DE69305748T3 - Enzymatisches asymetrisches reduktionsverfahren zur herstellung von 4h thieno (2,3-6) thiopyren derivaten. - Google Patents

Enzymatisches asymetrisches reduktionsverfahren zur herstellung von 4h thieno (2,3-6) thiopyren derivaten. Download PDF

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Description

  • Die Erfindung bezieht sich auf ein asymmetrisches Reduktionsverfahren.
  • Die Verbindung
    Figure 00010001
    ist ein lokal aktiver Carboanhydraseinhibitor, der für die Behandlung des Glaukoms bzw. grünen Stars vorgeschlagen wird. Die Verbindung mit einem Methylsubstituenten in der 6-Position, der in bezug auf den 4-Substituenten eine trans-Orientierung aufweist (das 4S,6S-Diastereoisomer), ist von therapeutischem Interesse, aber sie ist schwierig ohne eine überwiegende Menge des cis-Isomers (das 4R,6S-Diastereoisomer) herzustellen.
  • Die Erfinder arbeiteten ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel
    Figure 00010002
    in der X ein Wasserstoffatom oder eine Gruppe der Formel -SONH2 ist, die ein nützliches Zwischenprodukt bei der Herstellung des vorstehend beschriebenen, gewünschten trans-(4S,6S)-Isomers III und Derivaten davon in einer Menge ist, die größer als diejenige des entsprechenden cis-Isomers ist, aus einer Verbindung der Formel I.
    Figure 00020001
    X = -H oder -SO2NH2
  • Die Chemie, die den Hintergrund für die Synthese dieser Materialien darstellt, wird in Jones, et al., J. Org. Chem. 1991, 56, 763–769, in Shinkai, J. Heterocyclic Chem. (1992) 29, 627–639 und in den US-Patentschriften 4.968.814 und 4.968.815 und in einer Veröffentlichung vom Blacklock et al., J. Org. Chem. 1993, 58, 1672–1679 offenbart, die nach der Priorität für diese Patentanmeldung erfolgte.
  • Die Reduktion der Verbindung (I) unter Verwendung von Reduktionsmitteln wie einem Boran-Tetrahydrofuran-Komplex führt zur Herstellung des (4R,6S)-Diastereomers (IV) als dem Hauptprodukt (> 90%) mit dem gewünschten (4S,6S)-trans-Diastereoisomer (II), das einen kleineren Teil des Produkts ausmacht.
  • Figure 00020002
  • Jones et al., J. Org. Chem. (1991), 56, 763–769 offenbarten ein Verfahren für die enantioselektive Reduktion eines nahen Analogen, der Verbindung (V), unter Verwendung von Bäckerhefe (Saccharomyces cerevisiae). Diese Reaktion ergibt die (R)- und (S)-Alkohole in einem Verhältnis von 11 : 89.
  • Figure 00030001
  • Wenn jedoch bei der Reduktion der Verbindung (I) eine Reihe von Bäcker- und Bierhefen getestet wurden, war das unerwünschte cis-Diastereomer das Hauptprodukt (60 bis 85%). Eine Untersuchung eines breiten Bereichs von Mikroorganismen (Bakterien, Hefen und Pilze) zeigte, dass die meisten vorwiegend das unerwünschte cis-Diastereomer erzeugten. Überraschenderweise fanden die Erfinder jedoch, dass es tatsächlich möglich ist, das trans-Isomer in einer überwiegenden Ausbeute durch eine Enzymreduktion herzustellen, und es wurde eine Reihe von Mikroorganismen identifiziert, die Bakterien, Pilze und Hefe einschließen, die geeignet sind, die Verbindung (I) zu dem gewünschten trans-Alkohol (II) zu reduzieren.
  • Die Erfindung umfasst ein Verfahren, in dem eine Verbindung der Formel
    Figure 00040001
    in der X ein Wasserstoffatom oder eine Gruppe der Formel -SO2NH2 ist,
    dadurch in eine Verbindung der Formel
    Figure 00040002
    umgewandelt wird, dass sie bei einem pH von 2 bis 5 mit einem Enzymreduktionssystem in Kontakt gebracht wird, in dem mehr von dem 4S,6S-Isomer als dem cis-4R,6S-Isomer hergestellt wird. Geeignete Systeme umfassen ein geeignetes Oxidoreduktaseenzym und die reduzierte Form eine Cofaktors für das Enzym. Das Enzymreduktionssystem kann als ganze oder aufgebrochene Zellen geeigneter Mikroorganismen zur Verfügung gestellt werden.
  • Mit dem Begriff „selektiv" ist gemeint, dass mehr von dem trans-(4S,6S)-Isomer als von dem cis-(4R,6S)-Isomer hergestellt wird. Bevorzugt macht das trans-Isomer mindestens 60% und mehr, bevorzugter mindestens 80%, zum Beispiel mindestens 90% des Produkts aus.
  • Die Erfinder fanden, dass die Stereospezifität des Verfahrens durch den Betrieb unter sauren Bedingungen verbessert wird, und das Verfahren wird bei einem pH-Wert von 2 bis 5 durchgeführt. Mikroorganismen, die die Enzymreduktionssysteme enthalten, sind gegenüber solchen Bedingungen überraschenderweise beständig.
  • Geeignete Oxidoreduktasen können mittels eines Screeningverfahrens gefunden werden. Beispiele geeigneter Reduktasen stellen diejenigen aus Lactobacillus plantarum NCIMB 40027, Pichia haplophila CBS 2008, Candida utilis NCYC 322, Lactobacillus buchneri NCIMB 8818, Aspergillus flavus oryzae IMI 51983 oder insbesondere die aus Neurospora crassa IMI 19419 dar.
  • Im allgemeinen ergeben die Bäcker- und Bierhefen das unerwünschte cis-Produkt.
  • Der Cofaktor kann zum Beispiel NADH, NADPH, FADH, FMNH und/oder PQQ oder irgendein Cofaktor sein, der mit dem vorstehend erwähnten Enzym in einem Mikroorganismus auftritt. Bevorzugt ist ebenfalls ein Mittel anwesend, um den Cofaktor kontinuierlich zu reduzieren.
  • Das Enzym und der Cofaktor können auf sehr geeignete Weise als aufgebrochene oder bevorzugt ganze Zellen eines geeigneten Mikroorganismus zugeführt werden, und die Zellen können mit einem geeigneten Substrat zugeführt werden, zum Beispiel einem Kohlenhydrat, insbesondere einem Zuckersubstrat, zum Beispiel Glucose, Fructose oder Saccharose oder Glycerol oder Milchsäure. Solche Zellen umfassen im allgemeinen ein Mittel, um den Cofaktor unter Verwendung des Substrats zu reduzieren.
  • Das Verfahren wird geeigneterweise bei einer Temperatur von 20°C bis 40°C bevorzugt in einem wässrigen Medium, in dem der pH-Wert 2 bis 6 und bevorzugt 3 bis 5 beträgt, durchgeführt und die Konzentrationen des Reaktanten betragen geeigneterweise 5 g/Liter bis 10 g/Liter. Das Substrat, z. B. Glucose, ist geeigneterweise in einer Konzentration von 5 g/Liter bis 50 g/Liter anwesend und andere Nährstoffe, zum Beispiel Hefeextrakt, können anwesend sein.
  • Beispiel 1
  • Reduktion des Ketons (I) (wobei X = H) unter Verwendung eines Tetrahydrofuran-Boran-Komplexes.
  • In einen 250 ml Rundkolben, der im Ofen getrocknet worden war, wurde das Keton (I) (500 mg) gegeben und der Headspace wurde mit trockenem Stickstoff gespült. Zu dem Kolben wurden 25 ml wasserfreies Tetrahydrofuran gegeben und die resultierende Lösung wurde auf Eis gerührt, um die Temperatur auf 5°C abzukühlen. Der Tetrahydrofuran-Boran-Komplex (1,0 molar, 3 ml) wurde über einen Zeitraum von 15 Minuten tropfenweise zugegeben, wobei die Temperatur auf 5°C gehalten wurde. Nach der Beendigung der Zugabe des Tetrahydrofuran-Boran-Komplexes wurde die Mischung für weitere 30 Minuten gerührt, wobei es ihr gestattet wurde Raumtemperatur anzunehmen. Das übriggebliebene Tetrahydrofuran-Boran wurde mit Methanol (25 ml) gequencht, 30 Minuten lang gerührt, und dann wurden weitere 50 ml Methanol zugegeben. Das Produkt wurde durch Abziehen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck gewonnen. Das Produkt wurde mittels Hochdruckflüssigchromatographie (HPLC) unter Verwendung einer Nova-Pak-C10-Säule (3,9 mm Innendurchmesser × 300 mm) analysiert. Das Produkt und das Ausgangsmaterial wurden unter Anwendung eines Lösungsmittelgradienten, der aus 20 mM wässriger Phosphorsäure und Acetonitril bestand, unter den nachstehenden Bedingungen eluiert: Zeit: Null bis 10 Minuten, wässrige Phosphorsäure (20 mM), 92,5 : Acetonitril 7,5%; Zeit: 10 bis 25 Minuten, die Acetonitrilkonzentration wurde linear auf 27,5% erhöht, während die wässrige Phosphorsäure auf 72,5 erniedrigt wurde. Die Fließgeschwindigkeit des Lösungsmittels betrug 1,0 ml/Minute. Die Alkohole wurden nach 16 Minuten (cis) und 17 Minuten (trans) eluiert, während das Keton nach 24 Minuten eluiert wurde. Eine Analyse der erhaltenen Probe, die wie vorstehend beschrieben durchgeführt wurde, ergab eine Ausbeute der kombinierten Alkohole von 89% mit einem cis : trans-Verhältnis von 9 : 1.
  • Beispiel 2 (veranschaulichend)
  • Reduktion des Keton (I) (wobei X = H) unter Verwendung ganzer Zellen des Bakteriums Lactobacillus plantarum.
  • Zellen von L. plantarum NCIMB 40027 wurden in einem Oxoid MRS-Medium gezüchtet (als ein vorformuliertes Pulver von Unipath Ltd. Basingstoke, England, erhalten).
  • Acht konische Zwei Liter-Kolben, die jeweils 1,5 Liter Medium enthielten, wurden mit L-plantarum NCIMB 40027 angeimpft und auf einem rotierenden Schüttelapparat 24 Stunden lang bei 28°C inkubiert. Die Zellen wurden mittels Zentrifugierens gewonnen und durch Resuspendieren in 100 mM Natrium/Kaliumphosphat-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 7,0 gewaschen.
  • Auf die Rezentrifugierung folgend wurden die Zellen in 500 ml Natrium/Kaliumphosphat-Pufferlösung (100 mM, pH-Wert 7,0) in einer Konzentration von 33 g/Liter resuspendiert und in einen konischen 1 Literkolben gegeben. 1,25 g Keton (II) wurden in 2,5 ml Aceton gelöst und zusammen mit 25 g Glucose zu der Zellsuspension gegeben. Die Mischung wurde auf einem rotierenden Schüttelapparat 24 Stunden lang bei 28°C inkubiert. Die Zellen wurden mittels Zentrifugierens entfernt und der Überstand mit 500 ml Dichlormethan extrahiert. Die wässrige Phase wurde dann mit Natriumsulfat gesättigt und mit 500 ml Dichlormethan reextrahiert. Die kombinierten Dichlormethanextrakte wurden mit wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel wurde mittels eines Rotationsverdampfers abgezogen, wodurch eine Mischung aus Alkohol und übriggebliebenem Keton (I) erhalten wurde. Der Alkohol wurde mittels Flashchromatographie (flash chromatography) auf einem im Handel erhältlichen Kieselgel (Merck Kieselgel 60) (70– 230 mesh ASTM) durch Elution mit Ethylacetat : Hexan (87,5 : 12,5, bezogen auf das Volumen) gereinigt, wodurch 349 mg trans-Alkohol (II) und 41 mg cis-Alkohol (IV) erhalten wurden, wie durch das Verfahren aus Beispiel 1 ermittelt wurde.
  • Beispiel 3 (veranschaulichend)
  • Reduktion des Ketons (I) (wo X = H) unter Verwendung des Myzels des Pilzes Neurospora crassa.
  • Neurospora crassa IMI 19419 wurde in einem Mineralsalzmedium gezüchtet, das die nachstehenden Bestandteile (g/Liter) enthielt: Glucose: 20, Hefeextrakt: 2, Dikaliumhydrogenphosphat: 1,9, Natriumdihydrogenphosphat: 1,56, Ammoniumsulfat: 1,8; Magnesiumsulfat-Heptahydrat: 0,1, Eisentrichlorid: 0,001, Calciumcarbonat: 0,002, Zinksulfat-Heptahydrat: 0,0001, Mangansulfat-Tetrahydrat: 0,0001. Konische Zwei Literkolben, die einen Liter Medium enthielten, wurden mit Sporen von Neurospora crassa angeimpft und 48 Stunden lang bei 28°C auf einem Orbital-Schüttelapparat (orbital Shaker) inkubiert. Das Myzel wurde mittels Filtration mit einem Whatman Grade 113 Filterpapier gewonnen und mit Wasser gewaschen. Das Myzel wurde mit einer Konzentration von 20 g Trockengewicht/Liter in 9,37 ml Natrium/Kaliumphosphat-Pufferlösung (pH 7,0 oder pH 8,0, 100 mM) resuspendiert und in 15 ml Schraubverschlussfläschchen überführt. Zu den Fläschchen wurde Glucose (0,5 ml einer 50%igen Lösung) und eine Lösung des Ketons (I), 65 mg gelöst in Aceton (0,13 ml), gegeben. Die Fläschchen wurden dicht verschlossen und unter Schütteln 21 Stunden lang bei 28°C inkubiert. Eine Analyse der zellfreien Überstände mittels HPLC (wie in Beispiel 1 beschrieben} ergab eine quantitative Umwandlung des Ketons in Alkohol, sowohl bei einem pH-Wert von 7,0 als auch einen pH-Wert von 8,0. Bei einem pH-Wert von 7,0 betrug das Verhältnis trans-Alkohol (II): cis-Alkohol (IV) 94 : 6, während es bei einem pH-Wert von 8,0 89 : 11 betrug.
  • Beispiel 4
  • Reduktion des Ketons (I) (wo X = H) unter Verwendung ganzer Zellen der Hefe Pichia haplophila CBS 2008.
  • Zellen von Pichia haplophila CBS 2008 wurden in dem in Beispiel 3 beschriebenen Medium aus Mineralsalzen, Glucose und Hefeextrakt gezüchtet. Mit Trennböden versehene (baffled) konische Zwei Liter-Kolben, die 400 ml Medium enthielten, wurden mit der Hefe angeimpft und 48 Stunden lang bei 28°C auf einem Orbital-Schüttelapparat inkubiert. Zellen wurden aus der Kultur durch Zentrifugieren gewonnen und durch erneutes Suspendieren in einer 100 mM Citrat/Phosphat-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 5,0 gewaschen. Die Zellen wurden dann in einer Endkonzentration von 6 g Trockengewicht/Liter in der Citrat/Phosphat-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 5,0 gelöst und 10 ml wurden in ein 20 ml Schraubverschlussfläschchen gegeben. Zu dem Fläschchen wurden Glucose (0,2 ml einer 50%igen Lösung) und 14,5 mg Keton (I), gelöst in 25 μl Aceton, gegeben. Die Mischung wurde 22 Stunden lang bei 28°C auf einem Orbital-Schüttelapparat inkubiert, die Zellen wurden mittels Zentrifugierens entfernt und der Überstand wurde mittels HPLC wie in Beispiel 1 beschrieben analysiert. Der gewonnene Überstand enthielt kein übriggebliebenes Keton, 0,65 mg cis-Alkohol (IV) und 12,13 mg trans-Alkohol (II).
  • Beispiel 5 (veranschaulichend)
  • Beispiel 4 wurde unter Verwendung der in der nachstehenden Tabelle gezeigten Mikroorganismen wiederholt, außer dass die Zellen in einer Na/K-Phosphat-Pufferlösung (pH-Wert 7) (100 mM) suspendiert wurden. Die Zellkonzentrationen betrugen 10–30 g Trockengewicht/Liter.
  • Die Umwandlungen des zugeführten Ketons und der Prozentsatz an trans-Isomer in den reduzierten Gesamtprodukten sind in Tabelle 1 gezeigt.
  • TABELLE 1
    Figure 00100001
  • Figure 00110001
  • Beispiel 6
  • Abhängigkeit der Racemisierung des Ketons (I) (wo X = H) vom pH-Wert.
  • Eine 50% w/w-Lösung des Keton (I) in Aceton wurde hergestellt (der Enantiomerüberschuß des (6S)-Ketons betrug 98,0%). In getrennte Fläschchen wurden 2 ml der nachstehenden wässrigen Pufferlösungen gegeben (jede mit 50 mg Glucose ergänzt, um Biotransformationsbedingungen zu imitieren) -Natriumacetat (0,1 M), pH-Wert 4,3; Natriumcitrat (0,1 M), pH-Wert 5,0; Kaliumphosphat (0,1 M), pH-Wert 6,5; Natriumborat (0,05 M); pH-Wert 9,0.
  • Zu den Pufferlösungen wurden 10 mg Keton I (als Lösung in Aceton) gegeben, die Fläschchen wurden verschlossen und unter Schütteln bei einer Temperatur von 28°C aufbewahrt. In bestimmten Zeitabständen wurden die Fläschchen mit Ethylacetat extrahiert (zweimal 1 ml), die organische Schicht abgetrennt, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Keton wurde durch die Entfernung des Lösungsmittels mit einem Strom aus trockenem Stickstoff gewonnen. Die optische Reinheit des gewonnenen Ketons wurde mittels Hochdruckflüssigchromatographie (HPLC) unter Verwendung einer Chiralcel O.D.-Säule (0,46 mm Innendurchmesser × 250 mm) mit Hexan : Ethanol (9 : 1) als Elutionsmittel ermittelt, wobei die Strömungsgeschwindigkeit des Elutionsmittels 1 ml/Minute betrug und die Ermittlung bei einer UV-Absorption bei 240 mm erfolgte. Das (R)-Enantiomer wurde in 22,5 Minuten eluiert, wohingegen das (S)-Enantiomer in 24,2 Minuten eluiert wurde. Die Fläschchen wurden gesondert zu bestimmten Zeitpunkten extrahiert. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt. TABELLE 2 – ABHÄNGIGKEIT DER RACEMISIERUNG DES KETONS (I) VOM pH-WERT Enantiomerüberschuß an (6S)-Keton
    Figure 00130001
    • n.e.:
    nicht ermittelt.
  • Beispiel 7
  • Reduktion des Ketons (I) (wo X = H) unter der Verwendung des Myzels des Pilzes Neurospora crassa, bei einem pH-Wert, der auf 4 gehalten wurde.
  • Neurospora crassa IMI 19419 wurde in einem Braun Biostat ED-Fermenter (15 Liter Arbeitsvolumen) gezüchtet. Das Medium enthielt die nachstehenden Bestandteile (g/Liter):
  • Glucose: 40, Hefeextrakt: 2, Magnesiumsulfat-Heptahydrat: 1,2; Dikaliumsulfat: 0,21; Kaliumdihydrogenphosphat: 0,69; Phosphorsäure: 1,7; Eisentrichlorid: 0,05, Calciumcarbonat: 0,07, Zinksulfat-Heptahydrat: 0,0035, Mangansulfat-Tetrahydrat: 0,0035; Polypropylenglycol-Antischaummittel: 2. Um die Lösung vor dem Animpfen auf einen pH-Wert von 6,5 einzustellen, wurde Ammoniumhydroxid verwendet. Der Fermenter wurde mit 400 ml der Kultur angeimpft, die zuvor 24 Stunden lang unter Verwendung des Mediums und der Wachstumsbedingungen, wie sie in Beispiel 3 beschrieben sind, gezüchtet worden war. Während der Fermentation wurden die nachstehenden Parameter auf die angegebenen Werte eingestellt: Temperatur 28°C; pH-Wert 6,5, Luftstrom 7,5 Liter/Minute, Rührgeschwindigkeit 400 rpm. Die Kultur wurde unter diesen Bedingungen 30 Stunden lang gezüchtet, wobei die Myzelkonzentration einen Wert von 8,2 g Trockengewicht/Liter erreichte. An diesem Punkt wurde die Temperatur auf 34°C erhöht, wobei die Rührgeschwindigkeit automatisch so eingestellt wurde, um eine Spannung des gelösten Sauerstoffs von 40%-Sättigung beizubehalten, und 2 molare Salzsäure zu dem Fermenter gegeben wurde, um die Kultur auf einen pH-Wert von 4,0 einzustellen.
  • 107 g Keton (I) wurden in 300 ml Aceton gelöst. Die Acetonlösung des Ketons wurde über einen Zeitraum von 13 Stunden in kleinen aliqoten Teilen (15–30 ml) zu dem Fermenter gegeben. Die Geschwindigkeit der Zugabe des Ketons wurde so eingestellt, dass die Gleichgewichtskonzentration des Ketons unterhalb von 0,2 g/Liter blieb. Dies wurde unter Verwendung des in Beispiel 1 beschriebenen HLPC-Verfahrens überwacht.
  • Nachdem das Keton vollständig umgewandelt worden war, wurde die Kulturbrühe aus dem Fermenter entnommen und mittels eines Whatman 113-Filterpapiers filtriert. Das wässrige Filtrat wurde zweimal mit 0,5 Volumen Ethylacetat extrahiert. Das Lösungsmittel wurde unter Verwendung wasserfreien Natriumsulfats getrocknet und dann durch Vakuumdestillation abgezogen, um 90,9 g Alkohol zu ergeben.
  • Die relativen Konzentrationen der vier Diastereoisomeren des Produktalkohols wurden unter Verwendung zweier getrennter HPLC-Verfahren ermittelt. Das erste Verfahren verwendete als chirale stationäre Phase Chiralcel O.D. (4,6 mm Innendurchmesser × 250 mm), als Elutionsmittel Hexan : Ethanol (9 : 1), als Fließgeschwindigkeit des Elutionsmittels 1,0 ml/Minute; die Ermittlung erfolgte durch UV-Absorption bei 250 mm. Die Retentionszeiten betrugen: (4S,6S)- und (4R,6R)-traps-Alkohole coeluiert nach 16,0 Minuten; (4R,6S)-cis-Alkohol 16,8 Minuten und (4S,6R)-cis-Alkohol 19,0 Minuten.
  • In dem zweiten Verfahren wurden die Derivate durch Umsetzen der Alkohole mit (S)-α-Methoxy-α-(trifluormethyl)phenylacetylchlorid gemäß dem Verfahren von Dale, Dull und Mosher, J. Org. Chem. 34, (9), 2543–2549 (1969) hergestellt. Die Derivate wurden unter Verwendung einer Zorbax-Silicasäule (4,6 mm Innendurchmesser × 250 mm) getrennt; Elutionsmittel: Hexan : Ethylacetat (9 : 1); Fließgeschwindigkeit des Elutionsmittels 2,0 ml/Minute; die Ermittlung erfolgte durch UV-Absorption bei 260 nm. Die Retentionszeiten betrugen: (4R,6R)-traps-Alkohol 20,1 Minuten; (4S,6S)-traps-Alkohol und (4S,6R)-cis-Alkohol coeluiert nach 22,5 Minuten; (4R,6S)-cis-Alkohol 23,7 Minuten.
  • Die Ergebnisse der chromatographischen Analyse sind in Tabelle 3 gezeigt. TABELLE 3 – VERHÄLTNIS DER DIASTEREOISOMEREN DES ALKOHOLS (II) 1) Direkte Analyse auf Chiralcel O.D.
    Diastereoisomer Prozentsatz an Gesamtalkohol
    (4R, 6S) 0,8%
    (4S, 6R) 0,3%
    (4S, 6S) plus (4R, 6R) 98,9%
    2) MTPA-Derivatanalyse
    Diastereoisomer Prozentsatz an Gesamtalkohol
    (4R, 6S) 0,7%
    (4R, 6R) 0,1%
    (4S, 6S) plus (4S, 6R) 99,2%
  • IMI – International Mycological Institute, Ferry Lane, Kew, Surrey United Kingdom TW9 3OR
  • NCIMB – National Collection of Industrial and Marine Bacteria Ltd 23 St Machar Drive, Aberdeen United Kingdom AB2 1RY
  • ATCC – American Type Culture Collection, 12301 Parklaven Drive Rockville, Maryland 20852 United States of America
  • CBS – Centraal Bureau voor Schimmelcultures, Oosterstraat 1 3470 A G Baarn, Netherlands
  • IFO – Institute for Fermentation, 17–58 Juso-honmachi 2-chome Yodogawa-ku, Osaka 532, Japan
  • NRRL – Agricultural Research Service Culture Collection 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604 USA
  • NCYC – National Collection of Yeast Cultures, The Food Research Institute, Colney Lane, Norwich, United Kingdom NR4 7UA 93TJL13S/MS – 20 Sep 1993

Claims (9)

  1. Verfahren, in dem eine Verbindung der Formel
    Figure 00170001
    in der X ein Wasserstoff oder eine Gruppe der Formel -SO2NH2 ist, dadurch in eine Verbindung der Formel
    Figure 00170002
    umgewandelt wird, dass sie bei einem pH von 2 bis 5 in Kontakt mit einem enzymatischen Reduktionssystem gebracht wird, in dem mehr von dem trans-4S,6S-Isomer als dem cis-4R,6S-Isomer hergestellt wird.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, in dem das enzymatische Reduktionssystem in Form ganzer oder aufgebrochener Zellen eines geeigneten Mikroorganismus zur Verfügung gestellt wird.
  3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, in dem mindestens 90% des Produkts aus dem 4S,6S-Isomer besteht.
  4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, in dem das enzymatische Reduktionssystem eine Reduktase aus Lactobacillus plantarum, Pichia haplophila, Candida utilis, Lactobacillus buchneri, Aspergillus flavus oryzae oder insbesondere diejenige aus Neurospora crassa ist.
  5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, in dem das Enzymsystem in Form ganzer Zellen eines geeigneten Mikroorganismus zugeführt und ein Substrat bereitgestellt wird, dessen Verwendung die Reduktion eines Cofaktors für das Enzym in dem enzymatischen Reduktionssystem gestattet.
  6. Verfahren nach Anspruch 5, in dem das Substrat Glucose, Fructose, Saccharose, Glycerol oder Milchsäure ist.
  7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, in dem die Temperatur 20°C bis 40°C beträgt.
  8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, in dem die Glucosekonzentration 5 bis 50 g/Liter beträgt.
  9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, in dem 5 bis 10 g des Reaktanten pro Liter vorhanden sind.
DE69305748T 1992-08-28 1993-08-20 Enzymatisches asymetrisches reduktionsverfahren zur herstellung von 4h thieno (2,3-6) thiopyren derivaten. Expired - Lifetime DE69305748T3 (de)

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