DE60113278T2

DE60113278T2 - Cumarin-derivate und ihre salze, verfahren zu ihrer herstellung und ihre pharmazeutische verwendung

Info

Publication number: DE60113278T2
Application number: DE60113278T
Authority: DE
Inventors: Marco Prosdocimi; Giampaolo Menon; Giovanni Monastra; Enrico Galbiati; Mario Finesso
Original assignee: Bausch and Lomb Inc
Current assignee: Bausch and Lomb Inc
Priority date: 2000-07-31
Filing date: 2001-07-26
Publication date: 2006-04-27
Anticipated expiration: 2021-07-27
Also published as: EP1307438A1; EP1307438B1; AU2001283959B2; DE60113278D1; WO2002010148A1; AU8395901A; ITPD20000193A0; AU2001283959B8; CA2417788A1; ES2247158T3; US20040023893A1; IT1317356B1; ITPD20000193A1; JP2004505072A

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neue Coumarin-Derivate, auf Salze von diesen Verbindungen, insbesondere solche mit pharmazeutisch akzeptablen Basen oder Säuren, sowie auf Verfahren zur deren Herstellung.
Die neuen Coumarin-Derivate und die Salze gemäß der vorliegenden Erfindung haben interessante pharmakologische Eigenschaften und können somit vorteilhaft verwendet werden, um wichtige Krankheitserscheinungen zu behandeln, wie periphere Ischämie und Organischämie, elektrische Veränderungen des Myocardiums und anderer Organe, die sich aus der Freisetzung von Pro-Entzündungsmolekülen (TNF, IL-1, NO, etc.) ergeben, periphere und zerebrale Gefäßkrankheiten, Erkrankungen des Anginatyps, Hypercholesterolämie, systemische Infektionen, wie Sepsis, allergische Krankheitserscheinungen, wie Asthma, Rhinitis, Ekzem, Dermatitis, wie Antithrombotika und Antihypertensiva. Die vorliegende Erfindung umfasst auch pharmazeutische Zusammensetzungen, die ein oder mehrere von diesen Derivaten oder ihren Salzen in Form von Kapseln, Tabletten, injizierbaren Lösungen, Sprays und Systemen zur kontrollierten Freisetzung, Cremes, Gelen und transdermalen Systemen enthalten.
Die Coumarine umfassen eine große Klasse von Phenolsubstanzen, die in Pflanzen gefunden werden und die aus einem Benzolring und einem α-Pyronring, welche miteinander fusioniert sind, aufgebaut sind. Es wurden bisher mindestens 1.300 Coumarine identifiziert und zwar hauptsächlich als Metabolite in grünen Pflanzen, in Pilzen und in Bakterien.
Cloricromen (kommerzieller Name Proendotel) gehört zu einer Familie von Coumarinen und wird durch das Verfahren hergestellt, das in den US Patenten mit den Nrn. 4,296,039 und 4,452,811 beschrieben ist.
Neben den bekannten Koronargefäß-erweiternden und antiarrhythmischen Eigenschaften ( US 4,349,566 ) und den Thrombozyten-Antiaggregationseigenschaften ( US 4,362,741 ) wurde erkannt, dass Cloricromen in der Lage ist, viele der zellulären Funktionen von polymorphkernigen Leukozyten zu hemmen (Bertocchi et al.: Arch. Pharmacol. 1989, 339, 697–703; Gresele et al.: Biochem. Pharmacol. 1993, 45, 123–130). Es kann ferner positive Wirkungen auf die biochemischen Interaktionen zwischen verschiedenen Zellspezies haben, insbesondere zwischen Thrombozyten und polymorphkernigen Leukozyten (Zatta et al.: Eur. J. Pharmacol. 1991, 198, 97–100). Es ist bekannt, dass dies bei thrombotischen und ischämischen Zuständen relevant ist.
Cloricromen besitzt ferner einen dokumentierten Effekt in Modellen der Ischämie und der Reperfusion in verschiedenen Organen, wobei auch verschiedene Cytokine des Entzündungstyps beteiligt sind, wie TNF (Squadrito et al.: Life Sciences 1993, 53, 341–355). Cloricromen zeigt ferner eine Aktivität bei der Behandlung von Krankheitserscheinungen, die mit gefäßerweiternden Prozessen und Gewebeschädigung verbunden sind, welche durch eine gesteigerte Produktion von Nitrogenoxid gekennzeichnet sind (Patent des Anmelders, Nr. IT 1265665), wie zum Beispiel Lungenentzündung, Ödem, Erythem, Dermatitis, Psoriasis, Hautgeschwür, Arthritis, rheumatoide Arthritis und andere Autoimmunerkrankungen, Hypotonieschock, septischer Schock, hypovolemischer Schock, Vasculitis, wie Entzündungen nach Phlegmasia alba dolens, Colitis ulcerosa.
In Anbetracht dieser bekannten Eigenschaften von Cloricromen und da es bekannt ist, dass Cytokine stark entzündlich wirkende Mittel sind, wurden eine Reihe von Verbindungen hergestellt und auf ihre in vitro und in vivo Aktivität hinsichtlich der Synthese von Cytokinen, wie TNF, getestet, sowie hinsichtlich ihrer Wirkung auf andere zelluläre Phänomene, wie die Thrombozytenaggregation und die Produktion von freien Radikalen, und hinsichtlich ihrer Wirkung auf in vivo Modelle für die Entzündung. Unter den Arzneimitteln, die gegenwärtig bei entzündlichen Prozessen verwendet werden, sind nicht-steroide Verbindungen für ihre schwache oder fehlende Fähigkeit bekannt, die Freisetzung von entzündlichen Cytokinen zu hemmen, die ihrerseits durch Verbindungen des Steroidtyps gehemmt werden. Da diese Verbindungen verschiedene toxische Aktivitäten besitzen, ist die Verfügbarkeit von nicht-steroiden Produkten, die spezifisch auf die Cytokinsynthese wirken, besonders nützlich für die Entwicklung von innovativen Therapien.
Die erzielten experimentellen Ergebnisse zeigen, dass die Verbindungen, die Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind, andere und bessere Aktivitäten zeigen, als die von Cloricromen. Es wurde insbesondere beobachtet, dass einige Verbindungen auf die Synthese von TNF, ein bekanntes entzündlich wirkendes Cytokin, stärkere Wirkungen besitzen als Cloricromen, und dass sie bei dem Prozess der Thrombozytenaggregation und Freisetzung von freien Radikalen nicht beteiligt sind.
Diese gestiegene Wirkungsselektivität macht die Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung therapeutisch sehr vorteilhaft.
Ferner hat die in vivo Charakterisierung gezeigt, dass die Verbindungen gemäß der Erfindung eine niedrigere akute Toxizität im Vergleich zu Cloricromen besitzen. Dies wurde durch die Tatsache belegt, dass nur bei höheren Dosierungen toxische oder lethale Effekte beobachtet wurden.
Aufgrund der strikten Beziehung zwischen den freien Verbindungen und den Salzen der vorliegenden Erfindung ist all das, was hinsichtlich der freien Substanzen dargelegt wird, auch für die entsprechenden Salze, wo immer möglich, wahr.
Die Verbindungen gemäß der vorliegenden Erfindung sind die folgenden:
FID 201261
FID 201273
FID 201310
FID 201326
FID 201359
FID 201264
Diese Verbindungen wurden in verschiedenen in vitro und in vivo Modellen getestet:

– Hemmung der TNF-Freisetzung in vitro nach Stimulierung mit LPS
– Hemmung der TNF-Freisetzung in vivo nach Stimulierung mit LPS
– reduzierte Entzündung in Carrageenin-induzierten Ödemen in der Rattenpfote
– Hemmung der Freisetzung von Nitrit-Nitrat im Rattenplasma
– Hemmung der Superoxidanion-Bildung, induziert durch f-MLP im menschlichen Vollblut
– Hemmung der Thrombozytenaggregation im menschlichen Vollblut
– akute Toxizität nach einer einzelnen intravenösen Verabreichung
– Mutagenese (Mini-Ames-Test)

Test 1: Hemmung der TNF-Freisetzung in vitro nach Stimulierung mit LPS
Die Testverbindung wurde dem Kulturmedium einer Mausmakrophagen-Linie (J774) oder Vollblut mit Heparin als Anti-Gerinnungsmittel zugesetzt. Die Zellen wurden dann mit einem bakteriellen Lipopolysaccharid stimuliert. Nach Inkubation bei 37°C über einen geeigneten Zeitraum wurde der Überstand aus der Kultur entfernt und mit einer Linie von Mausfibroplasten (L929) inkuziert, die gegenüber TNF empfindlich war. Die Menge an freigesetztem TNF nach Stimulierung mit LPS wurde gemessen, indem die Sterblichkeit der L929-Zellen mit der von Kontrollen verglichen wurde.
Die Tabelle 1 zeigt für die einzelnen Verbindungen die Konzentration (± Standardfehler) an, welche zur Hemmung der Fibroplastensterblichkeit (L929) um 50% in der Lage war.
Tabelle 1
Test 2: Hemmung der Freisetzung von TNF und IL-1β in vivo nach Stimulierung mit LPS
Ratten bei Bewusstsein wurde eine Dosis von LPS injiziert, welche die Freisetzung von TNF und IL-1β stimulieren kann, wobei die Ratten zunächst eine intravenöse Verabreichung (15 Minuten zuvor) der Testverbindung mit einer Dosis von 0,5 mg/kg oder mit 2 mg/kg erhielten. Die Blutspiegel von TNF und IL-1β wurden mit dem ELISA-Verfahren mit Blutproben gemessen, die 75 Minuten bzw. 120 Minuten nach LPS-Injektion genommen wurden.
Die Tabelle 2 zeigt den Prozentsatz der Hemmung von jedem Produkt im Vergleich zu Kontrollen, die mit einer Salzlösung behandelt wurden.
Tabelle 2
Test 3: Reduktion der Entzundung in Carrageenin-induzierten Ödemen in der Rattenpfote
Ein Modell der akuten Entzündung wurde verwendet, wobei die Entzündung durch eine intraplantare Injektion von 1,5 mg Carrageenin in die Rattenpfote induziert wurde. Die Verabreichung der Verbindungen (2 mg/kg) geschah über die intravenöse Route 5 Minuten vor Induktion des Ödems. 3 Stunden später wurden die Tiere getötet und ihre Pfoten wurden als Maß für die Entzündung gewogen. Die Kontrolltiere erhielten eine Kochsalzlösung anstelle der Testverbindungen. Das Gewicht der Pfoten der Kontrolltiere wurde mit 100% auf den Entzündungsindex gesetzt.
Die Ergebnisse sind in der Tabelle 3 gezeigt.
Tabelle 3
Test 4: Hemmung der Freisetzung von Nitrit-Nitrat im Rattenplasma
Die Messung von Nitrit-Nitrat wurde mit dem Griess-Reagenz in Blutproben gemessen, die 8 Stunden nach Verabreichung von LPS (0,1 mg/kg) i.v. genommen wurden.
Die Tiere wurden mit den Verbindungen mittels o.s. (25 mg/kg) 30 Minuten vor und 3 Stunden nach LPS behandelt. Die Kontrolltiere erhielten Kochsalzlösung anstelle der Testverbindungen. Die Werte für die Freisetzung von Nitrit-Nitrat wurden auf 100% festgelegt. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 4 gezeigt.
Tabelle 4
Test 5: Hemmung der Bildung von Superoxidanionen induziert durch f-MLP im menschlichen Vollblut
Proben von Vollblut, das mit PBS Cytochrom C verdünnt war, wurden für 20 Minuten bei 37°C mit den Testverbindungen oder mit einer Kochsalzlösung inkuziert, bevor der chemotaktische Wirkstoff f-MLP (0,1 μm/l) in Gegenwart von Cytochalasin B hinzugesetzt wurde. Nach 20-minütiger Aktivierung mit diesem Wirkstoff wurden die Proben zentrifugiert und die Messwerte der Überstände wurden mit einem Spektrophotometer bestimmt, um die Reduktion von Cytochrom C zu bestimmen. Die Tabelle 5 zeigt die Konzentrationen an, welche die Reduktion von Cytochrom C um 50% hemmen.
Tabelle 5
Test 6: Hemmung der Kollagen-induzierten Thrombozytenaggregation im menschlichen Vollblut
Das Aggregationsereignis wurde analysiert, indem einzelne, nichtaggregierte Thrombozyten mit einem Zellzähler 5 Minuten nach Zugabe von Kollagen (1 μg/ml) gezählt wurden. Unter diesen Testbedingungen induzierte das Kollagen eine Thrombozytenaggregation von über 80%. Die Testverbindungen oder eine Kochsalzlösung als Kontrolle wurden 1 Minute vor Zugabe des Kollagens vorinkubiert.
Die Tabelle 6 zeigt die Konzentrationen an, welche die Thrombozytenaggregation um 50% im Vergleich zur Kochsalzlösung hemmen.
Tabelle 6
Test 7: Toxizität nach einer einzelnen intravenösen Verabreichung
Männliche CD-1 Mäuse wurde verwendet, um die maximale, nichtlethale Dosis (MNLD – die höchste Dosis, bei der kein Fall von Sterblichkeit beobachtet wurde) und die maximal tolerierte Dosis (MTD – Dosis, bei der keine evidenten oder ausgeprägten Zeichen von Toxizität oder einem veränderten Verhalten beobachtet wurden) zu bestimmen. Die Ergebnisse sind in der Tabelle 7 gezeigt.
Tabelle 7
Test 8: Mutagenese (Mini-Ames-Test)
Der Mini-Ames-Test ist eine Version des traditionellen Ames-Test, welcher die Inkubation von bakteriellen Zellen auf 35-mm Schalen anstelle von 100-mm Schalen beinhaltet. Er erfordert ferner eine geringere Menge an Produkt unter Aufrechterhaltung der Zuverlässigkeit des Ergebnisses.
Der Test wurde mit zwei Stämmen von Salmonella typhimurium, die Histidin erfordern (TA 98 und TA 100), sowie mit zwei Stämmen von Escherichia coli, die Tryptophan erfordern (WP2 pKM101 und WP2 uvrA pKM1091), durchgeführt.
Die bakteriellen Zellen wurden verschiedenen Konzentrationen der Testverbindungen in Gegenwart oder in Abwesenheit einer mikrosomalen Leberenzymzubereitung behandelt, um jede mögliche Stoffwechselaktivität zu offenbaren.
Die mutagenetische Aktivität wurde bestimmt als die Fähigkeit der Testverbindung, eine signifikante Zunahme in der Zahl der mutanten Klone zu induzieren im Vergleich zu solchen, die sich spontan in den Kulturen mit der Kontrollverbindung entwickelten.
Die getesteten Verbindungen (201273, 201326) erwiesen sich als nicht mutagen.
Die Verbindungen nach der Erfindung können durch bekannte Verfahren hergestellt werden ( Claisen's Kondensation und Umlagerung, Pechmann's Kondensation, Williamson's Sythese, Fischers Veresterung). Die Coumarine werden durch Kondensation zwischen einem Resocin und einem β-Ketoester synthetisiert. Sie können dann durch Substitution der aromatischen Wasserstoffe mittels Reaktion mit Formaldehyd und einem Amin alkyliert werden. Alternativ ist es möglich, dass freie Hydroxyl mit einem Allyl zu alkylieren und es thermisch auf den aromatischen Ring zu transponieren, oder das Hydroxyl kann mit einem alkylierendem Mittel alkyliert werden oder mit einem Spacer (einem Alkyldihalogenid oder einem Alkylhalogenid, substituiert mit einem Epoxyring, einem Ester, einem Amin), der dann später alkyliert wird.
Das synthetisierte Produkt kann einer Hydrierung unterworfen werden, um die Doppelbindung zwischen den Positionen 3 und 4 zu reduzieren, oder der Sauerstoff in Position 2 kann durch Reaktion mit einem Lawesson's Reagenz substituiert werden.
Einige Beispiele der Herstellung von Coumarin-Derivaten gemäß der vorliegenden Erfindung werden im folgenden berichtet:
Beispiel 1: Herstellung der Verbindung FID 201261
10 g von 3-Diethylaminoethyl-4-methyl-7-hydroxy-coumarin (0,0363 Mol; MG 275,35) wurden mit KOH in Ethanol (1:1 Mol/Mol) in ein Salz überführt, das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rest wurde wieder in 2-Butanon mit 6,0 g Epibromhydrin (0,044 Mol; MG 136,98) durch Rückflusskochen für 12 Stunden gelöst. Das KBr-Salz wurde abfiltriert und das Lösungsmittel wurde verdampft. Der Rest wurde wieder in Ethylacetat gelöst und mit 1 N NaOH gewaschen. Die organische Lösung wurde getrocknet, konzentriert, mit n-Hexan gefällt und vakuumgetrocknet. Der Rest wurde in Wasser gelöst, dem 10,8 g L-Cystein (0,0891 Mol; MG 121,16) zugesetzt waren, der pH wurde auf 9 eingestellt und die Mischung reagierte unter Rühren bei 37°C. Nach 12 Stunden wurde die Lösung mittels Kieselgelchromatographie mit Methylenchlorid-Methanol- Ammoniak 30% unter Verwendung eines Gradienten zwischen 80-15-2 und 60-30-7 gereinigt.
Die gereinigten Fraktionen wurden konzentriert, in Ethanol, das mit HCl gesättigt war, unter Rühren für 1 Stunde gelöst, verdampft und gefriergetrocknet (Ausbeute 6,1 g; MG 553,55).
Beispiel 2: Herstellung der Verbindung FID 201273
5 g von 3-Diethylaminoethyl-4-methyl-7-hydroxy-coumarin (0,0182 Mol; MG 275,35) wurden mit KOH in Ethanol (1:1 Mol/Mol) in ein Salz überführt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rest in 2-Butanon mit 9,1 g Epoxyhexan (0,091 Mol; MG 100,16) gelöst und für 48 Stunden am Rückflusskühler gekocht. Das KBr-Salz wurde abfiltriert und das Lösungsmittel wurde verdampft. Der Rest wurde in Ethylacetat gelöst, mit 1 N NaOH gewaschen, konzentriert und mittels Kieselgelchromatographie mit einem Elutionsmittel aus Methylenchlorid-Methanol-Ammoniak 30 unter Verwendung eines Gradienten zwischen 98-2-0,2 und 90-5-0,4 gereinigt.
Die gereinigten Fraktionen wurden konzentriert, in Ethylacetat gelöst und mit HCl in Ethanol behandelt, bis der Kongorotindikator die Farbe wechselte, konzentriert und aus Aceton-Hexan 2:1 kristallisiert (Ausbeute 3,1 g; MG 411,97).
Beispiel 3: Herstellung der Verbindung FID 201310
10 g Laktose (0,0278 Mol; MG 360,32) wurden in 51 g Essigsäureanhydrid (0,5 Mol; MG 102,09) suspendiert und es wurden dann 100 ml Pyridinanhydrid tropfenweise zugesetzt. Die Mischung reagierte über Nacht und wurde anschließend verdampft und mit Kieselgelchromatographie unter Elution mit Toluol-Aceton 4:1 gereinigt. Die reinen Fraktionen wurden verdampft und die erzielte Peracetyl-Laktose wurde vakuumgetrocknet und in 120 ml wasserfreiem N,N-Dimethylformamid suspendiert, es wurden 5,7 g Ammoniumcarbonat (0,059 Mol; MG 96,09) zugesetzt. Es erfolgte ein Rühren für 24 Stunden.
Dann wurde verdampft und auf Kieselgel unter Elution mit Toluol-Aceton 9:1 gereinigt.
Die reinen Fraktionen wurden verdampft und die erzielte Hydroxyperacetyl-Laktose wurde vakuumgetrocknet, in 250 ml wasserfreiem Methylenchlorid mit 9,3 ml Trichloracetonitril (0,0642 Mol; MG 144,4) gelöst, mit 0,5 g Natriumhydrid (0,0214 Mol; MG 24) behandelt und dann für 3 Stunden gerührt. Die Mischung wurde konzentriert und auf Kieselgel gereinigt, wobei mit einem Toluol-Aceton-Gradienten zwischen 9:1 und 7:3 eluiert wurde. Die reinen Fraktionen wurden verdampft, das erzielte Peracetyl-Laktose-Trichloracetamidat wurde vakuumgetrocknet und reagierte mit 3,0 g 3-Diethylaminoethyl-4-methyl-7-hydroxy-coumarin in 100 ml von wasserfreiem Methylenchlorid in Gegenwart von aktivierten Molekularsieben. 3,2 g von Bortrifluorid-Ethyletherat (0,0109 Mol; MG 295,68) wurde n zugesetzt und die Mischung reagierte für 3 Stunden. Es wurde dann filtriert, mit 1 N NaOH gewaschen, getrocknet, konzentriert und gereinigt mit Kieselgelchromatographie unter Verwendung eines Elutionsmittels aus Methylenchlorid-Methanol-Ammoniak 30% und unter Verwendung eines Gradienten zwischen 90-5-0,4 und 80-20-0,4.
Die gereinigten Fraktionen wurden konzentriert, in 100 ml 1 N NaOH/tert-Butanol 1:1 hydrolysiert und mit HCl neutralisiert. Der pH wurde mit Ammoniak auf 8 eingestellt und die Mischung wurde mit Chloroform/n-Butanol 1:1 extrahiert.
Das Lösungsmittel wurde abgedampft und der Rest wurde aus Wasser gefriergetrocknet (Ausbeute 3,2 g; MG 599,64).
Beispiel 4: Herstellung der Verbindung FID 201326
5,6 g von 3-Diethylaminoethyl-4-methyl-7-hydroxy-8-chlor-coumarin (0,018 Mol; MC 309,8) wurden in Toluol mit 9,1 g von 1,2-Epoxyhexan in Gegenwart von 2 g basischem Alluminiumoxid super 1 für 24 Stunden am Rückflusskühler gekocht. Der Feststoff wurde abfiltriert und mit 1 N NaOH gewaschen. Die Mischung wurde konzentriert und mittels Kieselgelchromatographie gereinigt unter Verwendung eines Elutionsmittels aus Methylenchlorid-Methanol-Ammoniak 30% und unter Verwendung eines Gradienten zwischen 98-2-0,2 und 90-5-0,4.
Die gereinigten Fraktionen wurden konzentriert, in Ethylacetat gelöst und mit HCl in Ethanol behandelt, bis der Kongorotindikator die Farbe veränderte, filtriert und aus Aceton kristallisiert (Ausbeute 1,6 g; MG 446,42).
Beispiel 5: Herstellung der Verbindung FID 201359
10 g von 3-Diethylaminoethyl-4-methyl-7-hydroxy-coumarin (0,0363 Mol; MG 275,35) wurden mit KOH in Ethanol (1:1 Mol/Mol) in ein Salz überführt. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rest wurde am Rückflusskühler in 2-Butanon mit 6 g Epibromhydrin (0,044 Mol; MG 136,98) für 12 Stunden gekocht. Das KBr-Salz wurde abfiltriert und das Lösungsmittel wurde verdampft. Der Rest wurde in Ethylacetat gelöst, mit 1 N NaOH gewaschen, getrocknet, konzentriert, mit n-Hexan gefällt und vakuumgetrocknet. Der Rest wurde in Wasser gelöst und es wurden 14,5 g N-Acetyl-L-cystein (0,0891 Mol; MG 1 63,19) zugesetzt, der pH wurde auf 9 eingestellt und die Mischung reagierte unter Rühren bei 37°C. 12 Stunden später wurde sie gefriergetrocknet und mittels Kieselgelchromatographie gereinigt, wobei Methylenchlorid-Methanol-Ammoniak 30%, 80-25-5, verwendet wurde.
Die gereinigten Fraktionen wurden konzentriert und aus HCl gefriergetrocknet (Ausbeute 10,0 g; MG 531,07).
Beispiel 6: Herstellung von FID 201264
30,3 g von 3-Diethylaminoethyl-4-phenyl-7-hydroxy-coumarin (0,0802 Mol; MG 337,86) (hergestellt wie in GB 1,013,053 beschrieben; Beispiel 1) wurden mit KOH in Ethanol (1:1 Mol/Mol) in ein Salz überführt. Das Lösungsmittel wurde verdampft, der Rest wurde in 150 ml DMSO gelöst und es wurden 26,5 g 1-Brompropanol-2 (0,1605 Mole; MG 165,07) zugesetzt. Nach 10 Tagen unter Rühren bei 50°C wurden 300 ml Toluol und 150 ml Wasser hinzugegeben. Die organische Phase wurde mit 1 M NaOH gewaschen und dann unter Vakuumbis zur Trockenheit konzentriert. Der Rest wurde mit Kieselgelchromatographie gereinigt, wobei als Elutionsmittel CH₂Cl₂-CH₃OH-Ammoniak 30% mit einem Gradienten zwischen 98-2-0,2 und 90-5-0,4 verwendet wurde. Die gereinigten Fraktionen wurden bis zur Trockenheit konzentriert, in Ethylacetat gelöst und mit HCl in Ethanol behandelt, bis der Kongorotindikator seine Farbe gewechselt hatte. Dann wurde konzentriert und aus Wasser gefriergetrocknet (Ausbeute 13,5 g; MG 431,96).
Alle Produkte wurden charakterisiert und ihre Strukturen wurden mittels NMR- und FT-IR- Analyse bestätigt.

Claims

Ein Coumarin-Derivat ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus;

und deren Salze mit pharmazeutisch akzeptablen Säuren oder Basen,
Pharmazeutische Zusammensetzungen enthaltend ein Coumarin-Derivat gemäß Anspruch 1 in der Form von Kapseln, Tabletten, injizierbaren Lösungen, Sprays, Systemen zur kontrollierten Freisetzung, Cremes, Gelen und transdermalen Systemen.
Pharmazeutische Zusammensetzungen gemäß Anspruch 2 zur Behandlung von vaskulären (inklusive solchen, die der Freisetzung von Pro-Entzündungsmolekülen folgen), dermatologischen und allergischen Erkrankungen, von Hypercholesterolämie und von systemischen Infektionen.
Pharmazeutische Zusammensetzungen gemäß Anspruch 2 oder Anspruch 3 zur Behandlung von peripheren Gefäßkrankheiten, Anginaartigen Erkrankungen und zerebralen Gefäßkrankheiten, peripherer Ischämie und Ischämie von Organen,
Pharmazeutische Zusammensetzungen gemäß Anspruch 2 oder Anspruch 3 zur Behandlung von Thrombose und Bluthochdruck.