CZ457199A3

CZ457199A3 - Antagonisté receptoru pro NMDA na bázi 1aminoalkylcyklohexanu

Info

Publication number: CZ457199A3
Application number: CZ19994571A
Authority: CZ
Inventors: Markus Gold; Wojciech Danysz; Christopher Graham Raphael Parsons; Ivars Kalvinsh; Valerjans Kauss; Aigars Jirgensons
Original assignee: Merz + Co. Gmbh & Co.
Priority date: 1997-06-30
Filing date: 1998-06-24
Publication date: 2000-06-14
Also published as: JP2002511873A; HK1029574A1; AR010708A1; HUP0100266A3; JP3963488B2; EP1009732B1; AU8804298A; FI19992801A; IL133235A0; ZA985678B; DK1009732T3; TW593225B; UA61962C2; AU724974B2; CZ293248B6; IL133235A; PT1009732E; DE69814878T2; EA200000080A1; ATE240936T1

Description

Oblast techniky

1-Amino-alkylcyklohexanové sloučeniny, které působí systémově jako antagonisté receptoru pro NMDA, farmaceutické preparáty tvořené těmito sloučeniny, metoda jejich přípravy a metoda léčby chorob CNS, které zahrnují poruchy glutamátergní transmise.

Dosavadní stav techniky

Antagonismus glutamátových receptoru N-metyl-D-aspartátového (NMDA) typu má potencionálně široké terapeutické uplatnění (19) . Funkční inhibice receptoru pro NMDA může být dosaženo prostřednictvím účinku na různých rozpoznávacích místech, jako jsou například primární přenosové místo, strychnin-nesenzitivní glycinové místo (glycin_B) , polyaminové místo a fencyklidinové místo umístěné uvnitř kationtového kanálu. Kanálové blokátory receptoru pro NMDA fungují nekompetitivním způsobem v závislosti na používání”, což znamená, že obvykle blokují kanál v otevřeném stavu. Tato závislost na používání byla interpretována tak, že silnější aktivace receptoru by měla vést k většímu stupni antagonismu. Z takového způsobu účinku dále vyplývalo, že tato třída antagonistů může být zejména užitečná v případech nadměrné aktivace receptorů pro NMDA, jako jsou epilepsie, ischémie a trauma. Avšak první klinické zkušenosti se selektivním vysoce afinitním, na používání silně závislým nekompetitivním antagonistou recptoru pro NMDA (+)-5-metyl10, ll-dihydro-5H-dibenzocyklohepten-5,10-imin maleátem (( + )-MK801) byly zklamáním. Zejména terapeutická účinnost u epilepsie byla slabá při výskytu určitých psychotropních vedlejších účincích pozorovaných v terapeutických dávkách. Tato pozorování spolu s faktem, že u jedinců s abusem fencyklidinu se vyskytovaly podobné psychotropní symptomy, vedla k závěru, že nekompetitivní antagonismus receptorů pro NMDA není perspektivním terapeutickým přístupem.

• A • · • A • · · A A A AAAA

AAAAAAA A A AA AA A

A A AAA AAAA

AAAA A AA AAAA A· AA

Avšak použití podrobnějších elektrofyziologických metod ukazuje, že neexistuje rovnítko mezi různými nekompetitivními antagonisty, protože faktory tohoto účinku, jako jsou rychlost blokády receptoru (kinetika plus-minus) a závislost na voltáži, mohou určovat farmakodynamické rysy in vivo, tj . také terapeutickou bezpečnost. Paradoxně může být žádoucí použít látky s nízkou až mírnou spíše než vysokou afinitou. Tyto výsledky podnítily přehodnocení koncepce nekompetitivního antagonismu receptoru pro NMDA ve vývoji léku (19,22).

V současnosti je mnoho takových látek v různých stádiích vývoje, například karvedilol, ADCI, ES 242S, remacemid, felbamát a budipin. Na druhou stranu nekompetitivní antagonisté receptoru pro NMDA, jako jsou například amantadin a memantin, které splňují výše uvedená kritéria, byly klinicky používány několik let v léčbě Parkinsonovy nemoci a demence, a jen vzácně se u nich vyskytují v terapeutických dávkách nežádoucí účinky.

Popis vynálezu

S ohledem na výše zmíněné důkazy jsme vyvinuly celou řadu nekompetitivních antagonistů receptoru pro NMDA na bázi 1aminoalkylcyklohexanu. Předkládaná studie byla zaměřena na srovnání antagonistických vlastností derivátů 1aminoalkylcyklohexanu vůči receptoru pro NMDA v receptorověvazebných studiích, v experimentech políčkové aktivace, v testování excitotoxicity in vitro, na třech konvulzních modelech a na dvou modelech porušení motoriky.

Substituenty těchto 1-aminoalkylcyklohexanů jsou detailně uvedeny v Tabulce 6.

Bylo prokázáno, že určité 1-aminoalkylcyklohexany mají výraznou a nepředvídatelnou antagonistickou aktivitu vůči receptoru pro NMDA. V důsledku výše zmíněné vlastnosti jsou tyto látky vhodné k léčbě širokého pole nemocí CNS, které zahrnují poruchy glutamátergní transmise, zejména ve formě farmaceutického

4 • 4 • · · · · · · 4 44 4

4 4 4 4 4 ·

4 4 44 44 4

4 4 4 4 4 4

4444 44 44 preparátu, v kterém jsou přítomny spolu s jedním nebo více, farmaceuticky přijatelnými diluenty, nosiči nebo excipienty.

Předmětem předkládaného vynálezu je zajistit nové farmaceutické sloučeniny, které jsou antagonisty receptorů pro NMDA na bázi 1-aminoalkylcyklohexanu, a jejich farmaceutické preparáty. Dalším předmětem předkládaného vynálezu je zajistit novou metodu léčby, eliminace, zmírnění nebo paliace chorob CNS, které zahrnují poruchy glutamátergní transmise, za použití takové sloučeniny definované v předkládaném vynálezu nebo farmaceutického preparátu obsahující totožnou sloučeninu. Dalším předmětem předkládaného vynálezu je zajištění procesu výroby řečených látek na bázi 1-aminoalkylcyklohexanu. Dodatečné předměty předkládaného vynálezu budou patrné z dalšího textu a ještě další budou zřejmé každému znalému oboru.

Myšlenka předkládaného vynálezu může být sumarizována inter alia v následujících slovech:

1-aminoalkylcyklohexanová sloučenina vybraná z těchto sloučenin

kde n+m =0, 1 nebo 2 kde R¹ až R⁹ jsou nezávisle vybrány z vodíku a nižšího alkylu (1-6C), přičemž alespoň R¹, R⁴ a R⁵ je nižší alkyl;

taková	sloučenina,	kde	R¹	až	R⁵ je metyl;
taková	sloučenina,	kde	R¹	je	etyl;
taková	sloučenina,	kde	R²	je	etyl;
taková	sloučenina,	kde	R³	je	etyl;

• · » · · · · ·

taková	sloučenina,	kde	R⁴	je etyl;
taková	sloučenina,	kde	R⁵	je etyl;
taková	sloučenina,	kde	R⁵	je propyl;
taková	sloučenina,	kde	R⁶	nebo R⁷ je	metyl;
taková	sloučenina,	kde	R⁶	nebo R⁷ je	etyl; a
taková	sloučenina,	kde	sloučenina	je vybrána

složené z

1-amino-l,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, 1-amino-l,3,5,5-tetrametyl-3-etylcyklohexanu, 1-amino-l,5,5-trimetyl-3,3-dietylcyklohexanu, 1-amino-l,5,5-trimetyl-cis-3-etylcyklohexanu, 1-amino-l,5,5-trimetyl-trans-3-etylcyklohexanu, l-amino-l-etyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexanu, l-amino-l-propyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexanu, N-metyl-l-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, N-etyl-l-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, farmaceuticky přijatelných solí.

j ej ich

Navíc je metoda léčby živočichů, zaměřená na onemocnění pomocí antagonistů receptorů pro NMDA, podáním množství 1-aminoalkylcyklohexanové sloučeniny řečeným živočichům, kterážto sloučenina je vybrána ze skupiny sloučenin charakterizovaných vzorcem zmírněni tvořena kde R* je - (CH₂) _n“ (CR⁶R⁷¹m-NR⁸R⁹

kde n+m =0, 1 nebo 2 kde R¹ až R⁹ jsou nezávisle vybrány z vodíku a nižšího alkylu (1-6C), který účinně zmírňuje řečená onemocnění;

taková metoda, kde R¹ až R⁵ je metyl; taková sloučenina, kde R¹ je etyl; taková metoda, kde R² je etyl;

• ·

taková	metoda,	kde	R³	je	etyl;
taková	metoda,	kde	R⁴	je	etyl;
taková	metoda,	kde	R⁵	je	etyl;
taková	metoda,	kde	R⁵	je	propyl;
taková	metoda,	kde	R⁶	nebo R⁷ je	metyl;
taková	metoda,	kde	R⁶	nebo R⁷ je	etyl;	a
taková	metoda,	kde	sloučenina	je	vybrána

složené z

1-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu,

1-amino-l,3,5,5-tetrametyl-3-etylcyklohexanu,

1-amino-1,5,5-trimetyl-3,3-dietylcyklohexanu,

1-amino-l,5,5-trimetyl-cis-3-etylcyklohexanu,

1-amino-l,5,5-trimetyl-trans-3-etylcyklohexanu, l-amino-l-etyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexanu, l-amino-l-propyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexanu,

N-metyl-l-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, a

N-etyl-l-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, a jejich farmaceuticky přijatelných solí; a taková metoda, kde je sloučenina podána ve formě farmaceutického preparátu obsahujícího sloučeninu v kombinaci s jedním nebo více farmaceutickými diluenty, excipienty nebo nosiči.

Dále farmaceutický preparát tvořený antagonisty receptorů pro NMDA účinným množstvím na bázi 1aminoalkylcyklohexanové sloučeniny vybrané z následujících

·· • 4 · · 4 9--9 · ·· ·

9 9 4 4 4 9 4 4 4

4444 4 4 4 4 ·· · 9 4 · 4 9 4 4 4 9 9

4499 9 49 4999 94 94 kde R¹ až R⁹ jsou nezávisle vybrány z vodíku a nižšího alkylu (1-6C), přičemž alespoň R¹, R⁴ a R⁵ je nižší alkyl, v kombinaci s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými diluenty, excipienty nebo nosiči;

takový	farmaceutický	preparát,	kde	R¹	až	R⁵ je metyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R¹	je	etyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R²	je	etyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R³	je	etyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R⁴	je	etyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R⁵	je	etyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R⁵	je	propyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R⁶	nebo R⁷ je metyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde	R⁶	nebo R⁷ je etyl;
takový	farmaceutický	preparát,	kde sloučenina je vybrána

ze skupiny složené z

1-amino-l,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu,

1-amino-l,3,5,5-tetrametyl-3-etylcyklohexanu,

1-amino-l,5,5-trimetyl-3,3-dietylcyklohexanu,

1-amino-l,5,5-trimetyl-cis-3-etylcyklohexanu,

N-metyl-l-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, a

N-etyl-l-amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu, a jejich farmaceuticky přijatelných solí.

Detailní popis vynálezu

Následující detaily a podrobné Příklady jsou uvedeny pouze pro ilustraci a nejsou míněny jako omezující.

• ·

9 • · · • · · ··

Metody

Chemie

Příprava 3-propyl-5,5-dimetyl-2-cyklohexen-l-onu (1-7) • · · 0 0 0 0 · · • · 0 · · · 0 · · •0 ·· · »000 • •••00 0 0 00 00 0

000 0000 0 · 0 · 0 0 0 «· · 0

Roztok 3-etoxy-5,5-dimetyl-2-cyklohexen-l-onu (1) (5,04 g, 30 mmol) v éteru byl po kapkách přidán k promíchanému roztoku k propylmagnézium jodidu připraveného z 90 mg magnézia a 90 mmol 1-jodopropanu v 60 ml éteru. Po promíchání trvajícím 1 hodinu při pokojové teplotě byla reakční směs podrobena reakci s 5% roztokem H2SO4. Organická fáze byla oddělena, promyta solným roztokem, vysušena pomocí MgSO4 a odpařena za vzniku hrubého oleje, který byl separován na sloupci silika gelu a eluován směsí hexan-etyl acetátu. Cyklohexenon (1-7) byl získán ve formě bezbarvého oleje (2,0 g, 70%). ¹H NMR (CDC1₃, TMS) δ: 0,92 (3H, t, J=7 Hz); 1,03 (6H, s) ; 1,3-1,75 (2H, m) ; 2,16 (2H, t, J=7 Hz); 2,17 (2H, d, J=l,5 Hz); 2,21 (2H, s) ; a 5,87 ppm (ÍH, t, J=l,5 Hz).

Následující známé cyklohexenony sloučenin 2:

byly použity k přípravě

1-1 (]

R¹ = R² = R³ = H) (komerčně dostupný), 1-2 (R³ = Me) * (komerčně dostupný) ,

1-3 (R² = R³ = Me) (komerčně dostupný),

1-4 (R¹ = R² = Me) (2) ,

1-5 (R¹ = R² - R³ = Me) (komerčně dostupný),

1-6 (R¹ = R² = Me, R³ = Et) (3) , *Rⁿ = H, pokud vynecháno

Další výchozí materiály 1_ jsou připraveny stejným nebo podobným způsobem.

Obecný postup pro přípravu cyklohexanonů 2.

Bezvodý chlorid měďnatý (1) (7,5 mmol) byl přidán k ochlazenému roztoku jodidu alkylhořečnatého (15-18 mmol) v éteru. Směs byla promíchávána v inertní atmosféře po dobu 5 minut a roztok 2cyklohexen-l-onu 1 (10 mmol) v éteru byl po kapkách přidán při

Φ 4 4 4 · 4 4« · · • 44 4 4 · 4 4 · 4 ·

4*4 44 4 «444

4444494 4 4 44 · 4 ·

4 444 44··

4444 4 44 4444 44 44 udržení teploty pod -5°C. Po přidání ketonu byla reakční směs promíchávána po dobu 1 hodiny a opatrně neutralizována nasyceným roztokem chloridu amonného. Tradiční postup Grignardovy reakce vedl k dosažení hrubého materiálu, který byl separován na sloupci silika gelu a eluován směsí petroléteru a etylacetátu. Cyklohexanony 2 byly získány ve formě olejů.

Výtěžky a ¹H NMR spektrální data sloučenin 2 jsou uvedeny v Tabulce 1.

Následující známé cyklohexanony 2_ byly použity k přípravě sloučenin _3^;

2-1 (R⁴ = Me)* (komerčně dostupný),

2-2	(R =	Et) (4),
2-3	(R⁴ =	= Pr) (5),
2-4	(R³	= R⁴ = Me) ( 6) ,
2-5	(R³	= Me, R⁴ = Me) (7) ,
2-6	(R³	= Me, R⁴ = Pr) (8) ,
2-7	(R¹	= R⁴ = Me) (8) ,
2-8	(R²	= R³ = R⁴ = Me) (10) ,
2-9	(R² =	= R³ = Me, R⁴ = Et) ,	(11)
2-13	(R¹	= R² = R³ = R⁴ = Me)	(ko	merčně dostupný),
2-14	(R¹	= R² = R³ = Me, R⁴ =	Et)	(10) ,
2-15	(R¹	= R² = R³ = Me, R⁴ =	Pr)	(10) ,
*Rⁿ =	= H,	pokud vynecháno

Další meziproduktové cyklohexanony _2 jsou připraveny stejným nebo podobným způsobem. Cyklohexanony 2 byly použity k přípravě sloučenin 3:

Obecný postup pro přípravu alkylcyklohexanolů 3.

Éterový roztok jodidu alkylhořečnatého (3-4 ekvivalenty) byl po kapkách přidán k ochlazenému roztoku cyklohexanonu 2_ v éteru. Směs byla promíchávána po dobu 1 hodiny při okolní teplotě a pečlivě promíchána s nasyceným vodným chloridem amonným.

4 4 4 • 4 4

4 4 ♦ 4 4 • 4444

4

4 4 4 4

4 4« » · 4 *4

Tradiční postup Grignardovy reakce vedl ke vzniku diastereomerních alkoholů 3, které byly separovány na sloupci silika gelu a eluovány směsí petroléteru a etylacetátu.

Výtěžky a ¹H NMR spektrální data sloučenin 3 jsou uvedeny v Tabulce 2.

Následující známé cyklohexanoly J3 byly použity k přípravě sloučenin 4_:

3-1	( (R³)	(R⁴)	= R⁵	= Me)* (9	) , tj	. R³
3-4	(R³ =	R⁴	= Me,	R⁵ = Me)	(12) ,
3-5	(R³ =	R⁵	= Me,	R⁴ = Et)	(13) ,
3-7	(R¹ =	R⁴ =	= R⁵ =	Me) (14),
3-8	(R¹ =	R³	= R⁴ =	R⁵ = Me)	(10) ,
3-13	(R¹ =	= R²	= R³	= R⁴ = R⁵ =	-- Me)	(10
3-14	(R¹ =	= R²	= R³	= R⁴ = Me,	R⁵ =	Et)

*Rⁿ = H, pokud vynecháno

Další meziproduktové cyklohexenoly _3 jsou připraveny stejným nebo podobným způsobem.

Obecný postup pro přípravu 1-alkyl-l-azidocyklohexanů 4.

Alkohol _3 byl smíšen s 1,7 - 2 N roztokem kyseliny hydrazové (10-13 ekvivalentů) v chloroformu a ochlazen v ledové lázni. Poté byl po kapkách přidán roztok TiCl₄ (1,2 ekvivalentů) v chloroformu, zatímco teplota byla udržována pod 5°C. Směs byla promíchávána po dobu 24 hodin, chromatografována na sloupci oxidu hlinitého a eluována chloroformem. Odpařením solventu byly získány diastereomerní azidy _4, které byly purifikovány chromatografií na silika gelu a eluovány lehkým petroléterem.

Výtěžky a ¹H NMR spektrální data sloučenin 4_ jsou uvedeny v Tabulce 3.

• 9 9 •••fe · ·

Další meziproduktové 1-alkyl-l-azidocyklohexany 4 jsou připraveny stejným nebo podobným způsobem.

«· fefe fefe • · · · · · · fe · · · fe · • · · · · · · • · 9 9 9 9

0 99 0 9 9»

Příprava l-nitrometyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexenu (6).

Roztok 3,3, 5,5-tetrametylcyklohexanonu (2-13) (1,54 g, 10 mmol) a etylendiaminu (60 mg) v nitrometanu (45 ml) byl zahříván pod zpětným chlazením v argonové atmosféře po dobu 25 hodin. Poté byl ve vakuu odebrán nadbytek nitrometanu, reziduum bylo purifikováno chromatograficky na silika gelu a eluováno směsí hexan-etyl acetátu (6:1). Bylo získáno 1,2 g (61%) produktu ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃, TMS) δ 0,96 a 1,03 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH₃); 1,34 (2H, s, 4-CH₂) ; 1,82 (2H, br s, 6CH₂) ; 4,80 (2H, s, CH₂NO₂) a 5,64 ppm (1H, br s, C=C-H) .

Příprava etyl 3,3,5,5-tetrametylcyklohexylidenacetátu (7).

K promíchanému roztoku trietyl fosfonoacetátu (49,32 g, 0,22 mol) v suchém THF (180 ml) byl přidán pod argonem za stálého chlazení studenou vodou NaH (8,8 g, 0,22 mol, 60% suspenze v minerálním oleji). Promíchávání pokračovalo po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě a poté byl během 10 minut přidán roztok

3,3,5,5-tetrametylcyklohexanonu (2-13) (30,85 g, 0,2 mol) a výsledná směs byla zahřívána pod zpětným chlazením po dobu 22 hodin. Roztok byl nalit na led (400 g), produkt byl extrahován éterem (4 x 150 ml) a roztok vysušen síranem hořečnatým. Po zakoncentrování ve vakuu bylo olejové reziduum destilováno při 145°C (11 mm) za vzniku 36,8 g (86%) sloučeniny _6 ve formě oleje.

^ΧΗ NMR (CDCI3, TMS) δ 0,96 a 0,98 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH₃); 1,27 (3H, t, CH₃-etyl) ; 1,33 (2H, m, cyklohexan 4-CH₂) ; 1,95 a 2,65 (2H, q, CH₂-etyl) a 5,69 ppm (1H, s, =C-H).

* · ··· 4 · 4 4 4 · 4 · • · · ·· 4 » 4 4 · • 4444 4 4 · 4 4 4 4 4 ·

4 444 444·

4444 · 44 4444 4· 44

Příprava etyl 3,3,5,5-tetrametylcyklohexylacetátu (8).

Etyl 3,3,5,5-tetrametylcyklohexylidenacetát (2) (4,48 g, 20 mmol) v etanolu (100 ml) byl hydrogenován pomocí 10% Pd/C (0,22 g, 5 váhových %) při 10 atm. Po dobu 18 hodin. Filtrací přes Celite^(tm) a odpaření vedlo k získání 4,28 g (95%) sloučeniny 8 ve formě oleje.

¹H NMR (CDC1₃, TMS) δ 0,89 a 1,02 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH3); 1,26 (3H, t, J=7 Hz, CH₃-etyl) ; 0,6-1,55 (7H, m, protony kruhu); 2,13 (2H, m, 2-CH₂) ; a 4,12 ppm (2H, q,

J=7 Hz, CH₂-etyl).

Příprava_2-metyl- (3,3,5,5-tetrametylcyklohexyl) -propan-2-olu (9) .

Roztok etyl 3, 3, 5,5-tetrametylcyklohexylacetátu (8_) (2,26 g, 10 mmol) v éteru (20 ml) byl po kapkách přidán k 2M roztoku jodidu metylhořečnatého v éteru (20 ml) během 15 minut za stálého chlazení ledovou vodou. Směs byla vařena pod zpětným chlazením po dobu 2 hodin, ochlazen a doplněn nasyceným vodným NH₄C1. Po tradičním postupu byl produkt purifikován na sloupci silika gelu, eluován směsí hexanu-etylacetátu (20:1), což vedlo ke vzniku 1,7 g (80%) sloučeniny 9 ve formě oleje.

^XH NMR (CDCI3, TMS) Ó 0,86 a 1,00 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH₃); 1,23 (6H, s, a-CH₃) ; 1,36 (2H, d, J=5 Hz, -CH₂-) ; 0,6-2,04 ppm (8 H, m, protony a OH skupiny kruhu) .

Příprava 2-metyl- (3,3,5,5-tetrametylcyklohexyl)-propyl-2-azidu (10) ·

Boron trifluorid éterát (0,77 g, 0,69 ml, 5,44 mmol) byl po kapkách přidán k promíchanému roztoku 2-metyl-(3,3,5,5tetrametylcyklohexyl) -propan-2-olu (_9) (0,96 g, 4,53 mmol) a trimetylsilyl azidu (0,63 g, 0,72 ml, 5,44 mmol) v benzenu (10 ml) . Po promíchávání trvajícím 24 hodin při pokojové teplotě byla směs nalita do vody (20 ml) . Organická fáze byla separována a promyta nasyceným vodným NaHCO₃ (10 ml) a φφ φ φφ ·· φφ φφ φφφ · · · · φ φ φ φ φφφ · · · « · φ φ φφφφφφ» · * · φ φ φ φ • · φφφ φφφφ φφφφ · φφ φφφφ φφ φφ salinickým roztokem (10 ml) . Roztok byl vysušen pomocí MgSO₄, zfiltrován a zakoncentrován. Hrubý produkt byl purifikován na sloupci silika gelu, eluován hexanem, což vedlo ke vzniku 0,56 g (52%) sloučeniny 10 ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃, TMS) δ 0,87 a 1,01 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH3); 1,27 (6H, s, OC-CH3) ; 1,36 (2H, d, J=5 Hz, —CH₂—); 0,6-1,85 ppm (7 H, m, protony kruhu).

Příprava 2-(3,3,5,5-tetrametylcyklohexyl)-etanolu (11).

Roztok etyl 3,3,5,5-tetrametylcyklohexylacetátu (_8) (1,8 g, 8,0 mmol) v éteru (30 ml) byl po kapkách přidán k promíchané suspenzi lithium aluminium hydridu (0,9 g, 24,0 mmol) v éteru (30 ml), který byl ochlazen v ledové lázni. Reakční směs byla vařena pod zpětným chlazením po dobu 3 hodin, ochlazena a reziduální lithium aluminium hydrid byl odstraněn vodou. Vodná vrstva byla separována a dvakrát extrahována éterem. Kombinované éterové fáze byl promyty salinickým roztokem, vysušeny pomocí MgSO₄, zfiltrovány a odpařeny. Hrubý produkt byl purifikován chromatograficky na silika gelu, eluován směsí hexanu-etylacetátu (4:1), což vedlo ke vzniku 1,2 g (79%) sloučeniny 11 ve formě oleje.

¹H NMR (CDCI3, TMS) δ 0,89 a 1,00 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH₃); 1,44 (2H, q, J=7 Hz, 2-CH₃) ; 0,55-1,95 (8H, m, protony a OH skupiny kruhu) a 3,70 ppm (2H, t, J=7 Hz, CH₂O) .

Příprava_2-(3,3,5,5-tetrametylcyklohexyl)-etylmetansulfonátu (12) .

Roztok metansulfonyl chloridu (1,03 g, 0,7 ml, 9,0 mmol) v suchém benzenu (20 ml) byl po kapkách přidán k promíchanému roztoku 2-(3,3,5,5-tetrametylcyklohexyl)-etanolu (11) (1,1 g, 6,0 mmol) a trietylaminu (1,2 g, 1,7 ml, 12 mmol) v benzenu )40 ml) za stálého chlazení v ledové lázni. Reakční směs byla promíchávána při pokojové teplotě po dobu 3 hodin, poté • · • ·

AA · • · A • A A

A AAAA

A A A A * A • · · A ·

A A « A

A AAA A A A A A AAAA

AA AAAA AA AA zfiltrována na krátké koloně silika gelu a eluována benzenem. Odpaření solventu vedlo ke vzniku 1,48 g (94%) sloučeniny 12 ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃, TMS) δ 0,88 a 0,98 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH3) ; 1,62 (2H, q, J=7 Hz, 2-CH₂) ; 0,65-2,0 (7H, m, protony kruhu), 3,0 (3H, s, CH3-SO₂) a 4,29 ppm (2H, t, J=7 Hz, CH₂O).

Příprava 2-(3,3,5,5-tetrametylcyklohexyl)-etylazidu (13).

Směs azidu sodného (2,27 g, 34,2 mmol), 2-(3,3,5,5tetrametylcyklohexyl)-etylmetansulfonátu (12) (1,46 g, 5,57 mmol) a dimetylsulfoxidu (20 ml) byla promíchávána při pokojové teplotě po dobu 48 hodin, naředěna vodou (50 ml) a extrahována éterem (3 x 30 ml) . Organická fáze byla promyta salinickým roztokem (30 ml), vysušena pomocí (MgSO₄) , zfiltrována a odpařena. Hrubý produkt byl purifikován chromatograficky na silika gelu, eluován hexanem, což vedlo ke vzniku 0,93 g (80%) sloučeniny 13 ve formě oleje.

^XH NMR (CDCI3, TMS) δ 0,87 a 0,99 (celkově 12H, oba s, cyklohexan 3,5-CH₂); 0,55-1,9 (7H, m, protony kruhu) a 3,31 ppm (2H, t, J=7 Hz, CH₂N₃) .

Příprava N-formyl-1,3,3,5,5-tetrametylcyklohexanaminu (14—1) roztoku (2,7 g, 15,6

1,3,3,5,5mmol) a

K důkladně promíchanému pentametylcyklohexanolu (.3-13) trimetylsilyl kyanidu (2,36 g, 23,8 mmol) v kyselině octové (2,5 ml) byla pod argonem přidána 98% kyselina sírová (4,66 g, 47,6 mmol) při udržení teploty pod -5°C. Směs byla míchána při pokojové teplotě po dobu 22 hodin, poté nalita na led (100 g), neutralizována 50% roztokem NaOH na pH 7 a extrahována éterem (3 x 30 ml). Kombinované éterové fáze byly promyty salinickým roztokem (50 ml), poté vysušeny pomocí MgSO₄ a odpařeny. Krystalické reziduum nažloutlé barvy bylo podrobeno reakci s acetonitrilem a zfiltrováno, což vedlo ke vzniku 2,5 g (80%) ·· « 4« 4« »4 ««

4 4 9 · · · · « 4 ·

4 4 »4 · 4 4 4 4 « · 4 »» 4 4 · « · 4 · « « · 4 4 4 4 4 4 4 ···· · «4 444« 44 44 sloučeniny 14-1 ve formě bílých krystalů, bod tání (m.p. 104106°C.

^ΧΗ NMR (CDC1₃, TMS) Ó 0,91 a 0,93 (celkově 6H, oba s, 3,5CHseq) ; 1,08 (2H, m, 2,6-CH_eq); 1,13 a 1,15 (celkově 6H, oba s,

3,5-CH_2ax); 1,25 (2H, m, 4-CH₂) ; 1,32 a 1,38 (celkově 3H, oba s, I-CH3) ; 1,70 a 2,12 (celkově 2H, oba d, 14,7 Hz, 2,6-Ch_ax); 5,30 a 5,60 (celkově IH, oba br s, NH); 8,05 a 8,30 ppm (celkově IH, oba d, 2,0 a 12,7 Hz, resp., HCO).

Příprava N-acetyl-1,3,3,5,5-tetrametylcyklohexanaminu (14-2).

K důkladně promíchanému roztoku 1,3,3,5,5pentametylcyklohexanolu (3-13) (3,0 g, 17,65 mmol) v acetonitrilu (20 ml) byla po kapkách přidána dýmavá HNO₃ při teplotě pod 45°C. Výsledná směs byla míchána při teplotě 4550°C po dobu 6 hodin, poté ochlazena, nalita do vody (30 ml) a neutralizována vodným NH₃. Vodná fáze byla extrahována éterem (3 x 30 ml) . Kombinované éterové fáze byly promyty salinickým roztokem (30 ml), poté vysušeny pomocí MgSO₄, zfiltrovány a odpařeny. Hrubý produkt byl krystalizován ze studeného acetonitrilu, což vedlo ke vzniku 2,23 g (60%) sloučeniny 14-2 ve formě bílých krystalů, bod tání (m.p. 110°C).

⁴H NMR (CDCI3, TMS) δ 0,90 a 1,12 (celkově 12H, oba s, 3,5-CH₃); 1,33 (3H, s, I-CH3) ; 1,88 (3H, s, CH₃C=O) ; 0,75-2,25 (6H, m, protony kruhu) a 5,3 ppm (IH, br s, NH).

Příprava N-metoxykarbonyl-N,1,3,3,5,5-hexametylcyklohexanaminu (15) .

K jedné porci suspenze N,1,3,3,5,5-hexametylcyklohexanamin hydrochloridu (5-20) (1,13 g, 5,13 mmol) a Na₂CO₃ (1,63 g, 15,4 mmol) v THF (30 ml). Výsledná směs byla promíchávána při pokojově teplotě po dobu 6 hodin, poté naředěna vodou (50 ml) a extrahována éterem (3 x 30 ml) . Kombinované éterové fáze byly promyty 10% K₂SO₄, salinickým roztokem, vysušeny pomocí MgSO₄, zfiltrovány a odpařeny. Hrubý produkt byl purifikován • 9

9 ··

9999 • · 999«

99 99

99 9 9 «9 9

9 9 «999

9 999 99 9

9 9 9 9 9 9 « 9 9 999 9 9 99 chromatograficky a eluován směsí hexan-etylacetát (6:1), což vedlo ke vzniku 0,90 g (78%) sloučeniny (15) ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃, TMS) δ 0,93 a 1,07 (celkově 12H, oba s, 3,5-CH₃); 1,23 (3H, s, I-CH3); 1,0-1,4 (4H, m, 4-CH₃ a 2,6-CH_eq); 2,56 (2H, d, J=14 Hz, 2,6-Ch_ax); 2,87 (3H, s, CH₃N) a 3,64 ppm (3H, s, CH₃O) .

Příprava etyl (3,3,5,5-tetrametylcyklohexyliden)kyanoacetátu (16) .

Směs 3,3,5,5-tetrametylcyklohexanonu (2-13) (2,64 g, 17 mmol), etylkyanoacetátu (1,93, 17 mmol), kyseliny octové (0,2 ml) a amonium acetátu (0,2 g) v benzenu byla zahřívána pod zpětným chlazením v Dean-Starkově přístroji po dobu 10 hodin. K této směsi byl přidán benzen (30 ml) a salinický roztok (30 ml) , organická vrstva byla separována, vysušena pomocí Na₂SO₄, zfiltrována a odpařena. Hrubý produkt byl purifikován chromatograficky a eluován hexanem, což vedlo ke vzniku 2,0 g (50%) sloučeniny (16) ve formě oleje.

^XH NMR (CDCI3, TMS) δ: 1,01 (6H, s, 3,5-CH_3eq); 1,05 (6H, s,

3,5-CH_3ax); 1,34 (3H, t, J=7 Hz, etyl-CH₃) ; 1,42 (2H, s, 4-CH₂) ;

2,46 a 2,79 (celkově 4H, oba s, 2,6-CH₂); a 4,29 ppm (2H, q, J=7 Hz, CH₂O).

Příprava etyl (1,3,3,5,5-pentametylcyklohexyliden)kyanoacetátu (17) .

K ochlazenému roztiku jodidu alkylhořečnatého (připraveného z magnézia (0,46 g, 19,2 mmol) a jodometanu (2,84 g, 20 mmol) v éteru (12 ml) byl přidán bezvodý chlorid měďnatý (1) (0,8 g, 8 mmol) . Směs byla promíchávána v inertní atmosféře po dobu 5 minut a po kapkách byl přidán roztok etyl (3,3,5,5tetrametylcyklohexyliden) kyanoacetátu (16) (2 g, 8 mmol) v éteru (10 ml) za teploty pod -15°C. Po přidání ketonu byla reakční směs promíchávána po dobu 3 hodin a pečlivě neutralizována nasyceným vodným roztokem NH₄C1. Tradiční postup

Φ Φ Φ • · Φ φ φ Φ

• · φ · · «φ φ • φ φ · φ φ · φ · φ φ φ φ φ φ • · φ φφφφ »9 ΦΦΦΦ ΦΦ ΦΦ

Grignardovy reakce vedl ke vzniku hrubého materiálu, který byl separován na sloupci silika gelu a eluován směsí petroléteruetylacetátu (20:1), což vedlo ke vzniku 1,0 g (47%) sloučeniny

(17) ve	formě	oleje.
1 NMR	(CDCI3,	TMS) δ: 0,98 (9H,	s,	3,5-CH_3eq a 1-CH₃) ; 1	,06 (6H,
s, 3,5-	CH_3ax) ;	1,31 (3H, t, J=7	Hz,	etyl-CH₃); 1,2-1,5	(6H, m,
protony	kruhu)	; 3,41 (IH, s, OC-	•CH)	a 4,25 ppm (2H, q,	J=7 Hz,

CH₂O) .

Příprava 1-kyanometyl-l,3,3,5,5-pentametylcyklohexanu (18).

Směs etyl (1,3,3,5,5-pentametylcyklohexyliden)kyanoacetátu (17) (1 g, 3,7 mmol), LÍCI (0,05 g) a vody (0,15 ml) v DMSO (2,5 ml) byl zahříván při teplotě 150-160°C po dobu 4 hodin. Roztok byl nalit do vody (70 ml) a extrahován éterem (4 x 20 ml). Éter byl promyt salinickým roztokem (2x50 ml) vysušen pomocí Na₂SO₄, zfiltrován a odpařen. Hrubý materiál byl purifikován na sloupci silika gelu a eluován směsí petroléteru-etylacetátu (20:1), což vedlo ke vzniku 0,66 g (94%) sloučeniny (18) ve formě oleje.

^XH NMR (CDC1₃, TMS) δ: 0,98 (9H, s, 3,5-CH_3eq a 1-CH₃) ; 1,02 (6H, s, 3,5-CH_3ax); 1,21 (3H, s, protony kruhu); 1,31 (3H, s, protony kruhu) a 2,31 ppm (2H, s, CH₂CN) . IR (čisté) v_CN = 2242 cm”¹.

Obecný postup přípravy alkylcyklohexanamin hydrochloridů 5-1-525 .

Roztok sloučenin 4, 10, nebo 13-15, 18 v éteru byl po kapkách přidán k promíchané suspenzi lithium aluminium hydridu (4 ekvivalenty) v éteru, která byla ochlazena v ledové lázni. Reakční směs byla promíchávána při pokojové teplotě v případě sloučenin 4, 10, 13, nebo zahřívána pod zpětným chlazením v případě sloučenin 14, 15, 18 až do kompletní přeměny výchozího materiálu. Reziduální lithium aluminium hydrid byl odstraněn vodou, vodná vrstva byla separována a dvakrát extrahována éterem. Kombinované éterové fáze byly promyty salinickým roztokem, vysušeny pomocí NaOH, zfiltrovány a • ·

odpařeny. Získaný amin byl podroben reakci s HC1 bez charakterizace. Amin hydrochlorid byl připraven buď probubláním plynu HC1 roztokem aminu v hexanu, nebo přidáním IN roztoku HC1 v éteru do roztoku aminu. V obou případech byl solvent odstraněn po přidání HC1, reziduum bylo podrobeno reakci s hexanem nebo acetonitrilem a krystalický produkt byl zfiltrován, což vedlo ke vzniku sloučenin 5-1 - 5-2 o vynikající čistotě.

Fyzikální vlastnosti a výtěžky sloučenin 5-1 - 5-25 jsou uvedeny v Tabulce 4.

¹NMR spektrální data sloučenin 5-1 - 5-25 jsou uvedeny v Tabulce 5.

Další 1-aminoalkylcyklohexany a jejich hydrochloridy jsou připraveny stejným nebo podobným způsobem. Hydrochloridy mohou být přeměněny na jejich volné báze nebo další kyselé adiční sole, jak je uvedeno v kapitole Kyselé adiční sole.

Příprava 3,3,5,5-tetrametylcyklohexylmetylamin hydrochloridu (5-26) .

Roztok l-nitrometyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexenu (6) (1,1 g,

5,63 mmol) ve směsi etanolu (140 ml) a chloroformu (2,8 ml) byl hydrogenován pomocí 10% Pd/C (280 mg) při 5 atm po dobu 20 hodin, zfiltrován a odpařen. Hrubý produkt byl podroben reakci s éterem, zfiltrován a promyt éterem, což vedlo ke vzniku 0,57 g (50%) aminu 5-26.

Fyzikální vlastnosti a výtěžky sloučenin 5-26 jsou uvedeny v Tabulce 4.

¹NMR spektrální data sloučenin 5-26 jsou uvedeny v Tabulce 5.

Amin 5-27 byl připraven podle známého postupu (16).

Amin 5-28 (17) byl připraven podle obecného postupu z odpovídajícího azidu (18). Všechny fyzikální vlastnosti byly ve shodě s popsanými daty (17).

• · · * · · ··· · · · ···· ·····*· · · · · · · · • · · · · · · · · ···· ft ·♦ ···· ·· ··

Čistota všech připravených sloučenin byla zkontrolována pomocí GC (MN-OV-l, 25m*0,53m, d_f = 1,0 um, 50-270°C (10°C/min)).

Kyselé adiční sole

Jako kyseliny, které jsou vhodné pro tvorbu kyselých adičních solí podle konvenčních postupů, mohou být uvedeny následující kyseliny:

chlorovodíková, bromovodíková, metansulfonová, izothionová, sírová, fosforečná a sulfamová, a z organických kyselin: octová, propionová, maleinová, fumarová, vinná, citónová, šťavelová, a benzoová, pokud bychom měli jmenovat alespoň několik příkladů. Preferované kyseliny jsou kyselina chlorovodíková, citrónová a maleinová. Pokud je požadováno, mohou být připraveny i další farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli a jedna kyselá adiční sůl může být konvertována na druhou pomocí neutralizace, například neutralizací hydrochloridu, což vede k uvolnění volné báze s následnou reacidifikací odlišným vybraným materiálem nebo organickou kyselinou. Tímto způsobem, který je konvenční v oboru, lze připravit další farmaceuticky přijatelné kyselé adiční sole.

• ·

Tabulka 1. Cyklohexanony 2

ε Q. CL *0 ω Σ H n o o o cc Σ z X	ω X 04 γ-· r-· 04 Ε χ ΙΩ Ο oi ΙΟ L0 Ε χ' ιη CO 1 ΙΟ Ο Τ X ιη TD χ’ CO Ο *Μ χ' ω 00 cn ό V7 X C0 _ u Ε χ χ’ Ξ X co 03 C0 ό oi	Ε χ' ΙΩ ΙΟ xř oi LO r— W X 04 co r— oí E x OJ in rř v— (O r— r~ Μι x 2 CD o N X o» ♦-» X co o cn Ó Ίη X 2 ω ω ό	0.87 (6H, ml; 1.15 (3H. sl; 1.15-1.45 (4H, ml; 2.13 (2H, s); 1.45 - 2.45 (5H. ml	w X X CD r— 04 X 2 04 in r~ n X cř X 04 0» CO » . x' CD O N X ♦* X co co o· ó	ω X X CD r~ oi « X 04 CO LO E X* 2 co 04 1? X CD CO o T“ E x CD 0- 00 6
© >N _Λ»Φ *0 ~'>1 >	LO ω	ΙΟ	rs	lO CO 00	cn 0*
4 Ε	CL	«-j UJ	u. Q_	«* LU	u. CL
-> Ε	Ο Σ			·-» UJ	u. CL
Ν Ε		© Σ	© Σ	© Σ	© Σ
Ε	Ο Σ	Φ Σ	O Σ	© Σ	© Σ
Slouč.	ο Ň	Τ’ r- 04	01 T— 04	CD r^- 04	Γ* r· 04

Λ ·

Tabulka 2. 1-Alkylcyklohexanoly 3

Ε Cl c. *o ω 2 H n U O U X 2 z I

0.84 (3H, t. 7Hz); 1.17 |3H, s};1.0 - 1.85 I12H, m)

E X τ— in CD o T” X CO T“· CN 77 X Γγ *·» x“ CO CD Ó

E X v σ> o t“ T) X co CD Γ” 77 X r* X co to CD ó

E I sf T” in CD r— 1 O ví X CO O) 77 X rx X co to CD a

E X m T*” tn CD σ To x co co r·“ E x“ co CD CD Ó ví X co co CD Ó

0.86 (3H, t, 6.5Hz|; 1.04 (3H. sl; 1.17 (3H, s|; 0.95 - 1.95 (13H, ml

0.80 (3H, sl; 0.81 (3H, t. 7Hz); 0.86 (3H, d, 6.5 Hz); 1.17 (3H. sl; 0.9 - 2.0 (10H, 1 m)

0.81 (6H, ml; 0.86 (3H, d, 6.5Hzl; 1.17 (3H, sl; 0.9 - 2.0 (12H, ml

0.87 (6H, ml; 1.08 (3H, s); 1.18 (3H. sl; 0.95 - 1.95 (10H, ml

0.88 (6H, ml: 1.09 (3H, s); 1.18 (3H, s); 0.9 - 1.95 (12H, ml

0.89 (9H, m); 1.21 |6H, s); 0.95 - 1.7 (11H, m)

0.81 (3H, t, 7Hz); 0.89, 1.17 and 1.21 Itotal 12H. all sl: 0.9 - 1.35 (5H, ml; 1.35 2.0 (4H, ml

0.84 (3H, ml; 0.88 and 1.19 (total 12H, both s); 0.9 - 1.35 (7H, ml; 1.35 - 2.0 (4H. 1 m)

0.78 (6H, t, 7Hzl; 0.89 (3H, s); 1.19 (6H, s): 0.95 - 1.3 (7H, m); 1.3 - 2.05 (4H. m)

E x' xř tn O CN CO v· E x' r— CO τ- ι 03 Ó ví X* to 03 *W x CO co CD Ó in co X CO to CD Ó

Výtěžek í %)

CO 0)

co 03

CD CD

Tř CO

CD CD

tT CD

CD CO

tn CD

CO CD

r*. CD

O 03

Λ X

© 2

CD 2

o Σ

o 2

σ 2

© 2

o 2

© 2

k. X

© 2

<r az

UJ

o.

£

© 2

UJ

£

© Σ

To Σ ** UJ

UJ

k> a.

·» X

ω

u. CL

© 2

£

w UJ

k- Cl-

© 2

UJ © Σ

£ © Σ

4-4 UJ

£

v X

© 2

© Σ

© 2

© Σ

X

© 2

© Σ

© 2

© Σ

© 2

Slouč.

o CN rX

J3 CN co

CD CO CTÍ

.a n rt

O CD Ó

ja <0 Wl

O) ra

O T— ra

T·» ra

T“ Λ

in T· ra

CD r· Λ

r· T— rx (

CD T- rx

Ol v rx

Tabulka 3. 1-Alkyl-l-azidocyklohexany 4


								E
							E	X CM
							X	χ
							o	tn
							X	cn
							o	·—
							CM	o
							cn	—
							Ó
								V)
							V)	X
							x'	co
							co	cn
							“5	CM	É
							o	*
							X.	* ·	X
							cn CM	KI X	OJ
							ID	LD
						£		cd’
						»	*O		CM
						X	C	w
						CD	©		¹
H, ml	E	£	E X	E x'	E x'	ID cn	CD CM r·	X co *5	0.95
CD	X	X	r-	CO	CO		.«	o	12
·—*	cn	r*·	v»	v—	**·	»			©
2.0	o CM*	O	O cm	2.0 (	2.0 (	o r*	X r*	1 06’	x’ co
	CM					O
ID						©	*		*<
CT	O	id cn	o	o	o		X	•σ	o
Ó		r·		r“	X co	co	c O
		ó		* *	XZ		CM		cn CM
Cl	4)			Vi	97	r·	CO	CD
X	X	*4»	x	x'	x*	CM	ó	Ó	r-
co	o	•	co	CO	CO		··	·_*
		X						•7
r-	co	CO	r*	O	r*·
co	CM		CM	CM	CM		X*	X	r-
	CO				X	co	CO	CM
		CM	r-			co
•»	•»		• ·	• *	·.*		©	©
N	N		N	KJ		o			zz
X	X	«12	I	X	X	o			w
id	ld	N	l/P	LD	ID				X
		X	CD	CD		xf	r-	CD
CD	CD	r*	CO	..	O	o
•σ'	•σ'		w	-				r-’	T>
X co	X CO	X CO	x co	x CO	X co	X ro	*o c ©	•σ c ©	x' CD
cn co	CM cn	CD CD	co co	CS co	CD CD	o co	CM CD	ID CD	r-* co
a	ó	Ó	O	o	Ó	o	Ó	Ó	Ó
		CD CM				LD	O	CO
CO	CD	xř	CM	-	CD	CD	CD	co
© 2	©	© 2	© 2	© 2	© 2	© 2	© 2	Φ 2	© 2

							©	O 2	X
						©		··*	©
© 5		UJ		k, CL		2	UJ	£	2
							_..,
							UJ	o.	©

						©	©	©	•X
	© 2		UJ		£	2	2	2	X
									*©
									5
									»·
									X
									X

									©
									2
©	XX T“·	© CM	Xi fM	© CO *T1	Λ CO	χρ V¹	LD 4i	te <ri	rs
J2L		JjstL

LD Γ*·*

4-17 Me Me Me (Pt) Př (Mel Me 71 0.86: 0.88 (total 3H, t. 8.5Hzl; 0.90, 1.17; 1.-19 Itotal 9H, sl; 1.28; 1.32 (totol 3H); 0.95-1.9 (1 OH. ml

4-18 Mo Me Et__Et__Me 66 0,78 (6H, t. 7Hz|; 0,90 (3H, sl; 1.18 (3H, sl; 1,31 t3H. sl; 0.95 - 1.95 (10H, ml

14-19 Me Me Pr Pr Me 61 0.89 (9H, s and ml; 1.17 (3H, sl: .1.27 (3H, sl; 0.95 - -1.95 (14H, ml • 4 • · 4444 4·4<

• 44 44 4 4 4 4 «

4444444 4 4 44 44 I » 4 444 444« »44 4 44 4444 44 44

Tabulka 4. Deriváty-aminocyklohexanu 5

Mrz 2/	Slouč.	Vzorec	M.W.	Elementární analýza	m.p. (°C)	^v/těžek, (%)
Vypočteno	(%)	Nalezeno	(%)
C	ΠΓ	i N	C	ί H	t N
625	5-1 a	c.h,₇n*hci	163.72	58.7	10.5	8.6	58.7	10.5	8.6	> 250	63
631	5-1 b	C.H,₇N’HCI	163.72	58.7	10.5	8.6	58.7	10.5	8.6	200 - 202	48
629	5-2a	C.H, ,N*HC)	177.75	60.8	10.8	7.9	60.8	10.8	7.9	> 250	66
630	5-2b	C.H,,N»HCI	177.75	60.8	10.8	7.9	60.8	10.8	7.9	179 - 181	43
627	5-3a	Ο,Λ,ΝΉΟΙ	191.78	62.6	11.1	7.3	62.6	11.1	7.3	> 250	80
628	5-3b	c,₇h₇,n*hci	191.78	62.6	11.1	7.3	62.6	11.1	7.3	181 - 182	⁸¹
621	5-4	σ,Η,,ΝΉα	177.75	60.8	10.8	7.9	60.8	10.8	7.9	230 - 231	73
620	5-5	C,pH₇,N*HCI	191.78	62.6	11.1	7.3	62.6	11.1	7.3	168 - 170	71
617	5-6	C,_tH₇₇N’HC1	205.81	64.2	11.3	6.8	64.2	11.3	6.8	106 -103	68
616	5-2	C.H„N*HCI	177.75	60.8	10.8	7.9	60.8	10.8	7.9	280 - 282	50
607	5-Sa	C,_nH„N*HCI	191.78	62.6	11.1	7.3	62.6	11.1	7.3	>240	74
608	5-8b	C,pH,,N*HCI	191.78	62.6	11.1	7.3	62,6	11.1	7.3	>240	57'
622	— 5-9a	c,,H_riN*HCf	205.81	64.2	11.3	6.8	64.2	11.3	6.8	25Q - '253	68
624	5-9b	C,,H₇₇N*HC[	205.81	64.2	11.3	6.8	64.2	11.3	6.8	228 - .231	60
618	5-10a \|	C,₇H,,N'HCI	219.84	65.6	11.9	6.4	65.6	11.5	6.4	167 - .168	57
619	5-10b I	c,₇h₇<n*hci	219.84	65.6	11.9	6.4	65.6	11.5	6.4	237 - 238	36
633	5-11 a	c,,h₇₁n*hci	205.81	64.2	11.3	6.8	64.2	11.3	6.8	255 - 257	69
632	5-11b	C,,H₇₁N’HCI	205.81	64.2	11.3	6.8	64.2	11.3	6.8	216 - 218	44
635	5-12a	C,₇H„N’HCI	219.84	65.6	11.9	6.4	65.6	11.5	6.4	218,- ?21	83
634	5-12b	c,,h,«n*hci	219.84	65.6	11.9	6.4	65.6	11.5	6.4	200 - 203	44
579	5-13	C,,H₇₇N‘HCI	205.81	64.2	11.3	6.8	64.2	11.3	6.8	235 - 237	82
600	5-14	C_t7H,,N’HCI’H,0	237.86	60.6	10.6	5.9	60.6	10.6	5.9	215 _: 218	74
601	5-15	C,₇H,₇N’HCI	233.87	66.8	11.7	6.0	66.8	11.7	6.0	> 280	88
615	5-16	C_t7H,«N’HCI	219.84	65.6	11.9	6.4	65.6	11.5	6.4	162 - 163	65
614	5-17	C,,H₇₇N’HCI’O.5H,	242.84	64.3	12.0	5.8 _	63.8	12.0	5.6	106 .- 107	54
623	5-18	ο,,η.,νήοή,ο	251.89	62.0	10.8	5.6	62.0	10.8	5.6	99 - 102	78
626	5-19	C,«H„N’HCI	261.93	68.8	12.0	5.3	68.8	12.0	5.3	167 - 169	72
640	5-20		219.84 ·	65.6	.11.9	6.4 I	65.6	11.7	6.3	249-251	86

639	5-21	C,₇H₇₇N*HC(	233.82 )	66.8	12.1	6.0	.66.6	12.3	5.9	257-259	82
642	5-22	C,iH₇₇NHCI»₇O	251.82	62.0	12.0	5.6	62.0	12.0	5.5	>210 ^:	98
645	5-23	CmH«N*HCI	247.05	67.8	122	5.7	67.6	12.3	5.6	205-207	89
644	5-24		219.84	65.6	11.9	6.4	65.4	11.9	6.2	>250	83
662	5-25	C,->HvNHCI0.5H₇O	242.84	64.3	12.0	5.8	64.9	11.9	5.7	>250 '	64
580	5-26	C„I-HNHCI	205.81	64.2	11.3	6.8	64.1	11.4	6.9	>230	50
557	5-27	C.nH₇,N*HCI	191.75	62.6	11.6	7.3	62.3	Í1.6	7.2 >250fdec.)	70
641	5-25	C7H15N-HC!	149.7	56.2	10.8	9.4 \| 55.9	11.0	9.2	283-285 I	69

• · « · · • · · ··

Tabulka 5. Spektrální data amino-cyklohexanových derivátů 5 «3 ω

I— č?

□

O ce i

I

C

CQ ca v i! -ě cni £ r!l «

íl

CO w* co

G) m

to

JO <7, *» <T

8!°· .1 Tzh ni n ω

JS

X co

Φ

b.

O •a

V)

X,

CJ co co a

s

O	2 co	v*
*** E	03	o ó
• X co	» X co	Έ ra
co	co	o
co	oo	co
o	ó	o


ω	tn
u_	u.
JO	JO
*	•
X	X
co	co
	·
in
T·	E
00
£	X 2.
►	CM
S	CM
	1
CS	ΙΛ
ci	O
í	V“
o
Vi
T“
X-Í	X*
w	no

X	to
co	iq

gl

S ώ

to co ó

T3 •o ra ó

dl cn ó

• ·

Tabulka 5. (pokračování)

Tj i X cn CM cd E x‘ T— τ- V 04 1 lO O V“ 7? X co 5 V— Ξ cn 3 o ví o cn o Ό C a E q 1 h~ O

0.8 -1.0 (m) and 0.91 (ε. total 6); 1.22 (3H,s), 1.44 (3H,s); 1.0 - 2.3 (9H, m); 822 (3H, br s) |

7? u. X) X CO OJ 00 E x’ £ tn 04 O r— To X CO a to 1 T“ X cn 75 £ ví co cn o Ό c « E 8 d

ω L- X3 X co cm co 3 X •r— CO CM 1 O 17 x cn in T i *w x' co a r- E x' to 5> o

M t_ X3 x‘ £2 CM cd E X ▼“ t- <Ί 04 I O T— TJ X co í X c» 3 O tfí_ fe d 3 σι co d

Ξ x‘ v. b #“* w X CO OJ to Έ X oj co 04 Ta X OJ τ— 5 75 Ν» O Ό C rc OJ q τ—

Ta 15 X* cn in W-* cd Tm X b cr x' £2 co ro r- 5 TÍ X V 75 £ T q τ- Έ ra cn tq v Έ I CM Sw cn CM N X b -X x‘ £2 σ o 17 x‘ CM T“ 3 Έ b o ra c TO CT O T~

17 u. O x' £2 CM cd 3 x' v o b T- 3 x' v o Csi i τ— Tn X* s cn OJ ΙΛ X OJ 75 £ ra c ra q £ h- X cn cn σ O

1 0.83 (3H, m); 1.00, 1.02 and 1.07 (tolal 8H, s); 1.2 - 1.5 (4H, m); 1.59 and 1.63 (total 3H, both s); 1.70 (4H, m); 8.25 (3H. br s) I

Ta 15 x‘ £2 CT CM cd 3 X v o b T- 17 x: % X co 75 *>* o 5 ra c ra o cq x~-> E X co xr 1 T“ τ· E X £ Y— Τ- ι q T“ E X cn b © o

v) v- X) X cn 10 Ol 00 ε X ΤΓ q V 1 q r Λ·» ω X jo cn q ν'* E X v o v T- E X 04 h- CN T- Ta X £ 3 5 b- X co co b- o

Ta £ X £2 CM cd 3 X :£ co ro T“ 1 cn r- X £2 o co r· 3 x‘ a W iq τ- ι Ta X co 5 τ- 3 X co, N co O

Ta j5 X o E a a 04 cri bJ X co X co co q 04 £ V r* Ό XJ X v OI N T- *w X co ·»»·* q E X £ cn q r· Ta X OJ T- £ o v- •ra c ra o o v-

ω v. XI x‘ OJ E Q. a t- cn ? X OJ O CO E X v Ol q T~ w X <0 Si»» V CD £ o. X co s_» co IO τ— 3 x' CM CT CM r I CM T- 3 £ T· τ— Ό C Q Cfi <n ó

7T X LO a' X' co CT co cl £ ^r T“ •o x‘ I q T-“ TO g s »— 17 X cn L0 V τ— 3 x' £2 CM co T- >^*· V) x’ 04 T— I OI v- τ— T3 C CD co q

17 x' £2 to rn cd Tm X ío «. -ra X* £2 o co i— 17 X co to V 3 X* Γ- ΙΟ Ol V» 1 to cd Έ x' to CM O T Tn x' to in co o

Ta i X* co S«»v 8 cd 3 x' £2 CM o rn 3 X* CT to co τ- ι CO O 17 zf co cn CT o 17 x' CD b. CO d

17 Q x‘ £2 co CM cd 3 x’ £2 cn o cn 3 X* £2 cn b 17 x' co w T— T- 0! x‘ £2 b q τ— tň I CD CM q —— ”w x' co co CT d

Ta £ x‘ £2 E a a to cn cd 3 x' £2 0 o ol E x‘ b CM cJ ó T— Trt u. XI 5 r- b CT d

0.97 (6H. s); 1.04 (6H, s); 1.12 (1H, d. 13.7 Hz); 1.2 - 1.4 (5H, m); 1.92 (2H, d, 12.3 Hz); 3.47 (1H. ml: 8.30 Í3H hr «0 I

V? 2s X CO x*- CO 00 E s τ— Oj oi 04 T— 7λ X co V

-Q O

rt τ—

XI

Λ Ol

a

co

10 τ-

ω τ-

b r

00 Ύ-

<n r·

o OJ

T·

qJ

Γ0 OJ 1

ω OJ 1

f?

CĎ OJ 1

r to,

v- tAf

T- 1 ΙΛ

iAí

v to

ih

1«

«Λ

IO

ia

w

ιό

w

LOJ

cni

W!

to:

to

10

ΙΛ,

• A

Tabulka 6 Základní struktura amino a aminoalkyl cyklohexanů

/^R

R* = -(CH₂)„-(C R^eR\-N n+m=0,1,2

R'-R’=ni.žší alkyl

	Mrz 2/	Sloučí	R¹	R²	R³	R⁴	R⁵	R’
625	5-1a	H	H	H	Me	Me	NH₇
631	5-1b	H	H	Me	H	Me	NH₇
629	5-2a	H	H	H	Et	Me	NH₇
630	5-2b	H	H	Et	H	Me	nh₇
627	5-3a	H	H	H	Pr	Me	nh₇
628	5-3b	H	H	Pr	H	Me	nh₇
621	5-4	H	H	Me	Me	Me	nh₇
620	5-5	H	H	Me (Et)	Et (Me)	Me	nh₇
617	5-6	H	H	Me (Pr)	Pr (Me)	Me	nh₇
616	5-2	Me (H)	H (Me)	H (Me)	Me (H)	Me	nh₇
643	5-8a	Me	H	Me	Me	Me	nh₇
608	5-8b	H	Me	Me	Me	Me	nh₇
622	5-9a	Me	H	Et	Me	Me	nh₇
624	5-9b	H	Me	Me	Et	Me	nh₇
618	5-1 Oa	Me	H	Pr	Me	Me	NH,
619	5-1 Ob	H	Me	Me	Pr	Me	nh₇
633	5-11a	Me	Me	H	Et	Me	nh₇
632	5-11b	Me	Me	Et	H	Me	nh₇
635	5-12a	Me	Me	H	Pr	Me	nh₇
	634	5-12b	Me	Me	Pr	H	Me	nh₇ 1
	579	5-13	Me	Me	Me	Me	Me	nh₇
	600	5-14	Me	Me	Me	Me	Et	NH,
	601	5-15	Me	Me	Me	Me	Pr	• nh₇
	615	5-16	Me	Me	Me (Et)	Et (Me)	Me	nh₇
	614	5-17	Me	Me	Me (Pr)	Pr (Me)	Me	nh₇ 1
	623	5-18	Me	Me	Et	Et	Me	nh₇
	626	5-19	Me	Me	Pr	Pr	Me	nh₇ 1
	640	5-20	Me	Me	Me	Me	Me	NHMe
	639	5-21	Me	Me	Me	Me	Me	NHEt
	642	5-22 '	Me	Me	Me	Me	Me	N(Me)₇
	645	5-23	Me	Me	Me	Me	H	CH₇CMe₇NH₇
	644	5-24	Me	Me	Me	Me	H	CH₇CH₇NH₇
	662	5-25	Me	Me	Me	Me	Me	ch₇ch₇nh₇
	580	5-26	Me	Me	Me	Me	H	ch₇nh, i
	557	5-27	Me	Me	Me	Me	H	nh₇
	641	5-28	H	H	H	H	Me	nh₇ I

·· ······ • · · · · · · ·· ···« ·* ·· konvenční poměrech,

Farmaceutické preparáty

Z aktivních složek předkládaného vynálezu spolu s jednou nebo více adjuvantních látek, nosičů, nebo diluentů mohou být utvořeny farmaceutické preparáty a jejich jednotkové dávky. Tyto preparáty mohou být tvořeny pevnými lékovými formami, jako jsou například potažené nebo nepotažené tablety nebo plněné kapsle, nebo tekutými lékovými formami, jako jsou například roztoky, suspenze, emulze, elixíry, nebo kapsle vyplněné těmito lékovými formami, vše pro perorální použití. Také je možná forma čípků nebo kapslí pro rektální podání, nebo forma sterilních roztoků k injekci pro parenterální (včetně intravenózního nebo subkutánního podání). Takové farmaceutické preparáty a jejich jednotkové dávkové formy mohou utvářet nebo nové složky v konvenčních nebo speciálních s nebo bez dalších aktivních složek, a takové jednotkové dávkové formy mohou obsahovat vhodné účinné množství aktivní složky odpovídající zamýšlenému dennímu dávkovacímu rozmezí. Tablety obsahující dvacet (20) až sto (100) miligramů aktivní složky, nebo v širším rozpětí deset (10) až dvě stě padesát (250) miligramů na tabletu, jsou vhodnými reprezentativními jednotkovými dávkovacími formami.

Příklady provedení vynálezu

Metoda léčby

V důsledku vysoké aktivity a nízké toxicity představující velice výhodný terapeutický index mohou být aktivní složky charakterizované v předkládaném vynálezu podány jedinci, např. živočichovi (včetně člověka), který potřebuje terapii, zmírnění, paliaci nebo eliminaci onemocnění či stavu, které jsou citlivé na podání těchto látek. Tyto látky lze použít také v indikaci nebo u stavů popsaných na jiném místě této aplikace, nejlépe souběžně, samostatně, nebo společně s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými excipienty, nosiči, nebo diluenty, obzvláště a preferovaně ve formě farmaceutického preparátu • ·

9 0

9 9 • 9 ·

9 9 • · • · · · · fe ·· • · • · · · • · · ·· ···· obsahujícího tyto látky v účinném množství, a to ve formě perorální, rektální nebo parenterální aplikace (včetně intravenozní a subkutánní) , nebo v některých případech i ve formě topické aplikace. Vhodné dávkovači rozmezí je 1-1000 miligramů denně, nejlépe 10-500 miligramů denně a zejména 50500 miligramů denně v závislosti na přesném způsobu podání, lékové formě, indikaci onemocnění, proti kterému je podání namířeno a preferenci a zkušenosti lékaře či veterináře.

Příklady reprezentativních farmaceutických preparátů

S pomocí běžně používaných solventů, pomocných látek a nosičů, mohou být reakční produkty zpracovány do tablet, potažených tablet, kapslí, roztoků kapek, čípků, injekcí a infúzních preparátů a podobně, a mohou být terapeuticky aplikovány perorální, parenterální či jinými cestami. Reprezentativní farmaceutické preparáty následují.

(b) Tablety vhodné k perorálnímu podání, které obsahují aktivní složku, mohou být připraveny konvenčními postupy přípravy tablet.

(c) Pro přípravu čípků může být použit pro inkorporaci aktivní látky obvyklý čípkový základ při použití obvyklých postupů. Mezi takové základy patří například polyetylenglykol, který je pevný za normální pokojové teploty, ale který se rozpouští při teplotě lidského těla.

(d) Pro přípravu parenterálních sterilních roztoků (včetně intravenozních a subkutánních) je použito aktivní látky spolu s konvenčními složkami v obvyklých množstvích. Těmito složkami jsou například chlorid sodný a dvojitě destilovaná voda q.s., za použití konvenčního postupu, jako je například filtrace, aseptické plnění do ampulí nebo infúzních láhví a autoklávování za účelem sterilizace.

Další vhodné farmaceutické preparáty budou okamžitě zjevné každému znalému oboru.

·· · *· »· ·· ·· φ · · · · · · · · · · • · · · · · · · · · • 9999 999 99999·

9 9 9 9 9 9 9 9

9999 9 99 9999 99 99

Následující příklady jsou.opět uvedeny pouze jako ilustrace a nejsou zamýšleny jako jakkoli omezující.

Příklad 1

Složení tablety

Vhodné složení tablety obsahující 10 miligramů aktivní složky je následující:

	Mg
Aktivní složka	10
Laktóza	63
Mikrokrystalická celulóza	21
Talek	4
Magnézium stearát	1
Koloidní silikon dioxid	1

Příklad 2

Složení tablety

Další vhodné složení tablety obsahující 100 miligramů aktivní složky je následující:

	Mg
Aktivní složka	100
Bramborový škrob	20
Pólyvinylpyrolidon	10

Tablety jsou potaženy barevným filmem. Materiál tvořící film se skládá z:

·· « ♦· ·· ·♦ 99 ««· · · · · · · · ·

9 9 9 9 · · · · · • ·*·· * · · * 99 99 9 « · · · 9 9 9 9

9999 · ·* 9999 99 99

Laktóza	100
Mikrokrystalická celulóza	80
Želatina	10
Zkříženě vázaný polyvinylpyrolidon	10
Talek	10
Magnézium stearát	2
Koloidní silikon dioxid	3
Barevné pigmenty	5

Příklad 3

Složení kapsle

Vhodné složení kapsle obsahující 50 miligramů aktivní složky je následuj ící:

	Mg
Aktivní složka	50
Kukuřičný škrob	20
Dibázický kalcium fosfát	50
Talek	2
Koloidní silikon dioxid	2

Plněno do želatinových kapslí.

Příklad 4

Roztok pro injekce

Vhodné složení injekčního roztoku obsahujícího jedno procento aktivní složky je následující:

Aktivní složka mg	12
Chlorid sodný	8
Sterilní voda	1

• 4 4 4 • 4 4 *9 • 44 · · • 4 4 4 4

4444 4 4 4 • » 4 4

4444 4 44

44 • 4 4 4

4 4 4

4 4 4 ·

4 4 »

4 4 4

Příklad 5

Složení tekutého preparátu k perorálnímu podání

Vhodné složení 1 litru tekuté směsi obsahující 2 miligramy aktivní složky v jednom mililitru směsi je následující:

	G.
Aktivní složka	2
Sacharóza	250
Glukóza	300
Sorbitol	150
Pomerančová příchuť	10

Žlutá barva připomínající západ slunce Purifikovaná voda ad 1000 ml

Příklad 6

Složení tekutého preparátu k perorálnímu podání

Další vhodné složení 1 litru tekuté směsi obsahující 20 miligramů aktivní složky v jednom mililitru směsi je následuj ící:

	G.
Aktivní složka	20
Tragakant	7
Glycerol	50
Sacharóza	. 400
Metylparaben	0,5
Propylparaben	0, 05
Příchuť černého rybízu	10
Rozpustná červená barva	0,02

Purifikovaná voda ad 1000 ml

4

Příklad 7

Složení tekutého preparátu k perorálnímu podání

Další vhodné složení 1 litru tekuté směsi obsahující 2 miligramy aktivní složky v jednom mililitru směsi je následuj ící:

· 4» 44 • · « 4 4 4 4

4 4 4 4 · • 4444 444 4 • 4 4 4 4 «444 4 44 4444

	G.
Aktivní složka	2
Sacharóza	400
Hořká tinktura ze slupek pomeranče	20
Sladká tinktura ze slupek pomeranče	15

Purifikované voda ad 1000 ml

Příklad 8

Složení aerosolu

180 g roztoku aerosolu obsahuje:

	G.
Aktivní složka	10
Kyselina olejová	5
Etanol	81
Purifikované voda	9
Tetrafluoroetan	75

ml roztoku je použito jako náplň do hliníkových aerosolových nádobek, které jsou opatřeny dávkovači záklopkou a je v nich vytvořen tlak 3 bary.

ft« ft • · A

9 9

A ···· A • · ··« · e *· »a 9 ftft ft ft · « • ftft • · · *A AAAA ftft ftft • ftft » • ftft ♦

A 9 9 4 9

A ftft · • ft ftft

Příklad 9

Složení TDS

100 g roztoku obsahuje:

	G.
Aktivní složka	10,0
Etanol	57,5
Propylenglykol	7,5
Dimetylsulfoxid	5,0
Hydroxyetylcelulóza	0,4
Purifikovaná voda	19, 6

1,8 ml roztoku je umístěno na vlnu pokrytou adhezivní podpůrnou fólií. Systém je uzavřen ochrannou páskou, která se odstraní před použitím.

Příklad 10

Nanopartikulární složení g polybutylkyanoakrylátových nanopartikulí obsahuje:

	G.
Aktivní složka	1,0
Poloxamer	0,1
Butylkyanoakrylát	8,75
Manitol	0,1
Chlorid sodný	0,05

Polybutylkyanoakrylátové nanopartikule jsou připraveny polymeraci emulze ve směsi voda/0,1 N HCl/etanol jako polymeračním médiu. Nanopartikule v suspenzi jsou nakonec lyofilizovány ve vakuu.

• · • · · · · • · · · · ···· ······ · · · · · · · • ··· · * · · • ·· ···· · · ··

Farmakologie - Souhrn

Aktivní složky předkládaného vynálezu, jejich farmaceutické preparáty a metoda léčby spočívající v jejich použití jsou charakterizovány jedinečnými výhodnými vlastnostmi poskytujíce neobyčejnost předmětu zájmu jako celek tak, jak je nárokováno v předkládaném vynálezu. Sloučeniny a farmaceutické preparáty vykazují v standardních přijatých spolehlivých testech následující cenné vlastnosti a charakteristiky:

Jedná se o systémově aktivní, nekompetitivní antagonisty receptoru pro NMDA s rychlou blokující a deblokující kinetikou a silnou závislostí na voltáži, které mají využití v terapii, eliminaci, paliaci a zmírňování příznaků stavů a onemocnění odpovídajících na tuto léčbu pomocí aplikace těchto látek živočichům v širokém indikačním rozmezí chorob CNS, které zahrnují poruchy glutamátergní transmise.

Farmakologie

In vitro

Receptorově vazebné studie

Samci Srague-Dawleyho krys (200-250 g) byly dekapitovány a jejich mozky byly rychle vyjmuty. Mozková kůra byla odříznuta a zhomogenizována ve 20 objemech ledové 0,32 M sacharózy za použití sklo-teflonového homogenizátoru. Homogenát byl centrifugován při 1000 g po dobu 10 minut. Peleta byla odstraněna a supernatant byl centrifugován při 20000 g po dobu 20 minut. Výsledná peleta byla resuspendována ve 20 objemech destilované vody a centrifugována 20 minut při 8000 g. Poté byly supernatant a náplav třikrát centrifugovány (48000 g po dobu 20 minut) za přítomnosti 50 mM Tris-HCl, pH 8,0. Všechny centrifugační kroky byly provedeny při 4°C. Po resuspendaci v 5 objemech 50 mM Tris-Hcl, pH 8,0, byla membránová suspenze rychle zamrazena při teplotě -80°C. V den analýzy byly membrány rozmraženy a promyty čtyřikrát v 50 mM Tris-HCl, pH 8,0 a centrifugovány při 48000 g po dobu 20 minut. Finální peleta byla suspendována v pufru pro analýzu. Množství proteinu ve

4 4 » · · · ·

4 4 4 4 4 4 · · · · • · · 4 · · · · · · • 4444 4 4 4 4 44 44 4 • 4 4·4 4444

4444 4 44 4444 44 44 finálním membránovém preparátu bylo určeno Lowryho metodou s určitými modifikacemi. Finální koncentrace bílkoviny použitá pro naše studie byla mezi 250-500 ug/ml.

Membrány byly resuspendovány a inkubovány v 50 mM Tris-HCl, pH 8,0. Inkubace byla zahájena přidáním (³H)-( + )-MK-801 (23,9 Ci/mmol, 5 nM) do vialek s glycinem (10 uM)), glutamátem (10 uM), a 0,1-0,25 mg bílkoviny (celkový objem 0,5 ml) a různými koncentracemi testované látky (10 koncentrací v dubletu). Inkubace pokračovala při pokojové teplotě po dobu 120 minut. Za rovnováhy. neznačené použití použitých podmínek bylo vždy dosaženo Nespecifická vazba byla definována přidáním sloučeniny MK-801 (lOuM). Inkubace byly ukončeny za použití filtračního systému Milipor. Vzorky byly třikrát promyty 2,5 ml ledového pufru pro analýzu přes filtr ze skelného vlákna (získaného od společnosti Schleicher a Schuell) za podmínek konstantního vakua. Filtrace byla provedena co nej rychleji. Po separaci a promytí byly filtry umístěny do scintilační tekutiny (5 ml; Ultima Gold) a pomocí konvenčního kapalinového scintilačního počítače (Hewlett Packard, Liquid Scintillation Analyser) byla určena radioaktivita zadržená na filtru.

Políčková aktivace (patch clamp)

Tkáně hipokampu byly získány od krysích embryí (E20 až E21) a byly poté přeneseny Hankova roztoku pufru bez kalcia a magnézia (Gibco) umístěného na ledu. Buňky byly mechanicky rozrušeny v 0,05% roztoku DNAázy/0,3% ovomukoidu (Sigma) s následnou osmiminutovou pre-inkubací v roztoku 0,66% trypsinu/0,1% DNAázy (Sigma). Disociované buňky byly poté centrifugovány při 18 g po dobu 10 minut, resuspendovány v minimálním esenciálním médiu (Gibco) a umístěny na polylysinem (Sigma) předem potažené Petriho misky (Falcon) v hustotě 150000 buněk na cm². Buňky byly vyživovány minimálním esenciálním médiem pufrovaném pomocí NaHCO₃/HEPES a suplementovaném 5% fetálním telecím sérem a 5% koňským sérem (Gibco) a inkubovány při 37° v atmosféře s 5% CO₂ při 95% vlhkosti. Po inhibici další mitózy gliálních buněk • · • · • · · ···· · · · · ··· · · · · · · · ······· · · · · · · · • · · · · ···· ···· · ·· ···· ·· ·* cytosin-p-D-arabinofuranosidem (20uM Sigma) po zhruba 7 dnech inkubace in vitro bylo médium kompletně vyměněno. Poté bylo médium částečně vyměňováno dvakrát týdně.

Zaznamenávání políčkové aktivace bylo prováděno u těchto neuronů za pomocí vyleštěných skleněných elektrod (4-6 mQ) při pokojové teplotě (20-22°C) za použití EPC-7 násobiče (List). Testované látky byly aplikovány přepínacími kanály upraveného rychlého superfúzního systému se společným výtokem (výměnné časy 10-20 ms). Obsahy intracelulárních roztoků byly následující (mM): CsCl (120), TEACI (20), EGTA (10), MgCl₂ (1), CaCl₂ (0,2), glukóza (10), ATP(2), cAMP (0,25); pH bylo upraveno na 7,3 pomocí CsOH nebo HC1. Extracelulární roztoky měly následující základní složení (mM) : NaCl (140), Kel (3), CaCl₂ (0,2), glukóza (10), HEPES (10), sacharóza (4,5), tetrodotoxin (TTX 3*10^-4) . Glycin (1 uM) byl přítomen ve všech roztocích: koncentrace dostatečná k 80-85% aktivaci receptorů pro glycin_B. Pro zahrnutí do finální analýzy byly přijaty pouze výsledky ze stabilních buněk, tj . po alespoň 75% zotavení z odpovědi vůči NMDA po utlumení použitým antagonistou.

Excitotoxicita

Kortikální neurony byly získány z mozkové kůry 17/18 dnů starých krysích plodů (Wistar), s následným obecným disociačním postupem popsaným v literatuře (23) . Po krátké trypsinizaci a jemném rozmělnění ohněm uhlazenou Pasteurovou pipetou byla buněčná suspenze promyta centrifugací. Buňky, byly suspendovány v Neurobazálním médiu bez séra se suplementem B27 (Gibco) před svým nanesením na polylysinem (Sigma; 0,2 mg/ml, 20 h, 4°C) a lamininem (Sigma; 2 ug/ml), 1 h, 37°C) potažené 96-jamkové destičky (Falcon, Primaria) v hustotě 5 x 10⁴ buněk/jamku. Kortikální neurony byly udržovány při teplotě 37°C v humidifikovaném 10% CO₂/90% vzduchu. Jeden den po umístění na destičku bylo přidáno do každé jamky 5 uM cytosin-p-Darabinofuranosidu (Sigma) za účelem inhibice proliferace gliálních buněk. Médium bylo poprvé vyměněno po čtyřech dnech obměněním 2/3 média za astrocyty-upravené médium. Pro • · experimenty byly použity kortikální neurony ze dnů 12 a 14 kultivace.

Astrocyty z novorozených krys byly izolovány ne-enzymovou cestou podle metody popsané v literatuře (24) . Stručně řečeno byly obě hemisféry získány z 2 dnů starých krys, protlačeny přes 80 uM gázu a rozmělněny Pasteurovou pipetou. Buněčná suspenze byla vytvořena za pomoci Dulbeccova modofikovaného esenciálního média (DMEM, Gibco) suplementovaného 10% fetálním telecím sérem (FCS, Hyclon) , 2 mM glutaminu (Gibco) a 50 ug/ml gentamycinu a přeneseny do plastových kultivačních nádob (Corning; 75 cm³) . Dva dny po umístění byly nádoby protřepány na rotační třepačce (150 U/min) za účelem odstranění mikrogliálních buněk. Kultury byly kultivovány 14 dnů až do splývání kolonií a kultivační médium bylo vyměňováno dvakrát týdně. Poté byly gliové monovrstvy důkladně promyty Neurobazálním médiem bez séra (Gibco) za účelem odstranění séra. Nádoby byly poté několikrát protřepány za účelem odstranění oligodendrocytů a neuronů. K získání média upraveného z primárních astrocytů byly kultury inkubovány v čersvém Neurobazálním médiu suplementovaném B27 a glutaminem. Každé 2-3 dny bylo upravené médium sbíráno a nahrazeno celkem čtyřikrát čerstvým médiem.

Expozice vůči EAA byla provedena v Neurobazálním médiu bez séra obsahujícím 100 uM glutamátu a testovaného léku. Po 20 hodinách inkubace byl morfologicky vyšetřen cytotoxický efekt za použití fázově-kontrastního mikroskopu, a dále biochemicky kvantifikován měřením životnosti buněk za pomoci MTT testu (Promega). V této kolorimetrické analýze se měří redukce zprostředkovaná mitochondriemi živých buněk tetrazoliové složky (MTT) na nerozpustný formazanový produkt. Po inkubaci kortikálních neuronů s roztokem barviva po dobu přibližně 1-4 hodin byl přidán solubilizační roztok za účelem dosažení lýzy buněk a solubilizace barevného produktu (inkubace přes noc při teplotě 37°C, 10% CO2, 90% RH) . Tyto vzorky byly poté odečteny · · · • 9 9 90 9

99»9 za použití ELISA zařízení na odečítání výsledků (Thermomax, MWG Biotech) při vlnové délce 570 nm. Množství vytvořené barvičky bylo přímo úměrné počtu živých buněk.

In vivo

Antikonvulzivní aktivita

NMR myší samice (18-28 g), které byly ustájeny po pěti v jedné kleci, byly použity testy maximálního elektrošoku (MES) a motorického poškození. Všechna zvířata měla neomezený přístup k vodě a potravě za podmínek 12 hodinového cyklu světlo-tma (světlo zapínáno v 6 hodin ráno) a kontrolované teploty (20±0,5°C) . Všechny experimenty byly provedeny mezi 10 hodinami ráno a 5 hodinami odpoledne. Testované látky byly injikovány 30 minut i.p. před indukcí křečí, pokud není uvedeno jinak (viz níže) . Všechny sloučeniny byly rozpuštěny v 0,9% salinickém roztoku.

MES test byl proveden spolu s testy zaměřenými na myorelaxaci (trakční reflex) a motorickou koordinaci (rotarod). Pro provedení testu trakčního reflexu byly myši umístěny jejich předními tlapkami na horizontální tyčku a na 10 sekund byly všechny čtyři tlapky napojeny na drát. Pro test ataxie (motorické koordinace) byly myši umístěny na rotarod (5 rpm) , kde zůstaly na tyčce po dobu 1 minuty. Pouze myši, které nedosáhly kritérií ve všech třech opakování v každém testu, byly považovány, že vykazují myorelaxaci nebo ataxii. Tyto testy byly následovány testem MES (100 Hz, trvání šoku 0,5 sekundy, intenzita šoku 50 mA, trvání impulzu 0,9 ms, Ugo Basile) aplikovaném prostřednictvím korneálních elektrod. Přítomnost tonických křečí byla hodnocena skórem (tonické extenze zadních tlapek s maximálním úhlem k tělu 90°) . Cílem bylo získat hodnoty ED₅₀ pro všechny hodnocené parametry (antikonvulzivní aktivita a motorické vedlejší účinky) za použití Lichtfieldova Wilcoxonova testu pro odpovědi na velikost dávky. Jako terapeutický index (TI) bylo použito rozdělení hodnoty ED50 pro vedlejší účinky (ataxie nebo • · ··· « · · ’ ·«·· Φ ·*♦<·* · ♦ ·* myorelaxace) hodnotou ED50 pro antagonismus křečí vyvolaných elektrošokem.

Statistická analýza

Hodnoty IC₅₀ ve studiích políčkové aktivity, elektrotoxicity a vazebných studií byly vypočteny podle čtyřparametrového logistického vzorce za použití počítačového programu Grafit (Erithacus Software, Anglie). Hodnoty Ki pro vazebné studie byly poté určeny podle Chenga a Prusoffa. Prezentované hodnoty vazby jsou vyjádřeny jako průměrné hodnoty ± SEM (směrodatná chyba) z 3-5 pozorování (každé provedené v dubletu).

4-7 dávek antagonisty bylo testováno v každém z in vivo testů (5-8 zvířat na dávku), což umožnilo výpočet stupňovaných hodnot ED₅o podle probitové analýzy (Lichtfield a Wilcoxon) s korekcí pro 0% a 100% účinky. Hodnoty ED₅₀ jsou prezentovány v 95% konfidenčních intervalech (CI). Ke srovnání in vitro účinnosti a in vivo antikovulzivní aktivity byla použita Pearsonova kotrelační analýza (Sigma Stát, Jandel Scientific).

Výsledky

Vazba

Všechny cyklohexany uvolnily vazbu (³H)-(+)-MK-801 na krysí kortikální membrány v hodnotami IC₅₀ mezi 4 a 150 uM, zatímco hodnoty Ki posuzované Cheng-Prussoffovou rovnicí byly dvakrát nižší (viz Tabulka 7).

Políčková aktivita

Ustálené vnitřní proudové odpovědi kultivovaných hipokampálních neuronů vůči NMDA (200 uM s glycinem 1 uM při 70 mV) byly antagonizovány testovanými cyklohexany s hodnotami IC₅₀ mezi 1,3-99 uM (Tabulka 7). Vrcholové a ustálené proudy byly ovlivněny ve stejném rozsahu, což znamená, že je nepravděpodobné, aby tyto účinky byly zprostředkovány glycinovým_B místem. Silnou podporou pro nekompetitivní charakter tohoto antagonismu bylo zjištění jasné závislosti na • · 9 ·· ·· ·· ··

4 4 · · · · · · · 9 • 4 4 · · · 9 4 4 · • 4 · 4 · 4 4 · · 4 4 >4 ·

4 449 9949

499« 4 49 ···· «4 4« použití a voltáži po jejich blokádě. Slabší antagonisté vykázaly rychlejší kinetiku a silnější závislost na voltáži.

Excitotoxicita

Většina cyklohexanů v nízkých koncentracích působila jako efektivní neuroprotektanty in vitro, přičemž Mrz 2/579 se zdá býti nejúčinnější v tomto ohledu (viz Tabulka 7) . U většiny sloučen byla protekce dosažena v koncentracích 20 uM.

In vivo

Antikonvulzivní aktivita

Všechny deriváty cyklohexanů inhibovaly u myší křeče indukované MES s hodnotami ED₅₀ v rozmezí 3,6 až 50 mg/kg i.p. (Tabulka 7). Selektované sloučeniny byly také testovány proti PTZ a NMDA indukovaným křečím (metodika viz (20,21)) a vykázaly srovnatelnou účinnost v MES testu (např. Mrz 2/579 měl hodnoty ED50 v PTZ a NMDA testech 5,5 a 3,7 mg/kg, respektive) . Jejich antikonvulzivní účinnost se zvýšila i.v. podáním (např. Mrz 2/579 ED50 - 2,5 mg/kg) . Mrz 2/579 byl také aktivní po s.c. aplikaci a méně účinný po p.o. podání (hodnoty ED₅₀ 4,6 a 13,7 mg/kg, respektive). Myorelaxace (trakční test) a ataxie (rotarod test) byly pozorovány u některých cyklohexanů v antikonvulzivních dávkách. U většiny z nich nebyla pozorována akutní letalita až do dávek 50 mg/kg.

Korelační analýza

Byla nalezena velmi dobrá zkřížená korelace mezi všemi třemi in vitro analýzami (všechny korelační koeficienty > 0,70, p <

0,001) . Existovala také dobrá korelace mezi antagonizací NMDAindukovanými vnitřními proudy a protekcí proti NMDA-indukované toxicitě in vitro s antikonvulzivní aktivitou in vivo (korelační koeficienty > 0,56, p < 0,01).

• A A · A I » A A · <

AA AAA· «·

A A ····

Tabulka 7

« · • ♦ • · · · ·

Účinky derivátů cyklohexanu a standardních nekompetitivních antagonistů receptoru pro NMDA na vazbu (³H)-( + )-MK-801, proudy indukované NMDA v experimentech políčkové aktivce, glutamátové toxicity v kultivovaných kortikálních neuronech MES-konvulze in vivo. Vazebné Ki hodnoty jsou vyjádřeny jako průměry ± SEM ze

3-5 experimentů. Hodnoty IC₅o (±SEM) v experimentu políčkové aktivace a v experimentech na glutamátovou toxicitu byly určeny z alespoň třech koncentrací vedoucích k 15 až 85% inhibici a alespoň 5 buněk na koncentraci. Hodnoty ED₅₀ jsou pro MES indukované konvulze udané v mg/kg (95%, konfidenční limity jsou uvedeny v závorkách).

Navíc částečně v důsledku jejich aminového substituentu jsou sloučeniny definované v předkládaném vynálezu účinné také v non-NMDA indikacích, protože vykazují imunomodulační účinky, mají účinnost proti malárii, proti viru Borna a viru Hepatitidy

C.

Závěrem lze říct, že z uvedeného je patrné, že předkládaný vynález přináší nové, cenné a nepředvídatelné aplikace a použití sloučenin definovaných v předkládaném vynálezu. Tyto sloučeniny tvoří aktivní složku dle předkládaného vynálezu, stejně tak jako nové farmaceutické preparáty a metody jejich přípravy a léčby s nimi, jejichž charakteristiky a výhody byly popsány v předcházejícím textu.

Vysoký stupeň aktivity aktivní látky definované v předkládaném vynálezu, jak je dokázáno v popsaných testech, ukazuje na její užitek při použití u člověka stejně tak jako u nižších živočichů. Klinické zhodnocení u člověka však dosud nebylo ukončeno. Je zřejmé, že distribuci a marketingu jakékoli sloučeniny nebo preparátu, který je v rozsahu předkládaného vynálezu, určeného k použití u člověka musí předcházet souhlas vládních organizací, jako je například U.S. Federal Food and Drug Administration, organizace, která je zodpovědná má i autorizaci k vydání takových povolení.

A » • A A O AAAA

Závěry

Prezentované 1-amino-alkylcyklohexany představují novou třídu systémově aktivních, nekompetitivních antagonistů pro receptor pro NMDA s rychlou blokující/deblokující kinetikou a silnou závislostí na voltáži. Pro jejich relativně nízkou účinnost a rychlou kinetiku budou tyto látky užitečnými terapeutiky pro široké spektrum onemocnění CNS, které zahrnují poruchy glutamátergní transmise.

Z tohoto důvodu nacházejí tyto sloučeniny aplikaci v terapii následujících chorob živočichů a zejména člověka. Jedná se o: 1. Akutní excitotoxicitu, jako je tomu například u ischémie během iktu, traumatu, hypoxie, hypoglykémie a jaterní encefalopatie. 2. Chronická neurodegenerativní onemocnění, jako jsou například Alzheimerova choroba, vaskulámí demence, Parkinsonova choroba, Huntingtonova choroba, roztroušená skleróza, amyotrofiká laterální skleróza, neurodegenerace při AIDS, olivopontocerebelární atrofie, Tourettův syndrom, onemocnění motorických neuronů, mitochondriální dysfunkce, Korsakoffův syndrom, Creutzfeldova-Jakobova nemoc. 3. Další onemocnění se vztahem k dlouhodobějším plastickým změnám centrálního nervového systému, jako jsou například chronické bolesti, tolerance k lékům, závislost a návykovost (např. na opiody, kokain, benzodiazepiny a alkohol). 4. Epilepsie, dikinesia tarda, schizofrenie, bolesti, spasticita a tinitus. 5 v důsledku jejich aminového substituentu v předkládaném vynálezu účinné anxiozita, deprese, akutní Navíc, jak.již bylo uvedeno, jsou sloučeniny také v non-NMDA definované indikacích, protože vykazují imunomodulační účinky, mají účinnost proti malárii, proti viru Borna a viru Hepatitidy C.

Mělo by být jasné, že předkládaný vynález není omezen na přesné detaily pracovního postupu, nebo na přesné preparáty, metody, postupy či jiné formy předkládaného vynálezu, které byly uvedeny a popsány, protože zřejmé modifikace a ekvivalenty musí * 4 být jasné každému znalému oboru. Předkládaný vynález je tedy omezen pouze svým plným rozsahem, který je legálně v souladu s připojenými patentovými nároky.

ΦΦΦ φ φ φ φ ·» * · • ♦ φ · φ · φ ♦ · · · φφφ · · φ φφφ» «φφφφφφ φ · φφ «φ · • φ φφφ «φφφ φφφφ φ φφ φ·«· φ» Φ·

Reference

1 .	R.L.	Frank, H.K.	Halí (1950) J. Am. Chem. Soc. 72:1645-
	1648	•
2 .	G.A.	Hiegel, P. Burk. (1973) J. Org. Chem.	38:3637-3639.
3 .	N. F.	Firrell, P.	W. Hickmott. (1970) J.	Chem.	Soc. C:716-
	719.
4 .	G.H.	Posner, L.L.	Frye (1984) Isr. J. Chem	.. 24:	88-92 .
5 .	G.L.	Lemiere, T.A. van Osselaer, F.C. Anderweireldt (1978)
	Bull	. Soc. Chim.	Belg. 87:771-782.
6.	H.O.	House, J.M.	Wilkins (1976) J. Org.	Chem.	41©25)4031-
	4033
7 .	A.R.	Greenaway,	W.B. Whaley. (1976) J.	Chem.	. Soc. P.T.
	1. :1385-1389.
8 .	S. Matsuzawa, Y	Horiguchi, E. Nakamura, I	Kuwajima.
	(1989) Tetrahedron 45:(2)349-362.
9.	H.O.	House, W.F.	Fischer. (1968) J. Org.	Chem.	33:(3) 949-
	956.
10	Chiurdoglu, G. ,	Maquestiau, A. (1954)	Bull.	Soc. Chim.
	Belg	. 63: 357-378

11. Zaidlewicz, Μ., Uzarewitz A., Zacahrewicz, W. (1964) Roznicki Chem. 38: 591-597.

12. Crosley, A.W., Gilling, C. (1910) J.Chem.Soc. 2218.

13. Zaidlewicz, M., Uzarewitz A. (1971) Roznicki Chem. 45:

1187-1194 .

14. Lutz, E.T., van der Maas, J.H. (1982) Spectrochim. Acta,

A. 38A: 283.

15. Lutz, E.T., van der Maas, J.H. (1981) Spectrochim. Acta,

A. 37A: 129-134.

16. Ramalingam K., Balasubramanian, M., Baliah, V. (1972) Indián J. Chem. 10: 366-369.

17. Hamlin, K.E., Freifelder, M. (1953) J. Am. Chem. Soc. 75: 369-373.

18. Hassner, A., Fibinger, R., Andisik, D, . (1984) J. Org. Chem. 49: 4237-4244.

19. W. Danysz, C.G. Parsons, I. Bresink, G. Quack (1995) Drug News Perspect 8: 261-277.

	46	• * · · · · * ♦ 9 * * * · · • · · · · · • ·····♦ * · » • * · · · •··· « 9· ·9·9	9 9 99 9 9 9 * • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 · 9 9 9 9
20	. J.D.	Leander, R.	,R. Lawson, P.L.	. , Ornstein, D.M.	Zímmerman
	(1988)	Brain Res.	448: 115-120.
21	C .G.	Parsons,	G. Quack, I.	Bresink, L.	Baran,	E .
	Przegalinski, W.	Kostowski, P.	Krzascik, S. Hartmann,	W.
	Danys z	(1995). Neuropharmacology	34: 1239-1258.

22. M.A. Rogawski (1993) Trends Pharmacol. Sci. 14:325-331.

23. Booher J. a Sensenbrenner M. (1972). Neurobiology 2:97105.

24. Dichter, M. (1987) Brain Research 149:279.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 1-aminoalkylcyklohexanová sloučenina sloučenin charakterizovaných vzorcem vybraná z těchto

4 4 4« « 4 4 4

4 4 4 · • 4 4 ♦

4 4 4 4

44 44 kde R* je - (CH₂) n (CR⁶R⁷⁾m-NR⁸R⁹ _fkde n+m = 0, 1 nebo 2 ₍ kde R¹ až R⁹ jsou nezávisle vybrány z vodíku a nižšího alkylu (1-6C), přičemž alespoň R¹, R⁴ a R⁵ je nižší alkyl;
2. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R¹ až R⁵ je metyl.
3. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R¹ je etyl.
4. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R² je etyl.
5. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R³ je etyl.
6. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R⁴ je etyl.
7. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R⁵ je etyl.
8. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R⁵ je propyl.
9. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R⁶ nebo R⁷je metyl.
10. Sloučenina definovaná v patentovém nároku 1, kde R⁶ nebo R⁷je etyl.