DE2904628A1

DE2904628A1 - Derivate der substanz sf-1739, verfahren zur herstellung derselben und mittel mit antibakterieller wirkung und antitumor-wirkung, welche diese derivate enthalten

Info

Publication number: DE2904628A1
Application number: DE19792904628
Authority: DE
Inventors: Takashi Hisamatsu; Shigeharu Inouye; Michio Kojima; Takashi Shomura; Kanagawa Yokohama
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1978-02-08
Filing date: 1979-02-07
Publication date: 1979-09-13
Also published as: FR2416899A1; DE2954282C2; GB2017079A; GB2017079B; DE2904628C2; FR2416899B1; US4209509A

Description

-AS -HOFFMANN · EITLE & PAKTNER

PAT E N TAN WALT E DR. ING. E. HOFFMANN (1930-197<S) . DIPL.-ING. W. EITLE ■ DR. RER. NAT. K. HOFFMANN · DIPL.-ING. W. LEH N

DIPL.-ING. K. FDCHSLE · DR. R-ER. NAT. B. HANSEN ARABELLASTRASSE 4 (STERN HAUS) · D-8000 MDNCH EN 81 · TELEFON (08?) 911087 . TELEX 05-29619 (PATH E)

3.1 720 m/wa

.MEIJI SEIKA KAISHA LTD., TOKYO / JAPAN

Derivate der Substanz SF-1739, Verfahren zur Herstellung derselben und Mittel mit antibakterieller Wirkung und Antitumor-Wirkung, welche diese Derivate enthalten

Die Erfindung betrifft eine neue Gruppe von Derivaten der Substanz SF-1739, Verfahren zur Herstellung derselben und Mittel mit antibakterieller Wirkung und Antitumor-Wirkung, welche 'als einen Wirkstoff mindestens eines der genannten Derivate enthalten.

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Insbesondere betrifft die Erfindung neue und nützliche Derivate der Substanz SF-1739, nämlich die Substanz SF-1739 HP, die Substanz' SF-1739 HP-C, die Substanz SF-1739 HP-F, die Substanz SF-1739 HP-3 und die Substanz SF-1739 HP-5, Verfahren zur Herstellung solcher SF-1739-Derivate sowie Mittel mit antimikrobieller und Antitumor-Wirkung, welche als einen Wirkstoff mindestens eines der Derivate der genannten Substanz SF-1739 enthalten.

Die japanische offengelegte, nicht geprüfte Patentanmeldung Nr. 125798/1976 (angemeldet von Meiji Seika Kaisha Ltd., Japan, am 24. April 1975 als Anmeldung Nr. 49131/1975) beschreibt, dass eine antibiotische Substanz SF-1739 durch Züchten von Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 erhalten werden kann. Gemäss einer Mitteilung des jährlichen Berichtes von Meiji Seika Laboratories, Band 16, Seite 20, ist auch bekannt, dass die Substanz SF-1739 eine gelbe, zweisäurige Base mit einer nicht-identifizierten chemischen Struktur und physiko-chemischen und biologischen Eigenschaften derselben, wie sie in dem Berieht im einzelnen diskutiert werden, darstellt. Ausserdem war es bekannt, dass die Substanz SF-1739 unter alkalischen Bedingungen extrem instabil ist und dass dessen freie Base in verschiedene Fraktionen zersetzt wird, welche keine antibakteriellen Wirkungen aufweisen, nachdem sie im trockenen Zustand mehrere Tage stehen, wohingegen diese unter sauren Bedingungen sehr stabil ist.

Von der Anmelderin wurden Untersuchungen zur Stabilität der Substanz SF-1739 unter sauren Bedingungen durchgeführt. Als Ergebnis zeigte sich, dass eine neue Substanz SF-1739 HP durch Behandlung der Substanz SF-1739 mit einer starken Säure erhalten werden kann und dass die neue Substanz potentielle antibakterielle Wirkung und Antitumor-Wirkung aufweist.

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Darüber hinaus wurden unter Berücksichtigung der Tatsache, dass die neue und nützliche Substanz SF-1739 HP eine wesentlich höhere Toxizität zeigt, weitere Untersuchungen an Derivaten der Substant SF-1739 HP durchgeführt, um deren Toxizität zu reduzieren. Dabei wurde ausserdem eine neue Gruppe von Derivaten der Substanz SF-1739 HP gefunden, nämlich die Substanz SF-1739 HP-C und die Substanz SF-1739 HP-F, welche durch Umsetzung der Substanz SF-1739 HP mit einem Cyanid oder Formamid erhalten werden und welche dem beabsichtigten Zweck in befriedigender Weise entsprechen.

Darüber hinaus wurden andere Metabolite untersucht, welche in einer Kulturflüssigkeit durch Züchten von solchen Actinomyceten, wie Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 (japanische offengelegte, nicht-geprüfte Patentanmeldung Nr. 125798/ 1976) erhalten werden können. Als Ergebnis wurde gefunden, dass in einer Kulturflüssigkeit gelbe Metaboliten gebildet werden, welche sich in definierter Weise von der Substanz SF-1739 unterscheiden, obwohl sie ebenfalls Rf-Werte aufweisen und auch festgestellt wurde, dass die neuen antibiotischen Substanzen, nämlich die Substanz SF-1739 HP-3 und die Substanz SF-1739 HP-5 von den gelben Metaboliten durch Behandlung mit einer starken Säure abgeleitet werden können.

Gemäss der Erfindung wird eine neue Gruppe von fünf antibiotischen Substanzen zur Verfügung gestellt: Die Substanz SF-1739 HP, die Substanz SF-1739 HP-C, die Substanz SF-1739 HP-F, die Substanz SF-1739 HP-3 und die Substanz SF-1739 HP-5.

Ausserdem werden gemäss der Erfindung Verfahren zur Herstellung dieser antibiotischen Substanzen geschaffen.

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Gemäss der Erfindung wird auch ein Mittel mit antibakterieller oder Antitumor-Wirkung zur Verfügung gestellt, welches als einen Wirkstoff mindestens eines dieser Derivate der Substanz SF-1739 enthält.

Wie im vorangehenden beschrieben, werden gemäss der Erfindung fünf verschiedene Derivate der Substanz SF-1739 zur Verfügung gestellt. Jedes dieser Derivate und dessen Herstellung wird nachfolgend im einzelnen beschrieben.

I. Substanz SF-1739 HP

Diese Substanz weist keinen definierten Schmelzpunkt auf und schmilzt unter Schwarzfärbung über einen weiten Bereich, der bei etwa 150 bis 180⁰C beginnt. Sie weist das in Fig. 1 wiedergegebene ultraviolette Absorptionsspektrum auf, welches

in Methanol (in Fig. 1 mit einer ausgezogenen Linie ( )

1 % wiedergegeben) drei Absorptionsmaxima bei 220 nm (E₁ = 407), 275 nm (132) und 535 nm (21) aufweist. Das Absorptionsspektrum in 0,05 N HCl-95 % Methanol (in Fig. 1 mit einer punktierten Linie (...) wiedergegeben) weist zwei Absorptionsmaxima bei 265 nm (E^] 1_ = 754), 410 (16) auf und das Absorptions-

I CJIlL

Spektrum in 0,05 N NaOH-95 % Methanol (in Fig. 1 mit einer gestrichelten Linie ( ) wiedergegeben) weist Absorptionsmaxima bei 221 nm (e!J^% = 440), 277 (124), 345 (Schulter) und

ι ein

540 (24) auf. Sie weist ein Infrarot-Absorptionsspektrum (in Nujol) wie in Fig. 2 gezeigt auf, mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1655, 1600, 1540, 1355, 1265, 1235, 1180, 1120, 1080, 1020, 1000, 965, 945, 920, 910, 865,

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830, 790 und 750 cm und ein kernmagnetisches Resonanzspektrum (in D_?0) gemäss Fig. 3. Ihr Massenspektrum zeigt Spitzen bei m/e 412, 430, wodurch bestimmt wurde, dass ihr Molekulargewicht etwa dem der Substanz SF-1739 entspricht. Die genannte Substanz weist die folgende analytische Zusammensetzung auf: C 62,19 %, H 6,95 %, N 8,50 %, 0 22„36 % (durch Differenz). Sie zeigt eine optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 4, aus welcher ihre spezifische Rotation ld±?l^₉ + 70° (in 0,05 % Methanol) bestimmt wurde.

Sie stellt eine schwärzlich purpurfarbene Substanz dar, welche leicht in Wasser und Methanol löslich ist, in Aceton und Äthylacetat löslich ist und in Hexan sich nur wenig löst. Ihre Rf-Werte an einer Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platte (erhältlich von E. Merck, Westdeutschland), betragen 0,45, wenn diese in Chloroform:Methanol (9:1) und 0,23, wenn diese mit n-Butanol:Methanol:0,1 Ν HCl (4:2:1) entwickelt werden, während die korrespondierenden Werte der Substanz SF-1739 jeweils 0,76 und 0,39 betragen. Die Stabilität der Substanz SF-1739 HP ist im Vergleich zu der Ausgangssubstanz SF-1739 wesentlich erhöht; sie ist sowohl unter sauren als auch alkalischen Bedingungen stabil. Wenn sie z.B. über Nacht in 5 N HCl bei Raumtemperatur stehen gelassen wird, so ist sie vollständig stabil, wohingegen die Ausgangssubstanz SF-1739 im wesentlichen zur Substanz SF-1739 HP umgewandelt wird. Auch wenn die genannte Substanz in 0,1 N NaOH-Methanol über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen wird, so wird deren antibakterielle Wirkung nicht wesentlich reduziert, wohingegen die Ausgangssubstanz SF-1739 im wesentlichen inaktiviert wird.

Diese Substanz kann aus der Substanz SF-1739 durch Behandlung

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mit einerSäure hergestellt werden. Für diese Säurebehandlung lassen sich anorganische Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoff säure, Schwefelsäure und dergleichen, und organische Säuren, wie Trifluoressigsäure, Methansulfonsäure, Trifluormethansulfonsaure und dergleichen, verwenden. Die Reaktionsparameter können je nach der Art und der Konzentration der verwendeten Säure und des verwendeten Lösungsmittels variieren. Bei Verwendung einer anorganischen Säure, wird die Behandlung am besten unter Kühlung oder bei Raumtemperatur über einen Zeitraum von 1 Tag bis 1 Woche durchgeführt, wenn eine höhere Konzentration von 5 bis 10 N angewendet wird, oder bei Raumtemperatur oder höherer Temperatur für einen oder mehrere Tage, wenn eine niedrigere Konzentration von nicht über 5 N angewendet wird. Bei einer erhöhten Temperatur von über 80⁰C nimmt die Bildung von Nebenprodukten manchmal zu. Die Behandlung kann in einer wässrigen Lösung ziemlich schnell fortschreiten, während sie in wässrigen) Methanol langsamer abläuft. Die Umwandlung bzw. Umsetzung der Substanz SF-1739 zur Substanz SF-1739 HP kann bei einem pH von unter 3 durchgeführt werden.

Nach Beendigung der Behandlung,kann mit Hilfe einer üblichen Methode die Substanz SF-1739 HP leicht aus dem Reaktionsgemisch gewonnen werden, wobei man sich die oben angegebenen physiko-chemisehen Eigenschaften der Substanz SF-1739 HP zunutze macht. Zum Beispiel kann das Reaktionsgemisch mit einer Base neutralisiert werden,, z.B. Natriumhydrogencarbonat, Kaliumcarbonat und dergleichen, zur Trockne konzentriert werden und der Rückstand mit Methanol extrahiert werden und der Extrakt direkt durch eine präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie gereinigt werden. Alternativ kann folgendes Verfahren durchgeführt werden, wobei weniger Nebenprodukte bei dieser Behandlung gebildet Werdens Das Reaktionsgemisch kann konzentriert werden, der Rückstand in Methanol

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aufgelöst und die erhaltene Lösung neutralisiert werden, die dann durch eine Sephadex-Säule LH-20 (erhältlich von Pharmacia, Schweden) geleitet wird, die dann mit Methanol oder einem Lösungsmittelgemisch von Äthylacetat und Methanol entwickelt bzw. eluiert wird, um das gewünschte Produkt zu reinigen.

II. . Substanz SF-1739 HP-C und Substanz SF-1739 HP-F

(Ha) Substanz SF-1739HP-C

Diese Substanz weist keinen definierten Schmelzpunkt auf und schmilzt unter Schwarzfärbung über einen weiten Bereich, der bei etwa 120 bis 15O°C beginnt. Sie hat das in Fig. 5 gezeigte ultraviolette Absorptionsspektrum und weist in Methanol (mit einer ausgezogenen Kurve in Fig. 5 angezeigt) drei

1 %
Absorptionsmaxima bei 222 nra (E' = 400), 273 nm (146)

und 540 nm (30), in 0,1 N HCl-90 % Methanol (in Fig. 5 mit einer punktierten Linie angezeigt) Absorptionsmaxima bei 204 nm, 266 nm (eJ* = 174) und 410 nm (22) und in 0,1 N NaOH-90 % Methanol (in Fig. 5 mit einer Kettenlinie angezeigt) Absorptionsmaxima bei 222 nm (έ1^% = 422), 275 nm

I will

(14) und 550 nm (23) auf. Sie besitzt das in Fig. 6 dargestellte Infrarot-Absorptionsspektrum (in Nujöl) mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1660, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, 880, 835 und 795 om"¹. Die optische Rotationsdispersionskurve ist in Fig. 7 wiedergegeben und das kernmagnetische

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Resonanzspektrum (in D„O) wird in Fig. 8 gezeigt. Die Substanz besitzt folgende analytische Zusammensetzung: C 59,58 %, H 6,14 %, N 12,63 %, O 21,65 % (durch Differenz). Die Substanz ist. schwärzlich purpurfarben und ist leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan. An Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platten (erhältlich von E. Merck, Westdeutschland) weist sie Rf-Werte von 0,40 bei Entwicklung mit Chloroform:Methanol (9:1) und 0,70 bei Entwicklung mit Äthylacetat:Methanol (3:2) auf, während die entsprechenden Werte der Substanz SF-1739 HP jeweils 0,26 und 0,31 betragen. Die Substanz ist im trockenen Zustand und in neutraler, saurer und alkalischer methanoliseher Lösung stabil.

(Hb) Substanz SF-1739 HP-F

Diese Substanz v/eist keinen definierten Schmelzpunkt auf; sie schmilzt unter Schwarzfärbung über einen weiten Bereich, welcher bei etwa 110 bis 160°C beginnt. Sie weist ein UV-Absorptionsspektrum auf, wie es in Fig. 9 wiedergegeben wird, wobei in Methanol (in Fig. 9 mit einer ausgezogenen Kurve dargestellt) drei Absorptionsmaxima bei 220 nm, 275 nm (e]^ = 121) und 540 nm (24), in 0,1 N HCl-90 % Methanol (in Fig. 9 mit einer punktierten Linie dargestellt),

1 ^^- Absorptionsmaxima bei 205 nm, 268 nm (E₁ = 133) und

I CITl

405 nm (19), und in 0.1 N NaOH-90 % Methanol (in Fig.

mit einer Kettenlinie dargestellt) bei 221 nm, 277 nm (E„ =

117) und 540 nm (29) erhalten werden. Die Substanz zeigt ein Infrarot-Absorptionsspektrum (in Nujol) wie es in Fig.

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wiedergegeben wird, mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1660, 1530, 1350, 1310, 1265, 1235, 1205, 1175, 1125, 1085, 1025, 1000, 940, 920, 830 und 795 cm"¹. Sie hat folgende analytische Zusammensetzung: C 57,26 %, H 6,33 %, N 12,14 %, 0 24,27 % (durch Differenz). Die Substanz ist von schwärzlich purpurner Farbe; sie ist leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan. Ihre Rf-.Werte an Silikagel-Dünnschicht-Platten (erhältlich von E. Merck, Westdeutschland) betragen 0,28 bei Entwicklung mit Chloroform:Methanol (9:1) und 0,53 bei Entwicklung mit Äthylacetat:Methanol (3:2), während die entsprechenden Werte der Substanz SP-1739 HP jeweils 0,26 und 0,31 betragen. Die Substanz ist im trockenen Zustand und in neutraler und alkalischer methanolischer Lösung stabil, jedoch in saurem Methanol weniger stabil.

(lic) Herstellung der beiden Substanzen

Die Substanz SF-I739 HP-C kann aus der Substanz SF-1739 HP hergestellt werden, die wie oben unter I (2) angegeben, hergestellt wird* durch Reaktion mit einem Cyanid.

Unter den geeigneten Cyaniden, die sich verwenden lassen, sind z.B. zu nennen: ein Alkalimetall, Erdalkalimetall, Metall oder organisches Amin (exnschliesslxch Ammoniak), Salz der Blausäure (Cyanwasserstoffsäure), wie Natrium, Kalium, Lithium, Magnesium oder Ammoniumcyanid und dergleichen; und eine Verbindung, welche sekundär ein Cyanidion (CN ) bildet, wie Cyanogenbromid und dergleichen.

Andererseits kann die Substanz SF-1739 HP-F aus der Substanz

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SF-1739 HP durch Reaktion mit Formamid hergestellt werden.

In beiden Fällen kann die Reaktion unter Kühlung oder bei Raumtemperatur schnell ablaufen und in ca. 5 bis 30 Minuten im wesentlichen abgeschlossen sein. Bei erhöhter Temperatur, welche über Raumtemperatur liegt, besteht die Tendenz der zunehmenden Bildung von Nebenprodukten. Unter den geeigneten Lösungsmitteln für die Reaktion sind für beide Fälle z.B. zu nennen: Wasser, ein Alkohol, Dimethylformamid, ein Lösungsmittelgemisch eines wassermischbaren organischen Lösungsmittels und Wasser und dergleichen. Ausserdem kann Formamid in überschüssiger Menge verwendet werden, so dass es sowohl als Reagenz als auch als Lösungsmittel für die Herstellung der Substanz SF-1739 HP-F dient.

Nach Beendigung der Reaktion kann das gewünschte Produkt auf einfache Weise gewonnen und durch eine übliche Methode gereinigt werden,'wobei man sich die oben aufgeführten physiko-chemisehen.Eigenschaften jeder Substanz zunutze macht. Das Reaktionsgemisch kann z.B. zur Trockne eingedampft werden und der Rückstand mit Methanol extrahiert werden, worauf der Extrakt direkt durch präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie gereinigt wird.

In alternativer Weise (wobei weniger Nebenprodukte bei der jeweiligen Reaktion gebildet werden) kann das Reaktionsgemisch konzentriert, der Rückstand in Methanol aufgelöst und die erhaltene Lösung über eine Säule aus Sephadex LII-20 (erhältlich von Pharmacia, Schweden) geleitet werden, welche daraufhin mit Methanol oder einem Lösungsmittelgemisch aus Äthylacetat und Methanol entwickelt werden kann, um das gewünschte Produkt zu reinigen.

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III. Substanz SF-1739 HP-5 und Substanz SF-I739 HP-3 (Ilia) Substanz SF-1739 HP-5

Diese Substanz ist schwärzlich purpurfarben und pulverförmig. Sie weist keinen definierten Schmelzpunkt auf und schmilzt unter Schwarzfärbung über einen weiten Bereich, welcher bei ca. 150 bis 180°C beginnt. Sie weist das in Fig. 11 gezeigte UV-Absorptionsspektrum auf, welches in Methanol (in Fig. 11 mit einer ausgezogenen Kurve gezeigt)

1 % drei Absorptionsmaxima bei 220 nm (E₁ = 375) , 275 nm

(156) und 535 nm (28), in 0,05 N HCl-95 % Methanol (in Fig. 11 mit einer punktierten Linie dargestellt) zwei Absorp- -

1 ^^-
tionsmaxima bei 266 nm (E' ° = 199) und 410 nm (22) und in 0,05 N NaOH-95 % Methanol (in Fig. 11 mit einer Ketten-

1 % linie dargestellt) Absorptionsmaxima bei 276 nm (E' = 148)

I OXiI

und 550 nm (34) besitzt. Sie zeigt das in Fig. 12 dargestellte Infrarot-Absorptionsspektrum (in Nujöl) mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1655, 1600, 1540, 1350, 1260, 1235, 1175, 1085, 1025, 1000, 905, 865, 835, 790 und 775 cm , sowie ein kernmagnetisches Resonanzspektrum (in D₂O), wie es in Fig. 13 dargestellt ist. Eine Analyse des C-13-kernmagnetischen Resonanzspektrums zeigt, dass im Molekül der Substanz SF-1739 HP-5 mindestens 19 Kohlenstoff atome vorliegen. Ihr Molekulargewicht wurde mittels der Dampfdruckmethode zu 550 ermittelt. Sie hat die folgende analytische Zusammensetzung: C 60,93 %, H 7,O5 %, N 8,41 %, 0 23,61 % (durch Differenz). Sie ist leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan. Ihre Rf-Werte an Silikagel-Dünnschicht-Platten (erhältlich von E. Merck, Westdeutschland) betragen

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= 29 -

0,12 bei Entwicklung mit ChloroformsMethanol (9:1) und 0,12 bei Entwicklung mit Äthylacetat!Methanol (3:2), während die entsprechenden Werte der Substanz SF-1739 HP jeweils 0,26 und 0,31 betragen. Die Substanz ist in trockenem Zustand und in Methanol stabil, jedoch leicht instabil in saurem Methanol und weniger stabil in alkalischem Methanol.

(HIb) Substanz SF-1739 HP-3

Diese Substanz stellt eine schwärzliche purpurfarbene, pulverförmige Substanz dar, welche keinen definierten Schmelzpunkt aufweist und unter SChwarzfärbung über einen weiten Bereich, der bei etwa 130 bis 150 C beginnt, schmilzt. Sie zeigt das in Fig. 14 dargestellte UV-Absorptionsspektrum, welches in Methanol (in Fig. 14 mit einer ausgezogenen Kurve gezeigt) vier Absorptionsmaxima oder Krümmung bei 219 nm (e!J^% = 890), 267 nm (314), 330 nm (Schulter) und 543 nm

(54), in 0,05 N HCl-95 % Methanol (in Fig. 14 mit einer punktierten Linie dargestellt) drei Absorptionsmaxima bei 264 nm (eJ* = 372), 325 nm (62), 420 nm (40), und in 0,05 N NaOH-95 % Methanol (in Fig. 14 mit einer Kettenlinie darge-" stellt) drei Maxima bei 267 nm (E^^% = 276), 375 nm (44) und 543 nm (64) besitzt. Ausserdem besitzt sie das in Fig. 15 gezeigte Infrarot-Absorptionsspektrum (in Nujöl) welches charakteristische Äbsorptionsbanden bei 3355, 1680, 1655, 1600, 1545, 1350, 1310, 1265, 1180, 1155, 1085, 1070, 1055, 1020, 950, 955, 900, 835 und 790 cm""¹ aufweist, sowie das in Fig. 16 dargestellte kernmagnetische Resonanzspektrum (in D-O) ο Mach der Dampfdruckmethode wurde ihr Molekulargewicht

zu etwa 350 ermittelt. Sie hat folgende analytische Zusammensetzung: C 64,13 %, H 5,01 %, N 9,25 %, 0 21,61 % (durch Differenz). Sie ist leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan. Ihre Rf-Werte an Silikagel-Dünnschicht-Platten (erhältlich von E. Merck) betragen 0,22 bei Entwicklung mit Chloroform: Methanol (9:1) und 0,39 bei Entwicklung mit Äthylacetat: Methanol (3:2), während die entsprechenden Werte der Substanz SF-1739 HP jeweils 0,26 und 0,31 betragen. Sie ist in neutralem und saurem Methanol stabil, jedoch in alkalischem Methanol weniger stabil.

(IIIc) Herstellung der beiden Substanzen

Diese Substanzen können aus natürlichen gelben Metaboliten durch Säurebehandlung hergestellt werden, wobei die genannten Metaboliten in einer Kulturflüssigkeit durch Züchten solcher Actinomyceten, wie Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 (offenbart in der vorhergehend genannten japanischen offengelegten, nicht geprüften Patentanmeldung) gebildet werden.

Für diese Behandlung eigenen sich folgende Säuren: eine mineralische Säure, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure und dergleichen, und eine organische Säure, wie Trifluoressigsäure, Methansulfonsäure, Trifluormethansulfonsäure und dergleichen. Die Reaktionsparameter können je nach der Art und der Konzentration der verwendeten Säure und des verwendeten Lösungsmittels variieren. Im Falle der Verwendung einer mineralischen oder anorganischen Säure wird die Behandlung vorzugsweise unter Kühlung oder bei Raumtemperatur während 1 Tages bis zu 1 Woche durchgeführt, wenn eine höhere Konzentration von 5 bis 10 N eingesetzt

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wird, oder bei Raumtemperatur oder einer höheren Temperatur innerhalb eines bis mehrerer Tage, wenn eine niedrigere Konzentration von nicht mehr als 5 N angewandt wird. Bei höherer Temperatur von über BO⁰C besteht die Tendenz einer zunehmenden Bildung von Nebenprodukten. Die Behandlung kann in wässriger Lösung sehr rasch verlaufen, während sie in wässrigem Methanol langsamer abläuft. Die Umwandlung der gelben Metaboliten zu den Substanzen SF-1739 HP-3 und SF-1739 HP-5 kann in einem pH-Bereich unter 3 erfolgen.

Nach Beendigung der Behandlung können die Substanzen SF-1739 HP-3 und SF-1739 HP-5 in einfacher Weise durch eine übliche Methode aus dem Reaktionsgemisch gewonnen werden, wobei man sich die vorstehend genannten physiko-chemisehen Eigenschaften der Substanzen SF-1739 HP-3 und SF-1739 HP-5 zunutze macht. Beispielsweise kann das Reaktionsgemisch mit einer Base, z.B. Natriumhydrogencarbonat, Kaliumcarbonat und dergleichen neutralisiert werden, zur Trockne konzentriert werden und der Rückstand mit Methanol extrahiert werden, worauf der Extrakt direkt durch eine präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie gereinigt wird. In alternativer Weise kann folgendes Verfahren angewandt werden, wobei bei dieser Behandlung weniger Nebenprodukte gebildet werden: Das Reaktionsgemisch kann konzentriert werden, der Rückstand wird in Methanol aufgelöst und die erhaltene Lösung wird neutralisiert und dann über eine Säule aus Sephadex LH-20 (erhältlich von Pharmacia, Schweden) geleitet, die daraufhin mit Methanol oder einem Lösungsmittelgemisch von Äthylacetat und Methanol entwickelt wird, um die gewünschten Produkte zu reinigen.

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(IIId) Als Referenz wird der Stamm SF-1739, welcher die gelben Ausgangsmetabolxte für diese Präparation bilden kann sowie die Herstellung der gelben Metabolite nachfolgend im Detail angegeben.

Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 wurde unter der Eintragungsnummer 3002 beim Technischen Forschungsinstitut für mikrobielle Industrie, der Agency für industrielle Wissenschaft und Technologie, dem Ministerium für internationalen Handel und Industrie, Japan, niedergelegt. Der vorstehend genannte Stamm Nr. 3002 besitzt folgende morphologische Charakteristiken:

(I) Morphologie^.

Luftrayeel (aerial mycelium) wächst auf Hafermehl-Agar, Hefe-Malz-Agar und dergleichen in üppiger Weise unter reicher Sporenbildung. Es werden einfache Zweige beobachtet, jedoch keine büschelförmigen Zweige. Am oberen Ende des Luftmycels bildet sich eine lose offene Spirale. Eine spezifische Konfiguration wie Sclerotia· wird nicht beobachtet. Unter dem Mikroskop ist die Sporenoberfläche warzenartig und teilweise stachelig. Die Sporen sind in ihrer Form eliptisch bis kurzzylindrisch und besitzen eine Grosse von 0,6 bis 0,8 χ 0,8 bis 1,2 u. Die Sporenketten bestehen im allgeme^irien aus 10 oder mehr Sporen pro Sporenkette.

(II) H§£i}§£üS„ä^_Y§E§£ili§§g
G^a£i}_?-üchtung_bei_28°C}_

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Medium	Wachstum äf	Luft- mycel	lösliches Pigment
Sucrose-Nitrat- Agar	gut, blass gelblich grau	grau	keines
Glucose-Aspara- gin-Agar	spärlich, cremefarben	schlecht, weiss	keines
Glycerin-Aspara- gin-Agar	hellgrau	grau	keines
Stärke-Agar	gut, blass gelbgrau - leicht oliv grau	grau - oliv - grau	keines
Hafermehl-Agar	gut,, blass gelbes Grau	üppig, grau	keines
Hefe-Malz-Agar	gut, graufar benes Gelb braun	üppig, dunkel grau	keines
Tyros in-Agar	dunkelgrau	olivgrau	keines
Nährsalz-Agar	blassgelb - graufarben gelb	grau	keines

ft

(III)

Temperaturbereich für das Wachs tum Gelatineverflüssigung

20 bis 4CTC auf Hefe-Malz-Agar-Medium langsam bei Züchtung bei 2O°C über einen Zeitraum von nicht unter 21 Tagen

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Stärkehydrolyse
Gerinnung von Magermilch

Peptonisierung von Magermilch
Melaninbildung

positiv (stark bei 28⁰C) positiv (stark bei 28⁰C und 37°C)

positiv (bei 28°C und 37°C)

negativ

ham-Gottliebj_s-A2ar-Medium_bei_28_C]_

D-Glucose +

D-Fructose +

D-Xylose +

D-Mannit +

I-Inosit + L-Arabinose --- +

Rhamnose +

Sucrose + Raffinose

Beim Zusammenfassen der oben angegebenen Eigenschaften zeigt sich, dass der Stamm SF-1739 zur Klasse (genus) der Streptomyces gehört, am oberen Ende des Luftmycels spiralförmig
ausgebildet ist und eine warzenähnliche Sporenoberfläche besitzt. Das Wachstum auf verschiedenen Medien ist grau bis
graufarben gelb-braun und das Luftmycel ist grau,- Eine Melaninbildung wurde nicht beobachtet; ausserdem wurden auch keine löslichen Pigemente beobachtet.

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NACHCSREtCHT]

Die Eigenschaften des Stammes SF-1739 sind denen von Streptornyces griseoplanus unter den Arten des Genus Streptomyces sehr ähnlich. .Insbesondere besitzen beide die gleiche Spiralbildung , die gleiche warzenähnliche Sporenoberflache, ein graues Luftmycel und es wird in beiden Fällen keine Melaninbildung beobachtet. Beim Vergleich von Stamm SF-1739 mit Streptomyces griseoplanus,, wie in ISP beschrieben (International Streptomyces Project) /siehe International Journal of Systematic Bacteriology, ΛΒ_, Seiten 124-126 (1968^7 unterscheidet sich der in ISP beschriebene Stamm vom Stamm SF-1739 hinsichtlich seines schlechten Wachstums auf Stärke-Ägar, der Verwendung von Raffinose und der NichtVerwendung von Sucrose, L-Inosit, D-Mannit und Rhamnose, jedoch ist ersterer dem letzteren sehr ähnlich, indem die Sporenoberfläche warzenähnlich bis nahezu stachelig ist.

Aus dem vorher gesagten scheint es verständlich, dass der Stamm SF-1739 zur Klasse Streptomyces griseoplanus gehört,, da die morphologischen Eigenschaften in vollkommener Übereinstimmung miteinander sind und sich andere prinzipielle Eigenschaften ebenfalls gut vergleichen lassen. Jedoch unterscheidet sich ersterer von dem in ISP beschriebenen Stamm hinsichtlich seines Nutzungsschemas der Kohlenstoffquelle und anderen Eigenschaften» Aus diesem Grunde wurde der Stamm SF-1739 als Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 bezeichnet. Er wurde bei der American Type Culture Collection,Rockville,USA unter der Hinterlegungsnr. ATCC 31451 hinterlegt.

Obwohl hier die Herstellung hauptsächlich im Hinblick auf den Stamm SF-1739 erläutert wird, ist es allgemein bekannt, dass verschiedene Eigenschaften von sämtlichen Mikroorganismen, die zur Klasse der Streptomyces gehören, nicht definitiv sind, sondern dass Mikroorganismen der Klasse Streptomyces auf natürliche und künstliche Weise leicht verändert

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werden können. Es sollen daher sämtliche Stämme, welche in der Lage sind, die antibiotischen gelben Ausgangsmetabolite zu bilden und die der Klasse der Streptomyces angehören, einschliesslich deren Varianten und Mutanten umfasst und gemäss der Erfindung verwendet werden.

Die Züchtung kann in befriedigender Weise durchgeführt werden, wie dies im allgemeinen für das Züchten eines beliebigen Stammes der Klasse Streptomyces durchgeführt wird. Als Komponenten für das Medium können beliebige bekannte Nährstoffe (nutrient materials) für die Klasse Streptomyces verwendet werden. Zum Beispiel dienen als Kohlenstoffquelle: Glucose, Sucrose, Stärke, Glycerin, Maissirup, Molassen, Söjabohnenöl und dergleichen. Als Stickstoffquelle können verwendet werden: Sojabohnenmehl, Weizenembryo, Fleischextrakt, Pepton, Trockenhefe, Maiskeimflüssigkeit, Ammoniumsulfat, Natriumnitrat und dergleichen. Ausserdem können anorganische Salze, wie Kalziumcarbonat, Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Phosphate etc., falls dies erforderlich ist, zu dem Medium zugegeben werden. Ausserdem kann eine kleinere Menge einer beliebigen Substanz zugegeben werden, die dazu dient, das Wachstum des Stammes zu fördern und die Bildung der antibiotischen gelben Metabolite zu beschleunigen.

Die Züchtung kann in einer Flüssigkultur, wie dies üblicherweise zur Bildung bekannter antibiotischer Substanzen angewandt wird, vorgenommen werden, vorzugsweise in Tauchkultur. Die Züchtungstemperatür liegt vorzugsweise im Bereich von .25 bis 35°C, häufig bei etwa 23°C. Eine maximale Bildung v/ird gewöhnlich in 2 bis 6 Tagen erzielt.

Die gelben Metabolite, die sich dann in einer Kulturflüssigkeit angesammelt haben, stellen eine basische, in Wasser

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teilweise lösliche Substanz dar, welche ausserordentlich instabil ist. Es ist nicht gelungen, dies zu isolieren und zu identifizieren»

Beim Einsatz der vorstehend genannten Metabolite zur Behandlung mit einer Säure, um die Substanzen SF-1739 HP-3 und SF-1739 HP-5 herzustellen, wird eine Kulturflüssigkeit, welche die Metabolite als solche enthält, mit einer Säure behandelt. In alternativer Weise ist es bequemer, die Metabolite zu konzentrieren und sie anschliessend der Säurebehandlung zu unterwerfen.

Für diese vorzugsweise angewendete Konzentrierung der Metabolite können bekannte Methoden, wie sie im allgemeinen für die Gewinnung eines basischen, in Wasser teilweise löslichen natürlichen Produktes angewendet werden, dienen. Zum Beispiel kann die Kulturflüssigkeit bzw= Kulturbrühe filtriert werden, das Filtrat basisch gemacht werden, mit Natriumchlorid, Ammoniumsulfat und dergleichen gesättigt werden und dann mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel, z.B. n-Butanol^ Äthylacetat, Butylacetat, Äther und dergleichen, extrahiert werden. Ebenso kann das Filtrat an einem Katxonenaustauschharz, wie Amberlite IRC-50, CG-50, IR-120 oder Dowex 5OW adsorbiert und dann mit einer Säure, wie Salzsäure oder Schwefelsäure eluiert werden, um die Metabolite im konzentrierten Zustand zu erhalten.

Um die gewünschten Metabolite in stärker angereichter Form su erhalten, können beliebige Kombinationen der vorstehend genannten Extraktionsmethoden und alternativ eine Adsorption mit einem Harz, z.B. XÄD-2, Desorption, Reinigung durch Säulenchromatografie mit Sephadex G-10, Carboxymethylzellulose und dergleichen und/oder Abkratzen einer Silikagel-Dünnschicht-Platte etc. angewandt werden.

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Schliesslich können die auf diese Weise konzentrierten und fraktionierten Metabolite in bevorzugter Weise für die Säurebehandlung zur Bildung der Substanzen SF-1739 HP-3 und SF-1739 HP-5 verwendet werden.

Die biologischen Aktivitäten der Derivate der Substanz SF-1739 gemäss der Erfindung werden nachfolgend beschrieben.

Antimikrobielle Wirkung

Tabelle 1 zeigt die minimale Inhibierungskonzentration der fünf Derivate der Substanz SF-1739 gemäss der Erfindung.

Tabelle 1

ANTIMIKROBIELLE WIRKUNG DER DERIVATE DER SUBSTANZ SF-1739

Microbe	MIC Substf HP	(mcg/nn inζ SF- HP-C	D 1739 HP-F	HP-5	HP-3
Bacillus subtilis	*O,O9	0,78	1,56	12,5	3,1
Staphylococcus aureus 2O9P	<O,O9	3,125	1,25	5O	3,1
Sarcina lutea	<O,O9	<0,19	0,39	6,25	0,78
Escherichia coli	3,125	>100	VlOO	5-100	>100
Escherichia coli K-12R	3,125	>100	MOO	>100	>100
Klebsiella pneumonia	3,125	50	>100 '	>1OO	>100
Pseudomonas aeruginosa	3,125	>1OO	>100	>100	>100
Proteus vulgaris	0,39	50	6,25	>100	>100

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Antitumor-Wirkung

Tabelle 2 zeigt die minimale cytopathogene Konzentration der fünf Derivate der Substanz SF-1739 gemäss der Erfindung.

. Tabelle 2

Test substanz	Minimale cytopathogene Konzentration (mcg/ml)* ....	Hep. #2	Sarcoma 130
SF-1739 HP SF-1739 HP-C SF-1739 HP-F SF-1739 HP-5 SF-1739 HP-3	HeLa S3	<0,4 <0,4 <0,4 1,9	<0,4 0,9 0,9 3,9
0,9 0,9 0,9 7,8 3,9

* ermittelt nach 48-stündiger Gewebekultur

In-vivo-carcinostatischer Effekt bei Mäusen

Männliche Mäuse vom Stamm CDF- (Alter etwa 5 Wochen,- Gewicht 19 ± 1 9, jede Gruppe bestehend aus 3 bis 5 Tieren) wurden intraperitoneal mit P-388 Leukämiezellen 1O⁶/O,O2 ml/Maus inokuliert. Jede Testsubstanz wurde in der angegebenen Dosis in Wasser aufgelöst und intraperitoneal zu 2 bis 0,2 ml/Tag/Maus

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3 Tage hintereinander 24 Stunden nach der Inokulation verabreicht. Daraufhin wurde dieZunahme der Lebensspanne (ILS) berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 zusammengefasst.

Tabelle 3

Testsubstanz	Dosis (mg/kg)	ILS (%)
SF-1739 HP	2 1 0,5 0,25	75,0 43,3 43;3 45,0
SF-1739 HP-C	16 8 4 2 1	70,2 53,8 113,5 61,5 59,4
SF-1739 HP-F	16 8	47,1 34,6
SF-1739 HP-5	40 20 8 4	56,7 51,9 30,0 25,0

Akute Toxizität

Tabelle 4 zeigt die akute Toxizität (LD₅₀) der fünf Derivate der Substanz SF-1739 gemäss der Erfindung. Die Derivate wurden intravenös an Mäuse verabreicht.

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Tabelle 4

Substanz	LD₅₀ (mg/kg)
SF-1739 HP SF-173 9 HP-C SF-1739 HP-F SF-1739 HP-5 SF-1739 HP-3	2 20 - 25 ->25 MO >1O
SF-1739	0,45

Die Verabreichung der vorliegenden Derivate der Substanz SF-1739 in der Behandlung verschiedener Tumorarten kann oral und parenteral in Form einer Präparation, welche im allgemeinen einem üblichen festen oder flüssigen pharmazeutisch annehmbaren Träger oder Exzipienten beigemischt ist, erfolgen. Die feste Präparation für die orale Verabreichung kann umfassen: eine Kapsel, eine Tablette, ein Granulum, eine Pastille und dergleichen und die topisch anwendbare Präparation kann ein Suppositorium, eine Salbe und dergleichen umfassen. Die flüssige Präparation kann umfassen:*eine Suspension, einen Sirup und dergleichen, und kann oral, topisch oder durch Injektion verabreicht werden. Derartige Präparationen können in einfacher Weise mit üblichen Materialien durch geeignete Methoden, wie sie dem Fachmann wohl bekannt sind, hergestellt werden. Die Menge des aktiven Bestandteiles bzw. Wirkstoffes in der vorliegenden Präparation oder dem vorliegenden Mittel sowie auch die anzuwendende Wahl der Präparation wird üblicherweise von der Art und dem Ausmass der zu behandelnden

* eine Lösung

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Krankheit, der Verabreichungsweise, dem Körpergewicht, dem Alter des Patienten, der Aktivität und Toxizität des Derivates der Substanz SF-1739 etc. abhängen.

Bei injizierbaren Präparationen ist es für Erwachsene wünschenswert, diese subkutan, intramuskulär oder vorzugsweise intravenös oder intraarteriell mit einer täglichen Dosis von 1 bis 100 mg kontinuierlich über mehrere Tage oder mit einer Dosis von 2 bis 200 mg jeden zweiten oder jeden dritten Tag zu verabreichen. Je nach der Art des Tumors kann es besonders wirksam sein, die Präparation direkt in den Tumor selbst zu injizieren.

Bei oraler Verabreichung ist es für Erwachsene wünschenswert, die Präparation in einer einzigen täglichen Dosis von 1 bis 500 mg/Tag oder /2. Tag zu verabreichen. Bei topischer Applikation kann der Wirkstoff direkt auf die angegriffene oder erkrankte Stelle in Form einer Mixtur mit einem geeigneten Grundstoff aufgetragen werden, um 1 bis 20 % Wirkstoff auszumachen.

In der Praxis kann auch so vorgegangen werden, dass einer oder mehrere der vorliegenden aktiven Derivate entweder allein oder in Kombination mit anderen bekannten Antitumormitteln und/oder beliebigen Immunobeschleunigern verwendet werden.

Für den Fall, dass die vorliegenden Derivate der Substanz SF-1739 als antimikrobielle Mittel, insbesondere als antibakterielle Mittel verwendet werden, können diese,ebenfalls oral oder parenteral in Form einer festen oder flüssigen Präparation, wie sie im allgemeinen für andere bekannte antibakterielle Mittel oder Antibiotika angewandt wird, verwendet v/erden. Als Präparation für die orale Verabreichung sind z.B.

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zu nennen: eine Kapsel, eine Tablette, ein Pulver, ein Granulum, eine Lösung, eine Suspension oder ein Sirup. Für die topische Anwendung können z.B. genannt werden: ein Suppositorium, eine Salbe und dergleichen. Als Präparation für die parenterale Verabreichung kommen injizierbare Lösungen oder Suspensionen in Frage; die Präparationen können auf subkutane, intramuskuläre oder intravenöse Weise verabreicht werden. Die Menge des zu verabreichenden Wirkstoffes kann je nach der Art und dem Schweregrad der Erkrankung, dem Körpergewicht, dem Alter des Patienten, der Aktivität und Toxizität der Derivate der Substanz SF-1739 und anderen Faktoren variieren; jedoch wird das aktive Derivat im allgemeinen bei Erwachsenen in einer täglichen Dosis von 1 bis 500 mg bei oraler Verabreichung in einer einzelnen Dosisform oder mehreren getrennten Formen oder einer einzelnen Dosis von 1 bis 100 mg bei parenteraler, z.B. intramuskulärer oder intravenöser Verabreichung, gegeben. Vom Arzt können unter besonderer Beachtung des Schweregrades einer Erkrankung, der körperlichen Konstitution eines Patienten und möglicher nachteiliger Effekte höhere oder niedrigere Dosen gewählt und angewandt werden.

Das erfindungsgemässe Derivat der Substanz SF-1739 kann entweder allein, als ein Gemisch derselben oder in Kombination mit anderen bekannten antimikrobiellen Mitteln, wie verschiedenen Antibiotika und dergleichen, verabreicht werden.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern, ohne diese zu beschränken.

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Beispiel 1

Eine Lösung von 6 mg SF-1739-Hydrochlorid in 3 ml 5 N Salzsäure wurde bei Raumtemperatur 1 Woche stehen gelassen. Die Lösung wurde mit festem Natriumhydrogencarbonat neutralisiert und die neutralisierte Lösung unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in einer kleinen Menge Methanol aufgelöst, Unlösliches abfiltriert und das FiItrat konzentriert. Der Rückstand wurde auf eine präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platte (2 χ 100 χ 100 mm, erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform und Methanol (9:1) entwickelt wurde. .Eine purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,45 wurde aus der Platte ausgeschnitten und mit Methanol extrahiert.

Der Extrakt wurde zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde wiederum in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (2:1) aufgelöst und der unlösliche Anteil abfiltriert. Das Filtrat wurde zur Trockne konzentriert', wobei 3,3 mg der Substanz SF-1739 HP erhalten wurden.

Beispiel 2

Herstellung der Substanz SF-1739 HP-C

Zu einer Lösung von 71 mg der Substanz SF-1739 HP in 5 ml Wasser wurden 144 mg Natriumeyanid gegeben und das erhaltene

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Gemisch 30 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen gelassen. Daraufhin wurde dieses unter vermindertem Druck unterhalb 35°C durch Addition von n-Butanol zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde in einer kleinen Menge Methanol aufgelöst, der unlösliche Anteil abfiltriert und das Filtrat konzentriert. Der Rückstand wurde auf eine präparative Silikagel-Dünrischichtchromatografie-Platte (2 χ 100 χ 100 mm, erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die daraufhin mit einem Lösungsmittelgemisch aus Äthylacetat und Methanol (3:2) entwickelt wurde. Eine purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,70 wurde abgekratzt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert und der Rückstand in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (2:1) wieder aufgelöst. Der unlösliche Anteil abfiltriert und dann das Filtrat zur Trockne konzentriert, wobei 35 mg der Substanz SF-1739 HP-C erhalten wurden.

Beispiel 3

H§E§£ellung_der_Substanz_SF-1_739_HP-F

Eine Lösung von 35 mg der Substanz SF-1739 HP in 1,5 ml Formamid wurde 5 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen gelassen. Das Reaktionsgemisch wurde dann unter vermindertem Druck unterhalb 50⁰C zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde in einer kleinen Menge Methanol aufgelöst und die erhaltene Lösung auf eine präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platte (2 χ 100 χ 100 m, erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Äthylacetat und Methanol (3:2) entwickelt wurde. Eine purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,53 wurde

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durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert, der Rückstand in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (2:1) wieder aufgelöst, der unlösliche Anteil abfiltriert und dann das Filtrat zur Trockne konzentriert, wobei 25 mg der Substanz SF-1739 HP-F erhalten wurden.

Beispiel 4

Zu einer Lösung aus 73 mg der Substanz SF-1739 HP in 2 ml . Methanol wurden 72 mg Kaliumcyanid gegeben und das erhaltene Gemisch 5 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde auf eine präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platte (2 χ 100 χ 100 mm, erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Äthylacetat und Methanol (3:2) entwickelt wurde. Eine purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,70 wurde durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert, der Rückstand in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (2:1) wieder aufgelöst, der unlösliche Anteil abfiltriert und dann das Filtrat zur Trockne konzentriert, wobei 50 mg der Substanz SF-1739 HP-C erhalten wurden.

Beispiel 5

SF-1739_HP

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Sporen von Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 (Accessions-Nr. 3002 beim Technical Research Institute of Microbial Industry) wurden in 1,6 1 eines flüssigen Mediums, welches 1iO % Stärke und 3,0% Sojabohnenmehl (pH 7,0) enthielt, inokuliert; die Kultur wurde 30 Stunden lang bei 28°C unter Verwendung von 16 Sakaguchi-Kolben in Bewegung gehalten, wobei sich eine Keimkultur bildete.

Die auf diese Weise erhaltene Keimkultur (seed culture) wurde in 70 1 eines flüssigen Mediums aus- Stärkesirup (3,0 %) , Sojabohnenmehl (2,0 %), Rindfleischextrakt (1,0 %), Weizenembryo (1,0 %) und Natriumchlorid (0,3 %) (pH 6,6) inokuliert; die Kultur wurde unter Belüften 90 Stunden lang bei 28°C unter Verwendung von zwei Fermentationsgefässen geschüttelt, wobei jedes 50 1 Volumen umfasste.

Die KuItürflüssigkeit wurde mit 6 N Salzsäure auf pH 3 bis eingestellt und mit einem Filterhilfsmittel, Hyflo Super CeI, filtriert. Das Filtrat (ungefähr 47 1) wurde mit 3 N Natriumhydroxid auf pH 6 eingestellt und über eine Säule geleitet, die etwa 4 1 eines Ionenaustauschharzes, Amerblite IRC-5O (H ) enthielt, um die antibiotischen Metabolite zu adsorbieren. Die Säule wurde gründlich mit Wasser gewaschen und mit 0,2 N wässriger Salzsäure eluiert. Die aktive Fraktion von etwa 4,5 1 wurde mit Natriumchlorid gesättigt, mit Natriumhydroxid auf pH 8,0 eingestellt und dann zweimal mit jeweils 1-Liter-Anteilen von Äthylacetat unter Kühlen extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wurde wiederum mit 200 ml einer 0,05 N wässrigen Salzsäure extrahiert. Die erhaltene wässrige Lösung (pH 2,0) wurde unter vermindertem Druck zur Trockne konzentriert, wobei 1,68 g der antibiotischen Metabolite als pulverförmiges Rohprodukt erhalten wurden. Dieses pulverförmige

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Rohprodukt wurde in 20 ml 5 N Salzsäure aufgelöst, 1 Woche lang bei Raumtemperatur stehen gelassen und dann wiederum unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wurde in 20 ml Methanol gelöst und die erhaltene gelblich-rote Lösung mit festem Natriumhydrogencarbonat neutralisiert, bis diese purpurfarben wurde. Unlösliche Anteile wurden abfiltriert, das Filtrat konzentriert und daraufhin der Rückstand auf sieben präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platten (2 χ 100 χ 100 mm, erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Äthylacetat und Methanol (3:2) entwickelt wurden. Die purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,12 wurde von jeder Platte durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden zur Trockne konzentriert, wobei die Substanz SP-1739 HP-5 als pulverförmiges Rohprodukt erhalten wurde. Dieses pulverförmige Rohprodukt wurde in einer kleinen Menge Methanol aufgelöst und auf drei präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platten aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform und Methanol (9:1) entwickelt wurden. Purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,12 wurden durch Abkratzen entfernt, mit Methanol extrahiert und der Extrakt zur Trockne konzentriert. Der Rückstand wurde in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (3:1) aufgelöst, unlösliche Anteile abfiltriert und das Filtrat zur Trockne konzentriert, wobei 153 mg der Substanz SF-1739 HP-5 erhalten wurden.

Von den ersten Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platten wurden die purpurfarbenen Bande mit einem Rf-Wert von 0,39 durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert, der Rückstand in einer kleinen Menge Methanol aufgelöst und auf eine präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platte (2 χ 100 χ 100 mm,

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erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform und Methanol (9s 1) entwickelt wurde. Eine purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,22 wurde durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert, der Rückstand in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (2:1) aufgelöst,, unlösliche Anteile durch Filtration entfernt und das Filtrat zur Trockne konzentriert, wobei 27 mg der Substanz SF-1739 HP-3 erhalten wurden.

Von den ersten Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platten wurden die purpurfarbenen Bande mit einem Rf-Wert von 0,31 durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert, der Rückstand in einer kleinen Menge Methanol aufgelöst und auf zwei präparative Silikagel-Dünnschichtchromatografie-Platten (2 χ χ 100 mm, erhältlich von E. Merck) aufgetragen, die dann mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform und Methanol (9:1) entwickelt wurden. Purpurfarbene Bande mit einem Rf-Wert von 0,26 wurden durch Abkratzen entfernt und mit Methanol extrahiert. Der Extrakt wurde zur Trockne konzentriert, der Rückstand in einem Lösungsmittelgemisch aus Methanol und Aceton (2:1) aufgelöst, unlösliche Anteile abfiltriert und dann das Filtrat zur Trockne eingedampft, wobei 99 mg der Substanz SF-1739 HP erhalten wurden«.

Claims

HOFFMANN · EITLM & PARTNER

DR. ING. E. HOFFMANN (1930-7970) . D1PL.-I NG. W.EITLE · DR. RER. NAT. K. HOFFMANN · Dl PL.-ING. W. LEHN

DIPl.-ING. K. FOCHSLE · DR. RER. NAT. B. HANSEN ARABELLASTRASSE 4 (STESNHAUS) · D-BOOO MO NCH EN 81 . TELEFON (089) 911087 ■ TELEX 05-29619 (PATHE)

31 720 m/wa

MEIJI SEIKA KAISHA LTD-, TOKYO / JAPAN

Derivate der Substanz SF-I739, Verfahren zur Herstellung derselben und Mittel mit antibakterieller Wirkung und Antitumor-Wirkung, welche diese Derivate enthalten

PATENTANSPRÜCHE

., Substanz SF-1739 HP mit den folgenden physiko-chemischen J Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz

(2) ultraviolettes Absorptionsspektrum gemäss Fig. 1,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. mit charakteristischen Absorptionsbanden bei

909837105*0

3350, 1655, 1600, 1540, 1355, 1265, 1235, 1180, 1120, 1080, 1020, 1000, 965, 945, 920, 910, 865, 830, 790 und 750 cm"¹,

(4) kernmagnetisches ResonanzSpektrum gemäss Fig. 3,

(5) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 4,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 62,19 %; H 6,95 %; N 8,50 %, 0 22,36 % (durch Differenz") ,

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(8) Chromatografie:

durch Dünnschichtchromatografie auf Silikagel wurden Rf-Werte von 0,45 (Chloroform:Methanol = 9:1) oder 0,23 (n-Butanol:Methanol:0,1 N Salzsäure = 4:2:1),

erhalten..

2. Substanz SF-1739 HP-C mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 5,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 6 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 91O, 880, 835 und 795 em""!,

(4) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 7,

(5) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 8,

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(β) Εlernentaranalyse:

Gefunden: C 59,58%? H 6,14%? N 12,63%; O 21,65% (■durch Differenz) ,

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig·löslich in Hexan,

(8) Chromatografie;

durch Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,40 (Chloroform:Methanol = 9:1) und 0,70 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten .

3. Substanz SF-1739 HP-F mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 9,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 10 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1660, 1530, 1350, 1310, 1265, 1235, 1205, 1175, 1125, 1085, 1025, 1000, 940, 920, 830 und 795 cm ,

(4) Elementaranalyse:

Gefunden: C 57,26%,· H 6,33 %; N 12,14%; 0 24,27% (durch Differenz),

(5) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan;

(6) Chromatografie:

durch Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,28 (Chloroform:Methanol = 9:1) und 0,53 (Äthylacetat:Methanol =3:2) erhalten.

909837/'0 540 ■ " „4-

Substanz SF-1739 HP-5 mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlieh purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 11,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 12 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1655, 1600, 1540, 1350, 1260,.1235, 1175, 1085, 1025, 1000, 905, 865, 835, 790 und 775 cm~¹,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 13,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 60,93%; H 7,05%; N 8,41%; 0 23,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und Aceton und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatografie:

durch Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,12 (Chloroform:Methanol = 9:1) und 0,12 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten.

5. Substanz SF-1739 HP-3 mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 14,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 15 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3355, 1680, 1655, 1600, 1545, 1350, 1310, 1265, 1180, 1155, 1085, 1070, 1055, 1020, 950, 955, 900, 835 und 790 cm"¹,

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(4) kernmagnetisches Resonanzspektruiti gemäss Fig. 16,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 64,13%; H 5,01%; N 9,25%; 0 21,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatografie:

durch Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,22 (Chloroform:Methanol = 9:1) und 0,39 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten.

6. Verfahren zur Herstellung einer Substanz SF-1739 HP mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 1,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 2 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1655, 1600, 1540, 1355, 1265, 1235, 1180, 1120, 1080, 1020, 1000, 965, 945, 920, 910, 865, 830, ' 790 und 750 cm"¹,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 3,

(5) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 4,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 62,19%? H 6,95%; N 8,50%; 0 22,36

(durch Differenz),

Löslichkeits

leicht löslich in Wasser und Methanol^ löslich

in Äthylacetat und wenig löslich in Hexan _d

y sJ '&

(8) Chromatografie:

durch Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,45 (ChloroformiMethanol = 9:1) oder 0,23 (n-Butanol:Methanol:0,1 N Salzsäure = 4:2:1) erhalten,

dadurch gekennzeichnet , dass eine Substanz SF-1739 einer Säurebehandlung unterworfen wird.

7. Verfahren zur Herstellung einer Substanz SF-1739 HP-C mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 5,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 6 mit .charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350,

1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, 880, 835 und 795 cm"¹,

(4) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 7,

(5) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 8,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 59,58%; H 6,14%; N 12,63%; 0 21,65% (durch Differenz),

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(8) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,40 (ChloroformMethanol =9:1) und 0,70 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten,

1904628

dadurch gekennzeichnet , dass eine Substanz SF-1739 einer Säurebehandlung unterworfen wird unter Bildung einer Substanz SF-1739 HP und Umsetzung des letzteren Produktes mit einem Cyanid.

8. Verfahren zur Herstellung einer Substanz SF-1739 HP-F mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) ültraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 9,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 10 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1660, 1530, 1350, 1310, 1265, 1235, 1205, 1175., 1125, 1085, 1025, 1000, 940, 920, 830 und 795 cm ,

(4) Elementaranalyse:

Gefunden: C 57,26%; H 6,33%; N 12,14%; 0 24,27% (durch Differenz),

(5) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(6) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,28 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,53 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten,

dadurch gekennzeichnet , dass eine Substanz SF-1739 einer Säurebehandlung unterworfen wird unter Bildung einer Substanz SF--1739 HP und Umsetzung des letzteren Produktes mit Formamid.

909837I0S40·

9. Verfahren zur Herstellung einer Substanz SF-1739 HP-5 mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 11,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 12 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1655, 1600, 1540, 1350, 1260, 1235, 1175, 1085, 1025, 1000, 905, 865, 835, 790 und 775 cm"¹,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 11,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 6093%; H 7,05%; N 8,41%; 0 23,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und Aceton und wenig löslich in Hexan,

(7) 'Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,12 (ChloroformMethanol =9:1) und 0,12 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten,

dadurch gekennzeichnet , dass ein antibiotischer Metabolit einer Säurebehandlung unterworfen wird, wobei der genannte Metabolit durch Züchten von Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 und anschliessende Fraktionierung der Kulturflüssigkeit erhalten wird.

37/0640

10. Verfahren zur Herstellung einer Substanz SF-1739 HP-3 mit den folgenden physiko-chemischen Eigenschaften:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 14,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 15 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3355, 1680, 1655, 1600, 1545, 1350, .1310, 1265, 1180, 1155, 1085, 1070, 1055, 1020, 955, 950, 900, 835 und 790 cm"¹,

(4) - kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 16,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 64,13%; H 5,01%; N 9,25%; 0 21,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich 'in Aceton und Methylacetat und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,22 (Chloroform;Methanol = 9:1) und 0,39 (Äthylacetat.-Methanol = 3:2) erhalten,

dadurch gekennzeichnet , dass ein antibiotischer Metabolit einer Säurebehandlung unterworfen wird, wobei der genannte Metabolit durch Züchten von Streptomyces griseoplanus Stamm SF-1739 und anschliessende Fraktionierung der Kulturflüssigkeit erhalten wird.

290A628

11. Antibakterielles Mittel, dadurch gekennzeichnet, dass es als Wirkstoff eine oder mehrere der antibiotischen Substanzen SF-1739 HP, SF-1739 HP-C, SF-I739 HP-F, SF-1739 HP-5 und/oder SF-1739 HP-3 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst, wobei die Substanz SF-1739 HP die folgenden physiko-chemisehen Eigenschaften aufweist:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ültraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 1,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 2 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1655, 1600, 1540, 1355, 1265, 1235, 1180, 1120, 1080, 1020, 1000, 965, 945, 920, 910, 865, 830, 790 und 750 cm ,

(4) kernmagnetisches ResonanzSpektrum gemäss Fig. 3,

(5) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 4,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 62,19%; H 6,95%; N 8,50%; 0 22,36% (durch Differenz),

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(8) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,45 (Chloroform:Methanol =9:1) oder 0,23 (n-Butanol:Methanol:0,1 N Salzsäure = 4:2:1) erhalten;

die Substanz SF-1739 HP-C die folgenden physik'o-chemischen Eigenschaften aufweist:

909837/

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Äbsorptionsspektrum gemäss Fig. 5,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 6 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, 880, 835 und 795 cm"¹,

(4) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 7,

(5) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 8,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 59,58%; H 6,14%; N 12,63%, 0 21,65% (durch Differenz),

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(8) Chromatografie:

'durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,40 (ChloroformMethanol = 9:1) und 0,70 (Ä'thylacetat: Methanol = 3:2) erhalten;

die Substanz SF-1739 HP-F die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ültraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 9,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 10 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1660, 1530, 1350, 1310, 1265, 1235, 1205, 1175, 1125, 1085, 1025, 1000, 940, 920, 830 und 795 cm ,

- 12 -909837/05*0

(4) Elementaranalyse:

Gefunden: C 57,26%; H 6,33%; N 12,14%; O 24,27% (durch Differenz),

(5) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(6) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,28 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,53 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten;

die Substanz SF-1739 HP-5 die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

(1) "schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 11,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 12, mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1655, 1600, 1540, 1350, 1260, 1235, 1175, 1085, 1025, 1000, 905, 865, 835, 790 und 775 cm~¹,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 13,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 60,93%; H 7,05%; N 8,41%; 0 23,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und Aceton und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von O,12 (ChloroformMethanol =9:1) und 0,12 (Äthylacetat:Methanol =3:2) erhalten; und

909B37/Q54Ö

- 13 -

- ₁₃ - - 2304628

die Substanz SF-1739 HP-3 die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 14,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 15 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3355, 1680, 1655, 1600, 1545, 1350, 1310,. 1265, 1180, 1155, 1085, 1070, 1055, 1020, 955, 950, 900, 835 und 790 cm ,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 16,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 64,13%; H 5,01%; N 9,25%; 0 21,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,22 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,39 (Äthylacetat:Methanol =3:2) erhalten.

12. Antitumor-Mittel, dadurch gekennzeichnet , dass es als einen Wirkstoff eine oder mehrere der Substanzen SF-1739 HP, SF-1739 HP-C, SF-1739 HP-F, SF-1739 HP-5 und/oder SF-1739 HP-3 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst, wobei die Substanz SF-1739 HP die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

37/0540

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ültraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 1,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 2 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1655, 1600, 1540, 1355, 1265, 1235, 1180, 1120, 1080, 1020, 1000, 965, 945, 920, 910, 865, 830, 790 und 750 cm ,

(4) · kernmagnetisches Resonanζspektrum gemäss Fig. 3,

(5) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 4,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 62,19%; H 6,95%; N 8,50; 0 22,36% (durch Differenz),

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(8) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,45 (ChloroformMethanol =9:1) oder 0,23 (n-Butanol:Methanol:0,1 N Salzsäure = 4:2:1) erhalten;

die Substanz SF-1739 HP-C die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 5,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 6 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3350, 1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175,

1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, 880, 835 und 795 cm"¹,
(4) optische Rotationsdispersionskurve gemäss Fig. 7,

- 15 -

909837/0540

(5) kernmagnetisches ResonanzSpektrum gemäss Fig. 8,

(6) Elementaranalyse:

Gefunden: C 59,58%; H 6,14%; N 12,63% O 21,65% (durch Differenz),

(7) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan;

(8) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,40 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,70 (Äthylacetat:Methanol = 3:2) erhalten;

die Substanz SF-1739 HP-F die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsgpektrum gemäss Fig. 9,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 10, mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1660, 1530, 1350, 1310, 1265, 1235, 1205, 1175, 1125, 1085, 1025, 1000, 940, 920, 830 und 795 cm ,

(4) Elementaranalyse:

Gefunden: C 57,26%; H 6,33%; N 12,14%; 0 24,27% (durch Differenz),

(5) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

909837/0S4Ö

(6) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,25 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,53 (Äthylacetat:Methanol =3:2) erhalten;

die Substanz SF-I739 HP-5 die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

(1) schwärzlich purpurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 11,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 12 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3300, 1655, 1600, 1540, 1350, 1260, 1235, 1175, 1085-, 1025, 1000, 905, 865, 835, 790 und 775 cm"¹,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrum gemäss Fig. 13,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 60,93%; H 7,05%; N 8,41%; 0 23,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Äthylacetat und Aceton und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatografie:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,12 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,12 (Äthylacetat:Methanol =3:2) erhalten;, und

die Substanz SF-1739 HP-3 die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften aufweist:

- 17 -

909837/05&0

(1) schwärzlich prupurfarbene Substanz,

(2) Ultraviolett-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 14,

(3) Infrarot-Absorptionsspektrum gemäss Fig. 15 mit charakteristischen Absorptionsbanden bei 3355, 1680, 1655, 1600, 1545, 1350, 1310, 1265, 1180, 1155, 1085, 1070, 1055, 1020, 950, 955, 900, und 790 cm ,

(4) kernmagnetisches Resonanzspektrlim gemäss Fig. 16,

(5) Elementaranalyse:

Gefunden: C 64,13%; H 5,01%; N 9,25%; 0 21,61% (durch Differenz),

(6) Löslichkeit:

leicht löslich in Wasser und Methanol, löslich in Aceton und Äthylacetat und wenig löslich in Hexan,

(7) Chromatograf i e:

durch eine Dünnschichtchromatografie an Silikagel wurden Rf-Werte von 0,22 (Chloroform:Methanol =9:1) und 0,39 (Äthylacetat:Methanol =3:2) erhalten,

wobei der Wirkstoff in einer ausreichenden Menge enthalten ist, um Symptome und Anzeichen bei Patienten, die an Krebs leiden, zu beheben oder zu lindern.

909837/0540