DE1518382C3 - Verfahren zur Herstellung von L Alanin - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von L AlaninInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung
von L-Alanin durch enzymatische Decarboxylierung von L-Asparaginsäure.
L-Alanin kann bekanntlich mit Hilfe von Mikroorganismen erhalten werden, die diese Aminosäure durch
Gärung erzeugen. Zum Zwecke einer gewerbsmäßigen Gewinnung ist dieses Verfahren aber nicht wirtschaftlich
genug.
Wie beschrieben wurde, besitzt L-Asparaginsäure-j9-decarboxylase
(L-Aspartat-4-carboxy-lyase, EC 4.1.1.12) die Fähigkeit, die Decarboxylierung von L-Asparaginsäure
in der /3-Stellung zu katalysieren, was zur Bildung
von L-Alanin führt (Biokhimiya 14, [1949] 44). Bestimmte Stämme der Art Pseudomonas und Achromobacter
erzeugen diese Decarboxylase (Journal of Bacteriology 80 [1960], 830; Biochem. J. 88 [1963], 578).
Die Aktivität der von dem Pseudomonas-Stamm erzeugten Decarboxylase war jedoch so gering, daß sie
den Wert von 60 für Qco2 bei 35° C nicht überschritt
(Qco2 = ul CO2 erzeugt/Stunde/mg Protein). Außerdem
bildet der eingesetzte Stamm der Art Pseudomonas, Pseudomonas reptilivora, gleichzeitig noch ein anderes
Enzym, durch das L-Alanin decarboxyliert wird. Der eingesetzte Achromobacter-Stamm, Achromobacter
d-15, war wegen seines schlechten Wachstums für die industrielle Gewinnung von L-Alanin schwer zugänglich.
Es wurde nunmehr gefunden, daß sich bei der Gärung von Pseudomonas dacunhae in Gegenwart einer
Dicarbonsäure eine erheblich höhere Aktivität an L-Asparaginsäure-ß-decarboxylase in den Zellen ansammelt.
So erreicht beispielsweise die aus der Gärbrühe von Pseudomonas dacunhae des Stammes
IAM 1152 gewonnene L-Asparaginsäure-jS-decarboxylase-Aktivität
bei 30° C einen QCo2-Wert von 1824.
Außerdem werden keine anderen störenden Enzyme erzeugt, die eine Zersetzung oder Racemisierung von
L-Alanin bewirken könnten.
Erfindungsgemäß wird L-Alanin in hoher Ausbeute durch Gärung von Pseudomonas dacunhae in einem
wäßrigen Nährmedium, das eine Dicarbonsäure als wichtigste Kohlenstoffquelle sowie andere geeignete
Nährstoffe enthält, und Umsetzung der erhaltenen Gärbrühe mit L-Asparaginsäure gewonnen.
Ein für das erfindungsgemäße Verfahren geeignetes Nährmedium enthält etwa 0,5 bis 2% Dicarbonsäuren
wie Fumarsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure oder deren Salze als einzige oder hauptsächliche Kohlenstoffquelle.
Als Stickstoffquelle können anorganische Ammoniumsalze, z. B. das Chlorid, Phosphat oder Sulfat
zugesetzt werden. Bessere Ergebnisse werden aber mit den Ammoniumsalzen der obigen organischen Säuren
erzielt. Außer diesen Nährstoffen können 1 bis 3% organische Stickstofflieferanten wie Maiseinweichwasser,
Pepton, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Caseinhydrolysat oder Harnstoff und geringe Mengen Mineralsalze
wie Kaliumphosphat, Magnesiumphosphat zu dem Nährmedium zugesetzt werden.
Die Bildung der L-Asparaginsäure-jS-decarboxylase
erreicht das Maximum, wenn das bakterielle Wachstum in ein Stadium zwischen dem Ende der logarithmischen
Phase und dem Anfang der stationären Phase tritt Die besten Bedingungen für die Enzymbildung sind gegeben,
wenn man die Gärung einen Tag lang unter aeroben Bedingungen bei einer Temperatur von 25 bis 3O0C und
vorzugsweise bei 30° C durchführt.
Nach der Gärung wird L-Asparaginsäure zu der Gärbrühe zugesetzt und das Gemisch genügend lange
bebrütet, um L-Asparaginsäure in L-Alanin umzuwandeln.
L-Asparaginsäure kann zu der Gärbrühe in einer Menge von mehr als 70 Prozent zugegeben werden. Da
die Löslichkeit der L-Asparaginsäure in Wasser weniger als 1 Prozent beträgt, liegt der größte Teil der
L-Asparaginsäure im Anfangsstadium in suspendierter Form in der Brühe vor und löst sich beim Fortschreiten
der Umsetzung langsam darin. Der pH-Wert des Reaktionsgemisches wird also durch die Pufferwirkung
der allmählich in Lösung gehenden L-Asparaginsäure bequem in dem für die enzymatische Umwandlung
günstigsten Bereich gehalten, der bei pH 4,5 bis 7, insbesondere 5 bis 6 liegt, wie durch einige Vorversuche
unschwer feststellbar ist.
Gewöhnlich kann die Decarboxylierung bei einer Bebrütung von 2 bis 4 Tagen und einer Temperatur von
30 bis 400C, vorzugsweise von 37° C, im wesentlichen zu
Ende geführt werden.
Bei dem obigen Decarboxylierungsverfahren kann die Gärbrühe durch eine wäßrige Suspension lebender
Zellen, die durch Filtration aus der Brühe isoliert wurden, oder durch Trockenzellen ersetzt werden. Es
kann auch ein zellfreier Extrakt verwendet werden, der nach gewöhnlichen Verfahren, wie z. B. durch Extraktion
nach Schallbehandlung oder durch Zerreiben der lebenden Zellen mit Quarzsand, gewonnene L-Asparaginsäure-j3-decarboxylase
enthält.
"Die Reaktionszeit der enzymatischen Decarboxylierung
kann auf etwa ein Drittel verkürzt werden, wenn etwa 0,005 bis 2% eines oberflächenaktiven Stoffes, wie
z. B. eines Fettsäureesters des Polyäthylenglycols oder
Polyäthylenglycolsorbitans, zu dem Reaktionsgemisch zugesetzt werden.
Das in dem Reaktionsgemisch erzeugte L-Alanin wird dann gereinigt durch Filtrieren des Gemisches,
Behandeln des Filtrats mit einem stark sauren Kationenaistauscherharz, wie beispielsweise einem
Sulfonsäureharz, und Konzentrieren der behandelten Lösung. Es können so mehr als 43 g reines L-Alanin in
kristalliner Form aus 100 ml des Reaktionsgemisches gewonnen werden. Eine so hohe Ausbeute wurde nach
den früheren Verfahren niemals erzielt.
Für die nachfolgenden Beispiele wurden jeweils 120 ml eines wäßrigen Nährmediums bereitet. Die in
Beispiel 1 bis 5 und 9 eingesetzten Nährmedien
enthielten die folgenden Bestandteile in %-Gewicht/ Volumen:
| Bestandteil | I | II | HI |
| NH4-Fumarat | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Na-Fumarat | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
| Maiseinweichwasser | 2,2 | 0,55 | — |
| KH2PO4 | 0,05 | 0,05 | 0,05 |
| MgSO4 · 7 H2O | 0,01 | 0,01 | 0,01 |
| Pepton | — | 1,8 | 0,9 |
| Caseinhydrolysat | — | — | 0,2 |
| Beispiel 1 |
120 ml des Nährmediums I wurden auf einen
pH-Wert von 7,0 eingestellt und in einen 500-ml-Schüttelkolben
gegeben. Nach der Sterilisierung wurde Pseudomonas dacunhae IAM 1152 auf das Nährmedium
geimpft und dieses 26 Stunden unter Schütteln (140 Hin- und Herbewegungen pro Minute) bei 300C bebrütet. Zu
der Gärbrühe wurden 48 g L-Asparaginsäure zugesetzt und die Mischung bei 37° C bebrütet. Innerhalb von
96 Stunden konnte eine 100%ige Umwandlung in L-Alanin erreicht werden. Nach Einstellen des pH-Wertes
auf 4,0 wurde das bebrütete Gemisch zum Sieden erhitzt und filtriert Das erhaltene Filtrat wurde durch
eine Säule mit einem Kationenaustauscherharz vom Sulfonsäuretyp geschickt. Nach dem Eluieren mit
wäßrigem Ammoniak wurde das Eluat eingeengt und lieferte 29,2 g (91 %) L-Alanin in kristalliner Form
[α]!?+14,3ο (C=4,in6 N-HCl)
Pseudomonas dacunhae IAM 1152 wurde auf 120 ml des wäßrigen Nährmediums II (pH 7,0) geimpft. Dann
wurde 26 Stunden bei 300C unter Schütteln bebrütet. Zu
der Gärbrühe wurden 48 g L-Asparaginsäure zugesetzt, und das Gemisch wurde 72 Stunden bei 37° C bebrütet.
Das bebrütete Gemisch gemäß diesem Beispiel und den Beispielen 3 bis 5 wurde wie in Beispiel 1 behandelt. In
allen Fällen wurde L-Alanin in kristalliner Form mit folgendem Drehwert erhalten:
[a] I5+ 14,2°(C = 4, in 6 N-HCl)
B e i s ρ i e I 3
Pseudomonas dacunhae IAM 1152 wurde unter den
gleichen Bedingungen wie in Beispiel 2 der Gärung unterworfen. Zu der Gärbrühe wurden 0,1% Polyäthylenglycol-sorbitan-monolaurat
und 48 g L-Asparaginsäure zugesetzt, und das Gemisch wurde 24 Stunden bei 37°C bebrütet.
Pseudomonas dacunhae IAM 1152 wurde auf 120 ml
des wäßrigen Nährmediums III (pH 5,5) geimpft. Dann wurde 20 Stunden bei 300C unter Schütteln bebrütet. Zu
der Gärbrühe wurden 84 g L-Asparaginsäure zugesetzt, und das Gemisch wurde 72 Stunden bei 37° C bebrütet.
Ausbeute an L-Alanin g
Prozent der Theorie
2 29,5 92
3 29,1 91
4 51,2 91 ,0 5 51,5 92
Es wurden 120 ml eines wäßrigen Nährmediums hergestellt, das die folgenden Bestandteile enthielt:
Natriumsuccinat
Caseinhydrolysat
Pepton
KH2PO4
MgSO4 · 7 H2O
Caseinhydrolysat
Pepton
KH2PO4
MgSO4 · 7 H2O
l,2%(Gew./Vol.) 0,2% (GewyVol.) 0,9% (GewV Vol.)
0,05% (GewVVol.) 0,01% (Gew./Vol.)
Pseudomonas dacunhae IAM 1152 wurde unter den Bedingungen des Beispiels 4 der Gärung unterworfen.
Zu der Gärbrühe wurden 0,1% Polyäthylenglycol-sorbitan-monolaurat
und 84 g L-Asparaginsäure zugesetzt, und das Gemisch wurde 24 Stunden bei 37°C bebrütet.
Dieses Nährmedium wurde auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und in einen 500 ml-Kolben überführt.
Nach der Sterilisierung wurde eine Impfkultur aus Pseudomonas dacunhae IAM 1152 auf das Nährmedium
aufgeimpft und dieses bei 300C 26 Stunden unter
Schütteln (140 Hin- und Herbewegungen pro Minute) bebrütet. Man erhielt 120 ml einer Gärbrühe von
Pseudomonas dacunhae IAM 1152.
30 ml der Gärbrühe wurden zentrifugiert. Die auf diese Weise gesammelten Mikrobenzellen wurden mit
einer physiologischen Kochsalzlösung gewaschen. Dann wurden die Mikrobenzellen in Wasser suspendiert und
durch Ultraschall (10 kH) während einer Zeitspanne von 10 Minuten zerstört. Die wäßrige Suspension der
Mikrobenzellen wurde zur Entfernung von unlöslichen Materialien zentrifugiert. Dabei erhielt man eine
überstehende Lösung, die L-Asparaginsäure-jS-decarboxylase
enthielt. 0,5 ml der überstehenden Lösung wurden einer Mischung aus 2 ml einer wäßrigen 10 mM
L-Asparaginsäurelösung und 1 ml einer wäßrigen 1 M Acetatpufferlösung (pH 5,5) zugesetzt. Die Mischung
wurde bei 300C während einer Zeitspanne von
10 Minuten inkubiert. Mit Hilfe eines Warburg-Manometers wurde die Menge an Kohlendioxid bestimmt, die
durch die Mischung erzeugt wurde. Daraus läßt sich die L-Asparaginsäure-jS-decarboxylase-Aktivität berechnen.
Die erhaltenen Werte sind in Tabelle II aufgeführt.
48 g L-Asparaginsäure wurden zu 120 ml der vorstehend erhaltenen Gärbrühe zugesetzt, und die
Mischung bei 37°C 72 Stunden bebrütet. Die Menge des darin angereicherten L-Alanins wurde durch eine
übliche mikrobiologische Untersuchung mit Leuconostoc citrovorum 8081 bestimmt. Der Prozentsatz der
Umwandlung von L-Asparaginsäure in L-Alanin wird daraus berechnet. Dann wurde die Reaktionsmischung
auf einen pH-Wert von 4,0 eingestellt, zum Sieden erhitzt und filtriert. Das auf diese Weise erhaltene
Filtrat wurde durch eine mit einem stark sauren Kationenaustauscher gefüllte Säule geschickt. Nach
dem Eluieren mit wäßrigem Ammoniak wurde das Eluat zur Trockne eingedampft. Dabei erhielt man L-Alanin in
kristalliner Form in den in Tabelle II aufgeführten Ausbeuten.
Spezifische Drehung)«]?+14,3° (C=4,6 N-HCl)
Es wurden 120 ml eines wäßrigen Nährmediums hergestellt, das die folgenden Bestandteile enthielt:
Natriummalat
Caseinhydrolysat
Pepton
KH2PO4
MgSO4 · 7 H2O
Caseinhydrolysat
Pepton
KH2PO4
MgSO4 · 7 H2O
1,2o/o (GewWol.)
0,2% (Gew/Vol.)
0,9%(Gew7Vol.)
0,05%(Gew7Vol.)
0,01% (Gew/Vol.)
0,2% (Gew/Vol.)
0,9%(Gew7Vol.)
0,05%(Gew7Vol.)
0,01% (Gew/Vol.)
Es wurden 120 ml eines wäßrigen Nährmediums hergestellt, das die folgenden Bestandteile enthielt:
IO
Dieses Nährmedium wurde gemäß Beispiel 6 bebrütet. Man erhielt 120 ml einer Gärbrühe von Pseudomonas
dacunhae IAM 1152. Bei der wie in Beispiel 6 durchgeführten Bestimmung der L-Asparaginsäure-/?-
decarboxylase-Aktivität wurden die in Tabelle II aufgeführten Werte erhalten.
48 g L-Asparaginsäure wurden zu 120 ml der vorstehend erhaltenen Gärbrühe gegeben und wie in
Beispiel 6 angegeben weitergearbeitet. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt.
Spezifische Drehung [α] 2 D 5+14,2° (C=4,6 N-HCl)
Tabelle II
Tabelle II
Mit Natriumhydroxid
neutralisierte Dicarbonsäure
Caseinhydrolysat
Pepton
KH2PO4
MgSO4 · 7 H2O
1,2% (Gew/Vol.)
0,2% (Gew/Vol.)
0,9% (GewV Vol.)
0,05% (Gew/Vol.)
0,01%(Gew./Vol.)
0,2% (Gew/Vol.)
0,9% (GewV Vol.)
0,05% (Gew/Vol.)
0,01%(Gew./Vol.)
Dieses Nährmedium wurde gemäß Beispiel 6 in der in Tabelle II angegebenen Zeitspanne bebrütet. Man
erhielt 120 ml einer Gärbrühe von Pseudomonas dacunhae IAM 1152.
Bei der wie in Beispiel 6 durchgeführten Bestimmung der L-Asparaginsäure-ß-decarboxylase-Aktivität wurden
die in Tabelle II aufgeführten Werte erhalten.
Die jeweilige, in Tabelle II angegebene Menge L-Asparaginsäure wurde zu 120 ml der vorstehend
erhaltenen Gärbrühe gegeben und wie in Beispiel 6 angegeben weitergearbeitet. Die erhaltenen Ergebnisse
sind in Tabelle II zusammengefaßt.
Bsp. Dicarbonsäuren
Zeitdauer des
Züchtens
Züchtens
(h)
L-Asparaginsäure-
0-decarboxylase-
Aktivität
(A)
(B) Zugesetzte
L-Asparagin-
säure
(g)
(C)
| 6 | Bernsteinsäure | 26 | 3400 | 1744 | 48 | 32,0 | 99,6 | 29,7 | 92,4 |
| 7 | Apfelsäure | 26 | 4126 | 1852 | 48 | 31,5 | 98,0 | 29,3 | 91,2 |
| 8a | Oxalsäure | 48 | 1384 | 1704 | 12 | 7,9 | 98,4 | 7,2 | 89,7 |
| 8b | Maleinsäure ' | 32 | 3024 | 1805 | 24 | 15,8 | 98,4 | Γ-.6 | 90,9 |
| 8c | Adipinsäure | 26 | 4032 | 1711 | 48 | 32,0 | 99,7 | 29,1 | 92,3 |
| 8d | Weinsäure | 48 | 3871 | 1878 | 48 | 31,9 | 99,3 | 29,4 | 91,6 |
Bemerkungen:
(A): Qco /ml Gärbrühe (d. h. μΐ CCh/h/ml Gärbrühe).
Qco /mg Protein (d. h. μΐ CO2/h/mg Protein in der Gärbrühe).
Menge (g) an in der Reaktionsmischung angereichertem L-Alanin.
Prozentsatz der Umwandlung von L-Asparaginsäure in L-Alanin.
Ausbeute (g) an kristallinem L-Alanin.
Ausbeute an L-Alanin in Prozent der Theorie, bezogen auf eingesetzte L-Asparaginsäure.
Beispiel 9 ..·.
Es wurden 120 ml eines wäßrigen Nährmediums hergestellt, das die gleiche Zusammensetzung wie in
Beispiel 8 hatte. Das Medium wurde auf den in der nachfolgenden Tabelle III angegebenen pH-Wert eingestellt.
Das Nährmedium wurde gemäß Beispiel 6 in der in Tabelle III angegebenen Zeitspanne mit Pseudomonas
dacunhae IAM 1152 bebrütet. Man erhielt 120 ml Gärbrühe.
Bei der wie in Beispiel 6 durchgeführten Bestimmung
der L-Asparaginsäure /i-decarboxylase-Aktivität, wobei
jedoch der zugesetzte 1 M Acetatpuffer pH 5,3 hatte, wurden die in Tabelle III aufgeführten Werte erhalten.
Die jeweilige, in Tabelle HI angegebene Menge L-Asparaginsäure wurde zu 120 ml der vorstehend erhaltenen Gärbrühe gegeben und wie in Beispiel 6 angegeben weitergearbeitet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt (als stark saurer Kationenaustauscher wurde ein solcher aus einem vernetzten Polystyrolgerüst mit SOjH-Gruppen benutzt).
Die jeweilige, in Tabelle HI angegebene Menge L-Asparaginsäure wurde zu 120 ml der vorstehend erhaltenen Gärbrühe gegeben und wie in Beispiel 6 angegeben weitergearbeitet. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt (als stark saurer Kationenaustauscher wurde ein solcher aus einem vernetzten Polystyrolgerüst mit SOjH-Gruppen benutzt).
Bsp. Dicarbonsäuren
pH
Zeitdauer
des Züchtens
des Züchtens
(h)
L-Asparaginsäure-
/?-decarboxylase-
Aktivität
(A)
(B) Zugesetzte (C)
L-Asparaginsäure
L-Asparaginsäure
(g)
(D)
(E)
9a Phthalsäure
9b Isophthalsäure
9c Terephthalsäure
9d Dipicolinsäurc
Legende siehe Tabelle II.
9b Isophthalsäure
9c Terephthalsäure
9d Dipicolinsäurc
Legende siehe Tabelle II.
| 8,0 | 48 | 3850 | 1802 | 48 | 32,0 | 99,0 | 29,5 | 91,0 |
| 8,2 | 64 | 1220 | 1007 | 12 | 8,0 | 99,7 | 7,3 | 90,9 |
| 8.2 | 48 | 2630 | 1566 | 12 | 7,9 | 98,4 | 7,2 | 89,7 |
| 7,2 | 48 | 3055 | 1710 | 24 | 15,9 | 99,0 | 14,5 | 90,3 |
Beispiel 10
Zum Nachweis, daß die übrigen Stämme der Art Pseudomonas dacunhae zur Durchführung des erfindungsgemäßen
Verfahrens ebenfalls geeignet sind, wurden Versuche nach dem in Beispiel 4 beschriebenen
Verfahren mit Kulturen der Stämme IAM 1048, IAM 1089, IAM 1123, IAM 1152, IAM 1176 und IAM 1199
durchgeführt, wobei jeweils eine Gärbrühe hergestellt wurde, welche die in Tabelle IV angegebene hohe
j3-Decarboxylase-Aktivität aufwies. Bei der Durchführung dieser Versuche wurde bei sämtlichen getesteten
Stämmen keine Bildung eines Enzyms beobachtet, das gleichzeitig das gebildete L-AIanin zersetzt.
Die vorstehend genannten Stämme wurden jeweils in 120 ml des Nährmediums III eingeimpft.
Das wäßrige Nährmedium hatte einen pH-Wert von 5,5. Es wurde 20 Stunden lang bei 30° C unter Schütteln
(140 Hin- und Herbewegungen pro Minute) bebrütet.
Bei der wie in Beispiel 6 angegeben durchgeführten Bestimmung der L-Asparaginsäure-jS-decarboxylase-Aktivität
bei 30° C wurden die in der Tabelle IV aufgeführten Werte erhalten.
Eine bestimmte Menge L-Asparaginsäure wurde zu
ίο 120 ml der erhaltenen Gärbrühe zugesetzt, worauf die
Mischung bei 37°C und einem pH-Wert von 5 bis 6 während einer Zeitspanne von 24 oder 48 Stunden
inkubiert und wie in Beispiel 6 angegeben aufgearbeitet wurde. Die dabei erhaltenen Ergebnisse sind in
Tabelle IV zusammengefaßt.
| Tabelle IV | L-Asparaginsäure- jS-decarboxylase- Aktivität (A) (B) |
380 · | Zugesetzte L-Asparagin säure (g) |
Zeitdauer der Decarb oxylierung (h) |
(C) | (D) | (E) | (F) |
| Pseudomonas dacunhae- Stamm |
1292 | 420 | 24 36 48 |
24 24 48 |
16,1 15,6 32,1 |
100 64,8 99,9 |
14,8 29,8 |
92 93 |
| IAM 1048 | 1386 | 1445 | 24 48 |
24 24 |
16,0 15,7 |
99,6 48,9 |
14,7 | 92 |
| IAM 1089 | 4191 | 1824 | 60 | 24 | 40,9 | 100 | 37,2 | 93 |
| IAM 1123 | 5654 | 157 | 60 84 |
24 24 |
40,2 56,4 |
100 100 |
37,0 52,0 |
92 93 |
| IAM 1152 | 550 | 521 | 12 | 24 | 8,0 | 99,6 | 7,3 | 91 |
| IAM 1176 | 1615 | 24 | 24 | 16,1 | 100 | t4,6 | 91 | |
| IAM 1199 | ||||||||
Legende siehe Tabelle 11.
Aus den vorstehenden Ergebnissen geht hervor, daß mit sämtlichen Stämmen von Pseudomonas dacunhae eine
gegenüber dem Stand der Technik erhöhte L-Asparaginsäure-jS-decarboxylase-Aktivität erzielt werden konnte.
709 630/16
Claims (2)
1. Verfahren zur Herstellung von L-Alanin durch enzymatische Decarboxylierung von L-Asparaginsäure
mit Hilfe einer durch Gärung eines L-Asparaginsäure-]9-decarboxylase-erzeugenden
Mikroorganismus in einem Nährmedium erhaltenen Gärbrühe oder einer gereinigten Zubereitung derselben,
dadurch gekennzeichnet, daß man in dem Nährmedium, welches eine Dicarbonsäure oder ein
Salz davon enthält, einen Stamm von Pseudomonas dacunhae züchtet
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man die enzymatische Decarboxylierung
in Gegenwart eines oberflächenaktiven Mittels durchführt
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6631864 | 1964-11-24 | ||
| DET0029829 | 1965-11-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE1518382C3 true DE1518382C3 (de) | 1977-07-28 |
Family
ID=
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