DE3112842A1 - Niedrigkariogenes suessungsmittel, verfahren zu dessen herstellung und dessen verwendung bei der herstellung von nahrungsmitteln und getraenken - Google Patents
Niedrigkariogenes suessungsmittel, verfahren zu dessen herstellung und dessen verwendung bei der herstellung von nahrungsmitteln und getraenkenInfo
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Description
Niedrigkariogenes Süssungsmittel, Verfahren zu dessen Herstellung und dessen Verwendung bei der Herstellung
von Nahrungsmitteln und Getränken
Die Erfindung betrifft ein niedrigkariogenes Süssüngsmittel
(d.h. ein Süssungsmittel, das wenig oder gar keinen Zahnzerfall bewirkt) aus Oligosacchariden, die
man erhält, indem man Fruktosyltransferase mit Saccharose umsetzt und die 1 bis 4 Moleküle Fruktose, -gebunden
an Saccharose, enthalten. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung und zur Verwendung eines
solchen Süssungsmittels.
Saccharose wird in grossem Masse wegen seiner guten Süsskraft, wegen des Geschmackes, der Kristallinität
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und dergleichen/ bei der Zubereitung von Nahrungsmitteln verwendet. Saccharose bildet jedoch ein Substrat
für Dextransaccharase, die durch im Mund befindliche Mikroorganismen gebildet werden, und daher führt ein
häufiger Genuss von Saccharose zur Bildung von im Munde unlöslichem Dextran und dadurch wird die Bildung von
Zahnbelag beschleunigt, Man sagt deshalb, dass Saccharose kariogen ist.
Der Mechanismus des Auftretens von Zahnkaries beruht wahrscheinlich auf den folgenden Stufen: (1) Einer
Stufe, bei welcher Saccharose in unlösliches Dextran umgewandelt wird durch Einwirkung von Dextransaccharose,
die durch kariogene Mikroorganismen von Streptococcus mutans oder dergleichen gebildet wird und gleichzeitig
die kariogenen Mikroorganismen unter Ausbildung von Zahnbelag adsorbiert werden und (2) einer Stufe, bei
der fermentierbare Zucker, wie Glukose und Saccharose, durch die Mikroorganismen in dem Zahnbelag auf der
Oberfläche der Zähne unter Ausbildung von organischen Säuren (die hauptsächlich aus Milchsäure bestehen)
fermentiert werden, wodurch der pH vermindert und ein Entkalkungsphänomen stattfindet.
Polyols, wie Xylit und Saccharin, und synthetische
Süssungsmittel, wie Zyklamat und Aspartam, sind bekannte Süssungsmittel, die nichtkariogen sind. Diese
Süssungsmittel haben aber den Nachteil, dass sie leicht Durchfall verursachen und die letzteren ergeben auch
nicht den richtigen Zuckcrgaschmack. Deshalb besteht
ein Bedürfnis nach niedrigkariogenen Süssungsmitteln, die die ausgezeichneten Eigenschaften von Saccharose
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• haben, ohne die vorerwähnten Nachteile aufzuweisen.
Aufgrund der Kariogenität von Saccharose ist es eine Aufgabe der Erfindung, ein Süssungsmittel zu zeigen,
das die wünschenswerten Eigenschaften der Saccharose mit einer niedrigen Kariogenität verbindet.
Erfindungsgemäss wird ein niedrigkariogenes Süssungsmittel zur Verfügung gestellt, das aus Oligosacchariden
mit 1 bis 4 Molekülen Fruktose, gebunden an Saccharose, besteht.
Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung von niedrigkariogenen Süssungsmitteln und ist
dadurch gekennzeichnet, dass man Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase umsetzt.
Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung von niedrigkariogenen Nahrungsmitteln (einschliesslich
festen Nahrungsmitteln und Getränken)· und insbesondere ein Verfahren zur Herstellung von niedrigkariogenen Nahrungsmitteln unter Verwendung der erfindungsgemässen
neuen Süssungsmittel.
Die Erfindung betrifft schliesslich auch ein Verfahren zur Herstellung von niedrigkariogenen Süssungsmitteln,
die Sorbit und Mannit enthalten, indem man selektiv Glukose und Fruktose, die als Nebenprodukte
in einer Oligosaccharidzusammensetzung enthalten sind, die man erhält, indem man Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase
umsetzt, und die . . . ..
: . . : zucker von Oligosaccharid mit 1 bis 4 Molekülen
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Fruktose, gebunden an Saccharose, nichtumgesetzte Saccharose, sowie Glukose und Fruktose enthält, reduziert.
Der Erfindung liegen Untersuchungen zugrunde, ein niedrigkariogenes saccharoseähnliches Material mit den
ausgezeichneten Eigenschaften von Saccharose zu finden. Es wurde nun gefunden, dass Oligosaccharide,
die durch Umsetzung von Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase erhalten wurden, und insbesondere
Oligosaccharide, bei denen 1 Molekül Fruktose an Saccharose gebunden ist (nachfolgend als GF0 bezeichnet)
und solche, bei denen 2 Moleküle Fruktose an Saccharose gebunden sind (nachfolgend als GF_ bezeichnet)
und solche, bei denen 3 Moleküle Fruktose an Saccharose gebunden sind (nachfolgend als GF. bezeichnet)
und solche, bei denen 4 Moleküle Fruktose an Saccharose gebunden sind (nachfolgend als GF5 bezeichnet) im wesentlichen
keine Wirkungen auf durch im Mund befindliche Mikroorganismen (wie Streptococcus mutans) gebildete
Detransaccharase haben und die Bildung von unlöslichem Dextran aus Saccharose, wie sie durch Dextransaccharase
verursacht wird, vermindern. Die erfindungsgemässen Oligosaccharide vom Typ GF2, GF3, GF. und GF5 kann man
isolieren und reinigen, z.B. durch Kohlenstoffchromatografie
(d.h. Chromatografie unter Verwendung von gepulverter Aktivkohle), durch Ionenaustauschchromatografie
aus den Zuckergemischen, die man durch Umsetzen von Fruktosy!transferase mit Saccharose erhält. Aus
praktischen Gründen verendet man jedoch vorzugsweise das Oligosaccharidgemisch. Das Zuckergemisch enthält
typischerweise auch nichtumgesetzte Saccharose, Oligosaccharide von GF2, GF3 und dergleichen, gebildet durch
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Transferasereaktion, und die Nebenprodukte von Glukose
und Fruktose, die als Nebenprodukte bei der Umsetzung anfallen.
Dieses Zuckergemisch hat auch die Wirkungen der Dextransaccharose,
wie sie durch Mikroorganismen im Mund gebildet wird, jedoch aufgrund der Gegenwart der Oligosaccharide
wird das unlösliche Dextran in einer geringeren Menge gebildet. Dies ist auf die Tatsache zurückzuführen,
dass die Oligosaccharide von GF2, GF3 und dergleichen
die Bildung von unlöslichem Dextran aus Saccharose trotz der Gegenwart von Saccharose unterdrücken
und dass aus den Oligosacchariden von GF~r GF3 und dergleichen
kein unlösliches Dextran gebildet wird.
Ein Gemisch oder eine Zusammensetzung enthaltend Oligosaccharide mit 1 bis 4 Molekülen Fruktose, gebunden
an Saccharose, bildet somit weniger unlösliches Dextran, das als Hauptursache für Zahnkaries gilt,
und die Oligosaccharide von GF~, GF3 und dergleichen
unterdrücken die Bildung von Dextran aus Saccharose.
Darüber hinaus hat die erfindungsgemasse Zusammensetzung
ausgezeichnete Eigenschaften als Süssungsmittel, d.h. dass sie eine gute Süsse, einen geeigneten Geschmack,
eine gute FeuchtigkeitsZurückhaltung und dergleichen
aufweist, zusätzlich zu der Eigenschaft der niedrigen Kariogenität.
Die Zusammensetzung hat eine Süsse von 60 bis 80,
wenn man die Süsse von Saccharose mit 100 bestimmt, und
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sie hat einen spezifischen Geschmack. Die Süsse wird nach der in "Sweetners and Dental Caries" von J. H.
Shaw auf Seite 45, Information Retrieval Incorporation beschriebenen Schwellenmethode bestimmt. GF3, GF3 usw.
lassen sich bei der Verarbeitung nur schwer anfärben, weil sie nichtreduzierende Zucker sind. Weiterhin hat
das Süssungsmittel etwa die gleiche Viskosität und den gleichen osmotischen Druck wie Saccharose und ist nicht
kristallin. Beim Vermischen mit Saccharose, Fruchtzucker, Laktose und dergleichen, kann es die Kristallisation
inhibieren. Diese Eigenschaft ist für die Praxis vorteilhaft. Weiterhin zeigt das Süssungsmittel ungefähr
die gleiche Gefrierpunktserniedrigung wie Saccharose und weist ausgezeichnete Feuchtigkeitszurückhaltungseigenschaften
auf.
Das Süssungsmittel hat somit eine Reihe von Eigenschaften der üblichen Süssungsmittel und kann deshalb
bei allen Nahrungsmitteln anstelle der üblichen Süssungsmittel, wie Zucker, säuresaccharifiziertes Gluten (mizuame) ,
isomerisierte Zucker und dergleichen, verwendet werden und die so hergestellten Nahrungsmittel sind dann weniger
kariogen als Nahrungsmittel, die man unter Verwendung der üblichen Süssungsmittel erhalten hat.
Die erfindungsgemässen Zusammensetzungen enthalten Oligosaccharide aus 1 bis 4 Molekülen Fruktose, gebunden
an Saccharose (nachfolgend als niedrigkariogenes Süssungsmittel bezeichnet) und stellt eine niedrigkariogene
Süssungsmittelzusammensetzung dar. Die Erfinder haben auch das Verfahren zur industriellen Herstellung
dieses niedrigkariogenen Süssungsmittels
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untersucht und dabei gefunden, dass man die Süssungsmittel
erhält durch Umsetzung von Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase.
Die Fruktosyltransferase tritt hauptsächlich hinsichtlich
der Spaltung der ß-1,2-Bindung zwischen Fruktose -und Glukose ein und überführt die entstandene Fruktose
in Saccharose unter Ausbildung von GF2 und überführt
die Fruktose an GF0 unter Ausbildung von GF-.. Sie unterscheidet
sich von Inulosaccharose /2.4.1.97 und Levansaccharose /2.4.1.10/, wie sie in Enzyme Nomenclature
(Academic Press, 1978) beschrieben wird, darin, dass die Reaktionsprodukte Oligosaccharide sind, bei denen
Fruktose an Saccharose als GF3, GF3 usw. gebunden ist.
Als Quelle für das Enzym kommen Mikroorganismen in Frage, wie Fungi /z.B. vom Genus Aspergillus
(Aspergillus niger ACE-2-1, ATCC 20611), vom Genus
Penicillium (Penicillium nigricans, etc.), vom Genus
Fusarium (Fusarium lini JAM 5008, etc.) und Genus
Gloeosporium (Gloeosporium kaki JAM 5011, e-tcj, sowie
Hefen /z.B. vom Genus Saccharomyces (Saccharomyces
cerevisiae, etc.), vom Genus Rhodotorulla (Rhodofcorulla
glutinis, etc.), vom Genus Pichia (Pichia miso, etc.),
vom Genus Hansenula (Hansenula miso, etc.), vom Genus Candida (Candida tropicalis, etc.), Aureobasidium
pullulans var. melanigenum A-8, ATCC 20612), sowie
pflanzlich gebildete Enzyme, wie solche aus Asparagus officinalis, Helianthus tuberosus L., etc.. Fruktosyltransf
erase aus Mikroorganismen erhält man, indem man die Mikroorganismen bei einer Optimaltemperatur für die
Mikroorganismen, z.B. zwischen 25 und 30°C während 94
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bis 96 Stunden unter Verwendung eines geeigneten Mediums kultiviert, z.B. eines Mediums, das 5,0 %
Saccharose, 1,0% Pepton, 0,7 % Fleischextrakt und 0,3 % NaCl enthält, worauf man als Beendigung der Kultivierung
die Zellen der Mikroorganismen durch Filtrieren oder Zentrifugieren unter Erhalt eines Kulturfiltrats
entfernt. Man kann das Filtrat selbst oder ein Enzym verwenden, das erhalten wurde durch Reinigen
des Filtrates in üblicher Weise mit bekannten Reinigungsverfahren für Enzyme, wie Ultrafiltration, Aussalzen
(d.h. dass Salze und andere Verunreinigungen daraus entfernt werden), mit Natriumsulfat, durch Lösungsmittelausfällung,
Gelfiltration oder Ionenaustauschchromatografie.
Enzyme pflanzlichen Ursprungs erhält man, indem man Pflanzengewebe physikalisch, z.B durch Vermählen,
zerstört und das Enzym extrahiert. Das Rohextrakt oder ein Enzym, das man durch Reinigen des Extraktes in
üblicher Weise (z.B. Ausfällen mit Ethanol (NH4J2SO4-Aussalzen
und dergleichen) erhält, kann man verwenden.
Die niedrigkariogenen Süssungsmittel erhält man, indem
man Saccharose in Gegenwart eines so erhaltenen Enzyms umsetzt. Die Untersuchungen haben als besonders
geeignete Reaktionsbedingungen die folgenden ergeben: Die Saccharosekonzentration bei der Transferaseumsetzung
wird im allgemeinen auf 5 bis 70 % und vorzugsweise 30 bis 60 Gew.% eingestellt. Der Umsetzungs-pH
liegt vorzugsweise bei 4,0 bis 7,0 und die Reaktionstemperatur bei 25 bis 65°C, insbesondere 50 bis 60°C,
wobei die günstigsten Bedingungen sich je nach dem
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Ursprung des Enzyms ändern können. Die Enzymmenge betxägt 5 bis 200 Einheiten und vorzugsweise 20 bis
80 Einheiten Enzym pro g Saccharose. Die Enzymmenge wird hier in "Einheiten" angegeben, wobei man als eine
Einheit eine Enzymmenge bezeichnet, welche die Aktivität aufweist, 1 uMol Glukose pro 2,5 ml in einer Reaktionslösung
ergeben, wenn die Umsetzung durchgeführt wird durch Zugabe von 0,5 ml Enzymlösung zu 1,0 ml
einer 5 %-igen Saccharoselösung und 1,0 ml einer Pufferlösung bei einem pH von 5,0, worauf man anschliessend
60 Minuten bei 400C umsetzt.
Nach Beendigung der Transferaseumsetzung wird das Reaktionsgemisch zur Entaktivierung des Enzyms auf
100°C erhitzt, mit Aktivkohle entfärbt, mit Anionenaustauschharz entsalzt und dann unter Erhalt des Produktes
konzentriert. Die Analyse der bei der Transferaseumsetzung erhaltenen Zusammensetzung kann man durchführen,
indem man beispielsweise eine Hochgeschwindigkeits-Flüssigkeits-Chromatografie
unter Verwendung einer Mikrobonopack CH-Säule (hergestellt von der Waters
Associates Incorporation) und ein Lösungsmittel aus Acetonitril/Wasser (80/20 V/V) verwendet.
Das so erhaltene niedrigkariogene Süssungsmittel hat in einem typischen Pail folgende Zusammensetzung:
28 Gew.% Glukose, 2 % Fruktose, 11 % Saccharose, 28 % GF2, 25 % GF3, 5 % GF4 und 1 % GF5. Die jeweilige Zusammensetzung
variiert erheblich, je nach den Umsetzungsbedingungen .
Als GF2 des Oligosaccharides können die folgenden
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aufgeführt werden: 0-ß-D-Fruktofuranosyl-(2 ->
1)-0-ßfruktofuranosyl-(2 -> 1 )-o^-D-glukopyranosid, O-ß-D-Fruktofuranosyl-(2
■* 6) -O-ß-glukopyranosyl- (1 -*2)-ß-D-fruktofuranosid,
O-ß-D-Fruktofuranosyl-(2 -e>6)-O-ßfruktofuranosyl-(2
-» 1) -oC-D-glukopyranosid und dergleichen.
Als GF3 kommt O-ß-D-Fruktofuranosyl-(2 ->
^T-0-ß-D-fruktofuranosyl/2 ■» 1)-oC-D-glukopyranosid,
O-ß-D-Fruktofuranosyl-(2 -* 6)-O-^ß-D-fruktofuranosyl-(2
■* 2]_/-0-o(/-D-glukopyranosyl-(1 -* 2)-ß-D-fruktofuranosid
und dergleichen in Frage und als GF.O-ß-D-Fruktofuranosyl-(2
->/T-0-ß-D-fruktofuranosyl-273 ■* 1)-
cJb -D-glukopyranosid und dergleichen. Ein Beispiel für
GF5 ist O-ß-D-Fruktofuranosyl-(2 -*- ^/T-0-ß-D-f ruktofuranosyl-2/.
-*■ 1) -oO-D-glukopyranosid und dergleichen.
Die Wirkung als Süssungsmittel und die Wirkungen der
einzelnen Bestandteile von GF?, GF3, GF4 und GF5 werden
ausführlicher in den nachfolgenden Beispielen erläutert.
Tabelle 1 im Versuchsbeispiel 1 zeigt die Mengen an unlöslichem Dextrin, erhalten aus GF2, GF3, GF4 und
GFc, unter Verwendung von Dextransaacharose, die erhalten
wurde durch Kultivierung von Streptococcus mutans ATCC 25175-Stamm im Vergleich zu den Ergebnissen,
die man mit Saccharose erhält. Aus der Tabelle geht eindeutig hervor, dass man aus GF2, GF3, GF4 und
GF5 kein unlösliches Dextran erhält.
Bei der Untersuchung, ob GF2 oder GF3 die Bildung von
unlöslichem Dextran aus Saccharose mittels Dextransaccharase unterdrückt, werden in Tabelle 2 und im
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Versuchsbeispiel 2 beschrieben. Aus Tabelle 2 geht deutlich hervor, dass GF2 und GF., die Bildung von unlöslichem
Dextran aus Saccharose unterdrücken.
Tabelle 4 im nachfolgenden Versuchsbeispiel 3 zeigt die Mengen an unlöslichem Dextrin, die man erhält aus
Süssungszusammensetzungen, die unter verschiedenen Bedingungen hergestellt wurden und die deshalb verschiedene
Zusammensetzungen aufweisen, im Vergleich zu den Ergebnissen, die man mit Saccharose erhält. Aus der
Tabelle geht hervor, dass die Transferasezusammensetzungen unlösliches Dextran in niedrigeren Mengen als
Saccharose ergaben. Vorzugsweise beträgt der Gehalt, ausgedrückt durch das Gewicht der Summe der Oligosaccharode
von GF2, GF3, GF4 und dergleichen, das
2-fache oder mehr des Gehaltes an freier Saccharose in der Süssungsmittelzusammensetzung. Das heisst, dass
dann, wenn das Verhältnis des Gewichtes der Summe der Oligosaccharide zu dem Gehalt an freier Saccharose wenigstens
2,0/1 beträgt, die Menge an gebildetem unlöslichen Dextran 50 % oder weniger beträgt als die
durch Saccharose gebildete. Infolgedessen sind solche Zusammensetzungen besonders bevorzugt.
Wie erwähnt, bildet ein Gemisch oder eine Zusammensetzung, die Oligosaccharide mit 1 bis 4 Molekülen Fruktose,
gebunden an Saccharose, enthält, weniger unlösliches Dextran, was der Hauptgrund für Zahnkaries ist,
und die Oligosaccharide von GF3, GF3, etc. unterdrücken
die Bildung von Dextran aus Saccharose.
Eine solche Zuckerzusammensetzung zeigt nicht die Wirkung
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einer Dextransaccharase wie sie von Streptococcus mutans etc., gebildet wird, und infolgedessen wird kein unlösliches
Dextran gebildet, wenn man eine solche Zuckerzusammensetzung einnimmt, und in diesem Sinne ist die
Zusammensetzung weniger kariogen. Wenn jedoch die Oligosaccharide von GF2, GF3 usw. in der Zusammensetzung
nicht im wesentlichen von den Mikroorganismen von Streptococcus mutans etc., fermentiert werden und daher
nur geringe Mengen an organischen Säuren daraus gebildet werden, können die so gebildeten nur geringen
Mengen an organischen Säuren, nichtumgesetzte Saccharose
und als Nebenprodukt gebildete Glukose und Fruktorse in der Transferaseumsetzung in organische Säuren überführt
werden. Infolgedessen ergibt die Säurezusammensetzung geringere Mengen an organischen Säuren im Vergleich
zu Saccharose, ist jedoch noch nicht vollständig befriedigend.
Diese Frage wurde nun weiter untersucht und dabei wurde festgestellt, dass Glukose und Fruktose nur in geringen
Mengen in der Zusammensetzung vorkommen und vollständig in Sorbit und Mannit überführt werden können, wenn man
die Zusammensetzung, die man erhalten hat durch Umsetzen von Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase,
unter spezifischen Bedingungen katalytisch reduziert und wobei die Mengen an Milchsäure, gebildet aus den
so erhaltenen Süssungsmittelzusarnmensetzungen, durch die Wirkung von Mikroorganismen nur etwa 20 % der beträgt,
die von Saccharose gebildet wird (siehe Versuchsbeispiel 4). Das heisst, dass die Erfindung auch ein Verfahren
zur Herstellung neuer Sorbit und Mannit enthaltender Süssungsmittel zur Verfügung stellt, bei dem man Saccharose
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in Gegenwart von Fruktosyltransferase unter Erhalt
einer Glukose, Fruktose, Saccharose und Oligosaccharide mit 1 bis 4 Fruktosemolekülen, gebunden an
Saccharose, enthaltende Zuckerlösung erhält, worauf man dann diese Zuckerlösung katalytisch reduziert
und dabei den pH der Lösung auf 7 bis 9 hält.
Es wurde insbesondere festgestellt, dass Glukose und Fruktose unter Erhalt von Sorbit aus Glukose und
Sorbit und Mannit aus Fruktose selektiv reduziert werden, ohne dass die Oligosaccharide von GF2, GF- GF4
usw. zersetzt werden, indem man beispielsweise Dinatriurahydrogenphosphat
zu einer wässrigen Lösung der vorerwähnten Zuckerzusammensetzungen gibt und den pH der wässrigeaLösung
auf 7 bis 9 einstellt und das Gemisch in Gegenwart von 3 bis 10 %, bezogen auf die Feststoffe,
eines Nickelkatalysators (beispielsweise Raney-Nickel,
Nickelformiat oder Nickel auf Diatomeenerde) rührt und
dabei die Reduktion bei 15 bis 130 C unter einem Wasserstoff
druck von 50 bis 120 bar vornimmt. Für die Reaktionsbedingungen ist die Einstellung des pH-Wertes
besonders wichtig. Führt man die katalytische Reduktion beispielsweise bei einem pH von 6 oder weniger
durch, so werden die Oligosaccharide von GF3, GF , GF.,
usw. zersetzt unter Ausbeute von Sorbit und Mannit in grossen Mengen und daher wird die Reduktion der Fruktose
und Glukose vorzugsweise bei einem pH von 7 bis 9 durchgeführt.
Die so erhaltene Sussungsmittelzusainmensetzung enthält
typischerweise etwa 37 % Sorbit, 2 % Mannit, 10 % Saccharose, 22 % GF3, 22 % GF3 und 7 % GF4. Wie im
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Versuchsbeispiel 4 gezeigt wird, hat man festgestellt, dass die Menge an Milchsäure, die sich aus der Zusammenetzung
durch die Wirkung von Streptocuccus mutans
bildet, viel geringer ist als aus Saccharose oder aus Zuckerzusammensetzungen, die man erhält, indem man
Fruktosyltransferase auf Saccharose einwirken lässt.
Eine erfindungsgemässe Süssungsmittelzusammensetzung
mit einem Gehalt an Sorbit, Mannit und Oligosacchariden von GF2, GF , GF. und einer geringen Menge Saccharose
stellt wie gesagt ein schlechtes Substrat für Dextransaccharose, die durch Streptococcus mutans gebildet
wird, dar und daher werden auch nur geringe Mengen an unlöslichem Dextran gebildet. Die geringere Empfindlichkeit
der Zusammensetzung gegenüber einer Fermentierung durch Streptococcus mutans vermindert auch die
Mengen an zu bildender kariogener Milchsäure.
Die Zusammensetzung ist somit ein Süssungsmittel mit
starken antikariogenen Eigenschaften.
Versuchsbeispiel 1
Streptococcus mutans ATCC 25175-Stämme wurden unter
anearoben Bedingungen kultiviert unter Verwendung eines Glukose und Triptokase enthaltenden Mediums und
nach dem Abtrennen der Mikroorganismuszellen wurde das Filtrat konzentriert und durch Ultrafiltration
unter Erhalt von Dextransaccharase gereinigt.
- 18 130061/0703
Es wurden dann 1,0 ml einer 1 %-igen Zuckerlösung, 1,5 ml einer O,67M Phosphatpufferlösung (pH 7,0) und
0,25 ml der vorerwähnten Enzymlösung vermischt und bei 37°C 4 Stunden umgesetzt. Das dabei gebildete wasserunlösliche
Dextran wurde durch Zentrifugieren mit 3.000 üpm ausgefällt und der Niederschlag wurde gesammelt.
Der Niederschlag wurde zweimal mit jeweils 5 ml 70 %-igem Ethanol gewaschen und dann in 2,5 ml
einer 1M Kaliumhydroxidlösung gelöst und der Phenol-Schwefelsäure-Methode
unterworfen, um die Menge an gebildeten Dextran zu bestimmen. Weiterhin wurden als
Zuckerlösungen 1 %-ige Lösungen von GF^r GF3' GF4 un<3
GF5 verwendet. Als GF-, GF3' GF4 un<^ GF5 wur^en Fraktionen
verwendet, die gereinigt worden waren, indem man eine Zuckerzusammensetzung (erhalten durch Umsetzung
von Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase) einer Kohlenstoffchromatografie (unter Verwendung
von pulverförmiger Aktivkohle) unterwarf, bis man bei der Dünnschichtchromatografie einen einzigen Flecken
erhielt. Die Ergebnisse werden in Tabelle 1 gezeigt.
- 19 130061/0703
Probe Dextran in der Reaktionslösung (
Saccharose 740
GF2 0
GF3 0
GF4 0
GFC 0
Wie aus Tabelle 1 hervorgeht, bildet sich aus GF, und GF5 kein Dextran.
Versuchsbeispiel 2
In diesem Beispiel wurde untersucht, ob GF2 und GF3
die Bildung von unlöslichem Dextran aus Saccharose unterdrücken, wenn man die Saccharose einer Dextransaccharase,
hergestellt gemäss Versuchsbeispiel 1, in Gegenwart von GF2 und GF3 aussetzt. Die Reaktionsbedingungen
waren die folgenden: 1,0 ml jeweils einer Zuckerlösung (mit einem Zuckergehalt gemäss Tabelle 2), 1,5 ml
«ilrior O,67M Phosphatpufferlösung (pH 7,0) und 0,25 ml
einer Enzymlösung wurden 4 Stunden bei 37°C vermischt und umgesetzt. Die Ausbeute an unlöslichem Dextran
in der Reaktionslösung wurde dann in gleicher Weise wie beim Versuchsbeispiel 1 bestimmt.
- 20 130061/0703
Zuckergehalt in der Reaktionslösung
Menge an in der Reaktionslösung gebildetem Dextran (·ν)
Saccharose 10 mg
Saccharose 10 mg + GF2 30 mg
Saccharose 10 mg + GF3 30 mg
740 (100) 300 ( 40) 350 ( 47)
Die Zahlen in Klammern in Tabelle 2 geben die Mengen an unlöslichem Dextran an, wobei das aus Saccharose gebildete
mit 100 angesetzt wird.
Versuchsbeispiel 3
Sussüngsmittel mit den folgenden Zusammensetzungen wurden hergestellt, indem man Saccharose in Gegenwart
von Fruktosyltransferase unter verschiedenen Bedin-.
gungen umsetzte.
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Nr.
Fruktose Glukose Saccharose
GF.
GF
GF
GF1
Verhalti *
1
2
3
2
3
4
5
6
7
5
6
7
0,8
0,9
0,9
5f9 13,7 17,4 23,5 28,4 31,5 31,6
81,9 53,5 41,8 23,9 14,9 11,0 10,0
12,2 | -,.,— | - | —- |
27,8 | 5,0 | - | — |
35,7 | 11,4 | - | — |
41,2 | 17,4 | - | |
39,2 | 25,1 | 5 | |
26,4 | 24,1 | 7 | ,0 |
23,5 | ,0 | ||
2,9
15, | 0 | I |
47, | 5 | to |
97, | 0 | |
220 | ||
380 | ||
514 | ||
575 | ||
GF9 + GF, + GF4 + GF. C%)
* -X 100
freie Saccharose (%)
Die Mengen an aus den vorerwähnten mit Transferase behandelten Zuckerlösungen wurden in gleicher Weise wie
in Versuchsbeispiel 1 bestimmt und die Ergebnisse werden in Tabelle 4 gezeigt.
Nr. | 1 | Dextrinausbeute in der Reaktionslösung (%) |
(100)* | |
Probe | Nr. | 2 | 490 | ( 89) |
Saccharose | Nr. | 3 | 436 | C 61) |
Nr. | 4 | 298 | ( 59) | |
Nr. | 5 | 289 | ( 41) | |
Nr. | 6 | 201 | ( 29) | |
transferasebehan- delter Zucker Nr. |
7 | 142 | < 9) | |
■ 1 | 44 | ( 8) | ||
Il | 40 | |||
Il | ||||
Il | ||||
Il | ||||
Il |
* Die Zahlen in Klammern in Tabelle 4 geben die Mengen an unlöslichem Dextran an, wobei das aus
Saccharose gebildete mit 100 angesetzt wird.
Versuchsbeispiel 4
Streptococcus mutans Serotyp C wurde anaerob in einem
Medium, enthaltend 0,27 % Maltose, 0,01 % L-Cystein-
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hydrochlorid, 0,1 % Natrium-L-glutamat, 0,2 % NH4H PO4,
0,02 % MgSO4*7H2O, 0,001 % NaCl, 0,01 % MnSO4 und 0,01 \
FeSO.·7Η90 kultiviert. Dann wurden die Mikroorganismuszellen
durch Zentrifugieren gesammelt und in einer 0,05M Phosphatpufferlösung in einer Konzentration von
10 mg/ml dispergiert. 0,9 ml einer 0,2M Phosphatpufferlösung, 0,14 ml einer 22,5 mMol MgCl^-Lösung, 0,2 ml
einer 1,7 %-igen Zuckerlösung und 0,5 ml der Zelldispersion wurden vermischt und 30 Minuten bei 37°C geschüttelt
und umgesetzt. Dann wurde das Gemisch zur Unterbrechung der Umsetzung 15 Minuten gekocht und nach Entfernen
der Zellen durch Zentrifugieren wurde die in der überstehenden Flüsigkeit enthaltene Milchsäure durch
die Enzymmethode bestimmt.
Tabelle 5 | Produktions- verhältnis |
|
100 | ||
Substrat | Milchsäure uMol/Reaktions- lösung |
48 |
Saccharose | 16,8 | 0 |
GF2 | 8,0 | 75 |
GF3 | 0,1 | 22 |
Zusammensetzung | 1* 12,6 | |
Zusammensetzung | 2** 3,7 | |
Zusammensetzung 1:(Zuckerzusammensetzung, erhalten
durch Umsetzung von Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransferase)
- 24 -
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Glukose 37 %
Pruktose 2 %
Saccharose 10 %
GF2 22 %
GF3 23 %
GF, 6 %
** Zusammensetzung 2: (Zusammensetzung, die durch kata-
Iytische Reduktion erhalten wurde)
Sorbit 38 %
Mannit 1 %
Saccharose 10 %
GF2 22 %
GF3 23 %
GF. 6 %
ml-Anteile eines BS-Mediums, enthaltend 5,0 % Saccharose, 1,0% Pepton, 0,7 % Fleischextrakt und 0,3 %
NaCl, wurden jeweils in zwei Reagenzgläser eingefüllt
und nach 30-minütigem Sterilisieren bei 120°C wurden die beiden Medien mit einer Platinspitze von Aspergillus
niger ACE-2-1, ATCC 20611, inokuliert und die Kultivierung
wurde 24 Stunden bei 28°C durchgeführt.
ml-Anteile der erhaltenen Kulturlösungen wurden in zwei Erlenmeyer-Kolben, enthaltend 20 ml BS-Medium
(30 Minuten bei 1200C sterilisiert) gefüllt und dann
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- 25 -
wurde 24 Stunden lang bei 28 C eine Schüttelkultur unter Ausbildung einer Vorkultivierung durchgeführt.
20 1 des BS-Mediuitis wurden in einen 30 1 Fermentator
gegeben und nach 30 -minütigem Sterilisieren bei 120°C gekühlt und mit 400 ml der vorerwähnten Kulturlösung
inokuliert. Die Kultivierung wurde 72 Stunden bei 28°C unter Rühren mit 300 Upm durchgeführt.
Nach Beendigung der Kultivierung wurden die Zellen durch Filtrieren entfernt, wobei man 20 1 des Kulturmediums
erhielt. 20 1 dieses Kulturfiltrates wurden konzentriert und durch Ultrafiltration gereinigt, wobei
man 2 1 einer Enzymlösung mit einer Enzymaktivität von 240 Einheiten/ml erhielt.
Zu 30 kg Saccharose wurden zum Auflösen 6,7 1 Wasser gegeben und nach Einstellung des pH-Wertes auf 5,0
wurde das Enzym in einer Menge von 48 Einheiten/g Saccharose zugegeben und die Transferaseumsetzung wurde
48 Stunden bei 50°C durchgeführt. Nach deren Beendigung wurde das Reaktionsgemisch 15 Minuten zum Entaktivieren
des Enzyms auf 100°C erhitzt und dann wurde zum Entfärben Aktivkohle in Mengen von 0,5 % zugegeben.
Nach Entfernen der Aktivkohle wurde die Lösung mit einen Ionenaustauscher vom Amberlit IR·120B
und Amberlit IRA«411 Typ behandelt und auf 75 % w/w
konzentriert, unter Erhalt von 12 kg eines niedrigkariogenen
Süssungsmittels.
Dieses Süssungsmittel hatte folgende Zuckerzusammensetzung: 26 % Glukose, 2 % Fruktose, 18 % Saccharose,
40 % GF2 und 14 % GF3.
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Fusarium lini JAM 5008 wurde wie in Beispiel 1 beschrieben
kultiviert, wobei man 20 1 einer Kulturlösung erhielt. Diese Lösung wurde konzentriert und durch Ultrafiltration
gereinigt, wobei man 2 1 einer Enzymlösung mit einer Enzymaktivität von 200 Einheiten/ml erhielt.
Zu 3 kg Saccharose wurden 7 1 Wasser gegeben und nach Einstellung des pH-Wertes auf 6,0 wurde dazu Enzym in
einerMenge von 16 Einheiten/g Saccharose gegeben und anschliessend
wurde die Transferasereaktion 24 Stunden bei 50°C durchgeführt. Nach Beendigung der Umsetzung
wurde die Lösung zur Entaktivierung des Enzyms 15 Minuten auf 1000C erhitzt und dann wurde Aktivkohle in
einer Menge von 0,5 %, bezogen auf die Feststoffe, zugegeben und entfärbt. Anschliessend wurde die Lösung mit
einem Ionenaustauschharz entsalzt und dann auf 75 % w/w konzentriert, unter Erhalt von 3.7 kg eines niedrigkariogenen
Süssungsmittels mit einer Zuckerzusammensetzung von:
38,2 % Glukose, 7,8 % Fruktose, 17,2 % Saccharose, 25,4 % GF2 und 11,4 % GF3.
Gloeosporium kaki JAM 5011 wurde wie in Beispiel 1 kultiviert,
wobei man 20 1 eines Filtrates erhielt. Das FiI-trat wurde konzentriert und durch Ultrafiltration gereinigt,
wobei man 1,5 1 einer Enzymlösung mit einer
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Enzymaktivität von 200 Einheiten/ml erhielt.
Zu 3 kg Saccharose wurden zum Auflösen 7 1 Wasser gegeben und nach Einstellung des pH-Wertes auf 6,0 wurde
das Enzym in einer Menge von 20 Einheiten/g Saccharose zugegeben und dann wurde die Transferasereaktion bei
50 C während 24 Stunden durchgeführt. Nach Beendigung der Umsetzung wurde die Lösung wie in Beispiel 1 beschrieben
entfärbt und entsalzen und dann auf 75 % w/w konzentriert, unter Erhalt von 3,8 kg eines niedrigkariogenen
Süssungsmittels, mit einer Zuckerzusammensetzung von: 25 % Glukose, 9 % Fruktose, 36 % Saccharose,
24 % GF2 und 6 % GF3.
Nachfolgend werden Beispiele gezeigt, in denen die erfindungsgemässen
Süssungsmittel einer Reihe von Nahrungsmitteln und Getränken zugegeben wird.
Ein niedrigkariogenes Süssungsmittel folgender Zuckerzusammensetzung:
37 % Glukose, 2 % Fruktose, 10 % Saccharose, 22 % GF2 , 23 % GF3 und 6 % GF4 (Wassergehalt
25 Gew.%) Waide bis zu ulnem Endwasöercjelialt von etwa
8 bis 10 % im Vakuum konzentriert und nach Kühlen auf etwa 8O0C wurde ein Geschmackstoff und ein lebensmittelzulässiger
Farbstoff zugegeben und dann wurde in Formen gegossen und auf Raumtemperatur gekühlt, unter Erhalt
- 28 -
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eines harten Bonbons. Dieses Bonbon zeigte keine Zuckerkristalle im Gegensatz zu solchen, die unter Verwendung
von Zucker hergestellt wurden und hatte eine niedrige Kariogenität.
Herstellun2-Yon_Oran2enmarmelade
90 g Orangenschalen wurden über Nacht in eine 3 %-ige
wässrige Natriumchloridlosung zur Entfernung der Bitterkeit getaucht, dann mit Wasser gewaschen, um das Salz
zu entfernen und etwa 20 Minuten gekocht und dazu wurden 200 g Orangenfleisch gegeben. Nach Zugabe von 370 ml
Waflfifär wiurde üau ßemiseh etwa 30 Minuton eingekocht:
und dabei wurden 320 g des niedrigkariogenon Süssungsmittels
mit der gleichen Zusammensetzung wie in Beispiel 4 (Wassergehalt 25 % w/w) gegeben. Die fertige
Orangenmarmelade hatte einen Zuckergehalt von 65 % w/w» Sie hatte einen erfrischenden sauren Orangengeschmack
und schmeckte sehr gut. >
12 g Agar-agar wurden 3 Stunden in Wasser eingetaucht und dann nach der Entfernung des Wassers zermahlen. Dazu
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wurden 260 ml Wasser gegeben und dann erhitzt und 96Og
eines niedrigkariogenen Süssungsmittels der gleichen Zuckerzusammensetzung wie in Beispiel 4 mit einem Wassergehalt
von 25 Gew.% gegeben und nach vollständigem Lösen des Agar-Agar wurde filtriert. Dieses Agar-Agar-Gemisch
wurde über einem Feuer erwärmt und dazu wurden 500 g rohe Bohnenpaste gegeben und geknetet und nach
Eindicken erhielt man eine Paste mit einem Gehalt von 70 bis 71 % Zucker, die in eine Dose gegossen wurde.
Die erhaltene süsse Paste von gedämpften Bohnen (neriyokan) hatte eine niedrige Kariogenität.
10 Teile Magermilch, 75,5 Teile Wasser, 0,25 Teile eines
Stabilisators, 0,25 Teile eines Emulgiermittels, 14 Teile eines niedrigkariogenen Süssungsmittels mit der
Zusammensetzung gemäss Beispiel 4 und eine ausreichende Menge Geschmackstoff wurden zu einer Eiscrememischung
vermengt. Nach dem Filtrieren wurde 30 Minuten bei 70 C sterilisiert und dann gekühlt. Nach 6-stündigem Altern
bei 3 bis 5°C wurde die Temperatur unter Rühren bis zum Gefrierpunkt erniedrigt. Auf diese Weise erhielt
man eine Eiscreme. Da das niedrigkariogene Süssungsmittel
ungefähr die gleiche Gefrierpunktserniedrigung aufwies wie eine solche, die normalen Zucker enthielt,
zeigte diese Eiscreme eine gute Formbeibehaltung.
- 30 -
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Ein Teig wurde hergestellt unter Verwendung von 1 kg Weizenmehl, 10Og Maisstärke, 333 g des niedrigkario-.genen
Süssungsmittels mit der Zusammensetzung gemäss Beispiel 4 und einem Wassergehalt von 25 % w/w, 125 g
Margarine, 5 g Natriumchlorid, 2,5 % Natriumkarbonat, 8,8 g Ammoniumkarbonat, 6,3 g Sojabohnenlecithin, 75 g
Gesamtei, 6,3 g Vanilleöl und 267 g Wasser und nach dem Treiben geformt und zu Biscuit gebacken. Die Teigkonsistenz
war die gleiche wie bei der Verwendung von gewöhnlichem Zucker und der Biscuits hatten eine gute
Lockerheit und einen guten Geschmack im Vergleich zu solchen, die unter Verwendung von Zucker ausgebacken waren.
Herstellun2_§ines_Getränkes
1,5 Teile Zitronensäure und 970 Teile Wasser wurden zu 133 Teilen des gemäss Beispiel 4 erhaltenen niedrigkariogenen
Süssungsmittels mit einem Wassergehalt von 25 % w/w gegeben und gelöst und dazu wurde ein Farbstoff
und ein Geschmackstoff gegeben. Dann wurde das Geraisch karbonisiert. Man erhielt aufgrund des Gehaltes
an nur niedrigkariogenem Süssungsmittel ein niedrigkariogenes Getränk.
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75 Teile eines pulverförmigen niedrigkariogenen Süssungsmittels
der gleichen Zusammensetzung wie in Beispiel 4 und 22 Teile Chiclegummi (d.h. Pflanzengummi) wurden
miteinander vermischt. Dann wurde Mentholaroma zugegeben und verknetet. Nach Auswalzen auf eine bestimmte
Dicke, Schneiden und Trocknen erhielt man Kaugummiplatten für den Verbrauch. Dieser Kaugummi hatte eine
niedrige Kariogenität, da zu dessen Herstellung ein niedrigkariogenes Süssungsmittel verwendet wurde.
100 Teile Bitterschokolade, 116 Teile eines niedrigkariogenen
Süsungsmittels in Pulverform derselben Zusammensetzung wie in Beispiel 4, 23 Teile Kakaobutter,
90 Teile Milchpulver- und geringeMengen an Vanille und Lecithin wurden miteinander vermischt und zu einer
Schokolade in üblicher Weise verarbeitet. Diese Schokolade zeigte eine verfeinerte Süsse und ergab den
gleichen Geschmack wie bei der Herstellung mit natürlichem Zucker.
- 32 -
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1 1 Sojasosse und 900 g des niedrigkariogenen Süssungsmittels
mit der gleichen Zuckerzusammensetzung wie in Beispiel 4 wurden miteinander vermischt und eingekocht.
Dazu wurden 800 g Essmuscheln und 50 g Ingwer gegeben und das Ganze wurde 40 bis 60 Minuten im fliessfähigen
Zustand gekocht, unter Erhalt von in Sojasosse eingekochten Essmuscheln, die einen sehr guten Geschmack
und eine gute Farbe hatten.
Die Kastanienhaut wurde entfernt und anschliessend wurden die enthäuteten Kastanien 8 bis 10 Stunden gekocht.
Die bittere Haut wurde entfernt und 40 %-ige heisse Zuckerlösung eines niedrigkariogenen Süssungsmittels
der gleichen Zusammensetzung wie in Beispiel 4 wurde darübergegossen. Nach 1-tägigem Stehen wurde
eine 45 %-ige Zuckerlösung darübergegossen und wiederum 1 Tag stehen gelassen. Dann wurde die Konzentration der
Zuckerlösung auf 70 % erhöht, wobei man glasierte Kastanien erhielt. Da der osmotische Druck des niedrigkariogenen
Süssungsmittels etwa der gleiche war wie von Zucker, erhielt man sehr gute Produkte.
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IO ml-Anteile von BS-Medium, enthaltend 5,0 % Saccharose,
1,0 % Pepton, 0,7 % Fleischextrakt und 0,3 % NaCl, wurden
jeweils in zwei Reagenzgläser gegeben und nach 30-minütigem Sterilisieren bei 120°C wurde jedes der
Medien mit einer Platinspitze Aspergillus niger inokuliert und 24 Stunden bei 28°C kultiviert.
10 ml-Anteile der erhaltenen Kulturlösung wurden in
zwei Erlenmeyer-Kolben, enthaltend 200 ml BS-Medium (30 Minuten bei 120°C sterilisiert) gegeben und dann
wurde eine Schüttelkultur bei 28°C während 24 Stunden unter Erhalt einer Vorkultivierung durchgeführt.
20 1 BS-Medium wurden in einen 30 1 Fermentator gegeben und nach 30-minütigem Sterilisieren bei 1200C gekühlt
und mit 400 ml der vorerwähnten Kulturlösung inokuliert. Die Kultivierung wurde 72 Stunden bei 28°C mit 300 üpm
durchgeführt. Nach Beendigung der Kultivierung wurden die Zellen abfiltriert, wobei man 20 1 eines Kulturfiltrates
erhielt. 20 1 dieses Kulturfiltrates wurden konzentriert und durch Ultrafiltration gereinigt, wobei
man 2 1 einer Enzymlösung erhielt mit einer Enzymaktivität von 240 Einheiten/ml.
5 kg Saccharose wurden in 3,3 1 Wasser gelöst und nach Einstellen des pH-Wertes auf 6,0 wurde die Enzymlösung
in einer Menge von 60 Einheiten/g Saccharose zugegeben und die Transferasereaktion bei 50°C während 2 Stunden
durchgeführt. Nach Beendigung der Transferaseumsetzung wurde die Lösung 15 Minuten auf 100°C zur Entaktivierung
1 30061/0703
34 -
des Enzyms erwärmt. Dann wurde Aktivkohle in einer Menge von 0,5 %, bezogen auf die Feststoffe, zum Entfärben
zugegeben. Nach Entfernen der Aktivkohle wurde die Lösung mit Ionenaustauschharzen vom Typ Amberlite
IR·120 und Amberlite IRA'411 behandelt und dann
auf eine Konzentration von 75 Gew.% konzentriert, wobei man 6 kg eines Süssungsmittels erhielt. Dieses
Süssungsmittel hatte eine Zuckerzusammensetzung wie folgt: 37 % Glukose, 2 % Fruktose, 10 % Saccharose,
22 % GF2, 23 % GF3 und 6 % GF4.
700 ml Wasser wurden zu der obigen Süssungsmittelzusainmensetzung
gegeben und dann wurden 15 ml 10 %-ige Na3HPO4 zugegeben und der pH mit 4 %-iger NaOH auf
9,0 eingestellt. Nach Zugabe von 50 g Raney-Nickel wurde die Umsetzung 50 Minuten bei 80 bis 90°C unter
Rühren und unter einem Wasserstoffdruck von 60 bis 120 bar durchgeführt. Nach Beendigung der Umsetzung
wurde der Nickelkatalysator entfernt und die Lösung wurde mit Amberlite IR·120B und Amberlite IRA«411-Ionenaustauschharzen
behandelt und dann auf 75 % w/w konzentriert, wobei man 1 kg eines Produktes erhielt.
Dieses Süssungsmittel hatte folgende Zuckerzusammensetzung: 38 % Sorbit, 2 % Mannit, 9 % Saccharose, 22 %
GF2, 23 % GF3 und 6 % GF4. ^
10 ml eines BS-Mediums, enthaltend 0,5 % Saccharose, 1,0 % Pepton, 0,7 % Fleischextrakt und 0,3 % NaCl, wurden
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jeweils in zwei Reagenzgläser gegeben und nach 30-minütigem Sterilisieren bei 120°C wurde jedes der
Medien mit einer Platinspitze Aureobasidlum pulIuIans
var. melanigenum A-8 ATCC 20612, inokuliert und dann wurde die Kultivierung 24 Stunden bei 28°c durchgeführt.
10 ml der erhaltenen Kulturlösung wurden dann in zwei
Erlenmeyer-Kolben gegeben, in denen 300 ml BS-Medium (sterilisiert bei 120°C während 30 Minuten) vorlag
und dann wurde eine Schüttelkultur während 24 Stunden bei 28 C unter Erhalt einer Vorkultivierung durchgeführt.
20 1 eines Mediums, enthaltend 10 % Saccharose, 1,0 %
Pepton, 0,7 % Fleischextrakt, 0,3 % NaCl und 0,1 % CoCl2·6Η2Ο wurden in einen 30 1 Fermentator gegeben
und nach 30-minütigem Sterilisieren bei 1200C gekühlt
und mit 600 ml der vorerwähnten Kulturlösung kultiviert. Die Kultivierung wurde 24 Stunden bei 28°C mit 240 üpm
durchgeführt. Nach dem Kultivieren wurden die Zellen abzentrifugiert, wobei man 400 g eines Rohenzyms erhielt.
Dieses Rohenzym (die bei der Zentrifugierung erhaltenen Zellen) hatte eine Enzymaktivität von 12.000
Einheiten/g.
10 kg Saccharose wurden in 6,7 1 Wasser gelöst und auf einen pH von 6,O eingestellt und dann wurde das
Enzym in einer Menge von 30 Einheiten/g Saccharose zugegeben und die Transferaseumsetzung wurde 48 Stunden
bei 60 C durchgeführt. Nach Beendigung der Transferasereaktion wurde das Reaktionsgemisch 15 Minuten auf
100 C zur Inaktivierung des Enzyms erwärmt und
130061/0703
- 36 -
- 36 -
anschliessend durch Zugabe von Aktivkohle in einer Menge von 0,5 %, bezogen auf die Feststoffe, entfärbt.
Die Aktivkohle v/urde entfernt, mit Ionenaustauschharzen vom Amberlite 120-B- und Amberlite IRA-411-Typ
behandelt und dann auf 75 % w/w konzentriert, wobei man 11 kg eines niedrigkariogenen Süssungsmittels
erhielt, das folgende Zuckerzusammensetzung hatte: 0,8 % Fruktose, 31,5 % Glukose, 11,0 % Saccharose, 24,6 %
GF2, 25,1 % GF3 und 7,0 % GF4.
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Claims (11)
1.) Ein niedrigkariogenes Süssungsmittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an 1 bis 4 Molekülen
Fruktose, die an Saccharose gebunden sind.
2. Süssungsmittel gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , dass das Verhältnis in
Gew.% der Summe der Oligosaccharide mit 1 bis 4 Molekülen Fruktose, die an Saccharose gebunden
sind, zu dem Gehalt an dem Gewicht an freier Saccharose in dem Feststoff wenigstens 2,0/1 beträgt.
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•~ 2 —
3. Verfahren zur Herstellung eines niedrigkariogenen Süssungsmittels, dadurch gekennzeichnet,
dass man Saccharose in Gegenwart von Fruktosyltransf erase umsetzt.
4. Verfahren gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet , dass die Fruktosyltransferase
aus dem Genus Aspergillus erhalten wurde.
5. Verfahren gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet , dass die Fruktosyltransferase
aus dem Genus Fusarium erhalten wurde.
6. Verfahren gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet , dass die Fruktosyltransferase
aus dem Genus Gloeosporium erhalten wurde.
7. Verfahren gemäss Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Fruktosyltransferase
Aureobasidium pullulans var. melanigenum A-8
ATCC 20612 ist.
8. Verfahren zur Herstellung eines niedrigkariogenen --Nahrungsmittels, dadurch gekennzeichnet,
dass man als Süssungsmittel ein Gemisch verwendet, das hauptsächlich Oligosaccharide mit 1
bis 4 Molekülen Fruktose, gebunden an Saccharose, enthält.
9. Verfahren gemäss Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass das Verhältnis des Gewichtes
der Summe des Oligosaccharids mit 1 bis 4 Molekülen
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Fruktose, gebunden an Saccharose, zu dem Gewicht an freier Saccharose wenigstens 2,0/1 beträgt.
10. Verfahren gemäss Ansprüchen 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet , dass das Gemisch
hauptsächlich ein Gemisch aus Oligosacchariden mit 1 bis 4 Molekülen Fruktose, die an Saccharose
gebunden ist, darstellt.
11. Verfahren zur Herstellung eines Süssungsmittels
mit einem Gehalt an Sorbit und Mannit, dadurch g e · kennzeichnet , dass man Saccharose in
Gegenwart von Fruktosy!transferase umsetzt, unter Erhalt einer Zuckerlösung, enthaltend Glukose,
Fruktose, Saccharose und Oligosaccharide mit 1 bis Molekülen Fruktose, gebunden an Saccharose, worauf
man diese Lösung darm katalyticch bat einem pll !',wischen
7 und 9 reduziert.
130061/0703
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
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