JPS604132A - 新規なα−アミラ−ゼ阻害物質 - Google Patents
新規なα−アミラ−ゼ阻害物質Info
- Publication number
- JPS604132A JPS604132A JP58110124A JP11012483A JPS604132A JP S604132 A JPS604132 A JP S604132A JP 58110124 A JP58110124 A JP 58110124A JP 11012483 A JP11012483 A JP 11012483A JP S604132 A JPS604132 A JP S604132A
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- Japan
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- amylase
- substance
- wai
- salivary gland
- amino acid
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は小麦種子ないしは小麦粉からの新規なα−アミ
２−ゼ阻害物質ＷＡＩ −６５およびその製法に関する
。
２−ゼ阻害物質ＷＡＩ −６５およびその製法に関する
。
α−アミラーゼは各種生物に広く存在する加水分解酵素
でヒトに関して云えば主として唾液腺および膵臓から由
来し、その動態は各種疾病特に膵炎、耳下腺炎、肝疾患
、ある種の癌等の病態により健康時と比較して大きく変
動することが知られている。従ってこれらの病態を正し
く診断するためには、総アミラーゼ活性定量だけでなく
、唾液腺および膵臓由来のα−アミラーゼアイソザイム
の正確な逐次的動向を把握することが望まれている。
でヒトに関して云えば主として唾液腺および膵臓から由
来し、その動態は各種疾病特に膵炎、耳下腺炎、肝疾患
、ある種の癌等の病態により健康時と比較して大きく変
動することが知られている。従ってこれらの病態を正し
く診断するためには、総アミラーゼ活性定量だけでなく
、唾液腺および膵臓由来のα−アミラーゼアイソザイム
の正確な逐次的動向を把握することが望まれている。
従来臨床検査の場でヒトのα−アミラーゼアイソザイム
の分別定量には電気泳動法が用いられているが、この方
法は非常に炉頂であり迅速に検体を処理する方法として
は難点が多く、更に結果の判定には熟練を要し、容易な
方法とは云い難い。この問題点の解決として小麦粉由来
のアミラーゼ阻害物質を用いての分析方法がオドンネル
氏らによって研究されてきたが、いまだ満足するもので
なく実用的でなかった〔Ｊ。
の分別定量には電気泳動法が用いられているが、この方
法は非常に炉頂であり迅速に検体を処理する方法として
は難点が多く、更に結果の判定には熟練を要し、容易な
方法とは云い難い。この問題点の解決として小麦粉由来
のアミラーゼ阻害物質を用いての分析方法がオドンネル
氏らによって研究されてきたが、いまだ満足するもので
なく実用的でなかった〔Ｊ。
Ｃ１１ｎ、Ｃｈｅｍ、２３．５６０〜５６６ （１９７
７）参照〕。
７）参照〕。
これらの欠点を補うα−アミラーゼの分別定量用試薬と
して本発明者らは既に小麦粉を給源にしてヒト唾液中の
α−アミラーゼを特異的に阻害するα−アミラーゼ阻害
物質ＷＡＩ −５３を発見した（特開昭５７−１４０７
２７号公報参照）。
して本発明者らは既に小麦粉を給源にしてヒト唾液中の
α−アミラーゼを特異的に阻害するα−アミラーゼ阻害
物質ＷＡＩ −５３を発見した（特開昭５７−１４０７
２７号公報参照）。
ＷＡＩ −５５はヒト唾液および膵臓のα−アミラーゼ
に対する単位重量当シの阻害活性化（単位当りの各酵素
を５０チ阻害するために必要なＷＡＩ −５Ｚｌの量比
Ｗ）が２５０であり、オドンネル氏らのα−アミラーゼ
阻害剤の阻害活性比が高々１００であるのと比較すると
、α−アミラーゼアインザイム分別定量の観点から前者
の優位性は疑う余地がない。本発明者らは小麦粉中のα
−アミラーゼを更に詳細に研究する過程でＷＡＩ −５
３を含めた従来の既知α−アミ２−ゼ阻害物質とは物理
化学的および酵素化学的に全く異なる新規なα−アミラ
ーゼ阻害物質ＷＡＩ−６５を発見し、この物質が生体中
のα−アミラーゼアイソザイムの分別定量用臨床検査薬
となシ得る優れた特長を有することを見出した。
に対する単位重量当シの阻害活性化（単位当りの各酵素
を５０チ阻害するために必要なＷＡＩ −５Ｚｌの量比
Ｗ）が２５０であり、オドンネル氏らのα−アミラーゼ
阻害剤の阻害活性比が高々１００であるのと比較すると
、α−アミラーゼアインザイム分別定量の観点から前者
の優位性は疑う余地がない。本発明者らは小麦粉中のα
−アミラーゼを更に詳細に研究する過程でＷＡＩ −５
３を含めた従来の既知α−アミ２−ゼ阻害物質とは物理
化学的および酵素化学的に全く異なる新規なα−アミラ
ーゼ阻害物質ＷＡＩ−６５を発見し、この物質が生体中
のα−アミラーゼアイソザイムの分別定量用臨床検査薬
となシ得る優れた特長を有することを見出した。
本発明によれば、小麦種子または小麦粉中の水溶性区分
からの抽出液を少なくとも含水有機溶媒による分別沈殿
、加熱処理、ゲル濾過クロマト処理、イオン交換クロマ
ト処理からなる一連の工程で精製することによシ新規且
つ有用なα−アミラーゼ阻害物質ＷＡＩ −６５が提供
されるものである。
からの抽出液を少なくとも含水有機溶媒による分別沈殿
、加熱処理、ゲル濾過クロマト処理、イオン交換クロマ
ト処理からなる一連の工程で精製することによシ新規且
つ有用なα−アミラーゼ阻害物質ＷＡＩ −６５が提供
されるものである。
本発明による新規なα−アミラーゼ阻害物質をうるため
の原料となる小麦種子または小麦粉は硬質小麦、内地小
麦、軟質小麦、アユ２ム小麦ないしはそれらより由来す
る強力小麦粉、中力小麦粉、薄刃小麦粉の種類および等
級を問わない。含有量の差異こそあれすべての小麦の胚
乳部分には所望のα−アミ２−ゼ阻害物質が含まれてい
る。
の原料となる小麦種子または小麦粉は硬質小麦、内地小
麦、軟質小麦、アユ２ム小麦ないしはそれらより由来す
る強力小麦粉、中力小麦粉、薄刃小麦粉の種類および等
級を問わない。含有量の差異こそあれすべての小麦の胚
乳部分には所望のα−アミ２−ゼ阻害物質が含まれてい
る。
本発明のα−アミラーゼ阻害物質ＷＡＩ −６５の取得
方法としては次の工程によって行なえる。
方法としては次の工程によって行なえる。
原料としての小麦まだは小麦粉を原料に対し３〜１０倍
量の水好ましくは精製水で１〜５時間室温において攪拌
してＷＡＩ−６５物質の抽出を行なう。所定の時間攪拌
した後、例えば遠心分離、傾瀉、濾過等の適宜な操作で
上澄みを採取する。
量の水好ましくは精製水で１〜５時間室温において攪拌
してＷＡＩ−６５物質の抽出を行なう。所定の時間攪拌
した後、例えば遠心分離、傾瀉、濾過等の適宜な操作で
上澄みを採取する。
この上澄みは真空または常圧下での加熱によシ処理され
る。通常約５０〜７０℃において１０分ないし１時間の
加熱が行なわれる。７０℃で３０分の加熱が好ましい。
る。通常約５０〜７０℃において１０分ないし１時間の
加熱が行なわれる。７０℃で３０分の加熱が好ましい。
所望によってはこの加熱処理された液を再び遠心分離、
傾瀉または濾過等の操作に付して上澄みを採取する。
傾瀉または濾過等の操作に付して上澄みを採取する。
ここで加熱処理された抽出液（またはその上澄み）を水
性アセトン、エタノールまたはメタノールのような含水
有機溶媒〔濃度４０〜７０％（Ｖ／Ｖ） ）で処理して
生成する沈殿物を除去し、得られた残留液に更に上記溶
媒を加えて溶媒濃度９０％（ｖ／ｖ）とし且つその混合
物を低温（０〜１０℃）に放置して沈殿を形成させ、そ
して得られた沈殿を採取しそしてこれを精製水に溶解さ
せる。次いで得られた溶液を１〜２０ ｍＭ ＮａＣ１
を含むトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９，ｏ〜９５）を用いて
充填させたセファデックスＧ−７５を用いてゲル濾過カ
ラムクロマトを行なう。活性区分を集めて透析処理によ
シ脱塩し透析内液を濃縮した後、ＣＭ−セフ ７ ｏ
−、ｘ、 ＣＬ −６Ｂ−？ＣＭ −セフ ７デツクス
ｃ−２５などを用いたカチオン系イオン交換クロマトを
数回実施して所望の物質の純度を高める。
性アセトン、エタノールまたはメタノールのような含水
有機溶媒〔濃度４０〜７０％（Ｖ／Ｖ） ）で処理して
生成する沈殿物を除去し、得られた残留液に更に上記溶
媒を加えて溶媒濃度９０％（ｖ／ｖ）とし且つその混合
物を低温（０〜１０℃）に放置して沈殿を形成させ、そ
して得られた沈殿を採取しそしてこれを精製水に溶解さ
せる。次いで得られた溶液を１〜２０ ｍＭ ＮａＣ１
を含むトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９，ｏ〜９５）を用いて
充填させたセファデックスＧ−７５を用いてゲル濾過カ
ラムクロマトを行なう。活性区分を集めて透析処理によ
シ脱塩し透析内液を濃縮した後、ＣＭ−セフ ７ ｏ
−、ｘ、 ＣＬ −６Ｂ−？ＣＭ −セフ ７デツクス
ｃ−２５などを用いたカチオン系イオン交換クロマトを
数回実施して所望の物質の純度を高める。
ＣＭ−セファロースＣＬ −（３Ｆによる液体クロマト
処理は最も好便な方法で、通常３０ ｍＭ ｆｆ：酸緩
衝液（ｐＨ４，５）で樹脂を飽和させ、活性物質を含む
溶液を充填し、ひきつづいてＯ−０，５モルのＮａＣｌ
を含む同じ緩衝液で濃度勾配クロマト処理を実施する。
処理は最も好便な方法で、通常３０ ｍＭ ｆｆ：酸緩
衝液（ｐＨ４，５）で樹脂を飽和させ、活性物質を含む
溶液を充填し、ひきつづいてＯ−０，５モルのＮａＣｌ
を含む同じ緩衝液で濃度勾配クロマト処理を実施する。
通常セファデックスＧ−７５ゲルクロマト処理の段階ま
での過程でＷＡＩ −５５およびＷＡＩ −６５を分離
することはできないが、上述したカチオン交換樹脂を用
いたクロマト処理で能率よく分別できる。ＷＡエーロ
５の純度を充分高めるために１回以上のカチオン交換樹
脂によるクロマト処理を実施する必要があるが通常はこ
の操作を２回繰り返せば高純度のＷＡＩ〜６５フラクシ
ョ／が得られる。
での過程でＷＡＩ −５５およびＷＡＩ −６５を分離
することはできないが、上述したカチオン交換樹脂を用
いたクロマト処理で能率よく分別できる。ＷＡエーロ
５の純度を充分高めるために１回以上のカチオン交換樹
脂によるクロマト処理を実施する必要があるが通常はこ
の操作を２回繰り返せば高純度のＷＡＩ〜６５フラクシ
ョ／が得られる。
得られた０、６５ンラクシヨンを含む区分を集め、透析
処理で脱塩後凍結乾燥を行えば目的とするＷＡＸ −６
５の白色無定形凍結乾繰物が得られる。
処理で脱塩後凍結乾燥を行えば目的とするＷＡＸ −６
５の白色無定形凍結乾繰物が得られる。
このようにして得られたＷＡＩ −６５物質の物理化学
的な性質は次のとおシである。
的な性質は次のとおシである。
（１）水または希薄塩溶液に可溶、メタノール、エタノ
ール、アセトン、クロロホルムおよびヘキサンに不溶。
ール、アセトン、クロロホルムおよびヘキサンに不溶。
（２）紫外部吸収
λｍａｘ ２７８ ｎｍ
Ｅ？％？Ｆ −１１９
（３）分子量 ゲル濾過法によシ２４，０００（４）
Ｄａｒｉｓ氏等の方法［ｒＡｎｎａｌｓ Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅＪ １２１
，４０４（１９６４）参照〕によるポリアクリルアミド
電気泳動における泳動度は０，６５で単一なバンドを示
す。
Ｄａｒｉｓ氏等の方法［ｒＡｎｎａｌｓ Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ ５ｃｉｅｎｃｅＪ １２１
，４０４（１９６４）参照〕によるポリアクリルアミド
電気泳動における泳動度は０，６５で単一なバンドを示
す。
（５） ０ａｔｈ氏等の方法ＩＪＣａｒｅａｌ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙＪ ５０゜１９０〜７（１９７３）参照〕
によるＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動は分子量１２
，５００の位置に単一なバンドを与える。これは本物質
が二つの同一なサブユニットからなることを示す。
ｍｉｓｔｒｙＪ ５０゜１９０〜７（１９７３）参照〕
によるＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動は分子量１２
，５００の位置に単一なバンドを与える。これは本物質
が二つの同一なサブユニットからなることを示す。
（６） エドマン法によるＮ末端アミノ酸配列解析の結
果によればこの物質はＳｅｒ −Ｇ４ｙ −Ｇｌｕなる
アミノ酸配列をなす。
果によればこの物質はＳｅｒ −Ｇ４ｙ −Ｇｌｕなる
アミノ酸配列をなす。
（７） カルボキシはブチダーゼを用いだＣ末端アミノ
酸解析ではこの物質はＳｅｒを与える。
酸解析ではこの物質はＳｅｒを与える。
（８）ｌ−！ｊプシ／消化による得られるはプチドは１
１個でそれらのＮ末端は次のとおりである。
１個でそれらのＮ末端は次のとおりである。
ＡｓｐまたはＣｙｓＨ３
Ｇｌｕ、 ２
Ｌｙｓ ’Ｊたはｌ１ｅｕ ２
Ｓｅｒ、 Ａｌａ、 Ｖａｌ、Ｍｅｔ 各１（９） ア
ミノ酸組成はＷＡＩ −６５が二つの同じサブユニット
よりなシ、一つのサブユニットにアスパラギン酸が８残
基含まれるとすると次のとおりである。
ミノ酸組成はＷＡＩ −６５が二つの同じサブユニット
よりなシ、一つのサブユニットにアスパラギン酸が８残
基含まれるとすると次のとおりである。
Ｃｙｓ １０．４ Ｇｌｕ １Ｂ、Ｉ Ｖａｌ ５．９
Ａｓｐ ８．ＯＰｒｏ １１．５ Ｍｅｔ ４．７Ｔｈ
ｒ ７．５ （）ｌｙ ７．Ｉ １１ｅｕ ４．７Ｓｅ
ｒ （Ｓ、３ Ａｌａ ６．４ Ｌｅｕ １０．３Ｔｙ
ｒ ４．９ Ｌｙｓ ２．３ Ａｒｇ ７．ＩＰｈｅ
２．１ Ｈｉｓ １．’ＯＴｒｐα１ ヒト唾液腺およ
び膵臓アミラーゼの本発明の物質との阻害曲線において
単位あたりの各酵素を５０％阻害する本発明の物質の所
要量比は約（１：５００〜１：６００）である（添付図
面参照）。
Ａｓｐ ８．ＯＰｒｏ １１．５ Ｍｅｔ ４．７Ｔｈ
ｒ ７．５ （）ｌｙ ７．Ｉ １１ｅｕ ４．７Ｓｅ
ｒ （Ｓ、３ Ａｌａ ６．４ Ｌｅｕ １０．３Ｔｙ
ｒ ４．９ Ｌｙｓ ２．３ Ａｒｇ ７．ＩＰｈｅ
２．１ Ｈｉｓ １．’ＯＴｒｐα１ ヒト唾液腺およ
び膵臓アミラーゼの本発明の物質との阻害曲線において
単位あたりの各酵素を５０％阻害する本発明の物質の所
要量比は約（１：５００〜１：６００）である（添付図
面参照）。
α１）１国際単位当シの唾液腺アミラーゼを５０％阻害
するためのＷＡＩ −６５阻害物質の所要量は７２．４
μｇである。
するためのＷＡＩ −６５阻害物質の所要量は７２．４
μｇである。
本発明のα−アミ２−ゼ阻害物質（ＷＡＩ −６５）は
ヒトの唾液腺α−アミ２−ゼに対して極めて特異的に阻
害作用を示し、一方ヒトの膵臓α−アミラーゼに対する
阻害作用は極めて微弱である。更に本発明の物質は広域
な酵素濃度範囲で唾液腺型α−アミラーゼおよび膵臓型
α−アミラーゼアイソザイムに対する阻害比が大きな値
をとシうるのでヒトの体液をはじめとした各種臨床検体
のα−アミラーゼアイソザイムの分別定量のための優れ
た手段となシうるものである。
ヒトの唾液腺α−アミ２−ゼに対して極めて特異的に阻
害作用を示し、一方ヒトの膵臓α−アミラーゼに対する
阻害作用は極めて微弱である。更に本発明の物質は広域
な酵素濃度範囲で唾液腺型α−アミラーゼおよび膵臓型
α−アミラーゼアイソザイムに対する阻害比が大きな値
をとシうるのでヒトの体液をはじめとした各種臨床検体
のα−アミラーゼアイソザイムの分別定量のための優れ
た手段となシうるものである。
既にオドンネル氏等は、小麦粉中にヒトの唾液腺型α−
アミラーゼを膵臓型のそれよシも強く阻害するα−アミ
ラーゼ阻害物質を報告し、この物質を利用した臨床検体
中のα−アミラーゼアイソザイムの分別定量の可能性を
示している。［Ｃ１１ｎｉｃａ、ｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ２５，５６ｒ：？−５６６＜１９７７）］。
アミラーゼを膵臓型のそれよシも強く阻害するα−アミ
ラーゼ阻害物質を報告し、この物質を利用した臨床検体
中のα−アミラーゼアイソザイムの分別定量の可能性を
示している。［Ｃ１１ｎｉｃａ、ｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ ２５，５６ｒ：？−５６６＜１９７７）］。
しかしながらオドンネル氏等の報告したα−アミラーゼ
阻害物質はその電気泳動の易動度において、本物質が０
．６５であるのに対して０．２０であり、著るしく相違
している。更にまた特開昭５７−１４０７２７号公報で
開示されているα−アミラーゼ阻阻害物質入Ａｒ−５３
電気泳動度０．５３）とも相異することは明らかでおる
。
阻害物質はその電気泳動の易動度において、本物質が０
．６５であるのに対して０．２０であり、著るしく相違
している。更にまた特開昭５７−１４０７２７号公報で
開示されているα−アミラーゼ阻阻害物質入Ａｒ−５３
電気泳動度０．５３）とも相異することは明らかでおる
。
添付図面にＷＡＩ−６５阻害物質のヒト唾液および膵臓
のα−アミラーゼに対する阻害曲線を示す。添付図面よ
り計算されるＰ／Ｓ値（単位当シのアミラーゼアインザ
イムの酵素活性を５０％阻害する阻害剤の所要量比）は
外挿法によれば５４８であった。一方ＷＡニー５３阻害
物質は２５０であり、従ってこのことからみても本発明
のＷＡエーロ５阻害物質はＷＡエニー３阻害物質とは相
異するものであり、ＷＡエーロ５阻害物質はヒトα−ア
ミラーゼの分別定量に適した生化学試薬で優れた臨床検
査薬となり得るものと期待される。
のα−アミラーゼに対する阻害曲線を示す。添付図面よ
り計算されるＰ／Ｓ値（単位当シのアミラーゼアインザ
イムの酵素活性を５０％阻害する阻害剤の所要量比）は
外挿法によれば５４８であった。一方ＷＡニー５３阻害
物質は２５０であり、従ってこのことからみても本発明
のＷＡエーロ５阻害物質はＷＡエニー３阻害物質とは相
異するものであり、ＷＡエーロ５阻害物質はヒトα−ア
ミラーゼの分別定量に適した生化学試薬で優れた臨床検
査薬となり得るものと期待される。
以下に本発明のα−アミラーゼ阻害物質ＷＡＩ −６５
物質の製造法を実施例により詳詳述する。
物質の製造法を実施例により詳詳述する。
実施例
小麦粉２５縁に精製水１００１を加えて１時間ゆるやか
に攪拌し、遠心分離法によシ上清７３．４ｔを得た。得
られた上清液を凍結乾燥して１．１３縁の凍結乾燥物を
得た。これに精製水を加えて液量を１５．５１となし、
この水溶液を７０℃で３０分間加熱処理し、生ずる沈殿
を遠心分離で除いて上清１３．ｏｌを得た。得られた上
清液に４℃の温度下に９９％エタノールを加えてエタノ
ール濃度を６０優に保ち、生ずる沈殿を遠心分離で除い
た。ひき続いて更に９９％エタノールを加えてエタノー
ル濃度が９０％になるようにし、１星夜４℃で放置して
沈殿を形成させた。生成した沈殿を遠心分離で集め、精
製水に溶解させてＷＡＸ −６５を含む水溶液１．８ｔ
を得た。
に攪拌し、遠心分離法によシ上清７３．４ｔを得た。得
られた上清液を凍結乾燥して１．１３縁の凍結乾燥物を
得た。これに精製水を加えて液量を１５．５１となし、
この水溶液を７０℃で３０分間加熱処理し、生ずる沈殿
を遠心分離で除いて上清１３．ｏｌを得た。得られた上
清液に４℃の温度下に９９％エタノールを加えてエタノ
ール濃度を６０優に保ち、生ずる沈殿を遠心分離で除い
た。ひき続いて更に９９％エタノールを加えてエタノー
ル濃度が９０％になるようにし、１星夜４℃で放置して
沈殿を形成させた。生成した沈殿を遠心分離で集め、精
製水に溶解させてＷＡＸ −６５を含む水溶液１．８ｔ
を得た。
次に２ｍＭ塩化ナトリウムを含む１０ ｍＭ ）リス塩
酸緩衝液（ｐＨ９，２） ３溶出液としてセファデック
スＧ−７５ゲル濾過クロマト処理を行ない、ＷＡＩ −
６５を含む両分を集めた。得られたＷＡＩ−５３区分を
水溶液の形で透析膜にて脱塩後、ＣＭ−セファロースＣ
Ｌ −６Ｂを担体として０〜α５Ｍの塩化ナトリウムを
含む３０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）を用いて濃度勾
配クロマトグラフィーを実施した。溶出されたＷＡＩ
−５３区分を集め、透析処理を行って脱塩し、凍結乾燥
を行ってＷＡＩ −６５の粗乾固物０．３７７、Ｓ’を
得た。
酸緩衝液（ｐＨ９，２） ３溶出液としてセファデック
スＧ−７５ゲル濾過クロマト処理を行ない、ＷＡＩ −
６５を含む両分を集めた。得られたＷＡＩ−５３区分を
水溶液の形で透析膜にて脱塩後、ＣＭ−セファロースＣ
Ｌ −６Ｂを担体として０〜α５Ｍの塩化ナトリウムを
含む３０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４，５）を用いて濃度勾
配クロマトグラフィーを実施した。溶出されたＷＡＩ
−５３区分を集め、透析処理を行って脱塩し、凍結乾燥
を行ってＷＡＩ −６５の粗乾固物０．３７７、Ｓ’を
得た。
ＷＡＩ −６５の純度を更に高めるためにＣＭ−セファ
ロースＣＬ−６Ｂ１１ クロマト処理を同じ条件で繰シ
返して得られた。ＷＡ・Ｉｃ６５を含む両分を集め、透
析処理を行って脱塩し、凍結乾燥してＷＡＩ −６５の
乾燥物５６■を得た。
ロースＣＬ−６Ｂ１１ クロマト処理を同じ条件で繰シ
返して得られた。ＷＡ・Ｉｃ６５を含む両分を集め、透
析処理を行って脱塩し、凍結乾燥してＷＡＩ −６５の
乾燥物５６■を得た。
添付図面はＷＡＩ −６５物質のヒト唾液および膵臓ア
ミ２−ゼに対する阻害曲線を示す図である。 手続補正書 昭和５８年７月２８日 特許庁長官 若 杉 和犬 殿 ■、小事件表示 昭和５８年特許願第１１ＣＭ２４号 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 東京都中央区日本橋小網町１９番１２号名称 日
清製粉株式会社 （外１名） ４、代理人 ５、補正命令のＨ付（自発） 昭和 年 月 日（発送［１昭 ） Ｚ補正の内容 １） 特許請求の範囲を別紙のとおり補正します。 ２） 第１２頁第７行の「ベゾチドアラグメント数」を
「ベゾチド７ラグメント数」と補正します。 以上 ２、特許請求の範囲 下記の理化学的性状すなわち １）水または希薄塩溶液に可溶、メタノール、エタノー
ル、アセトン、クロロホルムおよびヘキサンに不溶であ
ること、 ２） 紫外部吸収 λ＋ｎａｘ ２７８ ｎｍ ７８ｎｍ Ｔｒ′１％１ｃｍ ”１９ ３） 分子量 ゲル濾過法によシ２４，０００４） Ｄ
ａｖｉｓ氏等の方法によるポリアクリルアミド電気泳動
における泳動度は０．６５で単一なバンドを示す、 ５） ０ａｔｈ氏らの方法による８ＤＳポリアクリルア
ミド電気泳動は分子量１２，５００の位置に単一なバン
ドを与え、これは本物質が二つの同一なサブユニットか
らなることを示す、６） エドマン法によるＮ末端アミ
ノ酸配列解析の結果によればこの物質はセリン−グリシ
ン−グルタミン酸なるＮ末端アミノ酸配列を示す、 ７）カルボキシペプチターゼを用いたＣ末端アミノ酸解
析ではこの物質はセリンを与える、８）トリプシン消化
による得られるペプチドは１１個でそれらのＮ末端は次
のとおシであるアスパラギン酸またはシスティン ５ グルタミン酸 ２ リシンまたはインロイシン ２ セリン、アラニン、バリン、メチオニン 各１９） ア
ミノ酸組成はＷＡエーロ５が二つの同じサブユニットよ
りなり、一つのサブユニットにアスパラギン酸が８残基
含１れるとすると次のとおりである シスチン １Ｑ、４ グルタミン酸 １ａ１ バリン ５．９ アスパラギン酸 ８．０ プロリン １１・５ メチオニン ４．７ スレオニン ７−６ グリシン Ｚ１ インロイシン ４．７ セリン ＆３ アラニン ６．４ ０イシン １０．６ テロシン ４・９ リジン ２．３ アルギニン ７．１ フエニルアラニン ２・１ ヒスチジン １．０ １０） ヒト唾液腺および膵臓アミ２−ゼに対する本物
質の阻害曲線において単位あたりの各酵素ｔ−５０％阻
害する３す喫−質の所要量比は１：５００〜１： ６０
０である（図面参照）、１１）１国際単位当りの唾液腺
アミラーゼを５０チ阻害するために必要至ｌは７２．４
μ？であるを有することを特徴とする、小麦由来の新規
なα−アミラーゼ阻害物質０
ミ２−ゼに対する阻害曲線を示す図である。 手続補正書 昭和５８年７月２８日 特許庁長官 若 杉 和犬 殿 ■、小事件表示 昭和５８年特許願第１１ＣＭ２４号 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 住所 東京都中央区日本橋小網町１９番１２号名称 日
清製粉株式会社 （外１名） ４、代理人 ５、補正命令のＨ付（自発） 昭和 年 月 日（発送［１昭 ） Ｚ補正の内容 １） 特許請求の範囲を別紙のとおり補正します。 ２） 第１２頁第７行の「ベゾチドアラグメント数」を
「ベゾチド７ラグメント数」と補正します。 以上 ２、特許請求の範囲 下記の理化学的性状すなわち １）水または希薄塩溶液に可溶、メタノール、エタノー
ル、アセトン、クロロホルムおよびヘキサンに不溶であ
ること、 ２） 紫外部吸収 λ＋ｎａｘ ２７８ ｎｍ ７８ｎｍ Ｔｒ′１％１ｃｍ ”１９ ３） 分子量 ゲル濾過法によシ２４，０００４） Ｄ
ａｖｉｓ氏等の方法によるポリアクリルアミド電気泳動
における泳動度は０．６５で単一なバンドを示す、 ５） ０ａｔｈ氏らの方法による８ＤＳポリアクリルア
ミド電気泳動は分子量１２，５００の位置に単一なバン
ドを与え、これは本物質が二つの同一なサブユニットか
らなることを示す、６） エドマン法によるＮ末端アミ
ノ酸配列解析の結果によればこの物質はセリン−グリシ
ン−グルタミン酸なるＮ末端アミノ酸配列を示す、 ７）カルボキシペプチターゼを用いたＣ末端アミノ酸解
析ではこの物質はセリンを与える、８）トリプシン消化
による得られるペプチドは１１個でそれらのＮ末端は次
のとおシであるアスパラギン酸またはシスティン ５ グルタミン酸 ２ リシンまたはインロイシン ２ セリン、アラニン、バリン、メチオニン 各１９） ア
ミノ酸組成はＷＡエーロ５が二つの同じサブユニットよ
りなり、一つのサブユニットにアスパラギン酸が８残基
含１れるとすると次のとおりである シスチン １Ｑ、４ グルタミン酸 １ａ１ バリン ５．９ アスパラギン酸 ８．０ プロリン １１・５ メチオニン ４．７ スレオニン ７−６ グリシン Ｚ１ インロイシン ４．７ セリン ＆３ アラニン ６．４ ０イシン １０．６ テロシン ４・９ リジン ２．３ アルギニン ７．１ フエニルアラニン ２・１ ヒスチジン １．０ １０） ヒト唾液腺および膵臓アミ２−ゼに対する本物
質の阻害曲線において単位あたりの各酵素ｔ−５０％阻
害する３す喫−質の所要量比は１：５００〜１： ６０
０である（図面参照）、１１）１国際単位当りの唾液腺
アミラーゼを５０チ阻害するために必要至ｌは７２．４
μ？であるを有することを特徴とする、小麦由来の新規
なα−アミラーゼ阻害物質０
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 下記の理化学的性状すなわち １）水または希薄塩溶液に可溶、メタノール、エタノー
ル、アセトン、クロロホルムおよびヘキサンに不溶であ
ること、 ２）紫外部吸収 λｍａｘ ２７８ｎｍ Ｅｑ４Ｂ、ｒ：ｙ、 １９ ３）分子量 ゲル濾過法によシ２４，０００４） Ｄａ
ｖｉｓ氏等の方法によるポリアクリルアミド電気泳動に
おける泳動度は０．６５で単一なバンドを示す、 ５） ０ａｔｈ氏らの方法によるＳＤＳポリアクリルア
ミＶ電気泳動は分子量１２，５００の位置に単一なバン
ドを与え、これは本物質が二つの同一なサブユニットか
らなることを示す、 ６） エドマン法によるＮ末端アミノ酸配列解析の結果
によればこの物質はセリン−グリシン−グルタミン酸な
るＮ末端アミノ酸配列を示す、 ７）カルボキシにプチターゼを用いたＣ末端アミノ酸解
析ではこの物質はセリンを与える、８）トリプシン消化
による得られるペプチドは１１個でそれらのＮ末端は次
のとおりであるアスパラギン酸またはシスティン ３ グルタミン酸 ２ リシンまたはインロイシン ２ セリン、アラニン、バリン、メチニオン 各１９）アミ
ノ酸組成はＷＡＩ −，６５が二つの同じサブユニット
よシなシ、一つのサブユニットにアスパラギン酸が８残
基含まれるとすると次のとおりである シスチン １０．４ グルタミン酸 １８．１ バリン ５，９ アスパラギン酸 ８．０ プロリン １１．５ メチオニン ４．７ スレオニン Ｚ３ グリシン ７．１ インロイシン ４．７ セリン ６．３ アラニン ６．４ ０イシン １０．３ チロシン ４．９ リジン ２．６ グリ７ン Ｚｌ フェニルアラニン ２．１ ヒスチジン １．０ １０） ヒト唾液腺および膵臓アミラーゼに対する本発
明の物質の阻害曲線において単位あたシの各酵素を５０
・チ阻害する本発明の物質の所要量比は約１：５００〜
１：６００である（図面参照）、 １１）１国際年位当シの唾液腺アミラーゼを５０％阻害
するために必要なインヒビター量は７２．４μＩである を有することを特徴とする、小麦由来の新規なα−アミ
ラーゼ阻害物質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58110124A JPS604132A (ja) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | 新規なα−アミラ−ゼ阻害物質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58110124A JPS604132A (ja) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | 新規なα−アミラ−ゼ阻害物質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS604132A true JPS604132A (ja) | 1985-01-10 |
| JPH0427997B2 JPH0427997B2 (ja) | 1992-05-13 |
Family
ID=14527631
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58110124A Granted JPS604132A (ja) | 1983-06-21 | 1983-06-21 | 新規なα−アミラ−ゼ阻害物質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS604132A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01165729A (ja) * | 1987-09-21 | 1989-06-29 | Rhone Poulenc Chim | 液液抽出によるガリウムの回収方法 |
| EP0372523A2 (en) * | 1988-12-09 | 1990-06-13 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Process of preparing alpha-amylase inhibiting substances from wheat |
| US5093315A (en) * | 1988-12-09 | 1992-03-03 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Dieting agents comprising α-amylase inhibiting substances |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5885899A (ja) * | 1981-11-16 | 1983-05-23 | Fujirebio Inc | アミラ−ゼインヒビタ−およびその製造法 |
-
1983
- 1983-06-21 JP JP58110124A patent/JPS604132A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5885899A (ja) * | 1981-11-16 | 1983-05-23 | Fujirebio Inc | アミラ−ゼインヒビタ−およびその製造法 |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01165729A (ja) * | 1987-09-21 | 1989-06-29 | Rhone Poulenc Chim | 液液抽出によるガリウムの回収方法 |
| JPH0375617B2 (ja) * | 1987-09-21 | 1991-12-02 | Rhone Poulenc Chimie | |
| EP0372523A2 (en) * | 1988-12-09 | 1990-06-13 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Process of preparing alpha-amylase inhibiting substances from wheat |
| US5084275A (en) * | 1988-12-09 | 1992-01-28 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Processes of preparing α-amylase inhibiting subtances from wheat |
| US5093315A (en) * | 1988-12-09 | 1992-03-03 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Dieting agents comprising α-amylase inhibiting substances |
| EP0372523B1 (en) * | 1988-12-09 | 1996-03-20 | Nisshin Flour Milling Co., Ltd. | Process of preparing alpha-amylase inhibiting substances from wheat |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0427997B2 (ja) | 1992-05-13 |
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