben. Gelatine-Mikrokügelchen wurden durch ein Emulgierungsverfahren einschließlich der Quervernetzung mit Glutaraldehyd hergestellt, wobei Mikrokügelchen von weniger als 2 um Durchmesser erzeugt wurden (Tabata und Ikada, Pharm. Res., 6, (1989), 422-427). Cortesi et al. (Int. J. Pharm., 105, (1994), 181-1'86), Natruzzi et al. (J. Microencapsulation, 11, (1994), 294-260) und Esposito et al. (Int. J. Pharm., 117, (1995), 15·1-158) haben die Herstellung von Mikrokügelchen mit einem mittleren Durchmesser von 22 um unter Verwendung eines Koazervierungs-Emulgierungs-Verfahrens berichtet. Mikrokügelchen, die durch dieses Verfahren hergestellt worden waren, waren nicht quervernetzt. Mikrokügelchen mit kleinerer Größe wurden gemäß einem ähnlichen Verfahren durch Esposito et al. hergestellt (Pharm. Sci. Commun., 4, (1994), 239-246). Der Typ der Gelatine (A oder B), der bei diesen Untersuchungen verwendet wurde, war nicht spezifiziert.
Die Herstellung von Mikrokügelchen durch Komplexation zwischen einem negativ geladenen Material wie z. B. Alginat und einem positiv geladenen Chitosan wurde in der Literatur beschrieben. Beispielsweise beschreiben Polk et al. (in J. Pharm. Sci., 83, (1994), 178-185) die Herstellung von Chitosan-Alginat-Mikrokügelchen durch das Hinzufügen einer Alginat-Lösung zu einer Lösung von Chitosan und Kalziumionen. Die höchste Chitosan-Konzentration, die bei den Mikrokügelchen-Zubereitungen verwendet wurde, betrug 5,2% (Gew./Gew.). In ähnlicher Weise wurde die Zubereitung von Komplexkoazervaten zwischen entgegengesetzt geladenen Polyionen, nämlich einem positiv geladenem Chitosan und einer negativ geladenen Gelatine vom Typ B von Remunan-Lopez und Bodmeier beschrieben (Int. J. Pharm., 135, (1996), 63-72). Diese Forscher fanden, daß das optimale Verhältnis von Chitosan zu Gelatine im Bereich 1 : 10 bis 1 : 20 lag. Das Koazervat wurde in trockener Form durch Dekantieren des Überstandes nach einer Zentrifugation und Trocknung bei 60ºC erhalten.
Es wurde nun überraschender Weise gefunden, daß Mikroteilchen, die aus einer Kombination eines Chitosans und einer kationischen Gelatine vom Typ A hergestellt werden, speziell vorteilhafte Eigenschaften besitzen, die den verbesserten Transport von therapeutischen Wirkstoffen einschließlich polarer Medikamente durch Schleimhautoberflächen hindurch, wie z. B. im Nasenhohlraum ermöglichen.
Somit wird gemäß einem ersten Gesichtspunkt der Erfindung eine Zusammensetzung geschaffen, die eine Mischung aus Chitosan und einer kationischen Gelatine vom Typ A zusammen mit einem therapeutischen Wirkstoff umfaßt (die im folgenden als "die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung" bezeichnet werden).
Unter dem Begriff "Mischung von Chitosan und einer Gelatine vom Typ A" verstehen wir jegliche Zusammensetzung, die ein Chitosan, wie es im folgenden definiert wird, und Gelatine vom Typ A, wie sie im folgenden definiert wird, umfaßt, gleichgültig, ob eine physikalische und/oder chemische Assoziation zwischen diesen beiden Bestandteilen vorhanden ist oder nicht.
Dem Fachmann ist klar, daß der Ausdruck "Chitosan" alle Derivate von Chitin oder Poly- N-Acetyl-D-Glucosamin (einschließlich aller Polyglucosamine und Oligomere von Glucosamin-Materialien mit unterschiedlichen Molekulargewichten) umfaßt, bei denen der größere Teil der N-Acetyl-Gruppen durch Hydrolyse entfernt worden ist. Es wird bevorzugt, daß das Chitosan eine positive Ladung trägt.
Es können Chitosan, Chitosan-Derivate oder -Salze (z. B. Nitrat-, Phosphat-, Sulfat-, Hydrochlorid-, Glutamat-, Lactat- oder Acetat-Salze) des Chitosans verwendet werden. Der Ausdruck Chitosan-Derivate wird so verwendet, daß er Ester-, Äther- oder andere Derivate umfaßt, die dadurch gebildet wurden, daß Acyl- und/oder Alkyl-Gruppen an die OH-Gruppen aber nicht an die IVH&sub2;-Gruppen des Chitosans gebunden wurden. Beispiele sind O-Alkyl-Äther von Chitosan und O-Acyl-Ester von Chitosan. Modifizierte Chitosane, insbesondere solche, die zu Polyethylenglycol konjugiert sind, werden von dieser Definition mit umfaßt. Chitosane mit geringer und mittlerer Viskosität (beispielsweise CL113, G210 und CL110) können von verschiedenen Lieferanten bezogen werden, zu denen Pronova Biopolymer, Ltd., Großbritannien; Seigagaku America Inc., MD; USA; Meron (India) Pvt., Ltd., Indien; Vanson Ltd, VA, USA und AMS Biotechnology Ltd., Großbritannien gehören. Geeignete Derivate umfassen solche, die von Roberts in Chitin Chemistry, MacMillan Press Ltd., London (1992) beschrieben werden.
Das verwendete Chitosan oder Chitosan-Derivat oder Chitosan-Salz besitzt vorzugsweise ein Molekulargewicht von 4.000 Dalton oder mehr, vorzugsweise im Bereich von 25.000 bis 2.000.000 Dalton und in besonders bevorzugter Weise ungefähr 50.000 bis 300.000 Dalton. Chitosane mit unterschiedlichen niedrigen Molekulargewichten können durch enzymatischen Abbau von Chitosan unter Verwendung von Chitosanase oder durch das Hinzufügen von salpetriger Säure zubereitet werden. Beide Verfahren sind dem Fachmann wohl bekannt und werden in jüngeren Veröffentlichungen beschrieben (Li et al., (1995), Plant Physiol. Biochem., 33, 599-603; Allan und Peyron, (1995), Carbohydrate Research, 277, 257-272; Damard und Cartier, (1989), Int. J. Biol. Macromol., 11, 297-302).
Vorzugsweise ist das Chitosan wasserlöslich und kann aus Chitin durch Deacetylierung zu einem Grad von mehr als 40 "/º, vorzugsweise zwischen 50% und 98% und in besonders bevorzugter Weise zwischen 70% und 90% hergestellt werden. Speziell deacetylierte Chitosane, die erwähnt werden können, umfassen die "Sea Cure®"-Serie von Chitosan-Glutamaten, die von Protan Biopolymer A/S, Drammen, Norwegen geliefert wird.
Der Ausdruck "Gelatine vom Typ A" umfaßt alle kationischen Proteine, die durch eine teilweise Säure-Hydrolyse von tierischem Collagen erhalten werden oder erhalten werden können und. umfaßt nicht Gelatinen vom Typ B.
Obwohl die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung in einer Vielzahl physikalischer Formen unter Verwendung von Vorgehensweisen zubereitet werden können, die dem Fachmann wohl bekannt sind, wird bevorzugt, daß die Zusammensetzungen in der Form von Mikroteilchen vorliegen. Der Ausdruck "Mikroteilchen" umfaßt Mikrokügelchen, Mikrokapseln und Pulver. Es wird jedoch bevorzugt, daß es sich bei den Mikroteilchert um Mikrokügelchen handelt.
Es wurde überraschender Weise gefunden, daß dann, wenn die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung in der Form von Mikroteilchen vorgesehen werden, diese Mikroteilchen eine positive Ladung beibehalten und für den verbesserten Transport von polaren Medikamenten durch oder für die verbesserte Darbietung von Impfstoffen an Schleimhautoberflächen, wie z. B. im Nasenhohlraum in einem solchen Ausmaß sorgen können, daß der Effekt stärker ist als der, der bei einer Chitosanlösung oder bei Mikroteilchen, die aus Chitosan alleine oder Gelatine vom Typ A alleine hergestellt werden (beispielsweise lösliche (sprühgetrocknete) Chitosan-Mikrokügelchen und Gelatine-Mikrokügelchen). Der Effekt ist auch ähnlich demjenigen, der für speziell aldehyhd-quervernetzte Chitosan-Mikrokügelchen erzielt wird, doch sind die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung ausreichend hart bzw. fest, so daß sie keine Vernetzung erfordern. Es wurde weiterhin gefunden, daß die Strömungseigenschaften der Mikroteilchen aus Chitosan und Gelatine vom Typ A besser sind als diejenigen von gesprühgetrockneten Chitosan-Mikrokügelchen und quervernetzten Chitosan-Mikrokügelchen.
Die Mikroteilchen können durch Sprühtrocknung, Emulgierung, Lösemittelverdampfung, Ausfällung oder andere Verfahren zubereitet werden, die dem Fachmann bekannt sind. Der therapeutische Wirkstoff kann in die Mikroteilchen während ihrer Herstellung eingebaut oder an den Mikroteilchen nach ihrer Herstellung adsorbiert werden.
Wenn die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung die Form von Mikrokügelchen besitzen, können sie beispielsweise unter Verwendung eines Emulgier- oder Sprühtrocknungs-Verfahrens zubereitet werden.
Wenn die Mikrokügelchen durch Sprühtrocknung zubereitet werden, wird eine warme Mischung von Chitosan und Gelatine vom Typ A mit augenblicklicher Abkühlung der sich ergebenden Mikrokügelchen sprühgetrocknet. Der therapeutische Wirkstoff kann durch Adsorption an die Oberfläche der Mikrokügelchen, durch Gefriertrocknung oder Sprühtrocknung einer Suspension der Mikrokügelchen mit dem therapeutischen Wirkstoff oder dadurch aufgenommen werden, daß die getrockneten Mikrokügelchen mit dem therapeutischen Wirkstoff physikalisch oder mechanisch gemischt werden.
Es wurde jedoch gefunden, daß die Mikrokügelchen vorteilhafter Weise dadurch zubereitet werden können, daß eine Lösung von mit Gelatine vom Typ A gemischtem Chitosan erwärmt, dann emulgiert und durch Abkühlung geliert wird. Es wurde gefunden, daß insbesondere Mikrokügelchen, die gemäß diesem Verfahren zubereitet werden, die zuvor erläuterten vorteilhaften Eigenschaften besitzen.
Bei dem Emulgierungsverfahren kann das Chitosan in Wasser gelöst und unter Erwärmen auf 40ºC mit der Gelatine vom Typ A gemischt werden, was bewirkt, daß die Gelatine schmilzt. Diese Mischung kann bei einer Temperatur oberhalb des Schmelzpunktes der Gelatine in einem organischen Medium (z. B. einem Pflanzenöl wie Sonnenblumenöl, Sojaöl, Baumwollsamenöl oder Kokusnussöl), in Anwesenheit eines Emulgators mit einem niedrigen Hydrophile-Lipophile-Gleichgewichts-Wert (HLB) emulgiert werden. Solche Emulgatoren, die für die Stabilisierung von Wasser-Öl-Emulsionen verwendbar sind, sind dem Fachmann bekannt (beispielsweise Span 80). Die Mikrokügelchen können dann dadurch verfestigt werden, daß die Temperatur der Emulsion unter Rühren auf unter 10ºC abgesenkt wird. Die Mikrokügelchen können dann unter Verwendung herkömmlicher Verfahren, beispielsweise dadurch eingesammelt werden, daß ein pharmazeutisch akzeptables, organisches Lösemittel, beispielsweise abgekühltes Azeton oder Petroleumäther der Emulsion hinzugefügt wird, worauf eine Zentrifugierung, ein Waschvorgang und eine Trocknung folgen. Der therapeutische Wirkstoff kann in die Mikrokügelchen dadurch aufgenommen werden, daß er der Chitosan-Gelatine-Mischung vor der Emulgierung hinzugefügt wird. Alternativ kann der therapeutische Wirkstoff an der Oberfläche der Mikrokügelchen durch Gefriertrocknung oder Sprühtrocknung einer Suspension der Mikrokügelchen mit dem therapeutischen Wirkstoff oder durch eine physikalische oder mechanische Mischung der getrockneten Mikrokügelchen mit dem therapeutischen Wirkstoff adsorbiert werden.
Somit wird gemäß einem weiteren Gesichtspunkt der Erfindung eine Medikamenten-Abgabezusammensetzung in einer Form geschaffen, die für eine Verabreichung an eine Schleimhaut geeignet ist und einen therapeutischen Wirkstoff und Mikroteilchen umfaßt, die aus einer Mischung von Chitosan und Gelatine vom Typ A hergestellt worden sind, und bei der der Wirkstoff entweder in die Teilchen während der Herstellung aufgenommen oder an der Oberfläche der Teilchen adsorbiert worden oder als Beimischung vorhanden ist.
Mikrokapseln und Pulver können dadurch hergestellt werden, daß das hier beschriebene Verfahren durch Vorgehensweisen modifiziert wird, die dem Fachmann wohl bekannt sind, oder sie können gemäß anderen Verfahren hergestellt werden, die dem Fachmann ebenfalls gut bekannt sind und zu denen Zweifach-Emulgierungs-Verfahren gehören.
Gemäß einem weiteren Gesichtspunkt der Erfindung wird ein Verfahren zur Zubereitung einer Zusammensetzung gemäß der Erfindung geschaffen, wobei dieses Verfahren die Zubereitung von Mikroteilchen aus Gelatine vom Typ A und Chitosan (d. h. Mikroteilchen, die eine Mischung von Gelatine vom Typ A und Chitosan umfassen) durch ein Sprühtrocknungs-Verfahren oder durch Emulgierung umfaßt, wobei diese Emulgierung das Erwärmen einer Lösung von mit Gelatine vom Typ A gemischtem Chitosan, Emulgierung und Gelierung durch Abkühlung umfassen kann.
Die Strömungseigenschaften der Mikroteilchen können durch dem Fachmann bekannte Verfahren gemessen werden. Ein mögliches Verfahren umfaßt die Messung des Hausner-Verhältnisses, wobei eine bekannte Masse eines Materials in einen Meßzylinder geschüttet und das Volumen aufgezeichnet wird. Der Zylinder wird dann mit einer bestimmten Anzahl von Stößen gegen eine Oberfläche gestoßen und das Volumen erneut gemessen. Die Dichten nach dem Einschütten und nach dem Stoßen werden dann ermittelt und das Hausner-Verhältnis = Dichte nach dem Stoßen/Dichte nach dem Einschütten berechnet. Ein Verhältnis von < 1,25 weist auf ein frei fließendes Material hin, während ein Verhältnis von > 1,5 ein schlecht fließendes (kohäsives) Material anzeigt. Ein weiteres mögliches Verfahren umfaßt die Messung des Ruhewinkels dadurch, daß Material durch einen in einer festen Höhe gehaltenen Trichter auf ein Millimeterpapier geschüttet wird, bis sich ein Kegel bildet. Die Höhe (H) und der Radius (R) des Kegels werden gemessen und es wird der Winkel (tan 8 = H/R) berechnet. Ein Ruhewinkel- θ < 300 deutet auf gute Strömungseigenschaften hin, während ein Ruhewinkel θ > 400 sehr schlechte Fließeigenschaften anzeigt (James I. Wells, Pharmaceutical Preformulation, Ellis Horwood Series in Pharmaceutical Technology, 1988).
Die Größe der Mikroteilchen, zu denen auch Mikrokapseln und insbesondere Mikrokügelchen gehören, liegt vorzugsweise im Bereich von 1 bis 200 um, und in mehr bevorzugter Weise zwischen 1 und 100 um, gemessen beispielsweise durch Lichtmikroskopie oder durch Siebtrennung.
Die Mikroteilchen bestehen vorzugsweise zwischen 50% und 95%, in mehr bevorzugter Weise zwischen 70% und 90% und in besonders bevorzugter Weise zwischen 75 % und 85% aus Gelatine vom Typ A und entsprechend zwischen 50% und 5%, vorzugsweise zwischen 30% und 10% und in besonders bevorzugter Weise zwischen 25 % und 15% aus Chitosan, gemessen in Bezug auf die Gesamtmenge von Gelatine und Chitosan in der Endzusammensetzung (d. h. ohne den therapeutischen Wirkstoff und andere zusätzliche Bestandteile, die enthalten sein können).
Der Ausdruck "therapeutischer Wirkstoff" umfaßt Medikamente, Gene (DNA) oder Genkonstrukte, Impfstoffe und Bestandteile hiervon (beispielsweise isolierte Antigene oder Teile hiervon) und monoklonale Antikörper. Für Anwendungen, die solche Materialien wie Gene, Genkonstrukte, Impfstoffe und monoklonale Antikörper verwenden, können die Mikroteilchen eingesetzt werden, um die Abgabe des therapeutischen Wirkstoffs in das Schleimhautgewebe für einen verstärkten therapeutischen Effekt, beispielsweise die Darbietung eines Antigens an das darunter liegende lymphoide Gewebe und/oder eine Transfektion der Zellen in der Schleimhautauskleidung zu verstärken.
Vorzugsweise ist der therapeutische Wirkstoff ein polares Medikament. Unter "polaren Medikamenten" werden Moleküle mit einem Verteilungskoeffizienten (Octanol-Wasser- System) von weniger als 50 verstanden.
Die Zusammensetzungen können mit therapeutischen Wirkstoffen verwendet werden, die aus der folgenden, nicht abschließenden Liste ausgewählt sind: Insulin, PTH (Parathyroidhormon), PTH-Analoge, PTHrP (menschliches Parathyroidhormon-Peptid), Calcitonine (beispielsweise vom Schwein, Menschen, Lachs, Hühnchen oder Aal) und synthetische Abwandlungen hiervon, Enkephaline, LHRH (luteinisierendes Hormon freisetzendes Hormon) und Analoge (Nafarelin, Buserelin, Leuprolid, Goserelin), Glucagon, TRH (Thyrotropin freisetzendes Hormon), Vasopressin, Desmopressin, Wachstumshorman, Heparine, GHRH (Wachstumshormon freisetzendes Hormon), CCK (Cholecystokinin), THF (thymischer Humoralfaktor), CGRP (auf Calcitonin gen-bezogenes Peptid), atrial-natriuretisches Peptid, Nifedipin, Metoclopramid, Ergotamin, Pizotizin, Pentamidin und Impfstoffe (insbesondere aber nicht hierauf beschränkt Aids-, Masern-, Rhinovirus-Typ13- und Atmungs-Syncytial-Virus-, Influenza-, Keuchhusten-, Menginokokis--, Tetanus-, Diphterie-, Cholera- und DNA-Impfstoffe (z. B. ein Impfstoff, der eine Plasmid-DNA enthält, die für ein geeignetes Antigen codiert)).
Weitere therapeutische Wirkstoffe umfassen, ohne hierauf beschränkt zu sein, Antibiotika und antimikrobische Wirkstoffe wie z. B. Tetracyclin-Hydrochlorid, Leukomycin, Penicillin, Penicillin-Derivate, Erythromycin, Sulphathiazol und Nitrofurazon; Antimigräne- Verbindungen wie z. B. Naratriptan, Sumatriptan, Alnitidan oder andere 5-HT1-Wirkstoffe, gefäßverengende Mittel wie z. B. Phenylephedrin-Hydrochlorid, Tetrahydrozolin- Hydrochlorid, Naphazolin-Nitrat, Oximetazolin-Hydrochlorid und Tramazolin-Hydrochlorid, herzstimmulierende Mittel wie Digitalis und Digoxin, gefäßerweiternde Mittei wie Nitroglyzerin und Papaverin-Hydrochlorid, Wirkstoffe zur Kontrolle des Knochenmethabolismus wie z. B. Vitamin D und Aktivvitamin D3, Sexualhormone, Hypotensive, Antitumor- Wirkstoffe, steroidale antientzündliche Wirkstoffe wie z. B. Hydrocortison, Prednison, Fluticason, Prednisolon, Triamcinolon, Triamcinolon-Acetonid, Dexamethason, Betamethason, Beclomethason und Beclomethason-Dipropionat, nicht-steriodale antientzündliche Wirkstoffe wie z. B. Acetaminophen, Aspirin, Aminopyrin, Phenylbutazon, Mefansäure, Ibuprofen, Diclofenac-Natrium, fndomethacin, Colchicin und Probenecid, enzymatische antientzündliche Wirkstoffe wie z. B. Chymotrypsin und Bromelain-Seratiopeptidase, anti-histaminische Wirkstoffe wie z. B. Dephenhydramin-Hydrochlorid, Chloropheniramin-Maleat und Clemastin, gegen Husten wirkende Expectoranzien wie Codein-Phosphat und Isoproterenol-Hydrochlorid, Analgetika wie z. B. Opioide (wie Diamorphin, Morphin und seine polaren Metaboliten wie z. B. Morphin-6-Glucuronide und Morphin-3-Sulfat), gegen Erbrechen wirkende Wirkstoffe wie z. B. Metoclopramid, Ondansetron, Chlorpromazin; Medikamente zur Behandlung von Epilepsie, wie z. B. Clonazepam, Medikamente zur Behandlung von Schlafstörungen wie z. B. Melatonin und Medikamente zur Behandlung von Asthma wie z. B. Salbutamol.
Kombinationen der oben erwähnten therapeutischen Wirkstoffe können verwendet werden.
Die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung können oral, nasal, vaginal, über den Rachenraum, rektal, über das Auge oder den Atmungsweg in einer Vielzahl von pharmazeutisch akzeptablen Darreichungsformen verabreicht werden, die dem Fachmann geläufig sind. Beispielsweise können die Zusammensetzungen über den nasalen Weg als Pulver unter Verwendung einer Nasaipulvervorrichtung, über den Atmungsweg unter Verwendung eines Pulverinhalators oder eines Inhalators für abgemessene Dosen, über den vaginalen Weg als Pulver unter Verwendung einer Pulvervorrichtung, als Vaginalzäpfchen oder Pessar oder Vaginaitablette oder Vaginaigel, über den Mund als Tablette oder Mundpflaster, auf rektalem Weg in Form von Zäpfchen, über das Auge in Form eines Pulvers oder einer trockenen Salbe, über den oralen Weg in Form einer Tablette, einer Kapsel oder eines Pelletts (wobei diese Zusammensetzungen den Wirkstoff über den Magen, den Dünndarm oder den Dickdarm abgeben können) verabreicht werden, wobei alle diese Verabreichungsformen in Übereinstimmung mit Verfahren zubereitet werden können, die dem Fachmann wohl bekannt sind. Die Zusammensetzungen können auf der Schleimhaut zumindest in einem gewissen Ausmaß gelieren und dies kann das Festhalten der Zusammensetzung auf der Schleimhaut erleichtern.
Der bevorzugte Verabreichungsweg ist nasal. Vorrichtungen, die verwendet werden können, um die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen nasal zu verabreichen, umfassen den Direct Haler®, die Bespak®-Pulvervorrichtung, den Monopudre® (Valois) und den Insufflator® (Teijin).
Zusammensetzungen gemäß der Erfindung, die oral verabreicht werden können, können so abgestimmt sein, daß sie den therapeutischen Wirkstoff an den Dünndarm oder den Dickdarm, insbesondere dem proximalen Dickdarmbereich des Magendarmtrakts abgeben.
Vorzugsweise ist ein Mittel vorgesehen, um ein Freisetzen des therapeutischen Wirkstoffs so lange zu verhindern, bis die Zubereitung den Dünndarm oder den Dickdarm erreicht hat. Mittel, die verwendet werden können, um eine Freisetzung zu verhindern, bis der Dünndarm erreicht worden ist, sind dem Fachmann wohl bekannt (siehe beispielsweise Dosierungsformen, die mit sogenannten enterischen Polymeren überzogen sind, die sich nicht unter den Säurebedingungen auflösen, die im Magen herrschen, sich aber unter den mehr alkalischen Bedingungen auflösen, die im Dünndarm eines Säugetiers oder Menschen angetroffen werden. Geeignete enterische Überzugsmaterialien umfassen modifizierte Zellulosepolymere und Acrylpolymere und insbesondere solche, die unter der Handelsmarke Eudragit® verkauft werden). Mittel, die verwendet werden, um eine Freisetzung zu verhindern, bis der Dickdarm erreicht worden ist, sind dem Fachmann wohl bekannt. Solche Materialien umfassen Zelluloseacetattrimellitat (CAT), Hydroxylpropylmethylzellulosephthalat (HPMCP), Polyvinylacetatphthalat (PVAP), Zelluloseacetatphthalat (CAP) und Schellack, wie dies von Healy in seinem Artikel "Enteric Coatings and Deiayed Release", Kapitel 7 in Drug Delivery to the Gastrointestinal Tract, Herausgeber Hardy et al., Ellis Horwood, Chichester, (1989) beschrieben wird. Speziell bevorzugte Materialien sind Methylmethacrylate oder Copolymere von Methacrylsäure und Methylmethacrylat. Solche Materialien stehen als Eudragit® enterische Polymere (Rohm Pharma, Darmstadt, Deutschland) zur Verfügung. Derartige Überzüge können auch in geeigneter Weise ein Material umfassen, das redox-sensitiv ist, z. B. Azopolymere, die beispielsweise aus einem Zufallscopolymer von Styren und Hydroxyethylmethacrylat bestehen können, das mit Divinylazobenzen quervernetzt ist, das durch Polymerisation freier Radikale synthetisiert wurde, oder Disulfidpolymere (siehe PCT/BE91/00006 und Van den Mooter, int. J. Pharm., 87, 37, (1992)). Siehe auch die internationale Patentanmeldung WO 97105903.
Es ist dem Fachmann klar, daß der Ort der Abgabe auch dadurch wahlweise gesteuert werden kann, daß die Dicke von bestimmten der oben erwähnten polymeren Überzüge verändert wird.
Der Fachmann versteht ohne weiteres, daß weitere Zutaten bei Zubereitungen verwendet werden können, welche die Zusammensetzungen gemäß der Erfindung umfassen.
Beispielsweise können bei festen Darreichungsformen weitere Zusätze, die verwendet werden können, Verdünnungsmittel wie z. B. mikrokristalline Zellulose (beispielsweise Avicel®, FMC) Laktose, Dikalziumphosphat und Stärke(n), Abbaumittel wie z. B. mikrokristalline Zellulose, Stärke(n) und quervernetzte Carboxymethylzellulose, Gleitmittel wie z. B. Magnesiumstearat und Stearinsäure, Granulierungsmittel wie z. B. Povidon und Freisetzungsmodifikatoren wie z. B. Hydroxypropylmethylzellulose und Hydroxypropylzellulose umfassen. Geeignete Mengen solcher Zusätze hängen von der Art des oder der aktiven Bestandteile und der speziell verwendeten Darreichungsform ab.
Gewünschtenfalls können in der Zusammensetzung andere Materialien, beispielsweise Absorptionsverstärker enthalten sein. Geeignete Absorptionsverstärker umfassen nicht- ionische oberflächenwirksame Mittel, Zyklodextrine, Bile-Salze und, vorzugsweise, Phospholipide wie z. B. Lysophosphatidylcholin, Lysophosphatidylglycerol und allgemein solche, die in WO 88/09163 erwähnt werden.
Gemäß einem weiteren Gesichtspunkt der Erfindung wird eine pharmazeutische Zubereitung in einer Form geschaffen, die für eine Verabreichung an eine Schleimhautoberfläche geeignet ist und die eine Zusammensetzung gemäß der Erfindung in einer pharmazeutisch akzeptablen Darreichungsform enthält.
Es hat sich gezeigt, daß Zusammensetzungen gemäß der Erfindung den Vorteil besitzen, daß sie für einen verbesserten Transport von polaren Medikamenten durch Schleimhautoberflächen wie z. B. im Nasenhohlraum sorgen, daß sie verbesserte Strömungseigenschaften im Vergleich zu dem Stand der Technik entsprechenden Zusammensetzungen besitzen und daß sie die Notwendigkeit vermeiden, chemische Quervernetzungsmittel zu verwenden.
Gemäß einem weiteren Gesichtspunkt der Erfindung wird somit ein Verfahren für den verbesserten Transport von therapeutischen Wirkstoffen quer durch (oder in) Schleimhautoberflächen bei Säugetieren und Menschen geschaffen (was die Darbietung von Impfstoffen an Schleimhautoberflächen umfaßt), sowie ein Verfahren zur Behandlung von Menschen oder Säugetieren, wobei diese Verfahren die Verabreichung einer oben beschriebenen Zusammensetzung vorzugsweise an eine Schleimhautoberfläche des betreffenden Menschen oder Säugetiers, beispielsweise seiner Vagina, seines Rachenraums, seines Rektums, seiner Lungen, seines Auges, seines Dickdarms, seines Dünndarms, seines Magens oder seines Nasenhohlraums umfassen.
Die Menge des therapeutischen Wirkstoffs, die in den Zusammensetzungen gemäß der Erfindung verwendet werden kann, hängt von dem verwendeten Wirkstoff ab. Es ist jedoch dem Fachmann klar, daß geeignete Dosen der therapeutischen Wirkstoffe ohne weiteres ermittelt werden können, ohne erfinderisch tätig zu werden. Geeignete Dosen liegen im Bereich von 1 ug bis 1 g in Abhängigkeit vom therapeutischen Wirkstoff oder den therapeutischen Wirkstoffen, der oder die verwendet werden, sowie vom Verabreichungsweg.
Die Erfindung wird im folgenden in nicht einschränkender Weise unter Bezugnahme auf Beispiele und die Zeichnung erläutert; in der Zeichnung zeigen:
Fig. 1 die mittleren Plasma-Glucose/Zeit-Kurven nach der Verabreichung an Schafe von 2 IU/kg Insulin in Gelatine-Mikrokügelchen und Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen; die entweder 9,6% oder 19,28 G210 Chitosanglutamat enthielten,
Fig. 2 die mittleren Plasma-Insulin/Zeit-Kurven nach einer Verabreichung an Schafe von 2 IU/kg Insulin in Gelatine-Mikrokügelchen und Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen, die entweder 9,6% oder 19,28% G210 Chitosanglutamat enthielten,
Fig. 3 die mittleren Plasma-Calcium/Zeit-Kurven nach Verabreichung an Schafe von 20 IU/kg Lachs-Calcitonin in Gelatine-Mikrokügelchen und in Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen, die entweder 39,9% G110 oder 19,9% G210 Chitosanglutamat enthielten,
Fig. 4 die mittleren Plasma-Insulin/Zeit-Kurven nach einer Verabreichung an Schafe von 2 IU/kg Insulin in 0,5%-iger Chitosan-Lösung (G210) und in Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen, die 19,28% G210 Chitosanglutamat enthielten,
Fig. 5 die mittleren Plasma-Insulin/Zeit-Kurven nach einer Verabreichung an Schafe von 2 IU/kg Insulin mit Chitosan-Pulver (G210) und in Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen, die 19,28% G210 Chitosanglutamat enthielten,
Fig. 6 die mittleren Änderungen der Plasma-PTH-Konzentration für eine PTH/Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung (PTH CHI/GER) im Vergleich zu einer Zubereitung, die PTH (allein), in Salzlösung (PTH sol) und PTH mit Chitosanglutamat (PTH CHI Sol) enthielten,
Fig. 7 den Einfluß auf den Plasma-Glucose-Pegel von Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen, die unterschiedliche Mengen von Insulin enthielten, und
Fig. 8 den Einfluß einer wiederholten Verabreichung von Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen auf den Plasma-Insulin-Pegel.

Beispiel 1

Zubereitung von Mikrokügelchen. die 3,6 Gew.-% Insulin, 86,7 Gew.-% Gelatine A und 9,6 Gew.-% Chitosanglutamat (Sea Cure G210) enthielten

193 mg Chitosanglutamat wurden in einen 50 ml fassenden Kolben eingewogen und es wurden 15 ml Wasser hinzugefügt und so lange gerührt, bis Auflösung eintrat. 1735 mg von Gelatine A (Sigma) wurden der Chitosan-Lösung hinzugefügt und bei 40ºC so lange gerührt, bis Auflösung eintrat. Der pH-Wert der Lösung wurde dadurch auf 4 eingestellt, daß eine geeignete Menge von 1 M HCl hinzugefügt wurde. 72 mg menschliches Zink-Insulin (1,8 ml einer 40 mg/ml Insulin-Vorratslösung) wurden der Gelatine/Chitosan-Lösung hinzugefügt, die in einen 20 ml fassenden, volumetrischen Kolben übertragen und mit Wasser auf das genannte Volumen aufgefüllt wurde.
2 g Span 80 wurden in einen Metallkolben eingewogen, es wurden 200 ml Sonnenblumenöl hinzugefügt und die Mischung auf 40ºC erwärmt. Die 40ºC warme Insulin/Gelatine/Chitosan-Lösung wurde hinzugefügt und unter 5-minütigem Rühren bei 1000 U/min mit einer Heidolph-Rührer emulgiert, der mit einem 4-blättrigen Rührarm ausgerüstet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde in ein Eisbad überführt und das Rühren mit 1000 U/min fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min reduziert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Geschwindigkeit von 5 ml/min hinzugefügt; dann wurde die Mischung bei 2500 U/min in Zentrifugierungsröhrchen 10 Minuten lang zentrifugiert. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand wurde in 50 ml Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration und Waschen mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton zurückgewonnen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.

Beispiel 2

Zubereitung von Mikrokügelchen, die 3,6 Gew.-% Insulin, 77,12 Gew.-% Gelatine A und 19,28 Gew.-% Chitosanglutamat (Sea Cure G210) enthielten

386 mg Chitosanglutamat wurden in einen 50 ml fassenden Kolben eingewogen, es wurden 15 ml Wasser hinzugefügt und die Mischung wurde so lange gerührt, bis Auflösung eintrat. 1542 mg Gelatine A wurden der Chitosan-Lösung hinzugefügt, die dann bei 40ºC so lange gerührt wurde, bis Auflösung eintrat. Der pH-Wert der Lösung wurde durch Hinzufügung einer geeigneten Menge von 1 M HOI auf 4 eingestellt. 72 mg menschliches Zink-Insulin (1,8 ml einer 40 mg/mf Insulin-Vorratslösung) wurden der Gelatine/Chitosan-Lösung hinzugefügt, die dann in einen 20 ml fassenden volumetrischen Kolben überführt und mit Wasser zu dem genannten Volumen aufgefüllt wurde.
2 g Span 80 wurden in einen Metallkolben eingewogen, 200 ml Sonnenblumenöl wurden hinzugefügt und die Mischung wurde auf 40ºC erwärmt. Die 40ºC warme Insulin/Gelatine/Chitosan-Lösung wurde hinzugefügt und unter 5-minütigem Rühren bei 1000 U/min mit Hilfe eines Heidolph-Rührers emulgiert, der mit einem 4-blättrigen Rührarm ausgerüstet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde dann in ein Eisbad übergeführt und das Rühren bei 1000 U/min fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min vermindert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Rate von 5 ml/min hinzugefügt, worauf eine 10-minütige Zentrifugierung in Zentrifugierröhrchen bei 2500 IJ/min erfolgte. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand in 50 ml Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration wiedergewonnen und mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton gewaschen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.

Beispiel 3

Zubereitung von Mikrokügelchen, die 0,2 Gew.-% Lachs-Calcitonin (SCT), 59,9 Gew.-% Gelatine A und 39,9 Gew.-% Chitosanglutamat (Sea Cure G110) enthielten

798 mg Chitosanglutamat (G110) wurden in einen 50 ml fassenden Kolben eingewogen, es wurden 15 ml Wasser hinzugefügt und das sich ergebende Gemisch wurde so lange gerührt, bis Auflösung eintrat. 1198 mg Gelatine A wurden der Chitosan-Lösung hinzugefügt, die dann bei 40ºC so lange gerührt wurde, bis Auflösung eintrat. Der pH-Wert der Lösung wurde durch Hinzufügen einer geeigneten Menge von 1 M HCl auf 4 eingestellt. 20.000 IU von SCT (0,91 ml einer 4 mg/ml SCT-Vorratslösung) wurden der Gelatine/Chitosan-Lösung hinzugefügt, die in einen 20 ml fassenden volumetrischen Kolben überführt und mit Wasser auf das angegebene Volumen aufgefüllt wurde.
2 g Span 80 wurden in einen Metallkolben eingewogen, es wurden 200 ml Sonnenblumenöl hinzugefügt und die Mischung auf 40ºC erwärmt. Die 40ºC warme SCT/Gelatine/Chitosan-Lösung wurde hinzugefügt und unter 5-minütigem Rühren bei 1000 U/min mit Hilfe eines Heidolph-Rührers emulgiert, der mit einem 4-blättrigen Rührarm ausgestattet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde in ein Eisbad übergeführt und das Rühren bei 1000 U/min wurde fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min vermindert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Rate von 5 ml/min hinzugefügt, die dann 10 Minuten lang bei 2500 U/min in Zentrifugierröhrchen zentrifugiert wurde. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand in 50 ml Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration zurückgewonnen und mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton gewaschen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.

Beispiel 4

Zubereitung von Mikrokügelchen, die 0,2 Gew.-% SCT, 79,9 Gew.-% Gelatine A und 19.9 Gew.-% Chitosanglutamat (Sea Cure (G210) enthielten.

398 mg Chitosanglutamat (G210) wurden in einen 50 ml fassenden Kolben eingewogen, es wurden 15 mf Wasser hinzugefügt und das sich ergebende Gemisch wurde so lange gerührt, bis Auflösung eintrat. 1598 mg Gelatine A wurden der Chitosan-Lösung hinzugefügt, die dann bei 40ºC so lange gerührt wurde, bis Auflösung eintrat. Der pH-Wert der Lösung wurde durch Hinzufügen einer geeigneten Menge von 1 M HCl auf 4 eingestellt. 20.000 IU von SCT (0,91 ml einer 4 mg/ml SCT-Vorratslösung) wurden der Gelatine/Chitosan-Lösung hinzugefügt, die dann in einen 20 ml fassenden volumetrischen Kolben überführt und mit Wasser auf das angegebene Volumen aufgefüllt wurde.
2 g Span 80 wurden in einen Metallkolben eingewogen, es wurden 200 ml Sonnenblumenöl hinzugefügt und die Mischung auf 40ºC erwärmt. Die 40ºC warme SCT/Gelatine/Chitosan-Lösung wurde hinzugefügt und unter 5-minütigem Rühren bei 1000 U/min mit Hilfe eines Heidolph-Rührers emulgiert, der mit einem 4-blättrigen Rührarm ausgestattet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde in ein Eisbad übergeführt und das Rühren bei 1000 U/min wurde fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min vermindert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Rate von 5 ml/min hinzugefügt, die dann 10 Minuten lang bei 2500 U/min in Zentrifugierröhrchen zentrifugiert wurde. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand in 50 mi Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration zurückgewonnen und mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton gewaschen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.

Beispiel 5

Die Insulin-Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen-Zubereitungen aus den Beispielen 1 und 2 wurden Schafen nasal verabreicht und die Wirkung der Zubereitungen wurde mit der Wirkung der Verabreichung von Insulin in Gelatine A-Mikrokügelchen verglichen. Die Insulin-Gelatine-Mikrokügelchen wurden wie folgt zubereitet: 1928 mg Gelatine A wurden 14 ml Wasser in einem 50 ml fassenden Kolben hinzugefügt und unter Rühren so lange auf 40ºC erwärmt, bis sich die Gelatine gelöst hatte. Der pH-Wert der Gelatine-Lösung wurde unter Verwendung von 1 M HCl auf 4 eingestellt und ein Äquivalent von 72 mg menschlichem Zinc-Insulin (1,8 ml einer 40 mg/ml Vorratslösung) wurden der Lösung hinzugefügt. Die Lösung wurde in einen 20 ml fassenden volumetrischen Kolben überführt und mit Wasser auf das angegebene Volumen aufgefüllt. 2 g Span 80 wurden in einen Metallkolben eingewogen, es wurden 200 ml Sonnenblumenöl hinzugefügt und die Mischung auf 40ºC erwärmt. Die 40ºC warme Insulin/Gelatine -Lösung wurde hinzugefügt und unter 5-minütigem Rühren bei 1000 IJ/min mit Hilfe eines Heidolph-Rührers emulgiert, der mit einem 4-blättrigen Rührarm ausgestattet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde in ein Eisbad übergeführt und das Rühren bei 1000 U/min wurde fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min vermindert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Rate von 5 ml/min hinzugefügt. Die Emulsion wurde dann 10 Minuten lang bei 2500 U/min in Zentrifugierröhrchen zentrifugiert. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand in 50 ml Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration zurückgewonnen und mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton gewaschen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.
Jede der Mikrokügelchen-Zubereitungen wurde nasal Gruppen von fünf Schafen unter Verwendung von silikonisierten Blueline-Röhrchen mit einer Insulin-Dosis von 2 IU/kg und einer Mikrokügelchen-Dosis von 2,0 mg/kg verabreicht. Zu festgelegten Zeitpunkten wurden Blutproben an den kanülierten äußeren Kehle-Venen entnommen und es wurden die Plasma-Glucose- und Insulin-Konzentrationen gemessen. Die mittleren Änderungen der Plasma-Glucose-Konzentration im Laufe der Zeit für die drei Zubereitungen sind in Fig. 1 dargestellt. Man sieht, daß das nasal verabreichte Insulin in Kombination mit Gelatine-Mikrokügelchen nicht zu irgend einer signifikanten Absenkungen der Plasma-Glucose-Pegel führte (Cmin = 95,9%), während die Zubereitungen, die 9,6% Chitosan und 19,28% Chitosan enthielten, zu Glucose-Absenkungseffekten von Cm,n = 74,6% bzw. Cmin = 53,8% des Basalpegels führten. Die entsprechenden Plasma-Insulin-Pegel für die drei Zubereitungen sind in Fig. 2 dargestellt. Man sieht, daß Cmax für beide Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen-Zubereitungen (131,6 mU/L und 439,7 mU/L für die 9,6/86,7% bzw. 19,28/77,12% Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen) signifikant höher war als das Cmax, das sich für die Gelatine-Mikrokügelchen (53,5 mU/L) ergab.

Beispiel 6

Die Calcitonin/Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen-Zubereitungen, die in den Beispielen 3 und 4 beschrieben sind, wurden Schafen nasal verabreicht und die Wirkung der Zubereitungen mit der Wirkung der Verabreichung von Calcitonin in Gelatine-Mikrokügelchen verglichen.
Die Calcitonin-Gelatine-Mikrokügelchen wurden auf folgende Weise zubereitet: 1996 mg Gelatine A wurden 15 ml Wasser in einem 50 ml fassenden Kolben hinzugefügt und unter Rühren so lange auf 40ºC erwärmt, bis sich die Gelatine gelöst hatte. Der pH- Wert der Gelatine-Lösung wurde unter Verwendung von 1 M HCl auf 4 eingestellt und ein Äquivalent von 20.000 IU von Lachs-Calcitonin (0,91 ml einer 4 mg/ml SCT-Vorratslösung) wurden der Lösung hinzugefügt. Die Lösung wurde in einen 20 ml fassenden volumetrischen Kolben überführt und mit Wasser auf das angegebene Volumen aufgefüllt. 2 g Span 80 wurden in einen Metallkolben eingewogen, es wurden 200 ml Sonnenblumenöl hinzugefügt und die Mischung auf 40ºC erwärmt.
Die 40ºC warme Insulin/Gelatine -Lösung wurde hinzugefügt und unter 5-minütigem Rühren bei 1000 U/min mit Hilfe eines Heidolph-Rührers emulgiert, der mit einem 4- blättrigen Rührarm ausgestattet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde in ein Eisbad übergeführt und das Rühren bei 1000 U/min wurde fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min vermindert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Rate von 5 ml/min hinzugefügt. Die Emulsion wurde dann 10 Minuten lang bei 2500 U/min in Zentrifugierröhrchen zentrifugiert. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand in 50 ml Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration zurückgewonnen und mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton gewaschen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.
Jede der Mikrokügelchen-Zubereitungen wurde nasal Gruppen von fünf Schafen unter Verwendung von silikonisierten Blueline-Röhrchen mit einer SCT-Dosis von 20 IU/kg und einer Mikrokügelchen-Dosis von 2,004 mg/kg verabreicht. Zu festgelegten Zeitpunkten wurden Blutproben an den kanülierten äußeren Kehle-Venen entnommen und es wurden die Plasma-Calcium-Konzentrationen gemessen. Die mittleren Änderungen der Plasma-Calcium-Konzentration im Laufe der Zeit für die drei Zubereitungen sind in Fig. 3 dargestellt. Man sieht, daß das nasal verabreichte SCT in Kombination mit Gelatine-Mikrokügelchen nur zu einer minimalen Absenkung der Plasma-Calcium-Pegel führte (Cmin = 91,1%) während die Zubereitungen, die 39,9% Chitosan G110 und 19,9 % Chitosan G210 enthielten, zu Calcium-Absenkungseffekten von Cmin = 73,6% bzw. Cmin = 74,7% des Basalpegels führten. Es gab keinen signifikanten Unterschied zwischen den Effekten, die durch den 39,9% G110- und den 19,9% G210-Chitosan-Pegel in den Gelatine-Mikrokügelchen erzielt wurden.

Beispiel 7

Die Insulin-Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen-Zubereitung, die im Beispiel 2 beschrieben wurde, wurde Schafen nasal verabreicht und es wurde die Wirkung der Zubereitung mit der Wirkung der Verabreichung von Insulin in eine einfachen Chitosan-Lösung verglichen.
Die Mikrokügelchen-Zubereitung wurde nasal einer Gruppe von fünf Schafen unter Verwendung von silikonisierten Blueline-Röhrchen mit einer Insulin-Dosis von 2 IU/kg und einer Mikrokügelchen-Dosis von 2,0 mg/kg verabreicht. Zum Vergleich wurde eine Lösung von 200 IU/ml Insulin in 5 mg/ml G210 Chitosanglutamat-Lösung nasal mit 2 IU/kg einer Gruppe von vier Schafen verabreicht. Zu festgelegten Zeitpunkten wurden Blutproben an den kanülierten äußeren Kehle-Venen entnommen und es wurden die Plasma-Insulin-Konzentrationen gemessen. Die mittleren Änderungen der Plasma-Insulin-Konzentration im Laufe der Zeit für die beiden Zubereitungen sind in Fig. 4 dargestellt. Man sieht, daß der Plasma-Insulin-Pegel für die Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung signifkant höher ist (Cmax = 450 mU/l) als bei der Chitosan-Lösungs- Zubereitung (Cmax = 100 mU/l).

Beispiel 8

Die Insulin-Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen-Zubereitung, die im Beispiel 2 beschrieben ist, wurde Schafen nasal verabreicht und die Wirkung der Zubereitung mit der Wirkung der Verabreichung von Insulin mit einer Chitosan-Pulver-Zubereitung verglichen.
Die Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung wurde nasal einer Gruppe von fünf Schafen unter Verwendung von silikonisierten Blueline-Röhrchen mit einer Insulin-Dosis von 2 IU/kg und einer Mikrokügelchen-Dosis von 2,0 mg/kg verabreicht. Zum Vergleich wurde eine Mischung von 640 IU Insulin mit 800 mg G210 Chitosanglutamat nasal mit 2 IU/kg einer Gruppe von vier Schafen mit 2 IU/kg verabreicht. Zu festgelegten Zeitpunkten wurden Blutproben an den kanülierten äußeren Kehle-Venen entnommen und es wurden die Plasma-Insulin-Konzentrationen gemessen. Die mittleren Änderungen der Plasma-Insulin-Konzentration im Laufe der Zeit für die beiden Zubereitungen sind in Fig. 5 dargestellt. Man sieht, daß der Plasma-Insulin-Pegel für die Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung signifkant höher ist (Cmax 450 mU/l) als bei der Chitosan-Pulver-Zubereitung (Cmax = 250 mU/l). Es sei auch daauf hingewiesen, daß die in den beiden Zubereitungen verabreichte Chitosanmenge bei der Chitosan-Pulver-Zubereitung viel höher ist als bei der Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung.

Beispiel 9

Zubereitung von Mikrokügelchen, die 0,4 Gew.-% PTH 19,92 Gew.-% Chitosanglutamat (Sea Cure 210) und 79,68 Gew.-% Gelatine A enthielten

9,28 mg PTH wurden 20 ml einer Lösung hinzugefügt, die 400 mg Chitosanglutamat und 1,6 g Gelatine A enthielt und auf 50 bis 60ºC gehalten. 2 g Span 80 wurden in einen Kolben eingewogen und es wurden 200 ml Sojaöl hinzugefügt. Die Bestandteile wurden gemischt und die Mischung auf 40ºC erwärmt. Die PTH/Chitosan/Gelatine-Lösung wurde hinzugefügt und 10 Minuten lang bei 1000 U/min unter Verwendung eines Heidolph-Rührers emulgiert, der mit einem 4-blättrigen Rührarm ausgestattet war, wobei die Temperatur auf 40ºC gehalten wurde. Der Kolben wurde in ein Eisbad übergeführt und das Rühren bei 1000 U/min wurde fortgesetzt, bis die Temperatur unter 10ºC abgefallen war. Die Rührgeschwindigkeit wurde auf 500 U/min vermindert und es wurden 150 ml gekühltes Azeton zur Emulsion mit einer Rate von 5 ml/min hinzugefügt, worauf eine 10-minütige Zentrifugierung bei 3000 U/min folgte. Der Überstand wurde weggeschüttet und der Rückstand in 50 ml Azeton resuspendiert. Die Mikrokügelchen wurden durch Vakuumfiltration zurückgewonnen und mit weiteren 50 ml gekühltem Azeton gewaschen. Man ließ den Filterkuchen trocknen und die Mikrokügelchen wurden in 50 ml Azeton in einer Schraubkappenflasche eingebracht, die einen Magnetrührer enthielt; das Rühren wurde über Nacht fortgesetzt. Die Mikrokügelchen wurden vakuumgefiltert und in einem Desiccator getrocknet.

Studie an Schafen

Die PTH/Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung wurde nasal einer Gruppe von 6 Schafen unter Verwendung von siliconisierten Blueline-Röhrchen mit einer PTH-Dosis von 4 ug/kg verabreicht. Zum Vergleich wurde der gleichen Gruppe von Schafen die gleiche Dosis PTH in Salzlösung und in einer Salzlösung verabreicht, die 0,5% Chitosanglutamat enthielt. Zu festgelegten Zeitpunkten wurden Blutproben an den kanülierten äußeren Kehle-Venen entnommen und es wurden die Plasma-PTH-Konzentrationen gemessen. Die mittleren Änderungen der Plasma-PTH-Konzentration im Laufe der Zeit für die drei Zubereitungen sind in Fig. 6 dargestellt. Man sieht, daß das Plasma-PTH für die Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen-Zubereitung signifikant höher ist (Cmax = 2,5 ng/ml) als bei der Chitosan-Lösungs-Zubereitung (Cmax = 0,25 ng/ml) und der Kontroll- PTH-Lösung (Cmax = 0 ng/ml).

Beispiel 10

Ermittlung des Hausner-Verhältnisses für Chitosan/Gelatine-A-Mikrokügelchen und für sprühgetrocknete Chitosan-Mikrokügelchen (Sea Cure G210)

Eine bekannte Masse (siehe unten) von Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen, die gemäß Beispiel 2 zubereitet worden waren, wurde vorsichtig in einen 10 ml fassenden Meßzylinder geschüttet und das Volumen gemessen (Schüttvolumen). Der Meßzylinder wurde 50 Mal (auf den Labortisch) aufgestoßen und das Volumen der Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen wurde erneut gemessen (gestoßenes Volumen). Die Messung wurde 3- fach ausgeführt.
Hausner-Verhältnis (Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen) = 1,25 (gute Strömungseigenschaften)
Eine bekannte Masse (siehe unten) von sprühgetrockneten Chitosan-Mikrokügelchen (Sea Cure G210; Pronova) wurde vorsichtig in einen 10 ml fassenden Meßzylinder geschüttet und das Volumen gemessen (Schüttvolumen). Der Meßzylinder wurde 50 Mal (auf den Labortisch) aufgestoßen und das Volumen der Chitosan-Mikrokügelchen wurde erneut gemessen (gestoßenes Volumen). Die Messung wurde 3-fach ausgeführt.
Hausner-Verhältnis (Chitosan) = 2,22 (sehr schlechte Fließeigenschaften)

Beispiel 11

Ermittlung des Ruhewinkels von Chitosan/Gelatine-A-Mikrokügelchen und für sprühgetrocknete Chitosan-Mikrokügelchen (Sea Cure G210)

Der Ruhewinkel (θ) wurde dadurch ermittelt, daß ungefähr 3 g Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen, die gemäß Beispiel 2 zubereitet worden waren, durch einen (auf einer festen Höhe gehaltenen) Trichter auf ein Stück Millimeterpapier geschüttet wurden, bis sich ein Kegel gebildet hatte. Die Höhe (H) und der Radius (R) des Kegels wurden ermittelt und der Winkel berechnet (tan θ = H/R). Die Messung wurde 3 Mal ausgeführt.
Mittlere Höhe = 10 mm
Mittlerer Radius = 18 mm
Ruhewinkel (Chitosan/Gelatine-Mikrokügelchen) = 29º (gute Strömungseigenschaften)
Der Ruhewinkel (θ) wurde dadurch ermittelt, daß ungefähr 3 g sprühgetrocknete Chitosan-Mikrokügelchen (Sea Cure G210; Pronova) durch einen (auf einer festen Höhe gehaltenen) Trichter auf ein Stück Millimeterpapier geschüttet wurden, bis sich ein Kegel gebildet hatte. Die Höhe (H) und der Radius (R) des Kegels wurden ermittelt und der Winkel berechnet (tan A = H/R). Die Messung wurde 3 Mal ausgeführt.
Mittlere Höhe = 25 mm
Mittlerer Radius = 24 mm
Ruhewinkel (Chitosan) = 46º (sehr schlechte Strömungseigenschaften)

Beispiel 12

Ermittlung der Wirkung der Dosis von Mikrokügelchen auf die Absorption von Insulin

Mikrokügelchen wurden gemäß Beispiel 2 mit einer Endkonzentration von Insulin in den Mikrokügelchen zubereitet, die 2,0 Gew.-%, 4,0 Gew.-%, 5,3 Gew.-%, 7,7 Gew.-% und 14,4 Gew.-% betrug.
Die Mikrokügelchen wurden nasal Gruppen von jeweils vier Schafen mit einer festen Dosis von 1 IU Insulin/kg und 2,0, 1,0, 0,75, 0,5 und 0,25 mg/kg von Gelatine/Chitosan- Mikrokügelchen verabreicht, wie in Beispiel 8 beschrieben. Die mittleren Änderungen im Plasma-Glucose-Pegel, ausgedrückt als AUC, sind in Fig. 7 wiedergegeben. Man sieht, daß der Effekt der Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen auf das AUC nicht verschieden ist, ganz gleich, ob 2,0 mg/kg oder bis zu 0,25 mg/kg von Mikrokügelchen mit einer konstanten Dosis von Insulin verabreicht wurden.

Beispiel 13

Wirkung der wiederholten Verabreichung von Gelatine-A/Chitosan-Mikrokügelchen auf den Plasma-Insulin-Pegel

Gelatine/Chitosan/Insulin-Mikrokügelchen wurden gemäß Beispiel 2 zubereitet. Die Mikrokügelchen und eine Chitosan-Lösungs-Zubereitung, die gemäß Beispiel 8 zubereitet waren, wurden Gruppen von jeweils vier Schafen jeweils einmal am Tag an fünf aufeinanderfolgenden Tagen nasal verabreicht. Eine SC-Injektion einer Insulin-Lösung wurde einer dritten Gruppe von Schafen an fünf aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht. Die Plasma-Insulin-Pegel als AUC ausgedrückt sind in Fig. 8 wiedergegeben. Man sieht, daß das AUC, das für jeden Tag erhalten wurde, für die Gelatine/Chitosan-Mikrokügelchen-Zubereitung beträchtlich höher ist als bei der Chitosan-Lösungs-Zubereitung. Man sieht auch, daß die AUC-Werte, die an den fünf aufeinanderfolgenden Tagen erreicht wurden, für die nasale Zubereitung ähnlich sind, was eine konsistente und reproduzierbare Wirkung belegt, während ein gewisser akkumulativer Effekt für die wiederholte SC- Injektion zu sehen ist.

Claims

1. Zusammensetzung, die eine Mischung aus Chitosan und einer kationischen Gelatine vom Typ A zusammen mit einem therapeutischen Wirkstoff umfaßt.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, bei der die Zusammensetzung die Form von Mikroteilchen besitzt.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, bei der der therapeutische Wirkstoff in die Teilchen während der Herstellung aufgenommen, an die Oberfläche der Teilchen adsorbiert oder als Beimischung vorhanden ist.

4. Zusammensetzung nach Anspruch 2 oder 3, bei der die Mikroteilchen Mikrokügelchen sind.

5. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der die Zusammensetzung für die Abgabe eines therapeutischen Wirkstoffs über eine Schleimhautmembran in den systemischen Kreislauf geeignet ist.

6. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das Chitosan ein Molekulargewicht von mehr als 4.000 Dalton besitzt.

7. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das Chitosan ein Derivat ist, wobei dieses Derivat dadurch gebildet ist, daß Acyl- oder Alkyl-Gruppen mit den Hydroxyl-Bestandteilen des Chitosans verbunden werden.

8. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, bei der das Chitosan in der Form eines Salzes vorliegt, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die Nitrate, Phosphate, Sulfate, Hydrochloride, Glutamate, Lactate und Acetate umfaßt.

9. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 2 bis 8, bei der die Mikroteilchen durch Sprühtrocknung, Emulgierung, Lösemittelverdampfung oder Ausfällung hergestellt werden.

10. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der das Chitosan einen Deacetylierungsgrad von mehr als 40% aufweist.

11. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 2 bis 10, bei der die Mikroteilchen einen Durchmesser zwischen 1 und 200 um besitzen.

12. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Zusammensetzung zwischen 50% und 95% der Gelatine vom Typ A umfaßt.

13. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der der therapeutische Wirkstoff ein polares Medikament ist.

14. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, bei der der therapeutische Wirkstoff ein Polypeptid ist.

15. Zusammensetzung nach Anspruch 14, bei der der therapeutische Wirkstoff aus der Gruppe ausgewählt ist, die Insulin, Calcitonin, lutenisierendes Hormon freisetzendes Hormon, Wachstumshormon oder einen Wachstumshormon freisetzenden Faktor umfaßt.

16. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 13, bei der der therapeutische Wirkstoff ein analgetischer Wirkstoff oder ein Medikament für die Behandlung für Migräne, ein zur Schleimhaut-Immunisierung dienendes Antigen oder ein Gen oder ein Genkonstrukt (DNA) ist, das zur Transfektion von Zellen in der Schleimhautoberfläche dienen soll.

17. Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die weiterhin einen die Absorption verstärkenden Wirkstoff umfaßt.

18. Zusammensetzung nach Anspruch 17, bei der der die Absorption verstärkende Wirkstoff ein Phosphorlipid ist.

19. Pharmazeutische Zubereitung in einer für die Verabreichung an eine Schleimhautoberfläche geeigneten Form, die eine Zusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche in einer pharmazeutisch akzeptablen Dosierungsform umfaßt.

20. Zubereitung nach Anspruch 19, bei der die Schleimhautoberfläche sich in der Nase, im Rachenhohlraum, in der Vagina oder im Magendarmtrakt befindet und die Zubereitung über den Mund, in das Rektum, in das Auge oder in die Lunge verabreicht wird.

21. Zubereitung der Typ-A-Gelatine-Chitosan-Mikroteilchen durch einen Sprühtrocknungsvorgang.

22. Zubereitung nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen durch eine Sprühtrocknung einer warmen Mischung aus Chitosan und Gelatine mit einer augenblicklichen Abkühlung der sich ergebenden Mikroteilchen zubereitet werden.

23. Zubereitung der Typ-A-Gelatine-Chitosan-Mikroteilchen durch Emulgierung.

24. Zubereitung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen dadurch zubereitet werden, daß eine Lösung aus mit Gelatine vom Typ A gemischtem Chitosan erwärmt und durch Abkühlung eine Emulgierung und Gelierung herbeigeführt wird.

25. Zubereitung nach Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß das Chitosan in Wasser gelöst und unter Erhitzung auf 40ºC mit der Gelatine gemischt wird und/oder daß die Mischung bei einer Temperatur oberhalb des Schmelzpunktes der Gelatine in einem organischen Medium in Anwesenheit einer Emulgierungssubstanz emulgiert wird.

26. Zubereitung nach einem der Ansprüche 24 und 25, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen dadurch verfestigt werden, daß die Temperatur der Emulsion unter 10ºC abgesenkt wird.

27. Zubereitung nach einem der Ansprüche 23 bis 26, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen weiterhin einen therapeutischen Wirkstoff umfassen, wobei dieser Wirkstoff in die Mikroteilchen dadurch aufgenommen ist, daß er der Mischung vor der Emulgierung zugesetzt wird.

28. Zubereitung nach einem der Ansprüche 21 bis 26, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen weiterhin einen therapeutischen Wirkstoff umfassen, wobei dieser Wirkstoff an die Oberfläche der Mikroteilchen durch Gefriertrocknung oder Sprühtrocknung einer Suspension der Mikroteilchen mit dem therapeutischen Wirkstoff adsorbiert ist.

29. Zubereitung nach einem der Ansprüche 21 bis 26, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen weiterhin einen therapeutischen Wirkstoff umfassen, wobei der Wirkstoff an die Oberfläche der Mikroteilchen durch eine physikalische oder mechanische Mischung der getrockneten Mikroteilchen mit dem therapeutischen Wirkstoff adsorbiert ist.

30. Verwendung der Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 18 oder einer Zubereitung nach einem der Ansprüche 19 und 20 zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung für den verbesserten Transport des therapeutischen Wirkstoffs durch Schleimhautoberflächen von Säugetieren oder Menschen.