DE2417425A1

DE2417425A1 - Aufloesung von hefezellwaenden

Info

Publication number: DE2417425A1
Application number: DE2417425A
Authority: DE
Inventors: Kumpei Kitamura; Eiichi Kokubo; Yoshiro Kuroiwa; Yasushi Yamamoto
Original assignee: Kirin Brewery Co Ltd
Current assignee: Kirin Brewery Co Ltd
Priority date: 1973-04-11
Filing date: 1974-04-10
Publication date: 1974-11-07
Also published as: DE2417425B2; FR2225515A1; FR2225515B1; GB1423949A; US3917510A

Description

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7850

KIRIN BEER KABUSHIKI KAISHA (auch bekannt unter dem Namen Kirin Brewery Co., Ltd.) Tokio, Japan

Auflösung von Hefezeilwänden

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Auflösung (lyse) von Hefezellwänden mit Hilfe von Hefezellwände auflösenden Enzymen.

Die verschiedensten Hefearten werden zu Nahrungszwecken für Mensch und Tier sowie industrielle Zwecke hergestellt.

Da man annimmt, daß die Zugänglichkeit von Hefezelleinschlüssen durch Entfernung der Hefezellwände verbessert werden kann, sind bereits verschiedene "Verfahren zur Entfernung der Hefezellwände vorgeschlagen worden. Unter ihnen wird die milde enzymatische Behandlung als vorteilhafter angesehen, als drastische physikalische und chemische Behandlungsarten, beispielsweise mit Hitze, konzentrierten Säuren oder konzentrierten Alkalien, da bei der erstgenannten Methode die Hefezelleinschlüsse vor Zerstörung oder Denaturierung bewahrt vrer den.

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Als enzymatisches Verfahren zur Auflösung von Hefe ζ eilwänden ist eine Methode unter Verwendung von Schneckenverdauungssaft bekannt, der aus den Eingeweiden von Helix pomatia gewonnen wird. Außer dem Schneckenenzym-Verfahren sind viele Methoden unter Verwendung verschiedener von Mikroorganismen stammender Enzyme bekannt. Jedoch variiert das Ausmaß der Auflösung lebensfähiger Hefezellen durch Anwendung der genannten Verfahren sehr häufig mit den Kulturbedingungen der Hefe. Besonders werden Zellwände von Hefesorten, die aerob bis zu einer stationären Wachstumsphase gezüchtet werden, von den oben erwähnten Enzymen kaum aufgelöst. Beispielsweise kann das Schneckenenzym nicht die Zellwände handelsüblicher Bäckerhefe, deren Kulturen unter heftiger Belüftung hergestellt werden, nicht auflösen. Zur wirksamen Auflösung derartiger Hefezellwänden hat man schon Thioverbindungen, wie Mercaptoäthanol, dem Umsetzungsgemisch mit dem Enzym zugesetzt oder Hefezellen mit Hilfe dieser Thioverbindungen vorbehandelt. Diese Verfahren sind jedoch aufgrund ihrer Kostspieligkeit und des dabei entstehenden schlechten Geruches großtechnischer Anwendung nicht fähig.

Da Hefeorganismen, einschließlich solcher Stämme, die Kohlenwasserstoffe verwerten können, in der Nahrungs- und Futtermittelindustrie in großtechnischem Maßstab hergestellt werden und die Industriezweige zur Herstellung von Hefen in naher Zukunft wahrscheinlich wegen der zu überwindenden Nahrungsmittelengpässe eine rasche Entwicklung erfahren werden, wird ein Verfahren zur Auflösung von Hefezellen durch Hefezellwände auflösende Enzyme ohne Anwendung von Thioverbindungen mannigfache technische Vorteile bieten.

Ziel der Erfindung ist die Schaffung eines Verfahrens zum wirksamen Auflösen von Hefezellwänden einschließlich solcher, die von zur Auflösung von Hefe ζ eilwänden befähigten Enzymen nur schlecht aufgelöst werden.

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_ 3 —

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zum Auflösen von Hefezellwänden durch Behandeln von Hefe in einem wäßrigen Medium mit einem Hefezellwände auflösenden Enzym* das dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Behandlung unter dem Einfluß eines wasserlöslichen Sulfits als Beschleuniger für die Auflösung durchführt.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren kann die Hefe mit dem in Gegenwart eines wasserlöslichen Sulfits behandelt oder sie kann vor der Auflösung mit einem wasserlöslichen Sulfit vorbehandelt werden. Das wasserlösliche Sulfit, das für die Vorbehandlung verwendet wird, kann Kupferionen enthalten.

Das Sulfit kann zusammen mit einem anderen anorganischen Salz oder anderen anorganischen Salzen oder Kupferionen als Promotoren der Auflösung der Hefezellwände angewandt werden. Das erfindungsgemäße Verfahren kann somit in einem Medium, in dem die auflösenden Enzyme mit Sulfiten oder Sulfiten und anorganischen Salzen zusammen vorkommen, durchgeführt werden, oder die auflösenden Enzyme gemeinsam mit anorganischen Salzen oder ohne diese können nach einer Vorbehandlung der Hefezellen durch Sulfite oder Sulfite und Kupferionen eingesetzt werden.

Obwohl die Sulfite keine Thiogruppen enthalten, besitzen sie doch überraschenderweise die Fähigkeit, die Auflösung von Hefezellwänden durch entsprechende Enzyme zu beschleunigen. Weiterhin ist es überraschend, daß anorganische Salze, die nicht Sulfite sind, diese beschleunigende "Wirkung der Sulfite unterstützen, und ferner ist es überraschend, daß die Vorbehandlung von Hefezellen mit Sulfiten und Kupferionen Hefezellen sehr empfänglich für eine Behandlung mit ζellwandlösenden Enzymen macht.

Im folgenden wird eine in's Einzelne gehende Beschreibung der Srfindung vorgenommen:

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1. Hefestamme

Verwendbare Hefestämme sind die folgenden: Saccharomyces, Endomycopsis, Saccharomycodes, Nematospora, Candida, Torulopsis, Brettanomyces, Schizosaccharomyces und Kloeckera.

2. Hefezellwände lösende Enzyme

Für das erfindungsgemäße Verfahren können alle Arten von Hefezellwände lösenden Enzymen verwendet werden. Derartige Enzyme sind Gegenstand zahlreicher Veröffentlichungen und werden auch in Zukunft noch gefunden werden. Ein typisches Enzym unter ihnen ist das, das durch Arthrobacter luteus erzeugt wird.

3. Sulfite

Da die Auflösung von Hefezellwänden und die Vorbehandlung von Hefezellen normalerweise in wäßrigen Lösungen vorgenommen werden, müssen die erfindungsgemäß verwendeten Sulfite zu einem bestimmten Ausmaß in Wasser löslich sein. Hierfür geeignete Sulfite sind : Alkalisulfite, wie Natrium- und Kaliumsulfit, Erdalkalisulfite, wie Magnesium- und Calciumsulfit, und Ammoniumsulfit.

4. Anorganische Salze

Anorganische Salze, die dem Umsetzungsgemisch aus Hefezellen und Hefezellwände lösenden Enzymen zugesetzt werden können, sind: Alkali-, Erdalkali- und Ammoniumsalze anorganischer Säuren, wie beispielsweise von Schwefel-, Salpeter-, Kohlen- (einschließlich Bicarbonate) und Phosphorsäure. Beispielsweise lassen sich die folgenden Salze verwenden: Kaliumchlorid, Natriumchlorid, Kaliumsulfat, Natriumnitrat, Natriumcarbonat, Natriumbicarbonat, Ammoniumsulfat, Ammoniumchlorid, Calciumchlorid, Magnesiumsulfat und Natriumphosphat.

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Die genannten anorganischen Salze können auch in Form eines Gemisches mit Hefezellwände lösenden Enzymen verwendet werden, das vor der der Auflösung der Zellwände dienenden Umsetzung bereitet worden ist.

5. Kupferionen

Kupferionen, die bei der Vorbehandlung von Hefezellen mit Sulfiten zusätzlich verwendet werden, werden der Vorbehandlungslösung in Form von Salzen zugesetzt, beispielsweise als Kupfersulfat, Kupfernitrat und Kupferammoniumhydroxid. Unter diesen Salzen ist das Kupferammoniumhydroxid das am besten geeignete. Es läßt sich leicht dadurch herstellen, daß man einer Lösung eines Kupfersalzes einer Mineralsäure Ammoniak zusetzt. Bei allen genannten Kupferionen handelt es sich um die zweiwertigen Ionen.

6. Mengenverhältnisse der Reagenzien

Das Mengenverhältnis zwischen Sulfiten, anorganischen Salzen und Kupfer(II)-Ionen ist soweit beliebig, wie die erfindungsgemäß angestrebten Wirkungen erzielt werden. Im allgemeinen lassen sich folgende Konzentrationen an Bestandteilen in den Lösungen, in denen die Hefezellen suspendiert werden, verwenden:

Sulfite: 0,01 bis 1,0 m, vorzugsweise 0,01 bis 0,5 m. Anorganische Salze: 0 bis 3_f0 m, vorzugsweise 0,4 bis 2,0.. *. Cupriionen: 0,0001 bis 0,02 m, vorzugsweise 0,001 bis 0,01 m.

7. Auflösung der Hefezellwände

Zur Auflösung der Hefezellwände nach dem erfindungsgemäßen Verfahren können verschiedene Durchführungsformen angewandt werden; Beispielsweise werden Natriumsulfit und' Kaliumchlorid zu einer 0,1 bis 20^igen, vorzugsweise 0,1 bis 8%igen wäßrigen oder gepufferten Suspension von Hefezellen in Form einer 0,01 bis 1,0 molaren, vorzugsweise 0,01 bis 0,5 molaren bzw.

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O bis 2 molaren, vorzugsweise 0_r4 bis 2 molaren Lösung hinzugegeben, wonach ein Hefezellwände lösendes Enzym, beispielsweise ein solches, das durch Arthrobacter luteus (ATCC Nr. 21606, vgl. US-PS 3 716 452) mit der Suspension vermischt wird. Das Gemisch wird bei 15 bis 40 - C so lange bebrütet, bis die Hefezellwände gelöst werden, beispielsweise 0,5 bis 5 h unter Rühren, wonach selbst eine Hefezellwand, die sich durch das Enzym allein nur schwer auflösen läßt, sehr leicht aufgelöst wird.

Im Falle der Vorbehandlung von Hefezellen mit Sulfit wird beispielsweise eine 0,01 bis 1 molare, vorzugsweise 0,01 bis 0,5 molare Lösung von Natriumsulfit einer 0,1 bis 2O56igen, vorzugsweise 0,5 bis 8%igen wäßrigen Suspension von Hefezellen zugesetzt und die Suspension 0,2 bis 2,0 h lang bei 5 bis 40 ⁰C gerührt oder geschüttelt. Nach dieser Behandlung werden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit zu entfernen. Anschließend wird eine 0 bis 2 molare, vorzugsweise 0,4 bis 2 molare Kaliumchloridlösung zu der 0,1 bis 20^igen, vorzugsweise 0,1 bis 8%tgen wäßrigen oder gepufferten Suspension der vorbehandelten Hefezellen hinzugegeben, und das Enzym wird der Suspension zugemischt. Das Gemisch wird so lange bei 15 bis 40 ⁰C bebrütet, bis die Hefezellwände aufgelöst werden, beispielsweise 0,5 bis 5 h unter Rühren, woraufhin selbst eine Hefezellwand, die sich durch das Enzym allein kaum auflöst, leicht gelöst wird.

Im Falle der Vorbehandlung durch Sulfite und Cupriionen werden beispielsweise eine 0,01 bis 1,0 molare, vorzugsweise 0,01 bis 0,5 molare Natriumsulfitlösung und eine 0,0001 bis 0,02 molare, vorzugsweise 0,001 bis 0,01 molare Kupf er a mmoniumhydroxidl ösung der wäßrigen Suspension von Hefezellen zugesetzt. Die Suspension wird 0,1 bis 2 h lang bei 5 bis 40 ⁰C gerührt oder geschüttelt. Danach werden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und Kupferammoniumhydroxid zu entfernen, Anschließend wird das Enzym einer 0,1 bis 209&Lgen, vorzugsweise 0,1 bis ewigen wäßrigen oder gepufferten Suspen-

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sion der vorbehandelten Hefezellen zugesetzt, und das Gemisch wird bei 15 bis 40 ⁰C so lange bebrütet, bis die Hefezellwände aufgelöst werden, beispielsweise 0,5 bis 5 h lang unter Rühren. Danach lassen sich selbst Hefezellwände, die von dem Enzym allein kaum aufgelöst werden, sehr leicht auflösen.

Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung wird wie folgt abgeschätzt: 1 ml wäßrige Hefesuspension (20 mg Trockensubstanz/ml), 5 ml Puffer (wenn dem Umsetzungsgemisch ein anorganisches Salz zugesetzt wird, wird ein 1,6 molarer Puffer aus einem anorganischen Salz verwendet), 1 ml Natriumsulfitlösung (wenn Natriumsulfit aus dem Umsetzungsgemisch fortgelassen wird, wird anstelle davon Wasser verwendet), 1 ml Enzymlösung und 2 ml Wasser werden miteinander vermischt und 2 h unter Rühren bei 25 ⁰C bebrütet. Das Umsetzungsgemisch wird zehnfach mit Wasser verdünnt, und von der verdünnten Suspension wird die optische Dichte bei 800 Nanometer bestimmt. In einem Vergleichsgemisch wird die Enzymlösung des oben angegebenen Umsetzungssystems durch 1 ml Wasser ersetzt. Die prozentuale Erniedrigung der optischen Dichte, die durch die Auflösung der Hefezellwände verursacht wird, wird gemäß der folgenden Gleichung ermittelt:

% Erniedrigung der optischen Dichte =

Opt.Dichte der Vergleichslösung-Opt.Dichte d.Umsetzungsgemisches Optische Dichte der Vergleichslösung χ 100

Nach vollständiger Auflösung der "Zellwände wird im allgemeinen wegen der Anwesenheit von Zelltrümmern eine Verringerung der optischen Dichte von lediglich etwa 70% beobachtet.

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Beispiel 1

Zellen von im Handel erhältlicher Bäckerhefe wurden mit Hilfe des Hefezellwände auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus unter Verwendung eines Reaktionssystems mit Natriumsulfit (Endkonzentration 0,1 molar) aufgelöst. Es wurde eine Enzymlösung mit 20,8 Einheiten/ml verwendet. In dem Natriumsulfit enthaltenden Reaktionssystem betrug das Ausmaß der Hefezellwandauflösung 42,6%, während nur 4,0% erzielt wurden, wenn das .Natriumsulfit weggelassen wurde. Somit wurde das Ausmaß der Hefezellwandauflösung durch den Zusatz von Natriumsulfit auf das Zehnfache gesteigerte

Beispiel 2

Zellen von handelsüblicher Bäckerhefe wurden in einer Konzentration von 1% in o,1 molarer Natriumsulfitlösung suspendiert und das ganze bei Raumtemperatur 30 min gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit zu entfernen. Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung dieser Hefezellen wurde unter Verwendung der Enzymlösung gemäß Beispiel 1 bestimmt. Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung der behandelten Hefezellen betrug 13,1%, während das der nicht behandelten Zellen 4,0% betrug.

Beispiel 3

Das Ausmaß der Zellwandauflösung von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe wurde unter Verwendung des Hefezellwand auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus unter den in Tabelle I dargestellten verschiedenen Bedingungen bestimmt. Es wurde eine Enzymlösung mit 4,2 Einheiten je Milliliter verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengestellt. Dabei bedeuten die Symbole + und - in der Spalte "Reaktionssystem" den Zusatz bzw. die Weglassung des in der Spaltenüberschrift angegebenen Reagenzes.

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Reaktionssystem

Ausmaß der Hefezeil-Kaliumsulfit (0,1 m) Kaliumchlorid (0,8 m) wand-Auflösung

2,2%

+ . 6,5%

+ + 52,1%

Mit dem Reaktionssystem, das Kaliumsulfit und Kaliumchlorid enthielt, betrug das Ausmaß der Hefezellwandauflösung ungefähr das 25-fache von dem, das mit einem Reaktionssystem, das lediglich das Enzym enthielt, erzielt wurde.

Beispiel 4

Das Ausmaß der Auflösung der Zellwände verschiedener, in Tabelle II angeführter Hefestamme wurde unter Vervrendung der in Beispiel 3 beschriebenen Enzymlösung mit Natriumsulfit (Endkonzentration 0,1 molar) und Natriumchlorid (Endkonzentration 0,8 molar) im Reaktionssystem bestimmt. Jede Hefezellart wurde nach viertätiger Kultivierung bei 30 ⁰C abgeerntet. Saccharomyces cerevisiae und Saccharomyces carlsbergensis wurden in einem Medium aus Malzextrakt, Candida lipolytica in einem Medium aus normalem Paraffin und KLoeckerä japonicum in einem Medium aus Methanol kultiviert. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt. .

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Tabelle II

85,8%-	4,2%
80,1%	. 10,4%
81,5%	13,0%
81,4%	6,6%

Ausmaß der Hefezellwand-Auflösung

Hefestamm System mit Na₂SO₃ System ohne

und NaCl und NaCl

Saccharomyces cerevisiae Saccharomeces carlsbergensis Candida lipolytica Kloeckera japonicum

Aus der Tabelle ergibt sich, daß das Reaktionssystem mit Natriumsulfit und Natriumchlorid zu einem Ausmaß an Hefezellwandauflösung führte, das gegenüber dem System, das die genannten Salze nicht enthielt, außerordentlich erhöht war.

Beispiel 5

Das Ausmaß an Zellwandauflösung von handelsüblicher Bäckerhefe wurde mit dem Schneckenenzym und mit Natriumsulfit (Endkonzentration 0,1 molar) und Kaliumchlorid (Endkonzentration 0,8 molar) im Reaktionssystem bestimmt. Die Enzymlösung war eine zweifach verdünnte Lösung aus Schneckendarmsaft. Unter Verwendung von Natriumsulfit und Kaliumchlorid im Reaktionssystem wurde ein Ausmaß an Hefezellwandauflösung von 22,8% erzielt, wohingegen die Hefezellwände in einem Reaktionssystem ohne die beiden Salze nicht aufgelöst wurden.

Beispiel 6

Zellen von handelsüblicher Bäckerhefe wurden in einer Konzentration von 1% in 0,1 molarer Natriumsulfitlösung suspendiert und das ganze 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit zu entfernen, und mit Hilfe des Hefezellwände auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus mit oder ohne Natriumchlorid (Endkonzentration 0,8 molar) aufgelöst. Es wurde eine Enzymlösung mit 4,2 Einheiten je ml verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengefaßt.

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Tabelle III

Hefezellen
Unbehandelte Hefe

Behandelte Hefe

System

Mit NaCl ohne NaCl

mit NaCl ohne NaCl

Ausmaß der Zellwand-Auflösung

6,556

2,2%

43,590 7,2%

Das Ausmaß an Hefezellwandauflösung wurde somit durch die Vorbehandlung der Hefezellen mit Natriumsulfit beträchtlich erhöht»

Beispiel 7

Das Ausmaß der Hefezellwand-Auflösung bei handelsüblicher Bäckerhefe wurde unter Verwendung des Hefezellwände lösenden Enzyms von Arthrobacter luteus sowie von Natriumsulfit (Endkonzentration 0,1 molar) und den in Tabelle IV angeführten anorganischen Salzen (Endkonzentration o,8 molar mit der Ausnahme von Kaliumsulfat, dessen Endkonzentration 0,6 molar war) ermittelt. Es wurde eine Enzymlösung mit 4,2 Einheiten je ml verwendet. Die Ergebnisse sind ebenfalls in Tabelle IV zusammengefaßt.

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Tabelle IV Anorganisches Salz Ausmaß der Hefezellwand-Auflösung

Kaliumchlorid 52,2%

Kaliumsulfat 36,2%

Natriumchlorid 50,6%

Ämmoniumchlorid 45,1%

Calciumchlorid 22,6%

Ammoniumsulfat 46,8%

Magne siumsulfat 42,4%

Natriumnitrat 30,3%

Natriumcarb onat 22,8%

Kein Zusatz 12,2%

Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung bei handelsüblicher Bäckerhefe wurde durch Zusatz jedes der angegebenen anorganischen Salze außerordentlich erhöht.

Beispiel 8

Eine 1%ige Suspension von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe in 0,1 molarer Natriumsulfitlösung, die 0,0025 molar an Kupfer (II)· Sulfat war, wurde 30 min lang bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und das Kupfersulfat zu entfernen, und mit Hilfe des Hefezellwände auflösenden Enzyms von Arthrobacter luteus aufgelöst. Es wurde eine Enzymlösung mit 4,2 Einheiten/ml verwendet. Das Ausmaß der Hefezellwandauflösung der behandelten Zellen betrug 26,3%, während das der nicht behandelten Hefezellen 2,2% betrug.

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- Ί3 -

Beispiel 9

Eine 1^ige Suspension von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe in einer 0,1 molaren Natriumsulfitlösung, die Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid in den in Tabelle V angegebenen Konzentrationen enthielt, v/urde 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit und das Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid zu entfernen und unter Verwendung der in Beispiel 8 angegebenen Enzymlösung aufgelöst. Die Ergebnisse sind in Tabelle V zusammengefaßt .

Tabelle V

Konzentration von.

Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid

0 m

0,0005 m 0,001 m 0,0025 m 0,005 m

Ausmaß der

Hefe ζ ellwand-Auf1ösung

7,2%

54,4%

67,096

Die mit Natriumsulfit und Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid behandelten Hefezellen wurden durch das Enzym äußerst leicht aufgelöst.

Beispiel 10

Zellen von verschiedenen Hefestämmen wurden in 1%iger Konzentration in 0,1 molarer Kaliumsulfitlösung, die 0,005 m an Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid war, suspendiert und das ganze ' 30 min bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurden die Hefe-. zellen mit Wasser gewaschen, um das Kaliumsulfit und Kupfer-(II)-Ammonium-Hydroxid zu entfernen, und mit der in Bei- ' spiel 8 beschriebenen Enzymlösung aufgelöst. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengefaßt.

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Tabelle VI

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behandelte Zellen	unbehandelte Zellen
87,5%	/ι OCt^ * 9 Z^
85,0%	10,4%
86,3%	13,0%
85,3%	6,6%

Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces carlsbergensis
Candida lipolytica
Kloeckera japonicum

Das Ausmaß der Zellwandauflösung der behandelten Zellen sämtlicher Hefestämme war außerordentlich erhöht.

Beispiel 11

Sine 1%ige Suspension von Zellen handelsüblicher Bäckerhefe in 0,1 m Natriumsulfitlösung, die 0,003 m an Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid war, wurde 1 h lang bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden die Hefezellen mit Wasser gewaschen, um das Natriumsulfit 'und Kupfer(II)-Ammonium-Hydroxid zu entfernen, und mit Hilfe des Schneckenenzyms aufgelöst. Als Enzymlösung wurde eine zweifach verdünnte Lösung von Schneckendarmsaft verwendet. Das Ausmaß der Zellwandauflösung der behandelten Hefezellen betrug 10,2%, während nichtbehandelte Zellen von dem Schneckenenzym nicht aufgelöst wurden.

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Claims

Patentansprüche

(T) . Verfahren zum Auflösen von Hefezellwänden durch Behandeln von Hefe in einem wäßrigen Medium mit einem Hefezellwände auflösenden Enzym,

dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung unter dem Einfluß eines wasserlöslichen Sulfits als Beschleuniger für die Auflösung durchführt.
2. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung in Gegenwart des wasserlöslichen Sulfits durchführt.
3. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß man die Behandlung durchführt, nachdem man die Hefe einer Vorbehandlung in einem das wasserlösliche Sulfit enthaltenden wäßrigen Medium unterzogen hat.
4. Verfahren nach Anspruch 3,
dadurch gekennzeichnet, daß man zur Vorbehandlung die Hefe mindestens 0,2 h in dem wäßrigen, das wasserlösliche Sulfit enthaltenden Medium suspendiert. ·
5. Verfahren nach Anspruch 2 oder 3_t
dadurch gekennzeichnet, •daß man die Behandlung in Gegenwart eines weiteren wasserlöslichen anorganischen Salzes durchführt.
6. Verfahren nach Anspruch 3_f
dadurch gekennzeichnet, daß man die Vorbehandlung in dem wäßrigen, das wasserlösliche Sulfit enthaltenden Medium in Gegenwart von Kupfer(Il)-Ionen durchführt.

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7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dad u r ch gekennzeichnet, daß man als wasserlösliches Sulfit ein Alkali-, Erdalkalisulfit oder Ammoniumsulfit verwendet.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß man als weiteres anorganisches Salz ein Alkali-, Erdalkalioder Ammoniumchlorid, -sulfat, -nitrat, -carbonat, -bicarbonat oder -phosphat verwendet.
9. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man als Lieferanten für die zweiwertigen Kupferionen Kupfer(II)-Sulfat, Kupfer(II)-Nitrat und Kupfer(II)-Ammoniumhydroxid verwendet.

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