DE60221420T2

DE60221420T2 - Trennung von regioisomeren von metallphthalocyaninen

Info

Publication number: DE60221420T2
Application number: DE60221420T
Authority: DE
Inventors: Gabrio Roncucci; Francesca Giuntini; Donata Dei; Maria Paola De Filippis; Paolo Sarri; Marco Possenti; Valentina Paschetta; Giacomo Chiti
Original assignee: RCIZIO SpA; L Molteni and C dei Fratelli Alitti Societa di Esercizio SpA
Current assignee: RCIZIO SpA; L Molteni and C dei Fratelli Alitti Societa di Esercizio SpA
Priority date: 2001-10-29
Filing date: 2002-10-28
Publication date: 2008-04-10
Anticipated expiration: 2022-10-29
Also published as: JP2005507940A; DE60221420D1; DK1444236T3; CA2465272A1; IL161650A0; CN1592748A; AU2002351793B2; ATE368081T1; CY1107774T1; WO2003037902A1; JP4560812B2; CN100360534C; EP1444236A1; EP1444236B1; ES2291521T3; PT1444236E; CN101200469B; CA2465272C; US7265100B2; CN101200469A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Trennen von Regioisomeren von Metall-Phthalocyaninen der Formel (I), wie sie nachstehend angegeben werden, die Photosensibilisatoren sind, die gekennzeichnet sind durch eine Absorption und Fluoreszenz im roten Bereich des sichtbaren Spektrums.
Stand der Technik
Die Phthalocyanin-Chromofluorophor-Makrozyklen sind dafür bekannt, dass sie eine reaktive Spezies von Sauerstoff produzieren, insbesondere Singlett-Sauerstoff oder Radikale, indem sie mit sichtbarem Licht in Wechselwirkung treten. Verbindungen, die eine grundsätzliche Phthalocyanin-Struktur aufweisen, sind in Entwicklung für eine geplante Verwendung in der photodynamischen Therapie (photodynamic therapy; PDT) und/oder für diagnostische Zwecke sowie für viele andere interessante Anwendungen, die sich über ein weites Feld technologischer Bereiche erstrecken. Insbesondere wurden Zn(II)-Phthalocyanine und ihre Konjugate kürzlich in dem US Patent Nr. 5,965,598 , in der Europäischen Patentanmeldung Nr. 00112654.9 und in der Europäischen Patentanmeldung Nr. 01106411.0 beschrieben, die alle auf den Namen der Anmelderin lauten.
Selbst wenn man die Diskussion auf das technische Feld von PDT beschränkt, stellen Phthalocyanine einen der am meisten interessanten Typen von Photosensibilisatoren dar, die geeignet sind für eine Vielzahl von Anwendungen, und die auch geeignet sind für die Herstellung von „Photosensibilisatoren der zweiten Generation" für die therapeutische Anwendung gegen Tumor- und hyperproliferative Krankheiten sowie für antimikrobielle und biozide Zwecke.
In der wissenschaftlichen Literatur wurde vor kurzem berichtet, dass nicht nur die Zahl und Ladung von Substituenten, die auf den Photosensibilisator-Einheiten zugegen sind, die in-vitro- und in-vivo-Phototoxizität der Verbindungen beeinträchtigen (N. Brasseur et al., J. Med. Chem. 1994, 37, 415–420), sondern auch, dass die nicht-optimale Verteilung und die schlechte Selektivität der Photosensibilisatoren der ersten Generation in Beziehung steht zu physiko-chemischen Merkmalen von Photosensibilisatoren, wodurch sie auch mit ihrer chemischen Struktur in Verbindung stehen. Phthalocyanin-Photosensibilisatoren können hergestellt werden nach Verfahrensweisen, die in diesem technischen Gebiet bekannt sind, wie beispielsweise diejenigen, die beschrieben wurden in „C.C. Leznoff in: Phthalocyanines; Properties and Application, Bände I–III (Hrsg.: A.B. P. Lever), VCH Publishers, New York, 1989".
Bei entweder einigen nicht-zentrosymmetrischen Phthalocyaninen oder bei tetrasubstituiertem Phthalocyanin führte die herkömmliche statistische organische Synthese zur Herstellung einer Mischung von Regioisomeren, von denen berichtet wurde, dass ihre Zusammensetzung abhängig ist entweder von Substituenten oder vom koordinierenden Metall.
Die statistische Kondensation bei der tetrasubstituierten Phthalocyanin-Synthese begünstigt – in Abwesenheit anderer Antriebs-Faktoren – die Bildung von weniger symmetrischen Isomeren, und es wird eine Mischung erwartet, die zusammengesetzt ist aus 12,5 % des Isomeren mit der Konfiguration D_2h, 25 % des Isomeren mit der Konfiguration C_2v, 50 % des Isomeren mit der Konfiguration C_s und 12,5 % des Isomeren mit der Konfiguration C_4h.
Für den Zweck einer Herstellung reaktiver Sauerstoff-Spezies gibt es kein Problem damit, eine Isomeren-Mischung zu haben, jedoch ist es in vielen anderen Fällen, in denen entweder eine Erkennung der Stelle oder eines Liganden vorliegt oder molekulare charakteristische hydrophile/hydrophobe Eigenschaften vorliegen, die mit der Wirksamkeit verbunden sind, oder schließlich in dem Fall einer therapeutischen Entwicklung fundamental, einzelne charakterisierte Isomere zu haben.
Für die vorher angesprochenen Beispiele ist eine selektive Reinigung immer notwendig, um die einzelnen Regioisomere zu erhalten. Einige Forschungsgruppen haben versucht, reine Isomere direkt durch regioselektive Synthese zu erhalten, jedoch wurde auf die sem Weg nur das C_4h-Isomer von 1(4),8(11),15(18),22(25)-tetrasubstituierten Phthalocyaninen mit behindernden Gruppen erhalten (C.C. Leznoff et al., Can. J. Chem. 1994, 72, 1990–1998; Ibid., Chem. Commun. 1996, 1245).
Ein Versuch der Reinigung von Metall-Phthalocyanin-Derivaten wurde jüngst auch unternommen, jedoch wurden nur sehr wenige Berichte, die diesen Sachverhalt betreffen, publiziert. C_2v- und C_s-Isomere von 2(3),9(10),16(17),23(24)-Tetra-tert-butylphthalocyaninato Ni(II) wurden mit Siliciumoxid-HPLC und -MPLC angereichert (M. Hanack et al., J. Chem. Soc., Chem. Commun. 1993, 58–60).
Eine vollständige Trennung wurde erreicht für ein 1(4),8(11),15(18),22(25)-Alkyloxysubstituiertes Ni(II)-Phthalocyanin mittels HPLC und MPLC unter Verwendung von einer stationären Nitrophenyl-Phase und einer stationären Siliciumoxid-Phase (M. Hanack et al., Angew. Chem. 1993, 32, 1422–1424).
Weiter erfordert die Trennung von 2(3),9(10),16(17),23(24)-Alkyloxy-substituierten (Ni(II), Cu(II) oder Zn(II)-)Phthalocyaninen eine gezielt entwickelte HPLC-Phase, deren Produktionsumfang nicht vergrößert werden kann, gemäß M. Sommerauer et al. (J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 10085–10093; B. Gorlach et al., ICPP-1, 2000, Post 413); diese stationäre Phase wird in der Praxis hergestellt ausgehend von im Handel erhältlichem Siliciumoxid-Gel, das dann wenigstens zwei Reaktionen mit 4-Aminobutyldimethylmethoxysilan und anschließend mit 2-Phenylchinolin-4-Carbonsäure unterworfen wird, um besondere Spacer-Ketten in Siliciumoxid einzuführen. Eine derartige Verfahrensweise entwertet praktisch die Reproduzierbarkeit der Herstellung dieser stationären Phase, neben der Tatsache, dass sie teuer ist.
Die Isomere eines Cu(II)-Komplexes eines mit Nitrophenoxy-Gruppen tetrasubstituierten Phthalocyanins wurden ebenfalls mittels HPLC unter Verwendung einer RP-C₁₈-Säule getrennt (M. I. Uvarova et al., J. Anal. Chem. 2000, 55, 910–925).
In Schlussfolgerung dazu ist festzustellen, dass bis jetzt passend entwickelte chromatographische Phasen benötigt würden, um Regioisomere von Metall-Phthalocyaninen zu trennen, wie auch Bedingungen, die für eine Trennung entweder in einem kleinen oder in einem großen Maßstab geeignet sind, bisher nicht gefunden wurden, insbesondere für Zn-Phthalocyanine, die Aminogruppen tragen.
Es wird daher der Bedarf zur Entwicklung von Verfahrensweisen der Trennung von Regioisomeren gefühlt, die sowohl für die Herstellung im Labormaßstab als auch im großen Maßstab geeignet sind.
Zusammenfassung der Erfindung
Im Gegensatz zu dem, was in der oben zitierten Literatur über die früheren Untersuchungen zur Trennung von Phthalocyanin-Regioisomeren berichtet wurde, hat die Anmelderin überraschenderweise gefunden, dass mittels eines chromatographischen Säulen-Trenn-Verfahrens auf als Standard verwendeten stationären Phasen, wie beispielsweise auf im Handel erhältlichem Siliciumoxid und Aluminiumoxid, und mit passenden Elutions-Phasen eine optimale Auflösung von Regioisomer-Mischungen, die sich von einer Substitution in speziellen Positionen des Phthalocyaninen-Makrozyklus ableiten, mit einer Vielzahl Amino-substituierter Phthalocyanine durchgeführt werden kann, insbesondere mit Zn(II)-Amino-substituierten Phthalocyaninen.
Trotz der Gegenwart von Zink und von den Aminogruppen an den peripheren Positionen des Phthalocyanin-Gerüsts, die üblicherweise starke Tailing-Effekte beim chromatographischen Verfahren hervorrufen, stellte sich heraus, dass das vorliegende Verfahren effizient in der Trennung von Phthalocyaninen der Formel (I) ist, selbst auf standardmäßig verwendeten stationären Phasen.
Die Anmelderin hat darüber hinaus gefunden, dass es möglich ist, die Elutions-Reihenfolge zu bestimmen und in der Folge auch Regioisomer-Mischungen zu erhalten, die an den weniger symmetrischen Isomeren (C_2v und C_s) angereichert sind.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher das Verfahren zur Trennung von Regioisomer-Mischungen von Metall-Phthalocyaninen der allgemeinen Formel (I)
worin
Me gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Zn, Si(OR₄)₂, Ge(OR₄)₂ und AlOR₄, worin R₄ gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus H und C₁-C₁₅-Alkyl;
n = 0, 1 ist;
R und R₁ gewählt sind aus Substituenten der allgemeinen Formel (II)
worin
X gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus O, S, NHCO, -CH₂-, C=C und C≡C;
Z gewählt ist aus Phenyl-, Aryl-, Arylalkyl- und cycloaliphatischen Gruppen; und
Y und Y' gleich oder verschieden voneinander sein können und gewählt sind aus C₁-C₁₅-AlkylGruppen
q = 0, 1 ist;
R₂ und R₃ gewählt sind aus H und Substituenten der allgemeinen Formel (II), wie sie oben definiert wurden, mit der Maßgabe, dass

– wenigstens einer der Reste R₂ und R₃ immer von H verschieden ist; und
– wenn n = 0 ist: a) R₂ und R₃ gleich oder verschieden voneinander sind und beide von H verschieden sind; oder b) R₂ = H ist und R₃ gleich mit oder verschieden von R₁ ist;

i) Aufbringen der Mischung auf eine Trenn-Säule, die die stationäre Phase enthält, die einen festen Träger umfasst, der gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Aluminiumoxid, Siliciumoxid und Siliciumoxid, auf dem aliphatische und/oder aromatische Gruppen gebunden sind;
ii) Trennen der Mischung durch Eluieren der Säule mit einem Lösungsmittel, das gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Dichlormethan, Tetrahydrofuran, Methanol, n-Hexan, Acetonitril und Mischungen daraus, ggf. in Kombination mit einer gepufferten wässrigen Lösung eines Innenpaar-Reagens.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die getrennten Regiosiomere C_4h, D_2h, C_2v und C_s der Metall-Phthalocyanine der Formel (I) in im Wesentlichen reiner Form, sowie die Mischungen von Regioisomeren C_2v und C_s der Metall-Phthalocyanine der Formel (I) in im Wesentlichen reiner Form.
Weiterer Gegenstand der Erfindung sind die neuen Metall-Phthalocyanine der Formel (I), worin n = 0 ist und R₂ und R₃ beide von H verschieden sind.
Merkmale und Vorteile des vorliegenden Verfahrens für die Trennung der Regioisomeren-Mischungen von Phthalocyaninen der Formel (I) werden im Einzelnen in der folgenden Beschreibung veranschaulicht:
Kurze Beschreibung der Figuren
1 steht für das MPLC Chromatogramm für die Trennung der tetrasubstituierten Zn(II)-Phthalocyanin-Verbindung 1 (Isomeren-Mischung), die erhalten wurde unter dem in Beispiel 1 beschriebenen Arbeitsbedingungen.
2 steht für das HPLC Chromatogramm von Verbindung 1 (Isomeren-Mischung), erhalten unter den Bedingungen wie sie in Beispiel 1 beschrieben sind.
3 zeigt die ¹H-NMR-Spektren (insbesondere im Resonanz-Bereich der aromatischen Protonen) von Verbindung 1 (Isomeren-Mischung) und von den durch MPLC wie in Beispiel 1 beschrieben getrennten Isomeren; die Spektren wurden in Lösungen mit einer Konzentration von etwa 1 mg ml^–1 in [d₆] DMSO unter Anwendung einer Bruker-Spektrometer-Analyse (200 MHz).
4 zeigt die TLC der Verbindungen 1 (Spur A), 2 (Spur B) und 3 (Spur C) auf dem Material Alugram Sil G/UV₂₅₄ (Dicke 0,2 mm) mit den folgenden Elutionsmitteln:
Elutionsmittel 1: 60 % n-Hexan, 40 % THF;
Elutionsmittel 2: 71 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 4 % THF und 1 % MeOH;
Elutionsmittel 3: 66 % CH₂Cl₂, 25 % n-Hexan, 6,5 % THF und 2,5 % MeOH;
Elutionsmittel 4: 65,5 % CH₂Cl₂, 25 % n-Hexan, 8 % THF und 1,5 % MeOH;
Elutionsmittel 5: 60 % CH₂Cl₂, 25 % n-Hexan, 12,5 % THF und 2,5 % MeOH.
5 zeigt die TLC der Verbindungen 1 (Spur A) und 4 (Spur B) auf dem Material Alugram Sil G/UV₂₅₄ (Dicke 0,20 mm) mit den folgenden Elutionsmitteln:
Elutionsmittel 1: 73 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 2 % THF und 0,5 % MeOH;
Elutionsmittel 2: 71 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 4 % THF und 1 % MeOH;
6 zeigt die TLC der Verbindungen 1 (Spur A) und 5 (Spur B) auf dem Material Alugram Sil G/UV₂₅₄ (Dicke 0,20 mm) mit den folgenden Elutionsmitteln:
Elutionsmittel 1: 60 % n-Hexan, 40 % THF;
Elutionsmittel 2: 71 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 4 % THF und 1 % MeOH;
Elutionsmittel 3: 73 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 2 % THF und 0,5 % MeOH.
7 zeigt die RP-HPLC Chromatogramme für die Trennung der tetrasubstituierten Zn(II)-Phthalocyanin-Verbindung 1 (Isomeren-Mischung), erhalten unter den Verfahrensbedingungen, die in Beispiel 5 beschrieben sind, worin: (A) das D_2h-Isomer ist, gereinigt mittels MPLC (60 ng/μl); (B) die Isomeren C_s + C_2v sind, gereinigt mittels MPLC (47,5 ng/μl); (C) das C_4h-Isomer ist, gereinigt mittels MPLC (50 ng/μl); und (D) die Mischung ist, erhalten in DMF als Lösungsmittel.
8 zeigt ein RP-HPLC Chromatogramm auf einer Phenyl-Hexyl-Säule für die Trennung der tetrasubstituierten Zn(II)-Phthalocyanin-Verbindung 1 (Isomeren-Mischung);
9 zeigt ein Innenpaar-RP-HPLC-Chromatogramm für die Trennung der tetrasubstituierten Zn(II)-Phthalocyanin-Verbindung 1 (Isomeren-Mischung);
10 zeigt ein Ionenpaar-RP-HPLC-Chromatogramm für die Trennung der tetrasubstituierten Zn(II)-Phthalocyanin-Verbindung 6 (Isomeren-Mischung).
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine chromatographische Trennung von Regioisomeren-Mischungen der Metall-Phthalocyanine der allgemeinen Formel (I), wie sie oben angegeben wurden, mittels eines chromatographischen Trenn-Verfahrens, das auf einer Säule durchgeführt wurde, die einen festen Träger als stationäre Phase enthält.
Das chromatographische Trenn-Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung ist gewählt aus der Gruppe, die besteht aus Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) und präparativer Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (MPLC). Die HPLC-Verfahren für möglichen Gebrauch gemäß der Erfindung können gewählt werden beispielsweise aus Normalphasen-HPLC (NP-HPLC), Umkehrphasen-HPLC (RP-HPLC) und aus Ionenpaar-Umkehrphasen-HPLC (Ionenpaar-RP-HPLC).
Gemäß der vorliegenden Erfindung ist der feste Träger, der als stationäre Phase verwendet werden soll, gewählt aus der Gruppe, die besteht aus Aluminiumoxid, Siliciumoxid und Siliciumoxid, auf dem aliphatische und/oder aromatische Gruppen gebunden sind, wie beispielsweise die Gruppen Octyl, Octadecyl und äquimolaren Mengen der Gruppen Phenyl und Hexyl, allgemein bezeichnet als Siliciumoxid-Phase mit gebundenem C₈ und als Siliciumoxid-Phase mit gebundenem Phenyl/Hexyl.
Die Trenn-Säule wird mit der mobilen Phase eluiert, die aus einem Lösungsmittel besteht, das gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Dichlormethan, Tetrahydrofuran, Methanol, n-Hexan, Acetonitril und Mischungen daraus, ggf. in Kombination mit einer gepufferten wässrigen Lösung eines Ionenpaar-Reagenz.
Wenn ein Ionenpaar-RP-HPLC-Verfahren gemäß der vorliegenden Erfindung durchgeführt wird, wird ein Ionenpaar-Reagenz der Ionenphase zugesetzt, wie beispielsweise Natriumpentansulfonat.
Gemäß einer besonderen Ausführungsform der vorliegenden Erfindung werden die isomeren Mischungen der vorliegenden Phthalocyanine der Formel (I) zuerst in dem anfänglichen Elutionsmittel gelöst, das vorzugsweise besteht aus der Mischung CH₂Cl₂:THF:MeOH im Verhältnis 94:5:1; die so erhaltene Lösung wird dann auf die Säule aufgebracht, und die Trennung wird durchgeführt durch Eluieren der Säule mit einer mobilen Phase, die eine Zusammensetzung aufweist, die vorzugsweise für die Dauer der chromatographischen Trennung veränderlich ist. Beispielsweise kann das folgende Elutions-System, das zwei Elutionsmittel A und B umfasst und den folgenden Elutions-Radienten aufweist, verwendet werden:
Elutionsmittel A = CH₂Cl₂:THF:MeOH im Verhältnis 94:5:1;
Elutionsmittel B = n-Hexan;
Gradienten-Zeittafel (Elutionsmittel B in %): 60 – 30 % in 15 Minuten, 30 – 0 % in 5 Minuten, 0 % für die Zeit von 10 Minuten.
Gemäß der vorliegenden Erfindung können im Handel erhältliche normale oder Umkehr stationäre Phasen und Lösungsmittel einer für HPLC geeigneten Reinheit oder wasserfreie Lösungsmittel verwendet werden, um das vorliegende Trennverfahren unter Anwendung von HPLC und MPLC durchzuführen.
Regioisomeren-Mischungen von Zn(II)-Phthalocyaninen werden vorzugsweise dem vorliegenden Trenn-Prozess unterworfen.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform des vorliegenden Verfahrens werden Regioisomer-Mischungen von 1(4),8(11),15(18),22(25)-Amino- und -Ammonium-tetra-substituierte Zn(II)-Phthalocyanine der Formel (I) dem vorliegenden Verfahren unterzogen, worin X vorzugsweise gewählt ist zwischen O und S, Z vorzugsweise Phenyl ist und Y und Y' vorzugsweise gewählt sind aus Methyl und Ethyl.
Indem man dem vorliegenden Prozess isomere Mischungen der Metall-Phthalocyanine der Formel (I) unterzieht, werden die entsprechenden getrennten Isomere C_4h und D_2h in im Wesentlichen reiner Form erhalten und werden die anderen getrennten Isomere C_2v und C_s oder eine Mischung dieser Isomere C_2v und C_s im Wesentlichen in reiner Form erhalten.
Die zentrosymmetrischen Metall-Phthalocyanine der Formel (I) in Form von Regioisomer-Mischungen, wie sie in dem Verfahren gemäß der Erfindung verwendet werden, d. h. die Verbindungen der Formel (I), worin dann, wenn n = 1 ist, R = R₂ ist und R₁ = R₃ ist, und die Verbindung der Formel (I), worin dann, wenn n = 0 ist, R₂ = H ist und R₃ = R₁ ist, können so hergestellt werden, wie dies in dem US-Patent Nr. 5,965,598 beschrieben ist, welches wir durch die Inbezugnahme in die vorliegende Offenbarung einbeziehen, während die vorliegenden nicht-zentrosymmetrischen Metall-Phthalocyanine der Formel (I), d. h. die vorliegende Verbindung der Formel (I) mit Ausnahme der oben beschriebenen zentrosymmetrischen Verbindungen hergestellt werden können, wie diese beschrieben ist in der Europäischen Patentamneldung Nr. 01106411.0 , welche wir durch die Bezugnahme in die vorliegende Beschreibung einbeziehen.
Die abgetrennten Isomere wurden charakterisiert und zweifelsfrei auf der Basis von Dünnschicht-Chromatographie (TLC), Massen-Spektrometrie, UV-Vis-Spektrometrie und ¹H-NMR identifiziert.
Beispiel 1
Regioisomeren-Trennung von 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis [(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1)
70 mg der Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1), hergestellt wie beschrieben in dem US-Patent Nr. 5,965,598 , wurden in 15 ml eines anfänglichen Elutionsmittels gelöst, das aus der Mischung CH₂Cl₂:THF:MeOH im Verhältnis 94:5:1 bestand, und wurden auf eine LiChroprep Si60-Siliciumoxid-Säule (Firma Merck; 12–25 μm; 460 × 26 mm) gegeben und dann unter Verwendung des folgenden Elutions-Gradienten-Systems bei 46 ml min^–1 mittels eines MPLC-Systems eluiert:
Elutionsmittel A = CH₂Cl₂:THF:MeOH im Verhältnis 94:5:1;
Elutionsmittel B = n-Hexan;
Gradienten-Zeitplan (Elutionsmittel B in %): 60 – 30 % in 15 min.; 30 – 0 % in 5 min.; 0 % für 10 min..
Es wurden drei Fraktionen gewonnen und weiter mittels MPLC-Läufen mit leicht verschiedenen Elutions-Programmen gereinigt:
Erste Fraktion (B in %): 60 – 30 % in 10 min.; 30 – 0 % in 5 min.; 0 % für die Zeit von 10 min;
zweite Fraktion (B in %): 50 – 30 % in 5 min.; 30 – 0 % in 5 min.; 0 % für die Zeit von 10 min;
dritte Fraktion (B in %): 30 % für 5 min.; 30 – 0 % in 5 min.; 0 % für die Zeit von 10 min.
Das MPLC Chromatogramm von Verbindung 1 ist in 1 wiedergegeben.
Die anfängliche Isomeren-Mischung sowie der vorliegende Reinigungsprozess wurden bewertet unter Verwendung von TLC-Systemen (Dünnschicht-Chromatographie-System), HPLC-Systemen und ESI-MS-Systemen unter den folgenden Arbeitsbedingungen:
TLC: Alugramm Sil G/UV₂₅₄ (Dicke: 0,20 mm); Elutionsmittel: 71 % CH₂Cl₂; 24 % n-Hexan; 4 % THF und 1 % MeOH. Rf-Werte der Spots: 0,75, 0,70 (D_2h), 0,55, 0,36 (C_s + C_2v), 0,24 (C_4h), 0,15. Die Dünnschicht-Chromatographie (TLC) ist im rechten Teil von 5 angegeben (Spur 2A).
HPLC auf Zorbax RXSIL-Säule (4,6 × 25 mm); Elutionsmittel-Gradient-Zeitplan (B in %): 60 – 40 % in 10 min., 40 – 0 % in 5 min. (dieselben Elutionsmittel, wie sie für die obige MPLC-Trennung verwendet wurden); Strömungsgeschwindigkeit: 1 ml min^–1; Injektion: 5 μl einer 0,2 mg/ml Lösung von Verbindung 1 im anfänglichen Elutionsmit tel. Das HPLC-Chromatogramm von Verbindung 1 (Isomeren-Mischung) ist in 2 angegeben.
ESI-MS: API 365 PESCIEX Massen-Spektrometer (Infusion 5 μl/min). Die m/z-Werte für [M+H]⁺ der vier Isomere von Verbindung 1 sind in der folgenden Tabelle 1 angegeben: Tabelle 1

Isomer D_2h C_s + C_2v C_4h

m/z 1.119,5 1.119,5 1.119,5
Die UV-Vis-Spektren wurden ebenfalls in DMF-Lösungen für die vier Isomere von Verbindung 1 aufgenommen. In der folgenden Tabelle 2 sind die λ_max-Werte (in nm) der Q-Bande angegeben. Tabelle 2

Isomer D_2h C_s + C_2v C_4h

λ_max (in nm) 691 697 702
¹H-NMR Spektren von Verbindung 1 (Isomeren-Mischung) und von dem durch MPLC getrennten Isomeren wurden ebenfalls aufgenommen in Lösungen mit einer Konzentration von etwa 1 mg ml^–1 in [d₆] DMSO unter Anwendung einer Analyse mit einem Bruker-Spektrometer (200 MHz). In 3 ist der Resonanz-Bereich der aromatischen Protonen in diesen Spektren angegeben.

Die ¹H-NMR-Daten der vier Isomere von Verbindung 1 sind in der folgenden Tabelle 3 angegeben, worin H' = Proton des C_s-Isomers ist und H'' = Proton des C_2v-Isomers ist. Tabelle 3

Isomer	D_2h	C_s + C_2v	C_4h
δ(H^b/H^b')	8.91 (d, J = 7.4 Hz, 4H)	9.30 (d, ³J = 7.4 Hz, H' + 2H'') 9.16 (d, ³J = 7.4 Hz, H') 8.91 (d, ³J = 7.4 Hz, H') 8.75 (d, ³J = 7.4 Hz, H' + 2H'')	9.17 (d, ³J = 7.4 Hz, 4H)
δ(H^a')	8.12 (dd, ³J = 7.4 Hz, 4H)	8.29-8.22 (dd, ³J = 7.4 Hz, H' + 2H'') 8.17-8.07 (m, 2H') 8.01-7.93 (dd, ³J = 7.4 Hz, H' + 2H'')	8.13 (dd, ³J = 7.4 Hz, 4H)
δ(H^a)	7.78 (d, ³J = 7.4 Hz, 4H)	7.84-7.75 (m, 2H' + 2H'') 7.52-7.42 (m, 2H' + 2H'')	7.51 (d, ³J = 7.4 Hz, 4H)
δ(H^e)	7.15 (dd, ³J = 8.1 Hz, 4H)	7.25-7.09 (m, 4H' + 4H'')	7.21 (dd, ³J = 8.1 Hz, 4H)
δ(H^c)	7.03 (s, 4H)	7.09-7.01 (m, 2H' + 2H'') 6.62-6,50 (m, 2H' + 2H'')	6.58 (s, 4H)
δ(H^d, H^l)	6.60-6.50 (m, 8H)	7.09-7.01 (m, 4H' + 4H'') 6.62-6,50 (m, 4H' + 4H'')	6.66-6.56 (m, 8H)
δ(H^m)	3.05 (s, 24H)	3.07-2,85 (m, 24H' + 24H'')	2,87 (s, 24H)

Beispiel 2
Es wird berichtet über die Dünnschicht-Chromatographie-(TLC-)Trennung (auf Siliciumoxid-Platten mit der Bezeichnung Alugramm SilG) der Isomere der folgenden Verbindungen:
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1);
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(4-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 2);
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(2-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 3).
Die Verbindungen 1, 2 und 3 wurden hergestellt, wie dies in dem US-Patent Nr. 5,965,598 beschrieben ist, und zeigen einen Unterschied in der Position der Dimethylamino-Gruppen an den peripheren Phenoxy-Ringen. Mischungen von Tetrahydrofuran/n-Hexan und Dichloromethan/n-Hexan/Tetrahydrofuran/Methanol wurden als mobile Phasen verwendet.
Das optimale Elutionsmittel für Verbindung 1 – wie in Beispiel 1 angegeben – besteht zu 71 % aus CH₂Cl₂; 24 % n-Hexan; 4 % THF und 1 % MeOH. Drei Haupt-Spots wurden beobachtet, und zwar mit den folgenden Retentionsfaktoren (Rf): 0,70 (D_2h), 0,36 (C_s + C_2v), 0,24 (C_4h).
Das optimale Elutionsmittel für Verbindung 2 besteht zu 60 % aus CH₂Cl₂; 25 % aus n-Hexan; zu 12,5 % aus THF und zu 2,5 % aus MeOH. Drei Haupt-Spots wurden beobachtet mit den folgenden Retentions-Faktoren (Rf): 0,85, 0,58 und 0,40.
Die Verbindung 3 zeigt getrennte Spots mit 60 % n-Hexan –40 % THF (Rf = 0,60, 0,52 und 0,47) und mit 60 % CH₂Cl₂; 37,5 % n-Hexan, 2 % THF und 0,5 % MeOH. Die beobachteten Haupt-Spots hatten die folgenden Retentions-Faktoren (Rf): 0,30, 0,21 und 0,15.
Beispiel 3
Es wird berichtet über die Dünnschicht-Chromatographie-(TLC-)Trennung (auf Siliciumoxid-Platten mit der Bezeichnung Alugramm SilG) der Isomere der folgenden Verbindungen:
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1);
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(4-(diethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 4);
Die Verbindungen 1 und 4 wurden hergestellt, wie dies in dem US-Patent Nr. 5,965,598 beschrieben ist, und stehen beispielhaft für die Veränderung der Alkyl-Substituenten der Aminogruppen. Mischungen von Dichloromethan/n-Hexan/Tetrahydrofuran/Methanol wurden als mobile Phasen verwendet.
Das optimale Elutionsmittel für die Verbindung 1 – wie in Beispiel 1 angegeben – besteht aus 71 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 4 % THF und 1 % MeOH. Drei Haupt-Spots wurden beobachtet, mit den folgenden Retentions-Faktoren (Rf): 0,70 (D_2h), 0,36 (C_s + C_2v), 0,24 (C_4h).
Dieses Elutionsmittel ist auch das optimale Elutionsmittel für die Trennung von Verbindung 4 (Rf-Werte: 0,76, 0,59, 0,52). Jedoch wird ein gutes chromatographisches Ergebnis erhalten auch mit einer Mischung von 73 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 2 % THF und 0,3 % MeOH (Rf): 0,35, 0,17, 0,08.
Beispiel 4
Es wird berichtet über die Dünnschicht-Chromatographie-(TLC-)Trennung (auf Siliciumoxid-Platten mit der Bezeichnung Alugramm SilG) der Isomere der folgenden Verbindungen:
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1);
-1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[((3-(dimethylamino-)phenyl-)sulphanyl-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 5).
Die Verbindungen 1 und 5 wurden hergestellt, wie dies in dem US-Patent Nr. 5,965,598 beschrieben ist, und stehen beispielhaft für die Variation des Brückenatoms zwischen einem Phthalocyanin-Ring und der Phenyl-Substituenten-Gruppe. Mischungen von Tetrahydrofuran/n-Hexan und Dichloromethan/n-Hexan/Tetrahydrofuran/Methanol wurden als mobile Phasen verwendet. Das optimale Elutionsmittel für die Verbindung 1 – wie berichtet in Beispiel 1 – besteht aus 71 % CH₂Cl₂, 24 % n-Hexan, 4 % THF und 1 % MeOH. Drei Haupt-Spots wurden beobachtet, mit den folgenden Retentions-Faktoren (Rf): 0,70 (D_2h), 0,36 (C_s + C_2v), 0,24 (C_4h).
Das optimale Elutionsmittel für die Verbindung 5 besteht zu 73 % aus CH₂Cl₂, zu 24 % aus n-Hexan, zu 2 % aus THF und zu 0,5 % aus MeOH (Rf: 0,49, 0,36, 0,30).
Beispiel 5
Regioisomeren-Trennung von 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1) mittels RP-HPLC auf einer C18-Säule
Eine Regioisomeren-Trennung für Verbindung 1 wurde auch mittels RP-HPLC durchgeführt, und zwar mittels einer C₁₈-Säule mit folgenden charakteristischen Eigenschaften: C18-Säule Phenomenex LUNA (4,6 mm × 150 mm; Teilchengröße: 5 μm); Säulentemperatur: Raumtemperatur; Strömungsgeschwindigkeit: 1 ml/min.; isokratische Elution mit MeOH; Einspritzvolumen: 10 μl; Proben gelöst in MeOH/DMF (9-1, v/v); λ: 695 ± 20 nm zur isomeren Quantifizierung; 254 nm für Reinheitsanalyse; und ein λ-Bereich von 190–800 nm zur qualitativen Analyse.
Die Elutions-Reihenfolge war dieselbe wie diejenige, die bei der NP-HPLC beobachtet wurde, was eine Trennung anzeigt, die durch sterische Hinderungen getrieben wird: Moleküle ohne raumgreifende Substituenten-Gruppen und damit höherer Planarität wurden besser gehalten.

Die Zuordnung von HPLC-Peaks erfolgte mittels Standard-Zugaben der reinen Isomere (die vorher durch preparative MPLC abgetrennt worden waren) und aufgrund der UV-Vis-Spektren der chromatographischen Peaks. In 7 sind RP-HPLC Chromatogramme für durch MPLC gereinigte Isomere und für eine Mischung gezeigt, die in DMF als Lösungsmittel synthetisiert worden war. Die chromatographischen Parameter auf der Säule LUNA C18 sind in der folgenden Tabelle 4 angegeben, worin die mittleren Retentionszeiten kalkuliert wurden mit n = 10, und die Säulen-Totzeit wurde gemessen durch den positiven Peak von DMF. Tabelle 4

Isomer	Rt (min)	k'	Steigung (mAU·μl/ng)	Ordinatenabschnitt (mAU)	R²
D_2h	15,7 ± 0,2	8,29	50,9 ± 0,4	–47 ± 18	> 0,999
C_s + C_2v	17,5 ± 0,1	9,36	49,8 ± 0,5	–30 ± 20	> 0,999
C_4h	17,8 ± 0,1	9,53	48,4 ± 0,3	–42 ± 15	> 0,999

Alle injizierten Lösungen wurden hergestellt in MeOH/DMF (9-1, v/v), mit Ausnahme der Daten des D_2h-Isomers, die – aufgrund dessen geringerer Löslichkeit in MeOH – gemacht worden in MeOH/DMF (1-1, v/v). Die Linearität wurde für jedes Isomer mit einer 6-Punkt-Kalibrierung in dem Bereich von 0,5–100 ng/μl verifiziert (jede Lösung wurde dreimal getestet). Die abgetrennten Isomere zeigten sehr ähnliche Kalibrierungs-Steigungen; dies zeigt an, dass die Gewinnung der gesamten Phthalocyanin-Q-Bande (695 ± 20 nm) zu einer zuverlässigen relativen Quantifizierung der Isomere in komplexen Mischungen führt. Tatsächlich senkt die Anwendung des Nachweises bei diesen langen Wellenlängen, bei denen die Moleküle einen sehr hohen Extinktionskoeffizienten besitzen (ε = 3 × 10⁵ M/cm) Interferenzen und erhöht die Empfindlichkeit (die Kalibrierungssteigungen sind 2,49-fach höher als diejenigen, die bei einem Nachweis bei 254 nm gefunden werden). Die Werte LCD und LOQ, berechnet jeweils mit einem Signal:Geräusch-Verhältnis von 3:1 und 10:1 waren 0,4 ng/μl und 1,2 ng/μl.
Das oben beschriebene Trennverfahren kann leicht in einen preparativen Maßstab überführt werden, d. h. eine MPLC-Trennung, und zwar mittels in diesem technischen Gebiet wohl bekannter Verfahrensweisen.
Beispiel 6
Regioisomeren-Trennung von 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II)-Isomeren (Verbindung 1) mittels RP-HPLC auf einer Phenyl-Hexyl Säule
Eine Isomeren-Trennung von Verbindung 1 durch RP-HPLC wurde verbessert mittels einer Phenyl-Hexyl-Säule, die die folgenden Parameter aufwies: Phenomenex LUNA Phenyl-Hexyl-Säule (4,6 mm × 150 mm; Teilchengröße: 5 μm); Säulentemperatur: 15, 20 oder 30 °C; Strömungsgeschwindigkeit: 1 ml/min.; Elutionsmittel: isokratische Elution mit Mischungen aus MeOH, CH₃CN/CH₂Cl₂ oder MeOH/CH₃CN und THF (s. h. Tabelle 4); Einspritzvolumen: 10 μl; Proben im Elutionsmittel gelöst; λ = 695 ± 20 nm zur isomeren Quantifizierung; 254 nm für Reinheitsanalyse; und ein λ-Bereich von 190–800 nm zur qualitativen Analyse.
Die Elutions-Reihenfolge war erneut dieselbe wie diejenige, die bei der NP-HPLC beobachtet wurde, was eine Trennung anzeigt, die durch sterische Hinderungen getrieben wird.
Die Zuordnung von HPLC-Peaks erfolgte mittels Standard-Zugaben der reinen Isomere (die vorher durch preparative MPLC abgetrennt worden waren) und aufgrund der UV-Vis-Spektren der chromatographischen Peaks. 8 zeigt ein HPLC Chromatogramm für die Isomeren-Mischung für Verbindung 1, synthetisiert in DMF als Lösungsmittel.

Die mittels RP-HPLC ermittelten chromatographischen Parameter auf einer Phenyl-Hexyl Säule mit der Bezeichnung LUNA sind in der folgenden Tabelle 5 wiedergegeben. Tabelle 5

Elutionsmittel-Zusammensetzung	T (°C)	RT (min) D_2h-Isomer	RT (min) Isomere C_s + C_2v	RT (min) C_4h-Isomer
MeOH/CH₃CN/THF (80/12,5/7,5, v/v/v)	20	16,3	17,8	18,5
MeOH/CH₃CN/THF (67,5/25/7,5, v/v/v)	20	11,6	13,0	13,8
MeOH/CH₃CN/THF (70/25/5, v/v/v)	20	14,8	16,6	17,8
MeOH/CH₃CN/THF (70/25/5, v/v/v)	30	11,9	13,4	14,4
MeOH/CH₃CN/THF (48/48/4, v/v/v)	30	9,9	11,9	13,4
MeOH/CH₃CN/CH₂CI₂ (70/25/5, v/v/v)	30	13,6	15,7	16,9
MeOH/CH₃CN/CH₂CI₂ (70/25/5, v/v/v)	15	19,4	22,2	23,9

Beispiel 7
Regioisomeren-Trennung von 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 1) mittels Ionenpaar-RP-HPLC
Eine Isomeren-Trennung von Verbindung 1 durch RP-HPLC wurde auch erreicht unter Verwendung einer C18-Säule, mit den folgenden Parametern: Säule Phenomenex LUNA C18 (4,6 mm × 150 mm; Teilchengröße: 5 μm); Säulentemperatur: 25 °C; Strömungsgeschwindigkeit: 1 ml/min.; isokratische Elution mit einem Elutionsmittel, das ein Ionenpaar-Reagenz enthielt, beispielsweise die Mischung Natrium-Pentan-Sulfonat (60 mM) in Wasser (gepuffert auf einen pH-Wert von 3 mit Phosphat 10 mM)/MeOH/THF (20/48/32, v/v/v); Einspritzvolumen: 20 μl; Proben im Elutionsmittel gelöst; Nachweis-λ = 254 ± 20 nm und 695 ± 20 nm und ein λ-Bereich von 190–800 nm zur qualitativen Analyse.
Die Elutions-Reihenfolge war: C_4h-Isomer; Mischung der Isomere C_s + C_2v; und Isomer D_2h. Das bedeutet, dass Isomere mit Aminogruppen, die dem Ionenpaar-Reagenz besser zugänglich sind, besser gehalten wurden.
Die Zuordnung von HPLC-Peaks erfolgte mittels Standard-Zugaben der reinen Isomere (die vorher durch preparative MPLC abgetrennt worden waren) und aufgrund der UV-Vis-Spektren der chromatographischen Peaks. 9 zeigt ein HPLC Chromatogramm für die Isomeren-Mischung für Verbindung 1, synthetisiert in DMF als Lösungsmittel.
Chromatographische Parameter für die Ionenpaar RP-HPLC auf der C18-Säule für Isomere der Verbindung 1 sind in der folgenden Tabelle 6 angegeben. Tabelle 6

Isomer RT (min) RRT λ_max (nm)

C_4h 30.1 0.91 702

C_s + C_2v 33.2 1.00 694

D_2h 36.0 1.08 690
Beispiel 8
Regioisomeren-Trennung von 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(trimethylammonium-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) (Verbindung 6) mittels Ionenpaar-RP-HPLC
Eine vollständige Isomeren-Trennung für die tetrakationische Phthalocyanin-Derivat-Verbindung 6, die so hergestellt worden war, wie dies in dem US-Patent Nr. 5,965,598 beschrieben ist, durch RP-HPLC wurde durchgeführt unter Verwendung einer C18-Säule mit den folgenden Parameter: Säule Phenomenex LUNA C18 (4,6 mm × 150 mm; Teilchengröße: 5 μm); Säulentemperatur: 35 °C; Strömungsgeschwindigkeit: 1 ml/min.; isokratische Elution mit einem Elutionsmittel, das ein Ionenpaar-Reagenz enthielt, wie beispielsweise die Mischung Natrium-Pentan-Sulfonat (120 mM) in Wasser (gepuffert auf einen pH-Wert von 3 mit Phosphat 10 mM)/MeOH (35/65; v/v); Einspritzvolumen: 10 μl; Proben im Elutionsmittel gelöst; Nachweis bei λ 254 ± 20 nm und 695 ± 20 nm und in einem λ-Bereich von 190–800 nm zur qualitativen Analyse.
Die Elution führte zu einer vollständigen Trennung der Isomere und die Elutions-Reihenfolge war: Isomer C_4h; Isomer D_2h; Isomer C_s und Isomer C_2v.
Die Zuordnung von HPLC-Peaks erfolgte mittels Standard-Zugaben der reinen Isomere (die vorher durch preparative MPLC in die nicht-kationische Verbindung 1 getrennt worden waren und mit MeI alkyliert worden waren), durch Vergleich mit ¹H-NMR-Spektren und aufgrund der UV-Vis-Spektren der chromatographischen Peaks. 10 zeigt ein HPLC Chromatogramm für eine Mischung der Verbindung 6.
Chromatographische Parameter für die Ionenpaar RP-HPLC auf der C18-Säule für Isomere der Verbindung 6 sind in der folgenden Tabelle 7 angegeben. Tabelle 7

Isomer RT (min) RAT λ_max (nm)

C_4h 10.6 0.54 696

D_2h 17.5 0.90 684

C_s 19.5 1.00 688

C_2v 29.2 1.50 688
Die oben angegebenen Beispiele zeigen, wie geeignet das vorliegende Verfahren für die Trennung von Isomeren-Mischungen unterschiedlich substituierter Metall-Phthalocyanine (I) ist. Tatsächlich kann durch Verwendung derselben Lösungsmittel oder einer Mischung von Lösungsmitteln wie derjenigen, wie sie oben für die TLC- Trennung verwendet wurde, eine wirksame Trennung der oben angegebenen Produkte auch durch HPLC und preparative MPLC durchgeführt werden.
Die abgetrennten Isomere von Metall-Phthalocyaninen der Formel (I) besitzen neben der Tatsache, dass sie die vorteilhaften Eigenschaften der entsprechenden Isomeren-Mischungen haben, die bereits in den oben zitierten Patenten im Namen der Anmelderin angesprochen wurden, in einigen Fällen auch einen molaren Absorptions-Koeffizienten und/oder eine Wellenlänge, die höher ist als bei den früher beschriebenen Photosensibilisatoren, wie in Tabelle 2 von Beispiel 1 angezeigt ist. Dies stellt ein wichtiges Erfordernis für eine effektive therapeutische Response dar.
Die Ergebnisse über eine differenzielle Toxizität zwischen Wirtszellen und Mikroorganismen stärkt die Wichtigkeit der beanspruchten Produkte der Formel (I).
Die Regioisomeren gemäß der vorliegenden Phthalocyaninen der Formel (I) können daher für dieselben Anwendungszwecke verwendet werden, wie sie bereits für die entsprechenden Isomeren-Mischungen in den oben erwähnten Patenten im Namen der Anmelderin beschrieben wurden, wie beispielsweise zur Herstellung pharmazeutischer Zubereitungen, möglicherweise mit pharmakologisch annehmbaren Trägern und Verdünnungsmitteln zur Verwendung in einer photodynamischen Therapie oder als Tracer für in vivo-/in vitro-Diagnostik-Mittel, möglicherweise in Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger.

Claims

Verfahren zur Trennung von Regioisomer-Mischungen von Metall-Phthalocyaninen der allgemeinen Formel (I)
worin Me gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Zn, Si(OR₄)₂, Ge(OR₄)₂ und AlOR₄, worin R₄ gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus H und C₁- bis C₁₅-Alkyl; n = 0, 1 ist; R und R₁ gewählt sind aus Substituenten der allgemeinen Formel (II)
worin X gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus O, S, NHCO, -CH₂-, C=C und C≡C; Z gewählt ist aus Phenyl, Aryl, Arylalkyl und cycloaliphatischen Gruppen; und Y und Y' gleich oder verschieden voneinander sind und gewählt sind aus C₁- bis C₁₅-Alkyl-Gruppen; q = 0, 1 ist; R₂ und R₃ gewählt sind aus H und Substituenten der allgemeinen Formel (II) gemäß der obigen Definition, mit der Maßgabe, dass: wenigstens einer der Reste R₂ und R₃ immer verschieden ist von H; und dann, wenn n = 0 ist: a) R₂ und R₃ gleich oder voneinander verschieden sein können und beide von H verschieden sind; oder b) R₂ = H ist und R₃ gleich oder verschieden von R₁ ist; und pharmazeutisch annehmbare Salze davon; wobei das Verfahren besteht in einer chromatographischen Trennung, die gewählt ist zwischen Hochdruck-Flüssigkeits-Chromatographie (HPLC) und Mitteldruck-Flüssigkeits-Chromatographie (MPLC), umfassend die folgenden Schritte: i) Aufbringen der Mischung auf eine Trennsäule, die die stationäre Phase enthält, die einen festen Träger umfasst, der gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Aluminiumoxid, Siliciumoxid und Siliciumoxid, an dem aliphatische und/oder aromatische Gruppen gebunden sind; ii) Trennen der Mischung durch Eluieren der Säule mit einem Lösungsmittel, das gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Dichlormethan, Tetrahydrofuran, Methanol, n-Hexan, Acetonitril und Mischungen daraus, gegebenenfalls in Kombination mit einer gepufferten wässrigen Lösung eines Ionenpaar-Reagenz.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die Hochdruck-Flüssigkeits-Chromatographie gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Normalphasen-HPLC, Umkehrphasen-HPLC und Ionenpaar-Umkehrphasen-HPLC.
Verfahren nach Anspruch 1, worin die aliphatischen und/oder aromatischen Gruppen gewählt sind aus der Gruppe, die besteht aus Octyl-, Octadecyl- und äquimolaren Mengen von Phenyl- und Hexyl-Gruppen.
Verfahren nach Anspruch 1, worin in den Metall-Phthalocyaninen der Formel (I) Me für Zn steht.
Verfahren nach Anspruch 1, worin in den Metall-Phthalocyaninen der Formel (I) n gleich 0 ist, R₂ = H ist und R₁ = R₃ ist, X gewählt ist aus O und S, Z für Phenyl steht und Y und Y' gewählt sind aus Methyl und Ethyl.
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Metall-Phthalocyanin der Formel (I) die Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) ist (Verbindung 1).
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Metall-Phthalocyanin der Formel (I) die Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(4-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) ist (Verbindung 2).
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Metall-Phthalocyanin der Formel (I) die Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(2-(dimethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) ist (Verbindung 3).
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Metall-Phthalocyanin der Formel (I) die Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(4-(diethylamino-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) ist (Verbindung 4).
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Metall-Phthalocyanin der Formel (I) die Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[((3-(dimethylamino-)pheny.-)sulfanyl-)phthalocyaninato-]Zink(II) ist (Verbindung 5).
Verfahren nach Anspruch 1, worin das Metall-Phthalocyanin der Formel (I) die Verbindung 1(4),8(11),15(18),22(25)-Tetrakis[(3-(trimethylammonium-)phenoxy-)phthalocyaninato-]Zink(II) ist (Verbindung 6).
Regioisomere der Metall-Phthalocyanine der Formel (I), wie in Anspruch 1 definiert, in im wesentlichen reiner Form, wiedergegeben durch – Regioisomere C4h; – Regioisomere D2h; – Regioisomere C2v; – Regioisomere Cs; – Mischung von Regioisomeren C2v und Cs.
Verwendung der Regioisomeren von Metall-Phthalocyaninen von Formel (I), wie in Anspruch 12 definiert, für die Herstellung pharmazeutischer Zubereitungen für eine photodynamische Therapie.
Verwendung von Regioisomeren von Metall-Phthalocyaninen von Formel (I) gemäß Anspruch 12 zur Herstellung von Zubereitungen, die als in vivo-/in vitro-Diagnostika verwendet werden sollen.
Metall-Phthalocyanine gemäß Formel (I)
worin Me gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus Zn, Si(OR₄)₂, Ge(OR₄)₂ und AlOR₄, worin R₄ gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus H und C₁- bis C₁₅-Alkyl; n = 0, 1 ist; R und R₁ gewählt sind aus Substituenten der allgemeinen Formel (II)
worin X gewählt ist aus der Gruppe, die besteht aus O, S, NHCO, -CH₂-, C=C und C≡C; Z gewählt ist aus Phenyl, Aryl, Arylalkyl und cycloaliphatischen Gruppen; und Y und Y' gleich oder verschieden voneinander sind und gewählt sind aus C₁- bis C₁₅-Alkyl-Gruppen; q = 0, 1 ist; R₂ und R₃ gewählt sind aus H und Substituenten der allgemeinen Formel (II) gemäß der obigen Definition, mit der Maßgabe, dass n = 0 ist und R₂ und R₃ beide von H verschieden sind.