DE2417425B2

DE2417425B2 - Aufloesung von hefezellwaenden

Info

Publication number: DE2417425B2
Application number: DE19742417425
Authority: DE
Inventors: Kumpei; Yamamoto Yasushi; Kokubo Eiichi; Kuroiwa. Yoshiro; Takasaki Gunma Kitamura (Japan)
Priority date: 1973-04-11
Filing date: 1974-04-10
Publication date: 1977-06-02
Also published as: US3917510A; FR2225515B1; DE2417425A1; FR2225515A1; GB1423949A

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Auflösung (lyse) von Hefezellwänden mit Hilfe von Hefezellwände auflösenden Enzymen.

Die verschiedensten Hefearten werden zu Nahrungs-/wecken für Mensch und Tier sowie industrielle Zwecke hergestellt.

Da man annimmt, daß die Zugänglichkeit von Hefezelleinschlüssen durch Entfernung der Hefezellwände verbessert werden kann, sind bereits verschiedene Verfahren zur Entfernung der Hefezellwändc vorgeschlagen worden. Unter ihnen wird die milde enzymatisch^ Behandlung als vorteilhafter angesehen. als drastische physikalische und chemische Behandlungsarten, beispielsweise mit Hitze, konzentrierten Säurt·! oder konzentrierten Alkalien, da bei der erstgenannten Methode die Hefezelleinschlusse vor Zerstörung oder Denaturierung bewahrt werden.

Als cn/ymatisches Verfahren zur Auflösung von Hefezellwänden ist eine Methode unter Verwendung von .Schneckenverdauungssaft bekannt, der aus den Eingeweiden von Helix pomatia gewonnen wird. Außer dem Schneckenenzym-Verfahren sind viele Methoden unter Verwendung verschiedener von Mikroorganismen stammender Enzyme bekannt Jedoch variiert das Ausmaß der Auflösung lebensfähiger Hefezellen durch Anwendung der genannten Verfahren sehr häufig mit den Kulturbedingungen der Hefe. Besonders weiden Zellwände von Hefesorten, die aerob bis zu einer stationären Wachstumsphase gezüchtet werden, von den obenerwähnten Enzymen kaum aufgelöst. Beispielsweise kann das Schneckenenzym nicht die Zellwände handelsüblicher Bäckerhefe, deren Kulturen unter

ίο heftiger Belüftung hergestellt werden, nicht auflösen. Zur wirksamen Auflösung derartiger Hefezellwände hat man schon Thioverbindungen, wie Mercaptoäthanol. dem Umsetzungsgemisch mit dem Enzym zugesetzt oder Hefezellen mit Hilfe dieser Thioverbindungen vorbehandelt. Diese Verfahren sind jedoch aufgrund ihrer Kostspieligkeit und des dabei entstehenden schlechten Geruches großtechnischer Anwendung nicht fähig.

Da Hefeorganismen, einschließlich solcher Stamme, die Kohlenwasserstoffe verwerten können, in Jer Nahrungs- und Futtermittelindustrie in großtcchm schem Maßstab hergestellt werden und die Industriezweige /ur Herstellung von Hefen in naher Zukunft wahrscheinlich wegen der /u überwindenden Nahrungsmittelengpässe eine rasche Entwicklung erfahren werden, wird ein Verfahren zur Auflösung von Hefezellen durch Hefezellwände auflösende Enzyme ohne Anwendung von Thioverbindungen mannigf.t. he technische Vorteile bieten.

xo Ziel der Erfindung ist die Schaffung eines Verfahrens zum wirksamen Auflösen von Hefezellwänden einschließlich solcher, die von zur Auflösung von Hefezellwänden befähigten Enzymen nur schlecht aufgelöst werden,

.15 Gegenstand der Erfindung ist das in Anspruch 1 gekennzeichnete Verfahren.

Die Patentansprüche 2 und i nennen vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren kann also die Hefe mit dem Enzym in Gegenwart eines wasserlöslichen Sulfits behandelt oder sie kann vor der Auflösung mit einem wasserlöslichen Sulfit vorbehandelt werden. Das wasserlösliche Sulfit, das für die Vorbehandlung verwendet wird, kann Kupferionen enthalten.

Das Sulfit kann zusammen mit Kaliumchlorid, Natriumchlorid. Kaliumsulfat, Natriumnitrat, Natriumcarbonat. Natriumbicarbonat, Ammoniumsulfat. Ammoniumchlorid. Calciumchlorid, Magnesiumsulfat oder Natriumphosphat oder einer Mischung dieser anorganisehen Salze oder Kupfer(ll)-sulfat. Kupfer(Il)-nitrat oder Kupfer(Il)-amtnoniumhydroxid als Promotor für die Auflösung der Hefezellwände angewandt werden. Das erfindiingsgemäße Verfahren kann somit in einem Medium, in dem die auflösenden Enzyme mit Sulfiten

5s oder Sulfiten und anorganischen Salzen zusammen vorkommen, durchgeführt werden, oder die auflösenden Enzyme können gemeinsam mit anorganischen Salzen oder ohne diese nach einer Vorbehandlung der Hefe/eilen durch Sulfite oder Sulfite und Kupferionen eingesetzt werden. Es sind dabei die in den Patentansprüchen angegebenen Bedingungen einzuhalten.

Obwohl die Sulfite keine Thiogruppen enthalten, besitzen sie doch überraschenderweise d'e Fähigkeit, die Auflösung von Hefezellwänden durch entsprechen-

h.s de Enzyme zu beschleunigen. Weiterhin ist es überraschend, daß bestimmte anorganische Salze, die nicht Sulfite sind, diese beschleunigende Wirkung der Sulfite unterstützen, und ferner ist es überraschend, daß

't

IS

die Vorbehandlung mit bestimmten Sulfiten und bestimmten Kupferionen die Hefezellen sehr empfänglich für eine Behandlung mit zellwandlösenden Enzymen macht.
Im folgenden wird die Erfindung näher erläutert:

1. Hefestämme

Verwendbare Hefestämme sind die folgenden: Saccharomyces, Endomycopsis, Saccharomycodes, Nematospora, Candida, Torulopsis, Brettanomyces, Schizosaccharomyces und Kloeckera.

2. Hefezeilwände lösende Enzyme

Für das erfindungsgemäße Verfahren können alle Arien von Hefezellwände lösenden Enzymen verwende! werden. Derartige Enzyme sind Gegenstand zahlreicher Veröffentlichungen. Ein typisches Enzym unter ihnen ist das, das durch Arthrobacter luteus :o erzeugt wird.

3. Sulfite

Da die Auflösung von Hefezellwänden und die Vorbehandlung von Hefezellen normalerweise in ;_S wäßrigen Lösungen vorgenommen werden, müssen die enindungsgemäß verwendeten Sulfite zu einem bestimmten Ausmaß in Wasser löslich sein. Hierfür geeignete Sulfite sind: Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Calciumsulfit und Ammoniumsulfit. ,₀

4. Anorganische Salze

Die oben aufgeführten anorganischen Salze werden dem Umsetzungsgemisch aus Hefezellen und Hefezell- ^s wände lösenden Enzymen zugesetzt.

Die genannten anorganischen Salze können auch in Form eines Gemisches mit Hefezellwände lösenden F.nzymen verwendet werden, das vor der Auflösung der Zellwände dienenden Umsetzung bereitet worden ist.

5. Kupferionen

Die oben aufgeführten Kupfersalze, die bei der Vorbehandlung von Hefezellen mit Sulfiten zusätzlich verwendet werden können, werden der Vorbehandlungslösung zugesetzt. Unter diesen Salzen ist das Kupfer(ll)-ammoniumhydroxid das am besten geeignete. F.S läßt sich leicht dadurch herstellen, daß man einer Lösung eines Kupfer(II)-salzes einer Mineralsäure so Ammoniak zusetzt.

6. Mengenverhältnisse der Reagenzien

Das Mengenverhältnis zwischen Sulfiten, anorgani- ss sehen Salzen und Kupfer(ll)-Ionen ist durch die folgenden Konzentrationen an Bestandteilen in den Lösungen, in denen die Hefezellen suspendiert werden, gekennzeichnet:

Sulfite: 0.01 bis 1,0 m,am besten 0.01 bis 0.5 m. (.<

Anorganische Salze: 0,4 bis 2,0 m.
Cupriionen: 0.0001 bis 0,02 m, am besten 0,001 bis 0.01 m.

7. Auflösung der Hefezellwände

Zur Auflösung der Hefezellwände nach dein erfind'jngsgemäßen Verfahren können verschiedene Durchführungsformen angewandt werden. Beispielsweise werden Natriumsulfit und Kaliumchlorid zu einer 0,1-bis 20V""(gen, am besten 0,1- bis 8%igen wäßrigen oder gepufferten Suspension von Hefezellen in Form einer 0,01- bis l.Omolaren, vorzugsweise 0,01- bis 0,5molaren bzw. 0,4- bis 2molaren Lösung hinzugegeben, wonach ein Heferellwände lösendes Enzym, beispielsweise ein solches von Arthrobacter luteus (ATCC Nr. 21 606, vgl. US-PS 37 16452), mit der Suspension vermischt wird. Das Gemisch wird bei 15 bis 40⁰C so lange gehalten, bis die Hefezellwände gelöst werden, beispielsweise 0,5 bis 5 h unter Rühren, wonach selbst eine Hefezellwand, die sich durch das Enzym allein nur schwer auflösen läßt, sehr leicht aufgelöst wird.

Im Falle der Vorbehandlung von Hefezellen mit Sulfit wird beispielsweise eine 0,01- bis 1 molare, am besten 0,01- bis 0,5molare Lösung von Natriumsulfit einer 0,1-bis 20%igen, am besten 0,5- bis 8%igen wäßrigen Suspension von Hefezellen zugesetzt und die Suspension 0,2 bis 2,0 h lang bei 5 bis 40' C gerührt oder geschüttelt. Nach dieser Behandlung werden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit zu entfernen. Anschließend wird eine 0.4- bis 2molare Kaliumchloridlösung zu der 0,1 - bis 20°/oigen, am besten 0,1- bis 8%igen wäßrigen oder gepufferten Suspension der vorbehandelten Hefezellen hinzugegeben, und das Enzym wird der Suspension zugemischt. Das Gemisch wird so lange bei 15 bis 40⁰C gehalten. >.s die Hefezellwände aufgelöst werden, beispielsweise 0.5 bis 5 h unter Rühren, woraufhin selbst eine Hefezellwand, die sich durch das Enzym allein kaum auflöst, leicht gelöst wird.

Im Falle der Vorbehandlung durch Sulfite und Cupriioren werden beispielsweise eine 0,01- bis l.Omolare, em besten 0,01- bis 0,5molare Natriumsulfitlösung und eine 0,0001- bis 0,02molare. am besten 0,001-bis 0,01-molare Kupferammoniumhydroxidlösung der wäßrigen Suspension von Hefezellen zugesetzt. Die Suspension wird 0,1 bis 2 h lang bei 5 bis 40°C gerührt oder geschüttelt. Danach werden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und Kupferammoniumhydroxid zu entfernen. Anschließend wird das Enzym einer 0,1- bis 20%igen, am besten 0,1- bis 8%igen wäßrigen oder gepufferten Suspension der vorbehandelten Hefezellen zugesetzt, und das Gemisch wird bei 15 bis 40⁰C so lange gehalten, bis die Hefezellwände aufgelöst werden, beispielsweise 0.5 bis 5 h lang unter Rühren. Danach lassen sich selbst Hefe/ellwände, die von dem Enzym allein kaum aufgelöst werden, sehr leicht auflösen.

Das Ausmaß der Hefezellwandauilösung wird wie folgt abgeschätzt: 1 ml wäßrige Hefesuspension (20 mg Trockensubstanz/ml), 5 ml Puffer (wenn dem Umsetzungsgemisch ein anorganisches Salz zugesetzt wird, wird ein I.ömolarer Puffer aus einem anorganischen Salz verwendet), 1 ml Natriumsulfitlösung (wenn Natriumsulfit aus dem Umsetzungsgemisch fortgelassen wird, wird anstelle davon Wasser verwendet), 1 ml iEnzymlösung und 2 ml Wasser werden miteinander vermischt und 2 h unter Rühren bei 2"> C gehalten. Das I Imsetzungsgemisch wird zehnfach mit Wasser verdünnt, und von der verdünnten Suspension wird die optische Dichte bei 800 Nanometer bestimmt. In einem Vergleichsgemisch wird die Lnzymlösung des oben angegebenen Umsetzungssystems durch 1 ml Wasser ersetzt. Die prozentuale Erniedrigung der optischen Dichte, die durch die Auflösung der Hefe/ellwände verursacht wird, wird gemäß der folgenden Gleichung ermittelt:

% Erniedrigung der optischen Dichte =

Opt. Dichte der Vergleichslösung - Opt. Dichte des Umsetzungsgemisches Optische Dichte der Vergleichslösung χ 100

Nach vollständiger Auflösung der Zellwände wird im allgemeinen wegen der Anwesenheit von Zelltrümmern eine Verringerung der optischen Dichte von lediglich etwa 70% beobachtet.

Beispiel 1

Zellen von im Handel erhältlicher Bäckerhefe wurden mit Hilfe des Hefezellwände auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus unter Verwendung eines Reaktionssystems mit Natriumsulfit (Endkonzentration 0.1 molar) aufgelöst. Es wurde eine Enzymlösung mit 20,8 Einheiten/ml verwendet. In dem Natriumsulfit enthallenden Reaktionssystem betrug das Ausmaß der Hefezellwandauflösung 42,6%, während nur 4,0% erzielt wurden, wenn das Natriumsulfit weggelassen wurde. Somit wurde das Ausmaß der Hefezellwandauflösung durch den Zusatz von Natriumsulfit auf das Zehnfache gesteigert.

Beispiel 2

Zellen von handelsüblicher Bäckerhefe wurden in einer Konzentration von 1% in 0,1 molarer Natriumsulfitlösung suspendiert und das ganze bei Raumtemperatur 30 min gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit zu entfernen. Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung dieser Hefezellen wurde unter Verwendung der Enzymlösung gemäß Beispiel 1 bestimmt. Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung der behandelten Hefezellen betrug 13,1 %. während das der nicht behandelten Zellen 4.0% betrug.

Beispiel 3

Das Ausmaß der Zellwandauflösung von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe wurde unter Verwendung dos Hefezellwand auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus unter den in Tabelle 1 dargestellten verschiedenen Bedingungen bestimmt. Es wurde eine Enzymlösung mit 4,2 Einheiten je Milliliter verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengestellt. Dabei bedeuten die Symbole + und - in der Spalte »Reaktionssystem« den Zusatz bzw. die Weglassung des in der Spaltenüberschrift angegebenen Reagenzes.

Tabelle 1
Reaktionssystem

Kaliumsulfit
(0.1-m)

Kaliumchlorid
(0.8-m)

Ausmaß der Hefezellwand-Auflösung

2,2%

+ - 12,4%

+ 6,5%

+ + 52,1 %

Mit dem Reaktionssystem, das Kaliumsulfit und Kaliumchlorid enthielt, betrug das Ausmaß der Hefezellwandauflösung ungefähr das 25fache von dem, das mit einem Reaktionssystem. d.is lediglich d;is ' ii/.ym !■nthielt. erzielt vwirde.

Beispiel 4

Das Ausmaß der Auflösung der Zellwände verschiedener, in Tabelle U angeführter Hefestämme wurde unter Verwendung der in Beispiel 3 beschriebenen Enzymlösung mit Natriumsulfit (Endkonzentration 0,1 molar) und Natriumchlorid (Endkonzentration 0,8molar) im Reaktionssystem bestimmt. Jede Hefezellart wurde nach viertätiger Kultivierung bei 30^cC abgeerntet. Saccharomyces cerevisiae und Saccharomyces carlsbergensis wurden in einem Medium aus Malzextrakt, Candida lipolytica in einem Medium aus normalem Paraffin und Kloeckera japonicum in einem Medium aus Methanol kultiviert. Die Ergebnisse sind in Tabelle 11 zusammengestellt.

Tabelle Il	Ausmaß der	Hefezellwand
25 Hefestamm	Auflösung
	System mit	System ohne
	Na₂SOj	Na:SOi
	und NaCI	und NaCI
	85,8%	4.2%
³⁰ Saccharomyces cerevisiae	80,1%	10.4%
Saccharomyces
carlsbergensis	81,5%	13.0%
Candida lipolytica	81,4%	6.6%
,, Kloeckera japonicum

Aus der Tabelle ergibt sich, daß das Reaktionssystem

mit Natriumsulfit und Natriumchlorid zu einem Ausmaß an Hefezellwandauflösung führte, das gegenüber dem System, das die genannten Salze nicht enthielt.

außerordentlich erhöht war.

Beispiel 5

Das Ausmaß an Zellwandauflösung von handelsüblieher Bäckerhefe wurde mit dem Schneckenenzym und mit Natriumsulfit (Endkonzentration 0,1 molar) und Kaliumchlorid (Endkonzentration 0,8molar) im Reaktionssystem bestimmt. Die Enzymlösung war eine zweifach verdünnte Lösung aus Schneckendarmsafi. so Unter Verwendung von Natriumsulfit und Kaliumchlorid im Reaktionssystem wurde ein Ausmaß an Hefezellwandauflösung von 22,8% erzielt, wohingegen die Hefezellwände in einem Reaktionssystem ohne die beiden Salze nicht aufgelöst wurden.
55

Beispiel 6

Zellen von handelsüblicher Bäckerhefe wurden in einer Konzentration von 1% in 0.1 molarer Natriumsulfat fitlösung suspendiert und das ganze 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit zu entfernen, und mit Hilfe des Hcfezellwände auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus mit oder f>5 ohne Natriumchlorid (Endkonz.entration O.Smolar) aufgelost. Es wurde eine Enzymiösung mit 4.2 Einheiten je mi verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt.

Tabelle 111	System	Ausmaß der Zellwand- Auflösung
Hefezellen	mit NaCl ohne NaCl mit NaCI ohne NaCl	6,5% 2.2% 43,5% 7,2%
Unbehandelte Hefe Behandelte Hefe

Das Ausmaß an Hefezellwandauflösung wurde somit durch die Vorbehandlung der Hefezellen mit Natriumsulfit beträchtlich erhöht.

Beispiel 7

Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung bei handelsüblicher Bäckerhefe wurde unter Verwendung des Hefezellwände lösenden Enzyms von Arthrobacter luteus sowie von Natriumsulfit (Endkonzentration 0.1 molar) und den in Tabelle IV angeführten anorganischen Salzen (Endkonzentration 0,8molar mit der Ausnahme von Kaliumsulfit, dessen Endkonzentration 0,6molar war) ermittelt. Es wurde eine Enzymlösung mit 4.2 Einheiten je ml verwendet. Die Ergebnisse sind ebenfalls in Tabelle IV zusammengefaßt.

Tabelle IV

Anorganisches Salz

Ausmaß der Hefezellwand-Auflösung

Kaliumchlorid

Kaliumsulfat

Natriumchlorid

Ammoniumchlorid

Calciumchlorid

Ammoniumsulfat

Magnesiumsulfat

Natriumnitrat

N atriumcarbonat

Kein Zusatz

52,2%
36,2%
50,6%
45.1%
22.6%
46,8%
42.4%
303%
22,8%
12,2%

Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung bei handelsüblicher Bäckerhefe wurde durch Zusatz jedes der angegebenen anorganischen Salze außerordentlich erhöhl.

Beispiel 8

Eine l%ige Suspension von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe in 0,1 molarer Natriumsulfitlösung, die 0.0025molar an Kupfer(H)-sulfat war, wurde 30 min lang bei Raumtemperatur gerührt Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und das Kupfersulfat zu entfernen, und mit Hilfe des Hefezellwände auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus aufgelöst Es wurde eine Enzymlösung mit 42 Einheiten/ml verwendet Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung der behandelten Zellen betrug 263%. während das der nicht behandelten Hefezellen 2L2% betrug.

Beispiel 9

Eine l%;ge Suspension von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe in einer 0,1 molaren Natriumsulfitlösung. die

Kupfer(II) ammonium-hydroxid in den in Tabelle V angegebenen Konzentrationen enthielt, wurde 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und das Kupfer(Il)-ammonium-hydroxid zu entfernen und unter Verwendung der in Beispiel 8 angegebenen Enzymlösung aufgelöst. Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengefaßt.

Tabelle V	Ausmaß der Hefe zellwand-Auflösung
Konzentratiion von Kupfer(II)-iimmonium-hydroxid	7,2% 19,0% 54,4% 79,5% 67.0%
0-m ' 0,0005-m 0,001-m 0,0025-m 0,005-m

Die mit Natriumsulfit und Kupfer(ll)-ammonium-riydroxid behandelten Hefezellen wurden durch das Enzym äußerst leicht aufgelöst.

Beispiel 10

Zellen von verschiedenen Hefestämmen wurden in l%iger Konzentration in 0,1 molarer Kaliumsulfitlösung, die 0,005 m an Kupfer(II)-ammonium-hydroxid war. suspendiert und das ganze 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Kaliumsulfit und Kupfer(ll)-ammonium-hydroxid zu entfernen, und mit der in Beispiel 8 beschriebenen Enzymlösung aufgelöst. Die Ergebnisse sind in Tabelle Vl zusammengefaßt.

laDeile Vl	Ausmaß der	Hefezellwand
Hefestamm	Auflösung
	behandelte	unbehandelte
	Zellen	Zellen
	873%	4,2%
Saccharomyces cerevisiae	85.0%	10,4%
Saccharomyces
carlsber.gensis	863%	13,0%
Candida lipolytica	853%	6.6%
Kloeckera japonicum

Das Ausmaß der Zellwandauflösung der behandelten Zellen sämtlicher Hefestämme war außerordentlich erhöht

Beispiel U

Eine l%ige Suspension von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe in 0,1 -m-Natriumsulfitlösung, die 0,003 m an Kupfer(U)-ammonium-hydroxid war, wurde 1 h lang bei Raumtemperatur gerührt Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und Kupfer(Il)-ammonium-hvdroxid zu entfernen, und to mit Hilfe des Schneckenenzyms aufgelöst Als Enzymlösung wurde eine zweifach verdünnte Lösung von Schneckendarmsaft verwendet Das Ausmaß der Zellwandauflösung der behandelten Hefezelten betrug 10.2%. während nichtbehandehe Zellen von dem h5 Schneckenenzym nicht aufgelöst wurden.

Claims

•i Patentansprüche:

1. Verfahren zum Auflösen von Hefezellwänden durch Behandeln von Hefen der Gattungen Saccharomyces. Endomycopsis, Saccharomycodes, Nematospora, Candida, Torulopsis, Brettanomyces, Schizosaccharomyces oder Kloeckera in einem wäßrigen Medium mit einem Hefezellwände auflösenden Enzym, dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung in Gegenwart von Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Calcium- oder Ammoniumsulfit durchführt oder man die Behandlung durchführt, nachdem man die Hefe einer Vorbehandlung in einem das genannte Sulfit enthaltenden wäßrigen Medium unterzogen hat, wobei man die Hefe zur Vorbehandlung mindestens 0,2 Stunden in dem wäßrigen, das genannte Sulfit enthaltenden Medium suspendiert und wobei das genannte Sulfit in 0.01-bis l.Omolarer Konzentration in der Lösung, in der die Hefezellen suspendiert werden, eingesetzt wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet daß man die Behandlung in zusätzlicher Gegenwart von Kaliumchlorid. Natriumchlorid, Kaliumsulfat. Natriumnitrat. Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Ammoniumsulfat. Ammoniumchlorid. Calciumchlorid. Magnesiumsulfat oder Natriumphosphat oder einer Mischung dieser anorganischen Salze durchführt, wobei das genannte anorganische Salz oder die Mischung in 0.4- bis 2,0molarer Konzentration in der Lösung, in der die Hefezellen suspendiert werden, eingesetzt wird.

3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die Vorbehandlung in d^m wäßrigen, das genannte Sulfit enthaltenden Medium in zusätzlicher Gegenwart von Kupfer(II)-sulfat. Kuper(ll)-nitrat oder Kupfer(ll)-ammoniumhydroxid durchführt, wobei das genannte Cupriion in 0,0001- bis 0,02molarer Konzentration in der Lösung, in der die Hefezellen suspendiert werden, eingesetzt wird.