DE2907635C2

DE2907635C2 - Reaktionsgefäß zum einmaligen Gebrauch für immunologische Bestimmungen

Info

Publication number: DE2907635C2
Application number: DE2907635A
Authority: DE
Inventors: Reijo Oulu Vihko
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1978-02-27
Filing date: 1979-02-27
Publication date: 1987-02-19
Also published as: FI56750B; GB2015158A; US4272478A; DE2907635A1; FI56750C; FI780656A7; GB2015158B

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Reaktionsgefäß zum einmaligen Gebrauch für immunologische Bestimmungen, insbesondere zur Durchführung von Reaktionen zwischen einem zu messenden Stoff, einem Markierungsstoff und einem Antikörper, mit an einer Wandungsfläche des Reaktionsgefäßes befestigten Antikörpern zum Binden der Reaktionsprodukte an das Reaktionsgefäß.
Man verwendet immunologische Analyseverfahren zur quantitativen Bestimmung von Verbindungen, die in Serumproben vorhanden sind, welche man von Patienten besonders in Krankenhaus- und Forschungslaboratorien gewonnen hat. Mit Hilfe der Bestimmungen erhält man Auskunft über eventuell im Patienten steckende Krankheiten. Derartige Bestimmungen können auch ein Teil von Untersuchungen sein, die beispielsweise zur Verfolgung des Schwangerschaftsverlaufes dienen.
Das wichtigste immunologische Analyseverfahren besteht heute aus dem radioimmunologischen Verfahren (RIA), das sich auf die Verwendung eines radioaktiven Markierungsstoffs gründet. Auch andere, nicht-radioaktive Markiervorgänge sind im Prinzip möglich, jedoch ist infolge der niedrigeren Empfindlichkeit deren Bedeutung in der Praxis zumindest im Moment gering.
Die immunologischen Analyseverfahren gründen sich auf eine Reaktion, die sich zwischen der vom Patienten bezogenen zu bestimmenden Substanz und einem Antikörper abspielt, wobei als Reaktionsprodukt ein unlöslicher Komplex entsteht. Als radioaktive Markiersubstanz benutzt man mit dem zu messenden Stoff bzw. mit dem Antikörper fast identische Moleküle, die gewöhnlich mit Jod-125 oder mit Tritium markiert sind. Das Markieren hat keinen Einfluß auf die chemischen Eigenschaften des Moleküls. Das Ergebnis erhält man, indem man die Strahlung mißt, die der an der Reaktion beteiligt gewesene Markierstoff aussendet. Als Meßstoffe können zahlreiche in biologischen Proben vorkommende Stoffe in Frage kommen, so z. B. Hormone, Proteine, Medikamente und Vitamine. Die Antikörper sind in solchem Fall Proteinmoleküle, die mit Hilfe von Versuchstieren (wie beispielsweise Kaninchen) hergestellt werden. Der besondere Vorzug des radioimmunologischen Verfahrens ist seine hohe Empfindlichkeit, die das genaue und spezifische Analysieren sogar von Stoffmengen der Größenordnung 10^-12 g zuläßt.
In der Praxis führt man radioimmunologische Bestimmungen unter Verwendung fertig ausgerüsteter Reagenzsätze aus, die u. a. den Antikörper und den Markierstoff enthalten. Den zu messenden Stoff erhält man mittels einer Blutprobe vom Patienten, von der das Serum nach Abscheiden der Rotzellen in das Reaktionsgefäß überführt wird. Falls der Markierstoff chemisch dem zu messenden Stoff entspricht, wird er zusammen mit dem Antikörper in das Reaktionsgefäß eingegeben. Andererseits verwendet man heute als Reaktionsgefäße auch Proberöhren, bei denen z. B. der Antikörper schon fertig an der Innenfläche der Röhre haftend vorgesehen ist, vgl. US 36 46 346. Das in dem zu messenden Stoff enthaltene Serum und der Markierstoff werden dann in die Proberöhre eingebracht und die als Reaktionsprodukte entstehenden komplexen Verbindungen werden an der Röhrenwandung gebunden, deren Radioaktivität nach erfolgtem Entfernen desjenigen Markierstoffs gemessen wird, der nicht reagiert hat. Falls man als Markierstoff radioaktiv markierte Antikörper benutzt, muß man die Reaktionen in zwei Stufen vornehmen, indem man erst den zu messenden Stoff an der Röhre anhaften läßt und in der darauffolgenden Phase in die Röhre Markierstoffe einführt, der sich weiter an den zu messenden Stoff anlagert.
Die zu immunologischen Bestimmungen geeigneten Antikörper zeichnen sich aus durch äußerst hohe Spezifität, d. h. das Vermögen, nur mit einem gewissen, als Messungsobjekt vorliegenden Stoff zu reagieren. Dementsprechend erfordert jeder zu messende Stoff seinen eigenen Reagenzsatz. Sollen nun viele verschiedene Stoffe gemessen werden, so wird die Zahl der auszuführenden Bestimmungen hoch.
Ziel der vorliegenden Erfindung ist es, die angeführten Nachteile zu vermeiden und eine gleichzeitige Bestimmung von mehreren Stoffen zu ermöglichen, um die von Laboratorien ausgeführten Diagnosen und sonstigen Untersuchungen zu beschleunigen.
Dieses Ziel wird erfindungsgemäß bei dem eingangs genannten Verfahren dadurch erreicht, daß das Reaktionsgefäß aus sich untereinander lösbar zusammenschließenden Teilen zusammengesetzt ist, die an ihren Wandungsflächen verschiedenartige Antikörper tragen, so daß mehrere zu messende Stoffe gleichzeitig von ein und derselben im Reaktionsgefäß enthaltenen Probe bestimmt werden können.
Erfindungsgemäß werden die verschiedenen Stoffe in verschiedenen Teilen des Reaktionsgefäßes an dem an jedem einzelnen Teil angehafteten Antikörper entsprechend gebunden. Nach erfolgter Reaktion werden die Teile zum Zwecke des Messens ihrer Radioaktivität voneinander getrennt. Beispielsweise können beim Verfolgen einer Schwangerschaft das allgemeine Wohlbefinden des Fötus, eventuelle angeborene Krankheiten oder eine eventuelle Zwillingsschwangerschaft an Hand gewisser im Blut der Mutter vorkommender Stoffe festgestellt, und bei Anwendung des erfindungsgemäßen Reaktionsgefäßes diese Stoffe alle simultan bestimmt werden.
Eine vorteilhafte Ausführungsform der Erfindung ist dadurch gekennzeichnet, daß sich das Reaktionsgefäß aus rohrförmigen Teilen zusammensetzt. Das Reaktionsgefäß kann in diesem Fall aneinanderschließende rohrförmige Teile umfassen, deren Innenflächen zumindest teilweise mit verschiedenartigen Antikörpern beschichtet sind. Ein derartiges Reaktionsgefäß ähnelt einem üblichen Reagenzglas. Seine Anwendung ist ebenso mühelos. Andererseits besteht die Möglichkeit das Reaktionsgefäß aus ineinandersteckenden Teilen auszubauen, von denen der äußere, rohrförmige Teil an seiner Innenfläche und der innere Teil an seiner Außenfläche verschiedene Antikörper tragen kann.
Die Erfindung wird nachstehend mit Hilfe von Beispielen und unter Verweis auf die Zeichnung beschrieben, wobei
Fig. 1 ein aus aneinanderschließenden rohrförmigen Teilen bestehendes Reaktionsgefäß darstellt,
Fig. 2 das Reaktionsgefäß der Fig. 1 nach erfolgtem Trennen der Teile voneinander, und
Fig. 3 ein aus ineinandersteckenden Teilen bestehendes Reaktionsgefäß teilweise im Schnitt zeigt.
In Fig. 1 ist ein Reaktionsgefäß 1 zum einmaligen Gebrauch zur radioimmunologischen Bestimmung dargestellt. Dieses Gefäß 1 besteht aus vier aufeinanderfolgenden rohrförmigen Teilen 2, 4, 4 und 5, die voneinander lösbar sind, wie aus Fig. 2 zu ersehen ist. Die Verbindung der Teile erfolgt über Anschlußglieder 6 und ringförmige Kerben 8 in den Innenflächen 7 der Teile 2 bis 4. Das Reaktionsgefäß ist vorzugsweise aus elastischem Kunststoff gefertigt, so daß sich die Teile 2 bis 5 leicht durch Ziehen voneinander lösen lassen.
Das Reaktionsgefäß 1 gemäß Fig. 3 besteht aus zwei ineinanderliegenden Teilen 9, 10. Die Reaktion findet in dem zwischenliegenden Raum 11 statt. Die Teile 9 und 10 können untereinander z. B. durch zwischen die Innenfläche 12 des äußeren, rohrförmigen Teiles 9 und die Außenfläche 13 des inneren Teiles 10 eingespannte Verbindungsglieder miteinander vereinigt sein (nicht eingezeichnet). Es ist hierbei lediglich wesentlich, daß das Lösen der Teile 9, 10 voneinander mühelos erfolgen kann.
Radioimmunologische Bestimmungen gründen sich in erster Linie auf Reaktionen, die sich zwischen den im Blut vorkommenden, zu messenden Stoffen, spezifischen Antikörpern und radioaktiven Markierstoffen abspielen. Mittels des in Fig. 3 dargestellten Reaktionsgefäßes kann die gleichzeitige Bestimmung von zwei, und mittels des in Fig. 1 dargestellten Gefäßes sogar die von vier verschiedenen Meßstoffen gleichzeitig erfolgen. Im Gefäß der Fig. 3 sind an der Innenfläche 12 des äußeren Teils 9 und an der Außenfläche 13 des inneren Teils 10 zwei verschiedene Antikörper angebracht, die jeweils ihr eigenes Antigen und ihren eigenen Markierstoff binden. Nach erfolgter Reaktion werden die Teile 9, 10 voneinander gelöst. Anschließend wird getrennt die abgegebene Strahlung gemessen. Entsprechend sind im Reaktionsgefäß der Fig. 1 verschiedenartige Antikörper derart an der Innenfläche 7 des Gefäßes vorgesehen, daß jeder der Teile 2 bis 5 je sein eigenes Antigen bindet.
Als Beispiele von Stoffkombinationen, zu deren Bestimmung man das erfindungsgemäße Reaktionsgefäß einsetzen kann, seien erwähnt: Östriol, Plazentalactogen (HPL) und α-Fetoprotein (α-FP), auf deren Basis man das Befinden des Fötus beurteilt; Thyroxin (T₄), Tr&ijlig;odothyronin (T₃) und das schilddrüsenstimulierende Hormon (TSH), an Hand deren man die Funktion der Schilddrüse schätzt; sowie Phenytoin, Carbamazepin, Phenobarbital und Ethosukzimid, die eine Beobachtung der Epilepsietherapie ermöglichen.

Claims

1. Reaktionsgefäß zum einmaligen Gebrauch für immunologische Bestimmungen, insbesondere zur Durchführung von Reaktionen zwischen einem zu messenden Stoff, einem Markierungsstoff und einem Antikörper, mit an einer Wandungsfläche des Reaktionsgefäßes befestigten Antikörpern zum Binden der Reaktionsprodukte an das Reaktionsgefäß, dadurch gekennzeichnet, daß das Reaktionsgefäß (1) aus sich untereinander lösbar zusammenschließenden Teilen (2-5, 9-10) zusammengesetzt ist, die an ihren Wandungsflächen (7, 12, 13) verschiedenartige Antikörper tragen, so daß mehrere zu messende Stoffe gleichzeitig von ein und derselben im Reaktionsgefäß enthaltenen Probe bestimmt werden können.

2. Reaktionsgefäß nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Reaktionsgefäß (1) rohrförmige Teile (2-5, 9) umfaßt.

3. Reaktionsgefäß nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Reaktionsgefäß (1) aus aneinandergesetzten rohrförmigen Teilen (2-5) besteht, deren Innenflächen (7) zumindest teilweise mit verschiedenen Antikörpern überzogen sind.

4. Reaktionsgefäß nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Reaktionsgefäß (1) aus ineinanderliegenden Teilen besteht, wobei jeweils die Innenflächen (12) der äußeren rohrförmigen Teile (9) und die Außenflächen (13) der inneren Teile (10) verschiedenartige Antikörper tragen.