DE3685751T2

DE3685751T2 - In liposomen inkorporierte hydrophobe cis-platin-komplexe.

Info

Publication number: DE3685751T2
Application number: DE8686906624T
Authority: DE
Inventors: R Khokhar; Gabriel Lopez-Berestein; Roman Perez-Soler
Original assignee: University of Texas at Austin
Current assignee: University of Texas at Austin
Priority date: 1985-10-18
Filing date: 1986-10-17
Publication date: 1993-02-04
Anticipated expiration: 2006-10-18
Also published as: US5178876A; FI872646L; US5186940A; KR900003094B1; FI85492C; ATE77384T1; CA1312616C; DE3685751D1; FI85492B; EP0248036B1; DK307787A; IL80349A0; IL80349A; WO1987002364A1; FI872646A0; DK307787D0; KR870700631A; EP0248036A1; US5041581A

Description

Die Erfindung betrifft neu synthetisierte Platinkomplexe mit hydrophoben Eigenschaften. Ferner wird die Verwendung von Liposomen unter Einverleibung dieser neuen und vorher synthetisierten Komplexe bei der Antitumor-Chemotherapie beschrieben.
Cis-Platin (CDDP) ist ein hochwirksamer Arzneistoff bei der Behandlung von verschiedenen neoplastischen Erkrankungen beim Menschen (Loehrer et al., Ann. Int. Med., Bd. 100 (1984), S. 704-713). Jedoch ist dessen Anwendung durch eine starke systemische Toxizität, insbesondere Nephrotoxizität und Neurotoxizität, beschränkt (Zwelling et al., Platinum Complexes, in: Pharmacologic principles of cancer treatment (1982), Herausgeber B.A. Chabner, Saunders, Philadelphia, PA). Bei einem Versuch, den therapeutischen Index von CDDP zu modifizieren, wurden im letzten Jahrzehnt neue Derivate synthetisiert. Jedoch wurde die Entwicklung von erfolgversprechenden Analogen durch ihre geringe Hydrosolubilität, die ihre klinische Anwendungsmöglichkeit verringert, verhindert (Burchenal et al., Cancer Treat. Rep., Bd. 63 (1979), S,1493-1497).
Liposomen sind Lipidvesikel, die spontan bei der Zugabe einer wäßrigen Lösung zu einem trockenen Lipidfilm entstehen können (Mayhew et al., in: Liposomes (1983), Herausgeber Marc J. Ostro, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.). Liposomen können als Arzneistoffträger von hydrophoben oder hydrophilen Arzneistoffen verwendet werden, wobei die Arzneistoffe in den hydrophoben oder hydrophilen Kompartimenten eingeschlossen sind. Bei multilaminaren Liposomen handelt es sich um mehrschichtige Lipidvesikel (MLV), die sich besonders zum Transport von hydrophoben Arzneistoffen eignen, da ihr hydrophobes Kompartiment größer als ihr hydrophiles Kompartiment ist. Bei intravenöser (iv) Injektion an Tiere (Kasi et al., Int. J. Nucl. Med. Biol., Bd. 11 (1984), S. 35-37; Lopez-Berestein et al., Cancer Drug Deliv., Bd. 1 (1) (1984), S. 199-205 und Menschen (Lopez-Berestein et al., Bd. 44 (2) (1984), S. 375-378), reichern sich MLV in der Leber, der Milz und anderen Organen, die reich an retikuloendothelialen (RES) Zellen sind, an.
Liposomen wurden bisher in vitro zur Abgabe von chemotherapeutischen Mitteln (Mayhew et al, Liposomes (1983), Herausgeber Ostro, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.) und zur in vitro-Abgabe von Immunomodulatoren und antifungalen Wirkstoffen (Mehta et al., Immunology, Bd. 51 (1984), S. 517-527) und zu deren in vivo-Abgabe bei Tieren (Lopez-Berestein et al., Clin. Exp. Metastasis, Bd. 2 (4) (1984), S. 127-137; und Lopez-Berestein et al., J. Inf. Dis., Bd. 147 (1983), S. 937-945) und an Menschen (Lopez-Berestein et al., J. Inf. Dis., Bd. 151 (1985), S. 704- 710) verwendet.
Neuere Untersuchungen zeigen, daß Liposomen bestimmte Typen von arzneistoffbedingten Toxizitäten, verringern können, z.B. die Doxorubicin- Kardiotoxizität (Forssen et al., Proc. Natl. Acad. Sci., Bd. 78 (1981), S. 1873-1877; Olson et al., Eur. J. Cancer Clin. Oncol., Bd. 18 (1982), S. 167-176; Gabizon et al., Cancer Res., Bd. 42 (1982), S. 4734-4739; und Herman et al.; Cancer Res., Bd. 43 (1983), S. 5427-5432) und CDDP-Nephrotoxizität (Freise et al., Arch. Int, Pharmacodynamie Therapie, Bd. 258 (1982), S. 180-192), und die Antitumoraktivität erhöhen können, und zwar als Folge eines langsamen Freisetzungsmechanismus (Mayhew et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., Bd. 308 (1978), S. 371-386; und Patel et al., Int. J. Cancer, Bd. 34 (1984), S. 717-723, einer höheren Arzneistoffaufnahme durch Tumorzellen oder aufgrund einer selektiveren Organverteilung (Gabizon et al., Cancer Res., Bd. 43 (1983), S. 4730-4735; und Mayhew et al., Cancer Drug Deliv., Bd. 1 (1983), S. 43-58). Im US-Patent 4,330,534 wird beispielsweise festgestellt, daß N&sup4;-Acylcytosin-arabinosid, das Liposomen einverleibt ist, sich bei Verabreichung an Tiere mit Tumoren als therapeutisch wirksam erweist. Trotz dieser vielversprechenden Ergebnisse hat sich die klinische Anwendung von in Liposomen eingekapselten Antitumormitteln verzögert, was vorwiegend auf Schwierigkeiten mit der Zubereitung, der Arzneistoffstabilität und der Herstellung im Großmaßstab zurückzuführen ist.
CDDP wurde bisher in MLV eingekapselt, wobei sich jedoch ein sehr geringer Einkapselungswirkungsgrad (7,4 %) und eine geringe Stabilität (75 % nach 48 Stunden in 0,9 % NaCl-Lösung) ergaben (Freise et al., Arch. Int. Pharmacodynamie Therapie, Bd. 258 (1982), S. 180-192).
Im US-Patent 4,256,652 sind bestimmte Platinverbindungen beschrieben, die aufgetrennte Stereoisomere von 1,2-Diaminocyclohexan (DACH) enthalten. Bei den verwendeten Isomeren handelte es sich und cis-DACH, trans-RR-DACH und trans-SS-DACH. Die dort beschriebenen Platinverbindungen enthielten neben einem aufgetrennten DACH-Isomeren zwei hydrophile Platinliganden, wie Bromid, Jodid, Nitrat, Broniacetat, Sulfat oder Glucuronat. Es wird beschrieben, daß die trans-RR-DACH enthaltenden Platinverbindungen häufig therapeutisch wirksamer sind als solche, die cis-DACH enthalten.
In der europäischen Patentanmeldung 83 30 6726.7 werden bestimmte Platinverbindungen beschrieben, die Diaminocyclohexan (stereochemisch nicht aufgetrennt) enthalten können und Phosphatidylgruppen mit Fettsäuresubstituenten aufweisen. Von diesen Verbindungen wird beschrieben, daß sie in Plasma weitgehend unlöslich sind. Sie werden vorzugsweise mit Lipidvesikel-Trägern verwendet. Die Platinverbindung-Phospholipidvesikel wurden vorzugsweise durch ein Schallbehandlungsverfahren hergestellt, für das die Bildung von unilamellaren Vesikeln charakteristisch ist.
In der europäischen Patentanmeldung 86 10 2860.3 sind lipolösliche Platinkomplexe beschrieben, die Amine und gesättigte oder ungesättigte höhere Fettsäurereste als Liganden aufweisen.
Die vorliegende Erfindung umfaßt einen vierfach koordinierten Platin(II)-komplex der Formel
In dieser Formel bedeuten R&sub1; und R&sub2; jeweils Alkylcarboxylate mit einer hydrophober Rest-Funktion, insbesondere Neodecyl, oder, wenn sie verknüpft sind, Alkylendicarboxylato mit einer hydrophober Rest-Funktion, wobei R&sub1; und R&sub2; keine gesättigten oder ungesättigten höheren Fettsäuren darstellen. Die Reste R&sub3; und R&sub4; bedeuten jeweils:
In der letztgenannten Formel ist R&sub5; aus der Gruppe Wasserstoff, Alkyl mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen, wie Isopropyl, Aryl, Aralkyl, Alkenyl, Cycloalkyl, wie Cyclohexyl, Cycloalkenyl und einer Kombination davon ausgewählt. R&sub5; bedeutet vorzugsweise Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen,insbesondere mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen und ganz besonders mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen oder Cycloalkyl mit 3 bis 12 Kohlenstoffatomen.
Ferner können R&sub3; und R&sub4; zu einer einzigen Funktion verknüpft sein. Wenn R&sub3; und R&sub4; miteinander verknüpft sind, sind sie vorzugsweise aus der Gruppe Cycloalkyl-1,2-diaminofunktionen mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen und Alkyl-1,2-diamino mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise Ethyl, ausgewählt. Eine bevorzugte Cycloalkyl-1,2-diaminokomponente ist 1,2- Diaminocyclohexan, vorzugsweise in der trans-R,R- oder trans-S,S-Form.
Wie erwähnt, beschreibt die Bedeutung Alkylcarboxylato für die Liganden R&sub1; und R&sub2; Alkylcarboxylatoliganden, bei denen es sich nicht um gesättigte oder ungesättigte höhere Fettsäuren handelt. Somit hat der nachstehend verwendete Ausdruck Alkylcarboxylato jeweils diese Bedeutung, d.h. er bezeichnet Alkylcarboxylatoliganden, bei denen es sich nicht um gesättigte oder ungesättigte höhere Fettsäuren handelt.
Im vorstehend beschriebenen Komplex weist der Alkylcarboxylatorest im Rahmen von R&sub1; und R&sub2; vorzugsweise etwa 5 bis 20 Kohlenstoffatome auf.
Bedeuten in dem Komplex R&sub1; und R&sub2; einen Alkylendicarboxylatorest, so weist dieser Alkylendicarboxylatorest vorzugsweise 5 bis 20 Kohlenstoffatome auf. Der in der vorstehenden Beschreibung verwendete Ausdruck Aryl ist ferner als eine Funktion definiert, die vorzugsweise etwa 6 bis 14 Kohlenstoffatome aufweist. In entsprechender Weise bedeutet der Ausdruck Alkenyl vorzugsweise eine Funktion mit etwa 5 bis 20 Kohlenstoffatomen.
Der in der vorliegenden Beschreibung verwendete Ausdruck Cycloalkyl bedeutet vorzugsweise ein Funktion mit etwa 3 bis 12 Kohlenstoffatomen. Der vorstehend verwendete Ausdruck Gycloalkenyl bedeutet vorzugsweise eine Funktion mit etwa 5 bis 20 Kohlenstoffatomen. Der vorstehend verwendete Ausdruck Aralkyl bedeutet eine Funktion mit vorzugsweise etwa 7 bis 20 Kohlenstoffatomen mit einem verknüpften Aryl- und Alkylbereich. Der Arylbereich weist vorzugsweise etwa 6 bis 10 Kohlenstoffatome und der Alkylbereich vorzugsweise etwa 1 bis 10 Kohlenstoffatome auf. Wenn R&sub3; und R&sub4; miteinander verbunden sind, haben sie vorzugsweise die Bedeutung Cycloalkyl-1,2-diamino mit 3 bis 20 Kohlenstoffatomen. Der Alkylring des Cycloalkylrestes weist vorzugsweise 3 bis 12 Kohlenstoffatome auf. Die Komplexe sind in Methanol oder Chloroform im wesentlichen löslich und in Wasser im wesentlichen unlöslich.
Wichtige Aspekte der vorliegenden Erfindung betreffen Liposomen, die Fettsubstanzen, wie Phospholipide, gegebenenfalls Cholesterin und die vorstehend beschriebenen vierfach koordinierten Platinkomplexe enthalten, sowie die Herstellung und die Verwendung dieser Liposomen. Die erfindungsgemäßen Liposomen enthalten den Platinkomplex und das Phospholipid in einem bevorzugten Verhältnis von etwa 1:10 bis etwa 1:30, wobei ein besonders bevorzugtes Verhältnis 1:15 beträgt.
Zu bevorzugten Phospholipiden von diesen Liposomen gehören Phosphatidylglycerin, Phosphatidylcholin, Sphingomyelin, Phosphatidinsäure oder Phosphatidylserin, wobei Phosphatidylglycerin, Phosphatidylcholin oder eine Kombination davon besonders bevorzugte Phospholipide sind. Das am meisten bevorzugte Phosphatidylglycerin ist eines, das im wesentlichen aus Dimyristoylphosphatidylglycerin besteht, und das am meisten bevorzugte Phosphatidylcholin ist eines, das im wesentlichen aus Dimyristoylphosphatidylcholin besteht. Wenn die erfindungsgemäßen Liposomen Dimyristoylphosphatidylglycerin und Dimyristoylphosphatidylcholin enthalten, liegen sie vorzugsweise in einem Verhältnis von etwa 1-10 bis 10-1 und insbesondere in einem Verhältnis von etwa 3:7 vor.
Die erfindungsgemäßen Liposomen können multilamellar, unilamellar oder von einem undefinierten lamellaren Aufbau sein. Eine pharmazeutische Zusammensetzung mit einem Gehalt an den Liposomen und einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel kann zur Therapie von Krankheitszuständen, wie Krebs, verwendet werden.
Ein zentraler Aspekt der vorliegenden Erfindung ist eine pharmazeutische Zusammensetzung mit einem Gehalt an den vorstehenden vierfach koordinierten Platin(II)-Komplexen, die gegebenenfalls in den vorstehenden Liposomen enthalten sind, zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung eines von Tumorzellen, die Empfindlichkeit gegen einen vierfach koordinierten Platen(II)-Komplex aufweisen, betroffenen Wirtstiers. Dieses Verfahren umfaßt die Verabreichung einer Menge des vorstehend beschriebenen, vierfach koordinierten Platin(II)-Komplexes oder eines erfindungsgemäßen Liposoms, das ein Phospholipid und eine zur Tumorhemmung wirksame Menge des Platinkomplexes enthält, an das Tier. Der Verabreichungsschritt erfolgt vorzugsweise parenteral oder durch intravenöse, intraarterielle, intramuskuläre, intralymphatische, intraperitoneale, subkutane, intrapleurale oder intrathekale Injektion oder durch topische Verabreichung oder orale Dosierung. Eine derartige Verabreichung wird vorzugsweise gemäß einem zeitlichen Schema wiederholt, beispielsweise zweimal täglich für eine Zeitdauer von 2 Wochen. Die Behandlung kann solange aufrechterhalten werden, bis eine Rückbildung oder ein Verschwinden des Tumors erreicht worden ist. Sie kann in Verbindung mit anderen Formen der Tumortherapie, z.B. einem chirurgischen Eingriff oder einer Chemotherapie mit anderen Mitteln, erfolgen.
Diese Antitumormethoden können auch zur Hemmung einer metastatischen Ausbreitung von Tumoren, wie Retikulosarkom, angewandt werden. Eine vorbeugende Vorbehandlung mit Platin(II)-Komplexen oder Liposomen mit einem Gehalt an diesen Komplexen kann zur Verhinderung einer metastatischen Ausbreitung in der Art einer Impfung vorgenommen werden.
Vierfach koordinierte Platin(II)-Komplexe wurden unter Verwendung von razemischem (nicht-aufgetrenntem) DACH, trans-RR-DACH oder trans-SS- DACH hergestellt.
Liposomen mit einem Gehalt an diesen Platinkomplexen erwiesen sich in einem wäßrigem Milieu als stabil, nicht nephrotoxisch und wirksam gegen Mäuse-Leukämie-L-1210.
Allgemein ausgedrückt, weisen die vierfach koordinierten, quadratisch-planaren Platin(II)-Komplexe der Erfindung folgende Formel auf:
worin R&sub1; und R&sub2; Alkylcarboxylato-Monoanionen sind, die eine hydrophober Rest-Funktion tragen. Bei R&sub1; und R&sub2; kann es sich auch um einzelne Alkylencarboxylato-dianionen handeln. Ferner bedeutet R&sub3; ein vicinales Diaminoalkan oder vicinales Diaminocycloalkan. Es kommt in Betracht, daß R&sub3; aus zwei unabhängigen Alkylaminen, Cycloalkylaminen oder Ammoniak zusammengesetzt ist. Diese Komponenten verleihen dem Komplex eine wesentliche Löslichkeit (normalerweise mehr als 5,0 mg/ml) in Methanol oder Chloroform bei Umgebungstemperaturen und eine wesentliche Unlöslichkeit (weniger als etwa 0,5 mg/ml) in wäßrigen Lösungen bei Umgebungstemperaturen.
Bei der hydrophober Rest-Funktion, d.h. der Funktion, die eine kovalente Seitenkette an der Carboxylgruppe bildet, kann es sich um einen Alkylrest handeln. Die hydrophober Rest-Funktion weist vorzugsweise 5 bis 20 Kohlenstoffatome auf. Der Alkylrest dieser hydrophober Rest-Funktion kann geradkettig oder verzweigt sein.
Wenn R&sub3; die Bedeutung 1,2-Diaminocyclohexan (DACH) hat, können die Aminogruppen in mehreren relativen stereochemischen Konfigurationen vorliegen, d.h. cis, trans-RR und trans-SS (ein Gemisch davon wird als "razemisch" bezeichnet).
Wenn eine hydrophober Rest-Funktion ein verzweigter Alkylrest mit 9 Kohlenstoffatomen, z.B. Neodecanoato (C&sub1;&sub0;H&sub2;&sub0;O&sub2; empirische Formel) war, so war der Wirkungsgrad der Einverleibung eines Platin(II)-Komplexes mit einem Gehalt an razemischem DACH oder trans-RR-DACH maximal (100 %). Somit verleihen lineare oder verzweigte Alkylrest-Funktionen mit etwa 6 bis 12 Kohlenstoffatomen Eigenschaften einer wirksamen Phospholipid-Liposom-Einverleibung bei beliebigen DACH enthaltenden Pt(II)-Komplexen.
Die hier beschriebenen Liposomen mit einem Gehalt an den Platin(II)-Komplexen lassen sich aus verschiedenen amphipathischen Substanzen unter Einschluß von natürlichen oder synthetischen Phospholipiden herstellen. Es gibt zahlreiche, zur Herstellung der Liposomen geeignete Phospholipide, die hier nicht erschöpfend aufgezählt sind, da sie aus dem Stand der Technik allgemein bekannt sind. Zu diesen Phospholipiden gehören ohne Beschränkung hierauf: Lecithin, Phosphatidylethanolamin, Lysolecithin, Lysophatidylethanolamin, Phosphatidylserin, Phosphatidylinosit, Sphingomyelin, Cardiolipin, Phosphatidinsäure und die Cerebroside. Zu den für die erfindungsgemäße Praxis besonders bevorzugten Phospholipiden gehören Dimyristoylphosphatidylglycerin (DMPG) und Dimyristoylphosphatidylcholin (DMPC). Cholesterin in untergeordneten Anteilen von weniger als 1 % bis etwa 50 % kann den Phospholipiden und Platin(II)-komplexen unter Bildung der erfindungsgemäßen Liposomen zugesetzt werden. Eine bevorzugte aber nicht als Beschränkung anzusehende Kombination von DMPG und DMPC ist ein Verhältnis von 3:7, wenngleich auch Verhältnisse von 1:10 bis 10:1 als zufriedenstellend in Betracht kommen. Verhältnisse von Platin(II)-Komplex zu Phospholipid von etwa 1:10 bis etwa 1:30, kommen allgemein als zufriedenstellend in Betracht, wenngleich ein Verhältnis von 1:15 in den bisherigen Untersuchungen vorwiegend angewandt wurde.
In der Praxis der vorliegenden Erfindung können entweder unilamellare oder multilamellare oder andere Liposomen mit einem Gehalt an einem Platin(II)-Komplex verwendet werden. Multilamellare Liposomen werden derzeit bevorzugt, da die erfindungsgemäßen Platin(II)-Komplexe im wesentlichen wasserunlöslich sind und sie offensichtlich den Phospholipid-Doppelschichten der Liposomenlamellen einverleibt werden.
Allgemein läßt sich das Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Platin(II)-Verbindungen in einer Reaktionsfolge folgendermaßen beschreiben: (1) Etwa 10 mMol vicinales Diaminocycloalkan oder -alkan werden zu 50 ml einer wäßrigen Lösung von K&sub2;PtCl&sub4; (3,5 g) gegeben und 8 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der gebildete gelbe Feststoff, der cis-Bis-dichlor-1,2-diamin-Pt(II) umfaßt, kann durch Filtration entfernt und mit Flüssigkeiten, wie Wasser, Methanol oder Aceton, gewaschen werden. Der Feststoff kann sodann in etwa 20 ml H&sub2;O suspendiert und mit einer wäßrigen Lösung mit einem Gehalt an etwa 0,75 g Ag&sub2;SO&sub4; versetzt werden. Nach etwa 24stündigem Rühren im Dunkeln kann das ausgefallene AgCl durch Filtration entfernt werden. Das Sulfato-vicinale Diamin-Pt kann sodann in etwa 100 ml H&sub2;O gelöst und mit etwa 2 mMol eines in situ hergestellten Erdalkalimetallsalzes eines Alkylcarboxylatoanions versetzt und etwa 30 Minuten damit gerührt werden. Nach Entfernung von BaSO&sub4; durch Filtration kann der erfindungsgemäße Platin(II)-Komplex beispielsweise durch Kristallisation oder durch Entfernung des Lösungsmittels unter Abdampfen erhalten werden.
Die in den folgenden Beispielen beschriebenen Verfahren zur Herstellung von speziellen Platin(II)-Komplexen und der chemotherapeutischen Behandlung mit speziellen Platin(II)-Komplexen lassen sich leicht an die Herstellung und Anwendung von analog beschriebenen und beanspruchten Komplexen anpassen, indem man einfache Substitutionen von geeigneten vicinalen Diaminen oder einen hydrophoben Rest enthaltenden Alkylcarboxylatomonoanionen vornimmt.
Erfindungsgemäße Liposomen mit einem Gehalt an Phosholipiden und Platinkomplexen (Pt-Liposomen) sind zur Hemmung sowohl des Wachstums als auch der metastatischen Ausbreitung von Tumoren geeignet.
Derartige Pt-Liposomen können parenteral, topisch oder oral verabreicht werden. Orale oder parenterale Dosierungen dieser Pt-Liposomen von etwa 2,5 mg/kg Körpergewicht bis 25 mg/kg Körpergewicht werden bei den meisten Zuständen als angemessen angesehen. Die speziellen Dosierungen bei der Behandlung eines von einem Tumor betroffenen Patienten, kann im Einzelfall je nach dem Zustand des Patienten, dem Typ und dem Ausmaß des Tumors und der speziellen Pt-Liposomtoxizität variieren.
Die Menge an Liposom-Platin die in einer pharmazeutischen Zusammensetzung enthalten ist, und die beim Behandlungsverfahren angewandte Dosierung hängt im Einzelfall vom Zustand der Patienten, der Art des zu behandelnden Tumors, der Antitumoraktivität von Liposom-Platin, den Toxizitäts- und Löslichkeitseigenschaften desselben und dgl. ab.
Liposom-Platin kann in einer Kombination mit anderen Antitumormitteln in einem kombinierten therapeutischen Schema verabreicht werden.
Eine parenterale Verabreichung kann intraperitoneal, subkutan, intrapleural, intrathekal, intraurethral, intravenös, intraarteriell, intramuskulär oder intralymphatisch erfolgen. Eine derartige parenterale Verabreichung umfaßt vorzugsweise Pt-Liposomen-Suspensionen in pharmazeutisch verträglichen Lösungen, wie sterilen, isotonischen, wäßrigen Lösungen. Diese Suspensionen können in fertiger Form bezogen oder aus vorgeformten Bestandteilen hergestellt werden. Wie dem Fachmann bekannt ist, können Pt-Liposomen in Form von Pellets oder Pulverpräparaten hergestellt werden. Diese Pellets oder Pulverpräparate können mit pharmazeutisch verträglichen Lösungen zur Bildung von Suspensionen für die parenterale Verabreichung vermischt werden.
Eine topische Verabreichung von Pt-Liposomen kann pharmazeutische Zusammensetzungen umfassen, wie Suspensionen, Cremes oder Salben, die in fertiger Form bezogen aus Pt-Liposomen-Pulverpräparaten oder -Pellets hergestellt werden können. Eine derartige topische Verabreichung kann in der Nähe der Krebsläsionen, z.B. an Epithel oder Schleimhaut, erfolgen.
Orale Verabreichungen von Pt-Liposomen umfassen vorzugsweise eine Verkapselung von Pt-Liposomen-Pulverpräparaten oder -Pellets, wobei die Pt-Liposomen vor der Freisetzung aus ihrer Verkapselung gegen die Verdauungsaktivität von Magen und Darm geschützt sind.
Gegebenenfalls lassen sich Pt-Liposomen herstellen, die beispielsweise andere therapeutische Mittel zur Behandlung von Tumoren oder Antioxidationsmittel zur Unterstützung der Stabilisierung der Liposomen enthalten.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Komplexe, insbesondere als ein Bestandteil von Liposomen, ist auf die Hemmung des Tumorwachstums und die Verhinderung einer metastatischen Ausbreitung von Tumoren abgestellt. Beispielsweise wird zunächst ein Wirt als Träger eines Tumortyps identifiziert, von dem allgemein bekannt ist, daß er Zellen enthält, deren Wachstum häufig durch Platin(II)-komplexe gehemmt wird. Das Tumorwachstum in diesem Wirt kann durch Verabreichung der erfindungsgemäßen Pt-enthaltenden Liposomen an den Wirt gehemmt werden.
In ähnlicher Weise kann die metastatische Ausbreitung von Tumoren in einem Wirt gehemmt werden. Ein Wirt mit metastatischen oder potentiell metastatischen Tumoren von einem Typ, von dem häufig eine Empfindlichkeit gegenüber Platin(II)-Komplexen bekannt ist, ist zunächst zu identifizieren. Die Verabreichung der erfindungsgemäßen Pt enthaltenden Liposomen an den Wirt dient dann der Hemmung der metastatischen Ausbreitung.
Die folgenden Beispiele erläutern bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung.

Beispiel 1

Materialien und Analysen

K&sub2;PtCl&sub4; wurde von der Firma AESAR (Johnson Matthey, Inc. Seabrook, NH) bezogen. 1,2-Diaminocyclohexan (DACH) wurde von der Firma Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI.; trans-RR-DACH und trans-SS-DACH von der Firma Mortol Thiokol, Inc., Danvers, MO, und Neodecansäure von der Firma Exxon Chemical Co., Houston, Texas, bezogen. Elementaranalysen der Platinkomplexe wurden von der Firma Integral Microanalytical Laboratories, Inc. Raleigh, NC und der Firma Robertson Laboratory, Inc., Florham Park, N.J. ausgeführt. IR-Spektren der Komplexe (als KBr-Presslinge) wurden im Bereich von 600-4000 cm&supmin;¹ unter Verwendung eines Nicolet 6000-Fourier-Transformations-IR-Spektrophotometers gemessen.
Chromatographisch reines (Dünnschichtchromatographie) Dimyristoylphosphatidylcholin (DMPC) und Dimyristoylphosphatidylglycerin (DMPG), die in dieser Untersuchung eingesetzt wurden, wurden von der Firma Avanti Polar Lipids (Birmingham, AL) bezogen. Cholesterin wurde von der Firma Sigma Ghemical Co. (St. Louis, MO) bezogen.

Beispiel 2

Herstellung von cis-Bis-Neodecanoato-1,2-DACH-platin(II)

cis-Bis-Neodecanoato-1,2-DACH-platin (II) war ein cis-Platin (CDDP) hydrophobes Analog, das als Prototyp zur Entwicklung von Liposomen- Platin (L-PT)-Präparaten verwendet wurde.
Dieser Prototyp wurde unter Anwendung eines mehrstufigen Verfahrens gemäß der Beschreibung für racemisches DACH (Khokhar et al., Inorg. Chem. Acta, Bioinorganic Section, Bd. 108 (1985), S. 63) folgendermaßen hergestellt: 0,96 g DACH wurden zu einer filtrierten wäßrigen Lösung von K&sub2;PtCl&sub4; (3,5 g in 50 ml H&sub2;O) gegeben. Das Gemisch wurde 6 bis 8 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der gelbe Feststoff mit einem Gehalt an cis- Bis-dichlor-DACH-Pt (II) wurde durch Filtration entfernt und mit H&sub2;O, Methanol und schließlich Aceton gewaschen. Anschließend wurde das Endprodukt unter Vakuum getrocknet. Die Ausbeute wurde zu 56 % berechnet. Anschließend wurden 1,0 g cis-Bis-dichlor-DACH-Pt (II) in 20 ml H&sub2;O suspendiert. Eine wäßrige Lösung von Ag&sub2;SO&sub4; (0,75 g in 150 ml H&sub2;O) wurde unter Bildung von wasserlöslichem Sulfato-DACH-Pt-H&sub2;O zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 24 Stunden im Dunkeln gerührt. Ausgefälltes AgCl wurde durch Filtration entfernt. Die gelbe Lösung wurde bei 45-50ºC unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Das gelbe Produkt wurde weiter über P&sub2;O&sub5; unter Vakuum getrocknet. Die Ausbeute an Sulfato-DACH-Pt(II)-H&sub2;O betrug 90 %.
Das razemische Sulfato-DACH-platin(II) (0,423 g) wurde in 10 ml Wasser gelöst. Die Lösung wurde mit Kaliumsalz von Neodecansäure (0,420 g) versetzt, und das Reaktionsgemisch wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Man erhielt eine kautschukartige Masse, die mit Chloroform extrahiert wurde. Der Chloroformextrakt wurde über wasserfreiem MgSO&sub4; getrocknet. Nach dem Abtrennen des MgSO&sub4; durch Filtration wurde das Filtrat zur Trockene eingedampft. Das erhaltene weißliche feste Produkt wurde unter vermindertem Druck und über P&sub2;O&sub5; getrocknet. Das Endprodukt wurde bei 0ºC gelagert.
Für das Endprodukt ergab sich folgende Elementaranalyse: C 48,30 %; H 8,10 % und N 3,92 %. Die berechneten Elementenwerte für eine Verbindung der empirischen Formel C&sub2;&sub6;H&sub5;&sub2;N&sub2;O&sub4;Pt sind: C 47,93 %; H 8,00 % und N 4,30 %.
Die Strukturformel von cis-Bis-Neodecanoato-DACH-platin(II) ist folgende:
worin R, R' und R" folgende Bedeutungen haben können: CH&sub3;, C&sub2;H&sub5; oder C&sub3;H&sub7;, was eine Alkylcarboxylato-Rest-Funktion mit der empirischen Formel C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub9;O&sub2; (MG = 172) ergibt.
cis-Bis-neodecanoato-DACH-platin(II) war in Methanol und Chloroform gut löslich und in Wasser unlöslich. Das vorstehend beschriebene Verfahren wurde mit trans-RR-DACH unter Bildung des trans-RR-Isomeren von cis-Bis-neodecanoato-DACH-platin(II) durchgeführt. Die Analyse von cis- Bis-Neodecanoato-RR-DACH-platin(II) war folgende: C 47,75 %; H 8,16 %; N 3,98 % (theoretisch C 47,93 %; H 8,00 %; N 4,30 %).

Beispiel 3

Platin enthaltende Liposomen (L-PT)

Multilamellare Lipidvesikel (MLV) oder Liposomen mit darin enthaltenen Platinkomplexen (PT) gemäß der vorstehenden Beschreibung wurden in der Art und Weise hergestellt, wie sie früher für andere Verbindungen beschrieben worden ist (Lopez-Berestein et al., Clin. Exp. Metastasis, Bd. 2 (4) (1984), S. 127-137; und Lopez-Berestein et al., J. Inf. Dis., Bd. 147 (1983), S 937-945). Kurz ausgedrückt, es wurden Chloroformlösungen von Lipiden (im gewünschten Molverhältnis) und Pt in einem Lipid-PT-Verhältnis von 15:1 vermischt, und das Chloroform wurde in einem Rotionsverdampfer (Buchi, Brinkmann Instruments, Westbury, NY) abgedampft. Der erhaltene trockene Lipidfilm mit einem Gehalt an PT wurde sodann durch heftiges Schütteln mit der Hand mit einer wäßrigen Lösung (0,9 % NaCl in Wasser) dispergiert. Die Suspension wurde anschließend 45 Minuten bei 30 000 x g zentrifugiert. Der Überstand wurde verworfen und das PT enthaltene Pellet in 0,9 % NaCl-Lösung resuspendiert.
MLV oder Liposomen mit einem Gehalt an Platinkomplexen lassen sich auch einem lyophylisierten Pulver mit einem Gehalt an Lipid und Platinverbindung herstellen. Das Lipid und die Platinverbindung werden in dem hydrophoben Lösungsmittel tert.-Butanol (F. 26ºC) in den vorstehend angegebenen Verhältnissen gelöst. Die Lösung wird zu einem weißen Pulver gefriergetrocknet. Die die Platinverbindung enthaltende MLV werden bei Zugabe von 0,9 % NaCl-Lösung in Wasser zum lyophilisierten Pulver unter vorsichtigem Schütteln von Hand gebildet.

Beispiel 4

Berechnung des Einkapselungswirkungsgrades (EE) und der Stabilität

Elementares Platin (Pt) wurde in der Liposomensuspension und im Pellet durch Röntgenfluoreszenz gemäß den Angaben von Seifert et al., Proc. Amer. Ass'n Cancer Res., Bd. 20 (1979), S. 168 in Department of Analytical Chemistry, The University of Texas Medical School at Houston, TX, bestimmt. Die Menge an Platinkomplex (PT) wurde im Überstand durch UV- Spektrophotometrie unter Verwendung einer Wellenlänge von 224 nm bestimmt. Der EE-Wert wurde zunachst gemäß folgenden beiden Gleichungen berechnet:
1. EE = Pt im Pellet/gesamtes Pt in der ursprünglichen Liposomensuspension
2. EE = Gesamtes zunächst zugesetztes Pt - Pt im Überstand/gesamtes ursprünglich zugesetztes Pt.
Da die gemäß diesen beiden Methoden erhaltenen Ergebnisse weitgehend vergleichbar waren und das zweite Verfahren nur die UV-spektrophotometrischene PT-Bestimmung erfordert, wurden die meisten EE-Bestimmungen gemäß der zweiten Methode berechnet.
Die Stabilität der unterschiedlichen Liposomen-PT (L-PT)-Präparate bei 4ºC in 0,9 % NaCl-Lösung und 50 % Humanserum (AB) in 0,9 % NaCl- Lösung bei 37º wurde unter Anwendung folgender Formel bestimmt:
Stabilität nach x Stunden = % EE bei x Stunden/% EE bei 0 Stunden x 100
Die bei den Stabilitätsbestimmungen verwendeten EE-Werte wurden durch Messen von PT im Überstand mittels UV-Spektrophotometrie (0,9 % NaCl-Lösung) oder durch Röntgenfluoreszenz (50 % Humanserum AB) erhalten. Die Stabilität in 0,9 % NaCl-Lösung wurde bis zu 14 Tagen nach der ursprünglichen Herstellung bestimmt. Ferner wurden die L-PT-Präparate am 14. Tag mikroskopisch betrachtet, um die Morphologie der Vesikel zu prüfen. Die Stabilität in 50 % Humanserum AB wurde nach einer Inkubationszeit bis zu 18 Stunden bestimmt.
Verschiedene cis-Platinanaloge wurden in multilamellaren Vesikeln aus DMPC:DMPG 7:3 eingekapselt. Der Einkapselungswirkungsgrad für razemische Pt-Neodecanoato-DACH- und Pt-Neodecanoato-trans-RR-DACH-Komplexe ist in nachstehender Tabelle 1 angegeben. Tabelle 1 Einkapselungswirkungsgrad von L-PT unter Verwendung von verschiedenen Analogen Platinanaloges % Einkapselungswirkungsgrad¹ razemisches Pt-Neodecanoato-DACH-Gemisch Pt-Neodecanoato-trans-RR-DACH ¹ Mittelwert von mindestens drei Versuchen. Liposomen-Zusammensetzung: DMPC:DMPG 7:3
Analoge Experimente (nicht dargestellt) mit DMPC allein, DMPG allein, Cholesterin allein sowie Kombinationen von DMPC und DMPG in anderen Konzentrationen mit oder ohne Cholesterin ergaben keinen besseren Einkapselungswirkungsgrad und sehr häufig einen beträchtlich verringerten EE- Wert.

Beispiel 5

Stabilität von L-PT in wäßrigem Milieu

Präparate wurden in 0,9 % Kochsalzlösung suspendiert und 14 Tage bei 4ºC inkubiert. Die Liposomenzusammensetzungen wurden mit dem Lichtmikroskop betrachtet. Die Menge an freiem PT in der Kochsalzlösung wurde bestimmt. Liposomen mit einem Gehalt an PT und mit DMPG als alleinigem Phospholipid zeigten bei der mikroskopischen Bestimmung einen beträchtlichen Strukturverlust. Freies PT wurde bestimmt. Die Stabilität wurde als in den Liposomen verbleibendes prozentuales PT berechnet. Die Ergebnisse dieser Messungen sind in nachstehender Tabelle 2 zusammengestellt. Tabelle 2 Stabilität von L-PT in Kochsalzlösung, L-PT nach 14 Tagen¹ Platinanaloges Stabilität, % razemisches Pt-Neodencanaoato-DACH Pt-Neodecanoato-trans-RR-DACH ¹ Liposomen-Zusammensetzung: DMPC:DMPG 7:3
Aus den vorstehenden Daten ist ersichtlich, daß razemisches Pt- Neodecanoato-DACH eine größere Stabilität aufweist.

Beispiel 6

In vivo-Antitumoraktivität von verschiedenen L-PT-Analogen gegen L-1210- Leukämie

Die Antitumoraktivität der verschiedenen L-PT-Analogen gegen L- 1210-Mäuseleukämie wurde in einem L-1210 BDF-Mäusemodell (Tumorbeimpfung Tag 0, Behandlung Tag 1, ip) gemäß der vorstehenden Beschreibung bestimmt. Im Vergleich mit CDDP (% T/C=175) zeigten die L-PT-Analogen eine gleichwertige oder geringfügig höhere Antitumoraktivität. Diese Ergebnisse sind in Tabelle 3 zusammengestellt. Tabelle 3 Antitumorwirkung von cis-Platin und unterschiedlichen Liposomen-Platinanalogen¹ gegen L1210-Leukämie³ Platinanaloges Dosis&sup4; mg/kg razemisches PT-Neodecanoato-DACH PT-Neodecanoato-trans-RR-DACH cis-Platin (CDDP)&sup5; ¹ Liposomen-Zammensetzung : DMPC:DMPG 7:3 ² Median der Überlebenszeit der behandelten Mäuse/Median der Überlebenszeit der Kontrollmäuse x 100 ³ 1 x 10&sup6; L1210-Zellen am Tag 0 durch ip-Verabreichung überimpft. &sup4; Behandlung: ip am Tag 1 &sup5; gelöst in Kochsalzlösung, 1 mg/ml.

Beispiel 7

In vivo-Antitumoraktivität von razemischem L-PT-Neodecanoato-DACH gegen Lebermetastasen von Mäuse-M5076-Retikulosarkom

Die potentielle Antitumorwirkung von L-PT gegen Lebermetastasen wurde unter Verwendung von razemischem L-PT-Neodecanoato-DACH, das gemäß Beispiel 3 hergestellt worden war und von Mäuse-M5076-Retikulosarkom, einem Tumor, der ausschließlich in der Leber metastasiert, getestet.
Razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH erwies sich im Vergleich zu cis-Platin als aktiver bei der Behandlung von etablierten Lebermetastasen von M5076, wobei zwei unterschiedliche Tumorinokula und Verabreichungsschemata angewandt wurden (Tabellen 4 und 5). Razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH (25 mg/kg an den Tagen 8, 12 und 16) ergab 30 Tage nach der intravenösen Inokulation mit 10&sup5; M5076-Zellen im Vergleich zu cis-Platin (7,5 mg/kg an den Tagen 8, 12 und 16) eine mehr als 2-fache Verringerung der Anzahl an Lebermetastasen (durchschnittliche Anzahl an Lebermetastasen ± SA = 39 ± 21 für L-PT gegenüber 114 ± 38 für cis-Platin (Tabelle 4)). Razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH (25 mg/kg an den Tagen 4, 8 und 12) ergab 45 Tage nach der Inokulation mit 10&sup4; M5076-Zellen eine vollständige Hemmung der Lebermetastasen von M5076, während 4 von 6 der mit cis-Platin behandelten Tiere (7,5 mg/kg an den Tagen 4, 8 und 12) 175 oder mehr Lebermetastasen aufwiesen (Tabelle 5)
Razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH erwies sich bei der Prophylaxe von Lebermetastasen von M5076-Retikulosarkom als wirksam. Razemisches L- PT-Neodecanoato-DACH (37,5 mg/kg am Tag -1) ergab am 21. Tag nach intravenöser Inokulation mit 10&sup4; M5076-Zellen (Inokulation am Tag 0) im Vergleich mit cis-Platin (10 mg/kg am Tag -1) und mit unbehandelten Tieren eine 5-fache Verringerung der Anzahl an Lebermetastasen (durchschnittliche Anzahl an Lebermetastasen ± SA = 52 ± 20 für L-PT, 256 ± 54 für cis-Platin und 226 ± 21 für die Kontrolle (Tabelle 6)). Tabelle 4 Behandlung von Lebermetastasen von M5076 Retikulosarkom mit razemischem L- PT-Neodecanoato-DACH Behandlung Dosis, mg/kg Schema, Tag Anzahl der Lebermetastasen nach 30 Tagen, Mittelwert ± SA Cis-Platin razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH
*Gruppen von 10 C57BL/6-Mäusen wurden am Tag 0 intravenös mit 10&sup5; M5076- Zellen inokuliert. Die Tiere wurden an den Tagen 8, 12 und 16 mit cis-Platin oder razemischem L-PT-Neodecanoato-DACH behandelt. Der Median der Überlebenszeit von unbehandelten Tieren betrug 19 Tage. Die behandelten Tiere wurden am 30. Tag getötet. Die Lebern wurden entfernt und in Bouin's-Fixativ gebracht. Die Anzahl der Leber-Tumorkolonien wurde gezählt. Tabelle 5 Behandlung von Lebermetastasen von M5076-Retikulosarkom mit razemischem L- PT-Neodecanoato-DACH Behandlung Dosis, mg/kg Schema, Tag Anzahl der Lebermetastasen nach 45 Tagen, Mittelwert ± SA Cis-Platin razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH
* Gruppen von 6 C57BL/6-Mäusen wurden am Tag 0 intravenös mit 10&sup4; M5076- Zellen inokuliert. Die Tiere wurden an den Tagen 4, 8 und 12 mit cis-Platin oder razemischem L-PT-Neodecanoato-DACH behandelt. Der Median der Überlebenszeit der unbehandelten Tiere betrug 30 Tage. Die behandelten Tiere wurden am 45. Tag getötet. Die Lebern wurden entfernt und in Bouin's-Fixativ gebracht. Die Anzahl der Leber-Tumorkolonien wurde gezählt. Zwei der mit cis-Platin behandelten Tiere starben vor dem 45. Tag, während in der mit L-PT behandelten Gruppe kein Tier starb. Tabelle 6 Prophylaxe von Lebermetastasen von M5076-Retikulosarkom mit razemischem L- PT-Neodecanoato-DACH* Behandlung Dosis, mg/kg Schema, Tag Anzahl der Lebermetastasen nach 21 Tagen, Mittelwert ± SA keine Cis-Platin razemisches L-PT-Neodecanoato-DACH
* Gruppen von 6 C57BL/6-Mäusen wurden am Tag -1 mit cis Platin oder razemischem L-PT-Neodecanoato-DACH behandelt. Die Tiere wurden am Tag 0 intravenös mit 10&sup4; M5076-Zellen inokuliert. Der Median der Überlebenszeit der unbehandelten Tiere betrug 21 Tage. Die behandelten Tiere wurden am 21. Tag getötet. Die Lebern wurden entfernt und in Bouin's-Fixativ gebracht. Die Anzahl der Tumorkolonien wurde gezählt.

Beispiel 8

Herstellung von cis-Bis-neodecanoato-cis-diamin-platin(II)

Zunächst wurde cis-Diamin-dijod-platin(II) (NH&sub3;)&sub2;Pt-I&sub2; gemäß folgendem Verfahren hergestellt:
K&sub2;PtCl&sub4; (5 g) wurde in Wasser (20 ml) gelöst. Eine wäßrige Lösung von KI (3g) wurde zugesetzt. Man erhielt eine dunkelbraune Lösung. Das Gemisch wurde mit wäßrigem konzentriertem Ammoniak (2 ml) versetzt und 2-3 h bei Raumtemperatur gerührt. Sodann wurde das Gemisch filtriert. Der Feststoff wurde mit einem Überschuß an Wasser, Ethanol und Ether gewaschen. Das Produkt wurde unter Vakuum über P&sub2;O&sub5; getrocknet. Ausbeute 4,5 g (77 %).
Sodann wurde die Verbindung der Erfindung auf folgende Weise hergestellt:
(NH&sub3;)&sub2;-Pt-I&sub2; (1,0 g) wurde in Wasser (50 ml), suspendiert und eine wäßrige AgNO&sub3;-Lösung (0,68 g, 20 ml H&sub2;O) wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur im Dunkeln gerührt. Der AgI-Niederschlag wurde filtriert und das Filtrat durch Rotationsverdampfung eingeengt. Die eingeengte Lösung wurde mit einer Lösung von in situ hergestelltem Natrium-neodecanoat (0,688 g Neodecansäure in 20 ml Methanol und 4 ml 1 n NaOH) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das gelbe Reaktionsgemisch wurde bei 40ºC unter vermindertem Druck unter Verwendung eines Rotationsverdampfers zur Trockene eingedampft. Man erhielt ein kautschukartiges Produkt, das mit Chloroform extrahiert wurde. Der Chloroformextrakt wurde über wasserfreiem MgSO&sub4; getrocknet. Das MgSO&sub4; wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat unter vermindertem Druck unter Verwendung eines Rotationsverdampfers eingedampft. Man erhielt einen cremefarbenen Feststoff, der über P&sub2;O&sub5; unter vermindertem Druck getrocknet wurde. Das Endprodukt wurde bei 0ºC gelagert.
Die Elementaranalyse des Endprodukts betrug: C 41,58; H 8,03; N 4,45 %. Die berechneten Werte für C&sub2;&sub0;H&sub4;&sub4;N&sub2;&sub4;Pt sind folgende: C 42,00; H 7,7; N 4,90 %.
cis-Bis-neodecanoato-bis-diamin-platin(II) weist folgende Strukturformel auf:
[H&sub3;N]&sub2; - Pt - [OOC - CR'RR"]&sub2;
worin R, R' und R" CH&sub3;, C&sub2;H&sub5; oder C&sub3;H&sub7; bedeuten können, wobei sich eine Alkylcarboxylato-Rest-Funktion der empirischen Formel C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub9;O&sub2; (MG = 171) ergibt.
cis-Bis-neodecanoato-bis-diamin-platin(II) ist in Chloroform, Methanol und anderen üblichen organischen Lösungsmitteln gut löslich, aber unlöslich in Wasser.

Beispiel 9

Herstellung von cis-Bis-neodecanoato-bis-cyclohexylamin-platin(II)-dihydrat

Das Verfahren von Beispiel 8 wurde wiederholt, wobei man aber anstelle von Ammoniak Cyclohexylamin als Liganden verwendete. Der Komplex ist in Chloroform, Methanol und anderen organischen Lösungsmitteln gut löslich, jedoch unlöslich in Wasser.
Elementaranalyse: berechnet für C&sub3;&sub2;H&sub6;&sub4;N&sub2;O&sub4; 2H&sub2;O: C 49,71; H 8,80; N 3,62 %; gefunden: C 49,31; H 8,39; N 3,16 %.
cis-Bis-neodecanoato-bis-cyclohexylamin-platin(II) weist folgende Strukturformel auf:
[C&sub6;H&sub1;&sub1;NH&sub2;]&sub2; - Pt - [OOC-C-R'RR"]&sub2;
worin R, R' und R" CH&sub3;, C&sub2;H&sub5; oder C&sub3;H&sub7; bedeuten können, wobei sich eine Alkylcarboxylato-Rest-Funktion der empirischen Formel C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub9;O&sub2; (MG = 171) ergibt.

Beispiel 10

Herstellung von cis-Bis-neodecanoato-ethylendiamin-platin(II) H&sub2;O

Zunächst wurde gemäß dem Verfahren von Beispiel 8 cis-Dijod-ethylendiamin-platin(II) unter Verwendung von Ethylendiamin als Liganden anstelle von Ammoniak hergestellt. Die Produktausbeute betrug 96 %.
Sulfato-ethylendiamin-platin(II) H&sub2;O wurde gemäß folgendem Verfahren hergestellt.
cis-Bis-dijod-ethylendiamin-platin(II) (3,9 g) wurde in 10 ml H&sub2;O suspendiert. Wäßrige Lösungen von Ag&sub2;SO&sub4; (2,2 g in 200 ml H&sub2;O) wurden zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur im Dunkeln gerührt. AgI wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat unter vermindertem Druck unter Verwendung eines Rotationsverdampfers bei 40-45ºC zur Trockene eingedampft. Das Endprodukt wurde über P&sub2;O&sub5; unter vermindertem Druck getrocknet. Die Produktausbeute betrug 2,35 g (81 %).
Die erfindungsgemäße Verbindung wurde sodann auf folgende Weise hergestellt:
Sulfato-ethylendiaminplatin(II) H&sub2;O (0,369 g) wurde in H&sub2;O (20 ml) gelöst. Eine in situ hergestellte Lösung von Natriumneodecanoat (0,344 g Neodecansäure in 20 ml Methanol und 2 ml 1 n NaOH) wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2-3 h bei Raumtemperatur gerührt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck unter Verwendung eines Rotationsverdampfers bei 40-45ºC zur Trockene eingedampft. Das erhaltene kautschukartige Produkt wurde mit Chloroform extrahiert. Der Chloroformextrakt wurde über wasserfreiem MgSO&sub4; getrocknet. Das MgSO&sub4; wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat unter Verwendung eines Rotationsverdampfers unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Das Endprodukt wurde unter vermindertem Druck über P&sub2;O&sub5; getrocknet. Das Produkt wurde bei 0ºC gelagert.
Elementaranalyse: berechnet für C&sub2;&sub2;H&sub4;&sub6;N&sub2;O&sub4;Pt H&sub2;O: C 42,86; H 7,79; N 4,54 %, gefunden C 43,07; H 7,32; N 4,71.
cis-Bis-Neodecanoato-ethylendiamin-platin(II) ist in Chloroform, Methanol und anderen organischen Lösungsmitteln gut löslich, jedoch unlöslich in Wasser.
cis-Bis-neodecanoato-ethylendiamin-platin(II) weist folgende Strukturformel auf:
worin R, R' und R" CH&sub3;, C&sub2;H&sub5; oder C&sub3;H&sub7; bedeuten können, wobei sich eine Alkylcarboxylato-Rest-Funktion der empirischen Formel C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub9;O&sub2; (Mg = 171) ergibt.

Beispiel 11

Herstellung von cis-Bis-neodecanoato-bis-isopropylamin-platin(II)

Zunächst wurden gemäß dem Verfahren von Beispiel 10 unter Verwendung von Isopropylamin als Liganden anstelle von Ethylendiamin cis-Bis- neodecanoato-bis-isopropylamin-platin(II) und Sulfato-bis-isopropylamin- platin(II) hergestellt.
Sodann wurde die Verbindung der Erfindung auf folgende Weise hergestellt:
Sulfato-bis-isopropylamin-platin(II) H&sub2;O (0,427 g) wurde in H&sub2;O (50 ml) gelöst. Eine Lösung von in situ hergestelltem Natriumneodecanoat (0,344 g Neodecansäure in 20 ml Methanol und 2 ml 1 n NaOH) wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2-3 h bei Raumtemperatur gerührt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch unter Verwendung eines Rotationsverdampfers unter vermindertem Druck bei 40-45ºC zur Trockene eingedampft. Man erhielt eine kautschukartige Masse, die mit Chloroform extrahiert wurde. Der Chloroformextrakt wurde über wasserfreiem MgSO&sub4; getrocknet. Das MgSO&sub4; wurde durch Filtration abgetrennt und das Filtrat unter Verwendung eines Rotationsverdampfers unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Das Produkt wurde unter vermindertem Druck über P&sub2;O&sub5; getrocknet. Das Endprodukt wurde bei 0ºC gelagert.
Elementaranalyse: berechnet für C&sub2;&sub6;H&sub5;&sub6;N&sub2;O&sub4;Pt: C 47,63; H 8,53; N 4,26 %; gefunden: C 47,74; H 8,47; N 3,93%.
cis-Bis-neodecanoato-bis-isopropylamin-platin(II) weist folgende Strukturformel auf:
([H&sub3;C]&sub2;CH-NH&sub2;)&sub2; - Pt - [OOC-C-R'RR"]&sub2;
worin R, R' und R" CH&sub3;, C&sub2;H&sub5; oder C&sub3;H&sub7; bedeuten können, wobei sich eine Alkylcarboxylato-Rest-Funktion der empirischen Formel C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub9;O&sub2; (MG = 171) ergibt.
cis-Bis-neodecanoato-bis-isopropylamin-platin(II) ist in Chloroform, Methanol und anderen organischen Lösungsmitteln gut löslich, jedoch in Wasser unlöslich.

Beispiel 12

cis-Bis-Neopentanoato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin(II)

Sulfato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin(II) H&sub2;O (0,432 g) wurde in Wasser (20 ml) gelöst. Eine in situ hergestellte Lösung von Barium-neopentanoat (0,204 g Neopentansäure in 5 ml Methanol und 0,3 g Ba(OH)&sub2; 8H&sub2;O in 50 ml H&sub2;O wurden vereinigt) wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 2-3 h bei Raumtemperatur gerührt. Sodann wurde das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck unter Verwendung eines Rotationsverdampfers bei 40-45ºC zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde mit Methanol extrahiert und filtriert. Das Filtrat wurde zur Trockene eingedampft. Man erhielt einen Feststoff, der mit Chloroform extrahiert wurde. Der Chloroformextrakt wurde zur Trockene eingedampft. Man erhielt ein cremefarbenes Produkt. Das Produkt wurde über P&sub2;O&sub5; unter vermindertem Druck getrocknet.
Elementaranalyse berechnet für C&sub1;&sub6;H&sub3;&sub2;N&sub2;O&sub4;Pt 2H&sub2;O: C 35,00; H 6,57; N 5,11 %; gefunden: C 35,16, H 6,17; N 5,27 %.
cis-Bis-neopentanoato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin(II) ist in Chloroform, Methanol und anderen üblichen organischen Lösungsmitteln gut löslich.
cis-Bis-neopentanoato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexyn-platin(II) weist folgende Strukturformel auf:

Beispiel 13

Einkapselungswirkungsgrad und Antitumoraktivität von lipophilen cis-Platin-Analogen

Die in den Beispielen 8 bis 12 hergestellten Verbindungen wurden auf ihren Einkapselungswirkungsgrad in Liposomen gemäß den in Beispiel 4 beschriebenen Verfahren getestet. Diese in Liposomen eingekapselten Verbindungen wurden auf ihre optimale Dosis und Wirksamkeit als Inhibitoren des in vivo-Tumorwachstums gemäß Beispiel 6 getestet. Die Daten in Tabelle 7 geben die Meßergebnisse wieder. Tabelle 7 Einkapselungswirkungsgrad und Antitumoraktivität von lipophilen cis-Platin-Analogen, die Liposomen einverleibt sind Verbindung Einkapselungswirkungsgrad Optimale Dosis mg/kg % T/C L1210 ip/ip Einzeldosis cis-Bis-neodencanoato-cis-diamin-platin(II) cis-Bis-neodecanoato-bis-cyclohexylamin-platin(II) cis-Bis-neodecanoato-ethylendiamin-platin(II) cis-Bis-neodecanoato-bis-isopropylamin-platin(II) cis-Bis-neopentanoato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin(II)

Beispiel 14

In vitro-Zytotoxizität gegen humane maligne Zellinien

cis-Bis-neodecanoato-1,2-diaminocyclohexan-platin(II) wurde in liposomaler Form gegen drei humane maligne Zellinien von Kolon-Karzinom (LoVo, SW620 und SW403) unter Anwendung eines Kolonienbildungs-Hemmtests getestet. Die Arzneistoffkonzentration, die eine 50%ige Hemmung der Kolonienbildung (IC&sub5;&sub0;) ergab, lag im Bereich von 4 bis 8 mikromolar. Der IC&sub5;&sub0;-Wert von cis-Platin für die gleichen Zellinien lag im Bereich von 3 bis 7 mikromolar.

Claims

1. Vierfach koordinierter Platin(II)-Komplex der Formel:

worin R&sub1; und R&sub2; jeweils einen Alkylcarboxylatorest bedeuten, der eine hydrophober Rest-Funktion trägt, oder zusammen einen Alkylendicarboxylatorest bedeuten, der eine hydrophober Rest-Funktion trägt, wobei R&sub1; und R&sub2; keine gesättigten oder ungesättigten höheren Fettsäuren darstellen, und worin R&sub3; und R&sub4; jeweils einen Rest der folgenden Formel bedeuten:

worin R&sub5; aus der Gruppe Wasserstoff, Alkyl, insbesondere mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, Aryl, Aralkyl, Alkenyl, Cycloalkyl, Cycloalkenyl oder einer Kombination davon ausgewählt ist; oder

worin R&sub3; und R&sub4; zusammen aus der Gruppe Cycloalkyl-1,2-diamino mit 3 bis 20 Kohlenstoffatomen und Alkyl-1,2-diamino mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen ausgewählt sind;

insbesondere wobei der Cycloalkylrest 3 bis 12 Kohlenstoffatome und ganz besonders 3 bis 7 Kohlenstoffatome aufweist; und

wobei der Komplex ferner dadurch definiert ist, daß er in Methanol oder Chloroform im wesentlichen löslich und in Wasser im wesentlichen unlöslich ist.

2. Vierfach koordinierter Platin(II)-Komplex nach Anspruch 1, der Formel

worin R&sub5; aus der Gruppe Wasserstoff, Alkyl, Aryl, Aralkyl, Alkenyl, Cycloalkyl, Cycloalkenyl oder einer Kombination davon ausgewählt ist; oder

worin R&sub3; und R&sub4; zusammen aus der Gruppe Cycloalkyl-1,2-diamino mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen und Alkyl-1,2-diamino mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen ausgewählt sind;

3. Komplex nach Anspruch 1 oder 2, wobei der Komplex zusätzlich durch eines oder mehrere der folgenden Merkmale definiert ist:

a) R&sub1; und/oder R&sub2; bedeuten

aa) Alkylcarboxylato, vorzugsweise mit 5 bis 20 Kohlenstoffatomen, insbesondere Neodecanoato oder Neopentanoato, ganz besonders, wenn sich diese in cis-Stellung befinden, oder

R&sub1; und R&sub2; bedeuten zusammen

bb) Alkylendicarboxylato mit 5 bis 20 Kohlenstoffatomen oder

b) R&sub3; und/oder R&sub4;

aa) umfassen ferner

aaa) Alkyl mit 1 bis 20, insbesondere mit 6 bis 12 und ganz besonders mit 2 bis 6 Kohlenstoffatomen,

bbb) Cycloalkyl mit 3 bis 12 Kohlenstoffatomen,

bb) bedeuten Aralkyl, das zusätzlich definiert ist durch einen Gehalt an verknüpften Aryl- und Alkylbereichen und 7 bis 20 Kohlenstoffatome aufweist, insbesondere wobei der Arylbereich 6 bis 10 Kohlenstoffatome und/oder der Alkylbereich 1 bis 10 Kohlenstoffatome aufweist, oder

R&sub3; und R&sub4; bedeuten zusammen

cc) Cycloalkyl-1,2-diamino mit 3 bis 20 Kohlenstoffatomen, wobei der Cycloalkylring 3 bis 12 Kohlenstoffatome aufweist, insbesondere wobei es sich beim Cycloalkyl-1,2-diamino um 1,2-Diaminocyclohexan und ganz besonders um trans-R,R-1,2-Diaminocyclohexan oder trans-S,S-1,2-Diaminocyclohexan handelt, oder

dd) Alkyl-1,2-diamino, insbesondere mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen, wobei für Alkyl die Bedeutung Ethyl ganz besonders bevorzugt ist,

c) R&sub5; bedeutet

aa) Wasserstoff oder

bb) Alkenyl mit 5 bis 20 Kohlenstoffatomen oder

cc) Alkyl mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen, insbesondere Isopropyl,

oder

dd) Cyclohexyl.

4. Liposom, enthaltend einen vierfach koordinierten Platinkomplex der Formel

worin R&sub1; und R&sub2; jeweils einen Alkylcarboxylatorest bedeuten, der eine hydrophober Rest-Funktion trägt, wobei der Alkylcarboxylatorest insbesondere 5 bis 20 Kohlenstoffatome aufweist, oder zusammen einen Alkylendicarboxylatorest bedeuten, der eine hydrophober Rest-Funktion trägt, wobei R&sub1; und R&sub2; keine gesättigten oder ungesättigten höheren Fettsäuren darstellen, und worin R&sub3; und R&sub4; jeweils einen Rest der folgenden Formel bedeuten:

worin R&sub5; Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 20 und insbesondere mit 6 bis 12 Kohlenstoffatomen oder Gycloalkyl mit 3 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet;

oder worin R&sub3; und R&sub4; zusammen Cycloalkyl-1,2-diamino mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen oder Alkyl-1,2-diamino mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeuten;

wobei der Komplex ferner dadurch definiert ist, daß er in Methanol oder Chloroform im wesentlichen löslich und in Wasser im wesentlichen unlöslich ist,

und ein Phospholipid, insbesondere wobei das Gewichtsverhältnis des Platinkomplexes zum Phospholipid 1 zu 10 bis 1 zu 30 und ganz besonderes 1 zu 15 beträgt,

wobei das Liposom insbesondere zusätzlich dadurch definiert ist, daß es Cholesterin enthält.

5. Liposom nach Anspruch 4, wobei der Komplex ausgewählt ist unter cis-Bis-neodecanoato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin (II), cis-Bis-ammin-bis-neodecanoato-platin(II), cis-Bis-neopentanoato-1,2-diaminocyclohexan-platin(II), cis-Bis-cyclopentencarboxylato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin(II), cis-Bis-neodecanoato-ethylendiamin-platin(II), cis-Bis-neodecanoato-bis-isopropylamin-platin(II), cis-Bis-neopentanoato-trans-R,R-1,2-diaminocyclohexan-platin(II), cis-Bis-neodecanoato-bis-cyclohexylamin-platin(II).

6. Liposom nach Anspruch 4, wobei das Phospholipid zusätzlich dadurch definiert ist, daß es sich um Phosphatidylglycerin, Phosphatidylcholin, Sphingomyelin, Phosphatidinsäure oder Phosphatidylserin handelt,

insbesondere wobei das Phospholipid zusätzlich dadurch definiert ist, daß es im wesentlichen aus Phosphatidylglycerin, einem Phosphatidylcholin oder einer Kombination davon besteht,

insbesondere wobei das Phosphatidylglycerin zusätzlich dadurch definiert ist, daß es im wesentlichen aus Dimyristoylphosphatidylglycerin besteht, und das Phosphatidylcholin zusätzlich dadurch definiert ist, daß es im wesentlichen aus Dimyristoylphosphatidylcholin besteht,

wobei das Dimyristoylphosphatidylglycerin und das Dimyristoylphosphatidylcholin zusätzlich dadurch definiert sind, daß sie in einem Verhältnis von 1 zu 10 bis 10 zu 1, insbesondere in einem Verhältnis von 3 zu 7, vorliegen.

7. Liposom nach Anspruch 4, zusätzlich dadurch definiert, daß es multilamellar oder unilamellar ist.

8. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend das Liposom von einem der Ansprüche 4-7 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel.

9. Verfahren zur Herstellung eines vierfach koordinierten Platin(II)-Komplexes der Formel

worin R&sub5; Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 20 Kohlenstoffatomen oder Cycloalkyl mit 3 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeutet; oder

worin R&sub3; und R&sub4; zusammen Cycloalkyl-1,2-diamino mit 3 bis 7 Kohlenstoffatomen oder Alkyl-1,2-diamino mit 2 bis 12 Kohlenstoffatomen bedeuten;

wobei der Komplex ferner dadurch definiert ist, daß er in Methanol oder Chloroform im wesentlichen löslich und in Wasser im wesentlichen unlöslich ist;

wobei das Verfahren folgendes umfaßt: Umsetzen eines Sulfato-trans- R,R-1,2-diaminoalkan-platin(II)-Komplexes mit einem Erdalkalimetallsalz eines Carboxylatomonoanions mit einer hydrophoben Radikalfunktion unter Bildung des vierfach koordinierten Platin(II)-Komplexes,

insbesondere wobei die Umsetzung in einer wässrigen Umgebung erfolgt,

insbesondere wobei das Sulfatsalz des Erdalkalimetalls durch Filtration entfernt wird und der Platinkomplex durch Kristallisation oder durch Entfernung des Lösungsmittels unter Abdampfen, insbesondere wobei das Abdampfen unter vermindertem Druck bei 45-50ºC erfolgt, erhalten wird,

insbesondere wobei der Platin-Komplex zusätzlich über einem Trocknungsmittel, insbesondere über Phosphorpentoxid, getrocknet wird.

10. Verfahren zur Herstellung eines Liposoms, umfassend

(a) Bereitstellen eines vierfach koordinierten Platin(II)-Komplexes der Formel

(b) Vermischen des Komplexes mit Phospholipid in einem Verhältnis von ungefähr 1:15 in einem hydrophoben Lösungsmittel, gegebenenfalls unter Vermischen des Komplexes mit Cholesterin;

(c) Abdampfen des hydrophoben Lösungsmittels unter Bildung eines Films von Phospholipid und Komplex oder Lyophilisieren des Gemisches unter Bildung eines Pulvers, wobei diese Stufe c) insbesondere eine Rotationsverdampfung umfaßt;

(d) Dispergieren des Films oder Pulvers in einer wässrigen Lösung unter Bildung von Liposomen, insbesondere wobei der Komplex und/oder das Phospholipid der Definition in einem der Ansprüche 4 bis 7 entsprechen.

11. Verfahren nach Anspruch 10, wobei eine zusätzliche Stufe hinzugefügt wird, bei der die Liposomen einer Schalloszillation unter Bildung von unilamellaren Liposomen unterzogen werden.