DE3782440T2

DE3782440T2 - Verfahren und ausruestung zur herstellung von radioaktivmarkierten antikoerpern fuer die in-vivo-krebsdiagnose und therapie.

Info

Publication number: DE3782440T2
Application number: DE8787200081T
Authority: DE
Inventors: Erfinder Wird Nachtraeglich Benannt Der
Original assignee: Rhomed Inc
Current assignee: Rhomed Inc
Priority date: 1986-01-24
Filing date: 1987-01-20
Publication date: 1993-04-08
Anticipated expiration: 2007-01-21
Also published as: CA1305919C; DE3782440D1; EP0234612B1; EP0234612A1; US4940670A; AU6785987A

Description

Diese Erfindung betrifft ein Verfahren und eine Vorrichtung zum Selektieren mindestens einer monoklonalen Antikörper-Komponente und zum Herstellen von Komponenten oder Verbindungen verwendbar beim Formulieren oder Zusammensetzen eines Medikaments, welches bei einem Patienten für die Feststellung oder Behandlung von Krebs und bei Qualitätskontrolltests der entstehenden Verbindung zu verwenden ist.
Die Verwendung von Zusammensetzungen, welche Strahlung in Mengen emittieren, welche nach der Verabreichung an den Patienten festgestellt werden können, ist im Stand der Technik bekannt. Die Verwendung von Zusammensetzungen, welche Strahlung in Mengen emittieren, die von Krebs befallene Gewebe durch Konzentrieren der Radioaktivität im Bereich von Tumoren zerstören können, nachdem die radioaktiv markierte Zusammensetzung dem Patienten verabreicht wurde, ist im Stand der Technik ebenfalls bekannt. Die wirksame Verwendung dieser Zusammensetzungen ist jedoch limitiert, wenn diese Patienten mit Tumoren verabreicht werden, die die besonderen antigenischen Determinanten nicht exprimieren, welche von den in der Zusammensetzung verwendeten Antikörpern erkannt werden. Diese Zusammensetzungen des Standes der Technik beruhen auf der Selektion von Antikörpern unter Verwendung von Kriterien bekannter oder angenommener Prävalenz eines bestimmten, mit einem bestimmten Tumortyp assoziierten Antigens. Z.B. Colontumoren exprimieren häufig carcinoembryonales Antigen (CEA), daher enthält eine Antikörperzusammensetzung für Colontumoren wahrscheinlich Antikörper, die mit CEA reaktiv sind. Ein solcher Antikörper muß jedoch nicht die wirksamste Wahl für die Behandlung eines Tumors eines bestimmten Patienten sein. Es ist daher außerordentlich wünschenswert, vorher festzustellen, ob ein bestimmter Antikörper an den Tumor eines bestimmten Patienten bindet, damit dieser Antikörper für die Verwendung in einem Medikament oder einer Zusammensetzung, welche dem Patienten verabreicht wird, selektiert wird. Es ist weiters wünschenswert, vor der Verabreichung an einen Patienten eine Qualitätskontrolle einer Verbindung durchzuführen, um sicherzustellen, daß die Verbindung an den Tumor bindet.
Festphasensysteme des Standes der Technik zur Bestimmung von Reaktionen zwischen Antigenen und Antikörpern werden in großem Umfang in vielen Assaysystemen verwendet, insbesondere in Radioimmunoassays. In dieser Festphasentechnologie werden das Reagenz oder die Reagenzien, die im Testverfahren verwendet werden, üblicherweise immobilisiert, indem sie auf ein Festphasenmaterial, wie z.B. ein Teströhrchen oder eine Sonde, aufgetragen oder an dieses gebunden werden, welches dann in die zu testende Probe eingetaucht wird. Zusätzliche Reagenzien werden dann beigegeben, um das Festphasenmaterial an einen Indikator zu koppeln. Häufig verwendete Indikatoren sind wie folgt: (1) Antikörper gekoppelt an Enzyme und dann weiters mit einem Enzymsubstrat in Kontakt gebracht, sodaß sich eine Farbreaktion ergibt; (2) Antikörper gekoppelt an eine fluoreszierende Substanz, welche auf bestimmte Frequenzen von Licht- oder Strahleneinwirkung anspricht, und (3) Antikörper gekoppelt an Radioisotopen, welche mit Hilfe von Strahlungsdetektoren oder -systemen nachgewiesen werden. Einige Festphasensysteme vewenden Lektine oder andere biologische Moleküle, welche spezifische Bindungen zwischen Molekülen herstellen. Beispiele für Erfindungen, welche diese Art von Assay umfassen, sind: U.S. Patent Nr. 4,081,244 mit dem Titel "IMMUNOASSAY PROCEDURE EMPLOYING NOVEL IMMUNOCHEMICAL COMPOSITES", Polito et al.; U.S. Patent Nr. 4,092,408 mit dem Titel "METHOD FOR SOLID PHASE IMMUNOLOGICAL ASSAY OF ANTIGEN", Litt; und U.S. Patent Nr. 4,225,575 mit dem Titel "METHOD AND APPARATUS FOR PERFORMING IN VITRO CLINICAL DIAGNOSTIC TESTS USING A SOLID PHASE ASSAY SYSTEM", Piasio et al. Diese Methoden des Standes der Technik sind von Nutzen beim Nachweis und bei der Messung von Substanzen, wie z.B. Hormonen oder Antikörpern, welche in biologischen Flüssigkeiten, wie z.B. Seren, vorkommen. Ein häufiger Test, bei dem diese herkömmliche Methode verwendet wird, ist ein Schwangerschaftstest, bei dem das Hormon HCG im Urin oder Blut nachgewiesen wird. Diese herkömmlichen Methoden sind jedoch nutzlos beim Nachweis von Antikörpern und Antigenen, die in einer Tumorprobe gefunden werden, und weiters liefern sie keine Mittel zum Selektieren von Antikörpern, die beim Zusammensetzen eines an einen bestimmten Patienten zu verabreichenden Medikaments verwendet werden sollen. Weiters sind diese herkömmlichen Methoden nur nützlich bei der Bestimmung der Gegenwart und Konzentration von antigenischen Substanzen in Lösungen und nicht bei der Bestimmung, welche Antikörper mit einer Probe eines bestimmten Tumors eine Reaktion eingehen. Die vorliegende Erfindung unterscheidet sich vom Stand der Technik dadurch, daß das Testmaterial einem soliden Tumor statt einem flüssigen entnommen wird, und daß diese Tumorprobe an die Festphase statt an Reagenzien fixiert wird.
U.S.Patent 4,522,918 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern, die mit Brustkrebs reaktiv sind, mit Hilfe einer bestimmten Hybridomatechnik.
WOA 8 503 523 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung von monoklonalen Antikörpern ebenfalls gegen Brustkrebs beim Menschen.
GB 2 147 698 betrifft eine Vorrichtung in Form eines Einsatzes mit einer einzigen Testfläche an seinem Ende, während die erfindungsgemäße Vorrichtung unabhängige Testflächen umfaßt.
Verfahren zur Durchführung von mehrfachen, simultanen Festphasenassays mit Antigenen und Antikörpern wurden im Stand der Technik beschrieben. U.S. Patent Nr. 4,378,344 mit dem Titel "METHOD AND APPARATUS FOR PERFORMING MULTIPLE, SIMULTANEOUS IN VITRO DIAGNOSTIC TESTS USING A SOLID PHASE SYSTEM", Zahradnic et al, beschreibt eine Assaymethode mit Verwendung einer Vorrichtung, welche einen Behälter und einen Einsatz umfaßt, wobei in jedem Festphasenreagenzien an Flächen fixiert sind, die mit der flüssigen Probe in Berührung kommen, welche analysiert wird. U.S. Patent Nr. 4,459,360 mit dem Titel "MULTIPLE - COMPONENT BINDING ASSAY SYSTEM AND METHOD OF MAKING AND USING IT", Marinkovich, beschreibt eine Assaymethode unter Verwendung eines fadenförmigen Gebildes, in dem jeder Faden ein anderes Allergen bindet. Dieses Assaysystem ist besonders geeignet für den Nachweis von Ige-Antikörpern in flüssigen Proben. Diese Patente des Standes der Technik lehren die Verwendung von Festphasenreagenzien beim Nachweis von verschiedenen Substanzen, die in üblichen Lösungen enthalten sind. Diese Patente des Standes der Technik sind jedoch nur verwendbar beim Testen von Flüssigkeiten, und insbesondere nur beim Testen von Flüssigkeiten, die für in vitro Diagnosetests verwendet werden. Die vorliegende Erfindung verwendet jedoch Tumorgewebe als Festphase und testet dieses auf Reaktivität mit einer Serie von verschiedenen Lösungen bestimmter Zusammensetzungen. Diese Art des Testens kann mit Hilfe von herkömmlichen Methoden und Vorrichtungen nicht durchgeführt werden.
Andere Patente des Standes der Technik betreffend den Nachweis von Antigenen folgen. U.S. Patent Nr. 3,673,410 mit dem Titel "METHOD OF EXAMINATION OF CELL SAMPLES USING A RADIOACTIVELY TAGGED DYE", Waite et al., beschreibt die Untersuchung von Gewebeproben mit Hilfe eines Screening-Verfahrens zum Nachweis einer Krankheit. U.S. Patent Nr. 3,856,920 mit dem Titel "METHOD OF SCREENING TISSUE SPECIMENS FOR DIAGNOSTIC EXAMINATION", Nodine et al., ist eine Verbesserung in bezug auf das U.S. Patent Nr. 3,673,410, und sieht die automatische Eliminierung von Proben vor, die keine Untersuchung mit Hilfe von gründlicheren Diagnoseverfahren erfordern. Beachtliche Verbesserungen in bezug auf diese Versuche ergaben sich aus Methoden, die eine Festphasenpräsentation von Proben für die Bestimmung eines oder mehrere Antigene oder Antikörper durch Nachweis des entsprechenden Antikörpers oder Antigens verwenden. U.S. Patent Nr. 4,187,075 mit dem Titel "METHOD OF ANALYZING BIOLOGICAL, LIQUID SPECIMENS FOR ANTIGENS OF ANTIBODIES", Noller, beschreibt eine Methode zum Nachweisen entweder eines Antigens oder Antikörpers in einer Festphasenpräsentation einer Körperflüssigkeit des Menschen. U.S. Patent Nr. 4,495,295 mit dem Titel "IMNUNOASSAYS USING SUPPORT-CONTAINING SEPARATE ANTIGENS AND ANTIBODIES DERIVED FROM AN IMMUNE COMPLEX", Neurath, verbessert frühere Methoden zum Nachweis von Antigenen oder Antikörpern durch die Verwendung eines dissoziierten Puffers beim Verfahren zum Trennen von Antigen-Antikörper-Komplexen. U.S. Patent Nr. 4,495,296 mit dem Titel "LABELED ANTI-HAPTEN ANTIBODIES AND THEIR USE AS A UNIVERSAL REAGENT FOR SOLID PHASE RADIO-AND/OR ENZYME- IMMUNOASSAYS", Neurath et al., verbessert den Nachweis von Antigenen oder Antikörpern durch die Verwendung von Antihapten-Antikörpern als universelle Reagenzien. Die vorliegende Erfindung verbessert diese herkömmlichen Methoden durch die Verwendung einer Serie von verschiedenen Antikörpern in einer parallelen Serie, wodurch der Nachweis von individuellen Reihen von Antigenen ermöglicht wird, um die Eigenschaften des Tumors eines bestimmten Patienten zu definieren. Die vorliegende Erfindung sieht ein Kit und eine Methode zum Anpassen von Antikörpern an Aliquoten von Tumorbiopsieproben, zum Selektieren von monoklonalen Antikörpern zur Verwendung bei der Zubereitung von Medikamenten auf der Basis von Antikörpern, die den antigenischen Eigenschaften eines bestimmten Tumors angepaßt werden, und für die Durchführung eines Qulitätskontrolltests des hergestellten Medikaments vor.
U.S. Patent Nr. 4,513,088 mit dem Titel "ASSAY FOR MONOCLONAL AGAINST SURFACE IG OF A HUMAN B-CELL TUMOR", Levy et al., beschreibt eine Methode zum Nachweis von Antikörpern durch spezifisches Screening von Hybridzellflüssigkeit auf anti-idiotypische Antikörper. Diese Methode ermöglicht das Selektieren von Antikörpern, die bei der Behandlung von menschlichen B-Zelltumoren nützlich sind. Die vorliegende Erfindung ist eine Verbesserung in bezug auf die Methode nach Levy et al., da sie das Selektieren von Antikörpern für die Diagnose und Behandlung von soliden Tumoren erlaubt. Weiters können bei Anwendung der vorliegenden Erfindung Antikörper zu allgemein tumorassoziierten Antigenen anstatt zu anti-idiotypischen Antikörpern selektiert werden.
Die Standardmethode des Standes der Technik zur Bestimmung, ob ein bestimmter monoklonaler Antikörper mit einem Tumor eines einzelnen Patienten eine Reaktion eingeht, erfordert die Herstellung von Scheiben des Tumors, das Aufbringen der Scheiben auf einen Objektträger und das Färben der Scheiben mit dem Antikörper von Bedeutung. Ein eigener Objektträger ist für jeden Antikörper erforderlich, wenn mehr als ein Antikörper getestet wird. Eine Alternativmethode des Standes der Technik besteht darin, eine Probe des Tumors zu entnehmen und diese so zu behandeln, daß die einzelnen Zellen des Tumors dispergieren. Die Zellen werden mit Antikörpern, welche mit fluoreszierender Farbe markiert sind, zur Reaktion gebracht und durch einen Zellsortierer geführt, welcher die Zellen, die mit dem Antikörper eine Reaktion eingegangen sind, zählt. Bei Verwendung dieser Methode wird für jeden Antikörper, der getestet wird, eine eigene Zellsortieranalyse durchgeführt. Diese Methoden des Standes der Technik können nicht für rasche Mehrfachantikörper-Screening-Assays verwendet werden. Einzelne Proben müssen durch speziell ausgebildetes Personal bearbeitet und einzeln auf die Reaktivität mit einem bestimmten Antikörper getestet werden. Somit sind diese herkömmlichen Methoden kostenintensiv, zeitaufwendig und schwierig zu standardisieren. Die vorliegende Erfindung sieht das einfache und rasche Testen einer Tumorprobe auf Reaktivität mit einer Serie von verschiedenen Antikörpern vor, wobei gleichzeitig Qualitätskontrollmessungen erfolgen, um standardisiertes Testen zu gewährleisten.
Eine Methode zum Binden von Antigen an eine Festphase für den Nachweis von spezifischen monoklonalen Antikörpern wurde von Suresh, M.R. und Milstein, C., Analytical Biochemistry, "A Direct Antigen - Binding Assay to Screen Hybridoma Supernants", 151, 192-195 (1985) beschrieben. Bei dieser Methode wird das Antigen an Nitrocellulosefilter fixiert, welche an einem Kunststoffeinsatz befestigt sind. Der Einsatz wird Lösungen ausgesetzt, die auf das Vorhandensein von Antikörpern untersucht werden, welche mit dem fixierten Antigen reaktiv sind. Die Gegenwart eines spezifischen Antikörpers in einer getesteten Lösung wird nachgewiesen, indem die Nitrocellulosefilter einer Nachweislösung ausgesetzt werden, welche einen Antikörper konjugiert mit einem Enzym enthält, welches eine Farbreaktion erzeugt, wenn es dem geeigneten Enzymsubstrat ausgesetzt wird. Diese Methode ist geeignet für ein Screening-Verfahren bei Hybridoma-Zellen, um jene zu selektieren, welche Antikörper sekretieren, der spezifisch für ein bestimmtes Antigen ist. Diese herkömmliche Methode wird verwendet, um einen bestimmten Antikörper zu finden, der in der Lösung enthalten sein kann. Diese Methode ist jedoch nicht verwendbar bei der Bestimmung, welche Antigene enthalten sind, und somit welche Antikörper oder Antikörperfragmente mit einer Tumorprobe eine Reaktion eingehen.
Die Verwendung von herkömmlichen Methoden für die Behandlung oder Diagnose von Krebs erfordert oft die Verabreichung eines Medikaments an einen Patienten, bevor bestimmt wird, ob diese Verbindung günstige Wirkungen haben wird oder nicht. Auch wenn für einen Patienten vor der Behandlung bei einem Medikament ein Screening-Verfahren durchgeführt wird, ist ein wiederholtes Screening oft zu teuer. Herkömmliche Methoden für ein Screening-Verfahren bei Medikamenten zur Behandlung von Krebs, um die potentielle Wirksamkeit eines bestimmten Medikaments für die Verwendung in einem bestimmten Patienten vorauszusagen, beruhen auf dem Wachstum von Tumorzellen in Gewebekulturen und der Behandlung der wachsenden Zellen mit verschiedenen Konzentrationen von verschiedenen krebsbekämpfenden Medikamenten. Die in vivo Wirksamkeit wird aus der gemessenen Wirkung des Medikaments auf das in vitro Wachstum der Tumorzellen in der Gewebekultur ermittelt. Siehe "Applications of the Human Tumor Stem Cell Assay to New Drug Evaluation and Screening", S.E. Salmon, Prog. Clin. Biol. Res, Band 48, S. 291-312, (1980). Diese herkömmliche Methode ist sehr arbeitsaufwendig und kann nur in Fällen verwendet werden, in denen die Tumorzellen tatsächlich in Gewebekulturen wachsen können. Die vorliegende Erfindung vermeidet die Notwendigkeit des Tumorzellenwachstums und des Messens der Wirkungen dem Medikaments auf das Tumorzellenwachstum. Ein Vorteil der vorliegenden Erfindung besteht darin, daß, wenn Tumorzellen zwischen Behandlungen einer antigenischen Modifikation (der Tumor ändert seinen Charakter) ausgesetzt sind, die erfindungsgemäße Selektionsmethode wieder verwendet werden kann, um zu bestimmen, ob andere Antikörper für die nächste Behandlung selektiert werden sollen.
Diese Erfindung betrifft eine Methode und eine Vorrichtung zum Selektieren, Herstellen und Testen der Qualität von zumindest einer monoklonalen Antikörper-Komponente oder Antikörper-Fragmenten für den Nachweis und die Behandlung von krebsartigen Tumoren. Die Verwendung der erfindungsgemäßen Methode und Vorrichtung ermöglicht das Herstellen von spezifischen Medikamenten für den Bedarf jedes einzelnen Patienten. Die Erfindung ist eine Verbesserung in bezug auf Methoden und Vorrichtungen des Standes der Technik.
Erfindungsgemäß ist eine Methode zum Selektieren von Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten vorgesehen, die spezifisch an den Tumor eines einzelnen Patienten binden. Die Methode umfaßt das gleichzeitige Testen von verschiedenen Antikörpern, um den Antikörper oder die Antikörper, die an einen Tumor binden, von jenen zu unterscheiden, welche nicht an den Tumor binden. Die Methode umfaßt weiters vorzugsweise das Mischen von selektierten Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten mit einem Radionuklid.
Die erfindungsgemäße Selektiervorrichtung umfaßt einen Einsatz und einen dazupassenden Behälter. Der Einsatz umfaßt mindestens zwei Vorsprünge, die in den dazugehörigen Behälter genau passen. In der bevorzugten Form der Erfindung umfaßt jeder Vorsprung mindestens drei Testflächen. Die erste Testfläche ist eine negative Kontrollfläche. Diese Fläche enthält eine antigenische Substanz, wie z.B. Rinderserumalbumin, welches in bezug auf monoklonale Antikörper, die spezifisch für tumorassoziierte Antigene sind, nicht reaktiv ist. Die zweite Fläche ist die Testfläche, an die die Tumorprobe gebunden ist. Die dritte Fläche ist eine positive Kontrollfläche, die eine antigenische Substanz, wie z.B. ein Homogenat eines Tumorxenografts, enthält, welches reaktiv ist mit einem der zu testenden, spezifischen monoklonalen Antikörper.
In einer alternativen Ausführung der Erfindung umfaßt die positive Kontrollfläche der Selektiervorrichtung Nebenflächen, an die unterschiedliche Mengen des antigenischen Materials gebunden sind, sodaß verschiedene Nachweismengen auf den Kontrollnebenflächen nach dem Testen der Antikörper vorhanden sind. Die Menge an nachgewiesenem Material auf den positiven Kontrollflächen kann dann mit der Menge an nachgewiesenem Material auf der Tumortestfläche verglichen werden, um festzustellen, welche Antigenmenge im Tumor enthalten ist. Dies hilft zur Bestimmung der Antikörpermenge, die in der Verbindung oder im Medikament verwendet werden soll, welches dem Patienten zu verabreichen ist.
Vorzugsweise haben der Behälter und der Einsatz der erfindungsgemäßen Selektiervorrichtung einander entsprechende Formen, so daß die Vorrichtung nicht falsch verwendet wird. Z.B. ein Einsatz zum Testen eines Lungentumors sollte nicht in einen Behälter zum Testen von Colonkrebs gegeben werden. Verschiedene Formen für den Einsatz/die Behälter können durch verschiedene Abstände zwischen den Vorsprüngen oder durch Formen des Einsatzes und der Behälter erreicht werden, sodaß nur der richtige Einsatz in den dazugehörigen Behälter paßt.
Die bevorzugte, erfindungsgemäße Selektiermethode zusammen in Verwendung mit der Selektiervorrichtung zur Anzeige, welche Antigene in der Tumorprobe enthalten sind, umfaßt die folgenden Schritte:
(1) Homogenisieren einer Tumorprobe entnommen mit Hilfe einer Biopsie oder eines chirurgischen Eingriffs;
(2) Suspendieren des Homogenats in einer Wasser- oder Salzlösung;
(3) Aufbringen von Aliquoten des suspendierten Homogenats auf Testflächen der erfindungsgemäßen Selektiervorrichtung;
(4) Fixieren des Homogenats auf den Testflächen;
(5) Beschichten der Testflächen, auf welchen die Tumorprobe fixiert wurde, mit überschüssigem antigenischem Material, welches nicht reaktiv ist, mit monoklonalen Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten, die für tumorassoziierte Antigene spezifisch sind, um sicherzustellen, daß alle restlichen Antigen-Bindungsstellen auf den Flächen gesättigt wurden;
(6) Binden des beigegebenen antigenischen Materials;
(7) Prüfen der Testflächen mit einer Serie von monoklonalen Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten;
(8) Waschen der Testflächen zum Entfernen von überschüssigem Antikörper oder überschüssigen Antikörper-Fragmenten, die keine Reaktion mit Antigen eingegangen sind;
(9) Entwickeln der gewaschenen Testflächen, um das Vorhandensein von Antikörper oder Antikörper-Fragmenten auf einer Festphase nachzuweisen;
(10) Entfernen und Waschen der Testflächen, um jede restliche Lösung zu entfernen und die Entwicklungsreaktion zu stoppen;
(11) Untersuchen der Testflächen zur Feststellung, ob, wenn überhaupt, Antikörper oder Antikörper-Fragmente mit der Tumorprobe eine Reaktion eingegangen sind und vorzugsweise der Intensität oder des Grads der Reaktion;
(12) Trocknen der Testflächen, sodaß diese, wenn erforderlich, als Bericht der Testergebnisse verwendet werden können.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Selektiermethode und -vorrichtung zeigt an, ob eine Antigen-Antikörper-Reaktion mit der Tumorprobe stattfindet, und vorzugsweise den Grad oder die Intensität der Reaktion. Besteht eine positive Reaktion, so ist der Antikörper in Verbindungen oder Medikamenten, die den Patienten verabreicht werden können, verwendbar. Der Grad oder die Intensität der Reaktion ist verwendbar bei der Bestimmung der Antikörpermenge, die in der Verbindung oder dem Medikament verwendet werden soll. Besteht keine Antigen-Antikörper-Reaktion, welche in den Testflächen angezeigt wird, so ist der getestete Antikörper ungeeignet für die Diagnose oder Behandlung des Tumors des Patienten.
Bei der erfindungsgemäßen Herstellungsmethode wird zumindest ein Antikörper oder Antikörper-Fragment, welches mit dem Tumor eines Patienten reaktiv ist, mit einem Radionuklid für die Verwendung beim in vivo-Krebsnachweis verarbeitet. Die Verbindung wird einem Qualitätskontrolltest unterworfen, um zu gewährleisten, daß die Formulierung das radioaktive Material an die dem Tumor des Patienten entnommene Probe bindet. Diese Verbindung wird dann einem Patienten verabreicht, und der Patient wird mit Hilfe einer Vorrichtung zur Bestimmung des Ausmaßes und der Lage des krebsartigen Tumors untersucht.
In einer alternativen erfindungsgemäßen Herstellungsmethode wird zumindest ein selektierter Antikörper oder ein selektiertes Antikörper-Fragment mit einem Radionuklid vermischt, um ein Radiopharmakon für die Immuntherapie des Tumors eines Patienten zu formulieren. Vor der Verabreichung des Radiopharmakons an den Patienten wird die Verbindung Tests zur Qualitätskontrolle unterworfen, um zu gewährleisten, daß das Radionuklid in entsprechender Weise hergestellt und mit den Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten kombiniert wurde.
Die erfindungsgemäße Methode und Vorrichtung sind auch verwendbar beim Selektieren und Mischen von Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten mit Chemikalien für die Chemotherapie oder mit Toxinen für die Immuntoxintherapie.
Die erfindungsgemäße Herstellungsvorrichtung umfaßt Mittel zum Mischen von mindestens einem selektierten Antikörper mit einem Marker-Reagenz und einem Radionuklid zur Herstellung einer radioaktiv-markierten Verbindung. Vorzugsweise umfaßt die Mischvorrichtung weiters Mittel, wie z.B. eine Filtersäule, zum Entfernen von Radionuklid-Verunreinigungen aus der radioaktiv-markierten Verbindung.
Die bevorzugte erfindungsgemäße Herstellungsmethode verwendet in Verbindung mit der Herstellungsvorrichtung zum Verarbeiten von selektierten Antikörpern mit einem Marker-Reagenz und einem Radionuklid umfaßt die folgenden Schritte:
(1) Herstellen mindestens eines selektierten Antikörpers zur Verwendung bei der Herstellung einer radioaktiv-markierten Verbindung;
(2) Mischen des Antikörpers mit einem Marker-Reagenz und einem Radionuklid; und
(3) Filtern der Verbindung zur Entfernung von Radionuklid-Verunreinigungen.
Die Verwendung der erfindungsgemäßen Methode schafft eine schnelle und kostengünstige Methode zur Bestimmung, welche Antikörper für einen bestimmten Patienten verwendet werden sollten, und zur Herstellung eines geeigneten Medikaments.
Die einzige Figur der Zeichnung der Erfindung zeigt ein bevorzugtes Ausführungsbeispiel der Selektiervorrichtung, wobei ein Einsatz mit sechs Vorsprüngen, welche jeweils drei Testflächen aufweisen, und ein Behälter gezeigt ist, der Reagenzien und verschiedene, zu testende monoklonale Antikörper oder Antikörper-Fragmente enthält.
Diese Erfindung betrifft eine Methode zur Herstellung von radioaktiv-markierten Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten für in vivo-Krebsnachweis und Therapie. Die Verwendung des Wortes "Antikörper" in der Beschreibung ist nicht einschränkend und bezieht sich auf die Einzahl oder Mehrzahl und umfaßt auch ein Antikörper-Fragment oder Antikörper-Fragmente.
Festphasenreaktionen erfolgen unter Verwendung der erfindungsgemäßen Selektiermethode und -vorrichtung, wobei das gleichzeitige Testen von mehrfachen Aliquoten einer Tumorprobe mit einer Serie von Antikörpern oder Antikörper-Fragmenten, die mit der Tumorprobe potentiell reaktiv sind, möglich ist.
Die einzige Figur der Zeichnung zeigt die erfindungsgemäße Vorrichtung, welche einen Einsatz 10 und einen Behälter 12 umfaßt. Der Einsatz 10 der vorliegenden Erfindung umfaßt mindestens zwei zahnähnliche Fortsätze oder Vorsprünge 14, auf denen jeweils kleine Volumina von Tumorbiopsiehomogenaten an Testflächen gebunden werden können. Im bevorzugten erfindungsgemäßen Ausführungsbeispiel umfaßt der Einsatz 10 mindestens drei Testflächen pro Vorsprung. Die einzige Figur der Zeichnung zeigt ein bevorzugtes Ausführungsbeispiel, bei dem der Einsatz 10 sechs Vorsprünge 14 und auf jedem Vorsprung drei Testflächen (16, 18 und 20) umfaßt. Die Testflächen (16, 18 und 20) auf jedem Vorsprung 14 enthalten ein Bindemittel, welches eiweißartige und andere antigenische Materialien bindet. Ein solches Bindemittel, welches in der vorliegenden Erfindung verwendbar ist, ist Nitrocellulosemembran. An eine negative Kontrolltestfläche 16 jedes Vorsprunges 14 ist eine antigenische Substanz, wie z.B. Rinderserumalbumin, gebunden, welche mit monoklonalen Antikörpern, die spezifisch für tumorassoziierte Antigene sind, nicht reaktiv ist. Die Testfläche 20 jedes Vorsprunges 14 hat kein an sie gebundenes antigenisches Material. Diese Fläche ist reserviert für das Fixieren einer Aliquote der dem Patienten entnommenen Tumorprobe. Zu testende monoklonale Antikörper werden selektiert, indem sie antigenischen Determinanten angepaßt werden, von denen vermutet wird, daß sie in einem bestimmten Tumortyp vorhanden sind. An eine positive Kontrollfläche 18 jedes Vorsprunges 14 ist eine antigenische Substanz, wie z.B. ein Homogenat eines Tumorxenografts, gebunden, das mit einem der spezifischen, monoklonalen Antikörper, die in der Testserie von monoklonalen Antikörpern enthalten sind, reaktiv ist.
Nach Abschluß der erfindungsgemäßen Methode hat die Tumortestfläche 20 den zu testenden Antikörper oder das zu testende Antikörper-Fragment gebunden, wenn eine Antigen-Antikörper-Reaktion stattgefunden hat, was anzeigt, daß dieser spezifische Antikörper an den Tumor bindet. Als alternatives und bevorzugtes Ausführungsbeispiel ist die positive Kontrollfläche 18 in mindestens zwei Nebenflächen 28 und 30 unterteilt, sodaß jede Nebenfläche eine unterschiedliche Konzentration der antigenischen Substanz enthält. Nach Abschluß der erfindungsgemäßen Methode enthalten die Nebenflächen unterschiedliche Antikörpermengen. Diese Mengen werden ermittelt und mit der Antikörpermenge verglichen, die auf der Tumortestfläche 20 vorhanden ist. Dies zeigt die Menge an antigenischem Material an, welches im Tumor enthalten ist, und hilft so bei der Bestimmung der Antikörpermenge, welche beim Kombinieren eines Medikaments für die Behandlung oder Diagnose zu verwenden ist.
Antigen-Antikörper-Reaktionen auf den Testflächen können mit Hilfe von Mitteln, welche aus dem Stand der Technik bekannt sind, nachgewiesen werden, welche umfassen:
(1) Dunkelfärben: Eine Anti-Antikörper-Peroxidase plus Substrat wird für die Entwicklung verwendet, und der Nachweis erfolgt durch visuelle Untersuchung oder andere Mittel.
(2) Farbbildung: Ein Anti-Antikörper-Enzym plus Substrat wird für die Entwicklung verwendet, und der Nachweis erfolgt durch visuelle Prüfung oder andere Mittel.
(3) Fluoreszenz: Ein Anti-Antikörper-Fluoreszenzfarbstoff wird für die Entwicklung verwendet, und der Nachweis erfolgt mit Hilfe eines Fluorimeters oder mit Hilfe von anderen Mitteln.
(4) Radioaktivität: Ein Anti-Antikörper-Radionuklid wird für die Entwicklung verwendet, und der Nachweis erfolgt mit Hilfe eines Strahlungsdetektors oder mit Hilfe von anderen Mitteln.
Der erfindungsgemäße Einsatz 10 paßt mit einem Behälter 12 zusammen. Vorzugsweise enthält der Behälter 12 mehrere Abteilungen. Die einzige Figur der Zeichnung zeigt vier Abteilungsreihen (siehe 32, 34, 36 und 38). Die erste Reihe Abteilungen 32 enthält vorzugsweise eine antigenische Substanz, wie z.B. Rinderserumalbumin, welches mit für tumorassoziierte Antigene spezifische, monoklonale Antikörper nicht reaktiv ist. Die zweite Reihe Abteilungen 34 enthält vorzugsweise verschiedene monoklonale Antikörper oder Antikörper-Fragmente, die getestet werden, um anzuzeigen, ob sie an den Tumor eines bestimmten Patienten binden. Wird z.B. ein Colontumor getestet, werden verschiedene Antikörper oder Antikörper-Fragmente zu Colontumorantigenen, wie z.B. CEA, in die zweite Reihe Abteilungen 34 des Behälters 12 gegeben. Die dritte und vierte Reihe Abteilungen 36 und 38 enthalten Reagenzien zum Nachweis der Antigen-Antikörper-Reaktion. Die strichlierte Linie in der einzigen Figur der Zeichnung gibt die Reihenfolge an, in welcher der Einsatz in die Abteilungsreihen des Behälters gegeben wird. Die erfindungsgemäße Vorrichtung ist insbesondere vorteilhaft in Kittform zum gleichzeitigen Testen von mehreren Antikörpern.
In einer alternativen Ausführungsform können die Reagenzien und/oder monoklonalen Antikörper in den erfindungsgemäßen Behälter in lyophilisierter (gefriergetrockneter) Form gegeben werden. Wasser, Seren oder das Serum des Patienten selbst können verwendet werden, um die Reagenzien wieder in Lösungsform zu bringen.
Die Form des Behälters der Selektiervorrichtung entspricht vorzugsweise der Form des Einsatzes. Vorzugsweise gibt man dem Behälter und dem Einsatz für jede zu testende Tumorart eine andere Form. So schafft man z.B. eine bestimmte Einsatz-/Behälterform für Lungentumoren und eine andere Einsatz-/Behälterform für Colontumoren. Verschiedene Formen von Einsatz und Behälter erhält man z.B. durch unterschiedliche Abstände zwischen den Fortsätzen jedes Einsatzes für jede Art von Krebstestvorrichtung, sodaß der Einsatz nur auf eine Art in den richtigen Behälter eingesetzt werden kann und daß ein Einsatz, der für eine bestimmte Krebsart hergestellt wurde, in einen Behälter für eine andere Krebsart nicht eingesetzt werden kann. Weiters erreicht man verschiedene Formen der Vorrichtungen durch verschiedenes Formen der Einsätze und der Behälter; so kann z.B. eine Testvorrichtung für Lungenkrebs runde Fortsätze am Einsatz aufweisen, welche in runde Abteilungen im Behälter passen, und eine Testvorrichtung für Colonkrebs kann flache Fortsätze am Einsatz aufweisen, welche in Schlitze in jeder Abteilung des Behälters passen. Die Verwendung von verschiedenen Formen für die Einsätze/Behälter gewährleistet, daß nur ein Einsatz für Lungenkrebs mit dem Behälter verwendet werden kann, der Antikörper enthält, welche mit Lungenkrebsantigenen reaktiv sind; und es kann nur der Einsatz für Colonkrebs mit dem Behälter verwendet werden, der Antikörper enthält, die mit Colonkrebs reaktiv sind. Der Vorteil der Verwendung von verschiedenen Formen für verschiedene Tumorarten besteht darin, daß eine falsche Verwendung des Produktes verhindert wird. Die Verwendung der Ausdrücke "Lunge" und "Colon" in der Beschreibung der Selektiervorrichtung hat nur erläuternde Bedeutung. Die erfindungsgemäßen Vorrichtungen und Methoden sind nicht auf diese Arten von krebsartigen Tumoren beschränkt, sondern verwendbar bei der Diagnose oder Behandlung jeder Tumorart.
Die erfindungsgemäße Selektiermethode umfaßt Fixieren einer Probe eines Tumorhomogenats an die Festphasen-Testfläche, Prüfen der Probe mit mindestens einem Antikörper und Nachweisen, ob eine Antigen-Antikörper-Reaktion stattgefunden hat.
Eine bevorzugte erfindungsgemäße Selektiermethode zur Feststellung, welcher aus der Serie von monoklonalen Antikörpern, wenn überhaupt, mit einer bestimmten Tumorprobe eine Reaktion eingeht, umfaßt die folgenden Schritte:
(1) Homogenisieren einer Probe eines Tumors, welche mit herkömmlichen Mitteln mit Hilfe von Biopsie oder eines chirurgischen Eingriffes entnommen wurde. Vorzugsweise wird das Tumorhomogenat in einer wäßrigen oder einer Salzlösung suspendiert, bevor die Probe auf eine Testfläche gegeben wird. Eine bevorzugte Lösung ist eine 0,15 u (0,05 N) Phosphatsalzlösung enthaltend ungefähr 0,9 Gew.% Natriumchlorid und mit einem pH-Wert von ungefähr 7,4. Diese Lösung kommt der Salzhaltigkeit und dem pH-Wert nahe, die normalerweise im menschlichen Körper herrschen.
(2) Aufbringen von Aliquoten des Tumorhomogenats auf Testflächen der Vorsprünge der erfindungsgemäßen Selektiervorrichtung. Das bevorzugte Volumen der Homogenataliquote liegt ungefähr zwischen 0,001 Milliliter und 1,0 Milliliter.
(3) Fixieren des Homogenats an die Testfläche. Das Fixieren erreicht man vorzugsweise durch Inkubieren, wie z.B. Inkubieren in feuchter Umgebung bei ungefähr 25ºC über einen Zeitraum von ungefähr 30 Minuten.
(4) Überziehen der Testfläche, an welche die Tumorprobe fixiert wurde, mit überschüssigem antigenischem Material, um zu gewährleisten, daß alle restlichen Antigen-Bindungsstellen auf der Fläche gesättigt wurden. Eine Vorgangsweise in diesem Zusammenhang ist die Zugabe einer 1%igen Lösung von Rinderserumalbumin in einer Menge, die ausreicht, die gesamte Testfläche zu bedecken.
(5) Binden des zugefügten, antigenischen Materials. Das Binden erfolgt vorzugsweise durch Inkubieren, wie z.B. Inkubieren in feuchter Umgebung bei ungefähr 25ºC über einen Zeitraum von ungefähr 30 Minuten. Restliches, nicht gebundenes antigenisches Material wird vorzugsweise durch Waschen der Vorsprünge des Einsatzes entfernt.
(6) Einführen des Einsatzes in einen passenden Behälter, welche eine Serie von monoklonalen Antikörpern enthält. Den Einsatz läßt man über einen ausreichend langen Zeitraum im Behälter, um den Antikörpern zu ermöglichen, mit den Antigenen, welche an den Einsatz gebunden sind, eine Reaktion einzugehen. Die Inkubationszeit liegt vorzugsweise zwischen 1 Minute und 24 Stunden und beträgt am vorteilhaftesten ungefähr 30 Minuten.
(7) Entwickeln des gewaschenen Einsatzes mit Reagenzien. Am vorteilhaftesten wird der Einsatz vor dem Entwickeln gewaschen, um alle Antikörper, welche mit Antigen keine Reaktion eingegangen sind, zu entfernen. Vorzugsweise wird der Einsatz entwickelt, indem er mit einem zweiten Antikörper zur Reaktion gebracht wird, der mit einem oder mit allen zu testenden Antikörpern der Serie reaktiv ist. Ziegen-Antimaus IgG, welches vorher mit einem Enzym, wie z.B. Meerrettichperoxidase, konjugiert wurde, ist ein bevorzugtes Entwicklungsreagenz. Der Einsatz wird in eine Lösung gegeben, die mit dem Entwicklungsreagenz reaktiv ist. Bei der Verwendung von Meerrettichperoxidase als Entwicklungsreagenz ist die reaktive Lösung vorzugsweise eine Peroxidlösung und am bevorzugsten eine wäßrige Lösung von 4-Chlor-2-naphthol und 1,0 % Wasserstoffperoxid. Die Peroxidlösung kann durch eine Enzymsubstraktreaktion hergestellt werden, wie z.B. durch die Reaktion von Glucoseoxidase mit Glucose. Die Antigen-Antikörper-Reaktion läßt man auf der Testfläche entwickeln, indem der Einsatz über einen Zeitraum von ungefähr 1 Minute bis 2 Stunden, und vorzugsweise ungefähr 10 Minuten, inkubiert wird. Nach dem Entwickeln wird der Einsatz am besten gewaschen, um jede zurückgebliebene Lösung zu entfernen und die Entwicklungsreaktion zu stoppen.
(8) Nachweisen des Vorhandenseins von Antikörpern auf dem Festphaseneinsatz, um festzustellen, welche Antikörper, wenn überhaupt, mit der Tumorprobe eine Reaktion eingegangen sind. Die Untersuchung kann visuell oder mit Hilfe von anderen Mitteln erfolgen, die aus dem Stand der Technik bekannt sind, um festzustellen, ob eine Antigen-Antikörper-Reaktion stattgefunden hat. Wird ein Entwicklungsreagenz, wie z.B. ein Ziegen-Antimaus IgG Meerrettichperoxidase/Wasserstoffperoxid/4-Chlor-2-naphthol-System verwendet, wird die Reaktion durch eine Dunkelfärbung der Fläche angezeigt, an die die Tumorprobe gebunden wurde. Die Kontrollflächen auf dem Einsatz werden untersucht oder auf andere Weise ausgewertet, um sicherzustellen, daß das Assay richtig verlaufen ist. Z.B. die Flächen, an welche das positive Kontrollantigen vorher gebunden wurde, sollten durch eine dunkelgefärbte Fläche anzeigen, daß eine Antigen-Antikörper-Reaktion stattgefunden hat. Die Flächen, an welche das negative Kontrollantigen vorher gebunden wurde, sollten durch eine nicht dunkelgefärbte Fläche anzeigen, daß keine Antigen- Antikörper-Reaktion stattgefunden hat. In einem alternativen Ausführungsbeispiel, in welchem verschiedene Mengen von Kontrollantigen verwendet werden, zeigen Nebenflächen der positiven Kontrollfläche des Einsatzes eine Stufung der Dunkelfärbung. In diesem Ausführungsbeispiel wird der Grad der Dunkelfärbung der Testfläche, an die die Tumorprobe gebunden ist, mit der positiven Kontrollfläche verglichen. Durch Vergleichen des Dunkelfärbungsgrades der Tumorfläche mit der Stufung der positiven Kontrollfläche kann die relative Menge von reaktivem Antigen in der Tumorprobe geschätzt werden.
Der Einsatz kann getrocknet werden, um als Bericht der Testergebnisse zu dienen. Wenn die Dunkelfärbung als Nachweismittel verwendet wird, kann der Einsatz photokopiert werden, sodaß diese Kopie als Bericht dienen kann.
Die erfindungsgemäße Selektiermethode und -vorrichtung können auch verwendet werden, um die relativen Mengen von verschiedenen Subpopulationen von Leukocyten zu bestimmen. Bei dieser Anwendung werden weiße Blutzellen getrennt und Aliquoten an den Testflächen der Vorsprünge fixiert. Die im Behälter verwendeten Antikörper sind eine Serie von Antikörpern, welche mit spezifischen Typen von menschlichen Leukocyten, wie z.B. Anti-T Helfer-Zellen und Anti-T Suppressor-Zellen eine Reaktion eingehen. Diese Methode ist verwendbar bei der Diagnose und Überwachung von Immundefekten, die bei Krebs, Autoimmunkrankheiten, Organtransplantaten auftreten, und von Immundefekten, die durch Krankheiten, wie z.B. AIDS (Acquired Immune Deficiency Syndrome), verursacht werden.
Die erfindungsgemäße Herstellungsvorrichtung umfaßt Mittel zum Mischen von mindestens einem selektierten Antikörper mit einem Marker-Reagenz und einem Radionuklid, um eine radioaktiv-marktierte Verbindung oder ein solches Medikament zu bilden.
Die Mittel und die Methode zum Mischen und Kombinieren des selektierten Antikörpers mit dem Marker-Reagenz und Radionuklid können einfach darin bestehen, daß gemessene Mengen der Bestandteile in Glasfläschchen oder Behälter gegeben werden.
Die Methoden zum Markieren von Antikörpern mit Radiojod wurden in der Literatur beschrieben. Beispiele für Schriften, welche diese Markiermethoden enthalten, sind: "Iodination and Acceptance Testing of Antibodies" von Pettit et al., in Tumor Imaging von S.W. Burchiel und B.A. Rhodes, Masson Publishing USA, Inc., N.Y., S. 99-109 (1982); und "Radioiodination of Antibodies for Tumor Imaging" von G.B. Saha, in Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy von S.W. Burchiel und B.A. Rhodes, Elsevier Science Publishing Co., Inc., N.Y., S. 171-184 (1983).
Methoden zum Markieren von Antikörpern mit Technetium-99m wurden in der Literatur beschrieben: "99mTc-Labeling and Acceptance Testing of Radiolabeled Antibodies and Antibody Fragments" von B.A. Rhodes et al., in Tumor Imaging von S.W. Burchiel und B.A. Rhodes, Masson Publishing USA, Inc., N.Y., S. 111-123 (1982); und "Radiolabeling of Antibodies with Technetium 99m" von B.A. Rhodes und S.W. Burchiel, in Radioimmunoimaging and Radioimmunotherapy von S.W. Burchiel und B.A. Rhodes, Elsevier Science Publishing Co., Inc., N.Y., S. 207-222 (1983).
In der vorliegenden Erfindung kann jedes Radionuklidmaterial verwendet werden. Die obenzitierten Schriften, die Radiojod und Technetium-99m betreffen, sind nur zur Erläuterung von Standardmethoden der radioaktiven Markierung erwähnt.
Gemäß der erfindungsgemäßen Methode wird die Verbindung vorzugsweise mit Hilfe von herkömmlichen Mitteln gereinigt, um Radionuklidverunreinigungen vor dem Qualitätskontrolltest oder der Verarbreichung der Verbindung an einen Patienten zu entfernen. Eine für die Reinigung verwendbare Vorrichtung ist eine Filtersäule. Ein vorteilhaftes Filtermaterial für die Reinigung ist Dowex 1 Ionenaustauscher-Harz.
Die radioaktiv-markierte Verbindung kann, nachdem sie gemischt und vorzugsweise gereinigt wurde, direkt in vivo an den Patienten verabreicht werden. Vorzugsweise wird die Verbindung zuerst erfindungsgemäß einer Qualitätskontrolle unterzogen, um sicherzustellen, daß die radioaktiv-markierte Verbindung mit dem Tumor des Patienten eine Reaktion eingehen wird und daß die Selektion des monoklonalen Antikörpers und die Verarbeitung der radioaktiv-markierten Verbindung richtig und in ausreichender Weise durchgeführt wurde.
Die Tumortestfläche auf der Qualitätskontrollvorrichtung enthält ein Bindemittel, welches eine Probe des Tumorhomogenats bindet. Ein solches Bindemittel, welches zum Binden der Tumorprobe an die Testfläche geeignet ist, ist eine Nitrocellulosemembran. Die Tumorprobe wird hergestellt und an die Tumortestfläche der Qualitätskontrollvorrichtung gebunden oder fixiert, und zwar in einer ähnlichen Weise wie bei der Selektiermethode und -vorrichtung. Die Testfläche wird dann mit überschüssigem antigenischem Material, wie z.B. Rinderserumalbumin, überzogen oder blockiert.
Die Tumortestfläche auf der Qualitätskontrollvorrichtung kann zur selben Zeit hergestellt werden wie die Tumortestfläche auf der Selektiervorrichtung. Eine Tumorprobe könnte an die Testfläche für die Qualitätskontrolle gebunden und dann vor der Verwendung mindestens einige Monate bei kalten Temperaturen gelagert werden. Dies würde die Notwendigkeit erübrigen, einen Patienten zwei Biopsien zu unterziehen; eine zum Zeitpunkt, wenn ein monoklonaler Antikörper selektiert wird, und eine zweite, wenn die radioaktiv-markierte Verbindung einem Qualitätskontrolltest unterzogen wird. Andererseits kann die Entnahme einer weiteren Tumorprobe bei einem Patienten notwendig sein, wenn zwischen dem Zeitpunkt der Selektion und der Qualitätskontrolle ein langer Zeitraum liegt, um sicherzustellen, daß der Tumor seinen Charakter nicht verändert hat und mit dem selektierten Antikörper oder den Antikörpern noch reaktiv ist.
Beim erfindungsgemäßen Qualitätskontrolltest wird eine kleine Probe der radioaktiv-markierten Verbindung auf eine Tumortestfläche gegeben. Mittel zum Aufbringen der Probe auf die Testfläche sind eine kleine Spritze oder ein Augentropfer. Die Probe wird an die Testfläche fixiert. Das Fixieren erfolgt vorzugsweise durch Inkubieren, wie z.B. durch Inkubieren in einer feuchten Umgebung bei ungefähr 25ºC über einen Zeitraum von ungefähr 30 Minuten. Die auf der Testfläche vorhandene Radioaktivität, die durch die radioaktivmarkierte Verbindung entsteht, wird dann mit Hilfe eines Strahlungsdetektors gemessen. Die Strahlung kann mit Hilfe von herkömmlichen Mitteln, wie z.B. einem Gammazähler oder einer Ionisationskammer, gemessen werden. Die Tumortestfläche wird dann gewaschen, um jede Verbindung zu entfernen, die mit der Tumorprobe keine Reaktion eingegangen ist. Nach dem Waschen wird die auf der gewaschenen Tumortestfläche vorhandene Radioaktivität wieder mit Hilfe eines Strahlungsdetektors gemessen. Der Prozentsatz Immunreaktivität der Verbindung mit der Tumorprobe wird berechnet, indem das Maß der Radioaktivität nach dem Waschen durch das Maß der Radioaktivität vor dem Waschen dividiert wird. Dieser Prozentsatz sollte für stark reaktive Verbindungen sehr hoch und für weniger reaktive Verbindungen weniger hoch sein. Wenn der Prozentsatz nieder ist, sollte die radioaktiv-markierte Verbindung einem Patienten nicht verabreicht werden. Gründe für einen niederen Prozentsatz können wie folgt sein: (1) Der monoklonale Antikörper wurde nicht richtig selektiert; (2) die radioaktiv-markierte Verbindung wurde nicht ordnungsgemäß hergestellt; (3) die Tumorprobe war nicht entsprechend (zu lange gelagert oder nicht richtig gebunden); oder (4) eine neue durch Biopsie entnommene Tumorprobe ist nicht mehr mit einem früher selektierten, monoklonalen Antikörper reaktiv.
Die Testmethode für die Qualitätskontrolle verwendet weiters vorzugsweise eine Testvorrichtung für die negative Kontrolle und/oder eine Testvorrichtung für die positive Kontrolle. Eine Vorrichtung für die negative Kontrolle umfaßt eine Testfläche mit einer antigenischen Substanz, wie z.B. Rinderserumalbumin, welches mit der radioaktiv-markierten Verbindung keine oder eine unwesentliche Reaktion eingeht. Die radioaktiv-markierte Verbindung enthält mindestens einen, der in der Selektiervorrichtung enthaltenen monoklonalen Antikörper, und somit sollte die gewählte antigenische Substanz mit keiner Serie von monoklonalen Antikörpern, die kombiniert sein können oder in der Selektiervorrichtung enthalten sind, eine Reaktion eingehen. Die Testvorrichtung für die positive Kontrolle umfaßt eine Testfläche, welche eine antigenische Substanz bindet, wie z.B. ein Tumorhomogenatxenograft, welche mit der radioaktiv-markierten Verbindung eine Reaktion eingehen sollte, wenn die Verbindung richtig hergestellt wurde. Sind in der radioaktiv-markierten Verbindung mehr als ein monoklonaler Antikörper enthalten, so sollten getrennte Testflächen für die positive Kontrolle vorgesehen sein, die jedem monoklonalen Antikörper entsprechen.
Bei der bevorzugten erfindungsgemäßen Testmethode für die Qualitätskontrolle wird eine kleine Probe der radioaktiv-markierten Verbindung ungefähr zum gleichen Zeitpunkt auf die Testflächen für die negative und positive Kontrolle gegeben, zu dem die Verbindungsprobe auf die Tumortestfläche gegeben wird. Die Testflächen für die negative und positive Kontrolle werden gleich behandelt wie die Tumortestfläche; die auf den Testflächen vorhandene Radioaktivität wird gemessen, die Testflächen werden gewaschen, um nicht zur Reaktion gebrachte Verbindung zu entfernen, und die vorhandene Radioaktivität wird nach dem Waschen wieder gemessen. Für die positive Kontrollfläche sollte der Prozentsatz der Radioaktivität hoch sein. Wenn der Prozentsatz nicht hoch ist, sollte die radioaktiv-markierte Verbindung dem Patienten nicht verabreicht werden. Ein niederer Prozentsatz auf der Testfläche für die positive Kontrolle kann ein Zeichen für beschädigte Antikörper, ein Nichtbinden des Radionuklidmaterials an den Antikörper oder ein Fehler bei der Selektion, beim Mischen oder beim Qualitätskontrolltest sein. Der Prozentsatz der Radioaktivität bei den Testflächen für die negative Kontrolle sollte nieder bis null sein. Ein hoher Prozentsatz auf der Testfläche für die negative Kontrolle zeigt einen Fehler beim Mischen oder beim Qualitätskontrolltest an. Das Material sollte vor der Verabreichung an den Patienten neu gemischt und/oder getestet werden.
Ein Beispiel für hypothetische Reaktivitätsprozentsätze, welche man beim erfindungsgemäßen Qualitätskontrolltest für eine radioaktiv-markierte, einen monoklonalen Antikörper enthaltende Verbindung erhalten kann, wird rein zum Zwecke der Erläuterung in der Folge angeführt: (1) Der Immunreaktivitätsprozentsatz der Tumortestfläche sollte zwischen 70 % und 100 % liegen; (2) der Reaktivitätsprozentsatz der negativen Kontrollfläche sollte zwischen 0 % und 15 % liegen; und (3) der Reaktivitätsprozentsatz der positiven Kontrollfläche sollte zwischen 85 % und 100 % liegen. Ein Beispiel für hypothetische Reaktivitätsprozentsätze, die man beim erfindungsgemäßen Qualitätskontrolltest für eine radioaktiv-markierte, zwei monoklonale Antikörper (50 % des Antikörpers A und 50 % des Antikörpers B) enthaltende Verbindung erhalten könnte, wird rein zum Zwecke der Erläuterung in der Folge angegeben: (1) Der Immunreaktivitätsprozentsatz der Tumortestfläche sollte zwischen 70 % und 100 % liegen; (2) der Reaktivitätsprozentsatz der Testfläche für die negative Kontrolle sollte zwischen 0 % und 15 % liegen; (3) der Reaktivitätsprozentsatz der Testfläche für die positive Kontrolle für den Antikörper A sollte zwischen 35 % und 50 % liegen; und (4) der Reaktivitätsprozentsatz für die positive Kontrollfläche für den Antikörper B sollte zwischen 35 % und 50 % liegen.
Die Testvorrichtung für die Qualitätskontrolle kann einzelne Streifen umfassen, die abgerissen oder getrennt werden können, um den Strahlungsnachweis zu erleichtern. Die Vorrichtungen für die Qualitätskontrolle können getrennt oder zusammen mit den erfindungsgemäßen Selektier- und Herstellungsvorrichtungen verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen Methoden können zur Herstellung eines radioaktiv-markierten Medikaments oder einer Verbindung für den Krebsnachweis oder für die Immuntherapie verwendet werden. Beim Krebsnachweis wird das Medikament einem Patienten verabreicht, und der Patient wird mit einer Vorrichtung, wie z.B. einem Gammastrahlendetektor oder einem Kernspinspektroskop mit Kontrastverstärkung, untersucht, um das Ausmaß und die Lage eines krebsartigen Tumors festzustellen. Bei der Immuntherapie wird das Medikament oder die Verbindung einem Patienten für die Behandlung des krebsartigen Tumors oder Tumors verabreicht.

Beispiel 1

Dieses Beispiel beschreibt eine Methode und eine Vorrichtung zum Testen einer Serie von monoklonalen Antikörpern, die mit menschlichen Colontumoren potentiell reaktiv sind, um jene Antikörper zu selektieren, die zur Herstellung eines Radiopharmakons zur Tumorfeststellung oder zur Verwendung in der Therapie geeignet sind, das für einen bestimmten einzelnen Patienten spezifisch ist. Die Vorrichtung umfaßt einen Einsatz und einen Behälter.
Der Einsatz hat sieben zahnartige Vorsprünge, wobei jeder drei Testflächen für die Anzeige von Antigen-Antikörper-Reaktionen umfaßt. Die drei Testflächen auf jedem Vorsprung sind: (1) eine negative Kontrollfläche; (2) eine Antigen-Antikörper-Testfläche für die Tumorprobe; und (3) eine positive Kontrollfläche. Carcino-embryonales Antigen (CEA) wird an die positiven Kontrollflächen der ersten vier Vorsprünge gebunden. Colon-Ovarialtumorantigen (COTA) wird an die positive Kontrollfläche des fünften Vorsprunges gebunden; Colon-spezifisches Antigenprotein (CSAp) wird an die positive Kontrollfläche des sechsten Vorsprunges gebunden; und menschliches Choriongonadotropin wird an die positive Kontrollfläche des siebenten Vorsprunges gebunden.
Der Behälter umfaßt vier Reihen mit sieben Abteilungen in jeder Reihe. Die erste Reihe mit sieben Abteilungen enthält jeweils 0,5 Milliliter 1 Gew.% Rinderserumalbumin; die zweite Reihe mit sieben Abteilungen enthält 0,5 Milliliter Lösung von jeweils 0,001 Gew.% Lösung von sieben verschiedenen monoklonalen Antikörpern in der folgenden Reihenfolge: Anti-CEA, Determinant 1; Anti-CEA, Determinant 2; Anti-CEA, Determinant 3; Anti-CEA, Determinant 4; Anti-COTA; Anti-CSAp; und Anti- HCG-Beta. Die dritte Reihe mit sieben Abteilungen enthält eine 0,1 Gew.% Lösung von Ziegen-Antimaus IgG-Meerrettichperoxidasekonjugat. Die vierte Reihe mit sieben Abteilungen enthält eine wäßrige Lösung von 4-Chlor-2-naphthol und 0,1 Gew.% Wasserstoffperoxid.
Eine mit Hilfe eines chirurgischen Eingriffs entnommene Colontumorprobe wird in einer phosphatgepufferten Salzlösung mit einem pH-Wert von 7,4 homogenisiert und verdünnt, wobei sich eine 1:9 Verdünnung der Probe ergibt. 0,05 Milliliter Aliquoten der homogenisierten Lösung werden auf die Testfläche jedes der sieben Vorsprünge des Einsatzes für die Tumorproben gegeben. Der Einsatz wird 30 Minuten in einer feuchten Kammer bei 25ºC stehengelassen. Der Einsatz wird dann in die erste Abteilungsreihe des Behälters gegeben, welche die Rinderserumalbuminlösung enthält, und 30 Minuten bei 25ºC im Behälter inkubiert. Der Einsatz wird entfernt und gewaschen, um jedes nicht fixierte, antigenische Material zu entfernen. Der Einsatz wird dann in die zweite Abteilungsreihe des Behälters gegeben und 30 Minuten bei 25ºC inkubiert, um die Reaktion der verschiedenen anderen monoklonalen Antikörper zu ermöglichen. Der Einsatz wird dann gewaschen und in die dritte Abteilungsreihe des Behälters gegeben, welche das Ziegen-Antimaus IgG-Meerrettichperoxidasekonjugat enthält, und 30 Minuten bei 25ºC inkubiert. Der Einsatz wird dann gewaschen und in die vierte Abteilungsreihe im Behälter gegeben, welcher die 4-Chlor-2-naphthol/wasserstoffperoxidlösung enthält, und 10 Minuten bei 25ºC inkubiert, um zu ermöglichen, daß die Flächen, an welche Antikörper gebunden wurde, ein dunkleres Aussehen entwickeln. Der Einsatz wird entfernt und gewaschen, um jede restliche 4-Chlor-2-naphthol/wasserstoffperoxidlösung zu entfernen, und getrocknet. Die Antikörper, die mit dem Tumor eine Reaktion eingegangen sind, werden durch die dunkler gewordenen Flächen auf den Vorsprüngen des Einsatzes angezeigt. Die negative Kontrollfläche ist nur leicht oder nicht dunkel geworden, wenn die Methode und Vorrichtung richtig verwendet wurde. Übermäßiges Dunkelwerden der negativen Kontrollfläche zeigt ein Problem mit dem Assay an. Die positive Kontrollfläche zeigt durch Dunkelwerden eine Antigen-Antikörper-Reaktion an. Fehlendes oder leichtes Dunkelwerden der positiven Kontrollfläche zeigt ein Problem mit dem Assay an.

Beispiel 2

Dieses Beispiel beschreibt eine Vorrichtung und Methode zum Testen einer Reihe von monoklonalen Antikörpern, die mit menschlichem Brusttumor potentiell reaktiv sind, um jene Antikörper zu selektieren, die geeignet sind für die Herstellung eines Radiopharmakons zur Tumorfeststellung oder zur Verwendung in der Therapie, das spezifisch ist für einen bestimmten einzelnen Patienten. Der Einsatz hat zehn zahnähnliche Vorsprünge, wobei jeder Vorsprung drei Testflächen für die Anzeige von Antigen-Antikörper-Reaktionen umfaßt. Die drei Testflächen auf jedem Vorsprung sind: (1) eine positive Kontrollfläche; (2) eine Antigen-Antikörper-Testfläche für die Tumorprobe; und (3) eine negative Kontrollfläche. Die folgenden Antigene sind an die positiven Kontrollflächen gebunden: Menschliches Mammaepithelantigen (HME-Ag) (46.000 Dalton) ist an den ersten Vorsprung gebunden; HME-Ag (70.000 Dalton) ist an den zweiten Vorsprung gebunden; HME-Ag (150.000 Dalton) ist an den dritten Vorsprung gebunden; CEA ist an den vierten, fünften, sechsten und siebten Vorsprung gebunden; Antigen erkannt durch den monoklonalen Antikörper B6.2 ist an den achten Vorsprung gebunden; Antigen erkannt durch den monoklonalen Antikörper B72.3 ist an den neunten Vorsprung gebunden; und menschliches Choriongonadotrophin ist an den zehnten Vorsprung gebunden. (Die folgenden Schriften liefern Informationen über die spezifischen Antigene, die für jeden Vorsprung verwendet werden: (1) HME-AGs: siehe "Circulating Human Mammary Epithelial Antigen in Breast Cancer," von R.L. Ceriani, M. Sasaki, H. Susman, W.M. Wara und E.W. Blank, Proc. Natl. Acad. Sci, Band 79, S. 5420-5424, (1982); (2) Antigene reaktiv mit B6.2 und B72.3: siehe "Definition of Antigenic Heterogeneity and Modulation around Human Mammary Carcinoma Cell Populations Using Monoclonal Antibodies to Tumor-Associated Antigens," von P. Horan Hand, M. Nuti., D. Colcher und J. Schlom, Cancer Res. Band 43, S. 728-735 (1983).)
Der Behälter umfaßt vier Reihen mit je zehn Abteilungen. Die erste Reihe mit zehn Abteilungen enthält jeweils 0,5 Milliliter eines 1 Gew.% Rinderserumalbumins; die zweite Reihe mit zehn Abteilungen enthält jeweils 0,5 Milliliter einer 0,001 Gew.% Lösung von zehn verschiedenen monoklonalen Antikörpern in der folgenden Reihenfolge: (1) Anti-HME-Ag-46.000; (2) Anti-HME-Ag-70.000; (3) Anti-HME-Ag-150.000; (4) Anti- CEA, Determinant 1; (5) Anti-CEA, Determinant 2; (6) Anti- CEA, Determinant 3; (7) Anti-CEA, Determinant 4; (8) B6.2; (9) B72.3; und (10) Anti-HCH-Beta. Die dritte Reihe mit zehn Abteilungen enthält 0,1 Gew.% Lösung eines Ziehen-Antimaus IgG-Meerrettichperoxidasekonjugats. Die vierte Reihe mit zehn Abteilungen enthält eine wäßrige Lösung von 4-Chlor-2- naphthol und 0,1 Gew.% Wasserstoffperoxid.
Eine mit Hilfe eines chirurgischen Eingriffes oder Nadelbiopsie entnommene Brusttumorprobe wird in einer phosphatgepufferten Salzlösung mit einem pH-Wert von 7,4 homogenisiert und verdünnt, wobei man eine 1:9 Verdünnung der Probe erhält. 0,05 Milliliter Aliquoten der homogenisierten Lösung werden auf die Testfläche von jedem der zehn Vorsprünge des Einsatzes gegeben, der für die Tumorproben bestimmt ist. Der Einsatz wird 30 Minuten in einer feuchten Kammer bei 25ºC stehengelassen. Der Einsatz wird dann in die erste Abteilungsreihe des Behälters gegeben, die die Rinderserumalbuminlösung enthält, und im Behälter 30 Minuten bei 25ºC inkubiert. Der Einsatz wird entfernt und gewaschen, um alle nicht fixierten antigenischen Materialien zu entfernen. Der Einsatz wird dann in die zweite Abteilungsreihe des Behälters gegeben und 30 Minuten bei 25ºC inkubiert, um die Reaktion der verschiedenen anderen monoklonalen Antikörper mit den Tumorproben zu ermöglichen. Der Einsatz wird aus dem Behälter entfernt und gewaschen, um alle nicht zur Reaktion gekommenen Antikörper zu entfernen. Der Einsatz wird dann in die dritte Abteilungsreihe des Behälters gegeben, die das Ziegen-Antimaus IgG-Meerrettichperoxidasekonjugat enthält, und 30 Minuten bei 25ºC inkubiert. Der Einsatz wird entfernt und gewaschen, um jede restliche zweite Antikörper-Meerrettichperoxidase zu entfernen. Der Einsatz wird dann in die vierte Abteilungsreihe im Behälter gegeben, die eine Wasserstoffperoxid- und 4-Chlor-2-naphthollösung enthält, und 10 Minuten inkubiert, um zu ermöglichen, daß die Flächen, an die Antikörper gebunden wurde, ein dunkleres Aussehen entwickeln. Der Einsatz wird entfernt und gewaschen, um jede restliche 4- Chlor-2-naphthol/wasserstoffperoxidlösung zu entfernen, und getrocknet. Die Antikörper, welche mit dem Tumor eine Reaktion eingegangen sind, werden durch die dunkler gewordenen Flächen auf den Vorsprüngen des Einsatzes angezeigt. Die negative Kontrollfläche zeigt leichte oder keine Dunkelfärbung, wenn die Methode und Vorrichtung richtig verwendet wurde. Übermäßige Dunkelfärbung der negativen Kontrollfläche zeigt ein Problem mit dem Assay an. Die positive Kontrollfläche zeigt eine Antigen-Antikörper-Reaktion durch Dunkelfärbung an. Keine oder leichte Dunkelfärbung der positiven Kontrollfläche zeigt ein Problem mit dem Assay an.

Beispiel 3

Dieses Beispiel beschreibt eine Vorrichtung und Methode für den Qualitätskontrolltest einer radioaktiv-markierten Verbindung. Ein flacher Kunststoffstreifen, der einen kreisförmigen Ausschnitt an einem Ende aufweist, wird als Teststreifen verwendet. Der Ausschnitt ist mit einem absorbierenden Material hinterlegt, von welchem bekannt ist, daß es Proteine bindet, wie z.B. Nitrocellulosepapier. 5 Mikroliter einer Probe von Tumorhomogenat werden auf diesen Ausschnitt gegeben. Zur Herstellung des Tumorhomogenats wird eine frische Probe des Tumors, welche mit Hilfe von chirurgischer oder Nadelbiopsie entnommen wurde, mit 9 Teilen phosphatgepufferter, 0,9 % Salzlösung gemischt und homogenisiert. Nach der Zugabe des Tumorhomogenats läßt man den Filter trocknen, und der Streifen wird in eine Lösung von Rinderserumalbumin eingetaucht, um zusätzliche Bindungsstellen auf dem absorbierenden Material zu blockieren.
Zusätzliche Teststreifen, auf welche ein bekanntes Antigen (zur Verwendung als positive Kontrolle) oder Rinderserumalbumin (zur Verwendung als negative Kontrolle) gegeben wurde, werden auch in einem Immunreaktivitätsassay verwendet.
Die hergestellte Antikörper-Dosierungsform in der radioaktiv-markierten Verbindung wird durch Auftropfen von 1-10 Mikroliter des radioaktiv-markierten Medikaments (oder einer Verdünnung des Medikaments in 0,1 % Rinderserumalbumin in 0,9 % Salzlösung) in den Ausschnitt des Streifens, welcher Tumorhomogenat enthält, getestet. Ähnliche Aliquoten des Medikamentes werden in die Ausschnitte sowohl der positiven als auch der negativen Kontrolltestflächen getropft. Wenn das Medikament unter Verwendung von mehr als einem monoklonalen Antikörper hergestellt wurde, so wird eine zusätzliche positive Kontrolle für jeden zusätzlichen Antikörper verwendet. Die Testflächen für die positive Kontrolle entsprechen einem bestimmten monoklonalen Antikörper (oder gehen bekannterweise eine Reaktion damit ein). Nach dem Auftropfen der Aliquoten des Tumorhomogenats auf die Testflächen folgt eine Reaktion über einen Zeitraum von 1 bis 60 Minuten in feuchter Umgebung. Als nächstes folgt ein Assay in einem Strahlungsdetektor. Nach dem Assay werden sie gewaschen, um nicht zur Reaktion gekommene Antikörper zu entfernen, und es folgt ein weiteres Assay. Die Menge an Radioaktivität, welche auf dem die Probe des Tumorhomogenats enthaltenen Streifen zurückbleibt, wird als Maß für die Immunreaktivität der Dosierungsform genommen. Die positiven und negativen Kontrollstreifen werden verwendet, um zu prüfen, ob das Assay ordnungsgemäß durchgeführt wurde; sie werden für die Qulitätskontrolle des Assays verwendet. Die Testfläche für die negative Kontrolle sollte 0 oder minimale Reaktivität mit dem Medikament anzeigen, während die Testfläche für die positive Kontrolle eine starke Reaktivität mit dem Medikament anzeigen sollte.
Für Antikörper-Dosierungsformen, die keine Radioaktivität aufweisen, ist ein zweistufiges Assay erforderlich. Nach dem Auftropfen von Aliquoten des Medikaments auf die Streifen und einer Reaktion über einen Zeitraum von 1 bis 60 Minuten in feuchter Umgebung werden diese gewaschen, um nicht zur Reaktion gebrachten Antikörper zu entfernen. Ein radioaktiv-markierter, zweiter Antikörper, welcher mit den Antikörpern, welche für die Medikamentherstellung verwendet wurden, eine Reaktion eingeht, wie z.B. I-125 markierte Ziegen-Antimaus- Antikörper, werden auf die Filter aufgebracht und die Streifen läßt man wieder über einen Zeitraum von 1 bis 60 Minuten inkubieren. Während dieser Zeit wird ein Assay auf Radioaktivität durchgeführt. Nach Inkubation und Assay werden diese gewaschen, um nicht zur Reaktion gekommenen, zweiten Antikörper zu entfernen, und ein weiteres Assay folgt. Der Prozentsatz Bindung der Radioaktivität wird für jeden Streifen gemessen. Die Qualitätskontrolle erfolgt auf der Grundlage der relativen Bindung der Radioaktivität an die Tumorprobe verglichen mit der positiven Kontrolle. Dieses Ergebnis wird mit vorher gemessenen Werten verglichen. Dieses Assay mißt die relative Immunreaktivität anstelle der absoluten Immunreaktivität, wie dies vorher beim direkten Assay, beschrieben wurde.
Somit werden eine Methode und Vorrichtung zum Selektieren, Herstellen und Testen von selektierten monoklonalen Antikörpern geschaffen, die bei der Diagnose und Behandlung von einzelnen Tumoren verwendbar sind. Durch die Verwendung der Selektiermethode und Selektiervorrichtung wird angezeigt, welche Antikörper eine Antigen-Antikörper-Reaktion zeigen und somit für Verbindungen oder Medikamente, die an den Patienten zu verabreichen sind, verwendet werden sollten. Die Verwendung der Herstellungsmethode und -vorrichtung ermöglicht das Verarbeiten von selektiertem monoklonalem Antikörper oder Antikörpern mit einem Marker-Reagenz und einem Radionuklid. Die Verwendung der erfindungsgemäßen Testvorrichtung und Methode für die Qualitätskontrolle gewährleistet, daß die radioaktiv- markierte Verbindung richtig hergestellt wurde und in vivo mit dem Tumor eines Patienten reagieren wird. Verbindungen, welche mit dem Tumor eines bestimmten Patienten reaktiv sind, können somit vor der Verabreichung der Verbindung an den Patienten mit Hilfe der erfindungsgemäßen Vorrichtung und der erfindungsgemäßen Methoden bestimmt werden.

Claims

1. Verfahren zum Selektieren wenigstens einer monoklonalen Antikörper-Komponente, wobei die monoklonale Antikörper- Komponente wenigstens einen Bestandteil aus der aus ganzen monoklonalen Antikörpern und monoklonalen Antikörper-Fragmenten bestehenden Gruppe umfaßt, zur Verwendung bei der Herstellung einer patientenspezifischen Verbindung auf der Basis eines monoklonalen Antikörpers zur Verwendung beim in vivo-Krebsnachweis oder bei der Therapie eines bestimmten Patienten, umfassend die folgenden Schritte:

a) Vorselektieren einer Serie von wenigstens zwei monoklonalen Antikörper-Komponenten, wobei von den monoklonalen Antikörper-Komponenten bekannt ist, für tumorassoziierte Antigene eines zu bestimmenden oder zu behandelnden Krebstyps spezifisch zu sein,

b) Herstellen einer soliden Tumorprobe, welche einem bestimmten Patienten entnommen wurde, des zu bestimmenden oder zu behandelnden Krebstyps;

c) Ermöglichen der Bindung der vorselektierten Serie monoklonaler Antikörper-Komponenten an tumorassoziierte Antigene, die in der soliden Tumorprobe des bestimmten Patienten enthalten sind;

d) unabhängiges Bestimmen, welche, falls überhaupt, der monoklonalen Antikörper-Komponenten in der selektierten Serie an assoziierte Antigene binden, die in der soliden Tumorprobe des bestimmen Patienten enthalten sind;

e) Selektieren wenigstens einer monoklonalen Antikörper- Komponente, falls vom selektierten, monoklonalen Antikörper in Schritt d) festgestellt wird, daß er an tumorassoziierte Antigene bindet, die in der soliden Tumorporbe des bestimmten Patienten enthalten sind, zur Verwendung bei der Herstellung einer Verbindung einsetzbar beim in vivo-Krebsnachweis oder bei der Therapie für den bestimmten Patienten.

2. Verfahren gemäß Anspruch 1, worin

die vorselektierten monoklonalen Antikörper-Komponenten der Serie voneinander getrennt auf Testflächen einer Selektiervorrichtung aufgebracht werden,

die solide Tumorprobe entsprechend der Zahl der monoklonalen Antikörper-Komponenten der Serie in mehrere Portionen aufgeteilt wird,

jede Portion der soliden Tumorprobe homogenisiert und auf eine unabhängige Testfläche einer Selektiervorrichtung aufgebracht wird,

in Schritt c) jeder Portion der auf die unabhängige Testfläche aufgebrachten, soliden Tumorprobe unabhängig ermöglicht wird, an eine andere, vorselektierte monoklonale Antikörper-Komponente der Serie zu binden,

in Schritt d) die unabhängigen Testflächen entwickelt werden, um eine Antigen-Antikörper-Reaktion anzuzeigen und dadurch die Anwesenheit gebundener, vorselektierter monoklonaler Antikörper aus der Serie nachzuweisen, und

die in Schritt e) selektierte, monoklonale Antikörper-Komponente verarbeitet wird, um ein Arzneimittel auf der Basis eines monoklonalen Antikörpers zur Verwendung beim in vivo-Krebsnachweis oder bei der Therapie für den bestimmten Patienten zu bilden.

3. Vorrichtung (10) zum Selektieren wenigstens einer monoklonalen Antikörper-Komponente gemäß den Ansprüchen 1 und 2, wobei die monoklonale Antikörper-Komponente wenigstens einen aus der aus ganzen monoklonalen Antikörpern und monoklonalen Antikörper-Fragmenten bestehenden Gruppe selektierten Bestandteil umfaßt, zur Verwendung bei der Herstellung einer patientenspezifischen Verbindung auf der Basis eines monoklonalen Antikörpers zur Verwendung beim in vivo-Krebsnachweis oder bei der Therapie für einen bestimmten Patienten, umfassend

wenigstens zwei Testeinrichtungen (14), wobei jede der Testeinrichtungen (14) eine erste unabhängige Testfläche (20) umfaßt und die ersten unabhängigen Testflächen (20) Mittel aufweisen zum unabhängigen Aufnehmen und Aufbringen einer Portion einer soliden Tumorprobe des bestimmten Patienten eines nachzuweisenden oder zu behandelnden Krebstyps, wenn diese zur Verfügung gestellt wird;

Mittel (12, 34) zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen von wenigstens zwei verschiedenen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponenten, von denen, wenn zur Verfügung gestellt, im allgemeinen bekannt ist, gegenüber tumorassoziierten Antigenen des nachzuweisenden oder zu behandelnden Krebstyps spezifisch zu sein;

Mittel (36, 38), um jede Portion der auf die ersten unabhängigen Testflächen (20) aufgebrachten, soliden Tumorporbe einer anderen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponente auszusetzen, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten ist;

Mittel, um jeder Portion der auf die ersten unabhängigen Testflächen (20) aufgebrachten, soliden Tumorprobe unabhängig zu ermöglichen, an die andere vorselektierte, monoklonale Antikörper-Komponente zu binden, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten ist;

Mittel zur Ermöglichung von unabhängigen Bestimmungen, ob jede der anderen, vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponenten, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten sind, an die Portionen der auf die ersten unabhängigen Testflächen (20) aufgebrachten, soliden Tumorporbe bindet; und

Mittel zum Selektieren wenigstens einer der vorselektierten monoklonalen Antikörper-Komponenten zur Verwendung in einer Verbindung auf der Basis von monoklonalen Antikörpern einsetzbar beim in vivo-Krebsnachweis oder bei der Therapie des bestimmten Patienten, wenn von der gewählten, monoklonalen Antikörper-Komponente bekannt ist, daß sie an den Teil der soliden Tumorporbe bindet, welche auf die erste unabhängige Testfläche (20) aufgebracht ist.

4. Vorrichtung gemäß Anspruch 3, weiter umfassend

eine zweite unabhängige Testfläche (16), welche als negative Kontrollfläche bestimmt ist und auf jeder der Testeinrichtungen (14) angebracht ist;

Mittel zum Aufnehmen und Aufbringen einer ersten vorselektierten antigenischen Substanz auf die zweiten unabhängigen Testflächen (16), wobei von dieser, wenn zur Verfügung gestellt, im allgemeinen bekannt ist, gegenüber allen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponenten, die in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten sind, nicht-spezifisch zu sein;

Mittel, um der ersten, vorselektierten antigenischen Substanz, welche auf jede zweite unabhängige Testfläche (16) aufgebracht ist, unabhängig zu ermöglichen, daß sie einer anderen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponente, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten ist, ausgesetzt wird und an diese bindet;

Mittel zur Ermöglichung von unabhängigen Bestimmungen, ob die erste vorselektierte antigenische Substanz, welche auf jede zweite, unabhängige Testfläche (16) aufgebracht ist, an die andere, vorselektierte, monoklonale Antikörper-Komponente, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten ist, bindet;

eine dritte unabhängige Testfläche (18), welche als positive Kontrollfläche bestimmt ist und auf jeder der Testeinrichtungen (14) angebracht ist;

Mittel zum Aufnehmen und Aufbringen einer zweiten vorselektierten, antigenischen Substanz auf die dritten unabhängigen Testflächen (18), wobei von dieser, wenn zur Verfügung gestellt, im allgemeinen bekannt ist, gegenüber allen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponenten, die in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten sind, spezifisch zu sein;

Mittel, um der zweiten vorselektierten, antigenischen Substanz, die auf jede dritte unabhängige Testfläche (18) aufgebracht ist, unabhängig zu ermöglichen, daß sie einer anderen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponente, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten ist, ausgesetzt wird und an diese bindet; und

Mittel zur Ermöglichung von unabhängigen Bestimmungen, ob die zweite vorselektierte antigenische Substanz, welche auf jede dritte unabhängige Testfläche (18) aufgebracht ist, an die andere vorselektierte, monoklonale Antikörper- Komponente, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten ist, bindet;

wobei während des Betriebes der Vorrichtung (10) die negativen Kontrollflächen (16) ordnungsgemäß funktioniert haben, wenn die erste vorselektierte, auf die zweiten unabhängigen Testflächen (16) aufgebrachte antigenische Substanz nicht an irgendeine der anderen vorselektierten monoklonalen Antikörper-Komponenten, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten sind, bindet, und die positiven Kontrollflächen (18) ordnungsgemäß funktioniert haben, wenn die zweite vorselektierte, auf jede dritte unabhängige Testfläche (18) aufgebrachte antigenische Substanz an die anderen vorselektierten, monoklonalen Antikörper-Komponenten, welche in den Mitteln zum Aufnehmen, Enthalten und Trennen (12, 34) enthalten sind, bindet.