DE68914154T2

DE68914154T2 - In liposomen verkapselte vinca-alkaloide und deren verwendung zur tumorbekämpfung.

Info

Publication number: DE68914154T2
Application number: DE68914154T
Authority: DE
Inventors: Aquilur Rahman
Original assignee: Georgetown University
Current assignee: Georgetown University
Priority date: 1988-05-23
Filing date: 1989-05-23
Publication date: 1994-10-20
Anticipated expiration: 2009-05-24
Also published as: JPH03504381A; IE891661L; EP0416014A4; DK279890D0; WO1989011292A1; US4952408A; AU625308B2; AU3742489A; IE64513B1; DK279890A; CA1339077C; EP0416014A1; DE68914154D1; DK175869B1; EP0416014B1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Vinca-Alkaloiden beim Bekämpf en von Tumoren.
Die dimeren Alkaloide Vincristin und Vinblastin aus Catharanthus-Spezies, welche Indol-Indolin-Hälften enthalten, werden einzeln oder in Verbindung mit anderen chemotherapeutischen Mitteln weitverbreitet als Antitumormittel benutzt. Vincristin hat eine beträchtliche Wirksamkeit gegenüber Non-Hodgkin- und Hodgkin-Lymphomen, akuter Lyinphoblastenleukämie, Wilm's Tumor, Rhabdomyosarkom und Neuroblastom bewiesen.
Die Vinca-Alkaloide besitzen cytotoxische Wirksamkeit aufgrund ihrer Bindung an Tubulin. Das Letztgenannte ist ein dimeres Protein, welches in der löslichen Fraktion des Zytoplasmas aller Zeilen gefunden wird. Es liegt im Gleichgewicht mit einer polymerisierten Form, dem Mikrotubuli- System vor, welches die Spindel bildet, entlang der die Chromosomen während der Mitose wandern. Zusätzlich spielen Mikrotubuli eine entscheidende Rolle beim Erhalten der Zellstruktur, indem sie einen Kanal für Zellsekretionen und für den Durchgang von Neurotransmittern entlang von Axonen zur Verfügung stellen. Die Vinca-Alkaloide inhibieren durch ihre Bindung an Tubulin den Aufbauvorgang von Mikrotubuli und führen zu der Auflösung der mitotischen Spindel.
Die klinische Verwendung von Vincristin ist wegen Toxizitäten, welche eine Behandlung einschränken, stark beeinträchtigt. Gesamtdosen von Vincristin, die über 2 mg liegen, sind oft mit einer fortschreitenden und zur Behinderung führenden Neurotoxizität verbunden. Die ersten Anzeichen von Neuropathie sind eine Abnahme der Sehnenreflexe und Parästhesieen der Finger und unteren Extremitäten. Weiter fortgeschrittene Neurotoxizität kann zu Hirnnervenlähmungen (palsics) und ausgeprägter Schwäche der dorsalen Beugemuskeln des Fußes und Streckmuskeln der Handwurzel führen. Bei höheren Dosen von Vincristin, über 3 mg Gesamtdosis, können aufgrund vegetativer Neuropathie Konstipation, Obstipation und Ileuslähmung auftreten.
Das Vincristin-Alkaloid, wie viele andere das Tumorwachstum hemmende Wirkstoffe, versagt dabei, wirksam zwischen normalen und Zielgeweben zu unterscheiden. Ein System, welches solchen chemotherapeutischen Mitteln ermöglicht, ihr Ziel auf eine selektive und kontrollierte Weise zu erreichen, würde einen beträchtlichen Fortschritt bei der Krebschemotherapie darstellen.
Es ist vorgeschlagen worden, Vinca-Alkaloide in Liposomen zu verkapseln, und physikochemische Untersuchungen, welche die Aufnahme und Abgabe dieser Wirkstoffe betrafen und welche Verfahren der Verkapselung zur Verfügung stellten, sind durchgeführt worden. [Juliano und Stamp, Biochim. Biophys. Acta 586(1), 137 - 145 (1979); Ter-Minassian- Saraga und Albrecht, Int. J. Pharm. 24(2-3), 149 - 164 (1985); US-Patent 4331654 auf den Namen von Morris; Mayer et al., Biochim. Biophys. Acta 816(2), 294 - 302 (1985); PCT-Anmeldung WO/86 01102 auf den Namen von The Liposome Company Inc.].
Firth et al. [J. Neurol. Sci. 63(2), 153 - 165 (1984)] haben in vitro die Wirksamkeit von Vincristin, welches in Liposomen eingeschlossen war, an einer menschlichen Glioma Zellinie untersucht. Sie beobachteten eine Dosis-Wirkungs- Kurve, die ähnlich zu der mit dem freien Wirkstoff beobachteten war.
Juliano und Stamp [Biochim. Pharmacol. 27(l), 21 - 27 (1978)] zeigten, daß in Liposomen verkapseltes Vinblastinsulfat langsamer aus dem Plasma von Ratten eliminiert wird, als der freie Wirkstoff.
Oliver et al. [J. Neurol. Sci. 68(1), 25 - 30 (1985)] beschreiben eine verminderte Clearance von Vincristin aus dem Gehirn von Ratten, wenn diesen der in Liposomen eingeschlossene Wirkstoff injiziert wurde, verglichen zu dem freien Wirkstoff.
Layton und Trouet [Eur. J. Cancer. 16(7), 945 - 950 (1980)] berichten ebenfalls für in Liposomen verkapseltes Vincristin eine geringere Clearance aus dem Plasma als für den freien Wirkstoff. Jedoch zeigen die Ergebnisse von therapeutischen Versuchen, welche von diesen Autoren durchgeführt wurden, daß eine liposomale Verkapselung von Vinca- Alkaloiden nicht ihre Toxizität vermindert oder ihre therapeutische Breite vergrößert.
Demgemäß ist es eine Aufgabe dieser Erfindung, eine chemotherapeutische Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, welche nicht an den oben angeführten Nachteilen leidet.
Es ist eine weitere Aufgabe dieser Erfindung, eine chemotherapeutische Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, welche es dem chemotherapeutischen Mittel ermöglicht, sein Ziel auf eine selektive Weise zu erreichen.
Es ist eine weitere Aufgabe dieser Erfindung, eine chemotherapeutische Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, welche es dem chemotherapeutischen Mittel ermöglicht, sein Ziel auf eine kontrollierte Weise zu erreichen.
Es ist eine weitere Aufgabe dieser Erfindung, eine chemotherapeutische Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, welche eine erhöhte Antitumorwirkung hat.
Es ist eine weitere Aufgabe dieser Erfindung, eine chemotherapeutische Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen, welche eine verminderte Toxizität hat.
Der Erfinder hat eine Zusammensetzung gefunden, welche alle diese Aufgaben dieser Erfindung und weitere Aufgaben, welche aus der nachstehend gegebenen Beschreibung der Erfindung ersichtlich werden, erfüllt. Diese Zusammensetzung ist eine Zusammensetzung, welche wenigstens ein in Liposomen verkapseltes Vinca-Alkaloid in Komplexierung mit Cardiolipin enthält. Das Vinca-Alkaloid ist Vincristin, Vinblastin, Vindesin oder eine Kombination von diesen.
In der folgenden Beschreibung bezieht sich "in Liposomen verkapselt" oder "liposomal" auf die liposomalen Zusammensetzungen der Erfindung, worin wenigstens ein Vinca- Alkaloid mit Cardiolipin komplexiert ist.
Der Erfinder hat nun ein neuartiges Verfahren zum Verkapseln von Vincristin, Vinblastin, Vindesin (Desacetylvinblastin) oder einer Kombination von diesen in Liposomen gefunden. Dieser Fund hat den weiteren Fund möglich gemacht daß, verglichen mit dem freien Wirkstoff, die Pharmakokinetik und Gewebeverteilung von liposomalen Vinca-Alkaloiden, mit einem ausgeprägten Anstieg der Antitumorwirkung und einer beträchtlichen Verminderung der Toxizitäten, beträchtlich geändert ist.
Die von Liposomen verkapselte Vinca-Alkaloid-Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung stellt einen neuartigen Ansatz in der Krebstherapie dar. Die dosislimitierenden Toxizitäten von freiem chemotherapeutischen Wirkstoff werden durch die liposomale Verkapselung wirkungsvoll vermindert, folglich können höhere Dosen verabreicht werden. Zusätzlich liefern äquivalente Wirkstoffdosen, welche in Liposomen eingeschlossen sind, bei der Zusammensetzung der Erfindung viel höhere therapeutische Wirkungen, was bis jetzt noch nicht mit irgendeinem anderen Antikrebsmittel, mit irgendwelchen Behandlungsmodalitäten, welche auf einem Trägersystem beruhen, beobachtet wird. Obwohl der Mechanismus nicht vollständig verstanden wird, scheint es teilweise, daß die Pharmakokinetik des Wirkstoffs verändert wird, wenn er mit Cardiolipin komplexiert und in Liposomen eingeschlossen verabreicht wird.
Somit stellt die vorliegende Erfindung eine Zusammen-Setzung zur Verfügung, welche ein in Liposomen verkapseltes Vinca-Alkaloid(e) umfaßt. Das in Liposomen verkapselte Vinca-Alkaloid(e) kann in Liposomen verkapseltes Vincristin, in Liposomen verkapseltes Vinblastin, in Liposomen verkapseltes Vindesin oder eine in Liposomen verkapselte Kombination aus wenigstens zwei von Vincristin, Vinblastin und Vindesin sein.
Das in Liposomen verkapselte Material kann erhalten werden, indem entweder die freie Base des Vinca-Alkaloids oder ein Salz davon (z.B. das Sulfat oder das Ammoniumsalz) in einem Lösungsmittel gelöst wird. Wenn die Form der freien Base des Vinca-Alkaloids verwendet wird, ist das Lösungsmittel vorzugsweise ein relativ unpolares organisches Lösungsmittel. Wenn die Salzform verwendet wird, ist das verwendete Lösungsmittel vorzugsweise ein Polares organisches Lösungsmittel, z.B. Methanol oder Ethanol. Wenn das Vinca-Alkaloid vollständig in dem Lösungsmittel gelöst ist, wird das gelöste Vinca-Alkaloid mit Cardiolipin komplexiert, indem eine Lösung von Cardiolipin zu dem solvatisierten chemotherapeutischen Mittel zugegeben wird. Das Lösungsmittel, welches verwendet wird um das Cardiolipin zu lösen, kann Methanol oder Ethanol sein.
Die erhaltene Mischung wird dann leicht gerührt und unter einer inerten Atmosphäre bis zur Trockenheit verdampft. Die inerte Atmosphäre kann Stickstoff, Argon oder eine Kombination aus diesen beiden sein.
Zu dieser getrockneten Mischung fügt man dann Phosphatidylcholin, Cholesterin und entweder Phosphatidylserin oder Dicetylphosphat (DCP) zu. Die erhaltene Mischung wird dann leicht gerührt, um eine homogene Lösung zu erhalten und unter einer inerten Atmosphäre zur Trockenheit verdampft, um Lipide und Wirkstoffilme zu erzeugen.
Die getrockneten Lipide werden dann in einer Lösung resuspendiert, wo sie hydratisiert und dann beschallt werden.
Die verwendete Lösung kann eine Salzlösung sein, eine phosphatgepufferte Salzlösung, eine Lactoselösung, eine Glucoselösung, eine Manitollösung oder irgendeine andere bekannte physiologisch-gepufferte Lösung. Nicht-eingeschlossenes Vinca-Alkaloid wird von dem in Liposomen verkapselten Vinca-Alka1oid durch Dialyse und/oder Hochgeschwindigkeitszentrifugation abgetrennt.
Wenn gewünscht, kann das in Liposomen verkapselte Vinca-Alkaloid dann lyophilisiert werden, um eine Lagerung zu ermöglichen. Wenn jedoch das in Liposomen verkapselte Vinca-Alkaloid in Lösung stabil ist, kann es in einem Salz lösungs- oder Lactosemedium gelagert werden.
Bei der obigen Herstellung sind die relativen Mengen der Bestandteile, welche verwendet werden um das in Liposomen verkapselte Vinca-Alkaloid herzustellen, wie folgt. Das Vinca-Alkaloid wird in einer Menge von 6,8 Gewichtsteilen bis 9,2 Gewichtsteilen verwendet. Das Cardiolipin wird in einer Menge von 30,6 Gewichtsteilen bis 41,4 Gewichtsteilen verwendet. Das Phosphatidylcholin wir in einer Menge von 102 Gewichtsteilen bis 138 Gewichtsteilen verwendet. Das Cholesterin wird in einer Menge von 34 Gewichtsteilen bis 46 Gewichtsteilen verwendet und das Phosphatidylserin oder Dicetylphosphat wird in einer Menge von 6,8 Gewichtsteilen bis 9,2 Gewichtsteilen verwendet.
Diese in Liposomen verkapselte chemotherapeutischen Zusammensetzungen sind nützlich bei der Behandlung von Non- Hodgkin- und Hodgkin-Lymphomen, akuter Lymphoblastenleukämie, Wilm's Tumor, Rhabdomyosarkom und Neuroblastom. Bei der Behandlung dieser Tumoren wird das in Liposomen verkapselte chemotherapeutische Mittel, welches in einem geeigneten pharmazeutischen Träger oder Arzneimittelträger gelöst wurde, entweder als ein Bolus oder kontinuierlich über eine Dauer von 5 Minuten bis 30 Minuten intravenös verabreicht. Bei kontinuierlicher Verabreichung kann das in Liposomen verkapselte therapeutische Mittel, welches in einem geeigneten pharmazeutischen Träger oder Arzneimittelträger suspendiert ist, durch eine osmotische Pumpe abgegeben werden.
Träger, welche in der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, umfassen geeignete pharmazeutisch annehmbare Träger, umfassend Arzneimittelträger und Hilfsstoffe, welche das Verarbeiten der aktiven Verbindungen zu Präparationen, die pharmazeutisch benutzt werden können, erleichtern. Geeignete Formulierungen für eine intravenöse Verabreichung der aktiven Verbindung können Suspensionen der aktiven Bestandteile umfassen.
Lösungen für intravenöse Verabreichungen enthalten von ca. 0,1 bis ca. 99,5 Gew% und vorzugsweise von ca. 25 bis 85 Gew% des aktiven Bestandteils, zusammen mit dem Arzneimittelträger.
Die Dosis und der Weg der Verabreichung und die verwendeten Träger und/oder Adjuvantien können je nach behandeltem Tumortyp und im Hinblick auf die bekannten Verfahren zur Behandlung solcher Tumoren variieren. Typischerweise beträgt die Dosis der Verabreichung in Menschen von 1,2 bis 1,6 mg Vinca-Alkaloid pro m².
Eine vollständigere Würdigung dieser Erfindung und viele ihrer begleitenden Vorteile werden leicht erhalten werden, wenn dieselbe durch Bezug auf die folgende detaillierte Beschreibung, wenn im Zusammenhang mit den begleitenden Figuren betrachtet, besser verstanden wird.
Figur 1 stellt die Plasma-Pharmakokinetik von freiem und liposomalem Vincristin dar.
Figur 2 stellt die Plasma-Pharmakokinetik von liposomalem Vincristin bei einer Dosis von 5 mg kg&supmin;¹ i.v. dar.
Figur 3 stellt die Cytotoxizität von freiem und liposomalem Vincristin bei L1210-Leukämie nach 72 Stunden Wirkstoffeinwirkung dar.
Figur 4 stellt die Toxizität von freiem Vincristin in Mäusen dar.
Figur 5 stellt die Toxizität von liposomalem Vincristin in Mäusen dar.
Andere Merkmale dieser Erfindung werden im Laufe der folgenden Beschreibungen von exemplarischen Ausführungsformen klar werden, welche zur Veranschaulichung der Erfindung gegeben werden und nicht zu ihrer Beschränkung dienen sollen.

Liposomale Verkapselung:

Um Vincristin in Liposomen zu verkapseln wurden verschiedene Lipidbestandteile untersucht und die prozentuale Wirksamkeit des in Liposomen eingeschlossenen Wirkstoffs wurde bestimmt. Die beste Kombination von Lipiden, welche in unseren Laboratorien entwickelt wurde, ist wie folgt:
Vincristinsulfat, 8 mg, wurde in Methanol gelöst und leicht gerührt, um eine klare Lösung zu erhalten, und wurde mit 36 mg Cardiolipin in Ethanol komplexiert. Die Mischung wurde leicht gerührt und unter N&sub2; zur Trockenheit verdampft. Zu dieser getrockneten Mischung wurden dann 120 mg Phosphatidylcholin, 40 mg Cholesterin und 8 mg Phosphatidylserin zugegeben. Die Mischung wurde leicht gerührt, um eine homogene Lösung zu erhalten, und unter N&sub2; zur Trockenheit verdampft. Die getrockneten Lipide wurden in 0,9% NaCl-Lösung resuspendiert, für eine halbe Stunde im Dunklen hydratisiert und dann bei 37ºC für 30 Minuten in einem Cuphorn-Beschaller beschallt. Das nicht-eingeschlossene Vincristin wurde von dem liposomal verkapselten Wirkstoff durch ausgedehnte Dialyse bei 4ºC für 24 Stunden gegen 0,9% NaCl mit mindestens 3 Wechseln der Salzlösung abgetrennt. Der Prozentsatz des Einschlusses von Vincristin in Liposomen wurde nach Abschluß der Dialyse spektralphotometrisch bestimmt und es wurde gefunden, daß dieser 70% (N=7) der gesamten Ausgangsdosis betrug.

Pharmakologische Verteilungsstudien

CD&sub2;F&sub1;-Mäusen wurde Vincristin als ein freier Wirkstoff mit einer Dosis von 1 mg kg&supmin;¹ und liposomal eingeschlossen nes Vincristin mit einer Dosis von 1 mg kg&supmin;¹ und 5 mg kg&supmin;¹ über eine seitliche Schwanzvene verabreicht. In regelmäßigen Zeitabständen wurden vier Mäuse aus jeder Behandlungsgruppe geopfert und bestimmte Gewebe wurden isoliert und durch Radioimmunassays, wie in unseren Laboratorien üblich, auf Wirkstoffwerte hin getestet. Die Plasma-Pharmakokinetik von freiem Vincristin und liposomalem Vincristin ist in den Figuren 1 und 2 dargestellt.
Mit einer Dosis von 1 mg kg&supmin;¹ an freiem Vincristin beträgt der Plasma-Höchstwert nach 5 Minuten 0,62 µg ml&supmin;¹, während das liposomale Vincristin bei Dosen von 1 mg kg&supmin;¹ und 5 mg kg&supmin;¹ zu einem Plasma-Höchstwert von 1,5 µg ml&supmin;¹ bzw. 4,0 µg ml&supmin;¹ nach 5 Minuten führt. Von 5 Minuten bis zu 2 Stunden sind die Plasmawerte mit liposomalem Vincristin wenigstens vierfach höher als bei freiem Vincristin in entsprechenden Dosen. Die Dosis von 5 mg kg&supmin;¹ an liposomalem Vincristin liefert einen viel höheren Plasmawert von 5 Minuten bis 24 Stunden, verglichen mit einer Dosis von 1 mg kg&supmin;¹ von entweder freiem Vincristin oder liposomalem Vincristin.
Die Verabreichung von freiem Vincristin führt zu einer viel schnelleren Clearance des Wirkstoffs aus dem Plasma mit einem großen apparenten Verteilungsvolumen. Jedoch ist bei einer liposomalen Verabreichung von Vincristin die Clearance des Wirkstoffs aus dem Plasma beträchtlich verzögert.
Tabelle 1 zeigt die Messungen von Wirkstoffkonzentrationen in ausgewählten Geweben, welche auf die Verabreichung von freiem und in Liposomen eingeschlossenem Vincristin folgen.
Die Wirkstoffwerte in der Leber nach 2 Stunden betrugen 50 ng gm&supmin;¹ Gewebe mit freiem Vincristin und betrugen 125 und 260 ng gm&supmin;¹ Gewebe bei einer Dosis von 1 bzw. 5 mg kg&supmin;¹ an liposomalem Vincristin. Jedoch waren die Wirkstoffwerte in der Leber nach 8 Stunden mit freiem Vincristin nicht nachweisbar, während sie bei Dosen von 1 bzw. 5 mg kg&supmin;¹ von liposomalem Vincristin 75 und 160 ng gm&supmin;¹ Gewebe betrugen. Zusätzlich sind die Wirkstoffwerte in der Milz zu allen Zeitperioden der Beobachtung mit liposomalem Vincristin, verglichen mit freiem Vincristin, 2- bis 3-fach höher. Im Gegensatz dazu waren die auf die Verabreichung folgenden Wirkstoffwerte im Gehirn von freiem Vincristin, sowohl bei 1 mg kg&supmin;¹ als auch 5 mg kg&supmin;¹ Dosis, höher als von liposomalem Vincristin. Die auf die Verabreichung einer 1 mg kg&supmin;¹ Dosis von entweder freiem oder liposomalem Vincristin folgenden Werte in der Lunge waren bei verschiedenen Beobachtungsperioden vergleichbar (Tabelle 1).

In Vitro Cytotoxizitätsbewertung gegenüber L1210-Leukämiezellen

L1210-Leukämiezellen wurden in einer Suspension in Luft mit 5% CO&sub2; in RPMI-Medium 1640, ergänzt mit 10% fötalem Kälberserum und Gentamicin (50 µg/ml), kultiviert. Zellen der log-Phase (10 ml) beim Animpfen von 1 x 10- Zellen/ml Medium in 25 cm² Plastikkolben wurden 24 Stunden lang bei 37ºC mit verschiedenen Dosen von entweder freiem Vincristin oder liposomal eingeschlossenem Vincristin behandelt. Nach der Wirkstoffbehandlung wurden die Zellen in Falcon-Röhrchen überführt und 10 Minuten lang bei 600 rpm zentrifugiert. Das Medium im Überstand wurde verworfen und das Zellpellet wurde 3 mal mit RPMI-Medium 1640 gewaschen. Das letzte Zellpellet wurde in 10 ml RPMI-Medium resuspendiert und wurde in 25 cm² Plastikkolben überführt und bei 37ºC in Luft mit 5% CO&sub2; zur Kultivierung inkubiert. Nach 48 und 72 Stunden wurde ein Aliquot Zellen aus jedem Kolben genommen und wurde unter einem Mikroskop durch Trypanblau-Ausschluß auf die Lebensfähigkeit hin ausgezählt. Die Anzahl von Zellen, die in jedem Kolben wuchsen, wurden mit Bezug auf eine Kontrolle bestimmt. Figur 3 stellt das prozentuale Überleben von Zellen dar, wenn diese mit freiem Vincristin oder in Liposomen eingeschlossenem Vincristin behandelt wurden. Wie es scheint, beträgt die IC&sub5;&sub0; (Konzentration bei der die Zellsterblichkeit 50% beträgt) für L1210-Leukämiezellen aus Mäusen mit freiem Vincristin 0,004 µg/ml, während die IC&sub5;&sub0; für liposomales Vincristin 0,003 µg/ml beträgt. Dieses Experiment zeigt, daß in Liposomen verkapseltes Vincristin in vitro eine gleichwertige Cytotoxizität gegenüber Leukämiezellen besitzt.

Antitumor-Studien mit L1210-Mausleukämie in Mäusen

Die L1210-Leukämie wurde durch Serienpassagieren i.p. in weiblichen DBA/2F&sub1; Mäusen aufrecht erhalten. Für Antitumor-Studien wurden 2 x 10- L1210-Leukämiezellen i.p. in männliche CD&sub2;F&sub1; Mäuse (22 - 25 g) implantiert. Vierundzwanzig Stunden nach der Tumorimplantation, wurde den Mäusen intravenös eine Einzeldosis von 2 mg/kg und 3 mg/kg an freiem Vincristin und 2, 3, 5,0 und 7,5 mg/kg Einzeldosen von liposomalem Vincristin injiziert. Jede mit Wirkstoff behandelte Gruppe und mit Salzlösung behandelte leukämische Kontrollgruppe war aus acht Mäusen zusammengesetzt. Bei jedem Tier wurde der Todestag beobachtet. Die Daten sind ausgedrückt als % ILS (Prozentsatz der Zunahme der Lebenszeit). Lebenszeit-Mediane wurden aus gruppierten Überlebenszeit-Medianen berechnet und % der Zunahme des Lebens wurde berechnet als:
100 × Median der Überiebenszeit von behandelten Mäusen/Median der Überiebenszeit von Kontrollmäusen - 100
Die Experimente wurden am 50. Tag beendet. Mäuse, welche an diesem Tag lebendig waren, wurden als "Heilungen" bezeichnet und wurden in die Berechnung des Überlebenszeit-Medians von behandelten Mäusen einbezogen. Die Ergebnisse wurden in Tabelle 2 dargestellt. Die mit Salzlösung behandelten oder mit leeren Liposomen behandelten Kontrollen wiesen den Überlebens-Median von 11 Tagen auf. Freies Vincristin bei einer Dosis von 2 mg kg&supmin;¹ sorgte für einen Überlebens- Median von 14,5 Tagen bei einer % ILS von 32 mit 2/8 Langzeit-Überlebenden. Die Dosis von 3 mg kg&supmin;¹ an freiem Vincristin erzeugte einen Überlebens-Median dieser tumortragenden Mäuse von 7,5 Tagen bei einer ILS von -32%, was zeigt, daß die tumortragenden Mäuse eher an der Toxizität des Wirkstoffs als an dem Tumor starben. Alle Tiere in dieser Gruppe waren bis zu dem 10. Tag tot. Im Gegensatz dazu sorgten die Dosen von in Liposomen eingeschlossenem Vincristin für eine viel höhere therapeutische Wirkung in Mäusen, welche L1210-Leukämie hatten. Beispielsweise erzeugte die Dosis von 2 mg kg&supmin;¹ an iiposomalem Vincristin eine ILS von > 354% mit 4/8 Mäusen, die am 50. Tag überlebten. Zusätzlich erzeugten höhere Dosen von in Liposomen verabreichtem Vincristin eine deutliche therapeutische Wirkung bei der Mehrheit von Leukämie tragenden Mäusen, die bis zum 50. Tag überlebten. Die Dosis von 3,0, 5,0 und 7,5 mg kg&supmin;¹ an liposomalem Vincristin erzeugte > 354% ILS mit 6/8, 7/8 bzw. 4/8 Langzeit-Überlebenden (Tabelle 2).

Toxizitätsbewertung von freiem Vincristin und liposomalem Vincristin in normalen Mäusen

Die Studien, welche an Mäusen ausgeführt wurden, die L1210-Leukämie trugen, zeigten, daß die Widerstandsfähigkeit für liposomales Vincristin, bei einer gleichzeitigen Zunahme der therapeutischen Wirksamkeit, erhöht ist. Daher wurde die letale Toxizität von freiem Vincristin und in Liposomen eingeschlossenem Vincristin in Mäusen als eine Funktion der Dosis des Wirkstoffs ausgewertet. Normalen CD&sub2;F&sub1;-Mäusen wurden einzelne Injektionen i.v. von freiem Vincristin mit Dosen von 2 mg kg&supmin;¹ und 3 mg kg&supmin;¹ verabreicht, und liposomales Vincristin wurde als einzelne Dosen mit 1,5, 2,0, 5,0 und 7,5 mg kg&supmin;¹ i.v. verabreicht. Die Mäuse wurden täglich auf ihren Tod hin beobachtet und zweimal die Woche gewogen, um Änderungen des Körpergewichtes aufgrund von Toxizität aufzuzeichnen. Wie in den Figuren 4 und 5 gezeigt, überlebten Mäuse, denen freies Vincristin mit einer Dosis von 2 mg kg&supmin;¹ injiziert wurde, bis zum 60. Tag, dem Tag an dem das Experiment beendet wurde. Jedoch zeigten Mäuse, welche Dosen von 3 mg kg&supmin;¹ an freiem Vincristin erhielten, eine deutliche Sterblichkeit und 90% der Mäuse waren bis zum 8. Tag tot. Im Gegensatz dazu zeigten sich bei Mäusen, die Dosen von 1,5, 2,0 und 5,0 mg kg&supmin;¹ an liposomalem Vincristin erhielten, keine Letalfälle und 100% überlebten den 60. Tag. Mit liposomalem Vincristin bei einer Dosis von 7,5 mg kg&supmin;¹, starb nur ein Tier am 7. Tag und der Rest der Tiere in der Gruppe überlebte bis zum 60. Tag. Dieses Experiment zeigt, daß Mäusen höhere Dosen von Vincristin in Liposomen ohne eine Toxizität verabreicht werden können. TABELLE 1 VINCRISTINWERTE LUNGE ng/gm Gewebe Wirkstoff Minuten NIERE ng/gm Gewebe TABELLE 1 (Forts.) LEBER ng/gm Gewebe Wirkstoff Minuten frei MILZ ng/gm Gewebe GEHIRN ng/gm Gewebe TABELLE 1 (Forts.) PLASMAWERTE µg/ml Wirkstoff Minuten frei TABELLE 2 Antitumorbewertung von freiem Vincristin und 10 liposomalem Vincristin gegenüber L12l0-Leukämie in Mäusen Wirkstoff Dosis (mg/kg) Überlebens-Median (Tage) %ILS Langzeit-Überlebende (50 Tage) Salzlösung Freie Liposomen (Leere Liposomen) Freies Vincristin liposomales CD&sub2;F&sub1;-Mäusen wurden intraperitoneal 2 x 10&sup5; Leukämiezellen implantiert und eine Wirkstoffbehandlung wurde am Tag 1 mit verschiedenen Dosen an freiem und liposomalem Vincristin intravenös durchgeführt.

Claims

1. Eine pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine in Liposomen verkapselte wirksame Menge eines Vinca-Alkaloids, wobei das Vinca-Alkaloid wenigstens ein Element, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Vincristin, Vinblastin und Vindesin ist,

dadurch gekennzeichnet, daß

das Vinca-Alkaloid mit Cardiolipin komplexiert ist.

2. Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das Vinca-Alkaloid Vincristin ist.

3. Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das Vinca-Alkaloid Vinblastin ist.

4. Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, worin das Vinca-Alkaloid Vindesin ist.

5. Die Zusammensetzung nach Anspruch 1, welche von 6,8 bis 9,2 Gewichtsteile des Vinca-Alkaloids, von 30,6 bis 41,4 Gewichtsteile Cardiolipin, von 102 bis 138 Gewichtsteile Phosphatidylcholin, von 34 bis 46 Gewichtsteile Cholesterin und von 8,8 bis 9,2 Gewichtsteile Phosphatidylcholin oder Dicetylphosphat umfaßt.

6. Eine Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Behandlung eines Tumors, der durch ein Non-Hodgkin-Lymphom, ein Hodgkin-Lymphom, eine akute Lymphoblastenleukämie, einen Wilm's Tumor, ein Rhabdomyosarkom und ein Neuroblastom verursacht wurde.