DE2041418A1

DE2041418A1 - Verfahren zur Herstellung von 1,-3,4-Dihydroxyphenylalaninderivaten

Info

Publication number: DE2041418A1
Application number: DE19702041418
Authority: DE
Inventors: Toshinori Kurano; Keijiro Murata
Original assignee: Sankyo Chemical Industries Ltd; Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Chemical Industries Ltd; Sankyo Co Ltd
Priority date: 1969-08-16
Filing date: 1970-08-14
Publication date: 1971-02-25
Also published as: FR2058097A5; GB1265773A; CH537904A

Description

Kart Kfefctbtn 204 141 B

Potentanwalt 1 Berlin 1«, Käieerdaia« 2S

14. August 1970

p. 5117

Sankyo Company, Limited in

Tokyo (Japan)

und

Sankyo Chemical Industries, Limited in Tokyo (Japan).

Verfahren zur Herstellung von L-3»4-Bihydroxyphenylalaninderivaten.

Die Erfindung bezieht sich auf eine Verbesserung in der Herstellung von L-3,4-Dihydroxyphenylalaninderivaten.

Sie bezieht sich insbesondere auf ein neues und verbessertes Verfahren für die Herstellung eines L-Isomers eines 3»4—Sihydroxyphenylalaninderivates der Formel

NH₂

—ff \- CH₂ - C - COOH \_/ I (I)

^R2°

worin E,. und R? gleich oder verschieden, sein können und je

Wasserstoffatom oder Methylgruppe darstellen, oder sie können zusammen Methylengruppe bilden, oder eines balzes davon.

Von den L-3»4-Dihydroxyphenylalaninderivaten der obigen Formel (I) ist L-3,^-Dihydroxyphenylalanin (iai Folgenden mit "L-DOPA" bezeichnet) bekannt und nützlich für die Behandlung der Parkinson'sehen Krankheit und Mentaldepression.

Bisher wurde L-DOPA beispielsweise hergestellt, indem das Racemat davon durch chemische synthetische Arbeitsweisen mit anschließender optischer Auflösung oder ^ Spaltung des Racemats zwecks Abtrennung und Gewinnung des wertvollen L-Isomers [siehe beispielsweise Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 10, 680 (1962) und Helvetica Chimica Acta, ££, 1776 (1952)) erzeugt wurde. Diese bekannte Methode hat jedoch Nachteile, indem bei der Herstellung gleichzeitig das unerwünschte D-Isomer zusammen mit dem gewünschten L-Isoner gebildet wird, was zu einer geringen Ausbeute und Reinheit des L-Isomers führt.

Es sind daher zahlreiche Versuche auf dem Fachgebiet unternommen worden, um das gewünschte L-3,4-Dihydroxyphenylalaninderivat in einer vorteilhafteren Weise zu gewinnen.

Als ein Ergebnis ujßfangreicher Studien zur Herstellung des L-3,4—Dihydroxyphenylalaninderivates wurde ψ nun unerwarteterweise gefunden, daß eine hohe Ausbeute des L-Isomers des 3,4-Dihydroxyphenylalaninderivates der obigen Formel (I) erhalten werden kann, indem man eine spezifische Substratverbindung der Einwirkung eines ausgewählten Mikroorganismus unterwirft, und auf diesar neuen Erkenntnis beruht die vorliegende Erfindung.

Es ißt daher ein hauptsächliches Ziel dieser Erfindung, ein neues und vorteilhaftes Verfahren für die biologische Herstellung des L-Isomera des 3,^-Dihydroxyphenylalaninderivates der obigen Formel (I) oder des Salzes davon aufzuzeigen.

- 3 109809/2262

Weitere Merkmale und Vorteile der Erfindung ergeben sich für den Fachmann aus der folgenden spezielleren beschreilung.

Gemäß der Erfindung besteht das verbesserte Verfahren ::ur Herstellung des L-Isomers des 3,^-Dihydroxyphenylalaninderivates der obigen Formel (I) darin, daE man eine Verbindung, der Formel

„0-/ \- CH₂ -Y- COOH (II)

worin R₁ und R₂ die oben beschriebenen Bedeutungen haben, und

0 S OH X-

I! i! 1 1

Y eine Gruppe der Formeln -G-, -C-, -CH- oder -CH- ist,

worin X ein Halogenatom darstellt, oder ein Öala davon In Gegenwart eines Aminogruppen-Donors in einem wäßrigen Medium oder einem wäßrigen KuIturnediua. der Einwirkung ein.es L-DOPA erzeugenden Mikroorganismus unterwirft, wobei dieser Mikroorganismus ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus
Bakterien der folgenden Gattungen

Erevib'acteriuin, Micrococcus, Corynebacterium_y Pseudomonas, Aerobacter, Serratia, Bacillus,, Sarc ina und Escherichia;

109809/226S bad ohigin/m.

204U18

Schimmelpilzen der folgenden Gattungen Aspergillus,

Fenicillium,

Mucor und

Helminthosporium; Strahlenpilzen der folgenden Gattung

Streptomyces; und Hefen der folgenden Gattungen Saccharomyces und Candida.

Repräsentativ für geeignete Mikroorganismen, welche tei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden können, ergeben sich aus der folgenden Zusammenstellung:

bakterien	ammoniagenes,
	ro seum,
Brevibacteriuiii genus, wie	divaricatum,
Brev.	flavum,
Brev.	lactofermentum
Brev.	eaccharolyticu
Ere v.
Brev.
Brev.

oder

Micrococcus genue, wie

Mic. varians; Corynebacterlujm genus, wie

Cory, equi,

Cory« lilluat,

Cory, callxinee oder

Cory, acetoacidophilujn; Fseudomonaa genus, wie

Pa. aeruginoea oder

Ps. aureofaciens;

iC9809/2262

Aerobacter genus, wie

A. cloacae; Serratia genus, wie

Ser. marcescens; Bacillus genus, wie

Bac. subtilis; Sarcina genus, wie

Sar. lutea; Escherichia genus, wie

E. coli;
Schimmelpilze

Aspergillus genus, wie

Asp, oryzae oder

Asp, niger; Penicillium genus, wie

Pen, chryβplenum; Mucor genus, wie

M. javanicus; Helminthosporiua genus, wie

Helm, oryzae; Strahlenpilze

Streptomyces genus, wie

St. griseus; Hefen

Saccharomyces genus, wie

Sacch. cerevisiae; Candida genus, wie

Can, albicans.

Sie Mikroorganismen, welche in dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden können, sind sämtlich in der Technik bekannte Arten, und ihre mikrobiologischen Eigenschaften sind beschrieben, beispielsweise in der folgenden Literatur:

- 6 109809/22 6^

20AU18

"Bergey's Manual of Determinative Bacteriology", 7th Ed., R.S. Breed et al., William and Wilkinsons Co., 1957;

"The yeasts: A Taxonomic Study¹*, J. Lodder et al., North-Holland, 1967;

"The Actinomycetes", S.A. Waksman et al., tfilliam and Wilkinsons Co., 1962;

"A Manual of the Aepergilli", C. Thorn et al., William and Wilkinsons Co., 1945;

"A Manual of Fenicillia", K.B. Baper et al., William and Wilkinsons Co.,

"The Genera of Fungi", P.E. Clements et al., Hafner Pub., 1954.

Geeignete Substratverbindungen für das erfindungsgemäße Verfahren schließen ein 3»^-Dimethoxyphenylbrenztraubensäure , ei -Thioketo-ß-(3,4-dimethoxyphenyl)-brenztraubensäure, DL-<?6-Hydroxy-ß-(5,4-dimethoxyphenjl)-propionsäure, DL-oC-Brom-(oder Chlor)-e-(3,4-diaethoxyphenyl)-propionsäure, DL-OC-Brom-(oder Qhlor)-ß-(3,4-methylendioxyphenyl)-propionsäure, · Bt-fBiok#to-ß-(4-hydroxy-5-»ethoxyphenyl)-brenitr»ub#neSür© oder die entsprechenden Natrium-, Kalium-, Ammonium!«- oder Calciumealie davon. Besonders vorteilhaft ist die 3,4-Dimethoxyphenylbrenstraubensäure.

Bei der Ausführung des erfindungsgemäßen Verfahrens müssen zwei Ausführungsformen erwähnt werden, wie das Auegangsmaterial (II) einem Mikroorganismus ausgesetzt wird. Die eine ist eine fermentative Methode, die andere eine enzymatische Methode; beide werden nachstehend einzeln näher erläutert.

109809/2263

- ⁷ - 204η

bei der Ausführung der fermentativen Methode kann ein wäßriges Kulturmedium, wie es in der Technik für das •Vachstum der Mikroorganismen üblicherweise benutzt wird, vorteilhaft angewendet werden. Als eine Kohlenstoffquelle können, vorteilhaft angewendet werden Stärke, Glucose, Eest- !!lelasee, »alzextrakt und dergleichen. Als eine Stickstoff-4uelle ' können zweckmäßig verwendet werden Harnstoff, Pepton, Hefeextrakt, Aminosäuren, Aininoniu&ehlorid, sekundäres Anuucniumj hosphat und dergleichen» Solche Stickstoff quellen Können sowohl als Nährstoffquelle für den Mikroorganismus, wie auch als Aminogrup-pen-Iio-nor dienen. Das Kulturmedium kann ferner anorganische Salze, andere wachstumsfördernde Substanzen und dergleichen enthalten.

Zu deiL so hergestellten Kulturmedium wird das Substrat (II) oder ein Salz davon in einer hienge von Q₁b bis 5 % hinzugefügt. Das Substrat Kann zu dem Kulturmedium hinzugefügt werden zu Beginn der Kultivierung, oder es Kann portionsweise während des Kultivierens hinzugefügt werden. Das so hergestellte wäßrige Kulturmedium wird dann auf einen pH von eine» neutralen bis schwach alkalischen Bereich eingestellt und mit einem !mikroorganismus inokuliert» Bas Kultivieren Wird im allgemeinen bewirkt unter Schütteln oder mittels eines Belüftungsvorganees bei etwa 20 bis 50 ⁰C wähx-end 1 bis 5 Tagen. Nach Beendigung des Kultivierens wird die Kulturbrülle filtriert oder durch Zentrifugieren abgeschieden, um das Myzel zu entfernen, das Filtrat wird in üblicher Weise "behandelt, wie das für die Gewinnung .und. Reinigung einer Aminosäure bekannt ist. Beispielsweise können das gewünschte Produkt (I) oder das Salz davon bequem gewonnen werden .entweder, durch. Behandlung * des FiItrats mit .einem geeigneten Ionenauetauscherharz oder durch Einengung des Filtrats und Hinzufügen zu dem Rückstand eines geeigneten organischen Lösungsmittels.

BAD ORIQIMAI-

109809/226 2

204U18

Bei der Ausfühiung der enzymatischen Methode wird das gleiche wäßrige oder feste Kulturmedium, wie oben beschrieben, mit einem Mikroorganismus ohne Hinzufügen der Substratverbindung (II) inokuliert. Dann wird das Kultivieren 1 bis 5 Tage bei etwa 20 bis 50 ⁰C bewirkt. Nach Beendigung des Kultivierens wird das Myzel aus der Kulturbrühe in der üblichen, in der einschlägigen Technik bekannten Weise gewonnen, beispielsweise durch Filtration oder durch Zentrifugalabscheidung.

Das so gewonnene wyzel wird entweder als solches oder in einer suspendierten Form in Wasser oder einem

fc Gemisch aus Aasser und einem organischen Lösungsmittel, wie einem Gemisch aus Toluol und Äthylacetat, hinzugefügt zu einer zuvor auf einen pH von 7 his 8 eingestellten Lösung einer etwa 1 bis 10 %igen Substratverbindung (II) oder eines Salzes davon und eine äquimolare oder größere Menge eines Aminogruppen-Donors zu der ersteren.

Al6 Aminogruppen-Donor, welcher bei dieser Ausführungsfonn verwendet werden kann, kommen beispielsweise in Betracht Aminosäuren und deren Salze, wie Glutaminsäure, Asparaginsäure, Isoleucin und deren balze; und Eiweißabtauprodukte, wie Hefeextrakt, Pepton, Produkte, die beim Abbau von Casein gewonnen werden, und dergleichen. Das erhaltene Gemisch wird 24 bis 48 Stunden bei 30 bis 50 ⁰C

" stehengelassen. Nach dieser Zeit wird das Gemisch filtriert oder einer Zentrifugalabscheidung unterworfen, um das Myzel zu entfernen, und das Filtrat wird dann in der gleichen Weise wie bei der obigen fermentativen Methode behandelt.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren erhält man einige Vorteile insofern, als nur ein L-Isomer des 3»**~Dihydroxyphenylalaninderivates (I) oder das Salz davon selektiv mit hoher Ausbeute gewonnen wird, und einige der L-Isomere können bequem in das L-DOPA übergeführt werden, beispielsweise durch Behandlung mit einer Halogen-

ι C 9 3 ü 9 / 2 2 6 2

wasserstoffsäure, wie Bromwasserstoffsäure, und daher kann allein das wertvolle L-Isomer technisch vorteilhaft aus dem "bequem erhältlichen Ausgangsmaterial gewonnen werden, und zwar ohne Anwendung irgend eines optischen Auflösungs- oder Spaltungsverfahrens entsprechend den bekannten Methoden.

Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele, jedoch nicht einschränkend, näher erläutert.

Beispiel 1

Zu einem Kulturmedium der folgenden Formulierung wurden 2 % je einer der in der folgenden Tabelle 1 angegebenen Substratverbindungen hinzugefügt.

Glucose	5 %
Hefeextrakt	0,5 %
Harnstoff	0,5 %
Maiswasser	0,5 %
KH₂PO₄	0,1 %
MgSO₄ . 7H₂O	0,05%

100 ml des obigen Kulturmediums wurden auf einen pH von 7,0 eingestellt und 10 Minuten bei 120 ⁰C sterilisiert. Nach dem Abkühlen wurde das Kulturmedium mit je einem der unten angegebenen Bakterien inokuliert, und es wurde eine Schüttelkultur bei 30 ⁰C während 72 Stunden durchgeführt. Nach Beendigung der Inkubation wurde das unten angegebene L-DOPA-Derivat in der unten angegebenen Kulturbrühe mit einer unten angegebenen Ergiebigkeit

- 10 10 9809/2262

" ¹⁰ " 2UA H

(g/l) erzeugt. Die Kulturbrühe wurde der Zentrifug^labscheidung unterworfen, um das iwyzel zu entfernen. Das Filtrat wurde auf einen pH von 6 bis 7 eingestellt, unter vermindertem Druck zur Trockne eingeengt, und Äthanol wurde zu dem Rückstand hinzugefügt, wonach eine kristalline Substanz aus dem 50-fachen Volumen heißen Wassers umkristallisiert wurde, wobei man das gewünschte Derivat in reiner Form erhielt.

- 11 -

109809/2262

H H • fit α)

Γ

I
O

ι

&

KN

I

■

I*
Ν«
■

«

I

d

B

•

(

I

i

P
I

•

I

—

11

—

UN

τ-

Γ—

CM

CJN

ο

4*
•

M
Xt

+»
•

H
$>>

a

>

<»-%

β
ft

/

ti

° /

■

H ti

H ti

O

ΚΝ

·"*

O

CM

τ-

CM

M

>>

I

au

'Φ H

H

ti

O
U

O

I

rf ti

O

fl]
I ■-**■

CQ

S

ti

ι

ti
B

Xt

$'

ti

1 Pi

I

«

ti

M

ti

&

ω

I

T
ca

ti ti
ο ρ

ο
■ J

ti

«V

/

H

UN

or-

ι
•Η

I
■#·

H

Ρ«

ID

4*

I

O

ο

O

H-d

KN

I

ti

O

IU
ti

I

CM

KN

O

-τ-

CO

41

h»

H
» f
ι r-

M

,a

•H

bh

O³O

τ-

KN

O

ι

I

K

» Ä
I P

Pl

Pi

/

Cji

P

#%

• «

i

a*

I

/

I

4H

I

P

4»

/

Ή

Pi

KN 4»

I

A«

H

C-

KN

I
B

I

•

"C
k C"

_ld

•Η

O
U

B

I

J

ti

Fl

CM

τ-

ο

Xi

M

■

M»

• ti

OV

Ο

M

¹^.

I

%
I E

β

ti

/

»

4»

CM

VO

CM

UN

O

•
MN

ti

I
4»
J*·

/

O
,.,J

H

ßpH

τ-

KN

τ-

CM

ί

H

8

Pi

I

B

O «

η)

j?

+»

/

ti

I

4»

R

f

O

KN

H^

τ-

CO

•

Sub

•H

j

I

^O

ΚΝ

CM

O
f.

>%

H
Xt

ti

P.©

H

ä

»

/

A.

I

H ti

O

τ—

P

I/

H

4»

UN

CM

VO

τ-

/

a

CM

τ-

CM

OJ

"2

/

τ-

^p

ΚΛ ^H

KN

/

^_

I

T

(β

1

H

UN

■Η

CQ

^M

ISO

O

P

4»

P»rt

I

)H
ti
«

I

KN

C-

I^

*

T-

UN

■*

ω

3*.

I

UN

ω

KN

3

¹O/

KN

/

Hi

H

UN

ON

m

B

iö

KN

C-

ti

/

®

Φ
O

/

TiI
a

•Η
O
«β

O

B
•Η
H

S

Vl
O

m

•Η
4»

S!

m

ο

i

4»

H

1

S

9

ϊ

a

•HI

I

U
ο
ο

"3

S

*

ο§

ο
S

11

I

HJ

>

M

m
η

t

•

UN

IA

CMP

ϋ O

UN

B •Η

CM

UN

CVJ

- 12

10 9 8 0 9/2262

Beispiel 2

100 al dee wäßrigen Kulturmediums mit der gleichen Formulierung wie in obigem Beispiel 1 wurden inokuliert mit Brevibacterimn ammoniagenes und die Inkubation wurde 18 Stunden bei 30 ⁰C bewirkt. Die Kulturbrühe wurde der Zentrifugalabecheidung unterworfen, um das Myzel zu sammeln, welches dann zu einer Lösung (100 ml, pH 7) hinzugefügt wurde, welche 5 g 3,4-Dimethoxypheny!brenztraubensäure und 5 g Natriumglutamat enthielt. Danach wurde das erhaltene Gemisch 48 Stunden bei 30 ⁰C stehengelassen, wobei 3,6 g L-3,4-Dimethoxyphenylalanin in situ erzeugt wurden. Das Gemisch wurde der Zentrifugalabscheidung unterworfen, um das Myzel zu entfernen, und das Filtrat wurde in der gleichen Weise wie in obigem Beispiel 1 behandelt, wobei man 2,8 g des gewünschten Produktes als reine Kristalle erhielt.

Beispiel 3

100 ml eines Malzextraktmediums, welches 1,5 56 einer jeden der in der folgenden Tabelle 2 angegebenen Subetrat-Terbindung enthielt, wurde 20 Minuten bei 120⁰C sterilisiert, Nach dem Abkühlen wurde das Kulturmedium mit je einem der unten angegebenen Pilze (Fungus) inokuliert, und es wurde eine Schüttelkultur während 48 Stunden bei 27⁰C durchgeführt. Das unten angegebene L-DOPA-Derivat wurde in der Kulturbrühe mit der unten angegebenen Ergiebigkeit (g/l) erzeugt.

- 13 -

_/2262

Tabelle

CX) O CD — NJ N) CO

^^S. Substrat- \. ^s. dung	ß-(3,4-Di- methoxy- phenyl)- brenztrau- bensäure	Dl-oHHydroxy- ß-(3,4-di- aethoxyphen- yl)-propion- . säure	DL-tfrBrom- ß-(3,4- methylen-' dioxyphen- yl)-alanin	DL-Är-Chlor- ß-(3,4-di- methoxy- phenyl)- propion- säure	öC-TMolceto ß-(4-nydr- oxy-3-Betii- oxyphenyl)- alanin
Produtt Fungus N^	1-3,4-Di- metnoxy- paenyl- alanin	1-3,4-Di- methoxy- phenyl- alanin	L-3,4- Methylen- dioxyphen- y!alanin	L-3,4-Di- metnoxy- phenyl- alanin	1^4-Hydroxy- 3-methoxy- phenyl- alanin ι
	(g/1)	(g/1)	(g/1)	(g/1)	(g/1) ι
Asp. oryzae	8,5	5,4	3,4	2,8	0,38
Asp, niger	8,8	6,1	3,7	3,5	0,26
Pen, chry s ogemun	6,1	2,4	2,4	2,3	0,31
M. .iaTanicus	5,4	3,2	2,6	2,5	0,22
Heia, oryzae	3,4	2,1	1,5	1,6	0,15

2ÜAH18

Beispiel 4

Das wäßrige Kulturmedium (15 1) alt der folgenden Formulierung wurde hergestellt.

Restmelasse

(Glucosegehalt 30 t) 2,5 1

KH₂PO₄ 30 g

MgSO₄.7H₂O 15 g

Harnstoff 75 g

Zu den Kulturmedium wurden 1,5g eines Antischaummittels hinzugefügt, und das erhaltene Gemisch wurde in einen Gärbottich mit einem Volumen von 30 1 geschüttet. Nach dem Einstellen des pH auf 5,0 wurde das Kulturmedium , sterilisiert und mit der unten angegebenen Hefe inokuliert. Die Kultivierung im Belüftungeverfahren wurde 24 Stunden bei 28⁰C durchgeführt. Hach Beendigung der Kultivierung wurde das Myzel durch Zentrifugalabscheidung gesammelt. Das so erhaltene Myzel/in 5 1 Wasser suspendiert, und zu der Suspension wurden 100 ml Toluol hinzugefügt. Zu dem erhaltenen Gemisch wurde eine Lösung von 500 g der in der folgenden Tabelle 3 angegebenen Substratverbindung sowie 500 g Hatriumglutajutt in 5 1 Wasser, dessen pH auf 7,2 eingestellt war, hinzugefügt, und dann wurde das erhaltene Gemisch 24 Stunden bei 35⁰C unter gelegentlichem Rühren stehengelassen. Danach wurde das L-DOPA-Derivat, welches unten angegeben ist, in dem erhaltenen Gemisch mit der unten angegebenen Ergiebigkeit (g/l)erzeugt.

- 15 -

109809/2262

Tabelle 3

Substratverbin dung

CD O <XJ

ro cn ro

Hefe

β-(3,4-Di-

inethoxy-

phenyl)-

breixztrau-

beneäure

DL-»-Hydroxyß-(3,4-dimethoxyphenyl )-propionsäure

ß-(3,4-

■ethylen dioxyphen-

yl)-prop ioneäure

DL-x-Ciilor-

ß-(3,4-di-

aetaozy-

phenyl)-

propion-

saure

Ir.3,4-Di-■tthoxypheayl*· alanin

L-3,4-Di· aethozyphenylalanin

L-3,4-Methylendioxypheny!alanin

1.-3,4-Dimethoxyphenylalanin

x-Thioketo-

^-(4-hydrT

oxy-3-neth-

oxyphenyl)-

propion-

säure

L-4-Hydroxy-3-etthoxyphenyl- · alanin

Sacch. cwreviiiac Can. albicans

315 275

285 248

143 131

145 130

19 11

2Ü4H18

Beispiel 5

In 3 1 dee wäßrigen Kulturmediums, welches die folgenden Ingredientien enthält, wurden 45 g DL-oc-Hydroxy-ß-(3,4-dinethoxyphenyl)-propionsäure hineugefügt.

Glucose 150 g

Pepton 30 g

Hefeextrakt 30 g

HH₄H₂PO₄ 6 g

MgSO₄-7H₂O 1,5 g

6 g

0,3 g

Das erhaltene Geaisch wurde auf einen pH von 7 eingestellt und in einen Gärbottich Bit einem Volumen von 5 1 geschüttet. Fach der Sterilisation wurde das Kulturmedium ■it Streptoaycea griseus inokuliert und die Kultivierung nach des BelüftungsYerfahren 72 Stunden bei 27⁰C durchgeführt. Mach dieser Zeit waren 27 g L-3,4-Diaethoxyphenylalanin in der Kulturbrühe erzeugt.

Patentansprüche: - 17 -

109809/2262

Claims

Pat entansprüche;

r\.\ Verfahren zur Herstellung eines I-Isomers einer Verbindung der Formel

Ι«-TV

E₂O

CH₀ - C - COOH

² I

worin R^ und R₂ gleich oder verschieden sein können und je Wasserstoffatom oder Methylgruppe darstellen, oder sie können zusammen Methylengruppe bilden, oder einesSalz davon, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der Formel

CH₂ -Y- COOH

worin R«. und R₂ die oben beschriebenen Bedeutungen haben und Y eine Gruppe der Formeln

0 S OH X

i! Ii I I

-G-, -0-, -C-, oder -C- ist,

I I

H E

Wölfin !.Wasserstoffatom darstellt,, oder ein Salz davon in Gegenwart ©inea Ininogruppen-Bonora in einem wäßrigen Medium oder einem wäßrigen Kulturmedium der Einwirkung eines

- 18 -

109 80 9/2262

Mikroorganismus unterworfen wird, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus

Bakterien der Gattungen Brevibacterina, Micrococcua. Corynebacteriua _t Paeudomonaa, Aerobacter, Serratia, Bacillus. Sarcina und Eacherlchla;

Schimmelpilzen der Gattungen Aaperglllua, Penicillins!, Mncor und HelalnthoaporiuH;

Strahlenpilzen der Gattung Straptomyces, und

Hefen der Gattungen

SaccharoBjcea und

Candida.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der Mikroorganisnae ein Glied 1st, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Bakterien, welche su den Gattungen BreYJbacterluB und Corynebacterlnsi gehören.
3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dafi der Mikroorganismus ist

BrevibacteriuM a—

BreYlbacteriu» roaeu» oder Corynebacteria« equl.

- 19 -

109809/2262

20AH18. - 19 -
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sowohl R. wie auch R« für Methylgruppe stehen

tt

und ¥ die Gruppierung der Forael -C- ist.

109809/2262