FI119809B - NMDA-reseptorin 1-aminoalkyylisykloheksaaniantagonisteja - Google Patents

Description

„ i ‘

* * I

119809 NMDA-reseptorin 1-aminoalkyylisykloheksaaniantagonisteja - 1-aminoalkyl-cyclohexanantagonister av NMDA-receptor

Keksinnön tausta 5 1. Keksinnön ala 1-aminoalkyylisykloheksaaniyhdisteitä, jotka ovat systeemisesti aktiivisia NMDA-reseptorin antagonisteina, näitä käsittäviä farmaseuttisia koostumuksia, näiden valmistusmenetelmä ja näiden käyttöön perustuva menetelmä sellaisten keskushermostosairauksien hoitamiseksi, joihin liittyy glutamatergisen transmission 10 häiriöitä.

2. Tekniikan taso

Antagonististen aineiden vaikutuksilla N-metyyli-D-aspartaatti (NMDA) -tyyppisiin glutamaattireseptoreihin on potentiaalisesti suuri määrä terapeuttisia sovellutuksia [19], NMDA-reseptorien toimintaa kyetään inhiboimaan eri tunnistuskohdissa, ku- 15 ten primaarisessa välittäjäainekohdassa, strykniinille epäherkässä glysiinikohdassa (glysiiniB), polyamimikohdassa ja kationikanavan sisäpuolella sijaitsevassa fensyklidiinikohdassa, tapahtuvien vaikutusten perusteella. NMDA-reseptorin . kanavan estäjät vaikuttavat unkompetitiivisella “käytössä olosta riippuvaisella” tavalla, mikä tarkoittaa sitä, että ne estävät kanavan toiminnan tavallisesti ainoas- *·..*' 20 taan tämän ollessa avoimena. Useat tutkijat ovat tulkinneet tämän käytössäolo- v.: riippuvuuden tarkoittavan sitä, että reseptorin aktivaation voimistumisen pitäisi joh- • · taa antagonistisuusasteen voimistumiseen. Tällaisen vaikutustavan katsotaan lisäksi :T: tarkoittavan sitä, että tämä antagonistiluokka voi olla erityisen käyttökelpoinen silloin, kun NMDA-reseptorien voidaan odottaa yliaktivoituvan, kuten on asianlaita 25 epilepsiassa, iskemiassa ja traumassa. Selektiivisestä, suuriaffiniteettisesta, voimakkaasti käytössäoloriippuvaisesta unkompetitiivisesta NMDA-reseptorin . ·: ·. antagonistista, (+)-5-metyyli-10,11 -dihydro-5H-dibentsosyklohepteeni-5,10-imiini- • · · maleaatista, ((+)-MK-801) saadut ensikokemukset kliinisessä käytössä ovat tuottaneet pettymyksen. Asianlaita oli nimittäin niin, että tämän tehokkuus epilep- 30 sian hoidossa oli heikko samalla kun terapeuttisilla annoksilla ilmeni joitakin psykotrooppisia sivuvaikutuksia. Nämä havainnot siihen tosiseikkaan yhdistettynä, .·. : että fensyklidiinin väärinkäyttäjät kokevat samanlaisia psykotrooppisia oireita, ovat * · · johtaneet johtopäätökseen, että vaikuttaminen NMDA-reseptoreihin unkompeti-tiivisilla antagonisteilla ei ole mahdollisesti terapeuttisesti lupaava lähestymistapa.

2 119809

Hienosyisempiä sähköfysiologisia menetelmiä käyttäen on kuitenkin saatu viitteitä siitä, että erilaiset unkompetitiiviset antagonistit eivät ole keskenään samanarvoisia, koska tekijöillä, kuten reseptorien toiminnan estymisen nopeudella (päälle-päältä pois -kinetiikalla) ja tämän vaikutuksen jänniteriippuvaisuudella, voi olla määräävä 5 osuus farmakodynaamisten ominaisuuksien, toisin sanoen myös hoitoturvallisuuden, muodostumiseen in vivo -olosuhteissa. On paradoksaalista, että aineet, joilla suuren affiniteetin sijaan esiintyy pienestä kohtalaiseen tasoon olevaa affiniteettia, voivat olla haluttuja. Tällaiset havainnot panivat lääkeaineiden kehitystyössä alulle NMDA-reseptorien unkompetitiivisia antagonistisia vaikutuksia koskevan 10 käsityksen uudelleentarkastelun [19, 22]. Monet tällaiset aineet, esimerkiksi karve-diloli, ADCI, ES 242S, remasemidi, felbamaatti ja budipiini, ovat tällä hetkellä eri kehitysvaiheissa. Toisaalta NMDA-reseptorin unkompetitiivisia antagonisteja, kuten amantadiinia ja memantiinia - jotka täyttävät edellä olevat kriteerit -, on käytetty kliinisesti useiden vuosien ajan Parkinsonin taudin ja dementian hoidossa, maini-15 tussa järjestyksessä ilmoitettuna, ja ne todella tuottavatkin harvoin sivuvaikutuksia indikaatioitaan vastaavilla terapeuttisilla annoksilla käytettynä.

Edellä mainitun todistusaineiston valossa tässä keksinnössä on kehitetty sarja uusia 1-aminoalkyylisykloheksaanirakenteeseen perustuvia NMDA-reseptorin unkompetitiivisia antagonisteja. Käsillä oleva tutkimus omistettiin näiden 1-aminoalkyyli-20 sykloheksaanijohdannaisten NMDA-reseptoreihin kohdistuvien antagonististen *”*: ominaispiirteiden tutkimiselle reseptorisitoutumismäärityksissä, patch clamp -ko- ;***: keissa, eksitotoksisuudessa in vitro -olosuhteissa, kolmessa kouristusmallissa ja «M ** kahdessa motorisen toiminnan heikentymismallissa. Näiden 1-aminoalkyylisyklo- • · : heksaanien substituutiot on esitetty yksityiskohtaisesti taulukossa 6.

• * • · · V ’ 25 Käsillä oleva keksintö • · t * · · • * ·

Keksinnössä on havaittu, että tietyillä 1-aminoalkyylisykloheksaaneilla esiintyy .···, NMDA-reseptoriin kohdistuvaa huomattavaa antagonistista aktiivisuutta, joka ei * * · ollut ennakkoon odotettavissa. Edellä mainitun ominaisuuden ansiosta nämä aineet • · · *. soveltuvat sellaisten keskushermostosairauksien hoitoon, jotka muodostavat suuren • · :.*·· 30 määrän erilaisia sairauksia ja joihin liittyy glutamatergisen transmission häiriöitä, :*·: edullisesti näitä sisältävän farmaseuttisen koostumuksen muodossa, jossa ne esiin- .•j*. tyvät yhdessä yhden tai useamman farmaseuttisesti hyväksyttävän laimentimen, • * · . kantaja-aineen tai lisäaineen kanssa.

• *»! • · 3 119809

Keksinnön tavoitteet Käsillä olevan keksinnön tavoitteena on saada aikaan uusia farmaseuttisia yhdisteitä, jotka ovat NMDA-reseptorin 1-aminoalkyylisykloheksaaniantagonisteja, ja näiden farmaseuttisia koostumuksia. Keksinnön lisätavoite on saada aikaan uusi 5 menetelmä, joka sisältää sen, että tämän keksinnön mukaista yhdistettä tai tätä sisältävää farmaseuttista koostumusta käyttämällä hoidetaan, eliminoidaan, lievitetään, helpotetaan tai parannetaan sellaisia haitallisia keskushermostosairauksia, joihin liittyy glutamatergisen transmission häiriöitä. Keksinnön lisätavoite on saada aikaan mainittujen aktiivisten 1-aminoalkyylisykloheksaaniyhdisteiden valmistus-10 menetelmä. Vielä muut tavoitteet käyvät ilmi tuonnempana esille tuotavista seikoista ja muut lisätavoitteet ovat alan ammattikokemuksen perusteella ilmeisiä.

Keksinnön yhteenveto Tämän keksinnön uskotaan käsittävän sen, mitä yhteenvedon muodossa voidaan ilmaista muun muassa seuraavasti: 15 1 -aminoalkyylisykloheksaaniyhdiste, joka on valittu yhdisteistä, joilla on kaava: R5 ,R* x • · · • * * « * · · • * R2 R3 • · · jossa R* on -(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9 • « · * ♦ · ·*·*: jossa n + m = 0, 1 tai 2 * :.*·· jossa ryhmät Rl - R9 on valittu muista riippumattomasti vedystä ja (1 - 6-C)-alempi- •: · ·: 20 alkyylista menetellen niin, että vähintään ryhmät R1, R4 ja R5 ovat alempialkyyli; * * · · *. ** : tällainen yhdiste, jossa R1 - R5 ovat metyyli; • · • * * * · · tällainen yhdiste, jossa R1 on etyyli; tällainen yhdiste, jossa R2 on etyyli; 4 119809 tällainen yhdiste, jossa R3 on etyyli; tällainen yhdiste, jossa R4 on etyyli; tällainen yhdiste, jossa R5 on etyyli; tällainen yhdiste, jossa R5 on propyyli; 5 tällainen yhdiste, jossa R6 tai R7 on metyyli; Λ 7 tällainen yhdiste, jossa R tai R on etyyli; ja tällainen yhdiste, jossa yhdiste on valittu ryhmästä, joka koostuu 1-amino-1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista, l-amino-l,3,5,5-tetrametyyli-3-etyylisykloheksaa-nista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-3,3-dietyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-tri-10 metyyli-cis-3-etyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-trans-3-etyylisyklo-heksaanista, l-amino-l-etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaanista, 1-amino-1- propyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaanista, N-metyyli-l-amino-1,3,3,5,5-penta-metyylisykloheksaanista ja N-etyyli-1-amino-1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaa-nista, ja minkä tahansa edellä olevien yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävistä 15 suoloista.

Lisäksi NMDA-reseptoriantagonistilla lievittyvän sairaustilan lievittämiseen tarkoi- *:·*: tettu eläimen hoitomenetelmä, joka käsittää vaiheen, jossa mainitulle eläimelle an- :***: netaan mainittuun sairauteen lievittävästi vaikuttava määrä 1-aminoalkyylisyklo- • · · ;heksaaniyhdistettä, joka on valittu yhdisteistä, joilla on kaava * • · :·*·: R5 *R*

"·· V

Ä ·♦· • · · • · * ·:··· 20 R2 R3 jossa R* on -(CH2)„-(CR6R7)m-NR8R9 • · • · · * ·» » · jossa n + m = 0, 1 tai 2 5 119809 jossa R1 - R9 on valittu muista riippumattomasti vedystä ja (1 - 6-C)-alempialkyy-lista; tällainen menetelmä, jossa R1 - R5 ovat metyyli; tällainen menetelmä, jossa R1 on etyyli; 5 tällainen menetelmä, jossa R on etyyli; tällainen menetelmä, jossa R on etyyli; tällainen menetelmä, jossa R4 on etyyli; tällainen menetelmä, jossa R5 on etyyli; tällainen menetelmä, jossa R5 on propyyli; 10 tällainen menetelmä, jossa R taiR on metyyli; tällainen menetelmä, jossa R tai R on etyyli; ja tällainen menetelmä, jossa yhdiste on valittu ryhmästä, joka koostuu 1-amino- 1.3.3.5.5- pentametyylisykloheksaanista, 1 -amino-1,3,5,5~tetrametyyli-3-etyyli-sykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-3,3-dietyylisykloheksaanista, 1-amino- *·"" 15 l,5,5-trimetyyli-cis-3-etyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-trans-3- :.*.*.*: etyylisykloheksaanista, l-amino-l-etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaanista, 1- : V; amino-1 -propyyli-3,3,5,5 -tetrametyy lisykloheksaanista, N -metyyli-1 -amino- 1.3.3.5.5- pentametyylisykloheksaanista, N-etyyli-l-amino-l,3,3,5,5-pentametyyli- • · sykloheksaanista ja minkä tahansa edellä olevien yhdisteiden farmaseuttisesti hy-20 väksyttävistä suoloista; ja • * · • tällainen menetelmä, jossa yhdistettä annetaan tämän farmaseuttisen koostumuksen :J : muodossa, joka käsittää tätä yhdistettä yhteen tai useampaan farmaseuttisesti : V: hyväksyttävään laimentimeen, lisäaineeseen tai kantaj a-aineeseen yhdistettynä.

* * **.’*: Lisäksi farmaseuttinen koostumus, joka käsittää NMDA-reseptoriantagonistisesti ·:·*: 25 vaikuttavana määränä tai immunomodulatorisesti, malariaa vastaan, bomaviruksia vastaan tai hepatiitti C:tä vastaan vaikuttavana määränä sellaisen 1-aminoalkyyli- ,·, . sykloheksaaniyhdisteen sisältävää NMDA-reseptoriantagonistia, joka on valittu * · · * ' yhdisteistä, joilla on kaava: 6 119809 RS vR* Λ

Ra R3 jossa R* on -(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9 jossa n + m = 0, 1 tai 2 jossa R1 - R9 on valittu muista riippumattomasti vedystä ja (1 - 6-C)-alempi-5 alkyylista menetellen niin, että vähintään ryhmät R1, R4 ja R5 ovat alempialkyyli, yhdistettynä yhteen tai useampaan farmaseuttisesti hyväksyttävään laimentuneen, lisäaineeseen tai kantaja-aineeseen; tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R1 - R5 ovat metyyli; tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R1 on etyyli; 10 tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R2 on etyyli; tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R3 on etyyli; . tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R4 on etyyli; • · ·*.,*: tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R5 on etyyli; * · * · • f · - tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R on propyyli; • *i • · 15 tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R6 tai R7 on metyyli; • ·· • · · *·* * 67 tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa R tai R on etyyli; * * * V : tällainen farmaseuttinen koostumus, jossa yhdiste on valittu ryhmästä, joka koostuu :V: l-amino-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista, 1-amino-1,3,5,5-tetrametyyli-3- ; etyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-3,3-dietyylisykloheksaanista, 1- * · * ’ I 20 amino-l,5,5-trimetyyli-cis-3-etyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli- trans-3 -etyylisykloheksaanista, l-amino-l-etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisyklohek-ί,Γ: saanista, l-amino-l-propyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaanista, N-metyyli-1- i\j amino-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista ja N-etyyli-l-amino-1,3,3,5,5- pentametyylisykloheksaanista, ja minkä tahansa edellä olevien yhdisteiden farma-25 seuttisesti hyväksyttävistä suoloista.

7 119809

Keksinnön yksityiskohtainen selitys

Seuraavat yksityiskohdat ja yksityiskohtaiset esimerkit esitetään ainoastaan keksinnön kuvaamiseksi eikä niiden ole katsottava olevan sitä rajoittavia.

• · • · · • · * · ··· * · • · · » 1 · • 1 • · * · · 4» * 1 ··» • · « * 4 t • · · • · • · · · » • · · • · · « · · 4 I · • I 1 * * • · • 1 · • M » · • · • I· 1 · • · · · • · · * tl • 1 3 119809

Menetelmät

Kemialliset muokkaustoimenpiteet Λ X0'* 5cC0=E' rraA= R'tO'R‘ —* rsCA/;

R 1 R1 2 K " J R

1 ^ ^ sr» A·:: A;; Αί 2 R i R 11 RJ0H ^0, . A’ . ' O-SO.CH, v° jt va <>; rsCV; <>; R j R Rl 4 R r! a V R‘ a R‘ ..., rA \ / R-LNl

-:::= *A>R‘ _^ κΑ^)"(Α7)Νκ%9·Ηα «AA

:··..= 1 7^%., a

• · R R

**· _ f • · * Jr g .*!.* \ 3 01 V : R^NHCOX ^ \ R^/_'01 Ry^COjEt .·*·. r,^TjUr4 r,4_)>r4* r,^Ö*r4

.·:·. rI R R* rj ie R Ri R

R’ ncox a I Ai J„ :T: RvA>H 15 8 Y ’ ::·,· *sCv; —* <>;

R: V R1 R r* R

2 2 li 9 119809 3-propyyli-5,5-dimetyyli-2-sykloheksen-l-onin (1-7) valmistus

Liuos, joka sisälsi eetteriin valmistettua 3-etoksi-5,5-dimetyyli-2-sykloheksen-l-onia [1] (5,04 g, 30 mmol), lisättiin pisaroittani seosta samalla sekoittaen liuokseen, joka sisälsi propyylimagnesiumjodidia, joka oli valmistettu 90 mg.sta magnesiumia 5 ja 90 millimoolista 1-jodipropaania 60 ml:ssa eetteriä. Reaktioseosta sekoitettiin ensin 1 h ympäristön lämpötilassa, minkä jälkeen sitä käsiteltiin 5-prosenttisella H2S04-liuoksella. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin suolavedellä, kuivattiin MgS04in päällä ja haihdutettiin, mistä saatiin raakatuotteena öljymäistä materiaalia, joka erotettiin silikageelikolonnissa eluoiden heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella. 10 Sykloheksenonia (1-7) saatiin värittömänä öljymäisenä materiaalina (2,0 g, 70 %). 'H NMR (CDC13, TMS) 8:0,92 (3 H, t, J = 7 Hz); 1,03 (6 H, s); 1,3 - 1,75 (2 H, m); 2,16 (2 H, t, J = 7 Hz); 2,17 (2 H, d, J = 1,5 Hz); 2,21 (2 H, s) ja 5,87 ppm (1 H, t, J - 1,5 Hz).

Yhdisteiden 2 valmistamiseen käytettiin tällaisia tunnettuja sykloheksenoneja 1: 15 1-1 (R1 = R2 = R3 = H) [saatavilla kaupallisesti], 1-2 (R3 = Me)* [saatavilla kaupallisesti], 1-3 (R2 = R3 = Me) [saatavilla kaupallisesti], 1-4 (R1 = R2 = Me) [2], 1-5 (R1 = R2 = R3 = Me) [saatavilla kaupallisesti], 20 1-6 (R1 = R2 = Me, R3 = Et) [3], ...* *Rn = H, mikäli tämä on jätetty pois • · · • · · • ·

Muita lähtömateriaaleja 1 valmistetaan samalla tai samanlaisella tavalla.

*·* • · · • · 1

Yleinen menettely sykloheksanonien 2 valmistamiseksi « * *

Vedetöntä kupari(l)kloridia (7,5 mmol) lisättiin seosta samalla jäähdyttäen liuok- ·’·*: 25 seen, joka sisälsi eetteriin valmistettua alkyylimagnesiumjodidia (15 - 18 mmol).

Seosta sekoitettiin reagoimattomassa atmosfäärissä 5 minuuttia ja siihen lisättiin ,· . pisaroittani eetteriin valmistettua 2-sykloheksen-l-onin 1 (10 mmol) liuosta pitäen • · *· *· lämpötila alle -5°C:n. Kun ketonin lisäys oli suoritettu loppuun, reaktioseosta sekoitettiin 1 tunti ja se neutraloitiin huolellisesti kylläisellä vesipitoisella NH4CI-·*·*: 30 liuoksella. Vakiintuneen käytännön mukaisten Grignard-reaktioiden jatkokäsittely- : toimenpiteiden jälkeen saatiin raakamateriaalia, joka erotettiin silikageelikolon nissa, eluoiden petrolieetterin ja etyyliasetaatin seoksella. Sykloheksanoneja 2 saatiin öljymäisinä materiaaleina.

10 1 1 98 09

Yhdisteiden 2 saannot ja Ή NMR-spektrien määritystulokset on esitetty taulukossa 1.

Yhdisteiden 3 valmistamiseen käytettiin tällaisia tunnettuja sykloheksanoneja 2.

2-1 (R4 = Me)* [saatavilla kaupallisesti], 5 2-2 (R4 = Et) [4], 2-3 (R4 = Pr) [5], 2-4 (R3 = R4 = Me) [6], 2-5 (R3 = Me, R4 = Et) [7], 2-6 (R3 - Me, R4 = Pr) [8], 10 2-7 (R1 = R4 = Me) [9], 2-8 (R2 = R3 = R4 = Me) [10], 2-9 (R2 = R3 = Me, R4 = Et) [11], 2-13 (R1 = R2 = R3 = R4 = Me) [saatavilla kaupallisesti], 2- 14 (R1 = R2 = R3 = Me, R4 = Et) [10], 15 2-15 (R1 = R2 = R3 = Me, R4 = Pr) [10].

*R" = H, mikäli tämä on jätetty pois.

Muita sykloheksanonivälituotteita 2 valmistetaan samalla tai samanlaisella tavalla. Sykloheksanoneja 2 käytettiin yhdisteiden 3 valmistamiseen: * * Yleinen menettely alkyylisykloheksanolien 3 valmistamiseksi.

»·· 20 Alkyylimagnesiumjodidin (3-4 ekvivalenttia) eetteriliuosta lisättiin pisaroittain e · .•,j seosta samalla jäähdyttäen eetteriin valmistettuun sykloheksanoni 2:n liuokseen.

Seosta sekoitettiin 1 tunti ympäristön lämpötilassa ja reagenssi hävitettiin varovasti * t · kylläisellä vesipitoisella ammoniumkloridilla. Vakiintuneen käytännön mukaisten *** * Grignard-reaktioiden jatkokäsittelytoimenpiteiden jälkeen saatiin diastereomee- 25 listen alkoholien 3 seos, joka erotettiin silikageelikolonnissa eluoiden petrolieetterin i.: : ja etyyliasetaatin seoksella.

··« • · · • · · • 1 .* , Yhdisteiden 3 saannot ja H NMR-spektrien määritystulokset on esitetty taulukossa • · i 2.

« * ·

Yhdisteiden 4 valmistamiseen käytettiin tällaisia tunnettuja sykloheksanoleja 3: • · · • 30 3-1 ((R3)(R4) = R5 = Me)* [9], toisin sanoen R3 tai R4 ja R5 ovat Me.

3- 4 (R3 = R = Me, R5 = Me) [12], 3-5 (R3 = R5 = Me, R4 = Et) [13], 11 119809 3-7 (R1 = R4 = R5 = Me) [14], 3-8 (R1 = R3 = R4 = R5 = Me) [10], 3-13 (R1 = R2 = R3 = R4 = R5 = Me) [10], 3-14 (R1 = R2 = R3 = R4 = Me, R5 = Et) [15], 5 *Rn = H, mikäli tämä on jätetty pois.

Muita sykloheksenolivälituotteita 3 valmistetaan samalla tai samanlaisella tavalla.

Yleinen menettely l-alkyyli-l-atsidosykloheksaanien 4 valmistamiseksi.

Alkoholi 3 yhdistettiin kloroformiin valmistettuun 1,7- 2 N typpivetyhappo-liuokseen (10 - 13 ekvivalenttia) ja jäähdytettiin jäähauteessa. Seokseen lisättiin 10 pisaroittani kloroformiin valmistettua TiCLpliuosta (1,2 ekvivalenttia) pitäen lämpö tila samalla alle 5 °C:n. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 24 tuntia ja käsiteltiin alumiinioksidikolonnissa eluoiden kloroformilla. Kun liuotin oli haihdutettu, saatiin diastereomeerisiä atsideja 4, jotka puhdistettiin pikakromatografialla silikageelissä eluoiden matalassa kiehumispisteessä kiehuvalla petrolieetterijakeella.

15 Yhdisteiden 4 saannot ja *H NMR-spektrien määritystulokset on esitetty taulukossa 3.

Muita 1 -alkyyli-1 -atsidosykloheksaanivälituotteita 4 valmistetaan samalla tai ·;··· samanlaisella tavalla.

·· • 9 ;*·* l-nitrometyyli-3,3,5,5-tetrametyylisyklohekseenin (6) valmistus.

• · « • · ♦ • · 20 Liuosta, joka sisälsi 3,3,5,5-tetrametyylisyMoheksanonia (2-13) (1,54 g, lOmmol) ja etyleenidiamiinia (60 mg) nitrometaanissa (45 ml), palautusjäähdytettiin argon-atmosfäärissä 25 h. Nitrometaaniylimäärä poistettiin sitten vakuumissa ja jäännös puhdistettiin pikakromatografialla silikageelissä eluoiden heksaanin ja etyyliasetaa- #...t tin seoksella (6 : 1). Saatiin 1,2 g (61 %) yhdistettä 6 öljymäisenä materiaalina.

• · · • V : 25 *11 NMR (CDC13, TMS) δ 0,96 ja 1,03 (yhteensä 12 H, kumpikin s, sykloheksaani- : 3,5-CH3); 1,34 (2 H, s, 4-CH2); 1,82 (2 H, br s, 6-CH2); 4,80 (2 H, s, CH2N02) ja .’..J 5,64 ppm (1 H, br s, OC-H).

• *♦

Etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksylideeniasetaatin (7) valmistus.

Liuokseen, joka sisälsi trietyylifosfonoasetaattia (49,32 g, 0,22 mol) kuivassa 30 THF:ssa (180 ml) argonin alla, lisättiin pienin erin NaH:ta (8,8 g, 0,22 mol, mineraaliöljyyn valmistettu 60-prosenttinen suspensio) seosta samalla sekoittaen ja 12 1 1 9809 sitä jäävedeUä jäähdyttäen. Sekoitusta jatkettiin 1 h huoneenlämmössä, minkä jälkeen seokseen lisättiin 10 min kuluessa liuos, joka sisälsi 3,3,5,5-tetrametyyli-sykloheksanonia (2-13) (30,85 g, 0,2 mol) ja tuloksena olevaa seosta palautus-jäähdytettiin 22 h. Tämä yhdistettiin sitten jäihin (400 g), tuote uutettiin eetterillä 5 (4 * 150 ml) ja liuos kuivattiin MgS04:n päällä. Vakuumissa suoritetun materiaalin väkevöinnin jälkeen jäännös tislattiin 145 °C:ssa (llmm), mistä saatiin 36,8 g (86 %) yhdistettä 6 öljymäisenä materiaalina.

'H NMR (CDCI3, TMS) δ 0,96 ja 0,98 (yhteensä 12 H, kumpikin s, sykloheksaani- 3.5- CH3); 1,27 (3 H, t, CH3-etyyli); 1,33 (2 H, m, sykloheksaani-4-CH2); 1,95 ja 10 2,65 (yhteensä 4 H, kumpikin s, sykloheksaani-2,6-CH2); 4,14 (2 H, q, CH2-etyyli) ja 5,69 ppm (1 H, s, =C-H).

Etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyliasetaatin (8) valmistus

Etanoliin (100 ml) valmistettua etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksylideeniase-taattia (7) (4,48 g, 20 mmol) vedytettiin 10-prosenttisella Pd/C.Tlä (0,22 g, 15 5 paino-%) 10 atm:n paineessa 18 h. Kun materiaali oli suodatettu Celite™:n läpi ja haihdutettu, saatiin 4,28 g (95 %) yhdistettä 8 öljymäisenä materiaalina.

Ή NMR (CDCI3, TMS) δ 0,89 ja 1,02 (yhteensä 12 H, kumpikin s, sykloheksaani- 3.5- CH3); 1,26 (3H, t, J = 7 Hz, CH3-etyyli); 0,6 - 1,55 (7 H, m, renkaan protonit); 2,13 (2 H, m, 2-CH2); ja 4,12 ppm (2 H, q, J = 7 Hz, CH2-etyyli).

• * • ·

«M

20 2-metyyli-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyli)propan-2-olin (9) valmistus.

* * • · * · · *· " Eetteriin (20 ml) valmistettu liuos, joka sisälsi etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisyklo- v : heksyyliasetaattia (8) (2,26 g, 10 mmol), lisättiin 15 min kuluessa pisaroittain seosta • »t ·*.·* ·* samalla jäävedellä jäähdyttäen liuokseen, joka oli valmistettu eetteriin (20 ml) ja joka sisälsi 2 M metyylimagnesiumjodidia. Seosta palautusjäähdytettiin 2 h, :*·*· 25 jäähdytettiin ja reaktio lopetettiin kylläisellä vesipitoisella NUtCkllä. Vakiintuneita toimenpiteitä käyttäen suoritetun jatkopuhdistuksen jälkeen tuote puhdistettiin .· . silikageelikolonnissa eluoiden heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (20 : 1), mistä 1 1 « '· " saatiin 1,7 g (80 %) yhdistettä 9 öljymäisenä materiaalina.

• · !H NMR (CDCI3, TMS) δ 0,86 ja 1,00 (yhteensä 12 H, kumpikin s, sykloheksaani-30 3,5-CH3); 1,23 (6 H, s, a-CH3); 1,36 (2 H, d, J = 5 Hz, -CH2-); 0,6 - 2,04 ppm (8 H, • · ® ** m, renkaan protonit ja OH).

13 119809 2-metyyli-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyli)propyyH-2-atsidin (10) valmistus.

Booritrifluoridieteraattia (0,77 g, 0,69 ml, 5,44 mmol) lisättiin pisaroittani seosta samalla sekoittaen liuokseen, joka sisälsi 2-metyyli-(3,3,5,5-tetrametyylisyklo-heksyyli)-propan-2-olia (9) (0,96 g, 4,53 mmol) ja trimetyylisilyyliatsidia (0,63 g, 5 0,72 ml, 5,44 mmol) bentseenissä (10 ml). Kun seosta oli sekoitettu 24 h huoneenlämmössä, se yhdistettiin veteen (20 ml). Orgaaninen faasi erotettiin ja pestiin kylläisellä vesipitoisella NaHC03:lla (10 ml) ja suolavedellä (10 ml). Liuos kuivattiin MgSO^n päällä, suodatettiin ja väkevöitiin. Raakatuote puhdistettiin silikageelikolonnissa eluoiden heksaanilla, mistä saatiin 0,56 g (52 %) yhdistettä 10 10 öljymäisenä materiaalina. !H NMR (CDC13, TMS) δ: 0,87 ja 1,01 (yhteensä 12 H, kumpikin s, sykloheksaani-3,5-CH3); 1,27 (6 H, s, a-CH3); 1,36 (2 H, d, J = 5 Hz, -CH2-); 0,6 - 1,85 ppm (7 H, m, renkaan protonit).

2-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyli)-etanolin (11) valmistus.

Liuos, joka sisälsi eetteriin (30 ml) valmistettua etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisyklo-15 heksyyliasetaattia 8 (1,8 g, 8,0 mmol), lisättiin pisaroittani seosta samalla sekoittaen suspensioon, joka sisälsi litiumaluminiumhydiidiä (0,9 g, 24,0 mmol) eetterissä (30 ml) ja jota jäähdytettiin jäähauteessa. Reaktioseosta palautusjäähdytettim 3 h, jäähdytettiin ja jäljellä oleva litiumaluminiumhydridi hävitettiin vedellä. Vesi-....: pitoinen kerros erotettiin ja uutettiin kahdesti eetterillä. Yhdistetyt eetterifaasit 20 pestiin suolavedellä, kuivattiin MgSO^n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin. Raaka-"I tuote puhdistettiin pikakromatografialla silikageelissä eluoiden heksaanin ja etyyli- ’;*** asetaatin seoksella (4: 1), mistä saatiin 1,2 g (79%) yhdistettä 11 öljymäisenä ‘•J! materiaalina. ‘H NMR (CDC13, TMS) δ; 0,89 ja 1,00 (yhteensä 12 H, kumpikin s, V 1 sykloheksaani-3,5-CH3); 1,44 (2 H, q, J = 7 Hz, 2-CH2); 0,55 - 1,95 (8 H, m, V : 25 renkaan protonit ja OH) ja 3,70 ppm (2 H, t, J = 7 Hz, CH20).

,··*. 2-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyli)-etyylimetaanisulfonaatin (12) valmistus.

• · ··· V ·* Liuos, joka sisälsi kuivaan bentseeniin (20 ml) valmistettua metaanisulfonyyli- kloridia (1,03 g, 0,7 ml, 9,0 mmol), lisättiin seosta samalla sekoittaen ja jää-hauteessa jäähdyttäen liuokseen, joka sisälsi bentseeniin (40 ml) valmistettua 2- m * 30 (3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyli)-etanolia (11) (1,1 g, 6,0 mmol) ja trietyyli- v : amiinia (1,2 g, 1,7 ml, 12 mmol). Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä 3 h, ♦ · *,*·· minkä jälkeen se suodatettiin lyhyen silikageelikolonnin läpi eluoiden bentseenillä.

Liuottimen haihduttamisen jälkeen saatiin 1,48 g. (94 %) yhdistettä 12 öljymäisenä materiaalina. JH NMR (CDC13, TMS) δ: 0,88 ja 0,98 (yhteensä 12 H, kumpikin s, 14 1 1 9809 sykloheksaani-3,5-CH3); 1,62 (2 H, q, J = 7 Hz, 2-CH2); 0,65 - 2,0 (7 H, m, renkaan protonit) 3,0 (3 H, s, CH3-S02) ja 4,29 ppm (2 H, t, J = 7 Hz, CH20).

2-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyyli)-etyyliatsidin (13) valmistus.

Seosta, joka sisälsi natriumatsidia (2,27 g, 34,2 mmol), 2-(3,3,5,5-tetrametyyli-5 sykloheksyyli)etyylimetaanisulfonaattia (12) (1,46 g, 5,57 mmol) ja dimetyyli-sulfoksidia (20 ml), sekoitettiin huoneenlämmössä 48 h, laimennettiin vedellä (50 ml) ja uutettiin eetterillä (3 * 30 ml). Orgaaninen faasi pestiin suolavedellä (30 ml), kuivattiin MgS04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin pikakromatografialla silikageelissä eluoiden heksaanilla, mistä saatiin 10 0,93 g (80 %) yhdistettä (13) öljymäisenä materiaalina. *H NMR (CDC13, TMS) δ: 0,87 ja 0,99 (yhteensä 12 H, kumpikin s, sykloheksaani-3,5-CH3); 1,47 (2 H, q, J = 7 Hz, 2-CH2); 0,55 - 1,9 (7 H, m, renkaan protonit) ja 3,31 ppm (2 H, t, J = 7 Hz, CH2N3).

N-formyyli-l,3,3,5,5-pentametyylisyk]oheksaaniamiinin (14-1) valmistus.

15 Liuokseen, joka sisälsi 1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksanolia (3-13) (2,7 g, 15,6 mmol) ja tiimetyylisilyylisyanidia (2,36 g, 23,8 mmol) etikkahapossa (2,5 ml) ja jota pidettiin argonin alla, lisättiin seosta samalla voimakkaasti sekoittaen 98-prosenttista rikkihappoa (4,66 g, 47,6 mmol) pitäen lämpötila -5 °C;n alapuolella. Seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 22 h, minkä jälkeen se yhdistettiin jäihin • · ... 20 (100 g), neutraloitiin 50-prosenttisella NaOH-liuoksella siten, että pH-arvoksi saa- » · tiin ~7, ja uutettiin eetterillä (3 * 30 ml). Yhdistetyt eetterifaasit pestiin suolavedellä *·*·’ (50 ml) ja kuivattiin sitten MgS04:n päällä ja haihdutettiin. Kellertävää kiteistä • * jäännöstä käsiteltiin pienellä määrällä asetonitriiliä ja se erotettiin suodattamalla, • · * v : mistä saatiin 2,5 g (80%) yhdistettä 14-1 valkeina kiteinä, joiden sp. oli 104- :T: 25 106 °C. *H NMR (CDC13, TMS) δ: 0,91 ja 0,93 (yhteensä 6 H, kumpikin s, 3,5- CH3ekv; 1,08 (2 H, m, 2,6-CHekv); 1,13 ja 1,15 (yhteensä 6 H, kumpikin s, 3,5-CH3aks); 1,25 (2 H, m, 4-CH2); 1,32 ja 1,38 (yhteensä 3 H, kumpikin s, 1-CH3); 1,70 ja 2,12 (yhteensä 2 H, kumpikin d, 14,7 Hz, 2,6-CHaks); 5,30 ja 5,60 (yhteensä 1 H, kumpikin br s, NH); 8,05 ja 8,30 ppm (yhteensä 1 H, kumpikin d, 2,0 ja 12,7 Hz, 30 vastaavassa jäijestyksessä, HCO).

* • · N-asetyyli-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaaniamiinin (14-2) valmistus.

* · · • · ·

Liuokseen, joka sisälsi asetonitriiliin (20 ml) valmistettua 1,3,3,5,5-pentametyyli-sykloheksanolia (3-13) (3,0 g, 17,65 mmol), lisättiin pisaroittain seosta samalla voimakkaasti sekoittaen savuavaa HN03:a (6 ml) pitäen lämpötila alle 45 °C:n.

15 1 1 9809

Tuloksena olevaa seosta sekoitettiin 45 - 50 °C:ssa 6 h, minkä jälkeen se jäähdytettiin, yhdistettiin veteen (30 ml) ja neutraloitiin vesipitoisella NH3:lla. Vesipitoinen faasi uutettiin eetterillä (3 * 30 ml). Yhdistetyt eetterifaasit pestiin suolavedellä (30 ml), minkä jälkeen seos kuivattiin MgS04:n päällä, suodatettiin ja 5 haihdutettiin. Raakatuote kiteytettiin kylmästä asetonitriilistä, mistä saatiin 2,23 g (60%) yhdistettä 14-2 valkeina kiteinä, joiden sp. oli 110 °C. Ή NMR (CDCI3, TMS) δ: 0,90 ja 1,12 (yhteensä 12 H, kumpikin s, 3,5-CH3); 1,33 (3 H, s, 1-CH3); 1,88 (3 H, s, CH3C=0); 0,75 - 2,25 (6 H, m. renkaan protonit) ja 5,3 ppm (1 H, br s, NH).

10 N-metoksikarbonyyli-N,l*3,3,5,5-heksametyyIisykloheksaaniamiinin (15) valmistus.

Metyylikloroformaattia (0,97 g, 0,8 ml, 10,3 mmol) lisättiin yhtenä eränä suspensioon, joka sisälsi THF:iin (30 ml) valmistettua N,l,3,3,5,5-heksametyylisyklo-heksaaniamiinihydrokloridia (5-20) (l,13g, 5,13 mmol) ja Na2C03:a (1,63 g, 15 15,4 mmol). Tuloksena olevaa seosta sekoitettiin huoneenlämmössä 6 h, minkä jälkeen se laimennettiin vedellä (50 ml) ja uutettiin eetterillä (3 * 30 ml). Yhdistetyt orgaaniset faasit pestiin 1 Ο-prosenttisella K2S04:llä, suolavedellä, kuivattiin MgS04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin pikakromato-grafisesti eluoiden heksaanin ja etyyliasetaatin seoksella (6 ; 1), mistä saatiin 0,90 g 20 (78 %) yhdistettä (15) öljymäisenä materiaalina. 'H NMR (CDC13, TMS) δ: 0,93 ja * ' 1,07 (yhteensä 12 H, kumpikin s, 3,5-CH3); 1,23 (3 H, s, 1-CH3); 1,0 - 1,4 (4 H, m, C: 4-CH2 ja 2,6-CHekv); 2,56 (2 H, d, J = 14 Hz, 2,6-CHaks); 2,87 (3 H, s, CH3N) ja :X: 3,64 ppm (3 H, s, CH30).

• ♦ • · · • ··

Etyyli-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksylideeni)syaaniasetaatin (16) valmistus.

• * · m ··· * 25 Seosta, joka sisälsi bentseeniin (6,4 ml) valmistettua 3,3,5,5-tetrametyylisyklo- heksanonia (2-13) (2,64 g, 17 mmol), etyylisyaaniasetaattia (1,93, 17 mmol), etikkahappoa (0,2 ml) ja ammoniumasetaattia (0,2 g), palautusjäähdytettiin Dean-Stark-laitteessa 10 h. Tähän lisättiin bentseeniä (30 ml) ja suolavettä (30 ml), orgaa- * . ninen kerros erotettiin, kuivattiin Na2S04:n päällä, suodatettiin ja haihdutettiin.

• t · ’* ’* 30 Raakatuote puhdistettiin pikakromatografisesti eluoiden heksaanilla, mistä saatiin 2,0 g (50 %) yhdistettä (16) öljymäisenä materiaalina. *H NMR (CDC13, TMS) δ: :T: 1,01 (6 H, s, 3,5-CH3efcv; 1,05 (6 H, s, 3,5-CH3aks); 1,34 (3 H, t, J = 7 Hz, etyyli- CH3); 1,42 (2 H, s, 4-CH2); 2,46 ja 2,79 (yhteensä 4 H, kumpikin s, 2,6-CH2); ja 4,29 ppm (2 H, q, J = 7 Hz, CH20).

16 1 1 9809

Etyyli-(l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksyyli)-syaaniasetaatin (17) valmistus.

Vedetöntä kupari(l)kloridia (0,8 g, 8 mmol) lisättiin seosta samalla jäähdyttäen alkyylimagnesiumjodidia (tämä oli valmistettu magnesiumista (0,46 g, 19,2 mmol) ja jodimetaanista (2,84 g, 20 mmol) sisältävään liuokseen, joka oli valmistettu 5 eetteriin (12 ml). Seosta sekoitettiin reagoimattomassa atmosfäärissä 5 min ja siihen lisättiin pisaroittani eetteriin (10 ml) valmistettua liuosta, joka sisälsi etyyli-(3,3,5,5-tetrametyylisykloheksylideeni)syaaniasetaattia (16) (2 g, 8 mmol) pitäen lämpötila alle -15 °C:n. Kun ketonin lisäys oli suoritettu loppuun, reaktioseosta sekoitettiin 3 h ja se neutraloitiin huolellisesti kylläisellä vesipitoisella NHjCl-liuoksella. Valo kiintuneita toimenpiteitä käyttäen suoritetun Grignard-reaktioiden jatkopuhdis-tuksen jälkeen saatiin raakamateriaalia, joka erotettiin silikageelikolonnissa eluoi-den petrolieetterin ja etyyliasetaatin seoksella (20 : 1), mistä saatiin 1,0 g (47 %) yhdistettä 17 Öljymäisenä materiaalina. *H NMR (CDC13, TMS) 5: 0,98 (9 H, s, 3,5-CH3ekv ja 1-CH3); 1,06 (6 H, s, 3,5-CH3aks); 1,31(3 H, t, J = 7 Hz, etyyli-CH3); 1,2 -15 1,5 (6 H, m, renkaan protonit); 3,41 (1 H, s, α-CH) ja 4,25 ppm (2 H, q, J = 7 Hz, CH20).

l-syaanimetyyli-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanin (18) valmistus.

Seosta, joka sisälsi etyyli-(l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksyyli)syaaniasetaattia (17) (1 g, 3,7 mmol), LiCl:a, (0,05 g) ja vettä (0,15 ml) DMSO:ssa (2,5 ml), kuu- *:**: 20 mennettiin 150 - 160 °C:ssa 4 h. Liuos yhdistettiin veteen (70 ml) ja uutettiin eette- rillä (4 * 20 ml). Eetteri pestiin suolavedellä (2 * 50 ml), kuivattiin Na2S04:n päällä, ·*;*· suodatettiin ja haihdutettiin. Raakatuote puhdistettiin silikageelikolonnissa eluoiden * · petrolieetterin ja etyyliasetaatin seoksella (20 : 1), mistä saatiin 0,66 g (94 %) yh-distettä 18 öljymäisenä materiaalina. *H NMR (CDC13, TMS) δ: 0,98 (9 H, s, 3,5-25 CH3ekv ja 1-CH3); 1,02 (6 H, s, 3,5-CH3aks); 1,21 (3 H, s, renkaan protonit); 1,31 (3 H, s, renkaan protonit) ja 2,31 ppm (2 H, s, CH2CN). IR (laimentamaton) vCn = 2242 cm'1.

• · · * · * * · · :*·*: Yleinen menettely alkyylisykloheksaaniamiinihydrokloridien 5-1 - 5-25 valmis- .' . tamiseksi.

* · » • ·· « · *:**: 30 Liuos, joka sisälsi eetteriin valmistettuja yhdisteitä 4, 10 tai 13 - 15, 18, lisättiin .·*;·. pisaroittani seosta samalla sekoittaen eetteriin valmistettuun suspensioon, joka • · * ^ . sisälsi litiumaluminiumhydridiä (4 ekvivalenttia) ja jota jäähdytettiin jäähauteella.

** *: Reaktioseosta sekoitettiin huoneenlämmössä yhdisteiden 4, 10, 13 kyseessä ollessa tai palautusjäähdytettiin yhdisteiden 14, 15, 18 kyseessä ollessa siihen asti, kunnes 17 1 1 98 09 lähtömateriaalin muuntuminen oli tapahtunut täydellisesti (TLC-kontrolli). Jäljellä oleva litiiimalumininmhydridi hävitettiin vedellä, vesipitoinen kerros erotettiin ja uutettiin kahdesti eetterillä. Yhdistetyt eetterifaasit pestiin suolavedellä, kuivattiin NaOHin päällä, suodatettiin ja haihdutettiin. Saatua amiinia käsiteltiin HCl:llä mut-5 ta tätä ei luonnehdittu. Amiinihydrokloridi valmistettiin joko johtamalla HCl-kaasua heksaaniin valmistetun amiiniliuoksen läpi tai lisäämällä eetteriin valmistettua 1N HCl-liuosta amiiniliuokseen. Kummassakin tapauksessa liuotin poistettiin HCl:n lisäyksen jälkeen, jäännöstä käsiteltiin heksaanilla tai asetonitriilillä, ja kiteinen tuote erotettiin suodattamalla, mistä saatiin yhdisteitä 5-1 - 5-25, joiden puhtausaste 10 oli erinomainen.

Yhdisteiden 5-1 - 5-25 fysikaaliset ominaisuudet ja saannot on esitetty taulukossa 4.

Yhdisteiden 5-1 - 5-25 *H NMR-spektrien määritystulokset on esitetty taulukossa 5.

Muita 1-aminoalkyylisykloheksaaneja ja näiden hydroklorideja valmistetaan samalla tai samanlaisella tavalla. Hydrokloridit voidaan muuntaa vapaaksi emäkseksi tai 15 joiksikin muiksi happoadditiosuoloiksi kohdassa "happoadditiosuolat" tarkasteltavalla tavalla.

3,3,5,5-tetrametyylisykloheksyylimetyyIiamiinihydrokloridin (5-26) valmistus.

Liuosta, joka sisälsi l-nitrometyyli-3,3,5,5-tetrametyylisyklohekseeniä (6) (1,1 g, 5,63 mmol) seoksessa, joka koostui etanolista (140 ml) ja kloroformista (2,8 ml), »«· 20 vedytettiin 1 Ο-prosenttisen Pd/C:n (280 mg) päällä 5 atmrn paineessa 20 h, suoda-:V: tettiin ja haihdutettiin. Raakatuotetta käsiteltiin eetterillä, suodatettiin ja pestiin eetterillä, mistä saatiin 0,57 g (50 %) amiinia 5-26.

··· • · · ; Yhdisteen 5-26 fysikaaliset ominaisuudet ja saanto on esitetty taulukossa 4.

• · · • ♦ ·

Yhdisteen 5-26 *H NMR-spektrin määritystulokset on esitetty taulukossa 5.

• « * • · · *,. 25 Amiinia 5-27 valmistettiin noudattaen tunnettua menettelytapaa [16].

• · · • · ,·* : Amiinia 5-28 [17] valmistettiin vastaavasta atsidista noudattaen yleistä • · · [t'\ menettelytapaa [18]. Kaikki fysikaaliset ominaisuudet olivat hyvin yhtäpitäviä * · . kuvattujen määritystulosten suhteen [17].

• · · • * * • · ·

Kaikkien valmistettujen yhdisteiden puhtaus tarkastettiin GC:llä (MN-OV-1, 25 m * 30 0,53 m, df = 1,0 pm, 50 - 270 °C (10 °C/min)).

18 1 1 9809

Happoadditiosuolat

Happoina, jotka soveltuvat happoadditiosuolojen muodostamiseen tavanomaisen menettelytavan mukaisesti, voidaan mineraalisarjasta mainita seuraavat hapot: suola-, hydrobromi-, metaanisulfoni-, isotioni-, rikki-, fosfori- ja sulfaamihapot, ja 5 orgaanisesta sarjasta: etikka, propioni-, maleiini-, fumaari-, viini-, sitruuna-, ok-saali- ja bentsoehapot, joidenkin mainitsemiseksi. Edullisia happoja ovat suola-, sitruuna- ja maleiinihapot. Haluttaessa voidaan valmistaa muita farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja ja yksi happoadditiosuola voidaan muuntaa toiseksi neutraloimalla yksi suola, esimerkiksi hydrokloridi, mistä saadaan tulokseksi 10 vapaa emäs, ja tekemällä tämä uudelleen happameksi toisella valitulla mineraali-hapolla tai orgaanisella hapolla toisen farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditio-suolan valmistamiseksi tällä alalla tavanomaisten käytännön mukaisesti.

• «»» • 1 • · ··· • · ♦ · · • · 1 • 1 • · • · · ♦ 1· • · ··1 • · · • 1 · ··· • · · • « · « • · · • ♦ · • » t • · » * · 1 • · · * • · • · > • 1· • · Φ • 1 • · · • · · • · 1 · » · · • ·· • · 19 1 1 98 09

(N

'w'

/•“V

s ε « κ ? ^ ai $ S ^ n o ^ *? i? •P 1/1 ffi in h-γ ^ ϊλ ^-T * >λ ^ <n w aa ε γλ ^ w ΊΝ « K N ' -1^ ^ Μ M-w p ^ Ai aa »1 C —' Ίη -f

ΓΛ —Γ . „ , S

- * π aa vo 1 Ci hpT <N "

V} ^-, Mh ^ (N

® ^ M 8j X

— w ·Λ. 'm „ ΓΛ » 1 r,

r-s I »—1 HH

S ^ ?i S o, i/-> r-ι o ” * a k n T=f a r- ^ - “ s σ- ® aa 5 « o- o«ae.

S g 5 Z * - n 00 ^1 1—< I *' 'W' >s ^ v> „ *n ε " S' 3 'sr ^ S. aa K „ hri" o. „ r- Ai aa Ai 90 ^ « " i®, “ ....: £0 S aa" ® 'S- ® • · s x 1 w o « O cT) 'w ^ -w' ··· 1 Ai ^ ,_.Ai

• * - N O --1 IS' O

*···* -s1 [3 o oi. jö Ξ· • · υ 5 S o r* Tl ·.*.· u .m ai Ιλ s +s ε :*·.: aa aa ai ai ai • * 5 m 1 M « « « f M Ä 'w' ΓΛ \w^ -W 'w^ 'w' : : : ä vo eT 00 00 t"

. hh M SO SO t' M

··· Jr-1 o' 'w' o' o" o" o" • · · - 1 ---- • *

• O

S Λ »o in ,¾ ^ ^ "t S' • · c/a w ao ίη r-~ ao r~- * · · ............. .....

• Φ · • ♦ *·· * j l-i +» fc* ’«i Im : : <s sä £a alliani • · ·

• 'S

• · o m Ji +J 1_ ·.*·· s &_.SI__m._.&- * i/· ·;··; « <0 ω ω « | ’k__ΆΆΆΆ • · ^ • · · 3.

• * * γλ ω ω u α> α> 5 5 5 5 5 ··· CC Ä Ä Ä Ä Ä • · *-1- - “-“-“-“-*

*...* O 4J

-X öa •3 1q O H N \o h "3 c 1 1 1 1

δ I?-1 Icm IcmIcmI<nI(nI H

20 119809

I I I I I I I I I I I Γ'ε| I I

^ s'

o c rs K

r-v lo w S n o ^ x T.« ε 9

O E m K

C ^ 2v E

o 2C — ^ <N Q Ο 0„ <Λ • in fiN°

°V m m I N

<—- ο ,—v —I ^ m I

S ^ S I μ γλ x w. 5.10 3 ~ ” a * ° ^ s x γλ^-'γί'Ζ' ir^ e EOCC-S'? « . 3 b v S ^ ®. ϊ j 2 °i, t, 27" 2 ^ s x n c E E g Eä^Sr.eiS * 3 m - m trT ^ k - ° ^ ^ Λ 2 1. ®v π * 3 * , 72" |οσν NN'tSo « 3 >q ' fi'S3 3>ϊ0

'—' *—' 1—1 '—' _' K tn _r -ί if S ·* M

^ ~ ~ Ht £ C- ^ £) « £ * I I . I * rt„ie ,„K Ϊ ^ 7 oi w Ο Ο ο Ο ΓΛ - eo - ^ ^ - - 4 - 2 i—I — —''-’ΖΓ^τοηη·—''—' » p ^ i; ii “ x* m win 3iii — — Ίη Ίλ Ίη Ίη „ —f w ^ ^ Ο .Ξ, § ie l; Q. ϊ ϊ K Ϊ '" m * ° ^ 1¾ 1/1 ,Λ m m γλ ^ n »i « m « ^ tn ^ W £ s “ 2 K S' X G * ® s" - $ ~ s 3 cc,c,sS".s,S"8 jf iSSS“*S".0.°.^S“.Sx • rj 33330^^01---303^ '."; Q r- r- r- r- ι^Γ ., Αί Χ ^ r' t' o' 4-Ϊ 4-Γ +J~ £Λ <4_T ^ S S S S +£ S —' :."·' S sisi si aisd'ad'sd'cd'ad'cd'ad'ad'ad'3"si ., Γοη^ΐΓΊΓΛΓΛΓΛΓΛ^Ο^Ο^ΟΟΓΛΓΛΌΌ . . , Ä --' , ' > , , ' 'w' 'w' ' -· 'w' 'W' 'w' 'w' *W' ·.·.· 3 ^MOicniooHhooaH^ooio

u CeOOOOMOOOOOOWWOOOOOOWhOO

;**.· sal_olo οΊ o' oi O o" o" o" o" es o" o" O O

*··* ώ ^

2!I 3 rt ^ rλ r^i oo^-MTtooinO'Mi'O

• M a w on ö\ aoo\ooooooooooaoooo • · · • · ·

* * * uUDUOUUOlDdJ d>(UdJU

k_£££££££££££££££

^ /---X

• · .ti 3 J2

* · * o SS

* · e o> α> ϋ li ’w/ ; ; a ^_M. &. ώ. ä ä ä. i±l JS. £ä £± ϋΐ £± ·** « ^ ^ * * O W 0-

** *1 ΐ Q> 4> V OJ

S» ^ J Ή W M W V h ....: -2 ^__a_^iÄ5±iii£ä.__ * ^ ^ ϋϋϋϋϋϋϋ ·*·*· ~a αύ S 2 S 2 S S 2 · · I “ —“ —’ "*" --‘— —* J—* J—* “"**

* · 1-H

.**'. rl ωωωωωωωωω s Ä_______ p *P ,H sj Xl β Xl 33 X> O^MinOhoOOi S Λ"« ΓΊΓ-ί/ΛΓ^ΟΟΟ — "— — — — — — —

1Γ ·ΡΝ I I I I I I I I I I I I I I I

H t3 |^lmlc^lc^c^lc^lcnlmlml<^lmlfnlmlmlm 21 119809

I I I I I I I 1 I I I I I I I I I I I I I I I I I I II

o i_ B 'e' ° be 0 c? ks * £ 0 S <e -1 _ « ,_, ON ^ C3 R, .1» (N 1 1 tt ON -h" 2 w © ^ _ °S ΐ £ 2 ? s' ε^ s_ -, a ί1 ^ ~ a- DC m DC DC K * 0 DC af K 8 o s 5Γ - 3- " ! 2- ο βί. e a S o. a a ^ C a ~ Si 1 a; 0 7 7 DC ® ^ DC 7 9 8 ^ siiaiinaöo- I o? , -¾ΐ ’ a S * s X “ C- © ~0 © 3· Ä S °V ai ¢- ^ © © On DC · - in — An DC i—' 0 ON 5s O ^ ON ^O LO ·- ·- - II ^ ON . „ T?4" ., _f ¢-, fN Ο TV Tt ρ ++ _ Γ , + — « +- ^ ca p _ e a> ιλ ,_, c - wi k-ί .I if DC I . * C , E w j « ? „ ,„ « S I K K ϊ m ' K m « M A w Ϊ ” ·? M !£? ?''c9i9s“29s.c'cO"^H2',s'"OiBH2fi^ c- - e a P B B E ^ L; ^ o t' Ό X Τ'· N A - 1 r- < „ 1 DC n - ++Γ +-Γ (-+1 JQ C · n ^ ^ w 1/1 f'l 1— r^i °V, o °® * „r m JC| Γ DC CD K ffi 1 ^ ö K ^ - - - * 71 - 2 Ai 2 - " - ^ 2 © 0, _ „ — »ntn^^ö.+ ArAr®'0'©'® .-'m'0.-1 . „ i jj- i> . „ © λ ** *** *—· *—( » CC xs *c ^ ^ rn ^ S to ^ « j-c ^ 1/^ ^ * DC 0 a γί +r 0 ,_r ^DDDC^^C+^T^Nrt -a 0 τΓ +

<n cl „ “ g « * * (N * * « * ^ I * ® * XS 0 * DC

in |tN I I 1 n u “i 3 & S - n G -

— I 1 1 « ΐ Λ S '^' 'w' 22 Γ^, ’W τΛ „ in n w £r)J

S-2-assssio.a.18.&|s;S§a isStf®£l« =r ««»-SififoasS^sSflsSrrj^^orlfÄiSa r:^ e K DC «: 5f a X M °. ® 3 " " T3 «: £ TS ^ ON if ^ η. S 2 2 £ ® ς? I g- o- k ^ e, <2, r„ «; «;" * * dc x « dc ® S* ac * Tl t' ^ Z +-- ffi a «DjS+liNOitNlnffiK-nN+N+^n^ n^ nnjg--, C. »n f "i n « - 2 DC 2 2 ^ I- § 8 s. ^ 5 s. s © S„ κ κ af 3 M S. t ίόίί'^ηηη^ ϋ ί»Η00-"0Μ_·0„·"0'®πη mö O " f 2f =3! ?s- 1 ff

n^^Mviinin^.a.S*33* B EC S' B EC DC B S .j S S o ä CC S

Q ^ ^ h ΌΓ SO ,r ϋ ^ ^ ^ .¾ Is- - n .¾ O r- -n ,n y’O’O+i'+i+l+iw'^hTJOO w S -t-Γ m » '**? I-h' H-Γ I-h' H-Γ m' I-h' H-Γ ^is Mrf Η-Γ Η-Γ H-Γ Ν-Γ Η-Γ Η-Γ H-Γ Η-Γ H-Γ Η-Γ Η-Γ H-Γ Nrt' I-h' 0© H-Γ Η-Γ ΜπΓ

···· y—t α^ΗΗΝν1^(-Ι-Ιν1νν1ν|-Ι-Ι^Ι-ΙΙ-ΙνΗ-(Η-ΙΗ^^ΗΜ-(ΜΝ ββ^ MH HM HM

* Smmmmmmr+ininlNDfnmiOfniniornrnNDmNOONOmcroiaON

tfS S^/ -N^ 'w/ .p^ N^/ W W W 'v-' Sw/ Swf' \w/ "w* 'W' j—, 'w' ,***, 20NN0000M00ONinh«M+'--«!H N O On Oi Si ON N i" v» » • * M 00 OS eo to » «0 0^ Οβ Λ 00 00^ ON 00^ 00 00 00 » ON 00 00^ 00 00^ 00 00_ On_ t"~_ 00_ ·· Γ o‘ o o' o cT o" o o o' o' o" o" o" o" o' o' o" o' o" o' o" o’ o' o" o' +C o" o' • · --— — — --- : : : o £ .·.: ^ • ·· ts

• · H

··· S^H ^η(ΛΟΌ«ΝΜΓ^Μ^ ΙΛ fN Γ- O ^ r*^ —- Ό «—· III SD. £ϋ £± Π HL Σ1. Π Π }Ω.£ΐ. SD. ϊ£. 12. £2 ^ • β υα> 4> <d : ·*: ks s s s s s s s s s s s s s s s s s s s sää s a_s s * -rt

'"Ξ ΰ ΐ O 'αΓ 'oT

§ s s £ ss 1 kk_S_Ä_S S Ä S S S S S S Ä s_i _Ξ S S S Ä_Ä Ä . J3 *·· o

• * "H N /'—N

···.* i» ä Ä Ä ω £ • «o w w 2 w w f _ O rt) rt) d) d) d> H) d> d) 4> <X> 4> 4> 4> ·* *·: 1 og S ffl äSSSdcSSäSÄS ä ÄSSSSS ffl & * * ca •«•I 4> * · i 5 ^3 Äd)4>4>fl>4>CJl)(l><l><l>d><l>4J(l>

fc k_________g S S SSSSSSSSSS SS

· · • · · *S '"i

* * > DC

··· ·—· w • · * d>4>e><W1>tt>4>4><U0<L>(L>004>

*3 k_________SS S S SSSSSSSSS SS

a s 3 .J2 Λ X) C« X> C« X) -5 »S Λ Xl Λ X) (β Xl cax 00 o

2 jaHH(^(^r^rf)^|O'lptS00 00®\^'1'^II^M»—(P—Il-M^MPHI—11-M\ Ψ«+ *— A

R) .......................... il 22 119809

Taulukko 4 Amino-sykloheksaanijohdamiaiset 5________

Miz Yhdis- Kaava Mp. _Alkuaineanalyysi_ sp. (°C) Saanto 2/ te Laskennallinen tulos Havaittu tulos (%) (%) <%)__ _____C H N C H N___ 625 5-la C8H17N1HC1 163,72 58,7 10,5 8,6 58,7 10,5 8,6 >250 63 631 5-lb C8H|7N1HC1 163,72 58,7 10,5 8,6 58,7 10,5 8,6 200 - 202 48 629 5-2a C9Hi9N1HC1 177,75 60,8 10,8 7,9 60,8 10,8 7,9 >250 66 630 5-2b C9H,qN1HCl 177,75 60,8 10,8 7,9 60,8 10,8 7,9 179- 181 43 627 5-3a Cl0H2iN1HCl 191,78 62,6 11,1 7,3 62,6 11,1 7,3 >250 80 628 5-3b CI0H2,N1HC1 191,78 62,6 11,1 7,3 62,6 1U 7,3 181 - 182 81 621 5-4 CgH19N1HCl 177,75 60,8 10,8 7,9 60,8 10,8 7,9 230 -231 73 620 5-5 CiqH2iN1HC1 191,78 62,6 11,1 7,3 62,6 11,1 7,3 168- 170 71 617 5-6 CnHMN1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,2 11,3 6,8 106 - 108 68 616 5-7 C9Hi9N1HC1 177,75 60,8 10,8 7,9 60,8 10,8 7,9 280-282 50 607 5-8a CioH^HCl 191,78 62,6 11,1 7,3 62,6 11,1 7,3 >240 74 608 5-8b CiqH2iN1HC1 191,78 62,6 11,1 7,3 62,6 11,1 7,3 >240 57 622 5-9a CnH23N1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,2 11,3 6,8 250-253 68 624 5-9b CnH23N1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,2 11,3 6,8 228-231 60 618 5-10a Ci2H2sN1HC1 219,84 65,6 11,9 6,4 65,6 11,5 6,4 167- 168 57 619 5-10b Ci2H?sN1HCl 219,84 65,6 11,9 6,4 65,6 11,5 6,4 237 -238 36 633 5-lla CnH23N1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,2 11,3 6,8 255 -257 69 632 5-1 Ib CnH^N1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,2 11,3 6,8 216-218 44 635 5-12a C12H2sN1HC1 219,84 65,6 11,9 6,4 65,6 11,5 6,4 218-221 83 634 5-12b Ci2HS5N1HC1 219,84 65,6 11,9 6,4 65,6 11,5 6,4 200-203 44 579 5-13 CnH23N1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,2 11,3 6,8 235 -237 82 600 5-14 Ci2H2sN1HC11H2Q 237,86 60,6 10,6 5,9 60,6 10,6 5,9 215-218 74 601 5-15 Ci3H27N1HC1 233,87 66,8 11,7 6,0 66,8 11,7 6,0 >280 88 615 5-16 Ci2H2,N1HCl 219,84 65,6 11,9 6,4 65,6 11,5 6,4 162- 163 65 614 5-17 Ci3H27N1HC110,5 H2 242,84 64,3 12,0 5,8 63,8 12,0 5,6 106- 107 54 • 623 5-18 Ci3H27N1HC11H2Q 251,89 62,0 10,8 5,6 62,0 10,8 5,6 99 -102 78 626 5-19 CY3H3iN1HC1 261,93 68,8 12,0 5,3 ~68,8 12,0 5,3 167 - 169 72 .···. 640 5-20 Ci2H25N1HC1 219,84 65,6 11,9 6,4 65,6 11,7 6,3 249-251 86 * · ----------1 1 1 • · · •V: 639 5-21 1 C13H27N1HC1 1233,82 1 66,8 12,1 6,0 1 66,6 12,3 5,9 257 - 259 82 642 5-22 Ci3H27N1HC11H20 251,82 62,0 12,0 5,6 62,0 12,0 5,5 >210 98 :·1"· 645 5-23 CI4HmN1HC1 247,85 67,8 12,2 5,7 67,6 12,3 5,6 205 - 207 89 644 5-24 Ci2H25N1HC1 219,84 65,6 11,9 6,4 65,4 11,9 6,2 >250 83 662 5-25 Ci3H27N1HC110,5 H2Q 242,84 64,3 12,0 5,8 64,9 11,9 5,7 >250 64 : 580 5-26 CnH23N1HCl 205,81 64,2 11,3 6,8 64,1 11,4 6,9 >230 50 557 5-27 CiqH2iN1HC1 191,75 62,6 11,6 7,3 62,3 11,6 7,2 >250 (haj.) 70 641 5-28 C,H,,N1HC1 149,7 56,2 10,8 9,4 55,9 11,0 9,2 283-285 69 «1· * « · • · · ·♦· * 1 ♦ • · » • · • · · • · · • · • · ··· • · · • · · · • · · • · · • · 23 119809 /*\

v-i EC

00 ' LS If) s' n c oc

SC ff o E

m-μ * ^3 I ^

O —" tN

"<« '"ί C ^ |3 /jf'm' ^ D. “ fe “ e £ ·° b § ^ w" Λ„ ^ ,5 '3 Λ hH “ O , M 1 i. “ ^ “ a ! ;χ c -s & 2 ji ^^η^Λ,ϊ -° CC :Sad0000fr»“"'^ CC C·

rft — λ « fi NjjN

^ 2- ^ 1 s a a °° * K °° 00 ^ _fc jp 00 t—- 0 c 0 7 CC -S, ^ ΓΛ Μ- -- c ε — -® ^ ~ ® :: * <«Λ ϊ-'-'Λνμ !:Χ!ΐϊ E»c tJ ΐ® £ -f ·°„ <ν af 00 ’t, ^ ^ °i. S - w m JS X .33 cc« 35 “ - -s,0 o m a <n M-

q R E C £ 1 ^'e'^cf I

-£ ,<·λιο;~',ΊγλΒ[Λ^2 ® ,,λ ....: -3 " w n « S' w B g « “ M ΙΛ o\ : · I w' x g g cc E- s § il I 3 ai S ^ ” ... e f^\CC HrT S cc λ ^ m w* .*. : § ^ 0/ w ^ ^' m M ^2 »sc ^ ^ i 3 n n n ^ rl ^ >g cc I * T. e- 3 ~

a S' ö o o ^ o “ I !S 1 R " - E S

·** C Λ^ΗΙ—·β ·^Λν ... ω Hf r-~ w 5¾ q> w ” /~- ®n :w

.** w * ς'ΛΛ'-'/ίίο ^ 8 a ^ibfCC rt S

3 S -—· . . . ., 1. Ο "5 ,. , _, On C ω S H.^ffiCCCC~CC~.-rNb~-oS:cB«>.2 3 O. ^ «-» I * ry fmk Λ «CC C/J J*5 -fl I ^7 Rc.c.jo fee a g 1¾ ** ,® («^^^'tO^-CCoN ^C.rtii.Sui'—' .·**. -s’ s o ^ rt rt fn 0 -S,rt » S.’S'^'0 ’:"! I Ittll^IsJS^IsJls : ·.: ^ X « ^ i- i- vo" 1- Γ. t- ^ i) <=> £ -¾ 5

* ; js ο "ο τι +s *s *s *s'm ε χΓ .s, o' 91 S

*·**" % rt CC CC CC CC CC E CC si si si S' S-^oS

• O SmnnMMnnnn® ΛΟ-^’.Γη m a rt ¢5 . . Sw^ N_> w N_> 'w^ · —, ^ ^ o ... ·3 iZoNOr^-t^-NOi^io<Noooor-iro ' 1 *.*,· S 00 On 00 00 00 00 ON 00^ 00_ ON o^ O^ oo r- r~ ... < - o' o'1 o' 0' o'" o'" o'" o' o" o'" o'’ 0 o' 0 0' * · *...· ^ Ί i 3 .¾ sd

3 ·η O £ Ο O 3 Ο Λ Ο O O

T3 _e — — <N(Nr'NcN-NtirNNOr--ooooONON —

9 C- I I I I I I I I I I I I I I I

Λ ίΓίΛΐΛΐΛΐΛ'ΛνΊΐη^ΐΛΐΛίΛ'Λ'ΛίΛΐΛ j-η 24 119809 C/3 nh m

NH

CO lO

ΙΛ O /-V

00 Ό » >; ^ £ O E “ ^-N NrT ^ a afJs :S s -. s= f-a3 ai o o C, * αΚ γλ Ο & ^ ο C 4 χ> Τ', Γ!- ^ ε ;τ- -ο η J κ ? ~ £ & * si “ 3^3 S * £ε-~ ε

Siis- Sa5 « Ξ « 3f.i°-i?j°t· 5 5- ai SS"! Sai^aiSa: Ϊ 3f

•a'w oo M

fa <N S X £ a oc ^ * £ ., rf ai ^ ^ ^ jε x ·*. a § ~ i" u· ^ -5-6. i = af (Ί ΰΰ ‘T* .—, ·“ S. M m .. " 3 v> w r-1

«J- _ K ^ H-Γ ίο ^.S|M X - ” M ΐ 'Λ μ - W

00 ®\ m μ S Φ “S “ S _.- x £) - £ g M

r-s „ -° m g - M ö VI *Q Ci r^. ^ >—Γ rr? Oi E ft -' ^ . .2, . _r S K o „ w £ m· S m “ ^ 00 E5 <N as OS <Λ .-552,--333^,^0 1- · - X 1 0oX ΟΛ X , i- J « Ö,^ E * 2 "o2w..Jhh E «Xo ----0 ^ ^ S <S O ^ . - . - μπ-' X - ra ^ ,+ S *Ί as SS «-

^ lt w00 Er'^-'^aS^^ ^r^hÖO -oo^r^aS

»-H ^ ^ *5 N-^ ^-1 rs ^ 't J ^ O ^ ^ X ^ w ^ ._ ♦ #-vT ftON ? ® X X ^ fi ^ Λ t-^ • · * X ε χ 'S' m <n ^- -¾ x. ai ς? *j i? “i s„ <- I ^ ·*"· o^^-^Xaso^oT^S^-^siiaisiii^-^^ ~ 5 ^ x $ £ n n n - s o £ * * S Ci ^ £ n ·· aw'irtH'“x2'owww'OMtTf®rt .*. : ® “- 71 Tl * ai ai i? "s' X- 71 71 oo -r * io *** τΓΓ*·)®--'ι—Τ^-Ι-Γ,—ι ,-ίΚεΕΕ ,,,,^-ι^Γ-,Λ

:·:: £ a ~ π S ffi K I S - o, 2 3f π PC * * i? O ^ K

• ΧΧγ^μΙΟ«0\«£-Ν, ‘σ\σ\<Νσ?00 ι£*ΓΊ OS 53 ^ - - n °- % X X ^ 7 ri n "- ~ - - ? O ~ ·« CCOSf—iÄi/itnO - - “ :"*: lasigS^itfsas "J3J2 ··· Ä S sr, aj see :ce ^ °„ VO :td :cd :c0 ® ® * ‘ ” ^

o"^!3P"di "i§S3fi££®.£S

• · * On OS tfi ΓΙ ^ O V /~n S a S U 4) ΐ> ai λλ λι ^»- .

• · · *» ^ <N 1> Ν'—5<—5 N^ 4> 4> α>*ϊ:5-: .r,S 1 *· OOLA_TCÄÄ^^*'''iär'Äi5ÄO0sO^O#fcNl . ^ - £h'-'jsä*nnInpBj:j3 w ·:·*; X .S, O',^ (- >3^ r- AC >c t- χϋώ ., °„ .., _£ /Ms g g Λ C —^ htN-^fis+-CHM^www λ{Λ«λ .·]·. S ^ ^ x ai ^ ° ® ai ui ffi pc k Ir 3 3 af ci ai ® κ s -.-.- -a _-_,-8o E s «Mmmso» « « «ooso-hsom • · td -^- ^3, ._, o .31, .31, '—- ,—. ,—- .—- —- .31, .31] .31, —- -—' -—- ·—- -—' S—' ,"". 1 oo^^<Srrir-imr~oot^ooom(oit^sc^'t^r' • * vi » eo o o« o o » » m ^ » ob ο_ oo oo σ^ o\ σι *·· Q θ' θ' o" o' o" r-ϊ o*1 o" o" o‘ Ό — o" —' o" o' o" o' O*" ä--------------------- -axicsxiwxi _

J O — — <NO-4r-i"d-viSO[^OOONO — (Nr-i^viOf^OO

cd i i i i i i i i < i i i i i i i i i ΙΛίΛΙΛΙΛίΛ'ΛΐΛ'ΛΌΙΛΙΛίΛΙΛΙΛίΛΐηνΊ'Λ^^ίΓ) 25 1 1 9809

Taulukko 6 Amino-ja aminoalkyylisykloheksaanien perusrakenne R*r’ R* * -{CtU-CC ReR,)m-N^ n + m =0,1,2 k1 R3 R’-R* = alempialkyyli

Mrz Yhdiste R1 R? R3 R3 R3 R* 2/________ 625 5-la H H__H__Me Me NH2 631 5-lb H H Me__H Me NH2 629 5-2a H H__H__Et Me NH2 630 5-2b H H__Et__H Me NH2 627 5-3a H H__H__Pr Me NH2 628 5-3b H H Pr__H Me NH2 621 5-4 H H Me__Me Me NH2 620 5-5 H__H Me (Et) Et (Me) Me__NH2 617 5-6 H H Me (Pr) Pr (Me) Me NH2 616 5-7 Me (H) H (Me) H (Me) Me (H) Me NH2 643 5-8a Me__H__Me__Me__Me__NH2 608 5-8b H__Me__Me__Me__Me__NH2 622 5-9a Me__H__Et__Me__Me__NH2 624 5-9b H__Me__Me__Et__Me__NH2 618 5-10a Me__H__Pr__Me__Me__NH2 619 5-10b H Me__Me__Pr__Me__NH2 *:**: 633 5-1 la Me Me__H__Et__Me__NH2 .··*, 632 1-1 Ib Me Me__Et__H__Me__NH2 635 5-12a Me Me__H__Pr__Me__NH2 634 5-12b Me Me Pr__H Me NH2 V·: 579 5-13 Me Me Me__Me Me NH2 t·;·, 600 5-14 Me Me__Me__Me__Et__NH2 V..’ 601 5-15 Me Me Me__Me Pr NH2 615 5-16 Me Me Me (Et) Et (Me) Me NH2 614 5-17 Me Me Me (Pr) Pr (Me) Me NH2 ... 623 5-18 Me Me__Et__Et__Me__NH2 VJ 626 5-19 Me Me Pr__Pr Me NH2 * ’ : 640 5-20 Me Me__Me__Me__Me__NHMe . 639 5-21 Me Me__Me__Me__Me__NHEt 642 5-22 Me Me Me__Me Me N(Me)2 ·:*·: 645 5-23 Me Me Me__Me H CH2CMe2NH2 644 5-24 Me Me Me Me H CH2CH2NH2 V : 662 5-25 Me Me Me__Me Me CH2CH2NH2 :**·: 580 5-26 Me Me Me__Me H CH2NH2 557 5-27 Me Me Me__Me H__NH2 641 5-28 I H I H 1 H H Me | NH2 26 119809

Farmaseuttiset koostumukset Tämän keksinnön mukaiset aktiiviset ainesosat voidaan yhdessä yhden tai useamman tavanomaisen lisäaineen, kantaja-aineen tai laimentunen kanssa saattaa farmaseuttisten koostumusten ja näiden kerta-annosten muotoon ja niitä voidaan tässä 5 muodossa käyttää kiinteissä muodoissa, kuten päällystettyinä tai päällystämättöminä tabletteina tai täytettyinä kapseleina, tai nesteinä, kuten liuoksina, suspensioina, emulsioina, eliksiireinä tai kyseisillä nesteillä täytettyinä kapseleina, ja jotka kaikki on tarkoitettu oraaliseen käyttöön; peräpuikkojen tai peräsuolen kautta tapahtuvaan annosteluun sopivien kapseleiden muodossa tai parenteraaliseen 10 käyttöön (mukaan lukien suonensisäiseen tai ihonalaiseen käyttöön) tarkoitettujen steriilien injektioliuosten muodossa. Tällaiset farmaseuttiset koostumukset ja näiden kerta-annosmuodot voivat käsittää tavanomaisia tai uusia aineosia tavanomaisissa tai erityisissä määräsuhteissa yhdistettynä tai ilman yhdistämistä muihin aktiivisiin yhdisteisiin tai perusyksikköihin ja tällaiset kerta-annosmuodot voivat sisältää 15 aktiivista ainesosaa minkä tahansa sopivan vaikuttavan määrän, joka on yhteensopiva niiden päivittäisten annostusrajojen suhteen, joita on tarkoitus käyttää. Tämän mukaisesti sopivia edustavia kerta-annosmuotoja ovat tabletit, jotka sisältävät kahdestakymmenestä (20) sataan (100) milligrammaa aktiivista ainesosaa tai laajemmissa rajoissa ilmoitettuna kymmenestä (10) kahteensataanviiteen-20 kymmeneen (250) milligrammaa tablettia kohti.

• * · · · ,···, Hoitomenetelmä »** \v Tämän keksinnön mukaisia aktiivisia perusyksiköltä voidaan korkean aktiivisuus- tasonsa ja pienen toksisuutensa vuoksi, mitkä seikat tuottavat yhdessä erittäin :T: suotuisan terapeuttisen indeksin, antaa näitä tarvitsevalle potilaalle, esimerkiksi .*·*· 25 eläimen (mukaan lukien ihmisen) ruumiiseen, näihin reagoivan hoidon aiheen tai sairaustilan tai toisaalla tässä patenttihakemusjulkaisussa kuvaavana esimerkkinä esitetyn hoidon aiheen tai sairaustilan hoitamiseksi, lievittämiseksi tai paranta- • · · miseksi, helpottamiseksi tai eliminoimiseksi käyttäen näitä edullisesti vaikuttavana • · * *. määränä rinnan, samanaikaisesti tai yhdessä yhden tai useamman farmaseuttisesti • · 30 hyväksyttävän lisäaineen, kantaja-aineen tai laimentunen kanssa, erityisesti ja "**: edullisesti näiden farmaseuttisen koostumuksen muodossa katsomatta siihen, onko .···, annostelulle oraalinen, rektaalinen vai parenteraalinen (mukaan lukien annostelu • · · ^ . suonensisäisesti ja ihonalaisesti) tai joissakin tapauksissa jopa paikallinen. Sopivia * * annostusrajoja ovat 1 - 1000 milligrammaa päivässä, edullisesti 10 - 500 milli- 35 grammaa päivässä ja erityisesti 50 - 500 milligrammaa päivässä, mikä on tavanomaiseen tapaan riippuvainen täsmällisestä annostelutavasta, käytettävästä 27 1 1 9 8 0 9 annostelumuodosta, siitä hoidon syystä, johon annostelu kohdistuu, kyseessä olevasta potilaasta ja kyseessä olevan potilaan ruumiinpainosta ja hoitavan lääkärin tai eläinlääkärin mieltymyksestä ja kokemuksesta.

Esimerkkejä edustavista farmaseuttisista koostumuksista 5 Reaktiotuotteista voidaan yleisesti käytettyjen liuottimien, apuaineiden ja kantaja-aineiden avulla muokata valmistusprosessissa tabletteja, päällystettyjä tabletteja, kapseleita, kastoliuoksia, peräpuikkoja, injektio- ja infuusiovalmisteita ja muita näitä vastaavia lääkemuotoja ja niitä voidaan käyttää terapeuttisesti oraalista, rektaalista, parenteraalista ja muita annosteluteitä käyttäen. Seuraavaksi esitetään 10 edullisia farmaseuttisia koostumuksia.

(a) Oraaliseen annosteluun soveltuvia tabletteja, jotka sisältävät aktiivista ainesosaa, voidaan valmistaa tavanomaisin tabletointimenetelmin.

(b) Peräpuikkojen kyseessä ollessa voidaan käyttää mitä tahansa tavallista peräpuikkojen perusainetta, kuten polyetyleeniglykolia, joka on normaalissa huoneen- 15 lämmössä kiinteä mutta joka sulaa ruumiin lämpötilassa tai tämän läheisyydessä, aktiivisen ainesosan lisäämiseksi tähän tavanomaista menettelyä käyttäen.

(c) Parenteraalisten (mukaan luettuna suonensisäisesti ja ihonalaisesti käytettävien) steriilien liuosten kyseessä ollessa aktiivista ainesosaa käytetään yhdessä tavallisina .···. määrinä käytettävien tavanomaisten ainesosien, kuten esimerkiksi natriumkloridin * 1]'.' 20 ja määrätilavuuden säätämiseen tarkoitetun kaksi kertaa tislatun veden, kanssa · noudattaen tavanomaista menettelytapaa, kuten suodattamista, aseptista täyttöä ampulleihin tai suonensisäiseen tiputukseen tarkoitettuihin pulloihin ja auto- • · * *·* * klavointia steriilisyyden aikaansaamiseksi.

• · » • · ·

Muut sopivat farmaseuttiset koostumukset ovat alan ammattikokemuksen perus-25 teella suoranaisesti ilmeisiä.

« · « ***** V * Seuraavat esimerkit esitetään tälläkin kertaa ainoastaan kuvaamistarkoituksessa eikä * :*·.· niiden ole katsottava olevan keksintöä rajoittavia.

• ·

Esimerkki 1 !,ί ! Tablettiformulaatio • · • · · ·· 30 Sopiva formulaatio sellaisen tabletin aikaansaamiseksi, joka sisältää 10 milligrammaa aktiivista ainesosaa, on seuraava: 28 119809 mg

Aktiivinen ainesosa 10

Laktoosi 63

Mikrokiteinen selluloosa 21 5 Talkki 4

Magnesiumstearaatti 1

Kolloidinen piidioksidi 1

Esimerkki 2 T ablettiformulaatio 10 Toinen sopiva formulaatio sellaisen tabletin aikaansaamiseksi, joka sisältää 100 mg aktiivista ainesosaa, on seuraava: mg

Aktiivinen ainesosa 100

Perunatärkkelys 20 15 Polyvinyylipyrrolidoni 10

Kalvopäällystetty ja värjätty Kalvopäällystysmateriaalin koostumus on:

Laktoosi 100

Mikrokiteinen selluloosa 80 20 Gelatiini 10

Silloitettu polyvinyylipyrrolidoni 10 Talkki 10 ·:··: Magnesiumstearaatti 2 ,**·. Kolloidinen piidioksidi 3 25 Väripigmentit 5 • · · • · · • ·

Esimerkki 3 • · :***: Kapseliformulaatio « * · • · t

Sopiva formulaatio sellaisen kapselin aikaansaamiseksi, joka sisältää 50 milli-30 grammaa aktiivista ainesosaa, on seuraava: • · • · • * ·

.»·. mS

’···* Aktiivinen ainesosa 50

Maissitärkkelys 20

Kalsiumdivetyfosfaatti 50 *:**: 35 Talkki 2

Kolloidinen piidioksidi 2 Täytettynä gelatiinikapseliin · ·»» 29 1 1 9809

Esimerkki 4 Injektioliuos

Sopiva formulaatio sellaisen injektioliuoksen aikaansaamiseksi, joka sisältää yhden prosentin aktiivista ainesosaa, on seuraava: 5 Aktiivinen ainesosa mg 12

Natriumkloridi mg 8

Steriili vesi täydennykseksi ml 1

Esimerkki 5

Nestemäinen oraalinen formulaatio 10 Sopiva formulaatio 1 litran erälle nestemäistä seosta, joka sisältää 2 milligrammaa aktiivista ainesosaa yhdessä millilitrassa seosta, on seuraava: g

Aktiivinen ainesosa 2

Sakkaroosi 250 15 Glukoosi 300

Sorbitoli 150

Appelsiiniaromi 10

Sunset yellow

Puhdistettua vettä, kokonaistilavuuden säätämiseksi 1000 ml:ksi ... 20 Esimerkki 6 • ·

Nestemäinen oraalinen formulaatio * * · • * * • *

Toinen sopiva formulaatio 1 litran erälle nestemäistä seosta, joka sisältää 20 milli- •" *: grammaa aktiviista ainesosaa yhdessä millilitrassa seosta, on seuraava: * • · · • * · g 25 Aktiivinen ainesosa 20

Tragantti 7

Glyseroli 50 v : Salckaroosi 400 : Metyyliparabeeni 0,5 30 Propyyliparabeeni 0,05

Mustaviinimarja-aromi 10 ,···. Liukoinen punainen väriaine 0,02 [ Puhdistettua vettä kokonaistilavuuden säätämiseksi 1000 ml:ksi * * · • · * • · 119309 30

Esimerkki 7

Nestemäinen oraalinen formulaatio

Vielä yksi sopiva formulaatio 1 litran erälle nestemäistä seosta, joka sisältää 2 milligrammaa aktiivista ainesosaa yhdessä millilitrassa seosta, on seuraava: 5 g

Aktiivinen ainesosa 2

Sakkaroosi 400

Kitkerää appelsiininkuoritinktuuraa 20

Makeaa appelsiininkuoritinktuuraa 15 10 Puhdistettua vettä kokonaistilavuuden säätämiseksi 1000 ml:ksi

Esimerkki 8 Aerosoliformulaatio 180 g aerosoliliuosta sisältää: g 15 Aktiivista ainesosaa 10 öljyhappoa 5

Etanolia 81

Puhdistettua vettä 9

Tetrafluorietaania 75 • · • ·· 20 Alumiinista valmistettuihin aerosolipulloihin lisätään 15 ml liuosta, pullot suljetaan annosteluventtiilillä ja niihin muodostetaan 3,0 baarin paine.

• · * · · • · ♦

Esimerkki 9 • · · TDS-formulaatio * ♦ * • · · 100 g liuosta sisältää: *·* • · ·

tl· /% F

25 g v : Aktiivista ainesosaa 10,0 .* . Etanolia 57,5 • · · *· '· Propyleeniglykolia 7,5

Dimetyylisulfoksidia 5,0 .1. 30 Hydroksietyyliselluloosaa 0,4 *·* ' Puhdistettua vettä 19,6 • φ i · · • · · • · 1,8 ml liuosta pipetoidaan pehmeälle kankaalle, joka on suojattu tarttuvalla tausta-foliolla. Järjestelmä suljetaan suojapaperilla, joka poistetaan ennen käyttöä.

Nanopartikkeliformulaatio 31 119809

Esimerkki 10 10 grammaa polybutyylisyaaniakrylaattiiianopartikkeleita sisältävät: g 5 Aktiivinen ainesosa 1,0

Poloksameeri 0,1

Butyylisyaaniakrylaatti 8,75

Mannitoli 0,1

Natriumkloridi 0,05 10 Polybutyylisyaaniakrylaattinanopartikkeleita valmistetaan emulsiopolymeroinnilla seoksessa, jonka koostumus on vesi/0,1 N HCl/etanoli ja jota käytetään poly-merointimediumina. Suspension sisältämät nanopartikkelit lyofilisoidaan lopuksi vakuumissa.

Farmakologia - yhteenveto 15 Luonteenomaista käsillä olevan keksinnön mukaisille aktiivisille perusyksiköille ja näiden farmaseuttisille koostumuksille ja näiden käyttöön perustuvalle hoitomenetelmälle on se, että näiden ominaisuudet ovat ainutlaatuisia ja edullisia eivätkä ennakkoon odotettavia, mikä tekee “keksinnön kohteen kokonaisuutena”, esitettyjen . patenttivaatimusten muodossa, sellaiseksi, ettei se ole ilmeinen. Kyseisillä yhdis- 20 teillä ja näiden farmaseuttisilla koostumuksilla on esiintynyt normaaleissa hyväksy- * · ’···1 tyissä luotettavissa tutkimusmenetelmissä seuraavia arvokkaita ominaisuuksia ja v.: piirteitä: • · • t · • · ·

Ne ovat systeemisesti aktiivisia NMDA-reseptorien unkompetitiivisia antagonisteja, • · 1 joiden toiminnan eston/eston purkautumisen kinetiikka on nopea ja jänniteriippu- • · · 25 vuus voimakas, minkä mukaisesti ne ovat käyttökelpoisia näihin reagoivien sairaus- ... tilojen hoitoon, eliminoimiseen, lievittämiseen, parantamiseen ja helpottamiseen • 1 · *·1 1 käsittelemällä niillä hoidettavaa eläintä tai antamalla niitä tälle useiden sellaisten • · · v : keskushermostosairauksien hoitamiseksi, joihin liittyy glutamatergisen transmission häiriöitä.

• · * · * • ·· * · · • · » · * » • · · • 9 32 1 1 9809

Farmakologia In vitro

Tutkimukset, jotka koskevat aineiden sitoutumista reseptoreihin

Koiraspuolisten Sprague-Dawley-rottien (200 - 250 g) päät poistettiin ja niiden 5 aivot poistettiin nopeasti. Kuorikerros irrotettiin kirurgisesti ja homogenoitiin 20 kertaa niiden omaa tilavuutta vastaavassa määrässä jääkylmää 0,32 M sakkaroosia käyttäen teflonmäntäistä lasista valmistettua homogenisaattoria. Homogenaatti sentrifugoitiin 1000 x g:n voimalla 10 minuutin ajan. Nappi heitettiin pois ja super-natantti sentrifugoitiin 20 000 x g:n voimalla 20 minuuttia. Tulokseksi saatu nappi 10 suspendoitiin uudelleen 20 kertaa tämän omaa tilavuutta vastaavaan määrään tislattua vettä ja sentrifugoitiin 20 minuutin ajan 8000 x g:n voimalla. Tämän jälkeen supematantti ja nahkamainen kerros sentrifugoitiin kolme kertaa (48 000 x g 20 minuuttia) 50 mM Tris-HCl:n, jonka pH oli 8,0, läsnäollessa. Kaikki sentrifu-gointivaiheet suoritettiin 4 °C:ssa. Membraanisuspensio suspendoitiin ensin uudel-15 leen 5 kertaa tämän omaa tilavuutta vastaavaan määrään 50 mM Tris-HCl:ää, jonka pH oli 8,0, ja se jäädytettiin sitten nopeasti -80 °C:ssa. Määrityksen suorituspäivänä membraanit sulatettiin ja pestiin neljä kertaa suspendoimalla ne uudelleen 50 mM Tris-HCl:ään, jonka pH oli 8,0, ja sentrifugoimalla 48 000 x g:n voimalla 20 minuuttia. Viimeisestä vaiheesta saatu nappi suspendoitiin määrityspuskuriin. 20 Proteiinin määrä lopullisessa membraanipreparaatissa määritettiin noudattaen Lowryn menetelmää joiltakin osin muunneltuna. Näihin tutkimuksiin käytetty lopullinen proteiinikonsentraatio oli alueella 250 - 500 pg/ml.

• · φ · · ; *. Membraanit suspendoitiin uudelleen 50 mM Tris-HCl:iin, jonka pH oli 8,0, ja niitä • · · inkuboitiin tässä. Inkuboinnit aloitettiin lisäämällä [3H]-(+)-MK-801:tä • · · V ’ 25 (23,9 Ci/mmol, 5 nM) pulloihin, jotka sisälsivät glysiiniä (10 μΜ), glutamaattia : (10 μΜ) ja 0,1 - 0,25 mg proteiinia (kokonaistilavuus 0,5 ml) ja useita erilaisia konsentraatioita tutkittavia aineita (10 konsentraationa kahtena rinnakkaisena näyt-teenä). Inkubointeja jatkettiin huoneenlämmössä 120 minuuttia ja käytetyissä olo-suhteissa saavutettiin aina tasapainotila. Epäspesifinen sitoutuminen määritettiin li-/ . 30 säämällä leimalla varustamatonta MK-801:tä (10 μΜ). Inkuboinnit lopetettiin käyt- ** täen Millipore-suodatinjärjestelmää. Näytteet huuhdeltiin 3 kertaa 2,5 ml:11a jää kylmää määrityspuskuria lasikuitusuodattimilla, jotka oli hankittu yhtiöstä :T: Schleicher & Schuell jatkuvasti ylläpidettävässä vakuumissa. Suodatus suoritettiin mahdollisimman nopeasti. Erottamisen ja huuhtelun jälkeen suodattimet asetettiin • · 35 tuikenesteeseen (5 ml; Ultima Gold) ja suodattimille jäänyt radioaktiivisuus mää- 33 1 1 9 8 O 9 ritettiin tavanomaisella nestetuikelaskijalla (Hewlett Packard, Liquid Scintillation Analyser).

Patch clamp

Hippokampukset otettiin rotan alkioista (E20 - E21) ja nämä siirrettiin sitten Hank’s 5 buffered salt -suolaliuokseen (Gibco), josta kalsium ja magnesium oli jätetty pois, ja niitä pidettiin jäissä. Solut dissosioitiin mekaanisesti seoksessa, joka sisälsi 0,05 % DNaasia ja 0,3 % ovomukoidia (Sigma), mikä suoritettiin kahdeksan minuutin pituisen esi-inkuboinnin jälkeen, johon käytettiin 0,66 % trypsiiniä ja 0,1% DNaasia (Sigma) sisältävää seosta. Dissosioidut solut sentrifiigoitiin tämän jälkeen 10 mi-10 nuutin ajan 18 x g:n voimalla, suspendoitiin uudelleen minimum essential medium (Gibco) -elatusaineeseen ja maljattiin solutiheydellä 150 000 solua cm'2 muovista vahnistettuihin petrimaljoihin (Falcon), jotka oli päällystetty etukäteen poly-L-lysiinillä (Sigma). Soluja ravittiin NaHC03/HEPES-seoksella puskuroidulla minimum essential medium -elatusaineella, jota oli täydennetty 5-prosenttisella 15 fetaalisella vasikan seerumilla ja 5-prosenttisella hevosen seerumilla (Gibco), ja niitä inkuboitiin 95-prosenttisessa kosteudessa 37°C:ssa käyttäen 5% C02:ta. Medium vaihdettiin kokonaan noin 7 päivän kuluttua siitä, kun gliasolujen mitoosin jatkuminen in vitro -olosuhteissa oli inhiboitu sytosiini-beta-D-arabinofiiranosidilla (20 μΜ) (Sigma). Tämän jälkeen medium vaihdettiin osittain kaksi kertaa viikossa.

• * * 20 Patch clamp -rekisteröintejä suoritettiin näistä neuroneista kiillotetuilla lasielektro- deilla (4-6 ηαΩ) kokonaisten solujen käyttöön perustuvassa toimintatilassa huo-v.: neen lämpötilassa (20 - 22 °C) käyttäen EPC-7 vahvistinta (List). Tutkittavia aineita lisättiin kytkemällä käyttöön tilauksesta valmistetun nopean superfuusiojärjestelmän kanavia, jotka oli varustettu yhteisellä nesteen poistomekanismilla (10- 20 ms ;*j*. 25 vaihdunta-ajat). Solunsisäisen liuoksen sisältö oli seuraava (mM): CsCl (120), TEACI (20), EGTA (10), MgCl2 (1), CaCl2 (0,2), glukoosi (10), ATP (2), cAMP (0,25); pH säädettiin arvoon 7,3 CsOH:lla tai HCl.llä. Solunulkoisten liuosten • · » L. peruskoostumus oli seuraava (mM): NaCl (140), KC1 (3), CaCl2 (0,2), glukoosi \ * (10), HEPES (10), sakkaroosi (4,5), tetrodotoksiini (TTX 3 x 10"4). Kaikissa • · s.*·· 30 liuoksissa käytettiin glysiiniä (1 μΜ): konsentraatio, joka oli riittävää luokkaa ·:·*: saamaan aikaan noin 80 - 85-prosenttisen glysiiniB-reseptorien aktivoitumisen.

Lopulliseen analyysiin hyväksyttiin sisällytettäväksi ainoastaan stabiileista soluista • · · 1' . peräisin olevat tulokset, toisin sanoen soluista, joissa vasteet NMDA:lle olivat ** *: palautuneet vähintään 75 prosentilla siitä, mikä niiden heikentyminen oli ollut 35 tutkittujen antagonistien vaikutuksesta.

34 119809

Eksitotoksisuus

Isoaivojen kuorikerroksen neuroneja hankittiin käyttöön 17/18 päivän ikäisten fe-taalisten rottien (Wistar) isoaivojen kuorikerroksista noudattaen yleensä julkaisussa [23] kuvattua dissosiointimenettelyä. Lyhyen trypsiinikäsittelyn ja liekissä viimeis-5 tellyllä pasteurpipeteillä tehdyn hellävaraisen trituroinnin jälkeen solususpensio pestiin sentrifugoimalla. Solut suspendoitiin B27-täydennysseosta sisältävään see-rumittomaan Neurobasal medium -elatusaineeseen (Gibco), minkä jälkeen ne mal-jattiin solutiheyteen 5 x 104 solua/kuoppa 96-kuoppaisiin kuoppalevyihin (Falcon, Primaria), jotka oli päällystetty poly-L-lysiinillä (Sigma; 0,2 mg/ml, 20 h, 4 °C) ja 10 lamiininilla (Sigma; 2 pg/ml, 1 h, 37 °C). Kuorikerroksen neuroneja pidettiin 37 °C:ssa kosteutetussa kaasuseoksessa, joka sisälsi 10 % CC^ita ja 90 % ilmaa. Yhden päivän kuluttua maljauksesta kuhunkin kuoppaan lisättiin gliasolujen lisääntymisen inhiboimiseksi 5 μΜ sytosiini-p-D-arabinofuranosidia (Sigma). Medium vaihdettiin in vitro -olosuhteissa ensimmäisen kerran neljän päivän kuluttua ja 15 tämän jälkeen joka neljäs päivä korvaamalla 2/3 mediumista astrosyyttien kasvatukseen käytetyllä mediumilla. Kokeisiin käytettiin viljelypäivien 12 ja 14 välisiä aivokuoren neuroneja.

Vastasyntyneen rotan astrosyyttejä eristettiin ei-entsymaattisesti julkaisun [24] mukaista menetelmää noudattaen. Lyhyesti mainittuna kahden päivän ikäisistä rotista it>f. 20 poistettiin kirurgisesti molemmat aivopuoliskot, ne pakotettiin 80 pm verkon läpi ja • · trituroitiin pasteurpipeteillä. Solususpensio valmistettiin Dulbecco’s modified *;*I* essential medium (DMEM, Gibco) -elatusaineeseen, jota oli täydennetty 10- • · · prosenttisella fetaalisella vasikanseerumilla (FCS, Hyclone), 2 mM glutamiinilla \**: (Gibco) ja 50 pg/ml gentamysiinillä, ja pipetoitiin käsittelemättömiin muovista ··· - V : 25 valmistettuihin kudosviljelypulloihin (Corning; 75 cm ). Kaksi päivää maljauksen • ·* : jälkeen pulloja ravisteltiin mikrogliasolujen poistamiseksi 10 minuuttia kierto liikettä suorittavalla ravistelutasolla (150 kierrosta minuutissa). Viljelmiä kasvatet-tiin täyteen peittoasteeseen 14 päivän aikana ja kudosviljelymedium vaihdettiin • « .··*. kaksi kertaa viikossa. Tämän jälkeen yksisoluiset gliasolukerrokset pestiin seerumin 30 poistamiseksi perusteellisesti seerumittomalla Neurobasal medium -elatusaine- • · · *· *! liuoksella (Gibco). Tämän jälkeen pulloja ravisteltiin useita kertoja oligodendro- syyttien ja neuronien poistamiseksi. Primaarisista astrosyyteistä peräisin olevan ·*.*· solujen kasvatukseen käytetyn mediumin aikaansaamiseksi viljelmiä inkuboitiin • « .···, käyttäen uutta Neurobasal medium -elatusaineetta, jota oli täydennetty B27:lla ja 35 glutamiinilla. Solujen kasvatukseen käytetty medium koottiin talteen joka 2.- 3. päivä ja sen tilalle lisättiin uutta elatusainetta korkeintaan neljä kertaa.

35 119809 EAA-käsittely suoritettiin seeramittomassa Neurobasal medium -elatusaineessa, joka sisälsi 100 μΜ glutamaattia ja tutkittavaa lääkeainetta. Sytotoksinen vaikutus tutkittiin morfologisesti 20 tunnin inkuboinnin jälkeen faasikontrastimikroskoopissa ja kvantitoitiin biokemiallisesti määrittämällä solujen elinkyky käyttäen MTT-testiä 5 (Promega). Tällä kolorimetrisellä määrityksellä määritetään tetratsoliumkompo-nentin (MTT) pelkistyminen elävien solujen mitokondrioiden vaikutuksesta liukenemattomaksi formatsaanituotteeksi. Aivokuoren neuroneja inkuboitiin ensin noin 1 - 4 tuntia, minkä jälkeen lisättiin solubilisointiliuosta solujen hajottamiseksi ja värillisen tuotteen solubilisoimiseksi (inkubointi suoritettiin yön yli 37 °C:ssa, 10-10 prosenttisessa C02:ssa, 90-prosenttisessa suhteellisessa kosteudessa). Nämä näytteet luettiin tämän jälkeen käyttäen ELISA-levyjen lukulaitetta (Thermomax, MVG Biotech) 570 nm:n aallonpituuden kohdalta. Muodostuneen värin määrä oli suoraan verrannollinen elävien solujen lukumäärään.

In vivo 15 Kouristuksia ehkäisevä aktiivisuus

Naaraspuolisia NMR-hiiriä (18 - 28 g), joita oli 5 häkkiä kohti, käytettiin maksimaaliseen sähköiskututkimukseen (MES) ja motorisen toiminnan heikentymis-tutkimukseen. Kaikkia eläimiä pidettiin kahdentoista tunnin valo-pimeä-kierrossa (valojen päälle pano tapahtui kello 6 a.m.) ja säädetyssä lämpötilassa (20 ± 0,5 °C) 20 ja niille oli taijolla rajoituksetta vettä ja ravintoa. Kaikki kokeet suoritettiin ajan-kohdan 10 a.m. ja ajankohdan 5 p.m. välillä. Tutkittavia aineita injektoitiin 30 mi-!" nuuttia i.p. ennen kouristusten käynnistämistä, ellei toisin ole mainittu (katso alla).

; \ Kaikki yhdisteet liuotettiin 0,9-prosenttiseen fysiologiseen suolaliuokseen.

• φ · • ·· • · MES-tutkimus suoritettiin yhdessä tutkimusten kanssa, joiden tarkoituksena oli 25 selvittää lihasrelaksanttivaikutusta (vetorefleksi) ja motorista koordinaatiota (pyö-rivä sauva). Vetorefleksin aikaansaamiseksi hiiret asetettiin siten, että niiden etu-käpälät tulivat vaakasuoran sauvan päälle ja niiden oli asetettava kaikki neljä käpä- ♦ · · .I..' lää langalle 10 sekunnin kuluessa. Ataksian (motorisen koordinaation) tutkimiseksi • · · \ hiiret asetettiin pyörivälle sauvalle (viisi kierrosta minuutissa) ja niiden oli pysyt- • · ·*.*·· 30 tävä sauvan päällä yhden minuutin ajan.

• · • Ainoastaan niillä hiirillä, jotka eivät täyttäneet vaatimuksia kunkin tutkimusten kai- * kissa kolmessa toistossa, katsottiin esiintyvän lihasrelaksaatiota tai ataksiaa, maini- # · tussa järjestyksessä ilmoitettuna. Näiden tutkimusten jälkeen suoritettiin MES (100 Hz, sähköiskun kesto 0,5 sekuntia, sähköiskun voimakkuus 50 mA, impulssin 35 kesto 0,9 ms, Ugo Basile), joka annettiin marraskeden kanssa kosketuksessa olevien 36 1 1 9 8 0 9 elektrodien kautta. Kokeessa arvioitiin tonisten kouristusten esiintyminen (taka-käpälien töninen oikeneminen siten, että niiden kulma ruumiin linjasta oli vähintään 90°). Tarkoituksena oli saada ED50-arvot kaikista määritetyistä muuttujista (kouristuksia ehkäisevä aktiivisuus ja motoriset sivuvaikutukset) käyttämällä kvantisoitu-5 neiden annosvasteiden havaitsemiseen käytettävää Litchfield'in ja Wilcoxon'in testiä. Terapeuttisena indeksinä (TI) käytettiin suhdetta, joka oli saatu jakamalla sivuvaikutuksia (ataksiaa tai lihasrelaksaatiota) kuvaava ED50-arvo sähköisku-kouristuksille antagonistista vaikutusta esittävällä EDso-arvolla.

Tilastollinen analyysi 10 ICso-arvot, jotka saatiin patch damp-, eksitotoksisuus- ja sitoutumistutkimuksissa, laskettiin neljän muuttujan logistisella yhtälöllä käyttäen Grafit-tietokoneohjelmaa (Erithacus Software, Englanti). Sitoutumistutkimuksia vastaava Ki-arvo määritettiin tämän jälkeen Chengin ja Prusoffin mukaisesti. Esitetyt sitoutumisarvot ovat keskiarvoja ± SEM 3-5 määrityksestä (kukin näistä oli suoritettu kahtena rinnakkaisena 15 kokeena).

Kussakin in vivo -olosuhteissa suoritetussa kokeessa tutkittiin 4-7 antagonistien annosta (5-8 eläintä annosta kohti), jotta olisi ollut mahdollista laskea luokitellut ED5o-arvot probit-analyysin mukaisesti (Litchfield ja Wilcoxon) käyttäen korjausta 0 % - 100 % vaikutuksille. ED50-arvot on esitetty käyttäen 95-prosenttisia luoteita- *"" 20 vuusrajoja (Cl). Pearsonin tulomomenttikorrelaatioanalyysia (Sigma Stat, Jandel :*[[: Scientific) käytettiin in vitro -olosuhteissa havaittavien tehokkuuksien ja in vivo :*:*· -olosuhteissa havaittavan kouristuksia ehkäisevän aktiivisuuden vertaamiseen • · : toisiinsa.

• · · • * * * v : Tulokset »*« * 25 Sitoutuminen

Kaikilla sykloheksaaneilla esiintyi syrjäyttävää vaikutusta [3H]-(+)-MK-801:n si-toutumiseen rotan aivojen kuorikerroksen membraaneihin siten, että IC50-arvot • · · olivat alueella 4-150 μΜ, kun taas Ki-arvot, määritettynä Cheng'in ja Prusoffin • · :.**i yhtälöllä, olivat kaksi kertaa pienempiä (katso taulukko 7).

* • « 30 Patch clamp -tutkimus • * · • · ·

Tutkitut sykloheksaanit vaikuttivat antagonistisesti hippokampuksen viljeltyjen · neuronien tuottamiin sisäänpäin suuntautuvan virran vasteisiin NMDA:lle (200 μΜ yhdistettynä 1 μΜ glysimiin jännitteen ollessa -70 mV) dynaamisessa tasapaino- 37 119809 tilassa, siten että ICso-arvot olivat alueella 1,3 - 99 μΜ (taulukko 7). Vaikutukset virtahuippuihin ja dynaamisessa tasapainotilassa vallitseviin virtoihin olivat saman-asteisia, minkä perusteella on epätodennäköistä, että kyseessä olevien yhdisteiden vaikutukset tapahtuisivat glysiiniB-kohdassa tapahtuvien vaikutusten välityksellä. 5 Voimakasta tukea käsitykselle tämän antagonismin unkompetitiivisesta luonteesta antoi niiden toiminnan estymisen selvä käytössäoloriippuvuus ja jänniteriippuvuus. Heikohkoilla antagonisteilla esiintyi nopeampaa kinetiikkaa ja voimakkaampaa jänniteriippuvuutta.

Eksitoksisuus 10 Useimmat sykloheksaanit olivat mikromolaarisen konsentraatioalueen alapäässä tehokkaita hermosoluja suojaavia aineita in vitro -olosuhteissa, ja Mrz 2/579 vaikutti tässä suhteessa tehokkaimmalta (katso taulukko 7). Useimmilla yhdisteillä saavutettiin täydellinen suojaus 20 μΜ konsentraatiota käyttäen.

In vivo 15 Kouristuksia ehkäisevä aktiivisuus

Kaikki sykloheksaanijohdannaiset inhiboivat MES:n aikaansaamia kouristuksia hiirillä siten, että EDso-arvot olivat alueelta 3,6 - 50 mg/kg i.p. (taulukko 7).

Valikoiduista yhdisteistä tutkittiin myös niiden vaikutukset PTZ:n ja NMDA:n aikaansaamia kouristuksia vastaan (menetelmiä on tarkasteltu julkaisuissa [20, 21]) .···. 20 ja näiden tehokkuus osoittautui olevan verrattavissa MES-tutkimukseen (esi- • · merkiksi Mrz 2/579:n ED50-arvot olivat PTZ- ja NMDA-tutkimuksissa 5,5 ja I 3,7 mg/kg, mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna). Näiden kouristuksia estävä • · · tehokkuus lisääntyi suonensisäisen antamisen jälkeen (esimerkiksi Mrz 2/579 ED50: • · · * 2,5 mg/kg). Mrz 2/579 oli myös aktiivinen ihonalaisen antamisen jälkeen ja hieman v : 25 vähemmän tehokas suun kautta tapahtuneen antamisen jälkeen (ED50-arvot olivat 4,6 ja 13,7 mg/kg mainitussa järjestyksessä ilmoitettuna). Joillakin sykloheksaa- :Y: neilla havaittiin kouristuksia estävällä alueella olevilla annoksilla lihasten relak- • · säätiötä (vetotutkimus) ja ataksiaa (pyörivä sauva -tutkimus). Suurimmalta osalta

St . niissä ei havaittu akuuttia letaalisuutta edes konsentraatiossa 50 mg/kg.

• ·· • · 30 Korrelaatiotutkimus • · • ♦ · *·*·* Kaikkien kolmen in vitro -olosuhteissa tehdyn määrityksen kesken vallitsi erittäin hyvä keskinäinen korrelaatio (kaikki korrelaatiokertoimet olivat > 0,70, p < 0,001). NMDA:n aikaansaamia sisäänpäin suuntautuneita virtoja koskevan antagonistisen vaikutuksen tehokkuuksien sekä NMDA:n aikaansaamaa toksisuutta vastaan 38 1 1 9809 suunnatun suojan, jotka oli tutkittu in vitro -olosuhteissa, ja in vivo -olosuhteissa määritetyn kouristuksia vastaan suunnatun aktiivisuuden kesken esiintyi myös hyvää korrelaatiota (korrelaatiokertoimet > 0,56, p < 0,01).

Taulukko 7

Mrz 2/ [3H] ISEM Patch SEM Glut. SD |MES ED50| CL.

MK-801 clamp Toks. mg/kg Ι05ο(μΜ) IC50 (μΜ) IC50 (μΜ) __(μΜ)________ 557 17,6 0,9 18,5 2,7 6,7 2,0 43,9 35,6-54,1 579 __1,9 0,1 1,3 0,02 2,2 0,0 3,6 2,2 -6,1 580 15,9 0,8 12,9 0,4 5,6 0,8 27,3 12,8-64 600 2,4 0,1 3,7 0,2 2,1 0,2 22,6 43,0- 197 601 __7,4 0,7 10,5 0,8 3,5 0,3 15,6 10,4-23,4 607 8,2 0,3 13,8 1,5 10,1 2,2 22,9 18,3-28,7 608 6,6 1,3 12,7 1,2 16,6 1,1 20,6 18,3-23,2 614 13,6 1,3 13,9 1,9 >10___23,5 15,7 - 34,9 615 2,5 0,1 2,9 0,1 2,3 0,1 6,1 3,4- 10,7 616 15,0 0,4 34,2 4,6 9,1 2,1 24,0 15,6-36,8 617 51,8 3,9 57,4 7,3 >70___54,9 42,9 - 70,4 618 32,7 2,4 43,7 9,4 17,6 2,9 24,0 9,6-59,5 819 72,1 6,7 60,8 5,4 30,9 2,9 44,6 32,0-62,3 620 32,2 2,1 99,0 10,4 38,4 1,6 41,3 32,9-51,7 621 36,7 4,4 92,4 19,0 > 100___36,9 22,6 - 60,3 622 15,0 0,6 64,8 11,7 19,3 8,1 21,0 16,1 -27,5 623 3,3 0,2 3,7 0,7 4,5 0,6 13,1 9,9- 17,2 ·:··* 624 15,4 1,2 31,0 3,6 2,7 0,6 47,2 41,8-532 625 46,8 8,1 244,9 40,1 39,4 6,3 129,8 42,5 -395,6 :···'* 626 11,6 1,5 9,6 2,0 19,0 3,3 41,2 29,9-56,7 :Υϊ 627 70,3 3,3 209,7 1,0 26,6 5,7 43,9 30,3 -63,7 628 35,6 4,4 125,5 0,8 27,3 4,5 73,2 33,6- 159,4 *· *ϊ 629 39,4 2,4 218,6 1,6 >300___58,5 38,3 - 89,2 630 44,3 3,8 > 100__> 1QQ___>30__ 631 69,7 8,6 > 100__> 100___30,00__ 632 __2,0 0,2 6,4 0,6 10,9 0,4 11,04 7,7- 15,8 633 __6,8 0,5 13,9 3,2 5,4 0,9 8,78 3,6 -21,4 634 15,5 1,0 10,8 2,6 19,0 3,9 >30__ *:],* 635__7,8 0,4 21,0 4,6 8,2 1,4 31,59 21,3 -46,8 φ 639 3,3 0,3 7,4 1,0 5,7 0.4 5.5 3.8 -90 640 __3,7 0,6 14,6 1,2 8.3 0,4 8,2 5,7 - 11,8 641 184,5 26,7 > 100__Μ00___>50__ 642 10,2 1,6 42,5 6,5 29,3 3,3 8,04 5,1 -12,7 643 __3,6 0,5 13,5 1,7 12,0 0,9 18,65 10,8-32,2 644 __3,8 3,7 4,1 1,8 4,3 0,4 52,98 27,8- 100,8 1' . 645 85,1 30,6 20,4 3,6 > 100___65,61 43,8 - 98,2

Memantiini 0,7 0,11 2,3 0,3 1,3 0,7 6,9 5,4-8,8

Amantadiini 20,4 5,4 71,0 11,1 20,7__0,7 184,0 122-279 ΜΚ-801 0,002| Ο,ΟΟΟΙ 0,14 0,10 0,012 0,Οθ| 0,16 0,13-0,21 39 1 1 9 8 0 9

Sykloheksaanijohdannaisten ja NMDA-reseptorin unkompetitiivisten standardi-antagonistien vaikutus [3H]-(+)-MK-801:n sitoutumiseen, NMDA:n indusoimiin virtoihin patch clamp -kokeissa, glutamaattitoksisuuteen viljellyissä aivokuoren neuroneissa ja MES-kouristuksiin in vivo -olosuhteissa. Sitoutumiselle määritetyt 5 Ki-arvot ovat keskiarvoja ± SEM 3 - 5-kokeesta. ICso-arvot ( ± SEM) patch clamp-ja glutamaattitoksisuuskokeissa määritettiin määritystuloksista, jotka olivat peräisin 15 ja 85 % välillä olevan inhibition tuottavasta vähintään kolmesta konsentraatiosta ja jotka oli saatu vähintään viidestä solusta konsentraatiota kohti. MES:n aiheuttamien kouristusten kyseessä ollessa arvot ovat EDso-arvoja, jotka on ilmoitettu 10 yksiköissä mg/kg (95-prosenttiset luotettavuusrajat on esitetty suluissa).

Käsillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat lisäksi myös vähintään osaksi amiinisubstituenttinsa vuoksi tehokkaita ei-NMDA-indikaatioissa, ja niillä esiintyy immunomodulatorista aktiivisuutta, tehokkuutta malariaa vastaan, bomavirusta vastaan suunnattua aktiivisuutta ja hepatiitti C:tä vastaan suunnattua aktiivisuutta.

15 Edellä olevan perusteella on todettava yhteenvedoksi, että on selvää, että käsillä olevassa keksinnössä on saatu aikaan käsillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden uusia, arvokkaita ja ennakoimattomia sovellutuksia ja käyttömuotoja, jotka yhdisteet käsittävät käsillä olevan keksinnön mukaisen aktiivisen perusyksikön, sekä näitä sisältäviä uusia farmaseuttisia koostumuksia ja näiden valmistus-20 menetelmiä ja näiden käytön sisältäviä hoitomenetelmiä, joilla kaikilla edellä • · olevilla esiintyy yksityiskohtaisemmin lueteltuja ominaisuuksia ja etuja.

• * • · · :V: Käsillä olevan keksinnön aktiivisen aineen ja tätä sisältävien koostumusten korkea- luokkainen aktiivisuus, mistä ovat todisteena raportoidut tutkimukset, viittaa käyttö-:*·*; kelpoisuuteen, joka perustuu sen arvokkaaseen aktiivisuuteen ihmisissä sekä alem- .* j*; 25 missä eläimissä. Kliinistä tutkimusta ihmisillä ei ole kuitenkaan suoritettu loppuun.

On ilmeisen selvää, että minkä tahansa käsillä olevan keksinnön suojapiiriin ...# kuuluvan yhdisteen tai koostumuksen jakelu ja markkinointi tämän käyttämiseksi ihmisillä on luonnollisesti alistettava ensin sellaisten vastuussa olevien viran- • · * \* * omaisten, kuten Yhdysvaltain Food and Drug Administration -viraston, hyväksyt- 30 täväksi, joilla on valtuudet päättää näistä kysymyksistä.

• · . Johtopäätökset «M * · * * * · *

Esitetyt 1-aminoalkyylisykloheksaanit edustavat uutta systeemisesti aktiivisten unkompetitiivisten NMDA-reseptoriantagonistien luokkaa, jolla esiintyy nopea toiminnan eston/eston purkautumisen kinetiikka ja voimakas jänniteriippuvuus. Ne 40 1 1 9809 ovat suhteellisen pienen tehokkuutensa ja tähän liittyvän nopean kinetiikan vuoksi käyttökelpoisia terapeuttisia aineita suuressa määrässä keskushermostosairauksia, joihin liittyy glutamatergisen transmission häiriöitä.

Tämän mukaisesti näillä yhdisteillä on sovellutuksia seuraavissa eläimessä, erityi-5 sesti ihmisessä esiintyvissä sairauksissa. 1. Akuutti eksitotoksisuus, kuten halvauksen aikana esiintyvä iskemia, trauma, hypoksia, hypoglykemia ja hepaattinen enke-falopatia. 2. Hermojen krooniset rappeutumissairaudet, kuten Alzheimerin tauti, verisuoniperäinen tylsistyminen, Parkinsonin tauti, Huntingtonin tauti, multippeliskleroosi, amyotrofinen lateraalinen skleroosi, AIDS:ään liittyvä hermojen rappeu-10 tuminen, olivo-pontoserebellaarinen atrofia, Touretten oireyhtymä, motoneuroni-sairaus, mitokondrioiden toimintahäiriö, Korsakoffin oireyhtymä, Creutzfeldt-Jacobin tauti. 3. Muut sairaudet, jotka liittyvät keskushermostossa esiintyviin pitkäkestoisiin plastisiin muutoksiin, kuten krooninen kipu, lääketoleranssi, riippuvaisuus ja addiktio, (esimerkiksi opioidit, kokaiini, bentsodiatsepiinit ja alkoholi). 4. 15 Epilepsia, tardiivi dyskinesia, skitsofrenia, ahdistus ja tuskaisuus, masennus, akuutti kipu, spastisuus ja tinnitus. 5. Lisäksi, kuten jo mainittiin, käsillä olevan keksinnön mukaiset yhdisteet ovat myös vähintään osaksi amiinisubstituenttinsa vuoksi tehokkaita ei-NMDA-indikaatioissa, ja niillä esiintyy immunomodulatorista aktiivisuutta, tehokkuutta malariaa vastaan, boma-virusta vastaan suunnattua aktiivisuutta ja 20 hepatiitti C -virusta vastaan suunnattua aktiivisuutta.

•

On selvää, että keksinnön ei ole katsottava rajoittuvan esitettyihin ja kuvattuihin • · ’··;1 täsmällisiin käytön yksityiskohtiin tai täsmällisiin koostumuksiin, menetelmiin ja v.: toimintatapoihin, koska sen ilmeiset modifikaatiot ja vastaavuudet ovat alan • · *.1·· ammattikokemuksen perusteella selviä, mistä syystä keksintöä rajoittaa ainoastaan t · · V · 25 se täysi suojapiiri, jota voidaan pitää laillisesti keksintöön liitettyjen patentti- vaatimusten mukaisena.

··· • 9 · • 1 ♦ ··· • 1 · ♦ · 1 • · • · · • ·· • ♦ • · ♦ · · • ♦ · ♦ ♦ · ♦ * · ♦ • ♦1 • · 119809 41

Kirjallisuusviitteet 1. R.L. Frank, H.K. Hall (1950) J. Am. Chem. Soc. 72: 1645 - 1648.

2. G.A. Hiegel, P. Burk. (1973) J. Org. Chem. 38: 3637 - 3639.

3. N.F. Firrell, P.W. Hickmott. (1970) J. Chem. Soc. C: 716 - 719.

5 4. G.H. Posner, L.L. Frye. (1984) Isr. J. Chem. 24: 88 - 92.

5. G.L. Lemiere, T.A. van Osselaer, F.C. Andenveireldt. (1978) Bull. Soc. Chim. Belg. 87: 771 - 782.

6. H.O. House, J.M. Wilkins. (1976) J. Org. Chem. 41:(25) 4031 - 4033.

7. A.R. Greenaway, W.B. Whalley. (1976) J. Chem. Soc. P.T. 1. :1385-1389.

10 8. S. Matsuzawa, Y. Horiguchi, E. Nakamura, I. Kuwajima. (1989) Tetrahedron 45:(2) 349 - 362.

9. H.O. House, W.F. Fischer. (1968) J. Org. Chem. 33:(3) 949 - 956.

10. Chiurdoglu, G, Maquestiau, A. (1954) Bull. Soc. Chim. Belg. 63: 357 - 378.

11. Zaidlewicz, M., Uzarewicz A., Zacharewicz, W. (1964) Roczniki Chem. 38: 15 591 - 597.

12. Crossley, A.W., Gilling, C. (1910) J. Chem. Soc. 2218.

13. Zaidlewicz, M, Uzarewicz, A. (1971) Roczniki Chem. 45: 1187 - 1194.

14. Lutz, E.T., van der Maas, J.H. (1982) Spectrochim. Acta, A. 38A: 283.

15. Lutz, E.T., van der Maas, J.H. (1981) Spectrochim. Acta, A. 37A: 129 - 134.

20 16. Ramalingam K., Balasubramanian, M., Baliah, V. (1972) Indian J. Chem. 10: 366 - 369.

... 17. Hamlin, K.E., Freifelder, M. (1953) J. Am. Chem. Soc. 75: 369 - 373.

*·”1 18. Hassner, A., Fibinger, R., Andisik, D. (1984) J. Org. Chem. 49: 4237 - 4244.

*·1·1 19. W. Danysz, C.G. Parsons, I. Bresink, G. Quack (1995) Drug News Perspect. 8: V·; 25 261-277.

V : 20. J.D. Leander, R.R. Lawson, P.L., Omstein, D.M. Zimmerman (1988) Brain Res.

:T: 448:115- 120.

21. C.G. Parsons, G. Quack, I. Bresink, L. Baran, E. Przegalinski, W. Kostowski, P. Krzascik, S. Hartmann, W. Danysz (1995). Neuropharmacology 34: 1239 - 1258.

30 22. M.A. Rogawski (1993) Trends Pharmacol. Sci. 14: 325 - 331.

[· t 23. Booher J. ja Sensenbrenner M. (1972). Neurobiology 2: 97 - 105.

*· " 24. Dichter, M. (1987) Brain Research 149: 279.

• · * · · • · » • · · · * · • »· • ·

Claims (34)

119809 1. 1-aminoalkyylisykloheksaaniyhdiste, joka on valittu yhdisteistä, joilla on kaava x R2 R3 5 jossa R* on -(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9, jossa n + m = 0, 1 tai 2, jossa R2, R3, R6, R7, R8 ja R9 on valittu toisistaan riippumattomasti vedystä ja C| _6-alkyy lista, ja jossa R1, R4 ja R5 on valittu toisistaan riippumattomasti Q. 6-alkyylista, 10 ja näiden farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista, edellyttäen, että mainittu 1-aminoalkyylisykloheksaani yhdiste ei ole 1-metyyli-amino-1,3,3,5-tetrametyylisykloheksaani. * 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R1 - R5 ovat metyyli. • · • · • · ·

2. Förening enligt patentkrav 1, varvid R1- R5 är metyl. « t · • · · . 15 3. Förening enligt patentkrav 1, varvid R äretyl. • · · • * ·

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R1 on etyyli. • * • ♦

4. Förening enligt patentkrav 1, varvid R äretyl. , . 5. Förening enligt patentkrav 1, varvid R3 är etyl. • · · « · · • :***: 6. Förening enligt patentkrav 1, varvid R4 är etyl. * .

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R on etyyli. • · · * * · :*·*: 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R3 on etyyli.

5 R2 R3 varvid R* är -(CH2)„-(CR6R7)m -NR8R9, varvid n+m = 0,1 eller 2, varvid R2, R3, R6, R7, R8 och R9 väljs oberoende av varandra ur väte och Ci _6 -alkyl, 10 varvid R1, R4 och R5 väljs oberoende av varandra ur Ci_6-alkyl, och deras farmaceutiskt acceptabla salter, , förutsatt att nämnda 1-aminoalkylcyklohexanförening inte är l-metylamino-1,3,3,5- " ' tetrametylcyklohexan. • · • · ···

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R4 on etyyli. • · · • · · • ·

7. Förening enligt patentkrav 1, varvid R är etyl. • · 20

8. Förening enligt patentkrav 1, varvid R5är propyl. • · · • · · • ·

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R5 on etyyli. ··· • · e :.**i 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R on propyyli. • m

9. Förening enligt patentkrav 1, varvid R6 eller R7 är metyl.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R6 tai R7 on metyyli. • * · * * * • · ·***: 10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, jossa R6 tai R7 on etyyli. »·· 119809

10. Förening enligt patentkrav 1, varvid R6 eller R7 är etyl. 119809

11. Förening enligt patentkrav 1, varvid föreningen väljs ur gruppen bestäende av 1 -amino-1,3,3,5,5 -pentamety Icy klohexan, 1 -amino-1,3,5,5-tetrametyl-3-etylcyklo-hexan, 1 -amino-1,5,5-trimetyl-3,3-dietylcyklohexan, 1 -amino-1,5,5-trimetyl-cis-3-etylcyklohexan, 1 -amino-1,5,5-trimetyl-trans-3-etylcyklohexan, 1 -amino-1 -etyl- 5 3,3,5,5-tetrametylcyklohexan, l-amino-l-propyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexan, N-metyl-1 -amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexan, N-etyl-1-amino-1,3,3,5,5-penta- metylcyklohexan och farmaceutiskt acceptabla salter av nägon av föregäende.

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, joka yhdiste on valittu ryhmästä, joka koostuu l-amino-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista, 1-amino-l,3,5,5-tetrametyyli-3-etyylisykloheksaanista, 1-amino-l,5,5-trimetyyli-3,3-dietyylisyklo-heksaanista, 1 -amino-1,5,5-trimetyyli-cis-3-etyylisykloheksaanista, 1 -amino-1,5,5-5 trimetyyli-trans-3-etyylisykloheksaanista, l-amino-l-etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisyk-loheksaanista, l-amino-l-propyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaanista, N-metyyli- l-amino-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista ja N-etyyli-l-amino-1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista ja minkä tahansa edellä olevien yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista. 10 12. 1 -aminoalkyylisykloheksaaniyhdisteen, jolla on kaava A. R2 R3 jossa R* on -(CH2)n-(CR6R7)m-NR8R9, jossa n+m = 0, 1 tai 2, jossa R1 - R9 on toisistaan riippumatta valittu vedystä ja Ci_6-alkyylistä, • * :"*· 15 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen, • · · • · • · · käyttö valmistettaessa farmaseuttista valmistetta, joka on tarkoitettu sellaisen tilan * * * " lievittämiseen, joka lievittyy NMDA-reseptorin antagonistisella määrällä mainittua V 1 yhdistettä tai sen immunomodulatorisella, malarian vastaisella, Boma- • · · : viruksenvastaisella tai Hepatitis C -vastaisella määrällä mainittua yhdistettä. . . 20 13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R1 - R5 on metyyli. • · · ·

12. Användning av en 1-aminoalkylcyklohexanfÖrening med formeln Λ R2 R3 10 varvid R* är -(CH2)n-(CR6R7)m -NR8R9, varvid n+m = 0,1 eller 2, varvid R1- R9 väljs oberoende av varandra ur väte och Ci^-alkyl, och farmaceutiskt acceptabla salter därav, *:**; för framställning av en farmaceutisk beredning för användning för lindring av ett ··· _ 15 tillständ som lindras av en NMDA-receptorantagonistisk eller immunomodulerande, :V: antimalaria, anti-Boma-virus eller antihepatit C mängd av nämnda föreningen. • » • · · * ·♦ | -

13. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R -R är metyl. • « · V : 14. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R1 är etyl.

14. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R1 on etyyli. * * Λ :. * · 1 15. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R on etyyli.

15. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R2 är etyl. • « · • ·

16. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R3 är etyl. * · · Λ *· *| 17. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R är etyl.

16. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R3 on etyyli. • · • · » • · ·

17. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R4 on etyyli. • · ···

18. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R5 är etyl. • · t • · ··« a t e

18. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R5 on etyyli. 119809

19. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R är propyl.

19. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R5 on propyyli. A 7

20. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R6 eller R7 är metyl. 119809

20. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R tai R on metyyli.

21. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att R6 eller R7 är etyl.

21. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että R6 tai R7 on etyyli.

22. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att föreningen är vald ur gruppen bestäende av 1 -amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexan, 5 1 -amino-1,3,5,5-tetramety 1-3 -ety lcyklohexan, 1 -amino-1,5,5-trimetyl-3,3 -diety lcyklohexan, 1 -amino-1,5,5-trimetyl-cis-3-etylcyklohexan, 1 -amino-1,5,5-trimetyl-trans-3-etylcyklohexan, 1 -amino-1 -etyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexan, 10 1 -amino-1 -propyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexan, N-metyl-1 -amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexan, N-etyl-1 -amino-1,3,3,5,5-pentametylcyklohexan, och farmaceutiskt acceptabla salter därav.

22. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että yhdiste on valittu ryhmästä, joka käsittää seuraavat: 1 -amino-1,3,3,5,5 -pentametyylisykloheksaani, l-amino-l,3,5,5-tetrametyyli-3-etyylisykloheksaani, l-amino-l,5,5-trimetyyli-3,3-dietyylisykloheksaani, 10 l-amino-l,5,5-trimetyyli-cis-3-etyylisykloheksaani, 1 -amino-1,5,5-trimetyy li-trans-3-etyylisykloheksaani, l-amino-l-etyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaani, 1 -amino-1 -propyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaani, N-metyyli-1 -amino-1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaani, ja 15 N-etyy li-1-amino-1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaani, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

23. Användning enligt patentkrav 12, kännetecknad av att den farmaceutiska 15 beredningen innehäller ett eller flera farmaceutiskt acceptabla lösningsmedel, tillsatsmedel eller bärare.

23. Patenttivaatimuksen 12 mukainen käyttö, tunnettu siitä, että farmaseuttinen valmiste käsittää yhtä tai useampaa farmaseuttisesti hyväksyttävää liuotinta, lisäainetta tai kantaja-ainetta. • "*" 20 24. Farmaseuttinen koostumus, joka käsittää tehokkaan NMDA-reseptoria koh- i]"t: taan antagonistisen määrän, tai tehokkaan immunomodulatorisen, malariaa, boma- ·*;*: virusta tai hepatiitti C:tä vastaan suunnatun määrän 1-aminoalkyylisykloheksaani- • * : yhdistettä, joka on valittu yhdisteistä, joilla on kaava • · • · · • · · RS *R# v *,·/ R2 R3 • · · 25 jossa R* on -(CH2(CR6R7)m-NR8R9, * · • φ · · · jossan + m = 0, 1, tai 2, • · ^ Λ ί Λ 7 B Q jossa R , R , R , R , R ja R on valittu toisistaan riippumattomasti vedystä ja Q _6- • « .·**. alkyylista, ja • · · 119809 jossa R1, R4 ja R5 on valittu toisistaan riippumattomasti Ci .6-alkyylista, ja näiden farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista, yhdistettynä yhteen tai useampaan farmaseuttisesti hyväksyttävään laimentimeen, 5 lisäaineeseen tai kantaja-aineeseen.

24. Farmaceutisk sammansättning omfattande en effektiv NMDA-receptorantagonistisk mängd eller en effektiv immunomodulerande, antimalaria, : "· anti-Boma-virus eller antihepatit C mängd av en 1-aminoalkylcyklohexan-förening 20 vald ur fiöreningama med formeln :S v *· *! *·· • · · • · · «:r« „X\, R2 R3 W varvid R* är -(CH2)n-(CR6R7)m -NR8R9, ··· ♦ · • ^ ♦ • varvid n+m = 0, 1 eller 2, • · 77 • · · • ·* ♦ · ^ IJ / Λ ft O ·:*·· varvid R , R , R , R , R och R väljs oberoende av varandra ur väte och Ci_6 - .*. 25 alkyl, • · · ¥ * * · * · varvid R1, R4 och R5 väljs oberoende av varandra ur Cj _6 -alkyl, och farmaceutiskt acceptabla salter därav, 119809 i kombination med ett eller flera farmaceutiskt acceptabla spädningsmedel, tillsats-medel eller bärare.

25. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R'-R5 är metyl.

25. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R1 - R5 ovat metyyli.

26. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R1 är etyl.

26. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R1 on etyyli.

27. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R2 är etyl.

27. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R2 on etyyli.

28. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R3 är etyl.

28. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R on etyyli.

29. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R4 är etyl.

29. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R4 on 15 etyyli.

30. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R5 är etyl.

30. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R5 on ,,,,· etyyli. • · *·* e

31. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R5 är propyl.

31. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R on pro- :Y.· pyyli. * · • · ·

32. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R6 eller R7 är metyl.

32. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R6 tai R7 • · · *X‘ on metyyli. • · · 1*1 • Ä 7

33. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid R6 eller R7 är etyl.

33. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa R tai R on etyyli. • · · • * ···

34. Patenttivaatimuksen 24 mukainen farmaseuttinen koostumus, jossa yhdiste on X : 25 valittu ryhmästä, joka koostuu l-amino-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista, 1- • · · XJ amino-l,3,5,5-tetrametyyli-3-etyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-3,3- dietyylisykloheksaanista, l-amino-l,5,5-trimetyyli-cis-3-etyylisykloheksaanista, 1-:Y: amino-l,5,5-trimetyyli-trans-3-etyylisykloheksaanista, 1-amino-l-etyyli-3,3,5,5-tet- ·*". rametyylisykloheksaanista, l-amino-l-propyyli-3,3,5,5-tetrametyylisykloheksaanis- 30 ta, N-metyyli-l-amino-l,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista ja N-etyyli-1-amino- 119809 1,3,3,5,5-pentametyylisykloheksaanista ja minkä tahansa edellä olevien yhdisteiden farmaseuttisesti hyväksyttävistä suoloista. 1. 1 -aminoalkylcyklohexanförening vald ur föreningama med formeln x

34. Farmaceutisk sammansättning enligt patentkrav 24, varvid föreningen är vald ur gruppen bestäende av l-amino-l,3,3,5,5-pentametylcyklohexan, 1-amino-1,3,5,5- 15 tetrametyl-3-etylcyklohexan, 1-amino-1,5,5-trimetyl-3,3-dietylcyklohexan, 1- ,···. amino-1,5,5-trimetyl-cis-3-etylcyklohexan, 1-amino-1,5,5-trimetyl-trans-3-etyl- cyklohexan, l-amino-l-etyl-3,3,5,5-tetrametylcyklohexan, 1-amino-1-propyl- • 1 · 3,3,5,5-tetrametylcyklohexan, N-metyl-l-amino-l,3,3,5,5-pentametylcyklohexan *;./ och N-etyl-l-amino-l,3,3,5,5-pentametylcyklohexan och farmaceutiskt acceptabla • · · ’l"' 20 salter av nägon av föregäende. • · 1 * 1 1 m • · • t · * · · • 1 9·· * · • · ·«· * · • · · • · • · · * · · • · 1 • · · • ·