DE3529397A1

DE3529397A1 - Fungizide zusammensetzung mit verlaengerter wirkungsdauer

Info

Publication number: DE3529397A1
Application number: DE19853529397
Authority: DE
Inventors: Ivan Michael Weswall Wirral Jackson; Frank Noctorum Birkenhead Ridgway; Michael Dudley Bromborough Merseyside Ward
Original assignee: ER Squibb and Sons LLC
Current assignee: ER Squibb and Sons LLC
Priority date: 1984-08-17
Filing date: 1985-08-16
Publication date: 1986-02-27
Also published as: NZ212984A; IT1214628B; JPS6157513A; BE903086A; SE8503851L; FR2569107B1; ZA855907B; JPH0759498B2; CA1255225A; IE851969L; AU581915B2; IE58484B1; SE8503851D0; CH666182A5; GB2163649A; NL8502254A; US4542020A; GB8520287D0; IT8521940A0; FR2569107A1

Description

■5 Die Erfindung betrifft gegen Pilze wirksame. Vaginalzäpfchen, die vorzugsweise Nystatin als den fungiziden Wirkstoff enthalten und die weiterhin ein wasserlösliches Polymer zum Anhaften und Verbleiben des fungiziden Wirkstoffes am Sitz der Infektion enthalten.

Es ist sowohl für den Patienten als auch für einen Kliniker vorteilhaft, wenn Arzneimittel so zusammengesetzt sind, daß der darin enthaltene aktive Wirkstoff über einen längeren Zeitraum freigesetzt wird. Dadurch ist es möglich, die einzelnen Dosierungen weniger häufig zu verabreichen. Die Literatur enthält eine Fülle verschiedener Dosierungsformen, aus denen der Wirkstoff über einen längeren Zeitraum hinweg freigesetzt werden kann, z.B. oral - einzunehmende Tabletten, Torrichtungen, die den osmotischen Druck ausnützen, und Vorrichtungen mit semipermeablen Membranen. In den letzten Jahren wurden Polymere, beispielsweise hydrophile Polymere wie Hydroxypropylmethylcellulose und andere Celluloseäther, entwikkelt, die in Zusammensetzungen mit verzögerter Wirkungsabgabe enthalten sind. Beispiele dafür sind die US-PS 4- 389 393, 4 357 469, 3 870 790, 4 369 172 und 4 226 849.

Die US-PS 3 312 594 beschreibt eine länger wirksame Pastille, die einen Arzneistoff und gleiche Anteile von Pectin, Gelatine und Carboxymethylcellulose enthält. Die . Pastille schmilzt durch den Speichel im Mund und es entsteht eine anhaftene Masse, die den Arzneistoff an der Mundschleimhaut verbleiben läßt.

Die US-PS 3 984 571 beschreibt einen flüssigen Träger für einen diagnostischen oder therapeutischen Wirkstoff. Dieser flüssige Träger enthält ein Hydrokolloid mit einer geringen Partikelgröße, beispielsweise einen Celluloseäther,

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der in einer nichtwäßrigen, mit Wasser nicht mischbaren, leicht beweglichen Flüssigkeit suspendiert ist. Wenn eine Zusammensetzung, die den diagnostischen oder therapeutischen Wirkstoff im flüssigen Träger enthält, mit einer feuchten Oberfläche in Kontakt gebracht wird, wird die leicht bewegliche Flüssigkeit abgeleitet und das Hydrokolloid selbst, das den diagnostischen oder therapeutischen Wirkstoff trägt, haftet an der Oberfläche.
Zur intravaginalen Behandlung wurden verschiedene Arten von

TO Tabletten, Kapseln, Schaum, Pessaren, Salben oder Cremes eingesetzt. Sie enthalten verschiedene übliche Arzneistoffe in üblichen Verabreichungsformen und werden für Kurz- oder Langzeit-Therapien eingesetzt. Obwohl diese verschiedenen Formen teilweise mit Erfolg eingesetzt wurden, haben sie alle einen oder mehrere Nachteile, beispielsweise^ daß der Arzneistoff während des Gebrauchs ausgetrieben wird, daß man Schwierigkeiten bei der Anwendung hat und/oder unangenehme körperliehe Nebenwirkungen, wie Irritationen, bei den Patienten beobachtet. Es wurden nur wenige Versuche unternommen, diese Nachteile zu überwinden, da eine therapeutische Behandlung durch Einführung in die Scheide nur eine relativ geringe kommerzielle Bedeutung hat.

Daher wäre eine wirkungsvolle, fungizide Zäpfchen-Zusammensetzung, die die Nachteile bei der bisher üblichen

xntravaginalen Behandlung überwindet, von großer Bedeutung.

In der vorliegenden Erfindung wird eine verlängert wirksame, gegen Pilze wirkende Zäpfchen-Zusammensetzung bereitgestellt, die eine verbesserte Wirksamkeit gegen Scheiden-

Infektionen aufweist und eine geringere Dosierung erfordert. Die fungizide erfindungsgemäße Zäpfchen-Zusammensetzung besteht aus einem fungiziden Wirkstoff, beispielsweise Nystatin, einem wasserlöslichen Polymeren oder Hydrokolloid, das Wasser aufnimmt und festhaf-

tet und so die Verweilzeit des fungiziden Wirkstoffs am Scheidenepithel verlängert, und einem niedrigschmelzenden Zäpfchen-Grundstoff, der bei der Körpertemperatur

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schmilzt und dadurch das Hydrokolloid und den fungiziden Wirkstoff über die infizierten Bereiche verteilt.

Die fungizide Zäpfchen-Zusammensetzung der Erfindung ist also leicht anwendbar. Sie schmilzt bei der Körpertemperatur gleich nach der Einführung in die Scheide und setzt ein wasserlösliches Polymeres oder Hydrokolloid frei, das ander Scheidenmembran haftet und zu einer gleichmaßigen Verteilung des fungiziden Wirkstoffes am Sitz der Infektion führt. Damit ist eine langer andauernde Behandlung von Scheideninfektionen möglich. Da das erfindungsgemäße Zäpfchen natürlich ein festes, nicht reaktives, hydrophobes Mittel ist und seine Bestandteile in der festen Form vorliegen und sich nicht in Wasser lösen, muß darüber hinaus Wasser, außer für die Hydratisierung, nicht verfügbar sein.

Die fungizide erfindungsgemäße Zäpfchen-Zusammensetzung enthält einen gegen Pilze wirksamen Wirkstoff, beispielsweise Nystatin wobei/je nachdem welcher fungizide Wirkstoff verwendet wird, 'eine. Menge von etwa 0,1 bis etwa 6 Gewichtsprozent eingesetzt wird, ein Hydrokolloid, das der Zusammensetzung Hafteigenschaften verleiht, in einer Menge von etwa 0,5 bis etwa 10 Gewichtsprozent, vorzugsweise etwa 1 bis 5 Gewichtsprozent, und einainiedrigschmelzendenZapfchen-Grundstoff in einer Menge von etwa 84 bis etwa 99 Gewichtsprozent, vorzugsweise von etwa 90 bis etwa 98 Gewichtsprozent. Alle vorstehenden Prozentangaben beziehen sich auf das Gesamtgewicht des Zäpfchens oder Pessars.

Zusätzlich wird durch die vorliegende Erfindung die Behandlung von PilzInfektionen in der Scheide ermöglicht. Die therapeutische Anwendung besteht in der Einführung einer therapuetisch wirksamen Menge der fungiziden erfindungsgemäßen Zäpfchen-Zusammensetzung in die Scheidenöffnung von Säugern, die einer solchen Behandlung bedürfen, z.B. von Menschen, Katzen, Hunden und dergl.

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Die Zusammensetzung kann dann langsam in der Scheidenöffnung schmelzen und an der Scheidenmembran anhaften.

Die Zäpfchen-Zusammensetzung der Erfindung enthält einen oder mehrere fungizide Wirkstoffe, vorzugsweise Nystatin, in einer Menge, die ausreicht, um über einen genügend langen Zeitraum eine Konzentration aufrecht zu erhalten, die z.B. C. albicans wirksam abtöten kann. Die Zäpfchen-Zusammensetzung enthält daher etwa 0,1 bis etwa 6 Gewichtsprozent des

fungiziden Wirkstoffs, beispielsweise Nystatin,

vorzugsweise etwa 1 bis etwa 4- Gewichtsprozent, bezogen auf die gesamte Zusammensetzung. In bevorzugten Ausführungsformen enthält die Zusammensetzung etwa 25.000 bis etwa 500.000, vorzugsweise etwa 75·000 bis etwa 250.000 Einheiten Nystatin oder etwa 5 mg bis etwa 100 mg, vorzugsweise etwa 15 mg bis etwa 50 mg Nystatin pro Zäpfchen. Diese Angaben beziehen sich auf Nystatin mit einer Aktivität von 5000 Einheiten/mg. Das Mittel kann bis zu zweimal pro Tag oder nach einem geeigneten Dosierungsschema z.B. einem Zäpfchen ein- oder zweimal pro Tag, vorzugsweise ein Zäpfchen einmal pro Tag, verabreicht werden.

Andere fungizide Wirkstoffe, die in den erfindungsgemäßen Zäpfchen enthalten sein können sind z.B. Amphotericin B, Griseofulvin, Miconazol, Ketoconazol, Econazol und andere übliche lokal einsetzbare /. fungizide . Imidazol-Wirkstoffe, die in einer Zäpfchen-Dosierungsform verabreicht werden können.

Zusätzlich können die erfindungsgemäßen Zäpfchen neben dem fungiziden Wirkstoff einen oder mehrere antibakterielle Wirkstoffe enthalten, die zur Behandlung von bakteriellen Infektionen in der Scheidenöffnung eingesetzt werden können. Beispiele sind Neomycin, Gentamycin, Tyrothriein, Gramicidin und andere übliche lokal einsetzbare_/antibakterielle Wirkstoffe, die in einer Zäpfchen-Dosierungsform

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verabreicht werden können. Der antibakterielle Wirkstoff kann in einer Menge von etwa 0,05 bis etwa 5 Gewichtsprozent, bezogen auf die gesamte Zäpfchen-Zusammensetzung, eingesetzt werden. Als weitere mögliche Wirkstoffe können beispielsweise Antiphlogistika und Analgetica in Frage.

Die Hydrokolloide,, die in der Zäpfchen-Zusammensetzung der Erfindung enthalten sind, sind wasserlösliche oder in Wasser quellbare Polymere, z.B. Cellulose-Polymere und~Gummen. Als Hydrokolloid werden vorzugsweise Cellulose-Polymere wie Celluloseäther, z.B. Methylcellulose, Cellulosealkylhydroxylate, z.B. Hydroxymethylpropylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Hydroxymethylcellulose oder Hydroxyäthylcellulose, Cellulosealkylcarboxylate, z.B. Carboxymethylcellulose und Carboxyäthylcellulo.se, und Alkalimetallsalze von Cellulosealkylcarboxylaten, z.B. Natriumcarboxymethylcellulose und Natriumcarboxyäthylcellulose, eingesetzt. Bevorzugt sind Natriumcarboxymethylcellulose und Hydroxypropylmethyleellulose. In der vorliegenden Erfindung kann jedoch auch irgendein anderes Hydrokolloid eingesetzt werden, beispielsweise Gummi Arabicum, Guargummi, Traganthgummi, Xanthangummi, Pectin, Ammonium- öder Natriumalginat oder deren Gemische.

Der niedrigschmelzende Zäpfchen-Grundstoff, der zur Verwendung in der erfindungsgemäßen Zäpfchen-Zusammensetzung geeignet ist, hat einen Schmelzpunkt von weniger als 90 bis 95°ϊ" (32 bis 35°C), so daß er nach der Einführung in die Scheide schmilzt. Der Zäpfchen-Grundstoff hat eine übliche Zusammensetzung und kann folgende Bestandteile umfassen: Kakaobutter, glycerinierte Gelatine, hydrierte Pflanzenöle, Gemische von

Polyäthyienglykolen verschiedenen Molekulargewichts, IPett-30

säureester von Polyäthylenglykol, Gemische von Mono-, Di- und !Priglyceriden, die Glycerine st er von Gemischen von Pflanzen G^2-C^g-Fettsäuren ( vor allem Laurylsäure) sind, die aus Palmsamenöl, beispielsweise Kokosnußöl und Palmkernöl, stammen.
35

Obgleich die Zäpfchen-Zusammensetzungen der Erfindung vorstehend exemplarisch für Vaginal-Zäpfchen erläutert wurden, lassen sich die geschilderten Vorteile auch bei der Anwendung an den ebenso mit Schleimhaut aus-

^L .■■'... J

gekleideten Körperhohlorganen Mastdarm und Urethra bei Mensch und Tier erzielen. Der Ausdruck Zäpfchen bedeutet auch Suppositorien und umfaßt auch Globuli und/oder Pessare. Ihre Form ist im allgemeinen konisch, torpe-

doförmig, ovalrund ,oder oval.

Bevorzugte Zäpfchen-Zusammensetzungen der Erfindung sind nachstehend beschrieben.

Bestandteil mg/Zäpfchen

Nystatin (feingepulvert)

(Aktivität 5000 Einheiten/mg) 5 - 50 mg

Eydrokolloid (Ilatriumcarboxymethylcellulose oder Hydroxypropylmethylcellulose) 10 - 50 mg

NiedrigschmeIzender Zäpfchen-Grundstoff 985 - 900 mg.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Zäpfchen-Zusammensetzung kann unter Verwendung üblicher Verfahren für die Pessar- und Zapf chen-Formulierung und-Verarbeitung erfolgen. In einem bevorzugten Verfahren wird der Zäpfchen-Grundstoff bis zum Schmelzen erwärmt und auf einer Temperatur gehalten, die nicht über 45 C liegt, bis der Grundstoff vollständig geschmolzen ist. Die Temperatur der Masse wird auf 40⁰G reduziert. Mit einem geeigneten Rührer wird das Gemisch gerührt und dabei das Hydrokolloid zugesetzt. Es wird weitergerührt, bis sich eine relativ einheitliche Suspension gebildet hat.

Dann wird unter Rühren der fungizide Wirkstoff

zugesetzt und weitergerührt, bis sich eine relativ einheitliche Suspension gebildet hat. Danach wird der Rührer entfernt und die Masse wird in geeignete formlinge gegossen.

flach dem Abkühlen werden Zäpfchen erhalten. Im Verlaufe des 30

vorstehend beschriebenen Verfahrens wird die Temperatur der

Masse bei einem Wert von über 36-37°C gehalten.

Die Ausführungsbeispiele sind bevorzugte Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung. Wenn nicht anders angezeigt, sind ο

alle Temperaturwerte in C angegeben.

BAD ORIGINAL

Beispieli

Sine fungizide Zäpfchen-Zusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung wird wie nachstehend beschrieben hergestellt. Sie ist folgendermaßen zusammengesetzt:

Bestandteil Menge

Nystatin (100 Einheiten des Irzneistoffs pro

mg Produkt, bezogen auf eine Nystatin-Aktivität

1
von 5000 Einheiten mg" ) 2

Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) 2 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff"*"

(Witepso]®, W35**- (31,2%)) 96

(Witepsoi^ H15 - (68,8%))

++ Witepsol^ , hergestellt von Dynamit Nobel AG, Troisdorf 15

⁺ Der Witepsol-Zäpfchen-Grundstoff ist ein Gemisch aus Mono-, Di- und Triglyceriden. Diese sind Glycerinester aus Gemischen von Pflanzenfettsäuren, die von Palmsamenölen, beispielsweise Kokosnußöl und Palmkernöl, stammen. Es handelt sich um C^,2-Cx]Q Säuren, wobei Laurylsäure vorherrscht. Witepsol W35 hat einen Schmelzpunkt im Bereich von 33,5 bis 35,5°C, einen Erstarrungspunkt im Bereich von 27 bis 32⁰C und einen Hydroxylwert von 40 bis 50. Witepsol H15 hat einen Schmelzpunkt im Bereich von 33,5 "bis 35,5°C, einen Erstarrungspunkt im Bereich von 32,5 bis 34,5°C

und einen Hydroxylwert von 15·

Die Prozentangabe des Witepsol-Anteils ist bezogen auf die

Gesamtmenge des Zäpfchen-Grundstoffs.

Ein Gemisch von etwa 30 g Witepsol W35 und etwa 66 g Witepsol HI5 wird bis zum Schmelzen erwärmt (etwa 35°C) und bei

30 η

etwa 4-5 C gehalten, bis die anderen Bestandteile zugegeben werden. Die Temperatur der Masse wird unter Rühren und Luftkühlung auf 40⁰C vermindert und die erhaltene Flüssigkeit unter Rühren mit 2 g Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) versetzt. Es wird 10 Minuten weitergerührt, bis sich 35

eine relativ einheitliche Suspension gebildet hat. Die Suspension wird unter Rühren mit 2 g Nystatin versetzt und es wird 10 Minuten weitergerührt, bis man eine relativ einheit-

■ ' ■ . - J

liehe Suspension erhält. Im Verlauf des vorstehend beschrie-¹ benen Verfahrens wird die Temperatur der verschiedenen Gemische durch die beim Rühren entstehende thermische Energie auf einem Wert über etwa 36-37°C gehalten. Das Rühren wird dann abgebrochen und die erhaltene flüssige ⁵ Suspension in geeignete !Formlinge gegossen. Es werden erfindungsgemäße Zäpfchen von 0,03 g für die nachstehend beschrie benen Tierversuche und Zäpfchen von 1 g für den menschlichen Gebrauch erhalten.

Beispiel2

Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren hergestellt.

¹⁵ Bestandteil Menge {% w/w)

Nystatin (100 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine Nystatin-Aktivität von 5000 Einheiten mg"""¹) 2

Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) 5 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 93 (Witepsol W35 (31,2$))
(Witepsol H15 (68,80))

Beispiel 3

25 Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben, hergestellt.

Bestandteil Menge {% w/w)

Nystatin (100 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine Nystatin-Aktivität von 5000 Einheiten mg" ) 2

Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) 10 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 88 (Witepsol W35 (31,2$))
(Witepsol H15-(68,8$))

Bei spiel Ί-

Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.

'

Bestandteil Menge (% w/w)

Nystatin (100 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine Nystatin-

—1 Aktivität von 5000 Einheiten mg ) 2

Hydrokolloid (Methylcellulose) 2

Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 96 (Witepsöl W35 (31,2%))
(Witepsol H15 (68,8%))

B e i s ρ i e 1 5

Bestandteil Menge (% w/w)

Nystatin (100 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine Nystatin-Aktivität von 5000 Einheiten mg ) 2

Hydrokolloid (Methylcellulose) 5

Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 93 Witepsol W35 (31,2%)
Witepsol H15 (68,8%)

Be.i spiel.6'

Bestandteil Menge (% w/w)

Aktivität von 5000 Einheiten mg ) 2

Hydrokolloid (Methylcellulose) · 10

Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 88 (Witepsol W35 (31,2%))
(Witepsol H15 (68,8%))

Beispiel 7

Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammen setzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.

Bestandteil Menge (% w/w)

Hydrokolloid (Hydroxypropylmethylcellulose) 2 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 96 (Witepsol W35 (31,2%))
(Witepsol H15 (68,8%))

Beispiel 8

Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 heschrieben hergestellt.

Bestandteil Menge (% w/w)

Hydrokolloid (Hydroxypropylmethylcellulose) 5 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 93 Witepsol W35 (31,2%))
Witepsol H15 (68,8%))

ff <9»ft <* *

Beispiel 9

Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammen setzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.
5

Bestandteil Menge (% w/w)

Nystatin (100 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine NystatinAktivität von 5000 Einheiten mg ) 2 Hydrokolloid (Hydroxypropylmethylcellulose) 10 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 88 (Witepsol W-35
(Witepsol H15

B e i s ρ i e 1 10

20 Bestandteil Menge (# w/w)

Nystatin (50 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine Nystatin-Aktivität von 5000 Einheiten mg""¹) 2

Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) 2 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff · 96 (Witepsol ¥35 (31,2$))
(Witepsol H15 (68,8^)

B e i s ρ i e 1 11

³⁰ Nystatin enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt.

L J

Bestandteil Menge ($ w/w)

Nystatin (200 Einheiten des Arzneistoffs pro mg Produkt bezogen auf eine NystatinAktivität von 5000 Einheiten mg""¹) 2

Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) 2 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 96 (Witepsol W35 (31,2$))
(Witepsol H15 (68,8$))

Beispiel 12

Amphotericin B enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt, außer, daß als gegen Pilze· wirksamer Wirkstoff anstelle von Nystatin Amphotericin B verwendet wird.

Bestandteil Menge ($ w/w)

Amphotericin B 1

Hydrokolloid (Natriumcarboxymethylcellulose) 3 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 96 (Witepsol W35 (31,2$))
(Witepsol H15 (68,8$))

Beispiel 13

Econozol enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 heschrieben hergestellt, außer, daß als gegen Pilze wirksamer Wirkstoff anstelle von Nystatin Econozol verwendet wird.

Bestandteil Menge (mg)

Econozolnitrat 150

Hydrokolloid (Hydroxypropylmethylcellulose) 50 Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 800 (Witepsol W35 (31,
(Witepsol H15 (68,

L J

B e i s ρ i e 1 14 Miconozol enthaltende Zäpfchen mit der folgenden Zusammensetzung werden in ähnlicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben hergestellt, außer, daß als fungizider Wirkstoff anstelle von Nystatin Miconozol verwendet wird.

Bestandteil Menge (me;) Miconozol 100

Hydrokolloid (Methylcellulose) 50

Niedrigschmelzender Zäpfchen-Grundstoff 850 (Witepsol W35 (31,2$))
(Witepsol H15 (68,8^))

B e i s ρ i e 1 15 Nystatin enthaltende Mikrozäpfchen mit der in Beispiel 1 beschriebenen Zusammensetzung, wobei aber Nystatin eine Aktivität von 200 Einheiten pro mg Produkt hat, werden auf ihre Wirksamkeit in der Behandlung von Scheidenentzündung (Candida albicans Infektion) bei Ratten geprüft.

Tiere: Erwachsene Mäuse vom CD-1 Stamm (Gewicht von 20 bis 22 g) und Sprague-Dawley-Ratten (Gewicht von 180 bis 200 g) denen ein Eierstock entfernt worden war, stammen von Charles River Breeding Laboratories, Kingston, N.T. Die Tiere werden in Standard-Drahtkäfigen in einer Umgebung mit genau kontrollierter Luftfeuchtigkeit und Temperatur gehalten. Futter und Wasser sind frei zugänglich.

Infektiöse Organismen: Ein in der Klinik gewonnener Stamm von Candida albicans mit der Bezeichnung SC 9177 wird in allen Versuchen verwendet. Der Organismus wird auf Saboraud's Dextrose-Sehr ägagar bei 37°C 24· Stunden gezüchtet. Die Suspensioif^ür die Beimpfung werden durch Abspülen der gewach-" senen Zellen von mehreren Schrägagar-Flaschen mit 0,85 prozentiger Kochsalzlösung gewonnen. Sie enthalten 10⁷ koloniebildender Einheiten pro ml (CFU/ml).

Fungizide Wirkstoffe: Zu den in diesen Versuchen

verwendeten fungiziden Wirkstoffen gehören

Clotrimazol (GTKE-Lotrimin^-Creme, Schering Corp., Kenilworth, N.J.), Ketoconazol (Nizoral^-Tabletten, Janssen Pharmaceutica, New Brunswick, N.J.), Miconazol (Monistat 7^-Creme, Ortho Pharmaceutical Corp., Saritan, N.J.) und Nystatin (Mycostatid Creme, E.R. Squibb & Sons, Princeton, N.J.). Es werden Nystatin-Mikropessare (ein Gemisch aus Witepsol W35 und H15) gemäß Beispiel 1 der Erfindung verwendet.

Infektionsschema: 3 oder 4 !Tage vor der Infektion wird den Tieren 0,5 mg Estradiölvalerat subkutan verabreicht. Der dadurch verursachte chronische Zustand eines Pseudoöstrus macht es möglich, in einfacher Weise einelnfektion zu bewirken. Das geschieht durch intravaginale Einträufelung von etwa 0,05 ml ( etwa 10' CETJ) der Blastosporen-Suspension mit Hilfe einer Pasteur-Pipette.

Behandlung: Drei verschiedene Behandlungsschemata werden verwendet:

1. Eine Behandlung 6 Stunden nach der Infektion,

2. drei Behandlungen, die 6, 24 und 30 Stunden nach der Infektion durchgeführt werden, oder 3· vier Behandlungen, die 24, 30, 48 und 5^ Stunden nach der Infektion durchgeführt werden.

Die Nystatin-Mikrozäpfchen werden mit Hilfe einer kleinen Pinzette eingeführt. Die Anwendung der Creme-Zusammensetzung erfolgt mit einer Spritze mit einer geraden Nadel.

Ketoconazol-Tabletten werden zerdrückt, in Wasser dispergiert und über eine Sonde mit einer Nadel mit einer kugelförmigen Spitze verabreicht. Mindestens 8 Tiere gehören zu einer Dosierungsgruppe pro Versuch.

Kultur: 40 Stunden nach der letzten Behandlung werden die Scheiden mit 1 ml Kochsalzlösung gespült. Aliquots der Lösung werden auf Mycosel-Agar plattiert und 48 Stunden bei 57⁰C inkubiert.

Beweis für die Wirksamkeit: Nach der Bestimmung der Ci¹Us von C. albicans pro Tier nach der Behandlung, wird das geometrische Mittel für jede Behandlungsgruppe berechnet. Tiere , die keine lebensfähigen Candida-Zellen mehr aufweisen (unter

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5 CI¹U pro Scheide), werden als infektionsfrei angesehen. Zur Berechnung des geometrischen Mittels wird anstelle von 0 die Zahl 2,5 verwendet. Die Bewertung der Wirksamkeit beruht auf der Verminderung der Candida-Population relativ zu den unbehandelten oder mit Placebo behandelten Kontrollen und auf der Zahl der infektionsfreien Tiere.

Ergebnisse: Der erste Versuch (Tabelle I) ist eine Voruntersuchung, um die Möglichkeiten neuer Dosierungsformen von Nystatin zur Therapie vaginaler Candidiasis zu erforschen. In Abkehr vom üblichen Behandlungsschema (6, 24 und 30 Stunden nach der Infektion) werden Mäuse nur einmal behandelt, nämlich 6 Stunden nach der Infektion. Die prozentuale Verminderung der Zahlen nach der Behandlung ist mit den 2% Natriumcarboxymethylcellulose enthaltenden Zäpfchen deutlich höher als mit den Zäpfchen, die keiiB Natriumcarboxymethylcellulose enthalten. Beispielsweise ergeben 750 Einheiten von Nystatin in 2prozentige Natriumcarboxymethylcellulose enthaltenden Zäpfchen eine 96prozentige Verminderung der CFUs verglichen mit einer nur 85prozentigen Verminderung bei derselben Konzentration an Nystatin in Zäpfchen, die keim Natriumcarboxymethylcellulose enthalten.

Der nächste Versuch (Tabelle II) zeigt, daß Nystatin-Zäpfchen mit 2% Natriumcarboxymethylcellulose erheblich wirksamer sind als Nystatin, wenn es in einer Creme enthalten ist: 8 von 10 Tieren werden infektionsfrei, wenn sie mit Zäpfchen behandelt werden, die 3000 Einheiten Nystatin enthalten, gegenüber 3 von 10 Mausen, die infektionsfrei werden, wenn sie mit einer Creme behandelt werden, die 7500 Einheiten Nystatin enthält. Die Zäpfchen sind auch besser als eine Clotrimazol-Creme, wenn sie in diesem Versuch eingesetzt wird (5 von 10 Mäusen werden infektionsfrei). Die eindrucksvolle Wirksamkeit von Nystatin-Zäpfchen wird auch bei der Wiederholung dieses Versuches bestätigt (Tabelle III). Zum Vergleich wird auch Miconazol-Creme in diesem Versuch eingesetzt. Es ist offensicht-

lieh, daß sie weit weniger wirksam ist als die anderen geprüften Produkte.

Die Zäpfchen werden auch auf ihre Wirksamkeit gegenüber durch Candida verursachten Scheidenentzündungen in Ratten geprüft.

Tabelle IY enthält einen direkten Vergleich mit MycostatirF (Nystatin)-Creme. Beispielsweise sind 3000 Einheiten Nystatin pro Scheide in Zäpfchenform genauso wirksam wie 10.000 Einheiten Nystatin pro Scheide in Cremeform, d.h. um das gleiche Ergebnis zu erzielen ist weniger Nystatin in Zäpfchenform erforderlich als in Cremeform. Noch interessanter ist es, daß die Nystatin-Zäpfchen erheblich wirksamer zu sein scheinen als die im Handel erhältlichaiPräparate von Miconazol und daß sie zumindest gleich oder sogar wirksamer sind als Clotrimazol.

Die bessere Wirksamkeit von Nystatin enthaltenden Vaginal-Zäpfchen mit 2prozentiger Natriumcarboxymethylcellulose in einem Standard-Therapie-Dosierungsschema in Mäusen und Ratten war so ermutigend, daß die nächste Serie in einem schwierigeren Dosierungsschema mit verzögerter Behandlung in Ratten geprüft wurde. In diesem Schema werden Ratten lokal zweimal am Tag behandelt, beginnend 24 Stunden nach der Infektion anstatt der üblichen 6 Stunden. In diesem Infektionsschema werden Mikrozäpfchen mit 2$ Natriumcarboxymethylcellulose und auch eine neue Zusammensetzung mit 10$ Natriumcarboxymethylcellulose ausgewertet. Aus Tabelle V geht hervor, daß Nystatin in Mikrozäpfchen besser ist als Nystatin in der handelsüblichen Creme-Zsammensetzung und daß es gleich oder besser ist als die handelsübliche Creme-Zusammensetzung von 1# Clotrimazol (Lotrimin®-Creme).
In den nächsten beiden Versuchen werden Ratten in dem verzögerten Behandlungsschema getestet. Dabei werden Zäpfchen mit 2% Natriumcarboxymethylcellulose mit Zäpfchen verglichen, die 2% Hydroxypropylmethylcellulose enthalten. Aus Tabelle VI geht hervor, daß mit Nystatin-Zäpfchen, die entweder 2% Natriumcarboxymethylcellulose oder 2% Hydroxypropylmethylcellulose enthalten, eine Wirksamkeit erreicht werden kann,die mit der von Clotrimazol und Miconazol-Cremes vergleichbar ist.

Ketoconazol ist in diese Versuche mit einbezogen, weil es zur oralen Therapie gegen vaginale Candidiasis verwendet wird. Die gewählte Dosierung (6,3 mg/kg/Tag) entspricht etwa der Dosierung, die für !rauen empfohlen wird. Die Ergebnisse dieser beiden Versuche zeigen, daß die Wirksamkeit von Ketoconazol (7,9 x 10" CMJ/ml Vaginal-Spülflüssigkeit) verglichen mit der bei unbehandelten (8,6 χ 10 CSTJ/ml) oder auf Cremebasis behandelten (3,5 χ 10 CFÜ/ml) Infektions-Kbntrolltieren gering ist. Sie unterstreichen die therapeutischen Schwierigkeiten, die bei diesem Infektionsschema auftreten. Dagegen bestätigt die deutliche Verminderung der Hefepopulation, die durch die Nystatin-Zäpfchen in diesen Versuchen erreicht wird, noch einmal die ausgezeichneten therapeutischen Möglichkeiten von

Nystatin in dieser verbesserten Zusammensetzung. 15

co
οι

ro cn

cn

	Behandlung	Kon	1	100	filtration	Gesamtmenge/	—	bei vaginaler Candidiasis in Mäusen	% Reduk	Infektionsfrei^a
	Nystatin -	100		Einh./ing	Träger Vagina		Candida CFU/ml	tion	Gesamtzahl
	Zäpfchen	50	25	" /mg	30 mg Ziäpfchen 3.000 Ειώ		Geom.MitteX/Gruppe	97.34	2/10
Tabelle I		25	63	" /mg	30 mg " 1 500 »		520 '	86.98	1/10 . .
Lokale Wirksamkeit von Nystatin-Zäpfchen	Nystatin —	100	1%	.it, /mg	30 mg " 750 "	2.542	85.03	0/10 j«*" ■ϊ '^ : ,
	Zäpfchen	50		,Ii /mg	30 mg " 3.000 "	2 922	98.32	3/10 ',,* '
	mit 2% Natrium-25	■ » /mg	30 mg " 1 500 '}·■	328	99.21	4/10
carboxymethyl—		30 mg " 750 "	154	96.30	0/10 ' .»··,
cellulose (SCMC)			723		ro" _w<<
gem.Beispiel '					^"^ » * *. » t
Mycostatin®	" /mg				I * ■% % * t
(Nystatin)—		handelsüb- _{7 500} ·>		97.63	2/10 ,*',"
Creme	¹¹ /mg	liehe Creme	463		· t 3*
	" /mg	Creme-Grundstoff? 1.875		96.93	2/10 : ;·
Lotriinin® Creme	Clotrim-	Nr..2 J 472	599	95.30	3/10 *«·'
	azol	handelsübliche 0.75 mg	918	95.12	3/10
	Creme-Grundstoff (CB) Nr. 2	Creme	953
		—	0/10
19 523

^G. albjcans SC 9177 ·

Angegebene Zusammensetzungen, verabreicht 6 Stunden nach der Infektion

% Reduktion bezieht sich auf den Vergleich mit mit Creme-Grundstoff Nr.
_d Infektions-Kontrollen

Zahl der Mäuse in jeder Gruppe, die nach der Behandlung frei von C. albicans waren

behandelten

	100	Einh/mg	Gesamtmenge/ Candida CFU/ml Träger Vagina / Geom. Mitte l/tmoH.	7.3	Infektions frei	Reduktion	■» * » · » * *
	50	Il /mg	2% (0.5 mg) s.c.M.c* 3ooo Einheit. ■^•30 mg	5.9	e Gesamtzahl	99.80	* * ♦ * * I * * ff 3"» *
	25	■" · /mg	(0.25 mg) 1500 Einh.	84 700	8/10	99.84	-Λ i ■ ί Ϊ *** * *** I · * * * * * * • 4* * 4- » * > t »
Tabelle II	100 25	/mg ¹¹ /mg	(0-125 mg) 750 _Einh# 3.	56 470	8/10	97.73
	6.3	■"■ /mg	handelsüb- (1.25 mg) lieh.Prä-? -v/7500 Einh. parat Creme (0.31 mg) Grundst.Nr.2 ,^1875 Einh.	430	3/10 1/10	99.86 98.83	CO
Maus-Scheidenentzündung . - Candida albicans SC 9177	1% 2	Clotrim.	Creme ₍₀._{08 mg)} Grundst.Nr.2/^472 Einh.	80 .000	3/10 2/10	98.93
Behandlung Konzentration	handelsüb- 0.75 mg lieh.Präpa rat 0.075 ml 40		2/10	99.8
Nystatin-Zäpfchen v/ie in Beispiel 1		5/10 0/10

Placebo - Zäpfchen
Mycostatin (Nystatin)

Lotrimin® Creme Creme-Grundstoff Nr.

Lokale Behandlung nach 6, 24 und 30 Stunden (10 Tiere/Gruppe)
"SCMC = Watriumcarboxymethylcellulose

K) CD CO CQ

	Benanuiung	Konzentration	Binh./mg !'.· /mg .·" /mg	Träger	III	9177	Infektions frei	Reduktion	Λ ·■ ft # ♦ * * « * + *' 4 IV)',,,,¹
	Nystatin ,-zäpfchen ·	100 50 25	¹¹ /mg " /mg ¹¹ /mg	2% SCMC 2% SCMC 2% SCMC	albicans SC	Candida CFU/ml Geom.Mittel/	Gesamtzahl		*ί\> :.:** < * t I * * ) ¹ ** » C
	Myeoütatin® Creme Placebo-Zäpf chen	100 25 6.5	Clolriia-	handelsübl. Creme CB- Nr.2 CB. Nr.2 2% SCMC	Gesamtmenge	Gruppe	8/10 4/10 3/10	99.97 99.79 99.50	«: * » ί * < f * 1 St ί f ♦ f t 1 (
Tabelle	Lotrimin®	iÜl	Miconazol	handelsübl. Creme	Vagina	5.6 46 110	2/10 1/10 1/10 0/20	98.68 97.32 98.53
Maus-Scheidenentzündung - c.	Monistat®	2%		handelsübl. Creme	3_?ooo Einh 1 .500 · " 750 "	250 510 280 22 000	1/11	96.74
		-W-500 " 1 875 ■» 500 »	620	0/10	88.95
	(0.75 mg)	2 100
(1.5 mg)

unbehandelt

ä-Grundstoff Nr.2

58.000 19 000

0/20 0/20

Lokale Behandlung nach 6, 24 und. 'j>0 Stunden (10 Tiere/Gruppe)

Tabelle IV

Ratten-Scheidenentzündung - _c albicans se 9177 offensichtlich infektionsfrei

Behandlung Konzentration

Nystatin -Zäpfchen ~~

■ ■ - loo Einh/ing

50 " . /mg

¹¹ /mg

Gesamtmenge/ Candida CFU/ml
Vagina Geom.Mittel/

Gesamtzahl

% Reduktion

Gruppe

Mycostatin® - Creme

Placebo-Zäpfchen
Lotrimin® -Creme

Monistat® -Creme

25
100

50
25

2% SCMC 2% SCMC 2% SCMC

3.000 Einh.

1 500 " 750 »

/mg handelsübl. ίο ooo ■■

Creme

/mg CB, Nr. 2 5 000 " /mg CB, Nr.2 2 500 " 2% SCMC <9

<260
<59

<9

<20
<15

000

1% Clotr.ima- handelsübl. 20I Creme

2% Miconazol

handelsübl. Creme

1 mg

2 mg <260

Unbehandelt

Creme-Grundstoff Nr.2 -

7/10 3/10 A/10

8/10

7/10 8/10 0/10

5/10

3/10

000 0/10

- 69 000 0/10

^a Lokal, 6, 24 und 50 Stunden nach der Infektion

^b Kultur nach Spülung der Scheide, Λ0 Stunden nach der letzten Behandlung

^c<50 CFU C. alüicans/Maus

99.98 99.37 99.86

99.99

99.97 99.98

99.95

99.62

ιυ.¹ ι ,"

CO

cn

CD CO CO

co οι

αϊ

cn

Tabelle V Ratten-Scheidenentzündung-Candida albicans SC 9177, verzögerte Therapie*

Behandlung Mycostatin -Wikrozäpfchen

25

Konzentration

. /mg /mg

Placebozäpfchen

Mycostatin—Mikro— zäpfchen

Placebcr-Mikrozäpfchen nur

Witepso] W35 + Il

Unbehandelt Creme-Grundstoff Nr.2 Lo L rim in —Creme

loo Einh/mg

50 j.' /mg 25 » /mg

2% SCMC 2% SCMC 2% SCMC

2% SCMC

10% SCMC 10% SCMC 10% SCMC

10% SCMC Gesamtmenge/ Candida CFü/ml.Infektions-

Geom. Mittel/ frei
_Vagjjia Gruppe

1% cioti-iiiia- handelsübl. Creme ι mg

<8.6x 10

2.2 χ 10,
<1.2 χ 10

1.5 χ 10⁴

<9.4 χ 10

<1.4 χ 1O₂

6.2 χ 10

6.6 χ 10

2.4 χ 10

6.5 χ 10
8.0 χ 1(

<5.9 χ 10

MycosLaLin-Creme ooo Einh. <2.ι χ ίο

,Gesamtzahl

als infektionsfrei** angenommen Gesamtzahl

1/10 0/10 2/10

0/10

1/10 6/10 0/10

0/10

0/10 0/10 4/10

1/10

C3/10T

(2.10)

(3/10)

(0/10)

(5/10) (8/10) (1/10)

(0.10)

(5/10)

(3/10)

Tntravag-inal verabreichte Therapie, 2x pro Tag, Beginn 24 Stunden nach der Infektion Weniger als 50 CTD C. albicans /Ratte

-pi ι i t

cn ro co co co

	Konzentration	VI	<3.0 χ 10^ <1.5 χ H) 4.6 χ 10^ <3.8 χ \ü, 2.6 χ 10	mit Nystatin-	Reduktion	* * t * * * If	« X	i \ a * ■* »	. ' * Ά
Tabelle	6,000 Einh/. Pessar 3,000 " / " 1,500 " / " 750 " . / "		<1.5 χ 10² <1.6 χ 10^ 1.5 χ 10	j nfek- tionsfrei Ges.Zahl „,	98.88 99.48 74.00 98.94	ro · » vn '·*·■
Therapie einer Ratten-Scheidenentzündung	3,000 · " " 1,500 " " 750 !' '!	(C. albicans SC 9177)	8.6 χ 10^J	3/20 5/20 0/18 1/10 0/20	98.25 98.14 98.25	3 Λ I '„„	*
Zäpfchen Behandlung **	-	Jfeginale · „ , τ , ZaiiTung Zahl der Geom.Mit- Ratten tel/Gruppe	<1.0 χ 10²	5/18 3/18 0/8	-	It
2% HydroxypropylmeLhyl— cellulose (HPMC) - Nystatin- Zäpfchen Placebo-Zäpf chen	1% Clotrimazol	20 20 18 10 20	<2.3 χ 10²	0/18	99.71
2% SCMC - Nystatin- zäpfchen	2% Miconazol	00 co Oc	3.5 χ ίο''	5/20	99.34
Placebo-Zäpf chen	-	18	8.6 χ 10⁴	1/10
Lotriinin	-	20	7.9 χ 10^A	0/20
Morüatat	6.3 mg/kg per OS ,	10		0/10
Creme-Grundstoff Nr.2	20		0/20
Unbehandelt	10
Ketoconazol	20

Intravaginal verabreichte Therapie, 2x pro Tag, Beginn 24 Stunden nach der
Infektion

cn ro co co co -J

Claims

Patentansprüche

1. Fungizide Zäpfchen-Zusammensetzung, enthaltend einen fungiziden Wirkstoff in einer Menge von etwa 0,1 bis etwa 6 Gewichtsprozent der gesamten Zusammensetzung, ein Hydrokolloid in einer Menge von etwa 0,5 bis etwa 10 Gewichtsprozent der Zusammensetzung und einen niedrigschmelzenden Zäpfchen-Grundstoff, wobei kurz nach der Einführung eines daraus hergestellten Zäpfchens in die Vagina dieser Zäpfchen-Grundstoff schmilzt und dabei das Hydrokolloid und den. fungiziden Wirkstoff freisetzt, die an der Vaginalmembran und den Infektionsorten anhaften und daran festgehalten werden.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1_V in.der.der fungizide Wirkstoff Nystatin, Amphotericin B, Miconazol,

Ketoconazol oder Griseofulvin ist.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 2, in der der fungizide

Wirkstoff Nystatin ist. 35

4·. Zusammensetzung nach Anspruch 3, in der das Zäpfchen etwa 25.000 bis etwa 500.000 Einheiten Nystatin enthält.

L ■ . ■ ■ J

Γ -2 -

5. Zusammensetzung nach Anspruch 1, in der das Hydrokolloid ein Cellulose-Polymer ist.

6. Zusammensetzung nach Anspruch 1, in der das Cellulose-

Polymer ein Celluloseäther, ein Cellulosealkylhydroxylat, ein Cellulosealkylcarboxylat oder ein Alkalimetallsalz eines Cellulosealkylcarboxylates oder deren Gemisch ist.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 1, in der das Hydrokolloid Natriumcarboxymethylcellulose oder Hydroxypropylmethyl-

cellulose ist.

8. Zusammensetzung nach Anspruch 1, in der der fungizide

Wirkstoff eine durchschnittliche Partikelgröße im Bereich von etwa Λ bis 50 Mikron hat.

9. Zusammensetzung nach Anspruch 1, die zusätzlich ein oder mehrere antibakterielle Wirkstoffe in einer Menge von etwa 0,05 bis etwa 5 Gewichtsprozent enthält.

10. Zusammensetzung nach Anspruch 9, in der der antibakterielle Wirkstoff Neomycin, Gentamyein,Gramicidin oder Tyrothricin ist.

11. Verwendung der Zusammensetzung nach Ansprüchen 1 bis 10 zur Bekämpfung von Pilz-Infektionen in der Scheide bei Mensch und Tier.

12. Verwendung der Zusammensetzung nach Ansprüchen 1 bis 10 zur Bekämpfung von Pilz-Infektionen im Mastdarm und/oder der Urethra bei Mensch und Tier.