DE1174016B

DE1174016B - Verfahren zur Herstellung einer Lebend-Vaccine gegen Maul- und Klauenseuche

Info

Publication number: DE1174016B
Application number: DEB67300A
Authority: DE
Inventors: Dr Bernhard Schneider; Dr Hans-Joachim Bengelsdorff
Original assignee: Behringwerke AG
Current assignee: Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
Priority date: 1962-05-18
Filing date: 1962-05-18
Publication date: 1964-07-16
Also published as: BR6349184D0; GB1039722A

Description

Verfahren zur Herstellung einer Lebend-Vaccine gegen Maul- und Klauenseuche Gegenstand der Patentanmeldung B 61584 IVa/30h (deutsche Auslegeschrift 1155 881) ist ein Verfahren zur Herstellung einer Lebend-Vaccine gegen Maul-und Klauenseuche (MKS), das dadurch gekennzeichnet ist, daß man virulentes MKS-Virus in vorzugsweise primären Zellkulturen so lange kontinuierlich Passagen unterwirft und dadurch modifiziert, daß es sich nach parenteraler, vorzugsweise intramuskulärer Injektion in Klauentieren zwar noch vermehrt, aber keine klinisch erkennbare Erkrankung hervorruft.
In dem genannten Verfahren werden somit virulente MKS-Viren durch eine große Anzahl kontinuierlicher Passagen in vorzugsweise primären Zellkulturen attenuiert und danach eine Passage zur Herstellung einer MKS-Lebend-Vaccine verwendet.
Bei der Züchtung in Kälbernierenkulturen bei 370 C läuft der Attenuierungsvorgang jedoch sehr langsam ab, für einen brauchbaren Impfstamm sind daher sehr viele Passagen notwendig. Bei der Weiterzüchtung in Kälbernierenkulturen bleiben die immunogenen Eigenschaften der so attenuierten Viren allerdings stabil.
Es wurde nun eine weitere Ausgestaltung des Verfahrens nach Patentanmeldung B 61584 IVa/30h zur Herstellung einer Lebend-Vaccine gegen Maul- und Klauenseuche gefunden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man virulentes MKS-Virus in vorzugsweise primären Zellkulturen so lange kontinuierlich Passagen unterwirft und dadurch adaptiert, daß es den Zellrasen einer Passage vollständig zerstört, danach bei erniedrigter Bebrütungstemperatur, vorzugsweise bei einer um 7 bis 110 C, vorteilhaft etwa um 90 C erniedrigten Bebrütungstemperatur weiterzüchtet und dadurch erreicht, daß es sich nach parenteraler, vorzugsweise intramuskulärer Injektion an Klauentieren zwar noch vermehrt, aber keine klinisch erkennbare Erkrankung hervorruft.
Das erfindungsgemäße Verfahren hat vor den bisher bekannten Verfahren den Vorteil, daß man mit einer erheblich geringeren Anzahl Passagen, die für die Herstellung eines attenuierten MKS-Virus für die MKS-Vaccine ausgeführt werden müssen, auskommt und daß die immunogenen Eigenschaften der erfindungsgemäß attenuierten MKS-Viren bei der Weiterzüchtung stabil bleiben. Bei diesem Verfahren ist es nicht nötig, für die Herstellung der für die Produktion der MKS-Vaccine erforderlichen MKS-Viren auf eine andere Zellart überzugehen. Auch die Verwendung von Kälbernierenzellen bedeutet keine Schwierigkeit, da Kälbernierenzellen leicht beschafft werden können. Als besonderer Vorzug ist schließ- lich anzusehen, daß die Dauerpassagen in einer physiologischen Salzlösung ausgeführt werden und daß auf besondere biologische Zusätze verzichtet werden kann.
Die serologische Typenbestimmung des auf Kälbernierenzellen bei vorzugsweise 280 C gezüchteten Virus ist sicher und klar erkennbar. Des weiteren wird ein restloser virusspezifischer Zellzerfall bei der genannten Temperatur erreicht. Als entscheidender Vorteil des erfindungsgemäßen Verfahrens ist aber zu betrachten, daß bei Verwendung von Kälbernierenzellen und Einhaltung einer Bebrütungstemperatur von 280 C gleichbleibende und besonders hohe Virustiter erhalten werden.
Beispiel Aus Nieren frisch getöteter Kälber werden in bekannter Weise durchTrypsinandauung und Züchtung auf der Glasoberfläche von Kulturgefäßen Zellkulturen hergestellt. Die so verbreitete Gewebekultur wird mit einem 100/obigen Extrakt eines Rinderaphthen-Naturvirus des Typs C beimpft. Das Medium wird 24 Stunden post infectionem geerntet und von Kultur zu Kultur weiterverimpft. Nach 60 Passagen bei 370 C ist das Virus so weit an die Gewebekultur adaptiert, daß die 61. Passage bei 280 C ausgeführt werden kann. Nach 70 Passagen bei 280 C ist das Virus attenuiert. Von dem so gewonnenen attenuierten Virus wird für die Produktion eines Impfstoffes eine genügend große Menge hergestellt.
Zur Prüfung der Unschädlichkeit und Wirksamkeit werden sechs Rinder intramuskulär mit der erfindungsgemäß hergestellten Vaccine geimpft. Die Impfdosis beträgt 1 mol; die Impfdosis enthält i07-9 mittlere gewebekulturinfektiöse Einheiten (berechnet nach Behrens und Kärber). Die Tiere zeigten keine klinisch erkennbare Erkrankung. 2 Wochen nach der Impfung werden die Rinder einer Belastungsinfektion mit dem homologen Rinder-Naturvirus unterworfen. Die geimpften Rinder bleiben gesund, während nicht geimpfte Kontrolltiere, die der gleichen Belastungsinfektion unterzogen wurden, generalisiert erkrankten.

Claims

Patentanspruch: Verfahren zur Herstellung einer Lebend-Vaccine gegen Maul- und Klauenseuche durch Züchten von virulentem MKS-Virus in vorzugsweise primären Zellkulturen in kontinuierlichen Passagen und Verarbeiten der abgeschwächten Viren zu einer Vaccine nach Patentanmeldung B 61584 IVa/30h (deutsche Auslegeschrift 1155881), dadurch gekennzeichnet, daß man das virulente MKS-Virus bei etwa 370 C so lange kontinuierlich Passagen unterwirft, bis es den Zellrasen einer Passage vollständig zerstört, danach bei erniedrigter Bebrütungstemperatur, vorzugsweise bei einer um 7 bis 110 C, vorteilhaft etwa um 9° C erniedrigten Bebrütungstemperatur weiterzüchtet, bis es sich nach parenteraler, vorzugsweise intramuskulärer Injektion an Klauentieren zwar noch vermehrt, aber keine klinisch erkennbare Erkrankung hervorruft.