DE2166091C3 - Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung von d-Threo-2-propionamido-l -p-nitrophenyl-l^-propandiol. Ausscheidung aus: 2120153 - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft ein mikrobiologisches Ver- *^{5 Eii wurde in einem} 5-1-GIasfennenter gearbeitet,

fahren zur Herstellung von d-Threo-2-propionamido- Zunächst wurden 300 ml η-Paraffin der C₁₂-C₁₁,-

l-p-nitrophenyl-l,3-propandiol (hier als Substanz A Fraktion zugesetzt. Nach 24 Stunden, vom Beginn des

bezeichnet). Die genannte Substanz ist ein Derivat Züchtens ab, wurden alle 12 Stunden je 50 ml n-Parai!-

des d-Threo-2-amino-l-p-nitrophen>l-l,3-propan(iiol fin zusätzlich zugefügt. Die Züchtung wurde bei 30°C

(Chloramphenicol), bei dem die 2-Aminogruppe durch ao in 69 Stunden unter Rühren (650 Umdrehungen pro

Propionamid substituiert ist. min) und Belüften (1 l/min) mit sterilisierter Luft aus-

Über ein Verfahren zur Herstellung dieser Substanz geführt. Das pH des Mediums wurde automatisch mit

direkt durch Fermentation unter Verwendung eines Ammoniakwasser auf 6,5 bis 6,8 eingestellt. Das

Bakteriums ist bisher in der Technik noch nirgends n-Paraffin-Substrat war nach vollendeter Fermentation

berichtet worden. »5 fast verbraucht.

Das erfindungsgemäße Verfahren ist dadurch ge- Die erhaltene Fermentbrühe wurde durch Entfer-

kennzeichnet, daß man den Mikroorganismus No- nung der Mikrobenzellen auf ein pH von 4,0 eingc-

cardia hydrocarbonoxydans ATCC 15104 in einem stellt. Nach Zusatz derselben Menge Äthylacetat wurde

Kulturmedium, welches assimilierbare Kohlenstoff- die Fermentbrühe 24 Stunden geschüttelt, um die er-

quellen enthält, unter aeroben Bedingungen züchtet 30 findungsgemäße Verbindung in die Äthylacetatschicht

und anschließend das Reaktionsgemisch in üblicher zu extrahieren. Die extrahierte Flüssigkeit wurde mit

Weise aufarbeitet. wasserfreiem Na₂SO₄ entwässert und bei 35°C unter

Bei der Durchführung der Züchtung werden reduziertem Druck eingedampft. Der erhaltene RückKohlenwasserstoffe als Haupt-C-Quellen verwendet. stand wurde weiter mit Allylacetat (100 ml) extrahiert. Vorzugsweise werden hier Ci,-C₁₈-n-Paraffine einge- 35 Nach dem Zentrifugieren wurde die Lösung durch eine setzt. Sie werden ergänzt durch organische N-Quellen, Silicagel-Kolonne (Durchmesser: 4 cm, Höhe: 20 cm) wie Maiswasser, Hefeextrakt, durch anorganische geschickt, welche dann gründlich mit Chloroform ge-Metallsalze, z. B. des Eisens, Mangangs, Magnesiums, waschen wurde. Danach wurde durch die Kolonne eine Kaliums, Natriums. Das Medium wird sterilisiert und Mischung aus Chloroform und Methanol (95: 5) gcmit dem Mikroorganismus beimpft. Die Züchtung 40 schickt.

wird unter aeroben Bedingungen bei 20 bis 45°C Die ersten 1000 ml des Eluats enthielten nahezu die durchgeführt. Während der Züchtung wird das pH auf gesamte Menge der Substanz A. Diese Lösung wurde 4 bis 10, vorzugsweise 6 bis 8, eingestellt, z. B. durch konzentriert und mit Äthanol versetzt. Durch AbZusatz einer Harnstofflösung, von Ammoniakwasser, destillieren des Lösungsmittels kristallisierte die Subvon Ammoniak oder einer Ammoniumcarbonatlösung. 45 stanz A aus. Die Ausbeute an Substanz A betrug Die Züchtung ist nach 2 bis 7 Tagen zu Ende geführt. 1,2 g/l. Durch weiteres Eluieren der genannten Ko-Die Vollendung der Züchtung kann durch die Werte lonne konnten keine weiteren Substanzen gefunden der erhaltenen erfindungsgemäßen Verbindung sowohl werden.

festgestellt als auch bestimmt werden durch die Die isolierten Kristalle der Substanz A wurden durch

»paper disc method«, um so ein Maximum zu erreichen. 50 wiederholtes Umkristallisieren aus Äthylenchlorid ge-

Das erfindungsgemäße Verfahren soll an einem reinigt. Die isolierten Kristalle der Substanz A hatten

Beispiel erläutert werden. niedrigere antibiotische Aktivitäten als das Chlor-

Es wurde unter Schütteln in 24 Stunden Nocardia amphenicol, als dessen Analogem sie aufzufassen sind,

hydrocarbonoxydans ATCC 15 104 in einem Medium Sie hatte jedoch bezüglich des antibiotischen Spelk-

gezüchtet, das eine Zusammensetzung von 1 % Fleisch- 55 trums dieselben Tendenzen wie das Chloramphenicol,

extrakt, 1% Pepton, 0,5% NaCl und 2% Sorbit, sowie Auch wiesen beide Substanzen im UV-Spektrum ein

ein pH von 7,2 (vor der Sterilisation) hatte. Mit der Maximum bei 273 ηΐμ auf.

Claims (1)

1 2

erhaltenen Saatkultur wurden 31 eines Kulturmediums

Patentanspruch: beimpft, welches die nachfolgende Zusammensetzung

hatte:

Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung KHsPO₄ 0,2%

von d-Threo-Z-propionamido-l-p-nitrophcüyl- 5 MgSO₄ · 7 H₂O 0,1 %

1,3-propandiol, dadurch gekennzeich- FeSO₄ · 7 H₄O o|o2%

π et, daß mandea Mikroorganismus ATCC15104 (NH₄)JSO₄ 0,5%

in einem Kulturmedium, welches assimilierbare Maiswasser o'l %

Kohlenstoff quellen enthält, unter aeroben Bedin- Na₂HPO₄ 0,2%

gungen züchtet und anschließend das Reaktians- io MnSO₄ · 4 H₂O 0^002%

gemisch in üblicher Weise aufarbeitet. ZnSO₄ · 7 H₂O o'oOl %

CuCl₂ · 2 H₂O ................. 0^0003%

Hefeextrakt 0,5%