DE60311106T2

DE60311106T2 - Verfahren zur Isolierung von Milchproteinen und Isolat von Milchproteinen

Info

Publication number: DE60311106T2
Application number: DE60311106T
Authority: DE
Inventors: Jerôme SOUPPE
Original assignee: Laitiere Europeenne SA
Current assignee: Laitiere Europeenne SA
Priority date: 2002-07-02
Filing date: 2003-06-30
Publication date: 2007-11-08
Anticipated expiration: 2023-07-01
Also published as: DK1523243T3; DE60311106D1; FR2841747B1; US20080044544A1; EP1523243A1; BR0305244A; PT1523243E; US8603560B2; US7247331B2; CA2490622C; CA2490622A1; FR2841747A1; ES2280800T3; US20060040025A1; WO2004004482A1; EP1523243B1

Description

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein neues Verfahren zur Isolierung von Milchproteinen, die daraus resultierende Zusammensetzung, ein Isolat von Milchproteinen oder eine Milchproteinfraktion, und ihre Anwendungen, insbesondere alimentäre und pharmazeutische Anwendungen.
Es sind mehrere Dokumente des Standes der Technik bekannt, die die Reinigung von Milchproteinen beschreiben.
Das Dokument EP-253395 beschreibt den Erhalt eines Rinderlactoferrins purer Reinheit (> 80% in einer Stufe oder > 98% in zwei Stufen) durch Adsorption von Milch oder Molke bzw. Lactoserum an einem Kationenaustauschharz, das Carboxymethylreste umfasst, dann Spülen und Desorption des Lactoferrins.
Das Dokument EP-348508 beschreibt ebenfalls ein Verfahren zur Herstellung eines Rinderlactoferrins hoher Reinheit (> 95%) durch Adsorption von Milch oder Molke bzw. Lactoserum an einem Kationenaustauschharz vom Polysaccharidtyp, das Schwefelsäureesterfunktionen umfasst, und Elution durch eine wässrige Salzlösung.
Das Dokument EP-298875 beschreibt ein Verfahren, das es ermöglicht, bestimmte Proteine der Molke durch Adsorption an einem porösem mineralischen Träger in Form von Körnern zu isolieren; diese Körner sind mit einer Schicht aus aminiertem Polysaccharid, das an der Oberfläche funktionelle Säuregruppierungen aufweist, wie zum Beispiel Carboxyl- oder Sulfongruppierungen, überzogen.
Das Dokument EP-418704 beschreibt ein Verfahren zur sequentiellen Reinigung von Lactoferrin und Lactoperoxidase durch Elution an einer Säule, die mit einem Polysaccharidharz beschickt ist, welches mit Sulfonsäuregruppen gepfropft ist.
Das Dokument US-6,096,870 beschreibt ein Verfahren zur sequentiellen Trennung von Proteinen der Molke („petit lait") durch Elution an kationischen Harzen.
Das Dokument EP-1017286 beschreibt ein Verfahren zur sequentiellen Trennung von Proteinen der Molke durch Radialchromatographie.
Das Lactoferrin und die Lactoperoxidase sind Proteine der Milch, die mit interessanten Eigenschaften ausgestattet sind: Ihr Vermögen, Eisen zu binden, verleiht ihnen die Rolle eines antibakteriellen Mittels gegen Bakterien, deren Metabolismus bedeutende Eisenmengen erfordert. Die Lactoperoxidase ist für die Proteinmarkierung durch Iod unverzichtbar. Das Lactoferrin begünstigt das Wachstum der Lymphozyten und begünstigt die Adsorption des Eisens durch den Organismus, es reguliert die Differenzierung der Leukozyten und inhibiert die Peroxidation der Lipide.
Jedenfalls betreffen alle diese Dokumente Verfahren, die darauf gerichtet sind, ein Lactoferrin und/oder eine Lactoperoxidase zu erhalten, die möglichst rein sind, das heißt Verfahren, die darauf gerichtet sind, den Anteil der anderen Proteine, die anfangs in der Milch oder der Molke vorliegen, möglichst zu reduzieren. Außerdem sind die Bedingungen der Fixierung des Ausgangsmaterials und der Elution der Proteine milde Bedingungen mit langsamen Materialströmen. Dagegen hat sich die Anmelderin die Aufgabe gestellt, eine Milchproteinfraktion zu erhalten, die außer anderen Bestandteile Lactoferrin und Lactoperoxidase umfasst, aber insbesondere einen Verhältnisanteil an anderen Proteinen umfasst, der höher ist als der in Milch oder Molke als Ausgangsmaterial. Daher hat die Anmelderin ein Verfahren mit viel höheren Durchflussraten als die, die in den oben analysierten Dokumenten beschrieben sind, ausgearbeitet, wobei dieses Verfahren eine selektivere Fixierung für bestimmte Proteine ermöglicht.
Das Dokument WO93/13676 offenbart ein Verfahren, das es ermöglicht, ausgehend von Molke Lactoferrin und Lactoperoxidase durch Passage über ein Kationenaustauschharz mit erhöhtem Durchfluss zu isolieren. Dieses Verfahren unterscheidet sich von dem Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung durch die Tatsache, dass der Durchfluss höher ist als in den erfindungsgemäßen Verfahren (über 5 m/h) und dass es darauf gerichtet ist, Lactoferrin und Lactoperoxidase zu reinigen, und nicht darauf, eine bestimmte Milchproteinfraktion zu erhalten, die einen erhöhten Gehalt an anderen Proteinen enthält und mit verbesserten biologischen Eigenschaften versehen ist.
Aus dem Dokument EP-704218 ist auch ein Mittel bekannt, das zur Verstärkung der Knochen bestimmt ist, wobei dieses Mittel eine basische Proteinfraktion oder eine basische Peptidfraktion umfasst, die aus Milch stammt und durch Leiten der Milch über ein kationisches Harz und Elution erhalten wird. Jedenfalls sind die in diesem Dokument beschriebenen Adsorptions- und Elutionsbedingungen anders als die, die in dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden, und sie erlauben es, eine Proteinfraktion zu isolieren, die sich von der, die gemäß der Erfindung erhalten wird, unterscheidet.
Die Dokumente JP-8165249, JP-9187250, JP-9294537 und EP-1010430 beschreiben Zusammensetzungen, die zur Verstärkung der Knochen und/oder der Prävention von parodontalen Krankheiten bestimmt sind; diese Zusammensetzungen umfassen eine basische Proteinfraktion, die aus Milch stammt und durch Adsorption der Milch an einem kationischen Harz und Elution erhalten wird. Jedenfalls unterscheiden sich die in diesen Dokumenten beschriebenen Adsorptions- und Elutionsbedingungen von denen, die in dem Verfahren gemäß der Erfindung verwendet werden, und erlauben es, eine Proteinfraktion zu isolieren, die sich von der unterscheidet, die erfindungsgemäß erhalten wurde.
Mit Erstaunen hat die Anmelderin ein neues Verfahren zur Isolierung von Milchproteinen entdeckt, das es ermöglicht, eine Milchproteinfraktion, die mit verbesserten biologischen Eigenschaften ausgestattet ist, insbesondere eine Milchproteinfraktion, die das Wachstum der Osteoblasten und die Inhibierung der Proliferation der Präosteoklasten und der Osteoklasten fördert, zu erhalten.
Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Isolierung von Milchproteinen ausgehend von Milch oder einer Molke bzw. Lactoserum, umfassend die folgenden Stufen:

a) die Milch oder die Molke wird sterilisiert und entfettet;
b) die Milchfraktion der Stufe a) wird über ein konditioniertes Kationenaustauschharz in einer Elutionssäule geführt;
c) die auf dem Harz zurückgehaltene Fraktion wird durch eine wässrige Salzlösung eluiert;
d) das aus Stufe c) resultierende Eluat wird entsalzt, vorzugsweise durch Ultrafiltration und Diafiltration, danach sterilisiert, vorzugsweise durch Mikrofiltration.

Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass:

α) das Kationenaustauschharz ein Harz ist, das mit stark sauren Funktionen gepfropft ist; der Parameter BV das Verhältnis des Volumens an Ausgangsmaterial zu dem Volumen des feuchten Harzes in der Säule bezeichnet; der Parameter SV das Verhältnis der Durchflussmenge der Säule zum Volumen des feuchten Harzes in der Säule bezeichnet; der Parameter LV das Verhältnis der Durchflussmenge der Säule zum Querschnitt der Säule bezeichnet;
β) im Verlauf der Stufe b) die Fixierungsparameter die folgenden Werte haben: – BV_f liegt zwischen 50 und 400, vorzugsweise zwischen 80 und 300; – SV_f liegt zwischen 2 und 40 h^–1; – LV_f ist höher oder gleich 1 m/h und unter oder gleich 5 m/h;
γ) im Verlauf der Stufe c) die Elutionsparameter die folgenden Werte haben: – BV_e liegt zwischen 1,5 und 7; – LV_e liegt unter 1 m/h, vorzugsweise unter 0,5 m/h.

Als Ausgangsprodukt kann man im Verfahren gemäß der Erfindung Milch oder Molke bzw. Lactoserum, vorzugsweise von der Kuh stammend, verwenden.
Die Molke bzw. das Lactoserum ist eine Restflüssigkeit, die nach Extraktion der Proteine und der Fettmasse der Milch oder von „petit-lait" erhalten wird. Man unterscheidet im Allgemeinen drei Kategorien von Molke. Die beiden ersten Kategorien werden entsprechend der Azidität der Molke bzw. des Lactoserums klassifiziert, die unter oder über 1,8 g Milchsäure/l liegen kann: Die Süßmolke, die aus der Herstellung von Hartkäse aus gekochter oder nicht gekochter Milch (Emmentaler, Saint-Paulin usw.) stammt und Sauermolke (bzw. saures Lactoserum), die aus Casein und Käsen, die durch gemischte Coagulation oder Milchsäurecoagulation erhalten werden (Weichkäse, Frischkäse), stammt. Die mittlere Zusammensetzung der Süßmolke bzw. des süßen Lactoserums ist typischerweise für 61 g Trockensubstanz pro kg Lactoserum bzw. Molke, 42 bis 48 g Lactose, 8 g Proteine, 2 g Fett, 5 bis 7 g Mineralstoffe, 1 bis 5 g Milchsäure und als Rest Mineralstoffe und Vitamine.
Man kennt auch das ideale Lactoserum bzw. die ideale Molke, die durch Mikrofiltration der Milch an einem Träger mit einer mittleren Porosität von 0,1 μm erhalten wird.
Nach einer ersten Variante der Erfindung verwendet man als Ausgangsprodukt Milch und vorzugsweise Kuhmilch, deren Zusammensetzung den Erhalt eines Isolats von Proteinen mit interessanteren biologischen Eigenschaften durch das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht. Diese Variante ermöglicht es auch, eine höhere Ausbeute an Proteinen zu behalten als bei Varianten, die Molke bzw. Lactoserum als Ausgangsprodukt verwenden.
Nach einer zweiten bevorzugten Variante der Erfindung verwendet man als Ausgangsprodukt Casein-Sauermolke. Diese Variante stellt einen bedeutenden wirtschaftlichen Vorteil dahingehend dar, dass das Ausgangsprodukt ein Nebenprodukt aus der Industrie ist und es damit kostengünstig ist.
In der ersten Stufe des Verfahrens wird die Milch oder die Molke bzw. das Lactoserum in bekannter Art sterilisiert und durch Entrahmen entfettet:
Die Entrahmung der Milch bezeichnet die Trennung der Sahne von der Milch, unabhängig davon welches Verfahren zur Erreichung dieser Trennung verwendet wird.
In traditioneller Weise erfolgt die Herstellung der Sahne nach einem natürlichen Prozess: Wenn die Milch ruht, trennen sich die Elemente, die sie bilden, in Funktion ihrer Dichte. Die Fettkügelchen, die leichter sind als Wasser, steigen an die Oberfläche, um eine Sahneschicht zu bilden. Bei der industriellen Produktion wird die Bildung der Sahne durch Durchgang der Milch durch eine Zentrifugen-Entrahmungs-Vorrichtung beschleunigt.
Üblicherweise erfolgt die Pasteurisierung durch kontrolliertes Erhitzen mit kurzer Dauer, um so die gegebenenfalls in der Sahne vorliegenden pathogenen Keime zu eliminieren. Vorteilhafterweise wird die Pasteurisierung bei einer Temperatur zwischen 65 und 95°C, vorzugsweise zwischen 80 und 95°C durchgeführt. Beispielsweise kann man die Milch oder das Lactoserum bzw. die Molke während 15 Sekunden bei einer Temperatur zwischen 65 und 82°C behandeln. Man kann die Ausgangsmilch oder die Ausgangsmolke auch durch Mikrofiltration über ein Filter sterilisieren, welches Poren mit einem Durchmesser von 0,1 bis 2 μm hat.
Das sterile und entfettete Ausgangsmaterial wird dann über ein Kationenaustauschharz geleitet. Erfindungsgemäß ist das Kationenaustauschharz ein Harz, das mit stark sauren Funktionen gepfropft ist und das eine Ionenaustauschkapazität zwischen 200 und 1.000 μe/ml, vorzugsweise zwischen 400 und 700 μe/ml hat. Mit stark saurer Funktion ist eine dotierte Säurefunktion mit einem pKa ≤ 2 gemeint. Das Harz kann insbesondere mit Sulfonsäurefunktionen gepfropft sein, im Allgemeinen in Form von Sulfonatsalzen für seine Verwendung, wobei die Natur des Salzes durch die Lösung bestimmt wird, die zum Konditionieren der Säule vor Durchführung des Verfahrens dient. Vorzugsweise wählt man ein Pfropfen durch aromatische oder aliphatische Gruppen, die Träger der Sulfonsäurefunktionen sind, bevorzugter in Form ihrer Propylsulfonatsalze. Das Harz, auf das Sulfonsäurefunktionen gepfropft sind, kann jeglicher Natur sein, insbesondere Polyacryl oder Polystyrol. Die Granulometrie des Harzes liegt vorzugsweise zwischen 100 μm und 900 μm, bevorzugter zwischen 200 und 750 μm, noch bevorzugter zwischen 250 und 600 μm. Das erfindungsgemäß verwendbare Harz muss vorzugsweise eine Dichte von über 1,15 aufweisen.
Unter den Harzen, die im Handel verfügbar sind und in der vorliegenden Erfindung verwendbar sind, kann man insbesondere nennen: das Harz Trisacryl SP^®, im Handel von der Firma BIOSEPRA, das Harz MacroPrep HighS^®, im Handel von der Firma BioRad. Vorzugsweise wählt man ein Polystyrolharz, das mit Alkyl- oder Arylsulfonat-Funktionen gepfropft ist.
Das Harz wird vor seiner Verwendung in einer dem Fachmann bekannten Art durch Behandlung mit einer desinfizierenden Lösung und Spülung, um eine Kontamination durch Mikroorganismen zu vermeiden, konditioniert. Es wird dann gegebenenfalls durch Passage einer Puffer- und Spüllösung äquilibriert.
Die Stufe b) der Fixierung des Ausgangsmaterials, Milch oder Lactoserum bzw. Molke, das steril und entfettet ist, erfolgt unter den folgenden bevorzugten Bedingungen: Das Harz wird in einer Säule konditioniert, deren Temperatur zwischen 2 und 15°C, vorzugsweise zwischen 4 und 12°C, gehalten wird. Vorzugsweise wird die Säule von unten mit Ausgangsmaterial gespeist. Man arbeitet vorzugsweise in einem Wirbelbett. Die Fixierungsparameter werden so eingestellt, dass eine oder mehrere der folgenden Bedingungen verifiziert werden:

– BV_f liegt zwischen 80 und 150, vorzugsweise zwischen 80 und 120;
– SV_f lieg zwischen 5 und 40 h^–1, vorzugsweise zwischen 8 und 20 h^–1, noch bevorzugter zwischen 8 und 15 h^–1;
– LV_f liegt zwischen 3 und 4,8 m/h, vorzugsweise zwischen 3,2 und 4 m/h.

Vorzugsweise wird die Gesamtheit der folgenden Bedingungen im Verlauf der Stufe b) verifiziert:

– BV_f liegt zwischen 80 und 120;
– SV_f liegt zwischen 8 und 15 h^–1;
– LV_f liegt zwischen 3 und 4,8 m/h; im Verlauf der Stufe c):
– BV_e liegt zwischen 3 und 7;
– LV_e liegt unter 1 m/h.

Durch Ionenaustausch werden sich die Proteine der Milchfraktion, die als Ausgangsprodukt verwendet wird, an den sauren Funktionen des Harzes fixieren. Die Wahl der Fixierungsparameter gemäß der Erfindung erlaubt es eine selektive Fixierung der Proteine an der Säule durchzuführen. Unter den klassischen Bedingungen zur Fixierung der Milch an einem kationischen Harz fixieren sich hauptsächlich Lactoferrin und Lactoperoxidase an dem Harz. In dem Verfahren gemäß der Erfindung werden die anderen Proteine, die in geringeren Mengen vorliegen, durch die oben definierten Fixierungsbedingungen begünstigt, und ihre Verhältnismenge in dem Gemisch an Proteinen, die an dem Harz fixiert sind, liegt deutlich über ihrem Verhältnisanteil im Ausgangsprodukt. Das Verfahren gemäß der Erfindung erlaubt es somit eine Milchfraktion zu isolieren, die eine neue Zusammensetzung an Proteinen im Vergleich zu Milchproteinzusammensetzungen des Standes der Technik hat und die interessante biologische Eigenschaften aufweist.
Die Stufe c) der Elution von fixierten Proteinen erfolgt unter den folgenden bevorzugten Bedingungen:
Das Harz wird bei einer Temperatur zwischen 2 und 15°C, vorzugsweise zwischen 4 und 12°C gehalten. Vorzugsweise wird die Säule mit Ausgangsmaterial (wässrige Salzlösung) von oben beschickt. Die wässrige Kochsalzlösung, die zur Durchführung der Erfindung verwendet wird, ist im Allgemeinen eine Lösung eines Chlorids eines Alkalimetalls wie K+, Na+, Ca+, Mg+. Vorzugsweise verwendet man eine wässrige Natriumchloridlösung. Vorteilhafterweise hat die wässrige Salzlösung eine Konzentration zwischen 2 und 25%, vorzugsweise von 5 bis 15 Gew.-% Salz pro Gewicht an Flüssigkeit. Vorzugsweise ist die Ionenstärke der wässrigen Salzlösung zwischen 1 und 2 M. Der pH der Elutionslösung liegt im Allgemeinen zwischen 6 und 7, vorteilhafterweise zwischen 6,5 und 7.
Vorzugsweise verifizieren die Elutionsparameter eine oder mehrere der folgenden Bedingungen:

– BV_e liegt zwischen 3 und 7 und vorzugsweise zwischen 3 und 5;
– LV_e liegt unter 0,5 m/h.

Die Harzsäule wird in bekannter Weise vor einer neuen Verwendung gewaschen.
Nach dieser Stufe wird das erhaltene Eluat, das das Gemisch aus Milchproteinen enthält, in bekannter Art einer Stufe oder mehreren Stufen der Ultrafiltration und Diafiltration unterworfen, die dazu bestimmt sind, die Salze zu eliminieren. Andere Mittel, die dem Fachmann bekannt sind, zum Beispiel Elektrodialyse oder Leiten über schwache anionische und kationische Harze, können in dieser Stufe als Ersatz für die Ultrafiltration und Diafiltration verwendet werden. Vorzugweise wird diese Behandlung bis zum Erhalt eines Permeats, das eine Leitfähigkeit von unter 15 mS hat, durchgeführt. Es kann jedes andere Verfahren, das es ermöglicht, die Salze zu eliminieren, wie insbesondere Elektrodialyse, als Ersatz für diese Stufe verwendet werden. Die Lösung wird dann einer Mikrofiltration unterworfen, die dazu bestimmt ist, das Ultrafiltrationsretentat vor einer Trocknung zu sterilisieren. Es können andere technische Mittel verwendet werden, um die in dieser Stufe erhaltene Milchfraktion zu sterilisieren, insbesondere eine angepasste thermische Behandlung, Ultraschallbehandlung oder Behandlung mit gepulsten elektrischen Feldern.
Vorzugsweise wird das entsalzte und sterilisierte Produkt so getrocknet, dass die Milchfraktion aus dem erfindungsgemäßen Verfahren in Form eines Pulvers erhalten wird, das dann einer Konditionierung und Lagerung unterzogen wird. Die Trocknung kann in bekannter Art durch Lyophilisierung oder durch Atomisierung durchgeführt werden.
Die Milchproteinfraktion, vorzugsweise aus Kuhmilch und erhalten nach dem erfindungsgemäßen Verfahren, ist neu. In trockener Form ist sie dadurch gekennzeichnet, dass sie ausgestattet ist mit:

– einem Proteingehalt von über 90%,
– einem Gehalt an Mineralsalzen unter 1%,
– einem Fettgehalt unter 1%,
– einem Lactosegehalt unter 1%,
– einem Feuchtigkeitsgehalt unter 5%,
– einem Gehalt an Lactoferrin unter 80%,
– einem pH in Lösung mit 2% zwischen 6 und 7,5,
– einer spektralphotometrischen Reinheit im UV-sichtbaren Bereich, definiert durch das Verhältnis OD412/OD280 < 0,15,
– wenigstens 1% Proteine mit einem isoelektrischen Punkt über oder gleich 8, wobei die Prozentangaben als Gewicht bezogen auf das Gewicht der Trockensubstanz der Milchfraktion gemäß der Erfindung angegeben sind.

In dem Fall, dass das verwendete Ausgangsprodukt Milch und keine Molke bzw. kein Lactoserum ist, wird das durch das Verfahren der Erfindung erhaltene Produkt durch die zusätzlichen Bedingungen gekennzeichnet:

– Vorliegen von wenigstens 40% Proteinen mit einem isoelektrischen Punkt über oder gleich 8,
– der Gehalt an Lactoferrin liegt über 30% und unter 80%,
– die Lactoperoxidase-Aktivität ist über oder gleich 120 Einheiten ABTS pro mg Isolat (ABTS = 2,2'-Azino-bis-(3-ethyl-benzo-thiazolin-6-sulfonsäure).

Die Messung der OD bei 412 nm liefert eine quantitative Evaluierung des Lactoferrins und der Lactoperoxidase, die in der Milchproteinfraktion vorliegen.
Die Messung von OD bei 280 nm liefert eine quantitative Evaluierung der Gesamtheit der Proteine, die in der Milchproteinfraktion vorliegen.
Das Verhältnis OD⁴¹²/OD²⁸⁰ < 0,15 zeigt, dass das Lactoferrin und die Lactoperoxidase bezüglich der anderen Proteine in der Zusammensetzung gemäß der Erfindung verglichen mit den Verhältnissen, in denen sie in der Milch und in den Milchproteinfraktionen des Standes der Technik vorliegen, unterrepräsentiert sind.
Vorzugsweise entspricht die durch das Verfahren gemäß der Erfindung erhaltene Milchproteinfraktion wenigstens einem der folgenden Charakteristika:

– ein Proteingehalt über 95%,
– ein Gehalt an Mineralsalzen unter 0,5%,
– ein Fettgehalt unter 0,5%,
– ein Lactosegehalt unter 0,5%,
– ein Feuchtigkeitsgehalt unter 4%,
– ein pH in Lösung mit 2% zwischen 6 und 7,2,
– eine spektralphotometrische Reinheit im UV-sichtbaren Bereich, definiert durch das Verhältnis OD⁴¹²/OD²⁸⁰ < 0,1,
– enthält wenigstens 1% Proteine mit einem isoelektrischen Punkt zwischen 8,2 und 8,7.

In dem Fall, in dem das verwendete Ausgangsprodukt Milch und keine Molke bzw. kein Lactoserum ist, wird das durch das Verfahren der Erfindung erhaltene Produkt durch den vorteilhaften zusätzlichen Zustand gekennzeichnet:

– der Gehalt an Lactoferrin liegt über 50% und unter 80%.

Die Milchproteinfraktionen gemäß der Erfindung weisen vorteilhafte Eigenschaften auf: Sie begünstigen insbesondere das Wachstum der Osteoblasten und das der Intestinalzellen.
Die Milchproteinfraktionen der Erfindung sind auch wirksam, um das Wachstum der Osteoklasten und der Präosteoklasten zu inhibieren.
Diese Eigenschaften sowie die bereits bekannten Eigenschaften der Milchproteinfraktionen des Standes der Technik erlauben es, die Verwendung dieser Zusammensetzungen in zahlreichen Anwendungen, insbesondere auf alimentärem und pharmazeutischen Gebiet, ins Auge zu fassen. Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch jede alimentäre, pharmazeutische Zusammensetzung und jedes Hygieneprodukt, die/das eine Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung umfasst.
Eine alimentäre Zusammensetzung gemäß der Erfindung kann zum Beispiel eine alimentäre Milch sein, insbesondere eine Milch, die für Kinderernährung bestimmt ist, die durch einfache Rehydratisierung des Pulvers der Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung erhalten wird. Gegenstand der Erfindung ist auch die Verwendung einer Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung zur Herstellung einer alimentären Milch.
Gegenstand der Erfindung sind auch alimentäre Zusammensetzungen, die eine Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung und andere alimentäre Ingredienzien umfassen. In Betracht ziehen kann man insbesondere die Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung zu Kuhmilch zu geben, um diese mit bestimmten Proteinen anzureichern. Das Vorliegen von Calcium in den Lebensmitteln, die die Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung umfassen, wird insoweit besonders günstig sein, als diese Milchproteinfraktion die Absorption des Calciums durch den menschlichen Organismus, insbesondere die Fixierung des Calciums in den Knochengeweben, verbessert.
Gegenstand der Erfindung ist auch die Kombination einer Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung mit Calcium. Die Erfindung bezieht sich auch auf alimentäre Kits, die mehrere konditionierte Bestandteile in isolierter Form umfassen, die zu einer extemporären Herstellung des Nahrungsmittels bestimmt sind, und das Pulver der Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung umfassen.
Derartige Lebensmittel können zur Prävention von Pathologien wie zum Beispiel: Wachstumsretardierung, Osteoporose, Knochenbrüchigkeit, Knochenbrüche, Rheumatismus, Arthrose, periodontale Krankheiten, Defizienz der Intestinalbarriere... verwendet werden.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung gemäß der Erfindung, die wenigstens eine Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst, kann in der Behandlung einer oder mehrerer der folgenden Pathologien verwendet werden: Wachstumsretardierung, Osteoporose, Knochenbrüchigkeit, Knochenbrüche, Rheumatismus, Arthrose, periodontale Krankheiten, Defizienz der Intestinalbarriere...
Selbstverständlich kann eine derartige Zusammensetzung auch einen oder mehrere andere Therapeutika umfassen. Calcium kann vorteilhafterweise mit der erfindungsgemäßen Milchproteinfraktion kombiniert werden. Eine derartige Kombination ist Teil der vorliegenden Erfindung. In der Tat ermöglicht eine Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung die Verbesserung der Absorption von Calcium im Organismus, insbesondere die Fixierung des Calciums im Knochengewebe, was es ermöglicht, den Verstärkungseffekt für die Knochen zu verbessern.
Calcium mit Vitamin D kann auch vorzugsweise mit der Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung kombiniert werden. Eine derartige Kombination ist ebenfalls Teil der vorliegenden Erfindung. In der Tat verbessert das Vitamin D die intestinale Absorption von Calcium, und eine Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung ermöglicht es, die Fixierung von Calcium im Knochengewebe zu verbessern. Dieser synergistische Effekt ermöglicht insbesondere eine Verbesserung der Gesundheit der Knochen.
Pharmazeutische Zusammensetzungen oder Nahrungsergänzungsmittel gemäß der Erfindung können in jeder geeigneten Form verabreicht werden, wie zum Beispiel in Form von Pulver, Granulat, Tabletten, Kapseln, Getränken wie als Lösung oder als Sirup. Die Verabreichungshäufigkeit und die zu verabreichende Dosis werden als Funktion des Gewichts und des Alters der Person angepasst.
In der vorliegenden Erfindung enthalten sind auch Hygieneprodukte, insbesondere Produkte, die für die Hygiene der Mundhöhle bestimmt sind, wie zum Beispiel Zahnpasta in Form von Gel oder Paste, Mundspülungen, Kaugummis, die eine Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung umfassen.
BEISPIELE:
I – Herstellung von Isolaten von Milchproteinen
Allgemeine Bedingungen
Das in den Beispielen unten verwendete Harz ist ein Trisacryl SP^®-Harz. Es macht die folgenden Konditionierungsbehandlungen vor einer Anfangsverwendung durch:
Inkontaktbringen mit einer 0,4%igen wässrigen Lösung des Desinfektionsmittels ASEPTO^®, und zwar mit 3 Litern Desinfektionsmittel pro kg feuchtes Harz, gefolgt von einer Spülung. Äquilibrierung durch Durchleiten eines Acetatpuffers (80 mM, pH = 5,3), der Calciumchlorid (33 g/l) und Kaliumchlorid (50 g/l) enthält, und zwar mit 4 Litern dieses Puffers pro kg feuchtes Harz. Schließlich wird das Harz mit Wasser bis zum Erhalt eines Eluats, das einen pH zwischen 6 und 7 und eine Leitfähigkeit von niedriger als 5 mS hat, gespült.
Nach jeder Sequenz der Fixierung von Ausgangsmaterial und der Elution wird das Harz durch enzymatische Behandlung mit alkalischer Protease von Bacillus licheniformis in Puffer mit pH = 8 bei 60°C während 2 Stunden gereinigt, und dann folgt eine Behandlung mit einer NaCl-Lösung mit 100 g pro Liter während dreißig Minuten (wird zweimal wiederholt). Vor seiner Wiederverwendung wird es einer Konditionierungsbehandlung, die oben beschrieben ist, unterzogen.
Mit dem Eluat wird eine Ultrafiltration bei einer Temperatur zwischen 5 und 10°C an organischen Membranen, deren Ausschlussgrenze 10 kD ist, durchgeführt. Der Volumenkonzentrierungsfaktor, der durchgeführt wird, liegt zwischen 10 und 60, um so ein Retentat zu erhalten, das einen möglichst hohen Trockenextrakt hat, vorzugsweise zwischen 15 und 20%. Die Diafiltration wird bei einer Temperatur zwischen 15 und 25°C mit denselben Membranen durchgeführt, wobei ein Volumen an endmineralisiertem Wasser verwendet wird, das zwischen dem 8- und 10-fachen des Retentatvolumens, das aus der Ultrafiltration erhalten wurde, liegt, bis eine Leitfähigkeit von unter 15 mS erreicht ist.
Die Mikrofiltration wird bei 35°C ausgehend von dem Retentat, das aus der Ultrafiltration/Diafiltration erhalten wurde, an Keramikmembranen mit einer Ausschlussgrenze von 1,4 μm durchgeführt.
Die Trocknung des Mikrofiltrationspermeats wird mit einem Atomisierungsturm mit Turbine durchgeführt, und zwar mit einer Eingangstemperatur von 140°C und einer Ausgangstemperatur von 80°C.
Merkmale des Harzes:
Das Harz SPEC 70 besteht aus einem chemisch inerten und mechanisch beständigen Träger.
Chemisch wird der Träger durch Polymerisation von AMPS:2-Acrylamid-2-methylpropan-sulfonsäure hergestellt. Das Harz hat eine Ionenaustauschkapazität zwischen 400 und 700 μe/ml und eine Proteinfixierungskapazität, gemessen mit Lactoferrin (Minimum 20 mg/ml) oder Lactoperoxidase (Minimum 40 mg/ml) oder Lysozym (Minimum 70 mg/ml); seine Dichte liegt über 1,15 und seine Granulometrie liegt zwischen 250 und 560 μm.
Beispiel 1:
300.000 Liter Milch, die entrahmt und bei 68°C während 15 Sekunden thermisch behandelt worden war, werden bei 10°C über 3.000 Liter Kationenaustauschharz (Referenz SPEC 70, geliefert von der Firma BIOSEPRA) mit einem Durchfluss von 14.000 Liter/h in aufsteigendem Strom in zwei Säulen bzw. Kolonnen, die parallel arbeiten und jeweils einen Radius von 1 Meter haben, geleitet.
Die an dem Harz fixierten Proteine werden durch 9.000 Liter 10%iger Natriumchloridlösung in absteigendem Strom eluiert.
Das erhaltene Eluat weist einen pH von 6,5 und einen Trockenextrakt von 80 g/kg auf. Es wird über Ultrafiltrationsmembranen mit einer Ausschlussgrenze von 10 kD und 17 m² Oberfläche, geliefert von DSS, bei 11°C mit einem Permeationsfluss von 16 l/h/m² geleitet, bis ein Volumenkonzentrierungsfaktor von 7 erreicht ist.
Das Retentat hat einen pH von 5,9 und einen Trockenextrakt von 170 g/kg; um das Salz zu eliminieren, wird dieses Retentat dann an denselben Membranen bei 25°C mit Wasser in einer Menge von 70% des Volumens an verwendetem Eluat bis zur Erreichung eines Volumenkonzentrierungsfaktors von 9,5 am Ende mit einem Permeationsfluss von 16 l/h/m² diafiltriert.
Das diafiltrierte Retentat hat einen pH von 6,5 und einen Trockenextrakt von 95 g/kg; es wird dann über Mikrofiltrationsmembranen mit einer Porosität von 1,4 μm bei 30°C mit einem Permeationsfluss von 320 l/h/m² gekühlt. Das Permeat dieser Mikrofiltration weist einen pH von 6,6 und einen Trockenextrakt von 75 g/kg auf.
Dieses Permeat wird dann in einem Atomisierungsturm, der mit einer Turbine ausgestattet ist, getrocknet; die Eintrittstemperatur in den Turm ist 140°C und die Austrittstemperatur ist 80°C.
Das so erhaltene pulverförmige Isolat weist die folgenden Charakteristika auf:

– Feuchtigkeit: 4,7%,
– Proteine (N × 6,38): 96,2%, davon: Lactoferrin: 54% Lactoperoxidase: 125 ABTS-Einheiten/mg
– Asche: 0,1%, davon: Na: 0,02% Cl: 0,44%
– spektralphotometrische Reinheit: OD⁴¹²/OD²⁸⁰ = 0,06.

Das elektrophoretische Profil, das durch Isofokussierung unter Entwicklung mit Silbernitrat erhalten wurde, ist in 1 dargestellt. In 1 vergleicht man die Verteilung der isoelektrischen Punkte der Milchproteinfraktion gemäß der Erfindung (LN06 genannt) und ein Referenzprodukt, Std genannt, das ein Proteineichungskit ist, das von der Firma Pharmacia unter der Bezeichnung 1747101 und dem Namen „Isoelectric Focusing Calibration Kit Broad PI 3–10" im Handel ist. Man stellt fest, dass in erster Linie Proteine mit erhöhten isoelektrischen Punkten (um 8,4) vorliegen. Dieses Produkt umfasst etwa 50 Gew.-% Lactoferrin, bezogen auf das Gesamtgewicht des Isolats.
Beispiel 2:
4,4 Liter native Casein-Sauermolke (pH 4,7, Trockenextrakt 65 g/kg) werden bei 10°C über 22 ml Kationenaustauschharz (Referenz SPEC 70, geliefert von der Firma BIOSEPRA) geleitet, und zwar mit einem Durchfluss von 400 ml/h in absteigendem Fluss in einer Säule mit einem Durchmesser von 15 mm.
Die an dem Harz fixierten Proteine werden mit 90 ml einer 10%igen Natriumchloridlösung in absteigendem Fluss eluiert.
Nach Eliminieren des Salzes wird das erhaltene Eluat (100 ml) während 48 Stunden bei 4°C gegen entmineralisiertes Wasser dialysiert.
Das dialysierte Produkt weist die folgenden Charakteristika auf:

– Trockenextrakt: 1,5 g/kg,
– pH: 5,4,
– Leitfähigkeit: 24 μS,
– OD⁴¹² < 0,005,
– OD²⁸⁰ = 4,6 (0,46, 10-fach verdünnt).

Das elektrophoretische Profil erlaubt es, festzustellen, dass wenigstens 1% der vorliegenden Proteine einen isoelektrischen Punkt über oder gleich 8 haben. Dieses Produkt enthält etwa 3 Gew.-% Lactoferrin, bezogen auf das Gesamtgewicht des Proteinisolats.
II – Biologische Tests
A – Allgemeine Verfahren
1. Tests auf Proliferation der MC3T3-Zellen (Osteoblasten-Zelllinie)
Die MC3T3-Zellen werden bei 37°C in feuchter Atmosphäre, die 5% CO₂ enthält, kultiviert. Das verwendete Kulturmedium ist das ⎕-MEM (alpha-modifiziertes Eagle-Medium), supplementiert mit 10% fötalem Kälberserum und 50 U/ml Penicillin und 50 μg/ml Streptomycin.
Um die Wirkung der verschiedenen Proteine auf das Zellwachstum zu untersuchen, werden die Zellen auf Platten mit 48 Vertiefungen in einer Dichte von 5 × 10⁴-Zellen/cm² geimpft. 48 Stunden nach der Impfung werden die Proteine den Zellen zugesetzt. Die Proteinlösungen werden in Kulturmedium in einer Konzentration von 10 mg/ml hergestellt, dann über ein 0,02 μ-Filter filtriert und unmittelbar vor der Verwendung in dem Kulturmedium zu der gewünschten Konzentration verdünnt. Die Zellen werden nach 72 h Kultur gezählt, indem die DNA-Menge evaluiert wird.
2. Test auf Proliferation der RAW 264.7-Zellen (Präosteoklasten-Zelllinie)
Die RAW 264.7-Zellen werden bei 37°C in feuchter Atmosphäre, die 5% CO₂ enthält, kultiviert. Das verwendete Kulturmedium ist DMEM (Dubelccos modifiziertes Eagle-Medium), das 25 mM Glucose, 4 mM Glutamin und 1,5 g/l Bicarbonat enthält, supplementiert mit 10% fötalem Kälberserum und 50 U/ml Penicillin und 50 μg/ml Streptomycin.
Um die Wirkung der verschiedenen Proteine auf das Zellwachstum zu untersuchen, werden die Zellen auf Platten mit 48 Vertiefungen in einer Dichte von 5 × 10⁴ Zellen/cm² ausgesät. 48 Stunden nach der Impfung bzw. der Aussaat werden die Proteine den Zellen zugesetzt. Die Proteinlösungen werden in dem Kulturmedium in einer Konzentration von 10 mg/ml hergestellt, dann mit einem 0,22 μm-Filter filtriert und unmittelbar vor der Verwendung in dem Kulturmedium zu der gewünschten Konzentration verdünnt. Die Zellen werden nach 72 Stunden Kultur gezählt, indem die DNA-Menge evaluiert wird.
3. Test auf Proliferation der Caco-2-Zellen (Intestinal-Zelllinie)
Die Caco-2-Zellen werden bei 37°C in feuchter Atmosphäre, die 5% CO₂ enthält, kultiviert. Das verwendete Kulturmedium ist DMEM (Dubelccos modifiziertes Eagle-Medium), enthaltend 25 mM Glucose, supplementiert mit 15% fötalem Kälberserum, 1% nicht-essenziellen Aminosäuren, 6 mM Glutamin und 50 U/ml Penicillin und 50 μg/ml Streptomycin.
Um die Wirkung der verschiedenen Proteine auf das Zellwachstum zu untersuchen, werden die Zellen auf Platten mit 48 Vertiefungen in einer Dichte von 4 × 10⁴ Zellen/cm² geimpft. 48 Stunden nach der Beimpfung werden die Proteine zu den Zellen gegeben. Die Proteinlösungen werden in einer Konzentration von 10 mg/ml in dem Kulturmedium hergestellt, dann mit einem 0,22 μ-Filter filtriert und unmittelbar vor der Verwendung in dem Kulturmedium zur gewünschten Konzentration verdünnt. Die Zellen werden nach 72 h Kultur gezählt, indem die DNA-Menge evaluiert wird.
B-Resultate
Die oben beschriebenen Tests wurden unter Verwendung von drei Produkten durchgeführt:

– ein Isolat von Proteinen aus Kuhmilch, bestehend aus 90% Lactoferrin (Vergleichsprodukt): T₁,
– ein Isolat von Proteinen der Kuhmilch, dessen Gehalt an Lactoferrin weniger als 0,01% ist (Vergleichsprodukt): T₂,
– das in Beispiel 1 hergestellte Produkt: P₁,
– das in Beispiel 2 hergestellt Produkt: P₂.

Die Resultate dieser Tests sind in Tabelle I angegeben:
TABELLE I
Die Konzentration bezeichnet die Konzentration des Isolats der Milchproteine im Kulturmedium.
Der Stand der Technik tendiert dazu, zu beweisen, dass die Aktivität eines Isolats von Milchproteinen auf dem prozentualen Lactoferringehalt basiert, den es enthält (siehe Resultate für T₂).
Im Gegensatz zu diesem Vorurteil des Standes der Technik zeigen die Resultate der oben dargelegten Tests, dass die Isolate von Milchprotein gemäß der Erfindung, obgleich sie wenig Lactoferrin im Vergleich zum Vergleich T₁ enthalten, eine beachtliche Aktivität in den Tests auf zelluläres Wachstum bei den Osteoblasten und bei den Intestinalzellen und Aktivität der Inhibierung der Proliferation der Präosteoklasten aufweisen.

Claims

Verfahren zur Isolierung von Milchproteinen aus Milch oder einer Molke, umfassend die folgenden Stufen: a) die Milch oder die Molke wird sterilisiert und entfettet; b) die Milchfraktion aus Stufe a) wird über ein konditioniertes Kationenaustauschharz in einer Elutionssäule geführt; c) die auf dem Harz zurückgehaltene Fraktion wird durch eine wässrige Salzlösung eluiert; d) das aus Stufe c) resultierende Eluat wird entsalzt und sterilisiert; wobei dieses Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, dass α) das Kationenaustauschharz ein Harz ist, das mit starken sauren Funktionen gepfropft ist; der Parameter BV das Verhältnis des Volumens an Ausgangsmaterial zu dem Volumen des feuchten Harzes in der Säule bezeichnet; der Parameter SV das Verhältnis der Durchflussmenge der Säule zum Volumen des feuchten Harzes in der Säule bezeichnet; der Parameter LV das Verhältnis der Durchflussmenge zu dem Querschnitt der Säule bezeichnet; β) im Verlauf der Stufe b) die Fixierungsparameter die folgenden Werte haben: – BV_f liegt zwischen 50 und 400; – SV_f liegt zwischen 2 und 40 h^–1; – LV_f ist höher oder gleich 1 m/h und unter oder gleich 5 m/h; γ) im Verlauf der Stufe c) die Elutionsparameter die folgende Werte haben: – BV_e liegt zwischen 1,5 und 7; – LV_e liegt unter 1 m/h.
Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Ausgangsprodukt Kuhmilch ist.
Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Ausgangsprodukt eine Casein-Sauermolke (bzw. Caseinmolke) ist.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Kationenaustauschharz ein Harz ist, das mit sauren Funktionen mit pKs ≤ 2 gepfropft ist, das eine Ionenaustauschkapazität zwischen 200 und 1000 μe/ml hat.
Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Harz mit Sulfonsäure- oder Sulfonatsalz-Funktionen gepfropft ist.
Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Harz mit Propylsulfon- oder Propylsulfonat-Funktionen gepfropft ist.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Granulometrie des Harzes zwischen 100 μm und 900 μm, vorzugsweise zwischen 200 und 750 μm, noch bevorzugter zwischen 250 und 600 μm, liegt.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass im Verlauf der Stufe b) der Fixierung des Ausgangsmaterials eine oder mehrere der folgenden Bedingungen erfüllt ist/sind: – BV_f liegt zwischen 80 und 150; – SV_f liegt zwischen 5 und 40 h^–1; – LV_f liegt zwischen 3 und 4,3 m/h.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die folgenden Bedingungen eingehalten werden: im Verlauf der Stufe b): – BV_f liegt zwischen 80 und 120; – SV_f liegt zwischen 8 und 15 h^–1; – LV_f liegt zwischen 3 und 4,8 m/h; im Verlauf der Stufe c): – BV_e liegt zwischen 3 und 7; – LV_e ist weniger als 1 m/h.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass im Verlauf der Stufe b) das Harz in einer Säule konditioniert wird, deren Temperatur zwischen 2 und 15°C gehalten wird.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass im Verlauf der Stufe c) der Elution der fixierten Proteine wenigstens eine der folgenden Bedingungen erfüllt ist: – BV_e liegt zwischen 3 und 5; – LV_e ist kleiner als 0,5 m/h.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass im Verlauf der Stufe c) das Harz in einer Säule konditioniert wird, deren Temperatur zwischen 2 und 15°C gehalten wird.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die wässrige Salzlösung, die zur Durchführung der Erfindung verwendet wird, eine Lö sung eines Chlorids eines Alkalimetalls ist, das unter K⁺, Na⁺, Ca⁺, Mg⁺ ausgewählt wird.
Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die wässrige Salzlösung eine wässrige Natriumchloridlösung ist.
Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die wässrige Salzlösung eine Konzentration zwischen 2 und 25 Gew.-% Salz pro Gewicht Flüssigkeit hat.
Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die wässrige Salzlösung eine Ionenstärke zwischen 1 und 2 M hat.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der pH der wässrigen Salzlösung zur Elution zwischen 6 und 7, vorzugsweise zwischen 6,5 und 7 liegt.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Entsalzung durch Ultrafiltration und Diafiltration erfolgt.
Verfahren nach Anspruch 18, dadurch gekennzeichnet, dass die Behandlungen der Ultrafiltration und der Diafiltration bis zum Erhalt eines Permeats mit einer Leitfähigkeit von unter 15 mS durchgeführt werden.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Sterilisation durch Mikrofiltration durchgeführt wird.
Verfahren nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das entsalzte und sterilisierte Produkt derart getrocknet wird, dass die Milchfraktion, die aus dem Verfahren der Erfindung stammt, in Form eines Pulvers erhalten wird.
Milchproteinfraktion, dadurch gekennzeichnet, dass sie durch das Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 21 erhalten werden kann.
Milchproteinfraktion, dadurch gekennzeichnet, dass sie den folgenden Charakteristika entspricht: – ein Proteingehalt über 90%, – ein Gehalt an Mineralsalzen unter 1%, – ein Fettgehalt unter 1%, – ein Gehalt an Lactose unter 1%, – ein Feuchtigkeitsgehalt unter 5%, – ein Gehalt an Lactoferrin unter 80%, – ein pH in einer Lösung mit 2% zwischen 6 und 7,5, – eine spektralphotometrische Reinheit im UV-sichtbaren Bereich, definiert durch das Verhältnis OD⁴¹²/OD²⁸⁰, < 0,15, – enthält wenigstens 1% Proteine mit einem isoelektrischen Punkt über oder gleich 8, wobei die Prozentangaben als Gewicht bezogen auf das Gewicht der Trockensubstanz der Milchfraktion gemäß der Erfindung angegeben sind.
Milchproteinfraktion nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass sie wenigstens einem der folgenden Charakteristika entspricht: – ein Proteingehalt über 95%, – ein Gehalt an Mineralsalzen unter 0,5%, – ein Fettgehalt unter 0,5%, – ein Lactosegehalt unter 0,5%, – ein Feuchtigkeitsgehalt unter 4%, – ein Gehalt an Lactoferrin unter 80%, – ein pH in Lösung mit 2% zwischen 6 und 7,2, – eine spektralphotometrische Reinheit im UV-sichtbaren Bereich, definiert durch das Verhältnis OD⁴¹²/OD²⁸⁰, < 0, 1, – umfasst wenigstens 1% Proteine mit einem isoelektrischen Punkt zwischen 8,2 und 8,7.
Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 24, dadurch gekennzeichnet, dass sie aus Kuhmilch stammt.
Milchproteinfraktion nach Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass sie wenigstens 40% Proteine mit einem isoelektrischen Punkt über oder gleich 8 umfasst.
Milchproteinfraktion nach Anspruch 25 oder Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen Gehalt an Lactoferrin über oder gleich 30% und eine Lactoperoxidaseaktivität über oder gleich 120 ABTS-Einheiten pro mg Isolat umfasst.
Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 24, dadurch gekennzeichnet, dass sie von einer Casein-Sauermolke (bzw. Caseinmolke) abgeleitet ist.
Kombination einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 28 mit Calcium.
Kombination nach Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, dass sie außerdem Vitamin D umfasst.
Alimentäre Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie eine Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 umfasst.
Alimentärer Kit, der ein Pulver der Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 umfasst.
Verwendung einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 für die Herstellung einer alimentären Milch.
Verwendung einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 für die Herstellung eines Nahrungsmittels, das zur Prävention einer Pathologie bestimmt ist, die ausgewählt ist unter: Wachstumsretardierung, Osteoporose, Knochenbrüchigkeit, Knochenbrüchen, Rheumatismus, Arthrose, periodontalen Krankheiten, Defizienz der Intestinalschranke.
Verwendung einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 für die Herstellung eines Nahrungsmittels, das dazu bestimmt ist, das Wachstum der Osteoblasten und/oder der Intestinalzellen zu begünstigen und/oder das Wachstum der Präosteoklasten zu inhibieren.
Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie wenigstens eine Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.
Verwendung einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 für die Herstellung eines Medikaments, das zur Prävention und/oder der Behandlung einer Pathologie bestimmt ist, die ausgewählt ist unter: Wachstumsretardierung, Osteoporose, Knochenbrüchigkeit, Knochenbrüchen, Rheumatismus, Arthrose, periodontalen Krankheiten, Defizienz der Intestinalbarriere.
Verwendung einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 für die Herstellung eines Medikaments, das dazu bestimmt ist, die Absorption von Calcium im Organismus zu verbessern.
Verwendung einer Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 für die Herstellung eines Medikaments, das dazu bestimmt ist, das Wachstum der Osteoblasten und/oder der Intestinalzellen zu verbessern und/oder das Wachstum der Präosteoklasten zu inhibieren.
Hygieneprodukt, dadurch gekennzeichnet, dass es wenigstens eine Milchproteinfraktion nach einem der Ansprüche 22 bis 30 umfasst.