DE1642619A1 - Verfahren zur Herstellung von Enzym- oder Proteintrockenpraeparaten - Google Patents

Description

• verfahren zur Herstellung von Enzym-oder Proteintrock enpräparaten

  Es ist bekannt, daß Eiweißstoffe aus wässrigen Medien

  mit Tannin in form von wasserunlöslichen Verbindungen

  ausgefällt werden können. Hach einem bekannten Verfahren

  werden aus den wasserunlösliohen.Tannatexi anorganische

  Salze mit Wasser entfernt und anaohliegend dis Enzyme

  durch Behandeln, der Tannate mit Xischängen aus Wasser

  und organischen Lösungsmitteln extrahiert. Gemäß einem

  anderen verfahren wird über die Entfernung der Amylogluoo--

  sidase mit Hilfe von ldgnin und/oder Gerbsäure von solchen

  Enzymen berichtet,. die die Stärkekonvert:.erung behindern.

  Es wurde nun gefunden, daß Proteine insbesondere Enzyme

  aus wässrigen Medien, beispielsweise aus mikrobiellen

  Kulturlösungen, mit synthetischen Gerbstoffen in vorteil-

  hafter Weise gefällt werden können.

  Erfindungsgemäß handelt es sich bei den synthetischen Gerb-

  stoffen# die zur Fällung von Eiweigetoffen, insbesondere

  Enzymen# benutzt werden, um Kondensationsprodukte von einr-

  und mehrwertigen Phenolen, Phenol¢arb®nsäuren, Phenolsulfon-

  eäuren sowie phenolaultonamideao Tägin@7.fouei@uren uad

  aromatisohen.»inen, dir -im Xoleka Xoblnstofi-v gulfon-v

  Sulfoxy-q Sulf onimidbriicken enthalten.

  Weiterhin umfaßt die Erfindung die Gruppe der synthetischen

  Gerbstoffe, die durch. Kondensation aus Polyolen (auch

  Zaokern) mit aliphatisohen Oxy- und/oder Aminosäuren

  erhalten werden,

  Gegenstand der Erfindung ist die Verwendung von anionischen

  und kationischen.synthetischen Gerbstoffen zur Fällung von

  Proteineng insbesondere von Enzymen aus mikrobiellen Kultur-

  lösungen oder anderweitigen pflanzlichen oder tierischen

  Ettraktlösurigene

  Während die Fällung von S3weißstoffen bisher mit Tannin,

  lignin oder natürlichen Gerbsäuren erfolgte, werden hier

  synthetische Gerbstoffe verwendet, die gleiche 7ällungs-

  ergebnisse bei wesentlich geringeren Kosten gestatten.

  Erfindungsgemäß werden eiweißhaltige Zö sungen mit synthe-

  tischen Gerbstoffen versetzt, so das der Gerbstoffanteil

  bevorzugt -0* 5 % bis 5 9: und mehr beträgt, Die Pällung kann.

  in der.Wärme (bin 5000), bei iimmertemperatur oder-unter

  KUlung vorgenommen werdene Das unter Rühren ausgefällte

  Eiwei"erbotoffaddukt wird durch Zentrifugierent giltrie--

  .ren oder Dtkantieren vom Überstand abgetrennt und an..

  schließend entweder mit Wasser oder mit organischen Zöeunge-

  Mitteln verletzt, Vermitteln des Wagnero werden übersohüesinn.'

  so Oerbetoffgaben sowie anorganische Salze sufgenommen#

  uuld durch die Verwender organischer lösuxgomittel werden

  weitere .Salze und die gebundenen Gerbstoffe aus dem Fällunge. produkt entfernt. Als organische Lösungsmittel bewährten sich ein- und mehrwertige Alkohole sowie mit Wasser mischbare Ketone, Glycoläther, Dioxen und Tetrahydofuren. Um einen Ahtivitätsabfall der enzymhaltigen Pällungsprodukte zu vermeiden, hat die Extraktion der zynthetischen Gerb-. Stoffe in der Kälte bevorzugt zwischen 40C und +100C zu erfolgen. Das erhaltene Fällungaprodukt kann je naah den Reinheitsforderungen entweder erneut mit organischen Zö sungämitteln gewaschen oder sofort in üblicher Weise getrocknet werden.

  Beispiel 1: `

  Für die Fällu:ig von Amylase mird das K$.'l.t@@.` @@@ ;;

  Bacillus subtilis. benutzt® 1$5 1 ,-

  Kultur''ältrates werden ni!-'t:@-i@T=t:@

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  Gewaschen, Bein, Trocknen er.tstctien 3s7C

  Die Gesa::itni@tivität im Kaalturfiltrat )e°i,ir .:,-_@-"`

  Amylaseeinheiten (IB nach IUB), dieese,@@@tä@°1°_:@l@=@@ <.-Trockenprodur,.-Les 1 765 000 Amylaseeinhei ten. ä;@:rech-

  net sich eine Aktivitätsausbeute von 5235 Eü

  Beispiel 2t

  Für die Pällung von Protease wird das Kulturfiltrat vom

  Bacillus aubtilis benutzt. Zu 1000 m1 Piltrat mit einer

  Gesamtaktivität von 4780 Proteaseeinheiten (PU cgs) wird

  bei pH 7,0 eine Lösung eines synthetischen Gerbstoffes

  gegeben, dessen pH=Vlert ebenfalls auf PR 7,0 eingestellt

  ist. Der Gerbstoff entspricht dem Typ der Polykonden-

  sationsprodukte von mehrwertigen phenolen und a romatischen

  Sulfonsäuren (z.B. Skytan). Nach zweistündigem Rühren

  bei 300C wird vom Niederschlag abgetrennt und d er- Nieder=

  schläg zweimal mit Aceton ektrahiert und anschließend

  getrocknet. Es wird 2,20 g Trockenprodukt mit einer

  Gesamtaktivität von 3773. Proteaseeinheiten erhalten.

  Die Aktivitätsausbeute beträgt damit 78,9

Claims (2)

1. Patentansprüche s l.verfahr en zur Herstellung von Enzym- oder Prot eintrockenpräparaten mit niedrigem Salzgehalt, dadurch gekennzeichnet, daß die Fällung aus eiweißhaltigen Kulturlösungen , bzw. Kulturfiltraten mit anionischen, kationischen oder amphoteren Gerbstoffen durchgeführt-wird und daß die anschließende Extraktion der anorganischen Salze und der Gerbstoffe mit Wasser bzw. mit Gemischen aus Wasser und organischen Lösungsmitteln erfolgt, insbesondere mit ein- und/oder mehrwertigen Alkoholen und mit Wasser mischbaren Betonen, Glycoläthern, Dioxan und Tetrshydrofuran.
2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet; daB von den synthetischen Gerbstoffen (ein- bis mehrwertige Phenols, Phexrolsulfon-, Phenolcarbon- sowie higninsulfonsäuren und aromatische Amine) diejenigen zur Fällung von Eiweißstoffen verwendet werden, die Kohlenstoff-, 3ulfon-, Sulfoxy- und Sulfonimidbrücken besitzen oder über Bulfonamidgruppen verfügen, ferner auch Kondensationsprodukte aus Polyolen (einschließlich Zuckern) und aliphatischen Oxyeäuren und/oder Äminosäuren.