DE68926025T2

DE68926025T2 - Methode zur Herstellung von alpha-Amylase hemmenden Substanzen aus Weizen

Info

Publication number: DE68926025T2
Application number: DE68926025T
Authority: DE
Inventors: Koji Maeda; Yoshitaka Satoh
Original assignee: Nisshin Seifun Group Inc
Current assignee: Nisshin Pharma Inc
Priority date: 1988-12-09
Filing date: 1989-12-06
Publication date: 1996-09-05
Anticipated expiration: 2009-12-07
Also published as: JPH02157296A; EP0372523A3; DE68926025D1; US5084275A; EP0372523B1; JP2757404B2; EP0372523A2

Description

Hintergrund der Erfindung

Gebiet der Erfindung

Diese Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer α-Amylaseinhibierenden Substanz aus der überstehenden Flüssigkeit eines wäßrigen Extrakts von Weizen oder Weizenmehl.

Beschreibung des Stands der Technik

Es ist bekannt, daß Weizen oder Weizenmehl eine große Menge an α-Amylaseinhibierenden Substanzen enthält. Solche Substanzen inhibieren die Umwandlung von Stärke zu Sacchariden, sogar wenn Keimung von Weizensamen unter solchen Wetterbedingungen wie viel Regen in der Erntesaison auftritt, wodurch Qualitätsverschlechterung des geernteten Weizens verhindert wird.
Einerseits ist α-Amylase ein Enzym, das in der Lage ist, statistisch die α- 1,4-Glycosid-Bindungen von z.B. Stärke und Glycogen zu hydrolysieren, das verbreitet in z.B. Tieren, Pflanzen, Schimmel und Bakterien verteilt vorkommt. Im Menschen existiert OL-Amylase aus Speichel und α-Amylase aus Pankreas, die jeweils eine Rolle bei der Umwandlung von Stärke zu Sacchariden im Mund und im Verdauungstrakt spielen. Weil die α-Amylaseinhibierende Substanz die Aktivität von α-Amylase inhibiert, ist sie beispielsweise nützlich als Diätmittel für die Verhinderung von Fettleibigkeit, als therapeutisches Mittel für Hyperglykämie und Diabetes und als prophylaktisches Mittel für Dentalkaries.
Unter diesen Umständen wurden viele Versuche unternommen, einen α-Amylase Inhibitor durch Extraktion aus verschiedenen Rohmaterialien herzustellen. Es gibt bekannte Methoden für die Extraktion aus Betelnüssen (japanische Patent LOP Veröffentlichung Nr. 185995/1988) und eine Methode für die Extraktion einer in Weizen enthaltenen α-Amylase-inhibierenden Substanz (japanische Patent LOP Veröffentlichung Nr. 140727/1982). JP-A-60-4132 offenbart ein Verfahren für die Herstellung einer α-Amylase-inhibierenden Substanz, das Wärmebehandlung einer überstehenden Fraktion eines wäßrigen Extrakts von Weizen oder Weizenmehl bei einer Temperatur von 50 bis 70ºC, Bildung und Wiederauflösung eines Niederschlags, Gelchromatographie und Ionenaustauschchromatographie der erhaltenen Lösung umfaßt.
Die Verfahren zur Herstellung einer α-Amylase-inhibierenden Substanz aus Weizen oder Weizenmehl entsprechend dem Stand der Technik schließen eine sehr komplizierte Operation ein, die Wärmebehandlung eines wäßrigen Extrakts von Weizen oder Weizenmehl, fraktionierte Ausfällung der resultierenden Masse mit einem organischen Lösungsmittel, Sammeln der ausgefällten Fraktion, Behandlung einer Lösungsfraktion mit einem Adsorbens, Eluieren einer adsorbierten Substanz mit einer Salzlösung und Fraktionierung eines Eluats durch Chromatorgraphie umfaßt. Diese Verfahren sind nicht effizient und ökonomisch für die Herstellung von α-Amylaseinhibierenden Substanzen.
Bei der Herstellung Weizen-Gluten und Weizen-Stärke wurde eine große Menge von Waschwasser (Abfallflüssigkeit) bei einer Stufe des Eluierens von Stärke aus Teig oder durch Kneten von Mehl und Wasser geformter Masse produziert. Eine Behandlung von Abfallflüssigkeit erfordert viel Aufwand und Kosten. Diese Behandlung schließt ein lästiges Problem in der Industrie ein. Da solche Abfallflüssigkeit α-Amylase-inhibierende Substanzen enthält, würde die Isolierung dieser Substanzen aus der Abfallflüssigkeit den kombinierten Effekt der Entsorgung der Abfallflüssigkeit und der Isolierung wertvoller Substanzen verursachen.

Zusammenfassung der Erfindung

Die vorliegende Erfindung ist gerichtet auf ein Verfahren zur Herstellung einer α-amylase-inhibierenden Substanz aus Weizen, welches umfaßt Wärmebehandlung einer überstehenden Fraktion eines wäßrigen Extrakts von Weizen oder Weizenmehl bei einer Temperatur von 70 bis 95º0 zur Modifizierung unnötiger Protein-Kontaminanten in der überstehenden Fraktion, Entfernung eines modifizierten Proteins aus dieser Fraktion, und Durchführung einer Konzentrationsbehandlung mit der resultierenden Substanz unter Verwendung einer Ultrafiltrationsmembran, wobei die der Wärmebehandlung folgenden Stufen durchgeführt werden, wenn die überstehende Flüssigkeit noch heiß ist, mit einer Temperatur von mindestens 70ºC.

Kurze Beschreibung der Zeichnungen

Figur 1 ist ein Graph, der jeweils die Änderungen des Blutglucose-Spiegels in Mäusen nach der Verabreichung von destilliertem Wasser, löslicher Stärke und löslicher Stärke plus einem in Beispiel 1 erhaltenen pulvrigen Produkt zeigt.

Detailierte Beschreibung der Erfindung

Im erfindungsgemäßen Verfahren kann die α-Amylase-inhibierende Substanzen enthaltende wäßrige Lösung einer Filtrations- und Sterilisationsbehandlung vor der Konzentrationsbehandlung unter Verwendung einer Ultrafiltrationsmembran unterworfen werden. Darüber hinaus kann die konzentrierte α-Amylase-inhibierende Substanzen enthaltende Lösung mit üblichen Methoden wie Sprühtrocknen, Gefriertrocknen oder Vakuumtrocknen zur Bildung eines pulvrigen Produkts getrocknet werden.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung umfaßt das Verfahren die folgenden Stufen.
(a) Weizenmehl und Wasser in einem Verhältnis von mindestens 7:1 werden bei einer Temperatur von 0 bis 40ºC während einer Dauer von 30 Minuten bis 3 Stunden geknetet, gefolgt von Zentrifugieren (z.B. 3000 G, 30 Minuten) oder gefolgt von Stehenlassen zur Herstellung einer überstehenden Flüssigkeit. Die überstehende Flüssigkeit enthält lösliche Substanzen wie lösliches Protein, lösliche Stärke, anorganische Salze und Farbstoffe.
(b) Die überstehende Flüssigkeit wird bei einer Temperatur von 70 bis 95ºC, bevorzugt 85 bis 90ºC zur Modifizierung unnötiger Proteine erhitzt. Die modifizierten Proteine werden durch Zentrifugieren (z.B. 3000 G, 30 Minuten) oder Stehenlassen entfernt.
(c) Die resultierende überstehende Flüssigkeit wird zur Herstellung einer klaren Lösung filtriert, solange sie noch heiß ist, bevorzugt durch Filter mit einer Porengröße von jeweils 3 pm und 1 µm.
(d) Anschließend wird die Lösung durch eine Mikrofiltrationsmembran mit einer Porengröße von 0,2 µm zur Sterilisation geleitet.
(e) Die α-Amylase-inhibierende Substanzen enthaltende sterilisierte Lösung wird unter Verwendung einer Ultrafiltrationsmembran konzentriert (bevorzugt eine Membran, die eine Fraktion mit einem Molekulargewicht von mehr als 20000 bis weniger 100000 durchläßt). Anorganische Salze und unnötige niedermolekulargewichtige Substanzen werden entfernt, aber α-Amylase-inhibierende Substanzen passieren diese Membran nicht. In dieser Stufe wird das Volumen der klaren Lösung auf weniger als etwa 1/10 des ursprünglichen Volumens konzentriert.
(f) Gegebenenfalls wird die konzentrierte Lösung mit einer bekannten Methode wie Sprühtrocknen, Gefriertrocknen oder Vakuumtrocknen zur Herstellung eines pulvrigen Produkts getrocknet.
Die in der Stufe (a) verwendete überstehende Flüssigkeit kann eine von der gekneten Lösung von Weizenmehl und Wasser zum Zweck der Isolierung α- Amylase-inhibierender Substanzen abgetrennte überstehende Lösung sein oder kann eine Abfallflüssigkeit nach der Isolierung von Gluten und Stärke aus Weizen sein.
Bei der Herstellung von Gluten und Weizenstärke wurde Martin's oder Batter's Methode verwendet. Ein Teil des in dieser Methode verwendeten Wassers wird als Feuchtigkeit aus dem Herstellungssystem entnommen, um das Gluten in seinem nassen Zustand zu halten, oder als im Stärkekuchen enthaltende Feuchtigkeit. Die Menge an ausgeführtem Wasser ist lediglich gering, und das meiste Wasser wird als Abfallflüssigkeit entsorgt. Da solche Abfallflüssigkeit eine große Menge hochmolekularen organischen Materials wie Kohlenhydrate und Proteine in roher Form enthält, ist die wirksame Verwendung davon vorteilhaft unter dem Gesichtspunkt der Flüssigabfallbehandlung.
Martin's und Batter's Methoden sind eine Methode, die die Stufen des Knetens von Weizenmehl mit Wasser zur Bildung von Teig oder Masse, Altern zu gründlichen Hydratisierung von Gluten, wiederholtes Waschen des Teigs mit zugegebenen Wasser, Abtrennen von Gluten und Stärkemilch (Glutenwaschflüssigkeit) und Isolierung von Stärke aus der Stärkemilch durch solche Mittel wie mechanische Trennung umfassen. In diesem Fall enthält die Abfallflüssigkeit die in Weizenmehl vorhandenen α-Amylase inhibierenden Substanzen. Daher kann solche Abfallflüssigkeit als nützliches Ausgangsmaterial im erfindungsgemäßen Verfahren eingesetzt werden.
Die durch die Verfahren entsprechend der Erfindung hergestellten OL-Amylase inhibierenden Substanzen sind wärmebeständige enzymatische Substanzen und werden beim Erhitzen nicht denaturiert. Diese Eigenschaft wird erfindungsgemäß gut genutzt zur Entfernung von Proteinkontaminanten und anderen enzymatischen Substanzen. Wenn die überstehende Flüssigkeit in der obigen Stufe (b) bei einer Temperatur von 70 bis 95 ºC erhitzt wird, erleiden wasserlösliche Proteine und andere enzymatische Substanzen Wärmemodifikation und bilden hauptsächlich schlammige Niederschläge. Solche modifizierten Proteine können einfach durch Stehenlassen oder Zentrifugieren abgetrennt werden. In dieser Stufe kann der Anteil an Protein-Kontaminanten auf 1/2 bis 1/5 ohne Verlust der α-Amylaseinhibierenden Substanzen reduziert werden.
Nach Stufe (b) wird die α-Amylase-inhibierende Substanz enthaltende Lösung gegebenenfalls den Stufen (c) und (d) zur Entfernung fester Kontaminanten und mikrobieller Körper unterworfen, falls anwesend.
Eine der charakteristischen Merkmale des Verfahrens entsprechend der Erfindung liegt in der folgenden Stufe (e). In dieser Stufe wird Ultrafiltration zur Entfernung anorganischer Salze, Saccharide, Aminosäuren und anderer unnötiger niedermolekulargewichtiger Substanzen durchgeführt, während die gewünschten α-Amylase-inhibierenden Substanzen zurückbleiben, die konzentriert werden.
Die in der Erfindung verwendeten Ultrafiltrationsmembranen schließen solche aus Polyacrylnitril-, Polyolefin-, Polysulfon-, Polyimid- oder Polypropylenmaterialien ein, jeweils mit einem Fraktionierungsmolekulargewicht von 5000, 6000, 8000, 10000, 13000, 20000, 30000, 50000, 100000 und 200000 Dalton cut-off. Eine Polysulfon- Ultrafiltrationsmembran mit einem Fraktionierungsmolekulargewicht von 100000 Dalton cut-off (z.B. PM-100 , hergestellt von Romicon Co., Ltd., NTU 35100 , hergestellt von Nitto Denko Co., Ltd.) ist bevorzugt im Hinblick auf Handhabbarkeit und Konzentrationseffizienz.
Anschließend an Stufe (e) wird die konzentrierte Lösung der Stufe (f) unterworfen, falls notwendig. Diese Stufe (f) kann ein pulveriges Material produzieren, das leicht gehandhabt und gelagert werden kann. Die α-Amylase-inhibierenden Substanzen haben die Aktivitäten der Inhibierung von in Speichel und Pankreasflüssigkeit von Tieren enthaltenen α-Amylasen, was in Zersetzung von in Nahrung enthaltenen Stärkesubstanzen resultiert zur Verhinderung der Verdauung und Absorption als Energiequelle. Daher sind sie wirksam als Diätmittel, als therapeutische Mittel für Fettleibigkeit, Hyperglykämie und Diabetes und als vorbeugendes Mittel für Dentalkaries.
Repräsentative α-Amylase-inhibierende Substanzen, die durch die Verfahren der Erfindung hergestellt werden, haben die folgenden physikalischen Eigenschaften.

Zusammensetzung (pro 100 g der Pulver)

Feuchtigkeit 1,3 g - 3,3 g (Vakuumerhitzungs-Trocknungsmethode)
Protein 21,6 g - 17,8 g (Kjeldahl's Methode)
Asche 5,6 g - 7,8 g (direkte Verbrennungsmethode)
Natrium 624 mg - 139 mg (Atomabsorptionsspektrometrie)
Kalium 1,41 mg - 1,89 mg (Atomabsorptionsspektrometrie)
Magnesium 356 mg - 723 mg (Atomabsorptionsspektrometrie)
Chlor 1,43 g - 737 mg (Mohr's Methode)
Gesamt Saccharid 57,5 g - 56, 1 g (Somogyi's Methode)
Sulfatradikal 240 mg - 620 mg (Ionenchromatographie)
α-Amylase-inhibierende Aktivität (Blau-Stärke-Methode)
Speicheltyp 5-1 U/mg Feststoff
Prankreasflüssigkeits-Typ 3-0,1 U/mg Feststoff
Die durch die erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten α-Amylaseinhibierende Substanzen enthaltende wäßrige Lösung oder Festsubstanz können intakt als Diätmittel verwendet werden oder kann weiter zu flüssigen Präparaten und festen Präparaten wie Granulat und Tabletten gemeinsam mit üblichen Hilfstoffen formuliert werden. Die Hilfsstoffe schließen bekannte Exzipienten, Füllstoffe, Schmiermittel, Bindemittel, Duftstoffe, Farbmittel und andere Additive ein.
Zum Zweck der Verwendung als Diätmittel können die α-Amylase-inhibierende Substanzen enthaltenden Präparate in Form von Flüssigkeit, Tablette oder Granulat üblicherweise in einer Menge äquivalent 1000 U oder mehr, bevorzugt 3000 bis 30000 U der Speichel-α-Amylase-inhibierenden Substanz pro Tag bei Erwachsenen verabreicht werden.
Eine bevorzugte Herstellungsmethode ist eine Naßknetmethode, die umfaßt Zugabe von 15 bis 80 Gew.-%, bevorzugt 30 bis 50 Gew.-% Ethanol oder 15 bis 60 Gew.-%, bevorzugt 25 bis 45 Gew.-% einer gemischten Lösung von Wasser und Ethanol zu einer α-Amylase-inhibierende Substanz enthaltenden festen Substanz und Granulieren einer resultierenden Mischung zur Herstellung von Tabletten oder Granulat. Zur Verbesserung der Auflösung von Tabletten wird ein Aufschlußmittel bevorzugt in einer Menge von mindestens 10 Gew.-%, bevorzugt mindestens 25 Gew.-% zugegeben. Die Aufschlußmittel schließen Carboxymethylcellulose, Calciumcarboxymethylcellulose, Stärke, Hydroxypropylstärke, Lactose oder Calciumhydrogenphosphat oder eine Mischung davon ein.
Die Erfindung wird weiter durch die folgenden Beispiele illustriert.

Beispiel 1

Als Ausgangsmaterial wurde eine Abfallflüssigkeit von Weizenmehl nach der Entfernung von Gluten und Stärke verwendet. Die inhibierende Aktivität der Abfallflüssigkeit war 8,41 für humane Speichelamylase (U/mg Protein) und 3,55 für humanes Pankreasflüssigkeitsprotein (U/mg Protein). In 800 Liter der Abfallflüssigkeit wurde Dampf während einer Zeit von 15 Minuten eingeleitet, und die Flüssigkeit wurde auf 90ºC erhitzt. Anschließend wurden 900 Liter der resultierenden Lösung kontinuierlich zentrifugiert (3000 g) zur Entfernung modifizierter Proteine. Die resultierende klare überstehende Flüssigkeit wurde mit Filtern mit einer Porengröße von jeweils 3 µm und 1 µm filtriert und ergaben 850 Liter einer klaren Lösung. Die Lösung wurde dann durch eine Mikrofiltrationsmembran mit einer Porengröße von 0,2 µm zur Sterilisation geleitet. Die Lösung wurde dann unter Verwendung einer Romicon PM-100 Ultrafiltrationsmembran (Membranfläche 2,5 m², zwei Membranen) bis auf 1/10 des ursprünglichen Volumens konzentriert. Die Konzentrationstemperatur war 70ºC und der Einlaßdruck der Membran war etwa 2 kg/m². Die Lösung wurde während etwa 3 Stunden zirkuliert.
Anschließend wurde die konzentrierte Lösung sprühgetrocknet zur Herstellung von 4,1 g-Pulver. Die inhibierende Aktivität des Produkts war 11,8 für humane Speichelamylase (U/mg Protein) und 5,02 für humane Pankreasflüssigkeit-Amylase.

Beispiel 2

300 g der in Beispiel 1 erhaltenen Pulver und 120 g Ethanol wurden während 20 Minuten in einem Kneter geknetet ("PNV-5" , hergestellt von Irie Trading Co., Ltd.). Die geknetete Masse wurde unter Verwendung eines biaxialen Granulators ("EXD-60" , hergestellt von Fuji Powdal Co., Ltd.) granuliert (0,8 mm), bei 60ºC während 4 Stunden getrocknet und dann mit einem Brechgranulator ("Power Mill P-02S ", hergestellt von Sanei Manufacturing Co., Ltd. zur Bildung von Granulat gebrochen (14 Mesh).

Beispiel 3

300 g der in Beispiel 1 erhaltenen Pulver und 90 g einer gemischten Lösung von Wasser und Ethanol (Gewichtsverhältnis 4 : 6) wurden in einem Kneter während 20 Minuten geknetet ("PNV-5 , hergestellt von Irie Trading Co., Ltd.). Die geknetete Masse wurde (2 mm Gräten) unter Verwendung eines Brechgranulators ("Power Mill P-02S" , hergestellt von Sanei Manufacturing Co., Ltd.) granuliert, bei 60ºC während 4 Stunden getrocknet und in einem Brechgranulator ("Power Mill P-02S" , hergestellt von Sanei Manufacturing Co., Ltd.) gebrochen (20 Mesh). Zum Granulat wurden 9,0 g Sucrosefettsäureester ("Ryoto Sugar Ester 5-370" , hergestellt von Mitsubishi Kasei Corporation) gegeben, und die Mischung wurde unter Verwendung einer Tablettiermaschine zur Herstellung von Tabletten tablettiert ("Clean Press Collect 19" , hergestellt von Kikusui Manufacturing Co., Ltd.), wobei jede 309 mg wiegt.

Beispiel 4

Zu dem in Herstellungsbeispiel 1 erhaltenen Granulat wurde Hydroxypropylstärke oder Calciumcarboxymethylcellulose gegeben. Die Mischung wurde zur Bildung von Tabletten tablettiert.
Die Auflösung der Tabletten wurde entsprechend der Auflösungstestmethode beurteilt, beschrieben in Pharmacopoeia of Japan (revidierte Auflage XI). Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt. Tabelle 1 Konzentration von Aufschlußmittel und Aufschlußzeit (Minuten) Hydroxypropylstärke Calciumcarboxymethylcellulose

Beispiel 5

Der Einfluß auf Blutglucosespiegel wurde unter Verwendung von Mäusen untersucht (Alter: 6 Wochen, ddY-Spezies, männlich, 20-30 g) (Testgruppen von jeweils 6 Tieren).
Die Mäuse (normaler Blutglucosespiegel, etwa 200 mg Glucose/100 ml) wurde nach Fasten für 17 Stunden in den Test genommen. Der Blutglucosespiegel nach dem Fasten war 70 bis 80 mg Glucose/100 ml.
Eine wäßrige Lösung von löslicher Stärke (Wako Junyaku , erster Grad) wurde oral durch eine Magensonde gegeben. Die lösliche Stärke und ein im Beispiel 1 erhaltenes pulvriges Produkt wurden gründlich in einem Mörser gemischt und portionsweise mit destilliertem Wasser gemischt zur Herstellung einer wäßrigen Lösung für die Verabreichung. Bei Minuten 0, 15, 30, 45, 60, 120, 180 und 240 nach der Verabreichung wurden jeweils 50 µl Blut aus der Augenhintergrundkapillarvene durch Hematocrit Kapillarrohr (hegestellt von Terumo) entnommen. Das Kapillarrohr wurde an einem Ende versiegelt und das Rohr wurde 12000 Upm während 5 Minuten unter Verwendung einer Hochgeschwindigkeitszentrifuge für die Messung von Hämatokrit zur Abtrennung von Serum zentrifugiert ("KH-30A" , hergestellt von Kubota Co., Ltd.). Zur Messung der Blutglucosespiegel im Serum wurde RABA Mark II , Unikit Glucose E (hergestellt von Chugai Pharmaceuticals Co., Ltd.) verwendet. 20 µl des Serums wurden zu einer farbentwickelnden Lösung gegeben, die Mischung wurde während 5 Minuten bei 37ºC vorgewärmt und 50 gl einer Enzymlösung wurden dazugegeben Die Mischung wurde bei 37ºC während 20 Minuten zur Farbentwicklung gewärmt. Nach der Farbentwicklung wurde der Blutglucosespiegel unter Verwendung von RABA Mark II gemessen.
Da erwartet wurde, daß ein Anstieg im Blutglucosespiegel durch solche Verfahren wie orale Gabe durch eine Sonde und Abziehen von Blut durch die Augengrundvene induziert werden würde, wurde destilliertes Wasser oral als Kontrolle gegeben, und Blut wurde bei Minuten 0, 15, 30, 45, 60, 120, 180 und 240 nach der oralen Gabe zu Untersuchungen der Änderung des Blutglucosespiegels entnommen. Es wurde gefunden, daß ein Anstieg im Blutglucosespiegel auf etwa 50 mg Glucose/100 ml als Ergebnis der Operationen orale Gabe und Blutentnahme induziert wurde (vgl. Figur 1). Als nächstes wurde der durch lösliche Stärke verursachte Anstieg des Blutglucosespiegels untersucht, wobei festgestellt wurde, daß die orale Gabe von löslicher Stärke (2,5 g/kg) einen Anstieg im Blutglucosespiegel von etwa 200 mg Glucose/100 ml verglichen mit der Gabe von destilliertem Wasser verursachte. Der Anstieg im Blutglucosespiegel erreichte einen Peakspiegel (etwa 380 mg Glucose/100 ml) 30 Minuten nach der Gabe und sank im Laufe der Zeit (Figur 1). Andererseits erreichte, wenn lösliche Stärke (2,5 g/kg) und das in Beispiel 1 erhaltene pulverige Produkt (10 mg/Maus) oral gleichzeitig gegeben wurden, der Blutglucosespiegel einen Peakspiegel (300 mg Glucose/100 ml) 15 Minuten nach der Gabe, wobei der Peakspiegel um etwa 80 mg Glucose/100 ml niedriger war als der bei der Gabe von löslicher Stärke allein.

Akuter Toxizitätstest

Zu Gruppen von jeweils 5 ddY männlichen und weiblichen Mäusen (5 Wochen alt) wurden oral der wäßrige Extrakt von Weizenmehl (Experimentgruppe), rohes Weizenmehl (Kontrollgruppe) und destilliertes Wasser (Blindtest) gegeben, und die Mäuse wurden während 14 Tagen beobachtet. Die Tiere erhielten das Mittel in 10 % (m/v) wäßriger Lösung bei einer Dosis von 500 ml/kg. Keine toxischen Symptome wurden in irgendeiner Gruppe beobachtet.
Kein signifikanter Unterschied in Körpergewichtsänderungen wurde in den 3 Gruppen beobachtet. Weder grobe pathologische Änderungen noch Akkumulation des Mittels im Gewebe wurde beobachtet.

Claims

1. Ein Verfahren zur Herstellung eines eine α-Amylase-inhibierende Substanz enthaltenden Extrakts aus Weizen, welches umfaßt Wärmebehandlung einer überstehenden Fraktion eines wäßrigen Extrakts von Weizen oder Weizenmehl bei einer Temperatur von 70 bis 95ºC zur Modifizierung unnötiger Protein-Kontaminanten in der überstehenden Fraktion, Entfernen eines modifizierten Proteins aus dieser Fraktion und Durchführen einer Konzentrationsbehandlung mit der resultierenden Substanz Verwendung einer Ultrafiltratonsmembran, wobei die der Wärmebehandlung folgenden Stufen ausgeführt werden, wenn die überstehende Flüssigkeit noch heiß ist, bei einer Temperatur von mindestens 70ºC.

2. Ein Verfahren aus Anspruch 1, wobei die eine α-Amylase-inhibierende Substanz enthaltende wäßrige Lösung vor der Konzentrationsbehandlung unter Verwendung einer Ultrafiltrationsmembran einer Filtrations- und Sterilisationsbehandlung unterzogen wird.

3. Ein Verfahren aus Anspruch 1 oder 2, das darüber hinaus Trocknen der konzentrierten eine α-Amylase-inhibierende Substanz enthaltenden Lösung mit einer üblichen Methode umfaßt.

4. Ein Verfahren entsprechend einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Ultrafiltrationsmembran die Membran aus Polyacrylnitril-, Polyolefin- Polysulfon-, Polyimid- oder Polypropylenmaterialien einschließt, jeweils mit einem Fraktionierungsmolekulargewicht von 5000, 6000, 8000, 10000. 13000, 20000, 30000, 50000, 100000 und 200000 Dalton cut-off.

5. Ein Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Ultrafiltrationsmembran eine Polysulfon-Ultrafiltrationsmembran mit einem Fraktionierungsmolekulargewicht von 100000 Dalton cut-off ist.