DE2526981C3 - lalpha^4-Dihyaroxycholecalciferol-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Mittel - Google Patents
lalpha^4-Dihyaroxycholecalciferol-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische MittelInfo
- Publication number
- DE2526981C3 DE2526981C3 DE752526981A DE2526981A DE2526981C3 DE 2526981 C3 DE2526981 C3 DE 2526981C3 DE 752526981 A DE752526981 A DE 752526981A DE 2526981 A DE2526981 A DE 2526981A DE 2526981 C3 DE2526981 C3 DE 2526981C3
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- diene
- formula
- derivative
- hydrogen atom
- dhcc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/174—Vitamins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J71/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton is condensed with a heterocyclic ring
- C07J71/0005—Oxygen-containing hetero ring
- C07J71/001—Oxiranes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
'N/V
( Y
H O
OH
enthält.
14. Pharmazeutisches Mittel für Warmblüter gemäß Anspruch 13, das oral oder durch intramuskuläre
oder intravenöse Injektion verabreichbar ist, dadurch gekennzeichnet, daß es eine pharmazeutisch
wirksame Menge von mindestens einem 1rt-24(S)-und 1«-24(R)-Dihydroxycholecalciferol der
Formel (5-a) und ein Trägermaterial enthält, das gegenüber Warmblütern nicht toxisch ist.
15. Pharmazeutisches Mittel, um den Calciummetabolismus
von Warmblütern zu regulieren, nach Anspruch 13 oder 14, dadurch gekennzeichnet, daß
es eine pharmazeutisch wirksame Menge von mindestens einem 1a-24(S)- und 1a-24(R)-Dihydroxycholecalciferol
der Formel (5-a) und ein für Warmblüter nichttoxisches Trägermaterial enthält.
16. Prophylaktisches oder therapeutisches pharmazeutisches Mittel für Vitamin-D-Mangelkrankheiten
und verwandte Krankheiten nach einem der Ansprüche 13, 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet,
daß es eine pharmazeutisch wirksame Menge von mindestens einem 1ä-24(S)- und l<x-24(R)-Dihyd oxycholecalciferol
der Formel (5-a) enthält.
17. Futtermittel für Haustiere und Geflügel,
dadurch gekennzeichnet, daß es 0,2 bis 20 μg/kg
Futtermittel von mindestens einer der folgenden Verbindungen, nämlich 1ä-24(S)- und/oder
1 «-24(R)-Dihydroxycho!ecalciferol, enthält.
18. Angereicherte Milch, dadurch gekennzeichnet, daß sie 0,1 bis l,0μg/l von mindestens einer der
folgenden Verbindungen, nämlich 1«-24(S)- und/ oder 1 «-24{R)-Dihydroxycholecalciferol, enthä It.
R1O OR2
dargestellt, worin
R'. R; und Kj gleich oder unterschiedlich sein können
und je ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe, die in ein Wasserstoffatom überführbar ist, bedeuten.
Die allgemeine Formel (5) stellt allgemein 1*,24-(S)-Dihydroxycholecalciferol
und seine Derivate (das als 1r*,24(S)-DHCC und seine Derivate bezeichnet werden)
der folgenden Formel
OR.,
15-1)
R10
OR-
dar, worin
Ri, R2 und R 3 die gleiche Bedeutung wie oben gegeben
besitzen, la^RJ-Dihydroxycholecalciferol und seine
Derivate (das als la,24(R)-DHCC und seine Derivate bezeichnet werden) der folgenden Formel
OR.,
,■ν A
(5-2)
Gegenstand der Erfindung sind neue la,24-Dihydroxycholecalciferole
und ihre Derivate, Verfahren zu ihrer hi worin
Herstellung sowie pharmazeutische Mittel gemäß den Patentansprüchen.
Die neuen la^-Dihydroxycholecalciferoleund Deri-R1O
Ri, R2 und R3 die gleiche Bedeutung wie oben gegeben
besitzen, und eine Mischung aus la,24(S)-Epimer der Formel (5-1) und la,24(R)-Epimer der Formel (5-2).
In der vorliegenden Anmeldung wir wird die obige
Mischung aus dem 1 v?d(S)-lipimer der Formel (5-1)
und dem 1 x,24(R)-Epimer der formel (5-2) in beliebigem
Verhältnis durch die folgende Formel
OR,
IO
besitzen eine wesentlich niedrigere Toxizität (LD·-«) a!s
lA-Hydroxycholccalciferol (Ia-HCC), welches ein zu
aktiven Formen des Vitamins Di bekanntes Analoges ist.
Das !«-Hydroxycholecalciferol (Ia-HCC) wird durch
die folgende Formel
(5-3)
(B-Il
R,O
OR,
ausgedrückt In anderen Worten wird —ORj in der
24-Stellung durch
dargestellt.
Die gleiche Darstellung wie in den obigen Formeln (5), (5-1) und (5-2) wird verwendet, um die Vorstufen für
diese Verbindungen darzustellen.
Von den lm^-Dihydrowcholecalciferolen und seinen
Derivaten der Formel (5) besitzen 1«,24-Dihydroxycholecalciferole der Formel
(5-a)
HO
OH
die nützlichsten pharmakologischen Wirkungen, wie die Anmelderin festgestellt hat.
Die Ift^-Dihydroxycholecalciferole der Formel (5-a)
bedeuten ebenfalls (i) la^SJ-Dihydroxycholecalciferol
[la,24(S)-DHCC],(ii)la,24(R)-Dihydroxycholecalciferol
[1*,24(R)-DHCC] und (iii) eine Mischung aus 1«,24(S)-DHCC
und la,24(R)-DHCC (l<x,24-DHCC epimere
Mischung).
Wie im folgenden in ausführlichen Tierversuchen erläutert wird, zeigen das la,24(S)-DHCC allein, das
1«,24(R)-DHCC allein und Mischung davon eine sehr wertvolle pharmakologische Aktivität, um den Calcium-Metabolismus
von Warmblütern zu regulieren, und sie
IiO
X)
dargestellt.
Soweit der Anmelderin bekannt ist, wurde über die !«^-Dihydroxycholecalciferole noch nicht berichtet,
die einzige Ausnahme ist eine Arbeit der Erfinder der vorliegenden Anmeldung in The Journal of Steroid
Biochemisty, Band 5, Nr. 4, Juni 1974, Fourth International Congress on Hormonal Steroids, Mexico-City,
2. bis 7. Septemper 1974, Abstracts of Papers Presented (tatsächlich publiziert am 16. August 1974). In
dieser Arbeit wird angegeben, daß 24-Hydroxycholesterin (24-HC) der folgenden Formel
OH
., X
HO-
IB-2I
24.25-Dihydro\yeholcslcrin (24,25-I)HC) der folgenden
Formel
OH
HO
OH
(B-31
und deren lrc-Hydroxyderivate in Vitamin-D-Derivate
nach bekannten, üblichen Verfahren überführt werden können. Es sind jedoch nur die Verbindungen der
Formeln (B-2) und (B-3), die damals in Vitamin-D-Derivate überführt werden konnten. Dementsprechend ist es
seit dem obenerwähnten Kongreß in Mexico-City nur bekannt, daß die Umwandlung von ΐΛ-Hydroxyderivaten
der Formel (B-2) in Vitamin-D-Derivate noch untersucht wurde, und auf dem Kongreß wurde nicht
über die Umwandlung der lot-Hydroxyderivate der
Formel (B-3) in Viiamin-Ü-Üerivate berichtet. Nach den
damaligen Arbeiten der Anmelderin und ihren folgenden Untersuchungen war es nicht möglich, mit den
Verfahren, die vor der Einreichung der vorliegenden Anmeldung bzw. vor dem Prioritätstag der vorliegenden
Anmeldung bekannt waren, Vitamin-D-Derivate des Cholecalciferol-Typs aus diesen Derivaten herzustellen,
wie im folgenden näher erläutert wird. Der Anmelderin gelang es jetzt jedoch, eine Gruppe von
neuen l«-24-Dihydro\ycholecalciferolen und deren Derivaten der Formel (5) und bevorzugt der Formel
(5-a) nach dem erfindungsgemäßen Verfahren, das im folgenden näher erläutert wird, zu synthetisieren.
Das erfindungsgemäße Verfahren wird im folgenden in Einzelheiten beschrieben.
(1) Erste Reaktionssiufe
Erfindungsgemäß wird ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin
(das als Ιλ-24-DHC bezeichnet wird) der folgenden
Formel (2-a)
Oil
(Ml
(2-a)
HO
durch Umsetzung von l(\,2i\-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on
(das als 1«,2«-Epoxy bezeichnet wird) der
folgenden Formel
(H
mit einem Alkalimetall und einem Protondonor in Anwesenheit von flüssigem Ammoniak oder einem
flüssigen Amin hergestellt.
li\-24-DHC, das durch die Formel (2-a) dargestellt
wird, bedeutet eine Mischung aus 1«-24{S)-Dihydroxycholesterin
[1a-24(S)-DHC] und la-24(R)-Dihydroxycholesterin [I a-24(R)-DHC] in beliebigen Verhältnissen,
und gemäß dem Verfahren der ersten Stufe oben wird Ιλ-24-DHC als Mischung aus (S)-Epimer und (R)-Epimer
erhalten.
Soweit der Anmelderin bekannt ist, sind Ια-24-Epoxy
der Formel (1) und Ια-24-DHC der Formel (2-a) beides
neue Verbindungen, die in der Literatur nicht beschrieben werden, sondern die erstmals von der Anmelderin
synthetisiert wurden.
Das obige Ια-24-DHC kann in eine Gruppe von
Ιλ-24-DHCC und seinen Derivaten der Formel (5),
insbesondere der Formel (5-a), nach dem erfindungsgemäßen Verfahren, das näher erläutert wird, überführt
werden. Zusätzlich sind diese Verbindungen wertvolle Zwischenprodukte für andere Steriode. die physiologische
Aktivitäten besitzen, beispielsweise Zwischenprodukte für die Synthese von l<x-24,25-Trihydroxycholecalcifcml,
welches eine aktive Form von Vitamin Di ist.
Beispiele von flüssigen Aminen, die bei der ersten Stufe verwendet werden können, sind primäre, sekundäre
oder tertiäre Alkylamme wie Methylamin, Athylamin. Diäthy'amin oder Triathylamin. Die Verwendung von
flüssigem Ammoniak ist jedoch bevorzugt. Obgleich im Hinblick auf den flüssigen Ammoniak keine besondere
Beschränkung besteht, ist es bevorzugt, ihn beispielsweise durch Destillation zu behandeln, um das Wasser
daraus so weit wie möglich zu entfernen. Die geeignete Menge an flüssigen! Ammoniak oder flüssigem Amin
beträgt das 5- bis 500fache, insbesondere das 10- bis 200fache, bezogen auf diis Gewicht des li\.2rv-Epoxy-24-ketoch
lcsta-4,6-dien-3-ons.
Beispr.-ie von bevorzugten Alkalimetallen sind
Lithium, M't:ium und kalium. Lithium ist besonders gin
geeignet. Es wird eine überschüssige Menge an Alkalimetall, bezogen auf das h\,2(vEpoxy der Formel
(1), verwendet, beispielsweise das 5- bis 250tu>;hc
(ausgedrückt als Atomäquivalent), insbesondere das 10-bis
200fache, bezogen auf die Menge an 1λ,2λ-Epoxy
der Formel (1).
Bevorzugt wird ein inertes organisches Lösungsmittel für das 1λ,2λ-Epoxy der Formel (1) verwendet, damit
die Umsetzung glatt verlänti. Beispiele bevorzugter
Lösungsmittel sind die Ä'Hcr wie Äthyläther. Tetrahydrofuran,
Dioxan odei l,2-Dimetho\yäihan, aliphatisch^
Kohlenwasserstoffe wie Ligroin, Pentax Hexan. Cyclohexan
oder Methylcyclohexan und Mischungen aus zwei oder mehreren dieser Verbindungen.
Die Menge an organischem Lösungsmittel ist mindestens gleich, bezogen auf das Volumen des
verwendeten flüssigen Ammoniaks, und beträgt bevorzugt das 1 - bis 2fache, bezogen auf das Volumen des
flüssigen Ammoniaks.
Geeignete Protonendonoren sind die Ammoniumsalze wie die Ammoniumsalze organischer Säuren und die
Ammoniumsalze von anorganischen Säuren. Spezifische Beispiele der Ammoniumsalze sind
Ammoniumchlorid.
Ammoniumbromid,
Ammoniumcarbonat,
Ammoniumsulfat,
Ammoniumphosphat.
Ammoniumhydrogenphosphat, Ammoniumacetat,
Ammoniumformiat.
Ammoniumbenzoat,
Ammoniumbenzolsulfonat und Ammonium-p-toluensulfat.
Ammoniumbromid,
Ammoniumcarbonat,
Ammoniumsulfat,
Ammoniumphosphat.
Ammoniumhydrogenphosphat, Ammoniumacetat,
Ammoniumformiat.
Ammoniumbenzoat,
Ammoniumbenzolsulfonat und Ammonium-p-toluensulfat.
Vondiesen sind die Ammoniumsalze der anorganischen Säuren wie Ammoniumchlorid besonders bevorzugt.
Die Menge an Ammoniumsaiz ist mindestens äquimolar zu dem verwendeten Alkalimetall, bevorzugt beträgt sie
das bis zu 1 Omolarfache, bezogen auf das Letztere.
Niedrigere Alkohole wie Methanol, Äthanol oder tert.-Butylalkoho! können ebenfalls als Protonendonoren
verwendet werden.
Das Zugabeverfahren der Reaktionsreagentien ist bei der Durchführung der ersten Stufe des erfindungsgemäßen
Verfahrens sehr wichtig, und vorteilhafterweise wird eines der folgenden drei Zugabeverfahren
ausgewählt.
(A) Das lÄ,2a-Epoxy wird zu einer Mischung
zugegeben, die flüssiges Ammoniak und Alkalimetall enthält, und dann wird das Ammoniumsalz zugefügt Zur
Zen ist es bevorzugter, 1λ$ Ammoniumsnlz nacheinander
in 7wei oder mehreren kleinen Teilen zuzufügen.
(B) Ein geringer Anteil (wünschenswerterweise
weniger als das 0,7molfache, bezogen auf die Menge an verwendetem Alkalimetall) des AmmoP'iimsalzes wird
zuvor zii einer Mischung, die das flüssige Ammoniak und das Alkalimetall cnihä't, zugegeben. Das 1a,2<x-Epoxy
wird zu diesem System zugefügt, ii"<i dann wird der Rest
des Aminoniumsalzes zugegeben.
(C) Das l(\,2(Tc-Epoxy und das Ammoniumsalz werden
gleichzeitig in kieip>_-n Portionen r.u e;r.ci Mischung
zugegeben, die flüssiges Ammoniak und Alkalimetall enthält.
Von den ohicen Verfahren ist das Verfahren (A)
besonders bevorzugt.
Oii- Reaktionsteiiipcraiur betrag! ubiii.hcrv.eise von
-70cC bis zur Rückflußtemperatür des flüssigen
Ammoniaks in dc:r>. Reaktionssystem.
Es ist vorteilhaft, daß, nachdem der gesamte Pr jtc!ionoarior zugegeben wird, die Umsetzung bis zum
Rückfluß des flüssigen Ammoniaks weitergeführt wird,
bis das im Überschuß verwendete Alkalimetall vollständig zersetzt ist. Somit ist es mö^ch. daß man das
Endprodukt Ια-24-DHC in höherer Ausbeute erhält.
hin Verfahren war früher bekannt, bei dem l(X,2*-Epoxy-cholesta-4,6-dien-3-on der Formel
lB-4)
OH /
HO
(B-5)
einer solchen Vier-Siufen-Reduklionsreaktion die Stufen
(1) bis (4) glatt in einer einzigen Stufe ablaufen, wird in keiner Publikation beschrieben, und es wird
angenommen, daii dies eine imue Reaktion ist, die zum
ersten Mal von der Anmelderin gefunden wurde.
(2) Herstellung von 1·*,2λ-Epoxy
Das 1λ,2λ-Epoxy der Formel (1), das als Ausgangsmaterial
bei dc> ersten Stufe des erfindungsgemäßen
Verfahrens verwendet wird, kann leicht, beispielsweise durch das folgende Verfahien, hergestellt werden,
wobei als Ausgangsmaterial Fiicciltrin der folgenden
Formel
mit metallischem Lithium und Ammoniumchlorid in Anwesenheit von flüssigem Ammoniak umgesetzt wird,
wobei 1«-Hydroxycholesterin(l«-HC)der Formel
gebildet wird, um la-Hydroxychoiecalciferol (B-I)
herzustellen (D. H. R. Barton et al., J. Am. Chem.Soc, 95,2748,1973).
Es wurde gefunden, daß das 1«,2«-Epoxy, das bei der
vorliegenden Erfindung verwendet wird, durch eine Oxogruppe (= 0) in der 24-Stellung substituiert ist, und
erfindungsgemäß verläuft die Vier-Stufen-Reduktionsreaktion eines solchen la,2a-Epoxys,d. h.
(1) die Reduktion der Carbonylgruppe in der 24-Stellung,
(2) Die Reduktion der l«^2a-Epoxygruppe,
(3) die Reduktion des 4,6-Diens zu einem 5-En und
(4) die Reduktion der Carbonylgruppe in der 3-Stellung
glatt in einer einzigen Stufe, und wenn bevorzugte Bedingungen verwendet werden, kann das Ια-24-Dihydroxycholesterin
(Ιλ-24-DHC) in hoher Ausbeute von 60 bis 75% synthetisiert werden. Die Tatsache, daß bei
Ii(T
(Λ-1)
verwendet wird, das in großen Mengen in braunen Meeresalgen vorhanden ist. Ein Beispiel dieses Verfahrens
wird im folgenden näher erläutert.
Fucosterin wird mit Ozon bei niedrigen Temperaturen oxydiert, und das entstehende Ozonid wird mit
einem Essigsäure/Zink-System reduziert, um 24-K.etocholesterin der folgenden Formel
HO
(A-2)
in einer Ausbeute von ungefähr 60 bis 75% zu bilden. Das entstehende 24-Ketocholesierin wird oxydiert,
beispielsweise mit 2,3-Dichlor-5,6-dicyanobenzochinon (DDQ) bei Rückflußbedingungen, beispielsweise unter
Verwendung von Dioxan, wobei Cholesta-1,4,6-trien-3,24-dion der folgenden Formel
(A-3)
gebildet wird, und dann wird dieses Oxydationsprodukt
bei Zimmertemperatur unter alkalischen Bedingungen b5 (pH-Wert ungefähr 7,5 bis 9) unter Verwendung von
Wasserstoffperoxid epoxydiert.
Dieses Verfahren ermöglicht die Synthese von l«,2a-Epoxy der Formel (1) in einer Ausbeute von
ungefähr 40 bis 55% aus dem 24-Ketocholesterin der
Formel (A-2).
Das Cholesta-1,4,6-trieno,24-dion der Formel (A-3) ist ebenfalls eine neue Verbindung, die zum ersten Mal
von der Anmelderin synthetisiert wird.
Wenn ein niedriger Alkohol wie Methanol als Lösungsmittel für die obige Epoxydierungsreaktion
verwendet wird, scheidet sich das entstehende 1λ,2λ-Epoxy aus dem niedrigen AlkohoHösungsmittel ab. Das
ausgeschiedene Epoxy kann dann aus der Reaktionsmischung durch Filtration abgetrennt und direkt als
Ausgangsmaterial bei der ersten Stufe des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendet werden.
(3) Abtrennung von (S)- und(R)-Epimeren
von Ιλ-24-DHC
von Ιλ-24-DHC
Wie bereits angegeben, wird das Ιλ-24-DHC der Formel (2), das bei der ersten Stufe des erfindungsgemäßen
Verfahrens erhalten wird, als Mischung aus 1 Ä-24(S)- DHC und 1«-24(R)- DHC erhalten.
Es wurde gefunden, daß erfindungsgemäß das (S)-Epimer und das (R)-Epimer glatt durch substituierte
oder nichtsubstituierte Benzoylierung der Hydroxylgruppen in den 3- und 24-Stellungen des Ιλ-24-DHC
abgetrennt werden können. Mit anderen Worten, in der 1-Stellung kann eine Hydroxylgruppe selbst vorhanden
sein oder es kann eine mit einer Schutzgruppe geschützte Gruppe vorhanden sein, die in die Hydroxylgruppe
überführbar ist. um die Trennung der (S)- und (R)-Epimeren zu bewirken.
Die substituierte oder nichtsubstituierte Benzoylierung der 3- und 24-Stel!ungen des Ιλ-24-DHC kann
durchgeführt werden, indem man das Ιλ-24-DHC mit substituiertem oder unsubstituiertem Benzoylchlorid
beispielsv/eise in einem inerten organischen Lösungsmittel
in Anwesenheit einer organischen Base wie eines Säureakzeptors umsetzt. Diese Umsetzung ist üblicherweise
als Schotten-Baumann-Reaktion bekannt. Eine organische Base wie ein Pyridin kann bei der obigen
Umsetzung als inertes organisches Lösungsmittel verwendet werden, und in diesem Fall ist die
Verwendung eines Säureakzeptors nicht besonders erforderlich.
Die substituierte oder unsubstituierte Benzoylierung der 3- und 24-Stellungen des 1ä-24-DHC kann selektiv
erreicht werden, indem man mit substituiertem oder unsubstituiertem Benzoylchlorid beispielsweise in einer
Pyridinlösung bei niedriger Temperatur (z.B. -5 bis IO°C) während einer geeigneten Zeit (z.B. 10 bis 24
Stunden) umsetzt. Die Hydroxylgruppe in der 1 -Stellung kann acyliert werden, beispielsweise indem man ein
Sterin, dessen Hydroxylgruppen in den 3- und 24-Stellungen geschützt sind, mit Acylchlorid in einer
Pyridinlösung bei 0 bis 500C umsetzt. Die Hydroxylgruppe
in der !-Stellung kann trimethylisiert werden, beispielsweise indem man ein Sterin, dessen Hydroxylgruppen
in den 3- und 24-Stellungen geschützt sind, mit N-Trimethylsilyl-imidazol in einer Pyridinlösung bei
hoher Temperatur (z. B. 50 bis 1100C) umsetzt.
Führt man die substituierte oder unsubstituierte Benzoylierung von Ιλ-24-DHC bei höheren Temperaturen,
beispielsweise bei 15 bis 1000C, bevorzugt 3(1 bis
800C, so können die I-, 3- und 24-Stellungen des
Ιλ-24-DHC in einer einzigen Stufe benzoyliert werden.
Beispiele von substituierten oder unsubstituierten
Benzoylgruppen sind Benzoyl-, p-Brombenzoyl-, 2,4-Dibrombenzoyl-, p-Chlorbenzoyl- und p-Nitrobcnzoylgruppen.
Von diesen sind die Benzoyl- und p-Broniben-
zoylgruppen besonders bevorzugt.
In 1-Stellung von Ιλ-24-DHC kann eine Hydroxyl
gruppe gebunden sein. Beispiele von Schutzgruppe! dafür sind die obenerwähnten substituierten ode
unsubstituierten Benzoylgruppen, Acylgruppen (organi sehe Carbonsäurereste) oder Gruppen, die ein<
Ätherbindung ergeben. Beispiele solcher Acylgruppet sind Acetyl-, Propanoyl-, öutanoyl-, Pentanoyl-, Ca
proyl-, Cyclohexanoyl-, Chloracetyl- und Bromaeetyl gruppen. Beispiele von Schulzgruppen, die Ätherbin
düngen mit den Hydroxylgruppen in der 1 -Stellunj ergeben können, sind eine tert.-Butylgruppe. eini
Benzylgruppe. eine Triarylgruppe wie eine Triphenyl methylgruppe, eine Tetrahydropyranylgruppe, eim
Methoxymethylgruppe oder eine alkylsubstituierti Silylgruppe wie eine Trimethylsilylgruppe.
Die obigen Acylgruppen einschließlich der substitu ierten oder unsubstituierten Benzoylgruppen sind al
Schutzgruppen für die Hydroxylgruppen in de [-Stellung bevorzugt.
Um das Ιλ-24-DHC in das (S)-Epimer und da (R)-Epimer zu trennen, wird das Ιλ-24-DHC der Forme
(2-a) zuerst in ein Benzoylderivat von Ιλ-24-DHC ausgedrückt durch die folgende Formel
or;
OR,
(2-b|
überführt, worin
R4" eine substituierte oder unsubsiituierte Benzoylgrup
pe und
Rs ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe, die ir
ein Wasserstoffatom überführbar ist, bedeuten.
Dieses Benzoylderivat wird dann der Chromatographie unterworfen, wobei ein Trägermaterial verwendet
wird, das wenigstens Siliciumdioxid (S1O2) enthält, um e:
4r) in das 1 \-24(S)-Epimer und das lÄ-24(R)-Epimer zi
trennen.
Diese Epimere sind ebenfalls neue Verbindungen, die von der Anmelderin zum ersten Mal synthesiert unc
erfolgreich getrennt wurden.
ϊο Als Trägermaterial, das Siliciumoxid enthält, kanr
man beispielsweise verwenden: Silikagel, Kieselsäure Siliciumdioxid-Aluininiumoxid-Gel, Diatomeenerdt
oder Kaolin. Das Silikagel, die Kieselsäure und da; Siliciumdioxid-Aluminiumoxid-Gel, die hauptsächlich
v, Siliciumdioxid enthalten, sind besonders geeignet.
Die Chromatographie kann auf irgendeine geeignete Weise durchgeführt werden wie Hochdruckflüssigkeitschromatographie,
Dünnschichtchromatographie oder Säulenchromatographie. Um große Mengen zu trennen
W) ist die Säulenchromatographie bevorzugt. Die Saulenchrornatographie
wird beispielsweise durchgeführt indem man Silikagel als Trägermaterial und n-Hexan
Benzol Äthylacetat, Methylenchlorid oder Äther als Entwicklungslösung' mittel verwendet, um die Epimeren
πι in reiner Form zu erhalten. Unreine Fraktionen können
wiederholt der Säulenchromatographie unterworfer werden oder fraktioniert kristallisiert werden, um
geringe Mengen an Verunreinigungen zu entfernen.
909 609/266
Die Entwicklungsgeschwindigkeit von la-24(R)-DHC
ist hoch, wohingegen die Entwicklungsgeschwindigkeit seines Benzoylderivates niedrig ist.
(4) Zweite Reaktionsstufe (Synthese des
5,7- Dien- Derivats)
5,7- Dien- Derivats)
Erfindungsgemäß wird das Ια-24-DHC der Formel
(2-a), das bei der Umsetzung der ersten Stufe erhalten
wird, in ein geschütztes Derivat des la,3/?-24-Trihydroxycholesta-5.7-diens
überführt, nachdem die Wasserstoffatome der Hydroxylgruppen in den 1-, 3- und
24-Stellungen mit einer Schutzgruppe, die in ein Wasserstoffatom überführbar ist, geschützt wurden
oder nachdem das ΐΛ-24-DHC-benzoylderivat der
Formel (2-b) in das 1«-24(S)-Epimer und das la-24(R)-Epimer
getrenn! wurde oder nachdem die Benzoylschutzgruppen in den 1-, 3- und 24-Stellungen der
Formel (2-a) in andere Schutzgruppen, die in Hydroxylgruppen überführbar sind, überführt wurden.
Erfindungsgemäß können mindestens ein geschütztes 1 a,3/J-24(S)-Trihydroxycholesta-5,7-dien- Deri vat und
ein geschütztes lfx,3/J-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien-Derivat
(diese werden im folgenden der Einfachheit halber als 5,7-Dien-Derivate bezeichnet) der
Formel
OR1,
C)R,
OR5
. ι Λ
Cl
R4O
hergestellt werden, indem man mindestens ein geschütztes
Derivat des 1«-24(S)-Dihydroxycholcsterins und ein geschütztes Derivat des 1«-24(R)-Dihydroxycholcstcrins
der folgenden Formel
OR/,
/V-V
r; er
wenn
R4'. R5' und Re' gleich oder unterschiedlich sind und je
eine Schutzgruppe bedeuten, die in ein Wasserstoff a torn überführbar ist, ohne Änderung der Struktur der
folgenden Formel (3) mit einem allylischen Bromierungsmittel in einem inerten organischen Medium
umsetzt und dann die Reaktionsmischung mit einem Dehydrobromierungsmittel behandelt.
Es ist wichtig, daß bei der zweiten Stufe der Herstellung der obigen 5,7-Dien-Derivate die Hydroxylgruppen
in den 1-. 3- und 24-Stellungen des Ια-24-DHC
und seiner Epimeren der Formel (2) geschützt sind. Wenn die Umsetzung in der zweiten Stufe durchgeführt
wird, ohne daß diese drei Hydroxylgruppen des lx-24-DHC geschützt werden, können die Oxvdiition
und die Zersetzung der Hydroxylgruppen nicht verhindert werden, und die Ausbeute an den gewünschten
5.7-Dien-Derivaten wird sehr niedrig.
Die Schutzgruppe kann irgendeine Schutzgruppe sein, die in eine Hydroxylgruppe in den 1-, 3- und
24-Stellungen überführt werden kann, ohne daß das CholestaöJ-dien-Skelett nach der Umwandlung in das
5,7-Dien-Derivat zerstört wird. Beispiele solcher Schutzgruppen werden im folgenden angegeben.
(1) Acy !gruppen:
Ci _ 12 aromatische oder aliphatische Caruonsäurereste
oder deren nitro-, halogen- und alkoxy-substituierten Derivate, z. B. mit Acetyl-, Propanoyl-,
Butanoyl-, Pentanoyl-, Capronyl-, Cyclohexanoyl-, Chloracetyl-, Bromacetyl-, Benzoyl-, p-Brombenzoyl-,
p-Nitrobenzoyl-, Äthylbenzoyl- und Toluylgruppen. Von diesen sind die Acetyl-, Benzoyl-
und Propanoylgruppen besonders bevorzugt.
(2) Gruppen, die mit Hydroxylgruppen Ätherbindungen ergeben
eine tert.-Bulylgruppe, eine Benzylgruppe, eine
Triarylmethylgruppe wie eine Triphenylmethy!- gruppe, eine Tetrahydropyranylgruppe, eine
Methoxymethylgruppe und eine alkylsubstituierte Silylgruppe wie eine Trimethylsilylgruppe. Von
den obigen Schutzgruppen sind die Acylgruppen (I) besonders bevorzugt, aber die vorliegende
Erfindung ist darauf keinesfalls beschränkt.
Das Bromierungsmittel für die Allyl-Stellung kann
irgendeine Verbindung sein, die üblicherweise für die Bromierung von Allylstcllungen verwendet wird,
beispielsweise kann man bevorzugt N-Bromsuccinimid, l,3-Dibrcm-5,5-dimethylhydantoin und N-Bromcaprolactam
verwenden. Üblicherweise beträgt die Menge an allylischcm Bromierungsmittel das I — 2äquivalentfache,
bezogen auf die Menge an 5-En der Formel (2). Bei der vorliegenden Erfindung findet zuerst eine Umsetzung
zwischen dem l«-24-DHC der Formel (2), bevorzugt einem geschützten Ιλ-24-DHC oder seinem geschützten
Epiiner, und dem allylischen Bromierungsmittel in einem inerten organischen Medium statt. Geeigneterweise
wird diese Umsetzung bei Zimmertemperatur bis 1400C durchgeführt.
Das inerte organische Medium ist eines, welches mit dem Bromierungsmittel nicht reagiert. Vorteilhafterweise
wird beispielsweise ein Kohlenwasserstoff oder ein halogenierter Kohlenwasserstoff wie Hexan, Heptan,
Cyclohexan, Ligroin, Benzol, Toluol, Xylol, Brombenzol, Chlorbenzol, Nitrobenzol, Tetrachlorkohlenstoff,
1,2-Dichloräthan oder i,2-Dibromälhan verwendet.
Man kann auch ein Ätherlösungsmittel wie Äthyläther, Tetrahydrofuran, Dioxan, Methylcellosolv
oder Phenylcellosolv verwenden. Diese inerten organischen Lösungsmittel können entweder allein oder
miteinander vermischt eingesetzt werden.
Die Umsetzung verläuft bei der obigen Temperatur. Gewünschtenfalls kann die Umsetzung unter Bestrahlung
mit aktinischem Licht mit einer Wellenlänge durchgeführt werden, die den Infrarot- bis Ultraviolettstrahlen
entspricht. In diesem Fall verläuft die Umsetzung bei einer Temperatur, die niedriger ist als
Zimmertemperatur. Ein Radikalinitiator wie Azo-bisisobutyronitril,
Benzoylperoxid oder Cyclohexyl-hydroperoxid
kann ebenfalls in geringer Menge zugesetzt werden.
OH
(B-5)
/ ■;■. /
A1X)
(B-(S)
Das Dehydrobromierungsmittel ist bevorzugt Trimethylphosphit, s-Collidin oder Diäthylanilin und diese
Verbindungen können gemeinsam verwendet werden. Theoretisch verläuft die Umsetzung vollständig, wenn
die Menge an Dehydrobromierungsmittel äquimolar zu dem bromierten Produkt ist, das man bei der
vorhergehenden Bromierungsreaktion erhält; um geeignete Reaktionsgeschwindigkeiten und Ausbeuten
sicherzustellen, wird das Dehydrobromierungsmittel aber bevorzugt in einer Menge von mindestens dem
ungefähr 2molfachen, bezogen auf die Menge an bromiertem Produkt, verwendet. Da das Dehydrobromierungsmittel
ebenfalls als Reaktionsmedium wirkt, besteht für seine Menge keine besondere obere Grenze.
Im allgemeinen verläuft die Umsetzung sehr gut bei einer Temperatur von 80 bis 250°C, bevorzugt 120 bis
180°C. Die Reaktionszeit variiert in Abhängigkeit von
der Art des Dehydrobromierungsmittels, der Art des Reaktionslösungsmittels usw. Beispielsweise ist bei
einer bevorzugten Ausführungsform, bei der die Umsetzung unter Rückfluß in einem Xylol-s-Collidin-System
durchgeführt wird, die Umsetzung innerhalb einer kurzen Zeit von ungefähr 20 Minuten beendigt.
Gegen Ende derUmsetzung wird das Lösungsmittel bei vermindertem Druck abdestilliert, wobei man ein
öliges, rohes 5,7-Dien-Derivat erhält.
(5) Dritte Reaktionsslufe (Reinigung des rohen
5,7-Dien-Derivats
5,7-Dien-Derivats
Wie bereits oben angegeben, ist bereits ein Verfahren
zur Herstellung von la-Hydroxycholesterin (lix-HC)
der Formel
durch Bestrahlung mit Ultraviolettstrahlen umgelagert werden, um es in das lot,3^-Diacetoxycholecalciferon
(Vitamin-D-Derivat) der Formel
IB-I
A. O
OA,
zu überführen. Die Anmelderin rivat der Formel |
hat daher | versucht | ,das | 5,7-Dien-De- |
\ 7X ,
Y |
OR, k |
|||
ORs /\ I |
||||
ί | (3) | |||
" Y |
bekannt (D. H. R. B a r t ο η et al., |. Am. Chem. Soc, 95,
2748,1973).
Es ist weiterhin bekannt, daß das obige la-Hydroxycholesterin
(Ιλ-HC) in l«,3/?-Diacetoxycholesta-5,7-diender
Formel
R4O
das bei der /weiten Stufe erhalten wird, durch direkte Bestrahlung mit ultraviolettem Licht nach dem für die
Synthese von 1«,3/?-Diacetoxycholecalciferol der Formel
(B-I) bekannten Verfahren umzulagern, aber das gewünschte ΙίΧ-24-Dihydroxycholecalciferol-Derivat
der Formel
OR,
R4O
A1- CHiCO- bedeutet, überführt werden kann, wobei
die gleiche Umsetzung wie bei der zweiten Stufe der vorliegenden Erfindung, wie oben beschrieben, durchgeführt
wird, und dieses Produkt kann dann thermisch worin
R.1, R-, und Ri, die gleiche Bedeutung wk1 oben angegc >cn
besii/en [Formel (2)], konnte nicht isoliert werden.
Die Anmelderin nimmt an, daß dies darauf zurückzuführen ist. daß das 5.7-Dien-Derivat der Formel (3)
unrein ist und vermutlich ein 4,6-Dien-Derivat der Formel
(6)
/x/x/
R4O
enthält, worin R4, Rj und Rb die gleiche Bedeutung wie oben angegeben
besitzen. Aufgrund dieser Annahme hat die Anmelderin versucht, das rohe, bei der zweiten Stufe wie oben
gebildete und abgetrennte 5.7-Dien-Derivat zu reinigen, wobei eine bekannte Adsorptionschromatographie
unter Verwendung von Silikagel als Adsorptionsmittel, d. h. eine Dünnschichtchromatographie oder Säulenchromatographie,
verwendet wurde. Es gelang jedoch mit keinem dieser chromatographischen Verfahren, das
4,6-Dien-Derivat der Formel (6) aus dem rohen 2")
5,7-Dien-Derivat der Formel (3) abzutrennen.
Ein Beispiel ist bekannt, bei dem die Chromatographie unter Verwendung von Silbernitrat für die
Trennung und Reinigung von Acetoxycholesta-5,7 dienen (Tetrahedron Letters, Nr. 40, 4147, 1972 und jii
DE-OS 24 00 931) angewendet wurde.
Die Anmelderin hat daher daran gedacht, daß es möglich sein würde, die Silbernitrat-Chromatographie
mit dem obigen rohen 5,7-Dien-Derivat der Formei (3) durchzuführen, und hat versucht, das rohe 5,7-Dien-De- r,
rivat durch Säulenchromatographie unter Verwendung von 2%igem Silbemitrat-Silikagel zu reinigen. Dieser
Versuch mißlang, und das 4,6-Dien-Derivat konnte nicht abgetrennt werden.
Verschiedene weitere Untersuchungen von Reinigungsverfahren
für das rohe 5,7-Dien-Derivat haben schließlich zu dem Ergebnis geführt, daß freies 5,7-Dien
gut von dem freien 4,6-Dien und anderen Verunreinigungen abgetrennt werden kann, indem man ein
chromatographisches Verfahren verwendet und die 4-, Schutzgruppe von dem rohen 5,7-Dien-Derivat der
Formel (3) abspaltet und es in la^-Trihydroxycholesta-5,7-dien
(das freie 5,7-Dien) der Formel
OH
OH
HO
(3-a)
überführt und in Berührung mit einem Trägermaterial bringt, das Siliciumdioxid enthält und daran nichtmetallisches
Silber adsorbiert enthält.
Das erfindungsgemäße Reinigungsverfahren kann nicht nur mit dem rohen, geschützten 5,7-Dien-Derivat,
das bei der zweiten Stufe erhalten wird, sondern ebenfalls mit dem 5.7-Dien-Derivat in 24(S)-Epimer-Form
oder dem 5.7-Dien-Derivat in 24(R)-Epimer-Form durchgeführt werden. Auf jeden Fall ist es wesentlich,
daß eine rohe Verbindung dem erfindungsgemäßen Reinigungsverfahren unterworfen wird, nachdem die
Schutzgruppe in den 1-, 3- und 24-Stellungen abgespalten wurde, um sie in das freie 5,7-Dien der Formel (3-a)
zu überführen.
Geeignete Trägermaterialien, die Siliciumdioxid enthalten und daran adsorbiert nichtmetallisches Silber
enthalten, sind Silikagel und Siliciumdioxid-Aluminiumoxid-Gel,
die Silbernitrai entSialten oder wobei Silbernitrat an diesen haftet. Das Silikagel ist besonders
vorteilhaft.
Solches Silikagel wird beispielsweise hergestellt, indem man Silbernitrat in Wasser oder einem
geeigneten organischen Lösungsmittel wie Acetonitril oder Alkoholen löst, die Lösung mit Silikagel mischt und
dann das Lösungsmittel aus der Mischung abdampft. Wenn es für die Säulenchromatographie verwendet
wird, wird es gewünschtenfalls aktiviert und in eine Glassäule gefüllt. Wenn es für die Dünnschichtchromatographie
verwendet wird, wird ein geeignetes Fixiermittel wie Gips oder Stärke in das Silikagel eingearbeitet,
das auf obige Weise hergestellt wurde, und gewünschtenfalls wird ebenfalls ein fluoreszierendes
Mittel zugegeben. Die Masse wird dann auf einer geeigneten Platte (Glas oder Polyesterfilm) in einer
Dicke von 0,2 bis 2 mm ausgestrichen, fixiert und aktiviert.
Um eine Dünnschichtchromatographie-Platte, die nur aus Silikagel besteht, mit Silbernitrat zu imprägnieren,
wird die Platte in eine Lösung aus Silbernitrat in einem organischen Lösungsmittel (z. B. Acetonitril oder ein
Alkohol) in einer geeigneten Konzentration getaucht, getrocknet und dann aktiviert.
Die Menge an Silbernitrat, das bei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet wird, beträgt geeigneterweise
0,1 bis 20 Gew.-%, bezogen auf das Silikagel, insbesondere bevorzugt 0,5 bis 10 Gew.-%. Wenn die
Menge an Silbernitrat unter 0,1 Gew.-% oder über 20 Gew.-% liegt, wird die Trennfähigkeii schlecht. Im
letzteren Fall wird das Silbernitrat verschwenderisch verwendet.
Beispiele von Entwicklungslösungsmitteln oder Eluierungslösungsmitteln,
die für die Dünnschichtchromatographie oder die Säulenchromatographie verwendet werden können, sind organische Lösungsmittel wie
Cyclohexan, η-Hexan, Benzol, Toluol, Chloroform, 1,2-Dichlormethan, 1,2-Dichloräthan, Aceton, Diäthyläther.
Tetrahydrofuran, Äthylacetat, Methanol, Äthanol und Propanol und Mischungen davon. Von diesen sind
Mischungen aus niedrigsiedenden Lösungsmitteln wie η-Hexan, Benzol, Chloroform, Aceton, Äthylacetat oder
Methanol besonders geeignet. Geeignete Mischverhähnisse können leicht experimenteil bestimmt werden.
Die Entwicklungsverfahren, die Eluierung und die Bestimmung bzw. Feststellung können auf zufriedenstellende
Weise entsprechend bekannten chromatographischen Verfahren durchgeführt werden.
Die Anmelderin hat bei der Anwendung dieses Reinigungsverfahrens gefunden, daß das rohe 5,7-Dien-Derivat,
das bei der zweiten Stufe erhalten wird, das 4,6-Dien in einem Gewichtsverhältnis von ungefähr '/2
bis Ua, bezogen auf das gcreinigie 5,7-Dien, enthält. Eine so große Menge an 4,6-Dien kann von dem 5,7-Dien
nach dem erfindungsgemäflcii Reinigungsverfahren
abgetrennt und im wesentlichen vollständig entfernt werden.
Es wurde gefunden, HaB dieses Reinigungsverfahren
es ermöglicht, das obige freie 5,7-Dien leicht in hoher
Reinheil und Ausbeute herzustellen, wie im folgenden näher beschrieben wird. Dieses 5,7-Dien, entweder als
solches oder nachdem mindestens eine der Hydroxylgruppen in meinen I-, 3- und 24-Stellungen mit der :,
gleichen Schutzgruppe wie oben geschützt wurde, kann
in ein I.·»· 24-r>i!iydroxyvholecalcifeiOl oder dessen
jjeschuizte Derivate durch Bestrahlung mit ultravioletter
Strahlung: und Umlagerung (Isomerisierung) umgewandelt werden. ;;>
Es wird daher angenommen, daß das Reinigungsverfahren
bei der dritten Stufe der vorliegenden Erfindung ciaen sehr hohen technischen Wert besitzt.
(6) Vierte Stufe (Synthese von ^.
!«^-Cholecalciferol oder seinen
geschützten Derivaten)
geschützten Derivaten)
!«^-Cholecalciferol oder seine Derivate, die durch
Schutz von mindestens einer Hydroxylgruppe davon mit einer Schutzgruppe gebildet werden, und die durch
die folgende Formel
OR,
(5)
R1O
^O
dargestellt werden, worin
Ri, Rj und Rj die gleiche Bedeutung wie bei Formel (3-b)
besitzen, können erhalten werden, indem man mindestens ein freies 5.7-Dien, das bei der dritten Stufe gereinigt
und abgetrennt wurde, oder die Derivate davon, die durch Schutz von mindestens einer der Hydroxylgruppen
in den 1-, 3- und 24-Stcllungen des freien 5,7-Diens, -ΐΐ
ausgedrückt durch die folgende Formel
OR,
Υ'ν'Λ
OR,
i S
R1O
(3-b)
Ri, R: und Rj gleich oder unterschiedlich sind und je ein
Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe, die in ein Wasserstoffatom ohne Änderung der Struktur der
Formel (5) überführbar ist. bedeuten, in einem inerten organischen Lösungsmittel mit ultravioletten Strahlen
bestrahlt und dann das entstehende Produkt isomerisiert.
Das freie 5,7-Dien oder seine geschützten Derivate der Formel (3-b) kann 1a,3ß-24(S)-Trihydroxycholesta-5,7-dicn
oder die geschützten Derivate oder \.x,3ß-24(R)-Ti
iliydroxycliolesta-5,7-riien oder die geschützter
Deriv .c oder eine Mischung davon in beliebiger·
Verhältnissen sein, >ind diese Verbindungen können in
den 1ft-24(S) Typ, den I«-24(R)-Typ oder den gemischten
Typ von Dihydroxycholecalciferol oder seinen geschützten Derivaten nach der vierten Stufe des
erliiidungsgemäßen Verfahrens übet i'iihrt werden.
Wenn Ki, R2 und/oder Rj in den Formeln (3-b) und (5)
eine Schutzgruppe bedeuten, kann dies die gleiche .SehMt/j-nipDe sein, wie sie durch R4', R5' und und/oder
Rf.' 'η Formel (2) dargestellt wird. Das gereinigte
lA,J//-24-Trihydri)xycholesta-5,7-dien der Formel (3a)
kann in sein geschütztes Derivat nach dem gleichen Verfahren überführt werden, wie es oben für die
Trennung des Ιλ-24-LJHC in die (S)- und (K)-fcpimeren
in Abschi'iiii (3) beschrieben wurde.
Bei der vierten Stufe der vorliegenden Erfindung ist jedoch die Verwendung eines gereinigten freien
5,7-Diens, in dem aile Gruppen Ki, R2 und R3 der Formel
(3-b) Wasserstoffatome bedeuten, vorteilhafter als die Verwendung der geschützten Derivate. Da Ια-24-Dihydroxycholecalcifero!
der folgenden Formel
OH
HO
(5-al
OH
ein sog. Analoges der aktiven Formen von Vitamin Di
ist, ermöglicht die Verwendung von gereinigtem freiem 5,7-Dien der Formel (3-b) die direkte Herstellung von
Analogen von der aktiven Form des Vitamins Dj der Formel (5-a). Wenn andererseits ein geschütztes Derivat
der Formel (3-b) verwendet wird, sind zwei zusätzliche Stufen erforderlich, um die Hydroxylgruppen des
gereinigten freien 5,7-Diens zu schützen und die Schutzgruppen des entstehenden geschützten Ιλ-24-Dihydroxycholecalciferols
abzuspalten. Insbesondere treten bei der Abspaltung der Schutzgruppen eine
Teilzersetzung oder eine Degenerierung von Ια-24-Dihydroxycholecalciferol
auf.
Auch aus diesem Grund ist das Reinigungsverfahren in der dritten Stufe bei der vorliegenden Erfindung ein
sehr vorteilhaftes Reinigungsverfahren.
Das gereinigte 5,7-Dien oder seine geschützten Derivate der Formel (3-b), bevorzugt gereinigtes freies
5,7-Dien, wird in das l«-24-Dihydroxycholecalciferol
oder seine geschützten Derivate der Formel (5) oder (5-a) überführt, indem man das freie gereinigte 5,7-Dien
oder sein geschütztes Derivat in einem inerten organischen Lösungsmittel zuerst mit ultravioletten
Strahlen bestrahlt. Die ultravioletten Strahlen sind solche, von denen bekannt ist, daß sie Wellenlängen von
ungefähr 200 bis 360 nm besitzen, und bei der vorliegenden Erfindung sind solche, die Wellenlängen
von 260 bis 310 nm besitzen, besonders bevorzug i.
Beispiele von inerten organischen Lösungsmitteln, die
bei dieser Stufe verwendet werckn können, sind
Kohlenwasserstoffe und halogenierte Kohlenwasserstoffe wie Hexan, Heptan, Cyclohexan, Ligroin, Benzol,
Toluol, Xylol. Broniben/oi, Chlorbenzol, Nitrobcnzol,
Tetrachlorkohlenstoff, 1,2 Cycloäthan oder 1,2-Dibrom- >
äthan; Äther wie Diäthyläther, Tetrahydrofuran, Dioxan, Methyicpüosolv oder Phenylcellosolv; und Alkohole
wie Methanol, Äthanol, Propanol, Hexanol oder Cyclohexanol. Eenzol, Toluol, Diäthyläther, Methanol
und Äthanol, entweder allein oder als Mischungen, ;o
werden bei der vorliegenden Erfindung bevorzugt verwendet. Wird ein solches Lösungsmittel verwendet,
so kann die nachfolgende Isomerisierungsreaktion, die noch beschrieben wird, in dem gleichen Lösungsmittel
nach der ultravioletten Bestrahlung durchgeführt ι-,
werden.
Die geeignete Temperatur für die ultraviolette Bestrahlung beträgt -20 bis 80° C, bevorzugt —10 bis
200C. Bevorzugt wird die Bestrahlung in sauerstofffreier
inerter Atmosphäre wie in Argon- oder Stickstoffatmosphäre durchgeführt.
Man nimmt an, daß als Folge der ultravioletten Bestrahlung die 9,10-Stellungen des la,3j9-24-Trihydroxycholesta-5,7-diens
oder seines Derivats gespalten werden und das Ια-24-Dihydroxyprecholecalciferol- >-j
Derivat als Hauptprodukt gebildet wird.
Die Isomerisierung von Precholecalciferol ergibt das Ια-24-DihydroxyeholecaIcifero! der Formel (5) oder
(5-a).
Die Temperatur bei der Isomerisierungsreaktion ist so für das Fortschreiten der Reaktion nicht besonders
w'iCiliig.
Das ΐΛ-24-Dihydroxyprecholecalciferol-Derivat und
das Ια-24-Dihydroxycholecalcifcrol-Derivat zeigen
einen bestimmten Gleichgewichtswert, der sich entspre- r>
chend der Temperatur ändert, und bei niedrigeren Temperaturen erhöhen sich die Anteile an der letzteren
Verbindung. Offensichtlich werden jedoch bei niedrigeren Temperaturen die Umwandlungsgeschwindigkeiten
zu der letzteren Verbindung langsamer. Die Temperatur au
kann daher in Abhängigkeit vo:n Gleichgewichtswert und der Umwandlungsgeschwindigkeit ausgewählt
werden. In diesem Sinn ist die Temperatur nicht besonders wichtig für den Fortlauf der Umsetzung
selbst. -Ti
Bei der tatsächlichen Versuchsdurchführung werden diese Punkte in Betracht gezogen und Isomerisierungstemperaturen
von 10 bis 120° C, bevorzugt von 40 bis
100°C, werden verwendet.
Wünschenswerterweise wird die Isomerisierung ,ii
üblicherweise in einem inerten organischen Lösungsmittel durchgeführt. Wenn das gleiche bevorzugte Lösungsmittel
wie oben beschrieben verwendet wird, kann es ebenfalls als Lösungsmittel für die Isomerisierungsreaktion
dienen. ',-
Das Ια-24-Dihydroxycholecalciferol oder seine geschützten
Derivate der Formel (5-a) oder (5) werden so gebildet
Wenn die Schutzgruppe des geschützten Derivats von la-24-Dihydroxycholecalciferol eine Acy !gruppe e>o
ist, kann sie durch Entacylierung abgespalten werden, wobei man ein Verfahren verwendet, das darin besteht,
daß man in Alkalilösung eines Alkohols wie Methanol oder Äthanol zersetzt oder indem man reduktiv mit
LiAlH4, beispielsweise in einem Lösungsmittel wie b5
Äther, zersetzt. Bevorzugt wird die Entacylierung bei einer Temperatur von -10°C bis 50° C durchgeführt
Wenn die Schutzgruppe eine Ätherbindung mit der Hydroxylgruppe bildet, kann ein Teil davon leicht durch
Reduktion oder durch Behandlung mit einer Säure oder Alkali entfernt werden.
Das Abspalten der Schntzgruppen wird bevorzugt direkt mit der Reaktionsniischung, die man bei der
vierten Stufe erhalt, durchgeführt.
Das so gebildete l«-24-Dihydroxycholecalciferol kann abgetrennt und durch Säulenchromatographie,
präparative Dünnschichtchromatographie, Hochgeschwindigkeits-Flüssigkeitschromatographie
oder Umkristallisation gereinigt werden. Man kann ebenfalls die Chromatographie verwenden, wobei man einen Träger
verwendet, der Siliciumdioxid enthält, das daran adsorbiert nichtmetallisches Silber enthält, wie es oben
für die Reinigung des rohen 5,7-Diens beschrieben wurde, beispielsweise kann man Silikagel, welches
Silbernitrat enthält, verwenden. 1<x-24-Dihydroxycholecalciferol
höherer Reinheit kann isoliert werden, indem man zwei oder mehrere dieser Reinigungsverfahren
kombiniert.
(7) Pharmakologische Aktivitäten der
erfindungsgemäßen Produkte
erfindungsgemäßen Produkte
Das ΐΛ-24-Dihydroxycholecalciferol (la-24-DHCC)
der Formel (5-a), das nach dem erfindungsgemäßen Verfahren wie oben beschrieben erhalten wird, insbesondere
(i) la-24(S)-Dihydroxycholecalciferol. (ii) 1«-24(R)-Dihydroxycholecalciferol oder (iii) eine Mischung
der Dihydroxycholecalciferole (i) und (ii) in beliebigen Verhältnissen, ist eine neue Verbindung, die
von der Anmelderin erfolgreich synthetisiert und isoliert wurde. Diese Verbindungen sind Vitamin-Di-Analoge
mit überlegenen Aktivitäten, und ihre Toxizität ist niedrig.
Es ist bereits bekannt, daß ΐΛ-25-Dihydroxycholecalciferol
(Ια-25-DHCC) und la-Hydroxycholecalcifcrol
(Ia-HCC) überlegene Aktivitäten als Analoge der aktiven Formen von Vitamin Dj besitzen. Kürzlich
wurde gefunden, daß Ia-HCC eine sehr hohe Toxizitäl besitzt und daß seine Nebenwirkungen bei der
kontinuierlichen Verabreichung Schwierigkeiten mit sich bringen. Für das aus der DE-OS 22 09 352 bekannte
I(X,25-DHCC stehen keine Toxizitätswerte zur Verfügung,
jedoch ist aufgrund der Stoffwechselvorgänge davon auszugehen, daß seine Toxizilät analog zu
derjenigen von Ia-DHCC ist. Gegenüber diesen bekannten Produkten besitzt das erfindungsgemäße
1a,24-DHCC den bedeutenden Vorteil einer wesentlich geringeren Toxizität, wodurch eine außerordentlich
sichere Verabreichung möglich wird.
Ein Ziel der vorliegenden Erfindung besteht darin, die Toxizität des Ia-HCC zu erniedrigen. la-24,25-Trihydroxycholecalciferol
(1a-24,25-THCC) scheint, wie in vivo festgestellt wurde, eine recht selektive, obgleich
nicht so starke aktivierende Wirkung auf den intestinalen Calciumtransport zu besitzen. Wenn die epimere
la-24-DHCC-Mischung, la-24(R)-DHCC und 1a-24(S)-DHCC
(diese werden allgemein als 1a-24-DHCC bezeichnet, in vivo weiter metabolisiert werden, wird
das Ια-24-DHCC vermutlich in das la-24,25-THCC
überführt Dies läßt den Schluß zu, daß die Wirkung der epimeren l«-24-DHCC-Mischung, 1a-24(R)-DHCC und
1a-24(S)-DHCC selektiv sein kann. Das 1a-24-DHCC ist eine neue Verbindung, die in vivo noch nicht
festgestellt wurde, und man nimmt an, daß sie eine neue Aktivität aufweist
Die Anmelderin hat Vergleichsversuche der Aktivitäten der erfindungsgemäßen neuen Verbindungen mit
Ιλ-HCC durchgeführt und gefunden, daß die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen, wie es aus den
folgenden Beispielen hervorgeht, mindestens die gleiche Wirkung wie Ιλ-HCC beim intestinalen Calciumtransport
besitzen, daß ihre Wirkung auf die Knochenresorp- ■-, tion geringer ist als ungefähr ein Drittel der Wirkung
von Ιλ-HCC und daß ihre LD-,o-Werte ungefähr ein Zehntel des Werts von Ιλ-HCC betragen. Es wurde
insbesondere festgestellt, daß 1ä-24(S)-DHCC eine etwas schwächere Wirkung auf die Aktivierung des m
intestinalen Calciumtransports besitzt als 1a-24(R)-DHCC, daß es aber fast keine Knochenresorption zeigt.
Dementsprechend kann das erfindungsgemäße Ιλ-24-DHCC als einzigartige Medizin mit verminderten
Nebenwirkungen und hoher Sicherheit verwendet werden, verglichen mit bekannten Analogen von
aktiven Formen des Vitamins Di, wenn die Verbindungen beispielsweise bei Krankheiten verabreicht werden,
die durch abnormale Metabolisierung von Calcium induziert werden. Pharmakologische Versuche, die von
der Anmelderin durchgeführt wurden, haben eindeutig gezeigt, daß verschiedene optimale pharmazeutische
Präparationen hergestellt werden können, entsprechend unterschiedlichen Krankheitszuständen.
Bei der Regulierung des Calciummetabolismus von Warmblütern kann die wirksame Verabreichungsmenge
zwischen 0,01 bis 10 μg/Tag/kg Körpergewicht des
Warmblüters liegen.
Pharmakologische Versuche ergaben, daß bevorzugt geeignete Dosen der obigen neuen aktivierten Vitamin- jo
Dj-Derivate bei der klinischen Anwendung ungefähr 0,04 bis 0,4 μg (96,2 bis 962 ρ Mol)/kg Körpergewicht
betragen.
Man nimmt an, daß die Ιλ-24-DHCC-Verbindungen
der Formel (5-a) auf verschiedenen klinischen und j-, Veterinären Gebieten verwendet werden können und
daß sie für die Behandlung des abnormalen Metabolismus von Calcium und Phosphor, verursacht durch
Leberversagen, Nieren versagen. Versagen des gastrointestinalen
Trakts und bei parathyroidem Versagen und verwandten Knochenkrankheiten verwendet werden
können wie Vitamin-D-abhängige Rachitis, Nierenosteodystrophie, Hypoparathyridismus, Osteoporose,
Knochenerweichung, Pagetsche Krankheit, Malabsorptionssyndrom, Hypocalcaemie, die durch Leberzirrhose 4-,
induziert v.ird, Hypocalcaemie, die durch Steatorrhoe induziert wird, Hypocalcaemie, die durch Vitamin-D-resistente
Rachitis erzeugt wird. Es wird angenommen, daß diese Verbindungen sicherere Arzneimittel sind als
die bekannten Ιλ-HCC und Ιλ-25-DHCC. Es ist -,»
ebenfalls möglich, ein Mittel zu verwenden, das mindestens eine der folgenden Verbindungen 1«-24(R)-DHCC
und 1«-24(S)-DHCC zusammen mit anderen Mitteln enthält, die den Calciummetabolismus regulieren.
Beispielsweise können die Verbindungen bei der r>
Behandlung von Pagetscher Krankheit zusammen mit Calcitonin verwendet werden.
Geeignete Verabreichungsrouten sind orale, buccale und parenterale (intramuskuläre, subkutane, intravenöse
und rektale) Verabreichung. Dosisformen sind bn
beispielsweise komprimierte Tabletten, beschichtete Tabletten, harte oder weiche, elastische Gelatinekapseln,
Äthylalkohollösungen, Öllösungen und wäßrige Suspensionen.
Das Lösungsmittel für die Öllösungen kann ein b5
pflanzliches öl wie Mais-, Baumwollsamen-, Cocosnuß-, Mandel- oder Erdnußöl sein, ein Fischleberöl oder ein
öliger Ester wie Polysorbate 80.
Für die rektale Verabreichung können die erfindungsgemäßen Verbindungen zu pharmazeutischen Mittein
verarbeitet werden, die einen Suppositorien-Grundstoff wie Kakaoöl oder andere Triglyceride enthalten. Um
die Lagerbeständigkeit zu verlängern, enthalten die Mittel vorteilhafterweise ein Antioxydans wie Ascorbinsäure,
butyliertes Hydroxyanisol oder Hydrochinon.
Futtermittel für Haustiere können hergestellt werden, die das erfindungsgemäße ΙίΧ-24-DHCC in einer Menge
enthalten, so daß keine toxischen Wirkungen auftreten, um die Hypocalcaemie von Kühen zum Zeitpunkt des
Kalbens oder nach dem Zeitpunkt des Kalbens zu verhindern oder um die Hypocalcaemie von Haustieren
zu verhindern, die keine Hypocalcaemie-Vorgeschichte aufweisen. Werden diese Verbindungen Geflügel
während der Legezcii verabreicht, so kann das Legen von ν tichschaligen Eiern vermieden werden. Dies ist
ein weiteres Merkmal des erfindungsgemäßen h\-24-DHCC.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung näher.
Die Untersuchungsverfahren, die in diesen Beispielen verwendet werden, um die Eigenschaften der Endprodukte
näher zu bestimmen, sind die folgenden.
Sofern nicht anders angegeben, werden die NMR-Spektren mit einem Varian-EM 360- oder IEOL-PS/
PFT-100-(Nippon Electronics Co., I.td.JGerät in Deuterochloroform
(CDCIj) Ufi;cr Verwendung von Tetramethylsilan als interner Γ ■.: ndard bestimmt.
Die Massenspektrpr md die Hochauflösungsmassenspektren
werden unter Verwendung eines Shimadzu-LKB-9000-Geräts (Warenzeichen für ein Produkt von
Shimazu Seisakusho Co.. Ltd.) bestimmt.
Die UV-Spektren werden mit einem Hitachi-EPS-3T-Gerät
(Warenzeichen für ein Produkt der Hitachi Ltd.) unter Verwendung einer Äthanollösung gemessen.
Die Schmelzpunkte werden mit einem Mikroskop mit Heiztisch bestimmt, und die erhaltenen Werte werden
nicht korrigiert.
Die absolute Konfiguration von h\-24-Dihydroxycholesterin
wird folgendermaßen bestimmt:
Eine epimere Mischung aus 24,24-Epoxycholesterin-3-benzoat.
d. h. eine Mischung aus
B,O
B,0
worin
B, eine Benzoylgruppe bedeutet, wird unter Verwenüung
von Silikagel als Carrier bzw. Träger Chromatographien,
um die beiden Epimercn /u trennen und zu gewinnen. Beide Epimere werden ni't Methanol
behandelt, um ein 24-OH-Derivat und ein 25-OCHi-Derivat
/u hüden. LVn <f'^ absolute Konfiguration der
beiden Epimeren zu bestimmen, wi'ti das modifizierte
Horean-VerfahiL-n verwendet, welches in Tetrahedron
Letter 1, 15, 19/5. beschrieben wird. Durch Reduktion der beiden üpinu-ren, tieren absolute Konfiguration so
bestimmt wurde mit einem AlClj-LiAlHh-lSystem, wird
ein 24(R)-Hvdroxyderivat aus dem 24(R),25-Epoxyderivat und ein 2/!(S/Hydro,xyderivat aus dem 24(S),25-Epoxiderivat
erhalten. Da es bekannt ist, daß das letztere S DerKüt polarer ist ais das ersiere R-Derivat, wird
,!P.genommen, daß diese Tatsache ebenfalls für das
Ια-24-DihydiOxyc'.ioluiicrin gilt. Dieses lA-24-Dihydroxycholesterin
wird in das Tribenzoat- oder Dibenzoat-Derivai überiuhrt, welches dann durch eine Silikagelsäule
Chromatographien wird. Sorr.ii werden ein stärker polares Epimer in ein 1ä-24(S)-Derivat und ein weniger
polares Epimer :n ein 1<\-24(R)-Deriv;i überführt.
Wenn in der vorliegenden Anmeldung kein besonderer Hinweis auf ein R-Derivat oder auf ein S-Derivat
erfolgt, beispielsweise wenn nur das Ια-24-DHCC
erwähnt wird, so bedeutet dies eine äquimolare Mischung aus U-24(R)-DHCCund 1«-24(S)-DHCC.
Beispiel 1 (A) Synthese des Ausgangsmaterials
lÄ,2a-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on wird nach den folgenden drei Stufen (1) bis (3) hergestellt.
(1) Synthese von 24-Ketocholesterin aus Fucosterin
Fucosterin (4,1g) wird in 100 ml Methylenchlorid gelöst und unter Kühlen der Lösung mit Trockeneis-Aceton
auf ungefähr — 200C wird das Fucosterin während 30 Minuten mit Ozon in einer Bildungsgeschwindigkeit
von 0,86 g/h und in einer Konzentration von 17,2 g/m3 (O2) oxydiert. Nach der Umsetzung
werden 8 g Zinkpulver und 200 ml Eisessig zugegeben und das entstehende Ozonid wird 24 Stunden reduktiv
bei Zimmertemperatur zersetzt. Das entstehende Zinkacetat wird dann durch Filtration abgetrennt und
mit einer wäßrigen Lösung aus Natriumcarbonat gewaschen. Die abgetrennte Methylenchloridphase
wird gut mit Wasser gewaschen und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Methylenchlorid wird bei
vermindertem Druck abdestilliert und die entstehenden, farblosen Kristalle werden unter Verwendung von
Silikagel als Trägerstoff säulenchromatographiert (eluiert mit Berizol-n-Hexan-Lösungsmittelmischung),
und man erhall 2,8 g 24-Ketocholesterin in einer Ausbeute von 70,3%.
(2) Synthese von 24-Ketocholesta-l,4,6-trien-3-on aus 24-Ketocholesterin
4,0 g 24-Ketocholesterin und 7,0 g ^-Dichlor-S.ö-dicyanobenzochinon
werden in 140 ml Dioxan gelöst, und die Lösung wird bei Rückflußtemperatur des Dioxans 27
Stunden gerührt. Nach der Umsetzung wird die Reaktionsmischung auf Zimmertemperatur abgekühlt.
Das entstehende Hydrochinonderivat wird durch Filtration abgetrennt und mit 30 ml Dioxan gewaschen.
Das FiUrat und die Waschflüssigkeiten werden vereinigt und das Dioxan wird bei vermindertem Druck
abdestillien wobei man eine schwarzbraune, ölige
Verbindung erhält.
■> Die öiige Verbindung wird durch Säulenchromalographie
übjretrcnnl und gereinigt, wozu rnun Aluinini
umoxid als Trägermateria! verwendet (us wird mit einer
Lösungsmiitelmischung aus Methylenchlorid und Aceton ciuiert), und man erhä't 2,76 g 24-Ketocholesta-
i" 1.4,6trien-3-on in Form von Kristallen. Bei der Analyse
des Produktes erhält man die folgenden Ergebnisse:
NMR-Spektrum:
0,86(3 H,S.C-18-CH )
1,20(3 H1S1C-!9-CHi),
r> 1.15(6 H, D. J = 10_Hz.C-26,27-CHi),
r> 1.15(6 H, D. J = 10_Hz.C-26,27-CHi),
5,95—6,10(3 H,M,C—4,6,7 — H),
6.29(1 H.dD.J = 11.15Hz,C-2-H).
7,10(1 H, j - M HaC-I-H);
,() Molekulargewicht (durch Gasmassenspektrum):
394 (M ^).
(3) Synthese von 1a,2<x-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on
aus 24-Ketocholesta-1,4.6-trien-3-on
2") 3,53 g 24-Ketocholesta-1,4,6-trien-3-on werden in
einer Mischung aus 100 ml Methanol, 20 ml Tetrahydrofuran und 50 ml Dioxan gelöst und 1.6 ml einer
5gew.-°/oigen Methanollösung von Natriumhydroxid und 5 ml 30%iges wäßriges Wasserstoffperoxid werden
j(i zugegeben. Die Umsetzung wird bei Zimmertemperatur
24 Stunden durchgeführt. Nach Beendigung der Umsetzung wird eine geringe Menge Essigsäure
zugegeben, um die Lösung auf einen pH-Wert von 7 zu neutralisieren. Die Reaktionsmischung wird dann
j", extrahiert, indem man Wasser und Äther zufügt. Die
Ätherphase wird gut mit Wasser gewaschen und mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Der Äther wird
bei vermindertem Druck abdestilliert, man erhält 4,04 g eines hellgelben Feststoffs. Das feste Produkt wird unter
4(i Verwendung von Silikagel säulenchromatographiert
(man eluiert mit einer Lösungsmittelmischung aus Benzo! und Äther), und man erhält 2,52 g lA,2a-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on,
welches die folgenden Eigenschaften besitzt:
4' Fp.: 150bis 151.5°C
UV-Spektrum:
UV-Spektrum:
λί;,'Γ"'= 291 um
Hochresolutionsmassenspektrum: '"· gefunden = 410.2793
berechnet (M + ) = 410,2821 (C2THj8Oi)
NMR-Spektrum:
0,80(3 H.S,C-18-Hs), 1,15(3 H,S,C-19-Hs), 3,43(1 H,dD,J =4 Hz,] - 1.5 Hz.C-2-H),
3,60(1 H, D, J =4 HzX-I-H), 5,68(1 H, D,] = l,5Hz,C-4-H),
6,10(2 H,S,C-6.C-7-Hs).
(B) Synthese des erfindungsgemäßen Ια-24-Dihydroxycholesterins (erste Stufe)
Flüssiger Ammoniak (10 ml), der mit metallischem Natrium getrocknet wurde, wird in einen Dreihalskolben,
der mit einem Tropftrichter und einem Trockeneiskühler ausgerüstet ist, eingeschlossen, wobei der Kolben
mit einem Kühlmedium gekühlt wird, welches Aceton und Trockeneis enthält. Metallisches Lithium (150 mg)
wird zu dem flüssigen Ammoniak gegeben, und man
rührt während 10 Minuten. Die Mischung wird in 15 ml
Tetrahydrofuran gelöst und 100 mg la,2a-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on
werden tropfenweise im Verlaul von 10 Minuten zugefügt.
Nach der Zugabe wird der Kolben von dem Kühlmedium abgetrennt und 20 Minuten unter Rückfluß
des Ammoniaks behandelt. Dann wird der Kolben wieder in das Kühlmedium eingetaucht und 1,5 g
vollständig trockenes Ammoniumchloridpulver werden langsam im Verlauf von 2 Stunden zugegeben. Der ι ο
Kolben wird aus dem Kühlmedium entnommen und die Umsetzung wird unter Rühren weitergeführt.
Man hört mit dem Rühren auf, wenn die blaue Farbe der Lösung vollständig verschwindet. Der Kühler wird
aus dem Kolben entnommen und Stickstoffgas wird eingeleitet, um das Ammoniak zu entfernen.
Äthylacetat (60 ml) und 60 ml 1 n-Chlorwasserstoffsäure
werden zu dem Rückstand zugegeben, um ihn der Verteilungsextraktion zu unterwerfen. Die abgekühlte
Athylacetatphase wird gut mit Wasser gewaschen und getrocknet und anschließend wird das Äthylacetat bei
vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in 3 ml Äthylacetat gewaschen und durch eine Säule
Chromatographien, die Silikagel als Trägermaterial enthält, wobei man ein Eluierungsmittel verwendet, das
eine Mischung aus Benzol und Aceton enthält. Man erhält 61 mg gereinigtes Produkt mit den folgenden
Eigenschaften:
NMR-Spektrum (in C5D5N), δ (ppm):
0,70(3 H,S, 18-CHj),0,99(3 H1S, 19-CH1),
3,28(4 H, M, 24-H und Hydroxy H),
3,82(1 H,M,10-H),4,OO(1 H,M,3«-H),
5,50(1 H, M,6-H)
3,28(4 H, M, 24-H und Hydroxy H),
3,82(1 H,M,10-H),4,OO(1 H,M,3«-H),
5,50(1 H, M,6-H)
Massenspektrum (vergl. F i g. 1): J1»
418 (M*), 400,382
Hochresolutionsmassenspektrum:
Gefunden: 418,3428
Berechnet M +(C27H^Oj) = 418,3449
Gefunden: 418,3428
Berechnet M +(C27H^Oj) = 418,3449
40
Aus den obigen Eigenschaften kann das entstehende Produkt als Ια-24-Dihydroxycholesterin identifiziert
werden.
Synthese von ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin
(erste Stufe)
(erste Stufe)
Flüssiges Ammoniak (15 ml), welches mit metallischem Natrium getrocknet wird, wird in einen r>o
Dreihalskolben eingeschlossen, der mit einem Tropf trichter und einem Trockeneiskühler ausgerüstet ist,
während man den Kolben mit einem Kühlmedium kühlt, das Aceton und Trockeneis enthält. Dann werden
400 mg metallisches Natrium zugegeben und man rührt 10 Minuten. Die Mischung wird drnn in 18 ml
Tetrahydrofuran gelöst und 100 mg l«,2«-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on
werden tropfenweise im Verlauf von 10 Minuten zugefügt.
Nach der Zugabe werden 1,8 g Ammoniumchlorid- bo
pulver im Verlauf von 1 Stunde auf gleiche Weise wie in Beispiel 1 zugegeben. Die Reaktionsmischung wird auf
gleich; Weise wie in Beispiel 1 behandelt und 69 mg (Ausbeute 68%) eines Produktes, welches das gleiche
NMR-Spektrum, Massenspektrum und Hochresolu- hr>
tionsmassenspektrum wie in Beispiel 1 zeigt, werden erhalten. Dieses Produkt wird als l«,2rx-24-Dihydroxycholesterin
identifiziert.
(A) Synthese von
ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin-tribenzoat
ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin-tribenzoat
1,25 g ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin werden mit 1,55 g
Benzoylchlorid und 20 ml Pyridin vermischt und dann bei 400C während eines Tages umgesetzt. Wasser (5 ml]
wird zu der Reaktionsmischung gegeben und dann wird diese mit 50 ml Diäthyläther extrahiert Die Ätherphase
wird mit Säure und dann mit Alkali gewaschen getrocknet und eingedampft, um den Äther zi
entfernen; man erhält rohes la,3/?-24-Tribenzoyloxy
cholest-5-en.
(B)Trennung des 24(R)-Derivats und 24(S)-Derivats
von 1 ix3^-24-Tribenzoyloxycholest-5-en
von 1 ix3^-24-Tribenzoyloxycholest-5-en
Eine n-Hexan-Lösung aus 1,58 g rohem 1 ac,3/?-24-Tri
benzoyloxycholest-5-en wird durch eine Säule chroma
tographiert, die 100 g Silikagel als Carrier enthält, um e: in Fraktionen mit jeweils einem Volumen von 50 ml zi
teilen. Die Reinheit jeder dieser Fraktionen wird durch Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie bestimmt unc
die entsprechenden Fraktionen werden vereinigt unc die Lösungsmittel werden abgedampft. Zwei Epimer£
mit den folgenden r VIR-Spektren werden erhalten. Da;
weniger polare Epimer (500 mg), das zu einem früher Zeitpunkt eluiert wird, ist das 24(R)-Derivat, und da:
stärker polare Epimer (490 mg), das zu einem späterer Zeitpunkt gegen Ende eluiert wird, ist das 24(S)-Derivat.
NMR-Spektren von 1«,3j3-24(R)-Tribenzoyloxycholest
0,65(3 H,S,C-18), 0,92(3 H,S,C-21),
l,01(6H,b,S,C-25,26),l,20(3H,S,C-19),
5,00(1 H,M,C-24).5,20(l H,M,C-3),
5,44(1 H, M, C-I), 5,70(1 H,M,C-6),
7,5 (9 H, M, Benzoyl), 8.1 (6 H, M, Benzoyl)
l,01(6H,b,S,C-25,26),l,20(3H,S,C-19),
5,00(1 H,M,C-24).5,20(l H,M,C-3),
5,44(1 H, M, C-I), 5,70(1 H,M,C-6),
7,5 (9 H, M, Benzoyl), 8.1 (6 H, M, Benzoyl)
NMR-Spektrum von 1<x,3/?-24(S)-Tribenzoyloxycholest
0,63(3 H, S,C-18)
Die anderen Spektrumswerte sind die gleichen wit fürdas24(R)-Derivat.
(A) Synthese von ΐΛ-24-Dihydroxycholesterindibenzoat
2,5 g ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin werden mit 2,101
Benzoylchlorid und 40 ml Pyridin vermischt und di< Mischung wird I Tag bei 20°C stehengelassen.
Die Reaktionsmischung wird auf gleiche Weise wie ir Beispiel 3(A) behandelt, wobei man rohes la-Hydroxy
3/?-24-dibenzoyloxycholest-5-en erhält.
(B) Abtrennung des 24(R)-Derivats und des
24(S)-Derivats von 1<x-Hydroxy-3|3-24-dibenzoyl-
oxycholest-5-en
2,1 g rohes 1«-Hydroxy-3/?-24-dibenzoyloxycholest
5-en werden durch eine Säule Chromatographien, dii 30 g Silikagel enthält, wobei man ein Eluierungslösungs
mittel verwendet, das eine 200 :1-Mischung aus Benzo
und Äthylacetat enthält, und in Fraktionen von jeweil 50 ml teilt. )ede der Fraktionen wird der Hochdruck
Flüssigkeitschromatographie unterworfen, um ihn Reinheit zu bestimmen. Die entsprechenden Fraktioner
werden vereinigt und das Lösungsmittel wird abdestil Ik-rl, wobei zwei Epimere mit den folgende! NMR
Spektrumswerten erhalten werden.
9Ö9 ÖÜ9/2ÖÖ
10
15
Das weniger polare Epimer (500 mg, Fp. 168 bis 169° C) ist das 24(R)-Derivat und das stärker polare
Epimer (600 mg, Fp. 139,5 bis 140,5° C) ist das 24(S)-DerivaL
NMR-Spektrum von li!i-Hydroxy-3^-24(R)-dibenzoyloxycholest-5-en:
0,67(3H,S,C-18),0,96(6H,b,S,C-19,21)
1,00(6 H,D,J = 6Hz,C-25,26),
3,96(1 H, M, C-I),
5,06(1 H,M,C-24),536(1 H,M,C-3),
5,71 (1 H, M,C-6),7,52(6 H, M, Benzoyl),
8,12(4 H, M1 Benzoyl)
NMR-Spektrum von la-Hydroxy-30-24(S)-dibenzoyloxycholest-5-en:
0,70(3 H, S, C-18)
Die anderen Spektrumswerte sind gleich wie bei dem 24(S)-Derivat.
B e i s ρ i e 1 5
(A) Synthese von lix,3/?-24-Triacetoxycholest-5-en
300 mg Ια-24-Dihydroxycholesterin werden mit
40 ml Essigsäureanhydrid und 125 ml Pyridin 3 Stunden bei 950C umgesetzt. Die Reaktionsmischung wird auf
gleiche Weise wie in Beispiel 3(A) behandelt, wobei man rohes l«,3/i-24-Triacetoxycholest-5-en erhält. Das rohe
Produkt wird durch eine Säule Chromatographien, die Silikagel als Carrier enthält, wobei man ein Eluierungslösungsmittel
verwendet, das Benzol enthält, und man jo erhält 325 mg gereinigtes la,3)3-24-Triacetoxycholest-5-en
als öliges, gereinigtes Produkt mit dem folgenden NMR-Spektrum und Massenspektrum:
NMR-Spektrum:
0,67(3 H,S,C-18),2,02(9 H,S,3-Acetyl), r>
4,8(2 H, M, ix- und 24- H2), 5,05(1 H, M, \ß- H),
5,65(1 H, M, 6-H)
Massenspektrum:
Massenspektrum:
484 (M + - CH 3COOH), 424,364
(B) Synthese von l«,3/?-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
300 mg l«,30-24-Triacetoxycholest-5-en werden mit
90 mg l,3-Dibrom-5,5-dimethylhydantoin in 4,5 ml n-Hexan 15 Minuten unter Rückflußbedingungen
umgesetzt. Die Reaktionsmischung wird abgekühlt und das entstehende 5,5-Dimethy!hydantoin und das überschüssige
l,3-Dibrom-5,5-dimethylhydantoin werden durch Filtration entfernt. Das Filtrat wird bei vermindertem
Druck konzentriert, man erhält 349 mg einer gelben, öligen Verbindung Xylol (2,5 ml) wird zu dieser
Substanz zugegeben, wobei eine Lösung gebildet wird. Die entstehende I ösung wird tropfenweise im Verlauf
von 15 Minuten zu einer Lösung, die bei 165° C gehalten
wird, aus 0,85 ml s-Collidin in 1,9 ml Xylol zugegeben und die Umsetzung wird dann weitere 10 Minuten
durchgeführt. Nach der Umsetzung wird das Hydrobromid des s-Collidins durch Filtration abgetrennt und das
s-Collidin und Xylol werden bei vermindertem Druck w) abgedampft. Der Rückstand wird in Diäthyläther gelöst.
Die Ätherphase wird mit 1 n-Chlorwasserstoffsäure und einer 5%igen wäßrigen Lösung aus Natriumbicarbonat
und wiederholt mit Wasser gewaschen. Sie wird dann mit Aktivkohle behandelt und der Äther wird bei br>
vermindertem Druck abgedampft, wobei man 310 mg einer gelben, öligen Verbindung erhält. Diese ölige
Verbindung wird sorgfältig zweimal durch Säulenchromatographie (Eluierung mit Benzol) unter Verwendung
von Kieselsäure Chromatographien, man erhält 69 mg (Ausbeute 23%) eines nichtkristallinen gereinigten
Produktes. Aus den folgenden Spektrumswerten wird dieses Produkt als 1«,3^-Triacetoxycholesta-5,7-dien
identifiziert.
UV-SpektrunU™1""' (nm):
262,271,282,294
262,271,282,294
NMR-Spektrum:
2,02 und 2,04(9 H1S1CHjCOO-),
4,75(2 H,b,3<x- und 24-H),
5,01(1 H,b,10-H),
5,35(1 H1D1J = 5,5 Hz,6-oder 7-H),
5,69(1 H1DJ = 5,5 Hz16-oder 7-H)
Massenspektrum:
542 (M+), 514,482,422,362,249,204
Synthese von l«,3/?-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
(zweite Stufe)
150 mg l<x,3/?-24-Triacetoyycholest-5-en werden mit
45 mg l,3-Dibrom-5,5-dimethylhydantoin in 3 ml n-Hexan 15 Minuten bei Rückflußbedingungen umgesetzt.
Die Reaktionsmischung wird abgekühlt und die entstehenden Kristalle werden durch Filtration entfernt.
Das Filtrat wird bei vermindertem Druck konzentriert, wobei man eine gelbe, ölige Verbindung erhält. Zu
dieser Verbindung gibt man 1,3 ml Xylol. Die entstehende Lösung wird tropfenweise im Verlauf von ungefähr
15 Minuten zu einer Lösung aus 0,25 ml Trimethylphosphit in 4 ml Xylol unter Rückflußbedingungen
zugefügt und die Umsetzung wird weitere 90 Minuten weitergeführt. Die Reaktionsmischung wird dann bei
einer Temperatur unter 75"C konzentriert, und man erhält 148 mg ölige Verbindung. Diese Verbindung wird
auf gleiche Weise wie in Beispiel 5(B) behandelt. Das Endprodukt zeigt die gleichen UV-, Massen- und
NMR-Spektrumswerte wie das loc,3j3-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien,
das in Beispiel 5(B) erhalten wurde.
Synthese von l(x3j3-24-Tribenzoyloxy-cholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
200 mg \oi,3ß-24-TrJbCnZOyIoXy-ChOIeSt-S-Cn, das auf
gleiche Weise wie in Beispiel 5(A) beschrieben hergestellt wurde, werden 15 Minuten unter Rückfluß
zusammen mit 55 mg N-Bromsuccinimid in 15 ml Tetrachlorkohlenstoff erwärmt. Die Reaktionsmischung
wird abgekühlt und die entstehenden Kristalle werden durch Filtration abgetrennt. Das Filtrat wird konzentriert
und 5 ml Xylol werden zu dem Rückstand zugegeben, wobei eine Lösung gebildet wird.
Die entstehende Lösung wird tropfenweise im Verlauf von 15 Minuten zu einer Lösung aus 0,2 ml
Trimethylphosphit in 4 ml Xylol unter Rückfluß gegeben, und die Mischung wird weitere 90 Minuten am
Rückfluß erwärmt
Die Reaktionsmischung wird dann bei einer Temperatur unter 75°C konzentriert und der Rückstand wird
sorgfältig zweimal durch eine Säule Chromatographien, die Kieselsäure enthält, wobei man Benzol als
Eluierungsmittel verwendet. Man erhält 50 mg (Ausbeute 25%) eines gereinigten, nichtkristallinen Produktes.
IO
15
Dieses Produkt zeigt die folgenden Spektren und wird als 1«3^-24-Tribenzoyloxycholesta-5,7-dien identifiziert
UV-Spektrum, λ J,'^""1 (nra):
231,262,271,282,294
231,262,271,282,294
NMR-Spektrum:
4,95(2 H,b, 3α-Η und 24-H),
532(2 H.b, Ij3-Hund6- oder7-H),
5,72(1 H1D,] = 6 Hz, 6-oder 7-H),
7,49 und 8,02 (15 H, M, aromatischer H)
532(2 H.b, Ij3-Hund6- oder7-H),
5,72(1 H1D,] = 6 Hz, 6-oder 7-H),
7,49 und 8,02 (15 H, M, aromatischer H)
Massenspektrum:
728(M +), 638,620,606,484,362
Synthese von l«,3j?-24(S)-Triacetoxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
l«-Hydroxy-3jS-24(S)-dibenzoyloxycholest-5-en, hergestellt
auf gleiche Weise wie in Beispiel 4(B) beschrieben, wird mit UAIH4 in trockenem Diäthyläther
reduziert, wobei la,3/?-24(S)-Trihydroxycholest-5-en
gebildet wird. Dieses Produkt (180 mg) wird dann mit 24 ml Essigsäureanhydrid und 75 ml Pyridin 3,5 Stunden
bei 95°C umgesetzt. Das Produkt wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 3(A) behandelt und durch eine Säule
Chromatographien, die Kieselgel als Trägermaterial enthält, wobei man 195 mg l«,3/?-24(S)-Triacetoxycholest-5-en
erhält.
150 mg dieses Produktes werden auf gleiche Weise so wie in Beispiel 5 gereinigt, und man erhält 43,5 mg
(Ausbeule 29%) eines gereinigten Produktes mit den folgenden Spektrumswerten. Dieses gereinigte Produkt
wird als l<x,3^-24(S)-Triacetoxycholesta-5,7-dien identifiziert.
Si
UV-Spektrum, λ ί,','Γ"' (nm):
262,271,282,294
262,271,282,294
NMR-Spektrum:
2,02und 2,04(9 H.S1CHjCOO-), w
4,75(2H,b,c-3-,C-24-H),
5,01(1 H,b,c-1-H),
5,35(1 H1D1J = 5-6Hz1C-O-OdCrC-7-H),
5,69(1 H1D1J = 5-6Hz,C-6-oderC-7-H)
Massenspektrum:
542 (M +), 514,482,422,362,249,209
4")
Synthese von 1«,30-24(S)-Tribenzoyloxy-cholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
100 mg la,3j3-24(S)-Tribenzoyloxy-cholest-5-en, das
auf gleiche Weise wie in Beispiel 3(B) erhalten wurde, werden 15 Minuten unter Rückfluß zusammen mit
23 mg l,3-Dibrom-5,5-dimethylhydantoin in 16 ml Tetrachlorkohlenstoff erwärmt. Die Reaktionsmischung
wird gekühlt und die entstehenden Kristalle werden durch Filtration abgetrennt. Das Filtrat wird konzentriert
und 2,5 ml Xylol werden zu dem Rückstand gegeben. Die Lösung wird tropfenweise im Verlauf von
15 Minuten zu einer Lösung unter Rückfluß aus 0,3 ml s-Collidin in 2 ml Xylol gegeben und dann wird weitere
10 Minuten am Rückfluß erwärmt.
Nach der Umsetzung wird das Hydrobromid von s-Collidin durch Filtration entfernt und s-Collidin und
Xylol werden bei vermindertem Druck verdampft. Der Rückstand wird in Diäthyläther gelöst. Die Ätherphase
wird mit 1 n-Chlorwasserstoffsäure und einer 5%igen
>0 wäßrigen Lösung aus Natriumbicarbonat und dann
wiederholt mit Wasser gewaschen. Die Ätherphase wird getrocknet und der Äther wird bei vermindertem Druck
verdampft; man erhält eine gelbe, öüge Verbindung.
Die ölige Verbindung wird sorgfältig zweimal durch eine Säule Chromatographien, die Kieselsäure enthält,
wobei rrxan Benzol als Eluierungslösung verwendet; man erhält 28 mg (Ausbeute 28%) eines gereinigten,
nichtkristallinen Produktes. Dieses Produkt besitzt die folgenden Spektren und wird als la,3/J-24(S)-Tribenzoyloxycholesta-5,7-dien
identifiziert.
UV-Spektrum λ™-"1 (nm):
231,262,271,282,294
231,262,271,282,294
NMR-Spektrum:
4,95(2 H,b,C-3undC-24-Hs),
5,32(2 H,b,C-1 und C-6oderC-7-H),
5,72(1 H1D1J = 6Hz,C-6oderC-7-H),
7,49 und 8,02 (15 H, M, aromat. Hs)
5,32(2 H,b,C-1 und C-6oderC-7-H),
5,72(1 H1D1J = 6Hz,C-6oderC-7-H),
7,49 und 8,02 (15 H, M, aromat. Hs)
Massenspektrum:
728(M+), 638,620,606,484,362
Beispiel 10
Synthese von lix-Acetoxy-3j3-24(S)-Dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
1 <x-Hydroxy-3j3-24(S)-dibenzoyloxycholesl-3-en, hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 4(B) beschrieben, wird mit Essigsäureanhydrid und
Pyridin auf gleiche Weise wie in Beispiel 5(A) umgesetzt. Das Reakiionsprodukt wird auf gleiche Weise wie in
Beispiel 5 beschrieben gereinigt; man erhält 1«-Acetoxy-3j3-24(S)-dibenzoyloxycholest-5-en.
462 mg la-Acetoxy-3^-24(S)-dibenzoyloxycholest-5-en
werden mit 188,6 mg N-Bromsuccinimid in 16 ml Tetrachlorkohlenstoff 30 Minuten unter Rückfluß
umgesetzt. Die Reaktionsmischung wird abgekühlt und die erhaltenen Kristalle werden durch Filtration
entfernt. Das Filtrat wird bei vermindertem Druck konzentriert, wobei man eine gelbe, ölige Verbindung
erhält. Zu der Verbindung gibt man 6,8 ml Xylol, um eine Lösung herzustellen. Die Lösung wire! tropfenweise zu
einer Lösung aus 0,5 ml Trimethylphosphit in 8 ml Xylol unter Rückfluß gegeben und die Umsetzung wird
weitere 90 Minuten weitergeführt. Nach der Umsetzung wird die Reaktionsmischung bei vermindertem Druck
konzentriert, und man erhält ein öliges Produkt. Dieses Produkt zeigt die folgenden Spektren und es wird als
la-Acetoxy-3^-24(S)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
identifiziert.
identifiziert.
UV-Spektrum, λ i,'.:1·'""1 (nm):
231,262,271,282,294
231,262,271,282,294
NMR-Spektrum:
2,04(3H1S1CH3COO-),
4,7-5,4(3 H, M, 1/9,3«— und 24-H3),
5,33(1 H1D1J = 6 Hz16-oder 7-H),
5,70(1 H, D, J = 6 Hz, 6- oder 7-H),
7,4-8,2 (10 H, M, aromat. Hs)
4,7-5,4(3 H, M, 1/9,3«— und 24-H3),
5,33(1 H1D1J = 6 Hz16-oder 7-H),
5,70(1 H, D, J = 6 Hz, 6- oder 7-H),
7,4-8,2 (10 H, M, aromat. Hs)
Beispiel 11
Synthese von 1«,3/?-24(R)-Triacetoxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
1<x-Hydroxy-3/?-24(R)-dibenzoyloxycholest-5-en, hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 4(B) beschrieben, wird dem gleichen Verfahren wie in
Beispiel 8 unterworfen. Ein gereinigtes Produkt mit den
gleichen UV-, NMR- und Massenspektrenwerten wie
das entsprechende S-Epimer, welches in Beispiel 8 erhalten wurde, wird in einer Ausbeute von 28%
gebildet Dieses Produkt wird als 1a,?-0-24(R)-Triacetoxycholesta-5,7-dien
identifiziert.
Synthese von l«,3/?-24(R)-Tribenzoyloxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
la,3p-24(R)-Tribenzoyloxycholest-5-en, hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 3(B) beschrieben, wird dem gleichen Verfahren wie in
Beispiel 9 beschrieben unterworfen.
Ein gereinigtes Produkt mit den gleichen UV-, NMR- und Massenspektren wie das entsprechende S-Epimer,
welches man in Beispiel 9 erhält, wird in einer Ausbeute
von 27% erhalten. Dieses Produkt wird als 1<x,3j?-24(R)-Tribenzoyloxycholesta-5-dien
identifiziert.
Beispiel 13
Synthese von la-Acetoxy-3j3-24(R)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
(zweite Stufe)
1a-Hydroxy-3/?-24(R)-dibenzoyloxycholest-5-en, hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 4(B) beschrieben, wird mit dem gleichen Verfahren wie
in Beispiel 10 beschrieben unterworfen.
Ein gereinigtes Produkt mit den gleichen UV- und Massenspektren wie das entsprechende S-Epimer.
welches man in Beispiel 10 erhält, wird erhalten. Dieses
Produkt wird als l«-Acetoxy-3j3-24(R)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
identifiziert.
Beispiel 14
(A) Synthese von 1a,3/3-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
aus lÄ,3^-24-Triacetoxycholest-5-en
Entsprechend dem Verfahren von Beispiel 5(B) wird 1«,3/)-24-Triacetoxycholest-5-en mit l,3-Dibrom-5,5-dimethylhydantoin
und s-Collidin in η-Hexan umgesetzt. Das Reaktionsprodukt wird mit Säure und Alkali in
Äther gewaschen und mil Aktivkohle behandelt; man erhält eine rohe Reaktionsmischung, die 1«,3j3-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
enthält.
(B) Hydrolyse von 1«,3ß-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
Das bei (A) oben erhaltene rohe ProduKt wird in einer
5%igen Methanollösung von Kaliumhydroxid hydrolisiert, wobei man eine rohe Realaionsmischung erhält,
die 1«,3j?-24-TrihydiOxycholesta-5,7-dien enthält.
(C) Bestimmung der Reinheit von
1 a,3j?-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
1 a,3j?-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
Das UV-Spektrum von 100% reinem l«,3ß-24-Trihydroxycholesta-5.7-dien
beträgt λ*'!','""1 = 282 nm und das UV-Spektrum von 100% reinem 1a,3j9-24-Trihydroxy-4,6-dien
beträgt λϊί,',!','""'1 = 240 nm. Eigene Untersuchungen
zeigen, daß das Mischverhältnis zwischen diesen beiden Verbindungen bestimmt werden kann,
indem man ihre Amax-Werte vergleicht.
Das Verhältnis des 5,7-Dien-Derivats und des 4,6-Dien-Derivats in der oben bei (B) erhaltenen rohen
Reaktionsmischung wird nach diesem Verfahren bestimmt, und man stellt fest, daß das Molverhältnis von
l«,3^-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien zu l<x,3/3-24-Trihydroxyeholesta-4,6-dien
ungefähr 3 : 1 beträgt.
(D) Abtrennung von la,3^-24-Trihydroxycholesta-
5,7-dien und l«,3/?-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien
(dritte Stufe)
(D-I) Abtrennung durch präparative
Ί Dünnschichtchromatographie
Ί Dünnschichtchromatographie
Eine im Handel erhältliche Platte für präparative Dünnschichtchromatographie (Silikagel, ein Produkt
der Merck Company, 20 cm χ 20 cm χ 0,5 mm) wird in eine Lösung aus Silberniirat in Acetonitril eingetaucht,
um die Platte in einer Menge von ungefähr 1,5 Gew.-% Silbernitrat zu imprägnieren, und dann wird die Platte
bei 700C 2 Stunden in der Wärme behandelt. Die so erhaltene chromatographische Platte wird für die
anschließenden Trennstufen verwendet.
Die rohe Reaktionsmischung (30 mg), die man bei (B) oben erhält, wird auf der Platte adsorbiert und längs
ungefähr 20 cm mit einer Lösungsmittelmischung aus 6% Methanol und Chloroform entwickelt. Nach dem
Trocknen an Luft der Platte wird die Reaktionsmischung erneut mit dem gleichen Lösungsmittel entwikkelt.
Es treten zwei Banden mit einem Rf-Wert von ungefähr 0,23 und ungefähr 0,33 auf. Diese Fraktionen
werden abgekratzt und mit Äthylacetat aus dem Silikagel extrahiert. Man erhält 17,1 mg (57%) einer
farblosen, festen Verbindung (Rf = 0,23) und 6.0 mg (20%) einer farblosen, festen Verbindung (Rf = 0,33).
Ein Teil der Platte wird unter Verwendung von Schwefelsäure angefärbt und eine Bande mit einem
j» Rf-Wert von ungefähr 0,38 wird festgestellt. Diese
Fraktion wird abgekratzt und auf gleiche Weise wie oben beschrieben extrahiert, und man erhält ungefähr
1 mg feste Verbindung.
Diese Produkte besitzen die folgenden Spektren. Das
j-, Produkt mit einem Rf-Wert von 0,23 wird als
l(X,3/?-24-Trihydroxycholesta-5.7-dien identifiziert; das
Produkt mit einem Rf-Wert von 0,33 wird als la,3j3-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien identifiziert und
das Produkt mit einem Rf-Wert von 0,38 wird als Ια-24-Dihyclroxycholesterin identifiziert.
(1) Produkt mit einem Rf-Wert von 0,23 (1λ,30-24-Τπ-hydroxycholesta-5.7-dien)
UV-Spektrum (vergl. F i g. 2), λ™;- (nm):
4-1 262, 271 (ε = 11 000), 282 (κ = 12 00C). 294
(ε = 7000)
NMR-Spektrum (in CiDf1O):
0,63(3 H,S,18-CHj),
3.30(1 H, M, 24-H),
0,63(3 H,S,18-CHj),
3.30(1 H, M, 24-H),
3,70(1 H, M, 1/3-H),4,08(1 H.M,3a-H),
5,30(1 H, D. I = 6 Hz, 6-oder 7-H),
5,60(1 H, D, J = 6 Hz,6-oder 7-H)
5,30(1 H, D. I = 6 Hz, 6-oder 7-H),
5,60(1 H, D, J = 6 Hz,6-oder 7-H)
Massenspektrum (vcrgl. F i g. 3):
416 (M +). 398,380,357,251,227,197,157
Fp.: 102 bis 103"C
(2) Produkt mit einem Rf-Wert von 0,33 (1«,3j3-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien)
W) UV-Spektrum, λ™1""1 (nm):
233,240,248
Massenspektruni:
Massenspektruni:
416(M4), 398,380
(,, (3) Produkt mit einem Rf-Wert von 0,Jb (ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin)
Dieses entspricht einer Standardprobe mit einem Rf-Wert von 0.38.
(D-2) Trennung durch Säulenchromatographie
Silikagel, das im Handel für die Verwendung in der Säulenchromatographie erhältlich ist (C-200, Warenzeichen
für ein Produkt der Wako Jyunyaku Kogyo Kabushiki Kaisha), wird mit ungefähr 2 Gew.-°/o
SilbeinitrU untc·" Vcrwenrlung einer Lösung imprägnieu
und dann 2 Stunden bei 700C in der Wärme behandelt. Das Silikagel wird dann in eine Glassäule mit
einem Durchmesser von 1 cm und einer Länge von 30 cm gepackt. 40 mg Her rohen Reaktionsmischung, die
man bei (B) oben erhält, werden in die Säule gegossen und mit einer Lösungsmitteleluierung eluiert, die Benzo!
und Älhylacetat enthält. Man teilt in Fraktionen mit einem jeweiligen Volumen von ungefähr 20 ml. Diese
Fraktionen werden dann getrennt, wobei man mit Dünnschichtchrornatographie und UV-Spektrum die
Chromatographie verfolgt.
Wenn das Volumenverhältnis von Benzol zu Äthylacetat 2:1 bis 1:1 beträgt, werden 7,6 mg (Ausbeute
19%) eines Produktes, entsprechend einem Rf-Wert von 0,33 in (D-I), erhalten. Wenn dieses Verhältnis 1 :1
beträgt, werden 19,6 mg (49%) eines Produktes, entsprechend einem Rf-Wert von 0,23, erhalten.
Diese Produkte werden nach verschiedenen Spektrumswe
ten identifiziert.
Vergleichsbeispiel 1
In diesem Beispiel wird die Trennung von 1λ,3/3-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
und la,3/?-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien
mit einem Trägermaterial erläutert, welches Siliciumdioxid, aber kein nichtmetallisches
Silber enthält (Vergleich mit der dritten Stufe).
30 mg einer Mischung aus l*,3/3-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
und 1a,3^-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien
in einem Molverhältnis von 3 :1, die auf gleiche Weise wie in Beispiel 14(A) und (B) hergestellt wurde und die
auf gleiche Weise wie in Beispiel 14(C) identifiziert wurde, wird durch eine Säule mit einem Durchmesser
von 1 cm und einer Länge von 30 cm unter Verwendung von Silikagel als Trägermaterial geleitet, um sie in ihre
Bestandteile zu trennen.
Eine Lösungsmittelmischung aus Benzol und Äthylacetat wird als Entwicklungslösungsmittel in unterschiedlichen
Mischverhältnissen von 10:1 bis 1:1 verwendet, und die Ausgangsmischung wird in Fraktionen
mit einem Volumen von je ungefähr 20 ml geteilt. Die Trennung wird versucht, wobei man mit Dünnschichtchromatographie
und UV-Spektrum die Chromatographie verfolgt. Wenn das Mischverhältnis von Benzol zu Äthylacetat ungefähr 2 :1 beträgt, beginnt die
Hauptkomponente abzufließen. Analyse der jeweiligen Fraktionen mit UV-Spektrum zeigt, daß in allen
analysierten Fraktionen eine Absorption bei 283, 240, 248, 262, 271, 282 und 294 nm beobachtet wird. Daraus
folgt, daß, wenn Silikagel als Trägermaterial verwendet wird, das 1«3j3-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien nicht
von dem 1a,3/?-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien abgetrennt
werden kann. Man findet weiterhin, daß sich diese Fraktionen in ihrer Zusammensetzung kaum
unterscheiden und daß das Molverhältnis von 5.7-Dien zu 4,6-Dien bei ungefähr 3 :1 erhalten bleibt (vgl. das
folgende Vergleichsbeispiel 3).
Vergleichsbeispiel 2
In diesem Beispiel wird die Trennung von 1«,3j?-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
und l«,3/?-24-Triacetoxycholesta-4,6-dien unter Verwendung eines Trägermaterials,
das Siliciumdioxid, aber kein nichtmetallisches
Silber enthält. erläuteri(Vergleich mit der dritten Stufe). Eine Mischung aus 1a,3/?-24-Triacetoxycholesta-5,7
dien und 1λ,3/)'-24 rriacetoxycho'crta-4,6-dien in einem
> Molverhältnis von 3:1, die auf gleiche Weise wie in
Beispiel 14(A) hergestellt wurde und die auf gleiche Weise wie in Beispiel 14(C) identifiziert wurde, wird der
präparativen Dünnichichtehromatog! üphie unici Verwendung
der gleichiP Platte, wie sie in Beispiel 14 (D-!)
in verwendet wurde, unterworfen, wobei man ein Silikagel-Trägcrmaterial
verwendet, welches mit Silbernitrat behandelt wurde (Entwicklungslösungsmittel, 0,4%
Mci.'ianol-Chloroform). Man stellt mit UV-Spektruni
nur einen Flecken bei Rf ungefähr 0,4 fest.
ι ri Diese Fraktion wird isoliert, und man erhält eine ölige
Substanz, deren UV-Spektrum Absorptionen bei 233, ?40,248, ?«. 271.282 und 294 nm zeigt.
Man stellt lest, daß die Abtrennung von 1nc,30-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
aus 1 a,3jS-24-Triacetoxy-
:<) cholcsta-4,6-dien nicht gelingt, selbst wenn Silikagel,
welches nichtmetallisches Silber enthält, al«, Trägermaterial
verwendet wird (vgl. Vergleichsbeispiel 4).
Dei s ρ i e I 15
Trennung von 1«,3/J-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien
und 1«,3j3-24(R)-Trihydroxycholesta-
4,6-dien (dritte Stufe)
1 a-Hydroxy-3/j-24(R)-dibenzoyloxycholest-5-en, her-
i» gestellt und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel
4(B) beschrieben, wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 5(A) gezeigt, behandelt, um 1 a-Acetoxy-3/J-24(R)-dibenzoyloxycholest-5-en
herzustellen. Dieses Produkt wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 10 beschrieben
r> behandelt, wobei man eine rohe Reaktionsmischung
erhält, welche 1 a-Acetoxy-3/?-24(R)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
enthält. Die rohe Reaktionsmischung wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 14(B) hydrolysiert und
durch präparative Dünnschichtchromatographie auf
w gleiche Weise wie in (D-1) beschrieben getrennt.
Die Reaktionsmischung, die 1a,3/9-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien
und iA,3/?-24(R)-Trihydroxycholesia-4,6-dien
in einem Molverhältnis von ungefähr 3 :1 enthält, kann in die zwei Bestandteile genau getrennt
■»5 werden.
Das Produkt, das aus dem Flecken abgetrennt wird, der aus 1«,3/?-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien
stammt, besitzt die folgenden Eigenschaften.
UV-Spektrum λ·™· (nm):
"' 262,271 (ε 11 000), 282 (11 800), 294 (7000)
NMR-Spektrum (C3D6O):
3,25(1 H,M,C-24-H),3,68(1 H, M, \ß-H), 4,10(1 Η.Μ.3Λ-Η),
5,30(1 H,D,J = 6 Hz. 6 -oder 7 -H). 5,60(1 H, D.] =6Hz,6-oder7-H)
Massenspektrum:
416(M + ), 398,380,357,251,227,197,157
Fp.: 96 bis 99° C
Beispiel 16
Trennung von la,3/?-24(S)-TrihydroxychoIesta-5,7-dien
und 1 «,3j9-24(S)-Trihydroxycholesta-4,6-dien
(dritte Stufe)
la-Hydroxy-3j8-24(S)-dibenzoyloxycholest-5-en, hergestellt
und getrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 4(B) beschrieben, wird auf gleiche Weise wie in Beispiel
5(A) behandelt, wobei man la-Amoxy-30-24(S)-dibenzoyloxycholes'.-5-en
erhält. Dieses Produkt wird aiii gleiche Weise wie in Beispiel 10 beschrieben behandelt,
wobei man eine rohe ilc-aktionsmischung erhält, die
lji-Acetoxy-3fi-24(S)-diben7.oylcholesta-5,7-dien enthält.
Diese Reaklionsmischurig wird auf gleiche Weise
wie in Beispie! M(B) hydrolysiert und auf gleiche Weise wie in (D-I) oben durch präparative Dünnschichtchromatographie
abgetrennt.
Die rohe Reaktionsmischung, die la,3/}-24(S)-Trihydroxycholesia-5,7-dien
und 1ix,3/?-24(S)-Trihydroxycholesta-4,6-dien
in einem Molverhältnis von ungefähr 3 :1 kann scharf in die beiden Bestandteile getrennt werden.
Das Produkt, das von dem Hecken abgetrennt wird, der auf lÄ,3/3-24(S)-Trihydroxycholesia-5,7-dien basiert,
besitzt die folgenden Eigenschaften.
UV-Spektrum, λ™"""1 (nm):
262,271 (10 800), 282 (11 500), 294 (6900)
3,27(1 H,M,C-24-H),3,b7(1 H, M, Ij3—H),
4,10(1 Η,Μ,3α-Η),
5,30(1 H, D, J = 6 Hz,6-oder 7-H),
5,60(1 H, D, J = 6 Hz.6-oder 7-H).
4,10(1 Η,Μ,3α-Η),
5,30(1 H, D, J = 6 Hz,6-oder 7-H),
5,60(1 H, D, J = 6 Hz.6-oder 7-H).
Massenspektrum:
416(M+), 398, 380,357,251,227,197,157
Fp.: 120 bis 124° C
Beispiel 17
Synthese von Ια-24-Dihydroxycholecalcifprol
(vierte Stufe)
(vierte Stufe)
16 mg 1a,3j3-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien, hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 14 (D-I) beschrieben, werden in 500 ml Diäthyläther
gelöst und diese Lösung wird mit ultravioletten Strahlen 2,5 Minuten bei 5°C in einer Argonatmosphäre unter
Verwendung einer 200-W-Hochdruck-Quecksilberlampe
(654A-36, Warenzeichen für ein Produkt der Hanovia Company) bestrahlt. Ein Teil der Lösung wird
entnommen und ihr UV-Spektrum wird bestimmt. Man beobachtet eine Erhöhung in der Absorption bei 262 bis
263 nm, die auf das Ια-24-Dihydroxyprecholecalciferol
zurückzuführen ist. Nach der Umsetzung wird der Äther bei Zimmertemperatur bei vermindertem Druck abgedampft
Benzol (50 ml) wird zu dem Rückstand gegeben und die Isomerisierung erfolgt während 2 Stunden bei
Rückfluß des Benzols.
Nach der Umsetzung wird das Benzol bei vermindertem Druck abgedampft, man erhält 16 mg eines
farblosen Feststoffs. Dieses Produkt wird sorgfältig durch präparative Dünnschichtchromatographie unter
Verwendung von Silikage! als Trägermaterial, das
ungefähr 13% Silbernitrat enthält [das auf gleiche
Weise wie in Beispiel 14 (D-I) beschrieben erhalten wurde], abgetrennt (man entwickelt zweimal mit 6%
Methanol-Chloroform). Man erhält drei Banden, die durch ultraviolette Strahlen bestätigt werden. Aus der
am wenigsten polaren Bande erhält man 2,8 mg farblosen Feststoff. Dieses Produkt besitzt die folgenden Eigenschaften und wird als l«-24-Dihydroxycholecalciferol identifiziert.
UV-Spektrum (F ig. 4)
AÄ"""(nm)=265
(nm) = 228
N M R-Spcktrum (CjL\O):
0,57(6H1D, 18-CH j),
0,87(b H1D,] = 7Hz,26-und27-CHi),
0,96 (3 H, D, J = 5 Hz, 21-CHi),
3,19(1 H, M,24-H),4,15(1 H, M, 10-H).
4,36(1 H, M,3a--H), 4,85(1 H,b,S, 19-11).
5,30(1 H, b, S, 19-H),
6,05(1 H, D.Jab = 11 Hz,6-oder 7-H),
6,26(1 H, D,]mi= 11 Hz16-oder 7-H).
0,57(6H1D, 18-CH j),
0,87(b H1D,] = 7Hz,26-und27-CHi),
0,96 (3 H, D, J = 5 Hz, 21-CHi),
3,19(1 H, M,24-H),4,15(1 H, M, 10-H).
4,36(1 H, M,3a--H), 4,85(1 H,b,S, 19-11).
5,30(1 H, b, S, 19-H),
6,05(1 H, D.Jab = 11 Hz,6-oder 7-H),
6,26(1 H, D,]mi= 11 Hz16-oder 7-H).
1(1 Massenspektrum(Fig. 5):
416(M+), 398,380,269,251,134
Hochresuluiionsmassenspektmm:
gefunden:416,32768
,-, berechnet, M+(C27H44O3) = 416,32927
,-, berechnet, M+(C27H44O3) = 416,32927
Fp.: 84 bis 85° C
Beispiel 18
Synthese von 1a-24(R)-Dihydroxycholecalciferol
(vierte Stufe)
(vierte Stufe)
10 mg 1 \,3fi-24(R)-TrihydroxychoIesta-5,7-dien, hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 15 beschrieben, werden in 140 ml Diäthyläther gelöst
2-, und die entstehende Lösung wird 2 Minuten bei 5°C mit
ultravioletten Strahlen bestrahlt. Ein Teil der Lösung wird entnommen und sein UV-Spektrum wird bestimmt.
Eine Erhöhung der Absorption bei 262 bis 263 nm wird beobachtet, und es wird angenommen, daß dies auf die
so Vorstufe zurückzuführen ist. Nach der Umsetzung wird der Äther bei Zimmertemperatur und vermindertem
Druck abgedampft. Benzol (50 ml) wird zu dem Rückstand gegeben und die Isomerisierung wird
während 2 Stunden in Argonatmosphäre beim Rückfluß
r> des Benzols durchgeführt.
Nach der Umsetzung wird die Reaktionsniischung auf gleiche Weise wie in Beispiel 17 beschrieben behandelt
und durch präparative Dünnschichtchromatographie getrennt und gereinigt. Aus der am wenigsten polaren
Bande werden 1,8 mg farbloser Feststoff erhalten. Dieses Produkt besitzt die folgenden Eigenschaften und
wird als 1a-24(R)-Dihydroxycholecalciferol identifiziert.
UV-Spektrum
λ J,!,1?"1"1 (nm) = 265
4> ümi'n'""'(niii) = 228
4> ümi'n'""'(niii) = 228
NMR-Spektrum (C)DbO):
0,59 (3 H, S, 18-CHj),
0,87 (6 H, D, J = 7 Hz,26- und 27-CH)),
3.20(1 H.M.29-H),4,14(1 H,M, \ß-H),
4,42(1 H,M,3a-H),4,87(1 H,b,S. lfe-H),
5,32(1 H.b.S, 19-H),
6,08(1 H1D1Ja8= 11 Hz,6-oder 7-H),
6,30(1 H.D.Jad = 11 Hz,6-oder 7-H).
0,59 (3 H, S, 18-CHj),
0,87 (6 H, D, J = 7 Hz,26- und 27-CH)),
3.20(1 H.M.29-H),4,14(1 H,M, \ß-H),
4,42(1 H,M,3a-H),4,87(1 H,b,S. lfe-H),
5,32(1 H.b.S, 19-H),
6,08(1 H1D1Ja8= 11 Hz,6-oder 7-H),
6,30(1 H.D.Jad = 11 Hz,6-oder 7-H).
τ? Massenspektrum:
416(M + ), 398,380,269,251
Hochresolutionsmassenspektrum:
gefunden: 416,33084 berechnet (M + ) = 41632927(C27H44O))
gefunden: 416,33084 berechnet (M + ) = 41632927(C27H44O))
Beispiel 19
Synthese von 1«-24(S)-Dihydroxycholecalciferol
(vierte Stufe)
15 mg lo3/?-24(S)-Trihydroxycholesta-5,7-dien, hergestellt und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel
16 beschrieben, werden in 140 ml Diäthyläther gelöst, und die entstehende Lösung wird 2 Minuten bei 5°C mit
ultravioletten Strahlen bestrahlt. Dann wird das gleiche Verfahren wie in Beispiel 18 beschrieben wiederholt,
und man erhält 2,8 mg farblosen Feststoff. Dieses Produkt hatte die folgenden Eigenschaften und wurde
als la-24(S)-Dihydroxycholccalciferol identifiziert.
UV-Spektrum
AK '(nm) = 265
Αϊ,',!?1""1 (nm) = 228
NMR-Spektrum (in C1DhO):
0,58(3H1S, 18-CHi),
0,87 (6 H, D,) = 7 Hz, 26- und 27-CH3),
3,20(1 H, M, 24-H), 4,14(1 H,M1IjJ-H),
4,42(1 H, M, 3«- H), 4,87(1 H, b, S, 19-H),
5,32(1 H, b. S119-H).
6,08(1 H, D.Jab = Ii Hz, 6- oder 7-H),
6,30(1 H, D, Jah= 11 Hz,6-oder 7-H)
0,58(3H1S, 18-CHi),
0,87 (6 H, D,) = 7 Hz, 26- und 27-CH3),
3,20(1 H, M, 24-H), 4,14(1 H,M1IjJ-H),
4,42(1 H, M, 3«- H), 4,87(1 H, b, S, 19-H),
5,32(1 H, b. S119-H).
6,08(1 H, D.Jab = Ii Hz, 6- oder 7-H),
6,30(1 H, D, Jah= 11 Hz,6-oder 7-H)
Massenspektrum:
416 (M +), 398,380,269,251,134
Hochresolutionsmassenspektrum:
berechnet: 416,33095
gefunden (M +): 416,32927 (C27H44Oj)
berechnet: 416,33095
gefunden (M +): 416,32927 (C27H44Oj)
(A) Synthese von l«,3^-24-Triacetoxycholest-5,7-dien
a ι i s 1 «,3jS-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
200 mg 1a,3j3-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien, hergestellt
und getrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 14 (D-I) beschrieben, werden mit 2 ml Essigsäureanhydrid
und 5 ml Pyridin 3 Stunden bei 95°C umgesetzt. Die Reaktionsmischung wird in Eis-Wasser gegeben und mit
400 ml Diäthyläther extrahiert. Die Ätherphase wird mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure, dann mit Alkali und
weiter mit Wasser gewaschen und getrocknet. Der Äther wird verdampft, und man erhält la,3j3-24-Triacetoxycholesta-5,7-dien
als hellgelbliche, ölige Verbindung.
(B) Synthese von ΐΛ-24-Diacetoxychoiecalciferol-3/2-acetat
(vierte Stufe)
50 mg la-24-Diacetoxycholecalciferol-3/?-acetat werden
in 500 ml Diäthyläther gelöst. Die entstehende Lösung wird mit ultravioletten Strahlen in einer
Argonatmosphäre 4 Minuten bei 50°C bestrahlt.
Ein Teil dieser Lösung wird entnommen und sein UV-Spektrum wird bestimmt. Eine Erhöhung in der
Absorption bei 262 bis 263 nm wird beobachtet, und man nimmt an, daß sie auf die Vorstufe zurückzuführen ist.
Nach der Umsetzung wird der Äther bei vermindertem Druck und Zimmertemperatur verdampft. Benzol
(100 ml) wird zu c'em Rückstand gegeben und die isomerisierung wird während 2 Stunden in Argonatmosphäre
unter Rückfluß von Benzol durchgeführt. Nach der Umsetzung wird der Haupttefl des Benzols bei
vermindertem Druck abdestilliert und zu dem Rückstand gibt man 2 ml 5%iges Kaliumhydroxid/Methanol,
2 ml Methanol und 2 ml Benzol. Die Mischung wird 1 Tag bei Zimmertemperatur stehengelassen, so daß die
Hydrolyse ablaufen kann. Das Reaktionsprodukt wird mit Wasser verdünnt und mit Äthylacetat extrahiert.
Die Äthylacetatphase wird wiederholt mit Wasser gewaschen und getrocknet. Das Äthylacetat wird bei
vermindertem Druck abgedampft, man erhält 35 mg einer hellgelben, öligen Verbindung.
Diese Substanz wird durch präparative Dünnschichtchromatographie
unter Verwendung von Silikagel als Trägermaterial, welches Silbernitrat enthält, auf
gleiche Weise wie in Beispiel 17 beschrieben abgetrennt und gereinigt. Aus der weniger polaren Bande werden
5,7 mg Feststoff erhalten. Da die verschiedenen Spektren und Eigenschaften dieses Produktes vollständig
denen von ΐΛ-24-Dihydroxycholecalciferol, welches
in Beispiel 17 erhalten wurde, entsprechen, wird das Produkt nach der Isomerisierung als Ια-24-Diacetoxycholecalciferol-3-acetat
identifiziert.
(A) Synthese von
5,7-dien aus 1a,3j8-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
160 lüg la,3j3-24-Trihydroxycho!esta 5,7-Jicn. hergestellt
und abgetrennt auf gleiche Weise wie in Beispiel 14(D-I) beschrieben, werden mit 410 mg Benzoylchlorid
und 15 ml Pyridin umgesetzt.
Die Reaktionsmischung wird mit Wasser verdünnt und mit 40 ml Diäthyläther extrahiert. Die Ätherphase
wird mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure und dann mit Mkali und schließlich mit Wasser gewaschen und
getrocknet. Der Äther wird abgedampft, man erhält la,3j3-24-Tribenzoyloxycholesta-ä.7-dien als farbloses,
amorphes Produkt.
(B) Synthese voi. L\-24-Dibenzoyloxycholecalcife.-"1
\3-benzoat (vierte Stufe)
Jd 30 mg la,3j3-24-Tribenzoyloxycholesta-5.7-dien werden
in 500 ml Benzol gelöst und die entstehende Lösung wird mit ultravioletten Strahlen in Argonatmosphäre 2
Minuten bei 100C bestrahlt. Nach der Umsetzung wird die Isomerisierung 2 Stunden in Argonatmosphäre
Ji unter Rückfluß von Benzol durchgeführt. Nach der
Umsetzung wird der Hauptteil des Benzols bei vermindertem Druck verdampft und 2 ml 5%iges
Kaliumhvdroxid Methanol und 2 ml Benzol werden zu dem Rückstand gegeben. Die Mischung wird 28 Stunden
M) bei Zimmertemperatur in Argonatmosphäre gehalten,
um die Hydrolyse durchzuführen. Das Reaktionsprodukt wird mit Wasser verdünnt und mit Äthylacetat
extrahiert. Die Äthylacetatschicht wird wiederholt mit Wasser gewaschen und getrocknet. Das Äthylacetat
4i wird bei vermindertem Druck verdampft. Der Rückstand
wird dem gleichen Trenn- und Reinigungsverfahren wie in Beispiel 20 unterworfen. Man erhält '.,9 mg
ΐΛ-24-Dihydroxycholecalciferol, das die gleichen Eigenschaften
besitzt wie das Produkt, das in Beispiel 20
id erhalten wurde.
Aus diesem Ergebnis wird das nach der lsomerisierungsreaktion
erhaltene Produkt als ΐΛ-24-Dibenzoylcholecalciferol-3-benzoat
identifiziert.
Beispiel 22
(A) Synthese von 1 «-Hydroxy-3j3-24-dibenzoyloxy-
cholesta- 5,7 -dien aus 1 (X,30-24-Trihydroxy-
cholesta-5,7-dien
250 mg l*,3^-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien, hergestellt
auf gleiche Weise wie in Beispiel 14 (D-I) beschrieben, werden mit 210 mg Benzoylchlorid und
5 ml Pyridin vermischt und die Mischung wird 1 Tag bei 230C stehengelassen. Die entstehende Reaktionsmischung
wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 21 beschrieben behandelt, und man erhält l«-Hydroxy-3/?-
24-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien.
(B) Synthese von 1(\-HydiOxy-24-benzoyloxycholecalciferol-3/f-benzoat
(vierte Stufe)
20 mg l«-Hydroxy-3j3-24-diben?r!yloxycholesta-5,7-dien
werden in 500 ml üiäthyläther gelösi. Die Lösung wird mit ultravioletten Strahlen bestrahl1., isomerisiert
und auf gleiche Wcire wie in Beispiel 21(B) beschrieben
hydrolysiert, wobei man 1,9 mg 1&-2-1 Dihydroxyeholecalciferol
crliält, das die gleichen Eigenschaften besitzt
wie das in Beispiel 20 erhaltene Produkt.
Aus diesen Ergebnissen wird bestatin', daß das
Produkt, das mar. nach der IsomcrisierüngM-eaktion
erhält, la-Hydroxy-24-benzoylcholecalciferol-3ß-benroat
ist.
Beispiel 26
Beispiel 23
Synthese von 1 *-24(R)-Diacetoxycholecalciferoi-3/j-acetat
(vierte Stufe)
O.is ;n Be-sjjicl i J erhaltene l<x,3jS-24(R)-Trihydroxy- :<>
cholesla-57-dien wird auf gleiche Weise wie in Beispiel
20(A) beschrieben acetyliert, wobei man 1a,30-24(R)-Trihydroxychoiesta-5,7-dien
erhält. ^:; mg dieses Produktes werden auf gleiche Weise wie in Beispiel 20(B)
beschrieben behandelt, mit der Ausnahme, daß die 2> Bestrahlung mit ultravioletten Strahlen 2 Minuten
durchgeführt wurde. Man erhält JA mg eines Produktes, dessen Eigenschaften mit denen von 1«-24(R)-Dihydroxycholecalciferol
übereinstimmen.
Aus diesem Ergebnis wird bestätigt, daß das Produkt, in
das man nach der Isomerisierungsreaktion erhält, 1 «-24(R)-Diacetoxycholecalciferol-3j3-acetat ist.
Synthese von 1«-24(R)-Dibenzoyloxycholecalciferol-3j3-benzoat
(vierte Stufe)
Das la,3j3-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien wird
auf gleiche Weise wie in Beispiel 21(A) beschrieben benzoyliert, wobei man lÄ,3j9-24(R)-Tribenzoyloxycho- -m
lesta-5,7-dien erhält. Dieses Produkt wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 21(B) beschrieben behandelt, mit
der Ausnahme, daß 30 mg dieses Produktes verwendet werden und daß die Bestrahlung mit ultravioletten
Strahlen 2 Minuten bei 12°C durchgeführt wird. Man ·τ>
erhält 3,4 mg eines Produktes, dessen Eigenschaften mit denen von la-24(R)-Dihydroxycholecalciferol übereinstimmen.
Danach wird das Produkt nach der Isomerisierungsreaktion
als la-24(R)-Dibenzoyloxychoiecalciferol-3|?- -50
benzoat identifiziert.
Synthese von 1 «-Hydroxy-24(R)-benzoyloxychoIe-
calciferol-30-benzoat (vierte Stufe) "
Das la,3/?-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien wird
auf gleiche Weise wie in Beispiel 22(A) beschrieben benzoyliert, um la-Hydroxy-3/?-24(R)-dibenzoyIoxycholesta-5,7-dien
herzustellen. t>o
10 mg dieses Produktes werden auf gleiche Weise wie in Beispiel 22(B) beschrieben beharHelt, und man erhält
1,2 mg eines Produktes, dessen Eigenschaften denjenigen von 1«-24(R)-Dihydroxycholecalciferol entsprechen,
to
Aus diesem Ergebnis wird bestätigt, daß das Produkt nach der Isomerisierung 1a-Hydroxy-24(R)-benzoyloxvcholecalciferol-SÖ-benzoat
ist.
Synthese von li\-24(S)-Diacetoxycholecalciferol-3p-acetat
(vierte Stufe)
Das in Beispiel 16 erhaltene l;v,3/?-24(S)-Trihydroxycholestn-5
7-dien wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 20(A) beschrieben acetylen, wobei l'x3/9-24(S)-TrihydiOxycholesta-5,7-dien
gebildet wird. 20 mg dieses Produktes werden suf gleiche Weise wie in Beispiel 23
κι beschrieben behandelt, wobei man 3,1 mg eines Produktes erhält, dessen Eigenschaften denen von
I iv-24(S)-Dihydrcxycliolecalcifeu>! entsprechen.
Aus diesem Ergebnis wird bestätigt, daß das Produkt nach der Isomerisierungsreaktion !<x-24(S)-Diaceloxycholecalciferol-Sß-aielat
ist.
Synthese von 1«-Hydroxy-24(S)-benzoyloxycholecalciferol-3p'-benzoat
(vierte Stufe)
Das in Beispiel 16 erhaltene 1«,3/2-24(S)Trihydroxycholes!;;
5,7-dien wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 22(A) beschrieben benzoyliert, wobei 1ivHydroxy-3j?-
24(S)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien gebildet wird. 15 mg dieses Produktes werden auf gleiche Weise wie in
Beispiel 25 beschrieben behandelt, wobei man 1,5 g eines Produktes erhält, dessen Eigenschaften denen von
la-24(S)-Dihydroxycholecalciferol entsprechen. Daraus wird bestätigt, daß das nach der Isomerisierung
erhaltene Produkt 1«-Hydroxy-24(S)-benzoyloxycholecalciferolOjü-bcnzoat
ist.
Beispiel 28
Synthese von 1a-Acetoxy-24(S)-benzoyloxycholecalciferol-3/?-benzoat
(vierte Stufe)
Das auf gleiche Weise wie in Beispiel 27 beschrieben erhaltene 1 a- Hydroxy-3jS-24(S)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 26 beschrieben acetyliert. wobei l«-Acetoxy-3|?-24(S)-dibenzoyloxycholesta-5,7-dien
gebildet wird.
15 mg dieses Produktes werden auf gleiche Weise wie in Beispiel 26 beschrieben behandelt, mit der Ausnahme,
daß die Bestrahlung mit ultravioletten Strahlen 1 Minute bei 8°C durchgeführt wird. Man erhält 1,5 mg
eines Produktes, dessen Eigenschaften denen von lÄ-24(S)-Dihydroxycholecalciferol entsprechen. Daraus
wird bestätigt, daß das nach der Isomerisierung erhc'tene Produkt 1a-Acetoxy-24(S)-benzoyloxycholecalciferol-3/i-benzoat
ist.
Vergleichsbeispiel 3
Synthese von l«-24-Dihydroxycholecalciferol
aus 1 a,3/?-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien,
das la,3j?-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien enthält
(Vergleich mit der vierten Stufe)
10 mg einer Mischung aus la,3jS-24-TrihydroxychoIesta-5,7-dien
und 1<x,3j3-24-Trihydroxycholesta-4,6-dien
in einem Molverhältnis von ungefähr 3:1, die auf gleiche Weise wie in Vergleichsbeispiel 1 beschrieben
erhalten wird, werden in 500 ml Diäthyläther gelöst, und die Lösung wird 2 Minuten bei 5°C mit ultravioletten
Strahlen bestrahlt. Nach der Umsetzung wird der Diäthyiäther sorgfältig bei vermindertem Druck abgedampft.
Zu dem Rückstand fügt man 50 ml Benzol und
die Isomerisierung wird 2 Stunden in Argonatmosphäre unter Rückfluß von Benzol durchgeführt. Nach der
Umsetzung wird das Benzol ibdestilliert. und man erhält 10 mg einer braunen, c'igen Verbindung.
Das UV-Spektrum dieses Produktes ist kompliziert,
insbesondere besitzt es keine spezifische Absorption des ΐΛ-24-Dihydroxycholecalciferols, welches ein Absorptionsmaximum
bei 265 nm zeigt, und die Bildung von ΐΛ-24-Dihydroxycholecalciferol konnte nicht bestätigt
werden. Hl
Dies wurde weiter bestätigt, wenn man die obige Verbindung der präparat!ven Dünnschich!Chromatographie
unter Verwendung von Silikagei-Trägermaterial. das daran adsorbiert Silbernitrat enthält, unterwirft
und das Chromatogramm mit dem Chromatogramm einer Standardprobe von la-24-Dihydroxycholecalciferol
vergleicht. Das Produkt zeigt keinen Fleck, der der Standardprobe entspricht.
Daraus ist ersichtlich, daß die Reinheit von la,30-24-Trihydroxycholesta-5,7-dien
niedrig ist, li\,3/?-24-Trihy- iü
droxycholecalciferol durch Isomerisierung unter Verwendung von ultravioletter Bestrahlung nicht gebildet
wird.
Vergleichsbeispiel 4 : -,
Synthese von lft-24-Diacetoxycholecalciferol-
3j9-acetat aus 1 «,S/J-Triacetoxycholesta-
5.7-dien, das 1 A,3/?-24-Tnacetoxycholesta-
4,6-dien enthält (Vergleich der vierten Stufe)
10 mg einer Mischung aus l«,3/?-24-Triacetoxycholesta-5.7-dien
und la,3/?-24-Triacetoxy-4,6-dien in einem
Molverhältnis von ungefähr 3 : 1, erhalten auf gleiche Weise wie in Vergleichsbeispiel 2 beschrieben, werden
in 500 ml Diäthyläther gelöst und die Lösung wird 2 r>
Minuten bei 5=C mit ultravioletten Strahlen bestrahlt. Die Reaktionsmischung färbt sich gelblich-braun. Nach
der Umsetzung wird der Diäthyläther sorgfältig bei vermindertem Druck abdestilliert. Benzol (50 ml) wird
zu dem Rückstand gegeben und die Isomerisierung wird 2 Stunden in Argonatmosphäre unter Rückfluß des
Benzols durchgeführt. Nach der Umsetzung wird die Haupimenge des Benzols bei vermindertem Druck
abdestilliert. Zu dem Rückstand gibt man 1 ml 5°/oiges Kaliumhydroxid-Methanol und die Mischung wird 24
Stunden bei Zimmertemperatur in Argonatmosphäre zur Durchführung der Hydrolyse stehengelassen. Nach
der Umsetzung wird das Benzol abgedampft und das UV-Spektrum wird bestimmt. Das Produkt wird der
präparativen Dünnschichtchromatographie unterworfen. Die Ergebnisse sind die gleichen wie; bei
VergleichSibeispiel 3 und es wurde keine Bildung von
!α-24-Dihydroxycholecalciferol beobachtet.
Beispiel 29 -,-,
Einfluß auf die Aktivierung des intestinalen
Calciumlransports des
1«-24-Dihydroxychoiecalciferols(la-24-DHCC)
1«-24-Dihydroxychoiecalciferols(la-24-DHCC)
(a) Vergleich mit ΐΛ-Hydroxycholecalciferol
(Ia-HCC)
(Ia-HCC)
Männliche Wistarratten mit einem Körpergewicht von ungefähr 200 g müssen über Nacht fasten, und dann
wird ihnen oral 625 ρ Mol einer Lösung von jeweils I \-24-DHCC und Ιλ-HCC in Maisöl verabreicht Nach (,■>
einer vorbestimmten Zeitdauer wird eine Lösung aus radioaktivem Calciumchlorid (45CaCb, 30 nCi/ml) oral
verabreicht. Der Radioaktivitätsgehalt im Blut wird im Verlauf von 10 bis 60 Minuten bestimmt. Die maximaler
Werte werden als Index für die intestinal· Calciumabsorption
festgesetzt.
Einer Kontrollgruppe von Ratten wird Maisöl allein in der gleichen Menge verabreicht. Die Dosis der
Maisöllösung von Ιλ-24-DHCC oder Ia-DHCC und des
Maisöls betrugen 0.0125 ml/100 g Körpergewicht jeder Ratte, und die Dosis an radioaktiver wäßriger
Calciumchloridlösung (pH 7,0) betrug 0,1 ml/100 ° Körpergewicht jeder Ratte.
Der Radioaktivitätsgehalt wurde bestimmt, inder:
man 0.2 ml des Serums in eine Vial-Flasche gab, 12 m
einer Lösung zugab, die einen Scintillator enthäl [enthaltend 1200 ml Toluol, 800 ml Äthylcellosolv, 8j
2.5-DiphenyIoxazol und 300 mg 2,2'-p-Phenylen-bis-(5
phenyloxazol)]. und indem man die Radioaktivität mi' einem flüssigen Scintillationszähler bestimmte. Die
Ergebnisse sind in Tabelle 1 angegeben.
Zeit nach der
Verabreichung
Verabreichung
(Std.)
Radioaktivität im Serum (cpm)
1 σ-24-DHCC 1 <r-HCC
1 σ-24-DHCC 1 <r-HCC
Vergli
ich
275 ± 95 (4)*)
360 ± 150(4)
996 ± 80(4)
924 ± 130(4)
426+ 61 (4)
360 ± 150(4)
996 ± 80(4)
924 ± 130(4)
426+ 61 (4)
275 ± 95 (4)
697 ±221 (4)
1035 ± 150 (4)
643 + 210(4)
332 ± 28(4)
697 ±221 (4)
1035 ± 150 (4)
643 + 210(4)
332 ± 28(4)
*) Die Werte in Klammern zeigen die Anzahl der Ratten in einer besonderen Gruppe an.
Aus den obigen Ergebnissen geht hervor, daß Ιλ-24-DHCC eine fast gleiche Wirkung besitzt wie
Ia-HCC im Hinblick auf die Aktivierung der intestinalen Calciumabsorption.
(b) Vergleich zwischen 1<x-24(R)-DHCC und
lft-24(S)-DHCC
lft-24(S)-DHCC
Männliche Wistarratten mußten über Nacht faster und dann wird ihnen oral 625 ρ Mol einer Lösung von je
U-24(R)-DHCC und 1«-24(S)-DHCC in Maisöl verabreicht.
8 Stunden nach der Verabreichung werden die Ratten getötet und die intestinale Calciumabsorptior
wird mit dem umgekehrten gut sac-Verfahren bestimm) [Martin und De Luca. Amer. J. Physiol. 216, 1351
(1969)]. Die 'Ergebnisse sind in Tabelle !1 angegeben.
Vergleich
1*-24(R)-DHCC
la-24(S)-DHCC
<">Ca(S/M)
1,29 + 0,16(4)^ ]
1,29 + 0,16(4)^ ]
5,86 ±1,98 (4)
2,68 ±0,80 (4)
2,68 ±0,80 (4)
+ ) Die Zahl in Klammern zeigt die Anzahl der
Rauen in einer besonderen Gruppe an.
Die Versuchsbedingungen sind die folgenden:
Verwendeter intestinaler Tnikt:
Duodenum, 7 cm
Duodenum, 7 cm
Menge an Medium, das in das
umgekehrte Duodenum
gegeben wird, 0.7 ml
umgekehrte Duodenum
gegeben wird, 0.7 ml
1 cno /ice
Zusammensetzung des Mediums:
NaCl
Fructose
Tris-Cl-Puffer
CaCl·
NaCl
Fructose
Tris-Cl-Puffer
CaCl·
Inkubationsbedingungen:
37° C, 90 Minuten eine gasförmige
Mischung aus 95% O2 und 5% CO2
wird durchgeleitet
37° C, 90 Minuten eine gasförmige
Mischung aus 95% O2 und 5% CO2
wird durchgeleitet
Menge an Flüssigkeit, die für
die Radioaktivitätsmessungen
verwendet wird
25 26 98!
125 mM
1OmM
30 mM (pH 7,4)
0,25 mM
10 μα/1
0,1 ml
Die anderen Bedingungen sind gleich wie bei (a) ι
>ben.
Die obigen Ergebnisse zeigen, daß 1*-24(R)-DHCC eine größere Aktivität zeigt, die intestinale Calciumabsorption
zu aktivieren, als la-24{S)-DHCC.
Vergleich von U-HCC, Ιλ-24-DHCC.
1s-24(R)-DHCC und hn-24(S)-DHCC
im Hinblick auf die Aktivierung der
intestinalen Calciumabsorption
Das Versuchsverfahren ist gleich wie in Beispier 29(b).
Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 111 angegeben.
Dosis
125 p Mol
125 p Mol
625 ρ Mol
3 125 ρ Mol
Vergleich
1 a-HCC
1 ff-24-DHCC
1 ä-24(S)-D H CC
lff-24(R)-DHCC
3,59 ± 0,23 (4)
4.12 ±0,25 (4)
3,97 ±0,28 (4)
4,42 ±0,41 (4)
4.12 ±0,25 (4)
3,97 ±0,28 (4)
4,42 ±0,41 (4)
3,31 ±0.12(15)*)
4,10 ±0,27 (4)
4,84 ±0,32 (4)
4,17 ±0,31 (4)
5,93 ±0,33 (4)
4,10 ±0,27 (4)
4,84 ±0,32 (4)
4,17 ±0,31 (4)
5,93 ±0,33 (4)
5,10 ±0,27 (4)
5,47 ±0,33 (4)
5,18 ±0,20 (4)
5,84 ±0,39 (4)
5,47 ±0,33 (4)
5,18 ±0,20 (4)
5,84 ±0,39 (4)
*) Die Zahlen in Klammern geben die Anzahl der Rauen in einer besonderen Gruppe an.
Die in Tabelle III aufgeführten Ergebnisse bestätigen
die Versuchsergebnisse von Beispiel 29. In anderen Worten, ist die intestinale Calciumabsorption von
Ιλ-24-DHCC mindestens gleich der Aktivität von Ia-DHCC und unter Ιλ-24-DHCC. 1a-24(R)-DHCC
und la-24(S)-DHCC bestehen die folgenden Beziehungen im Hinblick auf die Fähigkeit, die intestinale
Calciumabsorption zu aktivieren:
1a-24(R)-DHCC > Ιλ-24-DHCC > 1a-24(S)-DHCC
Vergleich der Knochenabsorptionswirkung zwischen
Ιλ-24-DHCC und Iä-HCC
Ιλ-24-DHCC und Iä-HCC
Männlichen Wistarratten (je mit einem Körpergewicht von ungefähr 150 g) wird subkutan eine wäßrige
Lösung aus 45CaCI2 in einer Dosis von 50 nCi/Ratte
verabreicht und die Ratten werden 6 Wochen gehalten. Das so verabreichte 45Ca wird schnell absorbiert und ein
größerer Teil sammelt sich nach einigen Stunden in den Knochen. 3 Wochen später wird der ^Ca-Gehalt im
Blut konstant und nur die Knochen befinden sich in dem spezifisch markierten Zustand. Dies wird durch
makroautoradiographische Analyse des gesamten Körpers bestätigt. Die Ratten werden 6 Wochen gehalten
und dann wird ihnen oral kontinuierlich einmal am Tag eine Lösung aus 2125p Mol von je la-HCC und
1-v-24-DHCC verabreicht. BIuI wird im Verlauf der Zeit
entnommen und der Radioaktivitätsgehalt des Serums wird gemäß dem in Beispiel 29(a) beschriebenen
Verfahren bestimmt. Eine Erhöhung in dem Serum-Radioaktivitätsgehalt wird als Index des Einflusses der
Knochcn2bsorntion angesehen Her Knntrollpninnc
wird nur Maisöl allein verabreicht. Die Anzahl der Ratten, die untersucht werden, beträgt jeweils 4 in einer
Gruppe. Die erhaltenen Ergebnisse sind in F i g. 6 dargestellt. In dieser Figur bedeutet das Symbol einen
wesentlichen Unterschied in dem Serum-Radioaktivitätsgehalt, verglichen mit der Verglcichsprobe.
Aus den in Fig. 6 dargestellten Ergebnissen ist erkennbar, daß bei Ιλ-HCC die Knochenabsorption
beachtlich 2 Tage nach dem Beginn der Verabreichung zunimmt und daß diese Erscheinung mit der Zeit größer
wird. Andererseits nimmt bei Ιλ-24-DHCC die Knochenabsorption nur nach einem Verlauf von 4 Tagen
beachtlich zu, aber danach ist das Ausmaß der Erhöhung wesentlich niedriger als bei Iä-HCC (ungefähr Vi am
8.Tag). Dies legt nahe, daß Ιλ-24-DHCC einen schwächeren Knochenabsorptions-Effekt zeigt als
Ιλ-HCC und eine niedrigereToxizität.
Beispiel 32
Vergleich der Knochenabsorptionswirkung und der
Körpergewichtsänderung zwischen 1 a-HCC,
Ιλ-24-DHCC, 1«-24(R)-DHCC und I«-24(S)-DHCC
Ιλ-24-DHCC, 1«-24(R)-DHCC und I«-24(S)-DHCC
Ein ähnlicher Versuch wie in Beispiel 31 beschrieben wird mit den obigen vier Verbindungen durchgeführt.
Im Gegensatz zu Beispiel 31 wird der Versuch 3 Wochen nach der Verabreichung von '15CaCI) begonnen.
Sowohl der Radioaktivitätsgehalt des Serjms als auch die gesamte Calciumkonzentration im Serum werden
bestimmt. Für die Messung der Calciumkonzentration wird ein Calciumbestimmungssack (hergestellt von
latron Company) verwendet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle IV und V angegeben.
Tabelle IV
4äCa-Gehalt im Serum
4äCa-Gehalt im Serum
52
Zeit (Tage) Serum-Aktivität (cpm) O 5
Vergleich
ltf-HCC
1 α-24-DHCC
la-24(R)-DHCC
lff-24(S)-DHCC
699 ± 53.7 690 ± 39,4 675 ± 54,9 648 ± 44,3 780 ± 43,5
621 ±48,6 1056 ±66,8 948 ± 64,6 874 ± 30,4 539 ± 45,2
597 ± 33,9
1184±51,1
700 ± 32,8
778 ± 26,9
520 ± 53,8
700 ± 32,8
778 ± 26,9
520 ± 53,8
608 ± 49,3 904 ± 57,1 661 ±78,8 681 ±63,7
609 ±91.5
Tabelle V
Ca-Gehalt im Serum
Ca-Gehalt im Serum
Vergleich
1 ff-HCC
1 a-24-DHCC
\a-24i R)-DHCC
lff-24(S)-DHCC
11,4 ±0,32 10,4 ±0,21 11,7 ±0,26
11,3 ±0,35 i 1,2 ±0,16
10.0 ±0,29
14.1 ±0,29
12,9 ±0,18
12,6 ±0,23
11,5 ±0.33
12,9 ±0,18
12,6 ±0,23
11,5 ±0.33
11.1 ±0,22
14,7 ± 0,33
11,5 ±0,23
13.3 ±0,25
14,7 ± 0,33
11,5 ±0,23
13.3 ±0,25
11.2 ±0.29
10.6 ±0,15 13,8 ±0,41 12,1 ±0,19 12,8 ±0,35
11,5 ±0,24
Aus den in den Tabellen IV und V aufgeführten Ergebnissen ist erkennbar, dall die Versuchsergebnisse
von Beispiel 31 wieder bestätigt werden. In anderen Worten zeigen diese Ergebnisse, daß Ιλ-24-DHCC eine
schwächere Knochenabsorptionswirkung als Ia-HCC besitzt, und von Ιλ-24-DHCC. la-24(R)-DHCC und
1 \-24(S)-DHCC gilt für die Knochenabsorptionswirkung die folgende Beziehung:
U\-24(R)-DHCC> 1<v24-DHCC> li\-24(S)-DHCC.
Es ist besonders bemerkenswert, daß bei lot-24(S)-DHCC
kaum eine Knochenabsorptionswirkung bcobachtet wird, und diese Wirkung ist fast gleich wie bei der
Vergleichsprobe. Dies legt den Schluß nahe, daß U-24(S)-DHCC keinen Einfluß auf die spezifische
aktivierende intestinale Calciumabsorption zeigt und dies ist für klinische Anwendungen sehr wichtig.
Die Änderungen im Körpergewicht, die in dem
in vorliegenden Versuch bestimmt wurden, sind in Fig. 7
dargestellt. Es ist bemerkenswert, daß Ιλ.-24-DHCC
eine größere Änderung im Körpergewicht aufweist als
1Λ-HCC, und insbesondere zeigt 1«-24(S)-DHCC kaum
einen Unterschied im Hinblick auf die Vergleichsgrup-
Γ) pe. Dies legt den Schluß nahe, daß, ähnlich wie bei der
Knochenabsorption, die Toxizität von Ιλ-24-DHCC
geringer ist als von 1 λ-HCC
Beispiel 33
Vergleich der Toxizität zwischen Ιλ-24-DHCC und K-HCC
Die Toxizität von jeder der obigen zwei Verbindungen
wird nach bekannten Verfahren bestimmt. Die 4> Ergebnisse sind in Tabelle Vl angegeben.
Tabelle VI | Geschlecht | LD.sn (;ig/kg) | u-ncr | 1 σ-24-DHCC |
Species | Verabreichungsverfahren | 474 | >25OO | |
δ | per os | 508 167 |
33 000-3 300 | |
9 S |
intravenös | 100 | 3300-1000 | |
Vlaus | 9 | 330 744 |
- | |
Q | per os | |||
Ratte | ||||
Aus der obigen Tabelle ist erkennbar, daß die Toxizität von Ιλ-24-DHCC ein Zehntel oder weniger
von der von Ιλ-HCC beträgt. Dieses Ergebnis ist ebenfalls aus den Ergebnissen der Beispiele 31 und 32
ersichtlich.
Aufgrund der in den Beispielen 29 bis 33 erhaltene] Ergebnisse können die Eigenschaften von Ιλ-24-DHCC
mit denen von Ιλ-HCC, wie sie in Tabelle VIl aufgeführt
sind, verglichen werden. Bei diesen Werten wird die Aktivität von Ιλ-HCC als 1 angenommen.
53 54
Tabelle VII Da gezeigt wurde, daß das erfindungsgemäße
Ιλ-24-DHCC die intestinale Calciumabsorption selektiv
Ισ-24-DHCC Ia-HCC aktiviert und eine schwächere Knochenabsorptionswir-
kung zeigt, verglichen mit bekannten Analogen der
r-· η η r-i- αϊ · ι , ~>
aktiven Form von Vitamin D1. v.ird angenommen, daß
Einnuß auf die Akt!- 1 1 e$ pjn sehp wertvo„es Arznejmitte| ist, welches mit nur
vierung der intesti- wenigen Nebenwirkungen bei der Behandlung von
naien Calcium- Krankheiten verwendet werden kann, die durch
absorption abnormalen Metabolismus von Calcium induziert
Knochenabsorp- weniger a's ' 3 1 1(, werden, insbesondere ist la-24(S) DHCC eine beson-
tionswirkrng ders wertvolle Substanz in dieser Hinsicht, und es wird
Akute To.xizität wenieer als ' io 1 angenommen, daß die große Verwendung linden wird.
Claims (1)
- Patentansprüche:1. Gemisch von la^SJ-Dihydroxycholecalciferol und !«^(RJ-Dihydroxycholecalciferol in beliebigen Verhältnissen der folgenden FormelOHsen, ausgedrückt durch die folgende FormelOR,HOOH2. U-24(S)-Dihycin)xycholecalcircrol der folgenden FormelOHllo*Oλ K-24(R)-I)ihydro\ycholccalciferol der l'oljjenilcn FormelOHHO4. 1a-24(S) Dihydroxycholecalciferol-Derivat, I it-24(R)-DihydtOxycholecalciferol-Derivat oder ein Gemisch dieser Derivate in beliebigen VcrhältnisworinRi, R2 und Rj gleich oder unterschiedlich sind und je ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeuten, die in ein Wasserstoffatom überführbar ist, ohne daß die Struktur der obigen Formel geändert wird, mit dem Proviso, daß mindestens eine der Gruppen Ri, R2und R j eine Schutzgruppe bedeutet.5. Gemisch von la,3/?-24(S)-Trihydroxycriolesta-5,7-dien oder seinen Derivaten und l«,3/i-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien oder seinen Derivaten in beliebigen Verhältnissen, ausgedrückt durch die folgende FormelOR,OR,R1(TworinRi, R2 und Ri gleich oder unterschiedlich sind und je ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe, die in ein Wasserstoffatom überführbar ist, bedeuten.6. 1(\,3/J-24(S)-Trihydroxycholesta-5,7-dien oder ein Derivat hiervon, gebildet durch Schutz von mindestens einer Hydroxylgruppe davon, ausgedrückt durch dip folgende FormelOR,OR,R1ORi, R2 und Ri gleich oder unterschiedlich sind und je ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeuten, die in ein Wasserstoffatom überführbar ist, ohne daß sich die Struktur der obigen Formel ändert.7. l(X,3/i-24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dicn oder ein Derivat davon, gebildet durch Schutz vonmindestens einer Hydroxylgruppe davon, ausgedrückt durch die folgende Formeleiner Hydroxylgruppe davon, ausgedrückt durch die folgende FormelOR,\/ '■■■/OR5(2-d)Ri, Ri und R igleich oder unterschiedlich sind und je ein V'asserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeuten, die iii ein Wasserstoffatom überführbar ist, ohne daß sich die Struktur der obiger? Formel ändert.8. ΐΛ-24-Dihydroxycholesterin oder ein Derivat davon, gebildet durch Schutz von mindestens einer Hydroxylgruppe davon, ausgedrückt durch die folgende FormelOR,,OR5R, OR4' und Rs die in Anspruch 9 gegebenen Bedeutungen besitzen.11. l«,2*-Epoxy-24-ketochoiesta-4,6-dien-3-on der folgenden FormelrfworinR4, R5 und Rh gleich oder unterschiedlich sind und je ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeuten, die in ein Wasserstoffatom überführbar ist, ohne daß sich die Struktur der obigen Formel ändert.9.1«-24(S)-Dihydroxycholesterin oder ein Derivat davon, gebildet durch den Schutz von mindestens einer Hydroxylgruppe davon, ausgedrückt durch die folgende Formel12. Verfahren zur Herstellung von zumindest einer der folgenden Verbindungen, nämlich la,24(S)- und 1«,24(R)-Dihydroxycholecalciferol und deren Derivate, der folgenden FormelOR.,ORi'(2-c)(5)R1OOR1worinR4" ein Wasserstoffatom oder eine substituierte oder nichtsubstituierte Benzoylgruppe bedeutet und R5 ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeutet, die in ein Wasserstoffatom iiberführbar ist. 10. liX-24(R)-Dihydroxycholesterin oder ein Derivat davon, gebildet durch Schutz von mindestens worinR;. R: und Ri, die gleich oder verschieden s"in können, ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeuten, die in ein Wasserstoffatom übcrfiihrbar ist, ohne die Struktur der Formel (5) zu ändern, dadurch gekennzeichnet, daß man(1) ein 1ct,2ix-Epoxy-24-ketocholesta-4,6-dien-3-on der Formel1o£,3^,24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien-Derivat, der FormelΠ) OR4R4Omit einem Alkalimetall und einem Protonendonator in Gegenwart von flüssigem Ammoniak oder einem flüssigen Amin unter Bildung von la,24-Dihydroxycholesterin der FormelOHOH12-u)HOumsetzt,(2) das gebildete 1a,24-Dihydroxycholesterin als r, Benzoylderival der FormelORi'OR,r; o(2-b)zu bilden,(4) das gebildete 5,7-Dienderivat zur Bildung von zumindest einer der folgenden Verbindungen, nämlich 1 «,30,24(S)- und l«.3j3,24(R)-Trihydroxycholesta-5,7-dien, der FormelOH'τ< rHO'hydrolysiert,(5) zumindest eine der folgenden Verbindungen, nämlich 1«,3£,24(S)- und 1a,3/7,24(R)-Trihydroxycholesta 5,7-dien, abtrennt und gewinnt, indem man die hydrolysierten Produkte in Form einer Lösung in einem inerten organischen Lösungsmittel mit einem Träger in Kontakt bringt, der zumindest Siliciumdioxid und nichtmetallisches Silber in absorbierter Form enthält, und gegebenenfalls zumindest eine der Hydroxygruppen schützt, und(6) zumindest eines der auf diese Weise gebildeten 1ä,30,24(S)- und 1*,30,24(R)-Trihydroxycho!esta-5,7-dien-Derivate der FormelworinR4" eine substituierte oder unsubstituierte Benzoylgruppe bedeutet und Rj ein Wasserstoffatom oder eine in ein Wasserstoffatom überführbare Schutzgruppe bedeutet, in ein 1a,24(S)-Epimer und ein la,24(R)-Epimer durch Chromatographie unter Verwendung eines Trägers, der zumindest Siliciumdioxid enthält, trennt,(3) zumindest eine der folgenden Verbindungen, nämlich das l«,24(S)-Epimer und das la,24(R)-Epimer, mit einem allylischen Bromierungsmittel in einem inerten organischen Medium umsetzt und dann die erhaltene Reaktionsmischung mit einem Dehydrobromierungsmittel in Kontakt bringt, um zumindest eine der folgenden Verbindungen, nämlich ein 1 fx,3/i,24(S)-Trihydroxycholests-5,7-dien-Derivat und ein OR.,(3-b)R1Oworin Ri, R2 und R3 die vorstehend angegebene Bedeutung besitzen, einer Ultraviolettbestrahlung in einem inerten organischen I ösungsmittel aussetzt und dann das erhaltene Produkt isomerisiert und gegebenenlalls hiernach die Schutzgruppe uder die Schutzgruppen abspaltet.13. Pharmazeutisch wirksames Mittel für Warm- valcdavcn werden durch die fe!gv:u!o F'>rnel blüter, dadurch gekennzeichnet, daß es einepharmazeutisch wirksame Menge von mindestens ^einem 1«-24(S)- und lrtc-24(R)-Dihydroxycholecalciferol der formelOll
Applications Claiming Priority (10)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP6866474A JPS539222B2 (de) | 1974-06-18 | 1974-06-18 | |
JP49141332A JPS5168560A (en) | 1974-12-09 | 1974-12-09 | 1 arufua 244 jihidorokishikorekarushifuerooruno bunriho |
JP14133074A JPS5168557A (en) | 1974-12-09 | 1974-12-09 | 1 arufua 244 jihidorokishikorekarushifuerooruno seizoho |
JP14132974A JPS5168556A (en) | 1974-12-09 | 1974-12-09 | 1 arufua 244 jihidorokishikorekarushifuerooruno seizohoho |
JP14133174A JPS5320989B2 (de) | 1974-12-09 | 1974-12-09 | |
JP14902174A JPS5176255A (en) | 1974-12-27 | 1974-12-27 | 1 arufua * 24 * s * jihidorokishikorekarushifueroorunoseizohoho |
JP14901874A JPS5176253A (en) | 1974-12-27 | 1974-12-27 | 1 arufua *24 * r * jihidorokishikorekarushifueroorunoseizohoho |
JP14902074A JPS5176254A (en) | 1974-12-27 | 1974-12-27 | 1 arufua * 24 * s * jihidorokishikorekarushifueroorunoseizoho |
JP14902274A JPS5176259A (en) | 1974-12-27 | 1974-12-27 | 244 benzoiruokishikoresuteroorujudotaino 24 iepimaanobunriho |
JP14901774A JPS5176252A (en) | 1974-12-27 | 1974-12-27 | 1 arufua *24 * r * jihidorokishikorekarushifueroorunoseizoho |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2526981A1 DE2526981A1 (de) | 1976-01-15 |
DE2526981B2 DE2526981B2 (de) | 1978-06-29 |
DE2526981C3 true DE2526981C3 (de) | 1979-03-01 |
Family
ID=27580092
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE752526981A Expired DE2526981C3 (de) | 1974-06-18 | 1975-06-18 | lalpha^4-Dihyaroxycholecalciferol-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Mittel |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4022891A (de) |
CA (1) | CA1051442A (de) |
CH (1) | CH618669A5 (de) |
DE (1) | DE2526981C3 (de) |
DK (1) | DK142410B (de) |
FR (1) | FR2275196A1 (de) |
GB (2) | GB1508042A (de) |
NL (1) | NL7507268A (de) |
NO (1) | NO145162C (de) |
SE (1) | SE413096B (de) |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1088094B (it) * | 1976-10-14 | 1985-06-04 | Hoffmann La Roche | Derivati del pregnano |
JPS53147051A (en) * | 1977-05-24 | 1978-12-21 | Teijin Ltd | 1alpha-hydroxy-24-dehydro-vitamin d3 and its preparation |
JPS5822479B2 (ja) * | 1977-09-07 | 1983-05-09 | 帝人株式会社 | 1α−ヒドロキシ−24−オキソ−ビタミンD↓3およびその製造法 |
US4225596A (en) * | 1978-10-13 | 1980-09-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method for treating calcium imbalance and improving calcium absorption in mammals |
LU80545A1 (de) * | 1978-11-17 | 1980-06-05 | Hoffmann La Roche | Verfahren zur herstellung von 1a,3s-dihydroxy->5-steroiden |
US4230701A (en) * | 1979-03-21 | 1980-10-28 | Hoffmann-La Roche Inc. | Administration of biologically active vitamin D3 and vitamin D2 materials |
US4335120A (en) * | 1979-03-21 | 1982-06-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Administration of biologically active vitamin D3 and vitamin D2 materials |
JPS55136229A (en) * | 1979-04-10 | 1980-10-23 | Teijin Ltd | Adjustment of bone metabolism in warm-blooded animal and drug for it |
JPS5626820A (en) * | 1979-08-10 | 1981-03-16 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | Immunosuppressing agent |
US4338250A (en) * | 1981-04-27 | 1982-07-06 | Wisconsin Alumni Research Foundation | 1-Hydroxylation process |
CA1272953A (en) | 1984-10-08 | 1990-08-21 | Yuji Makino | Pharmaceutical composition for external use containing active-type vitamin d.sub.3 |
JPH0749435B2 (ja) * | 1988-07-04 | 1995-05-31 | 帝人株式会社 | 1α,3β,24−トリヒドロキシ−△▲上5▼−ステロイド類の製造方法 |
US5532228A (en) * | 1990-02-06 | 1996-07-02 | Schering Aktiengesellschaft | Side-chain homologous vitamin D derivatives, process for their production, pharmaceutical preparations containing these derivatives and their use as pharmaceutical agents |
US20040009958A1 (en) * | 1991-01-08 | 2004-01-15 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1alpha,24(S)-dihydroxyvitamin D2 |
US6166000A (en) * | 1991-01-08 | 2000-12-26 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1α,24(S)-Dihydroxy vitamin . D.sub2 |
EP0550702B1 (de) | 1991-01-08 | 1999-05-06 | Bone Care International, Inc. | Verfahren zur herstellung und verwendung von 1alpha,24-dihydroxy vitamin-d2 |
US6538037B2 (en) | 1991-01-08 | 2003-03-25 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxyvitamin D2 |
US5789397A (en) * | 1991-01-08 | 1998-08-04 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1A,24(S)-dihydroxy vitamin D2 |
US6251883B1 (en) | 1991-01-08 | 2001-06-26 | Bone Care International, Inc. | Methods for preparation and use of 1α,24(S)-dihydroxy vitamin D2 |
AU4841193A (en) * | 1992-08-28 | 1994-03-29 | Lunar Corporation | 1alpha,24(S)-dihydroxy vitamin D2, its formation and use |
IL107185A (en) * | 1992-10-06 | 1998-02-22 | Schering Ag | History of 52-carboxylic acid, processes for their preparation and pharmaceutical preparations containing them |
US5869472A (en) * | 1994-07-18 | 1999-02-09 | Bone Care International, Inc. | Synthesis of 1α-hydroxy vitamin D |
US6362350B1 (en) | 1999-07-01 | 2002-03-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Crystalline 1α, 24(S)-dihydroxyvitamin D2 and method of purification thereof |
US7129230B2 (en) | 2001-03-12 | 2006-10-31 | Nestec S.A. | Method and product for treating cancer in pets |
US20060003950A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-01-05 | Bone Care International, Inc. | Method of treating prostatic diseases using a combination of vitamin D analogues and other agents |
US7094775B2 (en) * | 2004-06-30 | 2006-08-22 | Bone Care International, Llc | Method of treating breast cancer using a combination of vitamin D analogues and other agents |
TW200714580A (en) * | 2005-10-14 | 2007-04-16 | Formosa Lab Inc | Process for preparing vitamin D analogs |
JP5492099B2 (ja) * | 2008-03-12 | 2014-05-14 | シトクロマ インコーポレイテッド | 安定化1,25−ジヒドロキシビタミンd2及びその製造方法 |
KR102300311B1 (ko) | 2017-04-18 | 2021-09-10 | 연성정밀화학(주) | 타칼시톨의 제조방법 및 그를 위한 중간체 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3901928A (en) * | 1973-01-10 | 1975-08-26 | Robert Henry Hesse | 1' ,3' -dihydroxy steroid-5-enes method of preparing same and their use for preparing 1' -hydroxy-25-hydrogen vitamin d compounds |
US3928397A (en) * | 1973-03-02 | 1975-12-23 | Eisai Co Ltd | New 5-cholestene derivatives and preparation thereof |
-
1975
- 1975-06-02 US US05/583,115 patent/US4022891A/en not_active Expired - Lifetime
- 1975-06-04 GB GB24138/75A patent/GB1508042A/en not_active Expired
- 1975-06-04 GB GB44013/76A patent/GB1508043A/en not_active Expired
- 1975-06-09 SE SE7506560A patent/SE413096B/xx not_active IP Right Cessation
- 1975-06-17 NO NO752150A patent/NO145162C/no unknown
- 1975-06-17 DK DK273375AA patent/DK142410B/da not_active IP Right Cessation
- 1975-06-17 CA CA229,466A patent/CA1051442A/en not_active Expired
- 1975-06-18 CH CH793875A patent/CH618669A5/de not_active IP Right Cessation
- 1975-06-18 NL NL7507268A patent/NL7507268A/xx unknown
- 1975-06-18 DE DE752526981A patent/DE2526981C3/de not_active Expired
- 1975-06-18 FR FR7519074A patent/FR2275196A1/fr active Granted
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DK142410C (de) | 1981-03-23 |
GB1508042A (en) | 1978-04-19 |
NL7507268A (nl) | 1975-12-22 |
NO145162C (no) | 1982-01-27 |
DE2526981B2 (de) | 1978-06-29 |
DK142410B (da) | 1980-10-27 |
DE2526981A1 (de) | 1976-01-15 |
DK273375A (de) | 1975-12-19 |
NO145162B (no) | 1981-10-19 |
FR2275196A1 (fr) | 1976-01-16 |
FR2275196B1 (de) | 1978-10-06 |
US4022891A (en) | 1977-05-10 |
GB1508043A (en) | 1978-04-19 |
CH618669A5 (de) | 1980-08-15 |
SE413096B (sv) | 1980-04-14 |
SE7506560L (sv) | 1975-12-19 |
NO752150L (de) | 1975-12-19 |
CA1051442A (en) | 1979-03-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2526981C3 (de) | lalpha^4-Dihyaroxycholecalciferol-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Mittel | |
DE2012167C2 (de) | 25-Hydroxycholecalciferol-hydrat und Verfahren sowie Zwischenprodukte zu seiner Herstellung | |
DE2400931C2 (de) | ||
DE3248900C2 (de) | ||
DE2259661A1 (de) | 1 alpha-hydroxycholecalciferol und verfahren zu dessen herstellung | |
DE3590232C2 (de) | 1,24-Dihydroxy- 22-Vitamin D3-Derivate, diese enthaltende Arzneimittel sowie Cholesterinderivate alsZwischenprodukte | |
CH652725A5 (de) | Zwischenprodukte fuer die herstellung eines vitamin d(3)-derivates. | |
DE3490215C2 (de) | ||
CH668258A5 (de) | Hydroxyvitamin d2-isomere. | |
CH650240A5 (de) | 24,24-difluor-1alpha,25-dihydroxycholecalciferol. | |
DE2724994A1 (de) | 5,6-cis- und 5,6-trans-10,19-dihydrovitamin d-derivate, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel | |
DE2838092C3 (de) | 1&alpha; -Hydroxy-24-oxovitamin D&darr;3&darr;, Verfahren zu seiner Herstellung, dabei verwendete Vorläufer und Verwendung von 1&alpha; -Hydroxy-24-oxovitamin D&darr;3&darr; | |
DE3590488C2 (de) | ||
CH654015A5 (de) | 24,24-difluor-25-hydroxycholesterin-7-en und dessen 3-acylderivate. | |
CH653995A5 (de) | 2beta-fluorcholecalciferole. | |
DE3416112A1 (de) | Verwendung von sterolinen und spiroketalinen als lipoxygenaseregulatoren | |
DE1172670B (de) | Verfahren zur Herstellung von 3-substituierten D-Homo-18-nor-androst-13(17a)-en-17-on-derivaten | |
DE3590080C2 (de) | ||
CH665835A5 (de) | 1alpha,25-dihydroxy-22z-dehydrovitamin d-verbindung. | |
DE2822752A1 (de) | 1 alpha -hydroxy-24-dehydrovitamin d tief 3 | |
DE3590020C2 (de) | In der Seitenkette ungesättigte 1-Hydroxyvitamin D-Verbindungen | |
DE2812741A1 (de) | Vitamin d tief 3 -derivate, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende arzneimittel | |
DE2048812A1 (de) | Ein neues 6alpha Methyl 19 nor pro gesteron und ein Verfahren zu dessen Her stellung | |
DE2357778C3 (de) | Neue Ester von 21-Mercaptosteroiden, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen | |
DE2101813C3 (de) | Neue 17alpha-(2',3'-difluormethylenprop-1 '-en-1 '-yl)-östra-4-en-3-one, Verfahren zu deren Herstellung sowie diese enthaltende Mittel |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) |