CZ342098A3

CZ342098A3 - 1-Methylkarbapenemové deriváty

Info

Publication number: CZ342098A3
Application number: CZ983420A
Authority: CZ
Inventors: Isao Kawamoto; Katsuya Ishikawa; Katsuhiko Kojima; Yasuo Shimoji; Satoshi Ohya; Munetsugu Morimoto
Original assignee: Sankyo Company, Limited
Priority date: 1996-04-26
Filing date: 1997-04-25
Publication date: 1999-02-17
Also published as: AU710881B2; NO312900B1; PT900797E; CN1093861C; ATE222588T1; CN1223655A; EP0900797A1; NZ332453A; NO984948D0; WO1997041123A1; HUP9902149A3; HUP9902149A2; DK0900797T3; US5977097A; ES2180977T3; KR20000064997A; EP0900797A4; NO984948L; DE69714841T2; AU2407697A

Description

1-Methylkarbapenemové deriváty

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká 1-methylkarbapenemových sloučenin s vynikajícími antibakteriálními účinky, jejich farmaceuticky přijatelných solí a derivátů, přípravků pro prevenci a léčbu bakteriálních infekcí, obsahujících jako účinnou složku předkládané sloučeniny, jejich soli a deriváty; použití těchto sloučenin, jejich solí a derivátů pro přípravu léků na prevenci a léčbu bakteriálních infekcí; způsobu prevence a léčby bakteriálních infekcí u teplokrevných živočichů zpočívajícího v podávání farmakologicky účinného množství některé z předkládaných sloučenin, její soli nebo derivátu; a postupů příprav těchto sloučenin, jejich solí nebo derivátů.

Dosavadní stav techniky

Karbapenemová antibiotika, deriváty thienamycinu, mají vynikající antibakteriální účinky, ale jsou málo chemicky stabilní, ztrácejí enzymu přítomného regenerace v moči Chemother., 22, 62 Agents Chemother., pokusných zvířat dehydropeptidázy I, mají nízkou rychlost Antimicrob. Agents aktivitu působením v lidském těle, a [dle H. Kropp et al (1982); R.S. Norrby et al . Antimicrob. 23, 300 (1983)]. U některých druhů vykazují nefrotoxické účinky.

Z thienamycinových derivátů byl používán imipenem ve směsi s cilastinem, což je inhibitor dehydropeptidázy I, panipenem byl dostupný na trhu ve směsi s betamipronem, což je inhibitor přenosu organických chemickou stabilitu i zlepšit zavedením karbapenemového skeletu a na obsahující jako jedinou účinnou složku karbapenemový derivát, aniontů. Později bylo zjištěno, že stabilitu vůči dehydropeptidáze I lze methylové skupiny do polohy 1trhu se objevily přípravky např. meropenem (U.S. Patent č. 5122604). Od zahájení běžného používání 1-methylkarbapenemových derivátů jako je meropenem v klinické praxi, se však začaly objevovat rezistentní kmeny mezi Pseudomonas aeruginosa a pod.

Proto se zvýšila poptávka po látkách s vyššími a lépe vyváženými antibakteriálními účinky proti širokému spektru bakterií, včetně kmenů Pseudomonas aeruginosa rezistentních vůči meropenemu, a látkách bez nefrotoxických účinků. V japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 5-310740, japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 5-339269, japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 6-172356 a japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 6-199860 jsou popsány 1-methy1-karbapenemové deriváty syntetizované s ohledem na uspokojení výše uvedených požadavků.

Podstata vynálezu

S výhledem na překonání výše uvedených nedostatků 1-methyl-karbapenemových derivátů, pokračovali předkladatelé ve výzkumu. Výsledkem jejich úsilí jsou předkládané sloučeniny I, které v porovnání s 1-methy1-karbapenemovými deriváty vykazují vyšší antibakteriální účinky, vyšší stabilitu vůči dehydropeptidáze I, mají zlepšenou rychlost regenerace v moči a lepší farmakokinetické vlastnosti jako je poločas v krvi. Rovněž bylo potvrzeno, že předkládané sloučeniny I jsou minimálně nefrotoxické a proto použitelné jako antibakteriální látky při prevenci a léčbě (zejména léčbě) bakteriálních infekc í .

V japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 5-310740, japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 5-339269 a japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 6-172356 jsou popsány sloučeniny obsahující 3-(aminomethyl)pyrrolidin [sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹, R² a R³ jsou současně vodík, apod.], ale práce se nezmiňují o přípravě sloučenin předkládaného vynálezu, které nesou substituent na aminu 3-(aminomethyl)pyrro1idinové skupiny.

Předkládaný vynález poskytuje 1-methylkarbapenemové sloučeniny s vynikajícími antibakteriálními účinky, jejich farmaceuticky přijatelné soli a deriváty; přípravky pro prevenci a léčbu bakteriálních infekcí, obsahující jako účinnou složku kteroukoliv z předkládaných sloučenin, jejich soli a deriváty; použití těchto sloučenin, jejich solí a derivátů pro přípravu léků na prevenci a léčbu bakteriálních infekcí; způsob prevence a léčby bakteriálních infekcí u teplokrevných živočichů zpočívající v podávání farmakologicky účinného množství některé z předkládaných sloučenin, její soli nebo derivátu; a postupy příprav těchto sloučenin, jejich solí nebo derivátů.

Předkládané 1-methylkarbapenemové sloučeniny obecného vzorce I, deriváty jsou

N

R2

R3 kde:

R¹	je H	nebo	nižší alkyl;
R²	je H	nebo	nižší alkyl; a
R³	je	H ,	nižší alkyl, nižší alkyl nesoucí 1 až 3
subst i tuenty	(ze	skupiny substituentů hydroxyl, halogen,

karbamoyl, karbamoyl substituovaný 1 nebo 2 nižšími alkyly, karbamoyloxy, karbamoyloxy substituovaný 1 nebo 2 nižšími alkyly, nižší alkoxy, amino nebo amino substituovaná 1 nebo 2 nižšími alkyly), cykloalkyl nebo skupina obecného vzorce -C(=NH)R⁴ (kde R⁴ je H, nižší alkyl něho amino), nebo

R² a R³ spolu vytváří alkylenovou skupinu případně přerušenou jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry (dusíkový

- 4 atom je případně substituován nižším alkylem);

za podmínky, že R¹, R² a R³ nejsou současně H.

Nižší alkyl“ v definicích pro R¹ , R² , R³ a R⁴ je přímý nebo rozvětvený C1-4 alkyl, např. methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl a t-butyl, výhodné jsou methyl nebo ethyl, nejvýhodnější je methyl.

Halogen v definici pro R³ je flór, chlór a bróm, fluór je výhodnější.

Příkladem karbamoylu substituovaného 1 nebo 2 nižšími alkyly v definici pro R³ je methylkarbamoyl, ethylkarbamoyl, dimethylkarbamoy1 a diethylkarbamoyl, výhodné jsou methylkarbamoyl nebo dimethylkarbamoyl.

Příkladem “karbamoyloxy substituované 1 nebo 2 nižšími alkyly v definici pro R³ je methylkarbamoyloxy, ethylkarbamoyloxy, dimethylkarbamoyloxy a diethylkarbamoyloxy, výhodné jsou methylkarhamoyloxy nebo dimethylkarbamoyloxy.

Příkladem aminoskupiny substituované 1 nebo 2 nižšími alkyly v definici pro R³ je methylamino, ethylamino, dimethylamino a diethylamino, výhodné jsou methylamino nebo d imethylamino.

Příkladem nižší alkoxy skupiny v definici pro R³ je C1-4 alkoxy jako methoxy, ethoxy, propoxy a butoxy, výhodná je methoxy.

Výhodným příkladem substituentu nižšího alkylu nesoucího 1 až 3 substituenty v definici pro R³ je hydroxy, fluór, karbamoyl, methylkarbamoy1, dimethylkarbamoyl, karbamoyloxy, methoxy, amino, methylamino nebo dimethylamino.

Příkladem výše popsaného nižšího alkylu nesoucího 1 až 3 substituenty jsou 2-hydroxyethy1, 3-hydroxypropy1, 2-hydroxypropy1, 2,3-dihydroxypropy1, fluormethyl, difluormethyl, trifluormethyl, 2-fluorethy1, 2,2,2-trifluorethyl, chlormethyl, dichlormethyl, trichlormethyl, 2-chlorethy1, karbamoylmethyl, N-methylkarbamoylmethyl, N,N-dimethylkarbamoyImethy1, 2-karbamoylethyl, 2-(N-methylkarbamoyl)ethyl, 2-(N,N-dimethy1karbamoy1)ethy1, 2-karbamoyloxyethy1, 2-(N,N-dimethylkarhamoyloxy)ethy1, 2-methoxyethy1, 2-ethoxy• ·

- 5 ethyl, 2-aminoethyl,

2-(dimethylamino)ethyl; a

C3-6 cykloalkyl a cyklohexyl;

ethyl, 2-aminoethyl, 3-aminopropyl, 2-aminopropyl,

2-(methylamino)ethyl, 3-(methylamino)propyl, 2-(dimethylamino)ethyl a 3-(dimethylamino)propyl; z nichž výhodné jsou

2-hydroxyethy1, 2-fluorethy1, 2,2,2-trifluorethyl, karbamoyImethy1, 2-karhamoylethy1, N-methylkarbamoyImethy1,

N,N-dimethylkarbamoylmethyl, 2-methoxyethyl, 2-karhamoyloxy2-(methylamino)ethyl nebo výhodnější jsou 2-hydroxyethyl, karbamoylmethyl, 2-aminoethyl nebo 2-(methylamino)ethy1.

Příkladem cykloalkylové skupiny v definici pro R³ je jako cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl z nichž výhodné jsou cyklopropyl nebo cyklobutyl; a výhodnější je cyklopropyl.

Příkladem skupiny obecného vzorce -C(=NH)R⁴ je formimidoyl, acetimidoyl, propioimidoyl a amidino; výhodné jsou formimidoyl, acetimidoyl a amidino.

Příkladem alkylenové skupiny z alkylenové skupiny atomem kyslíku, dusíku nebo síry R³, je přímý nebo rozvětvený ethylen, propylen, trimethylen, 2-methyltrimethylen, tetramethylen, 1-methyltetramethylen, 2-methyltetramethylen a pentamethylen.

Příkladem alkylenové skupiny případně přerušené jedním dusíku nebo síry je ethylenoxyethylen ethylenaminoethylen ethylenaminopropylen (CH2CH2NHCH2CH2CH2) (CHz CH₂ SCH2 CH₂ ).

případně přerušené jedním v definici pro R² a C2-6 alkylen, jako 1-methyltrimethylen, atomem kyslíku, (CH2 CH2 OCH2 CH2), (CH2CH2NHCH2CH2 ) , a ethylenthioethylen

Dusík v alkylenové skupině případně přerušené jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry je případně substituován nižším alkylem. Nižší alkyl je C1-4 alkyl, výhodně methyl.

Příkladem alkylenové skupiny případně přerušené jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry je ethylen, trimethylen, tetramethylen, pentamethylen, ethylenoxyethyl, ethylenthioethyl, ethylenaminoethyl, ethylenaminopropyl, ethylen(methyl)aminoethyl, ethylen(ethyl)aminoethyl a ethylen(methyl)aminopropylethyl; výhodné jsou trimethylen, tetramethylen, pentamethylen, ethylenoxyethyl, ethylen-

thioethyl, ethylenaminoethyl, ethylen(methyl)aminoethyl nebo ethylenaminopropyl; výhodnější je tetramethylen.

Výhodné příklady R¹ jsou vodík a Ci - 4 alkyl; výhodnější jsou vodík, methyl a ethyl; nejvýhodnější jsou vodík a methyl.

Výhodné příklady R² jsou vodík a C1-4 alkyl; výhodnější jsou vodík, methyl a ethyl; nejvýhodnější jsou vodík a methyl.

Výhodné příklady R³ jsou vodík, C1-4 alkyl, C1-4 alkyl substiovaný 1 až 3 substituenty (ze skupiny substituentů hydroxyl, halogeny, karbamoyl, karbamoyl substituovaný 1 nebo alkoxy, amino, a

C1- 4 alkyly, C1 - 4 2 C1-4 alkyly) C3-e cykloalkyl -C(=NH)R⁴ (kde R⁴ je H, C1-4 jsou vodík, methyl,

2,2,2-trifluorethyl, amino substituovaná 1 nebo skupina obecného vzorce alkyl nebo amino); výhodnější 2-hydroxyethy1, 2-fluorethy1, ethyl, karbamoylmethy1, 2-karbamoylethy1, N-methylkarbamoylmethyl, Ν,Ν-dimethylkarbamoylmethyl, 2-methoxyethy1, 2-karbamoyloxyethy1, 2-aminoethy1, 2-(methylamino)ethyl, 2-(dimethylamino)ethyl, cyklopropyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidino; ještě výhodnější jsou vodík, methyl, 2-hydroxyethy1, karhamoylmethyl, 2-aminoethyl, 2-(methylamino)ethyl, cyklopropyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidino; nejvýhodnější jsou vodík, methyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidino.

Výhodné příklady pro R² a R³, vytváří-li spolu skupinu, jsou C2-e alkylenové skupiny případně přerušené jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry substituován C1-4 alkylem); tetramethylen, pentamethylen, ethylen, ethylenaminoethylen, (dusíkový atom výhodnější jsou ethylenoxyethylen, ethylenthioethylen(methylamino)ethylen, je případně trimethylen, nebo ethylenaminopropylen; nejvýhodnější je tetramethylen.

Sloučeninu obecného vzorce I lze převést, pokud je to žádoucí, na farmaceuticky přijatelnou sůl nebo derivát.

Příkladem farmaceuticky přijatelných solí jsou soli anorganických kyselin jako hydrochlorid, hydrobromid, • · c i trát, askorbát, tri ethylamonná;

hydrojodid, fosforečnan, síran a dusičnan; sulfonát, jako methansulfonát, ethansulfonát, benzensulfonát a p-toluensulfonát; soli organických kyselin jako oxalát, tartarát, maleinát, sukcinát, acetát, benzoát, mandelát, laktát, glukonát a malát; soli aminokyselin jako soli glycinu, lysinu, argininu, ornitinu, glutamátu a aspartátu; anorganické soli jako je litná, sodná, draselná, vápenatá a hořečnatá; a soli organických baží, jako je amonná, triethylamonná, di isopropylamonná a cyklohexylamonná; výhodné soli jsou hydrochlorid, hydrobromid, fosforečnan, síran, methansulfonát, p-toluensulfonát, oxalát, tartarát, citrát, acetát, laktát, glutamát, aspartát, sodná, draselná, amonná, výhodnější jsou hydrochlorid, síran, methansulfonát, citrát, acetát nebo laktát; nejvýhodnější jsou hydrochlorid a síran.

Předkládaná sloučenina I je hygroskopická a na vzduchu, při lyofilizaci z vodného roztoku nebo rekrystalizací vytváří hydrát. Hydráty rovněž spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Příkladem farmaceuticky přijatelných derivátů jsou deriváty obecného vzorce I, v nichž jsou některé karboxylové, hydroxylové, amino skupiny apod., chráněny chránící skupinou (tzv. prekursorovou skupinou), chemicky odštěpitelnou in vivo, např. hydrolýzou, sloučeniny I nebo její soli. Vyhovuje-li konkrétní derivát uvedenému požadavku lze stanovit perorálním či intravenózním podáním pokusnému zvířeti, např. kryse nebo myši a analýzou je původní sloučenina derivát přítomen v derivát považovat za nebo biologicky, za vzniku původní tělesných tekutin. Pokud farmaceuticky přijatelný tekutinách, lze testovaný léčiva, sloučeniny I. Příkladem prekursorových nebo její tělesných prekursor chránících skupin pro karhoxyl, hydroxyl, amino a pod. jsou acyloxyalkyl, alkoxykarbonyloxyalky1, ftalidyl,

-yl)alkyl případně nesoucí v poloze a aminoacy1.

(2-oxo-1,3-dioxolen-45- acyl, alkoxykarbonyl • ·

Příkladem acyloxyalkylové skupiny jsou pivaloyloxymethyl, isobutyryloxymethy1, 1-(isobutyryloxy)ethy1, acetoxymethyl, l-(acetoxy)ethyl, 1-methylcyklohexylkarbonyloxymethy1, 1-methylcyklopentylkarbonyloxymethyl, 2-ethylbutyryloxymethy1 a hexanoyloxymethyl; výhodné jsou pivaloyloxymethyl, acetoxymethyl a 1-methylcyklohexylkarbonyloxymethyl.

Příkladem alkoxykarbonyloxyalkylové skupiny t-butoxykarbonyloxymethy1,

1-(ethoxykarbonyloxy)ethyl,

1-(t-butoxykarbonyloxy)ethyl,

1-(cyklopentylkarbony1oxy)ethy1; 1-(isopropoxykarbonyloxy)ethyl nyloxy)ethyl.

1-(methoxykarbonyloxy)ethyl, 1-(i sopropoxykarbonyloxy)ethy1, l-(cyklohexylkarbonyloxy)ethyl, výhodné jsou nebo 1-(cyklopentylkarboPříkladem (2-oxo-l,3-dioxolen-4-yl)alkylové skupiny případně nesoucí v poloze 5- alkyl nebo aryl jsou 2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethy1, 1-(2-oxo-l,3-dioxolen-4-y1)ethyl, 5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl, l-(5-methyl-2-oxo-1,3-dioxolen-4-yl)ethyl, 5-ethyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl, 5-propy1-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl a 5-fenyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl; výhodná je 5-methyl-2-oxo-l,3-dioxolen-4-ylmethyl.

Z výše uvedených příkladů chránících skupin jsou výhodnější 5-methy1-2-oxo-l,3-dioxolen~4-ylmethyl, acetoxymethyl, pivaloyloxymethyl, 1-methylcyklohexylkarbony1oxymethyl, l-(isopropoxykarbonyloxy)ethyl nebo l-(cyklohexylkarbonyloxy)ethy1 a přednostně jsou používány pro chránění karboxylových skupin sloučeniny I jako esterů.

Předkládané sloučeniny I zahrnují izomery a izomerní směsi. Výhodnými izomery jsou sloučeniny I v konfiguraci R v poloze 1- karbapenemového skeletu, v konfiguraci (5S,6S) poloh 5- a 6- podobně jako thienamycin a v konfiguraci R uhlíku nesoucího hydroxyl na suhstituentu v poloze 6-.

• · · (2S,4S) konfigurace je vhodná pro polohy 2- a 4u 2-(subst.pyrrolidin)-4-ylthio skupiny na substituentu v poloze 2- karbapenemového skeletu.

Poloha 3- na 3-(subst.pyrrolidin)-4-ylthio skupině není z hlediska konfigurace nijak omezena.

·· ·· • · · · • · · · • · · · ·

Výhodné příklady předkládaných sloučenin jsou sloučeniny obecného vzorce I , kde :

R¹	je H	nebo	C1-4 alkyl;
R²	je H	nebo	C1- 4 alkyl; a
R³	je	H,	C1-4 alkyl, C1-4 alkyl	nesoucí	1 až 3
substituenty	(ze	skupiny substituentů	hydroxyl,	halogen,

karbamoyl, karbamoyl substituovaný 1 nebo 2 Cí- 4 alkyly, karbamoyloxy, karbamoyloxy substituovaný 1 nebo 2 Cí - 4 alkyly, C1-4 alkoxy, amino nebo amino substituovaná 1 nebo 2 C1-4 alkyly), C3-e cykloalkyl nebo skupina obecného vzorce -C(=NH)R⁴ (kde R⁴ je H, C1-4 alkyl nebo amino), nebo

R² a R³ spolu vytváří C2 - 6 alkylenovou skupinu případně přerušenou jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry (dusíkový atom je případně substituován C1-4 alkylem)

Výhodnější příklady předkládaných sloučenin jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde :

R¹ je H, methyl nebo ethyl;

R² je H, methyl nebo ethyl; a

R³ je H, methyl, ethyl, 2-hydroxyethy1, 2-fluorethy1, 2,2,2-trifluorethyl, karbamoylmethyl, 2-karbamoylethy1,

N-methy1karbamoy1methyl, N,N-dimethylkarbamoylmethyl,

2-methoxyethy1, 2-karbamoyloxyethyl, 2-aminoethyl,

2-(methylamino)ethyl, 2-(dimethylamino)ethyl, cyklopropyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidino; nebo

R² a R³ spolu vytváří trimethylen, tetramethylen, pentamethylen, ethylenoxyethylen, ethylenthioethylen, ·· *· to·· ···· · ··

- 10 ethylenaminoethylen, ethylen(methylamino)ethylen, nebo ethylenaminopropylen.

Ještě výhodnější příklady předkládaných sloučenin jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde:

R¹ je H nebo methyl;

R² je H nebo methyl; a

R³ je H, methyl, ethyl, 2-hydroxyethyl, karbamoylmethyl, 2-aminoethy1, 2-(methylamino)ethyl, cyklopropyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidino; nebo

R² a R³ spolu vytváří tetramethylen.

Nejvýhodněj ší příklady předkládaných sloučenin jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde :

R¹ je H nebo methyl;

R² je H nebo methyl; a

R³ je H, methyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidino.

Z výše uvedených výhodných, výhodnějších, ještě výhodnějších a nejvýhodnějších předkládaných sloučenin I jsou výhodnější stereo!zomery obecného vzorce I:

R2

R3

COOH nebo obecného vzorce:

9· ·· • 9 9 9 · · 9 • · 999 »9 99

9 a

99

199 · a

9 a >9 99

N

R2

R3

Příklady výhodných sloučenin obecného vzorce I jsou uvedeny v tabulce 1.

N

R2

R3

Tabulka 1

SI ouč e n ina^¹	R²	R³
	č.
1	H	H	Me
2	H	H	Et
3	H	H	CH₂CH₂OH
4	H	H	ch₂ch₂f
5	H	H	ch₂cf₃
6	H	H	ch₂conh₂
7	H	H	ch₂ch₂conh₂
8	H	H	CH₂CONHMe
9	H	H	CH₂CONMe₂
10	H	H	CH₂CH₂OMe

11	Η	Η	CH₂CH₂OCONH₂
12	Η	Η	ch₂ch₂nh₂
L3	Η	Η	CH₂CH₂NHMe
14	Η	Η	CH₂CH₂NMe₂
15	Η	Η	cPr
16	Η	Η	C(=NH)H
17	Η	Η	C(=NH)Me
18	Η	Η	C(=NH)NH₂
19	Η	Me	Me
20	Η	Me	Et
21	Η	Me	CH₂CH₂OH
22	Η	Me	ch₂ch₂f
23	Η	Me	ch₂cf₃
24	Η	Me	ch₂conh₂
25	Η	Me	ch₂ch₂conh₂
26	Η	Me	CH₂CONHMe
27	Η	Me	CH₂CONMe₂
28	Η	Me	CH₂CH₂OMe
29	Η	Me	CH₂CH₂OCONH₂
30	Η	Me	ch₂ch₂nh₂
31	Η	Me	CH₂CH₂NHMe
32	Η	Me	CH₂CH₂NMe₂
33	Η	Me	cPr
34	Η	Me	C(=NH)H
35	Η	Me	C(=NH)Me

36	Η	Me	C(=NH)NH₂
37	Η	Et	Et
38	Η	Et	CH2CH2OH
39	Η	Et	CH2CH2F
40	Η	Et	CH2CF3
41	Η	Et	CH2CONH2
42	Η	Et	CH₂CH₂CONH₂
43	Η	Et	CH₂CONHMe
44	Η	Et	CH₂CONMe₂
45	Η	Et	CH₂CH₂OMe
46	Η	Et	CH₂CH₂OCONH₂
47	Η	Et	ch₂ch₂nh₂
48	Η	Et	CH₂CH₂NHMe
49	Η	Et	CH₂CH₂NMe₂
50	Η	Et	cPr
51	Η	Et	C(=NH)H
52	Η	Et	C(^r:NH)Me
53	Η	Et	C(-NH)NH₂
54	Η	-CH2CH2CH2CH2-
55	Η	-CH2CH2CH2CH2CH2-
56	Η	-CH2CH2OCH2CH2-
57	Η	-CH2CH2SCH2CH2-
58	Η	-CH2CH2NHCH2CH2-
59	Η	-CH2CH2NHCH2CH2CH2
60	Η	-CH₂CH₂NMeCH₂CH₂-

61	Me	H	H
62	Me	H	Me
63	Me	H	Et
64	Me	H	CH₂CH₂OH
65	Me	H	ch₂ch₂f
66	Me	H	ch₂cf₃
67	Me	H	ch₂conh₂
68	Me	H	ch₂ch₂conh₂
69	Me	H	CH₂CONHMe
70	Me	H	CH₂CONMe₂
71	Me	H	CH₂CH₂OMe
72	Me	H	CH₂CH₂OCONH₂
73	Me	H	ch₂ch₂nh₂
74	Me	H	CH₂CH₂NHMe
75	Me	H	CH₂CH₂NMe₂
76	Me	H	cPr
77	Me	H	C(=NH)H
78	Me	H	C(=NH)Me
79	Me	H	C(=NH)NH₂
80	Me	Me	Me
81	Me	Me	Et
82	Me	Me	CH₂CH₂OH
83	Me	Me	ch₂ch₂f
84	Me	Me	ch₂cf₃
85	Me	Me	ch₂conh₂

• · • ·

86	Me	Me	CH₂CH₂CONH₂
87	Me	Me	CH₂CONHMe
88	Me	Me	CH₂CONMe₂
88	Me	Me	CH₂CH₂OMe
89	Me	Me	CH₂CH₂OCONH₂
90	Me	Me	ch₂ch₂nh₂
91	Me	Me	CH₂CH₂NHMe
92	Me	Me	CH₂CH₂NMe₂
93	Me	Me	cPr
94	Me	Me	C(=NH)H
95	Me	Me	C(=NH)Me
96	Me	Me	C(=NH)NH₂
97	Me	Et	Et
98	Me	Et	CH₂CH₂OH
99	Me	Et	ch₂ch₂f
100	Me	Et	ch₂cf₃
101	Me	Et	CH₂CONH₂
102	Me	Et	CH₂CH₂CONH₂
103	Me	Et	CH₂CONHMe
104	Me	Et	CH₂CONMe₂
105	Me	Et	CH₂CH₂OMe
106	Me	Et	CH₂CH₂OCONH₂
107	Me	Et	ch₂ch₂nh₂
108	Me	Et	CH₂CH₂NHMe
109	Me	Et	CH₂CH₂NMe₂

• · · · • · · • · · ·

110	Me	Et	cPr
111	Me	Et	C(=NH)H
112	Me	Et	C(=NH)Me
113	Me	Et	C(=NH)NH₂
114	Me	-CH₂CH₂CH₂CH₂-
115	Me	-ch₂ch₂ch₂ch₂ch₂-
116	Me	-ch₂ch₂och₂ch₂-
117	Me	-ch₂ch₂sch₂ch₂-
118	Me	-ch₂ch₂nhch₂ch₂-
119	Me	-ch₂ch₂nhch₂ch₂ch₂
120	Me	-CH₂CH₂NMeCH₂CH₂-
121	Et	H	H
122	Et	H	Me
123	Et	H	Et
124	Et	H	CH₂CH₂OH
125	Et	H	ch₂ch₂f
126	Et	H	ch₂cf₃
127	Et	H	ch₂conh₂
128	Et	H	ch₂ch₂conh₂
129	Et	H	CH₂CONHMe
130	Et	H	CH₂CONMe₂
131	Et	H	CH₂CH₂OMe
132	Et	H	CH₂CH₂OCONH₂
133	Et	H	ch₂ch₂nh₂
134	Et	H	CH₂CH₂NHMe

135	Et	H	CH₂CH₂NMe₂
136	Et	H	cPr
137	Et	H	C(=NH)H
138	Et	H	C(=NH)Me
139	Et	H	C(=NH)NH₂
140	Et	Me	Me
141	Et	Me	Et
142	Et	Me	CH₂CH₂OH
143	Et	Me	ch₂ch₂f
144	Et	Me	ch₂cf₃
145	Et	Me	ch₂conh₂
146	Et	Me	ch₂ch₂conh₂
147	Et	Me	CH₂CONHMe
148	Et	Me	CH₂CONMe₂
149	Et	Me	CH₂CH₂OMe
150	Et	Me	CH₂CH₂OCONH₂
151	Et	Me	ch₂ch₂nh₂
152	Et	Me	CH₂CH₂NHMe
153	Et	Me	CH₂CH₂NMe₂
154	Et	Me	cPr
155	Et	Me	C(=NH)H
156	Et	Me	C(=NH)Me
157	Et	Me	C(=NH)NH₂
158	Et	Et	Et
159	Et	Et	CH₂CH₂OH

• ·

160	Et	Et	CH₂CH₂F
161	Et	Et	ch₂cf₃
162	Et	Et	ch₂conh₂
163	Et	Et	ch₂ch₂conh₂
164	Et	Et	CH₂CONHMe
165	Et	Et	CH₂CONMe₂
166	Et	Et	CH₂CH₂OMe
167	Et	Et	CH₂CH₂OCONH₂
168	Et	Et	ch₂ch₂nh
169	Et	Et	CH₂CH₂NHMe
170	Et	Et	CH₂CH₂NMe₂
171	Et	Et	cPr
172	Et	Et	C(=NH)H
173	Et	Et	C(=NH)Me
174	Et	Et	C(=NH)NH₂
175	Et	-CH₂CH₂CH₂CH₂-
176	Et	-ch₂ch₂ch₂ch₂ch₂-
177	Et	-ch₂ch₂och₂ch₂-
178	Et	-ch₂ch₂sch₂ch₂-
179	Et	-ch₂ch₂nhch₂ch₂-
180	Et	-ch₂ch₂nhch₂ch₂ch₂
181	Et	-CH₂CH₂NMeCH₂CH₂-

• ·

- 19 V tabulce 1 zkratky Me, Et a cPr znamenají methyl, ethyl a cyklopropyl.

Z příkladů sloučenin uvedených v tabulce 1 jsou výhodnější sloučeniny č. 1, 3, 6, 12, 13, 16, 17, 18, 34, 35,

36, 61, 62, 77, 78, 79, 94, 95 a 96;

z nich jsou nejvýhodnější následující stereoizomery:

stereoizomery sloučeniny č. 1:

(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2-[(3R)~

3-methylaminomethy1pyrrolid in-1-y1karbony1]pyrrolid in-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 3) (IR,5S,6S)-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2-[(3S)3-methylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 5) stereoizomery sloučeniny č. 3:

(IR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(2-hydro xyethylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-lmethy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-Hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(2-hydro xyethylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-lmethyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 13) stereoizomery sloučeniny č. 6:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(karbamoylmethylaminomethyl)pyrroli din-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methy1-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 13) ·· ·· • · · · • · · · • «

(IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(karbamoylmethylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrro1idin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 12:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(2-aminoethy1aminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3~(2-aminoethy1aminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxy ethyl ]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 13:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(2-(N-methylamino)ethylaminomethyl) pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6~[(IR)-1-hydroxy ethyl ]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(2-(N-methylamino)ethylaminomethyl) pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6- [(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 16:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-formimidoylaminomethy1pyrro1 i d i n-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 23) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-formimi doylaminomethy1pyrro1idin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)— -1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina • · • · · stereoizomery sloučeniny č. 17:

(IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-acetimidoylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrro1idin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 8) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[ (3S)-3-acetimidoylaminomethylpyrroli d in-l-ylkarbony1]pyrro1idin-4-y1thio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 18:

(IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-guanidinomethylpyrrolidin-1-y1 karbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl -l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 7) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-guanidinomethylpyrrolidin-l-yl karbonyl]pyrro1idin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methyl -l-karbapen-2-em-3-karhoxylová kyselina (sloučenina příkladu 11 ) stereoizomery sloučeniny č. 34:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-formimidoyl-N-methylamínomethy l)pyrrolid in-l-y1karbony1]pyrro1idin-4-ylthio]-6-[( IR) -1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 21) (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-(N-formimidoy1-N~methy1aminomethy 1 )pyrro1id i n-l-y1karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kysel i na stereoizomery sloučeniny č. 35:

• ·

- 22 (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-(N-acetimidoyl-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 20) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-(N-acetimidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidi n-l-y1karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 36:

(lR_z5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-(1-methylguanidinomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 19) (lR_z5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-(1-methylguanidinomethy1)pyrrolid in-1-ylkarbonyl]pyrrolid in-4-ylthio]-6-((IR) -1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 61:

(lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(3R)-3-aminomethylpyrrolidin-l-ylkarbony1]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl] l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 1) (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)-3-aminomethylpyrrolídin-l-y1karbony1]-1-methy1pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 2) stereoizomery sloučeniny č. 62:

(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-((2S,4S)-2-((3R)

- 23 3- methylaminomethylpyrrolidin-l-y1karbony1]-1-methylpyrrolidin

4- ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 4) (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-2-[(28,48)-2-((35)

3- methylaminomethylpyrroli din-l-ylkarbony1]-1-methylpyrrolidin

4- ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 6) stereoizomery sloučeniny č. 77:

(lR_/5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-formimidoylaminomethylpyrrol id in-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolid in-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karhapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 26) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-formimidoylaminomethylpyrrol idin-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 78:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-acetimidoylaminomethylpyrrol id in-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 25) (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-acetimidoylam inomethy1pyrroli d in-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-{(IR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kysel i na stereoizomery sloučeniny č. 79:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3~guani dinomethylpyrrolidin-1-ylkarhonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxy-

·· ··

- 24 ethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 24) (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)-3-guanidinomethylpyrrolidin-1-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 94:

(IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-formimidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6 -[(lR)-l-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 29) (lR,5S,6S)-2-{(2S,4S)-2-((3S)-3-(N-formimidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methy1pyrrolidin-4-ylthio]-6 -[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 95:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-(N-acet imidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methy1pyrrolidin-4-ylthio]-6 -[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 28) (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)~3-(N-acetimidoy1-N-methy1aminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-l~methylpyrrolidin-4-ylthio]-6

- ( (IR)-1-hydroxyethy1]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina stereoizomery sloučeniny č. 96:

(lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(1-methylguanid inomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methy1pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methyl-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (sloučenina příkladu 27) • · • · (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-(1-methylguanidinomethy1)pyrro1 idin-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrro1idin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina

- 25 1-Methylkarbapenemové deriváty předkládaného vynálezu obecného vzorce I lze připravit reakcí karbapenemové sloučeniny obecného vzorce II:

(kde R^L je karboxylu) s III:

odštěpovaná skupina a R⁵ chránící skupina derivátem merkaptopyrrolidinu obecného vzorce

R2p

R3p (kde R¹p je chránící skupina aminoskupiny, nebo odpovídá výše uvedené definici pro R¹; R²P je chránící skupina aminoskupiny, nebo odpovídá výše uvedené definici pro R², za předpokladu, že amino, hydroxyl nebo imino obsažené v R² mohou být chráněny; R³P je chránící skupina aminoskupiny, nebo odpovídá výše uvedené definici pro R³, za předpokladu, že amino, hydroxyl • ·

- 26 nebo imino obsažené v R³ mohou být chráněny); a případně následným odštěpením chránících skupin. Produkt lze dále převést na farmaceuticky přijatelnou sůl nebo derivát.

Předkládanou sloučeninu obecného vzorce I lze připravit níže uvedeným postupem A nebo postupem B.

• ·

(l)

Postup Β

(VII)

Krok B2

CH₃

N

COOH (I)

- 28 *· •

·· • · · · • 9 ·· ···* ·

Kde

R¹ , R² , R³ , R¹p, R²P a R³p mají výše definovaný význam a R⁵ je chránící skupina karboxylu.

Chránící skupiny pro amino, hydroxyl nebo imino skupiny obsažené v R²P nebo R³p jsou chránící skupiny běžně používané v organické syntéze (Green & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vyd. 1991, John Wiley & Sons, lne.) Výhodné chránící skupiny jsou benzyl, případně substituovaný benzyl jako 4-nitrobenzyl; benzyloxykarhonyl, případně substituovaný benzyloxykarhonyl, jako 4-nitrobenzyloxykarbonyl; allyloxykarbonyl, případně allyloxykarbonyl substituovaný v poloze 2-, jako 2-chlorallyloxykarbonyl nebo 2-methylallyloxykarbonyl; z nichž výhodnější jsou skupiny 4-nitrobenzyl a 4-nitrobenzyloxykarbonyl.

Chránící skupiny pro karboxylově skupiny obsažené v R⁵jsou chránící skupiny běžně používané v organické syntéze (Green & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vyd. 1991, John Wiley & Sons, lne). Příkladem těchto skupin jsou Cí-4 alkyly jako methyl, ethyl nebo t-butyl; benzyl, substituovaný benzyl jako 4-methoxybenzy1, 4-nitrobenzyl nebo 2-nitrobenzyl ; benzhydryl; allyl, případně allyl substituovaný v poloze 2-, jako 2-chlorallyl nebo 2-methylallyl; halogenethy1, jako 2,2,2-trichlorethyl, 2,2-dibromethy1 nebo 2,2,2-tribromethyl; nebo 2-trimethylsilylethyl; z nichž výhodnější jsou 4-nitrobenzyl nebo benzyl.

R⁶ je Cí- 4 alkansulfonyl jako methansulfonyl, trifluormethansulfonyl, ethansulfonyl, propansulfony1, isopropansulfony1 nebo butansulfonyl; C6- 1 o arylsulfonyl jako fenylsulfonyl, tolylsulfonyl nebo naftylsulfonyl; di(Ci-6 alky 1)fosfory1 jako dimethylfosforyl, diethylfosforyl, dipropylfosforyl, diisopropylfosforyl, dibutylfosforyl, dipentylfosforyl nebo dihexylfosforyl; nebo di(Ce-io aryl)fosfory1 jako difenylfosforyl nebo ditolylfosforyl; z nichž výhodná skupina je difenylfosforyl.

• · • · · · · • ·

R⁷ je Cí- 4 alkyl jako methyl, ethyl, propyl nebo isopropyl; halogen-(Cí- 4 alkyl) jako fluormethyl, chlormethyl, fluorethy1 chlorethy1, • · • ·

fluorpropyl, difluormethyl, difluorethyl, dichlorethy1, trifluormethyl nebo trifluorethyl; 2-acetylaminoethy1; 2-acetylaminovinyl; C6- 1 o aryl jako fenyl nebo naftyl, které jsou případně substituovány (nesou 1 až 3 substituenty, stejné nebo různé a každý substituent je popsán dále. Příklady substituentů jsou halogeny jako fluór, chlór a bróm; C1-4 alkyl jako methyl, ethyl, propyl nebo isopropyl; Cí-4 alkoxy jako methoxy, ethoxy, propoxy nebo isopropoxy; (Cí-4 alkoxy)karbonyl jako methoxykarbony1, ethoxykarbony1 a t-butoxykarbony1; karbamoyl, mono nebo di(Ci-4 alkyl)karbamoyl; nitro; hydroxyl a kyano); nebo heteroaryl s jedním nebo dvěma atomy dusíku, jako pyridyl, pyrimidinyl, které jsou případně substituovány (nesou 1 až 3 substituenty, stejné nebo různé a každý obsahuje halogen a C1-4 alkylovou skupinu jak byla definována výše mezi substituenty arylových skupin).

Příkladem odštěpované skupiny R^L jsou skupiny obecných vzorců -OR⁶ nebo -S(O)R⁷V postupu A se sloučenina I připravuje reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sulfonylačním nebo fosforylačním činidlem v přítomnosti báze za vzniku sloučeniny obecného vzorce V (krok Al); reakcí sloučeniny obecného vzorce V se sloučeninou obecného vzorce III v přítomnosti báze za vzniku sloučeniny obecného vzorce VI (krok A2); a konečně odštěpením chránících skupin ze sloučeniny obecného vzorce VI (krok A3). Všechny kroky jsou podrobněji popsány dále.

Krok Al

V kroku Al se připravuje sloučenina obecného vzorce V reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sulfonylačním nebo fosforylačním činidlem v inertním rozpouštědle a v přítomnosti báze.

- 30 Příkladem sulfonylačního činidla jsou anhydridy C1-4 alkansulfonových kyselin jako anhydrid kyseliny methansulfonové, trifluormethansulfonové a ethansulfonové; anhydridy Ce- 1 o arylsulfonových kyselin jako anhydrid kyseliny benzensulfonové nebo p-toluensulfonové; z nichž výhodný je anhydrid kyseliny p-toluensulfonové.

Příkladem fosforylačního činidla jsou di(Ci-4 alkyl)fosforylhalogenidy jako dimethylfosforyl chlorid a diethylfosforyl chlorid; di(C6-io aryl)fosforylhalogenidy jako difenylfosforyl chlorid a difenylfosforyl bromid; z nichž výhodný je difenylfosforyl chlorid.

Volha rozpouštědla není omezena za předpokladu, že rozpouštědlo neovlivňuje negativně průběh reakce. Příkladem vhodných rozpouštědel jsou halogenované uhlovodíky jako methylenchlorid, 1,2-dichlorethan a chloroform; nitrily jako acetonitril; amidy jako Ν,Ν-dimethylformamid a N,N-dimethylacetamid; estery jako ethylacetát a methylacetát; a ethery jako diethylether, tetrahydrofuran a dioxan; z nichž výhodná rozpouštědla jsou acetonitril, Ν,Ν-dimethylformamid nebo tetrahydrofuran, nejvýhodnější je acetonitril.

Volba báze není omezena za předpokladu, že nepůsobí negativně na nějakou jinou část molekuly, zvláště na β-laktamový kruh. Výhodnými příklady baží jsou organické báze jako triethylamin, di isopropylethylamin, pyridin a 4-dimethylaminopyridin; z nichž výhodnější je diisopropylethylamin.

Volba reakční teploty není omezena, i když výhodnější jsou nižší teploty, protože potlačují průběh vedlejších reakcí. Reakce se obvykle provádějí při -20 až 40 °C, výhodně -10 až 20 °C.

Reakční doba závisí hlavně na reakční teplotě a povaze • ·

- 31 reakčních složek; obvykle se pohybuje v rozmezí 5 h, výhodně 15 min až 1 h.

min až

Po zkončení reakce se vzniklá sloučenina V izoluje z reakční směsi obvyklými postupy. Například se reakční směs nebo zbytek po oddestilování rozpouštědla zředí organickým rozpouštědlem nemísitelným s vodou, roztok se promyje vodou a rozpouštědlo odpaří. Pokud je to nezbytné, lze surový produkt dále purifikovat, např. rekrystalizací, přesrážením nebo chromatografi i. Též lze provést další reakční stupeň (krok A2) bez purifikace.

Krok A2

V kroku A2 se připravuje sloučenina obecného vzorce VI reakcí sloučeniny obecného vzorce V s derivátem merkaptopyrrolidinu obecného vzorce III v inertním rozpouštědle a v přítomnosti báze.

Volba rozpouštědla není omezena za předpokladu, že rozpouštědlo neovlivňuje negativně průběh reakce. Příkladem vhodných rozpouštědel jsou halogenované uhlovodíky jako methylenchlorid, 1,2-dichlorethan a chloroform; nitrily jako acetonitril; amidy a Ν,N-dimethylacetamid; a methylacetát; a ethery

Ν,N-dimethylformamid jako ethylacetát jako estery jako diethylether, tetrahydrofuran a dioxan; z nichž výhodná rozpouštědla jsou acetonitril, Ν,N-dimethylformamid nebo tetrahydrofuran, nejvýhodnější je acetonitri 1.

Volba aminy jako báze není omezena, výhodné jsou však organické triethylamin a di isopropylethylamin a anorganické draselný a sodný; výhodnější je báze jako uhličitan di isopropylethylamin.

Volba reakční teploty není omezena. Reakce se obvykle provádějí při -20 až 40 °C, výhodně -10 až 20 °C.

• · · · • · · · • · ·· ·· · · · • · · • · · · • · · · • · · · • · · · · · • · · ·· ··

- 32 Reakční doba se obvykle pohybuje v rozmezí 30 min až 108 h, výhodně 1 až 15 h.

Po zkončení reakce se vzniklá sloučenina VI izoluje z reakční směsi obvyklými postupy. Například se reakční směs nebo zbytek po oddestilování rozpouštědla zředí organickým rozpouštědlem nemísitelným s vodou, roztok se promyje vodou a rozpouštědlo odpaří. Pokud je to nezbytné, lze surový produkt dále purifikovat, např. rekrystalizaci, přesrážením nebo chromatografií. Též lze provést další reakční stupeň (krok A3) bez purifikace.

Krok A3

V kroku A3 se sloučenina VI převádí na sloučeninu I odštěpením všech chránících skupin.

Způsob odštěpení chránící skupiny závisí na její povaze, obvykle se používají standartní postupy organické chemie (Green & Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vyd. 1991, John Wiley & Sons, lne).

(1) Pokud je například R⁵ benzyl nebo substituovaný benzyl jako 4-nitrobenzy1 nebo benzhydryl a chránící skupina hydroxylu, amino nebo iminoskupiny obsažených v R¹p, R² p nebo R³p je benzyl nebo substituovaný benzyl jako 4-nitrobenzyl, benzyloxykarbony1 nebo substituovaný benzyloxykarbony1 jako 4-nitrobenzyloxykarbonyl, lze chránící skupinu odštěpit redukčním činidlem jako je kombinace vodíku s hydrogenačním katalyzátorem nebo sirník alkalického kovu.

Příkladem redukčních činidel je kombinace vodíku a hydrogenačního katalyzátoru jako Pd/C a sirníky alkalických kovů jako sirník sodný a draselný, výhodná je kombinace vodíku a hydrogenačního katalyzátoru.

« ·

Volba rozpouštědla není omezena za předpokladu, že rozpouštědlo neovlivňuje negativně průběh reakce. Vhodnými rozpouštědly jsou však například alkoholy jako methanol a ethanol, ethery jako tetrahydrofuran a dioxan, výhodné jsou směsi uvedených rozpouštědel s vodou.

Reakční teplota se obvykle pohybuje v rozmezí 0 až 50 °C (výhodně 10 až 40 °C).

Reakční doba závisí na povaze výchozí sloučeniny a redukčního činidla, obvykle se pohybuje v rozmezí 5 min až 12 h, výhodně 30 min až 4 h.

- 33 Po zkončení reakce se produkt izoluje z reakční směsi obvyklými postupy. Například lze výslednou sloučeninu získat po odfiltrování nerozpustných podílů reakční směsi a odpaření rozpouštědla.

(2) Pokud substituovaný v 2-methylallyl a iminoskupiny allyloxykarbonyl, v poloze 2-, je například poloze 2-, a chránící obsažených případně jako

R⁵ allyl, případně allyl jako 2-chlorallyl nebo skupina hydroxylu, amino nebo v R¹p, R²p nebo R³ p je allyloxykarbonyl substituovaný 2-chlorallyloxykarbonyl nebo

2-methylallyloxykarbonyl, lze chránící skupinu odštěpit reakcí s deprotekčním činidlem, jako je např. palladiura-trialkylcín hydrid jako bis(tri fenylfosfin)palladium chlorid - tributylcín hydrid nebo tetrakis(trifenylfosfin)pa1lad ium - tributylcín hydrid nebo palladium - sůl organické kyseliny a alkalického kovu jako tetrakis(tri fenylfosfin)pallad i um - 2-ethylhexanoát draselný nebo sodný.

Výhodné příklady deprotekčních činidel jsou bis(trifenylfosfin)palladium chlorid - tributylcín hydrid a tetrakis(trifenylfosfin)palladium - 2-ethylhexanoát draselný.

Volba rozpouštědla není omezena za předpokladu, že rozpouštědlo neovlivňuje negativně průběh reakce. Vhodnými rozpouštědly jsou však například halogenované uhlovodíky jako methylechlorid, chloroform a 1,2-dichlorethan, estery jako « · · · • · · · • · · · • · · · · · • · · • · · · ·· ··

I · · ⁴ ► · ·· • · · · • · « • · · · ethylacetát, ethery jako a 1,2-dimethoxyethan, nitrily jako methanol, ethanol, propanol a tetrahydrofuran, dioxan acetonitril, alkoholy jako voda a směsi uvedených rozpouštědel. Výhodnější a jejich směsi.

jsou methylenchlorid, ethylacetát

Volba reakční teplota není omezena, reakce se obvykle provádí v rozmezí -20 až 100 °C (výhodně 0 až 60 °C).

Reakční doba se obvykle pohybuje v rozmezí 30 min až 48 h, výhodně 30 min až 12 h.

Po zkončení reakce se produkt izoluje z reakční směsi obvyklými postupy. Například lze výslednou sloučeninu I získat po odfiltrování nerozpustných podílů reakční směsi a odpaření rozpouštědla.

(3) Pokud je například R⁵ halogenethyl jako 2,2-dibromethyl nebo 2,2,2-trichlorethyl, lze chránící skupinu odštěpit reakcí s redukčním činidlem jako je kombinace kovu např. zinku s kyselinou, např. octovou nebo chlorovodíkovou. Výhodná je redukce zinkem v kyselině octové.

Volba rozpouštědla není omezena za předpokladu, že rozpouštědlo neovlivňuje negativně průběh reakce. Vhodnými rozpouštědly jsou však například alkoholy jako methanol a ethanol, ethery jako tetrahydrofuran a dioxan, alifatické kyseliny jako octová a směsi uvedených rozpouštědel s vodou.

Reakční teplota se obvykle pohybuje v rozmezí 0 až 40 °C (výhodně 10 až 30 °C).

Reakční doba závisí na povaze výchozí sloučeniny • ·

- 35 a redukčního činidla, obvykle se pohybuje v rozmezí 5 min až h, výhodně 30 min až 4 h.

Po zkončení reakce se produkt izoluje z reakční směsi obvyklými postupy. Například lze výslednou sloučeninu I získat po odfiltrování nerozpustných podílů reakční směsi a odpaření rozpouštědla. Cílovou sloučeninu I lze dále purifikovat běžnými postupy, např. rekrystalizaci, preparativní tenkovrstenvou chromatografií nebo sloupcovou chromatografií.

Alternativním postupem přípravy sloučeniny I je postup B. V postupu B se nechá reagovat sloučenina obecného vzorce VII se sloučeninou obecného vzorce III za vzniku sloučeniny obecného vzorce VI (krok Bl) a následně se odštěpí všechny chránící skupiny ze sloučeniny VI za vzniku sloučeniny I (krok B2). Příprava výchozí látky pro tuto syntézu je popsána v japonské patentové přihlášce Kokai č. SHO 62-30781. Oba kroky jsou podrobněji popsány dále.

Krok Bl

V kroku Bl se sloučenina obecného vzorce VII nechá reagovat se sloučeninou obecného vzorce III v inertním rozpouštědle a v přítomnosti báze.

Volba rozpouštědla není omezena za předpokladu, že rozpouštědlo neovlivňuje negativně průběh reakce. Vhodnými rozpouštědly jsou však například tetrahydrofuran, acetonitril, dimethylformamid, dimethylsulfoxid, voda a jejich směsi, výhodný je acetonitril.

Volba báze není omezena za předpokladu, že nepůsobí negativně na nějakou jinou část molekuly, zvláště na (3-laktamový kruh. Výhodnými příklady baží jsou organické báze jako diisopropylethylamin, triethylamin, N-methylpiperidin a 4-dimethylaminopyridin; anorganické báze jako uhličitan • ·

- 36 draselný a sodný; výhodnější je diisopropylethylamin.

Reakční doba závisí hlavně na reakční teplotě a povaze reakčního činidla; obvykle se pohybuje v rozmezí 15 min až 75 h, výhodně 30 min až 18 h.

Po zkončení reakce se vzniklá sloučenina VI izoluje z reakční směsi obvyklými postupy. Například se reakční směs nebo zbytek po oddestilování rozpouštědla zředí organickým rozpouštědlem nemísitelným s vodou, roztok se promyje vodou a rozpouštědlo odpaří. Pokud je to nezbytné, lze surový produkt dále purifikovat, např. rekrystalizaci, přesrážením nebo chromatografií. Též lze provést další reakční stupeň (krok B2) bez purifikace.

Krok B2

V kroku B2 se sloučenina VI převádí na sloučeninu I odštěpením všech chránících skupin.

Tento krok lze provést stejně jako je uvedeno u kroku A3 , postupu A.

1-Methylkarbapenemovou sloučeninu obecného vzorce I připravenou postupem A nebo B lze převést na příslušnou farmaceuticky přijatelnou sůl nebo derivát (výhodně ester) standartními postupy v oblasti chemie β-laktamových antibiotik.

Sloučeninu merkaptopyrrolidinu obecného vzorce IV, výchozí látku postupu A i B, lze připravit známým postupem, • · ·· · · <

• · ·· ··

- 37 např. postupem uvedeným v článku Kawamoto I., et al., Synlett, 575 (1995); v japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 2-28180; japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 2-3687; japonské patentové přihlášce č. Hei 4-211083; nebo japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 5-339269.

Předkládané sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli vykazují silné, dobře vyvážené antibakteriální účinky proti širokému spektru bakterií, včetně Gram pozitivních kmenů jako Staphylococcus Aureus a Bacillus subtí1ís, Gram negativních kmenů jako Escherichia coli, Shigela sp., Klebsiella penumoniae, Próteus sp., Serratia sp. , Enterobacter sp. a Pseudomonas aeruginosa a anaerobů jako Bacteroides fragilis. Rovněž vykazují vynikající proti Pseudomonas aeruginosa Předkládané sloučeniny obecného antibakteriální účinky rezistentním vůči meropenemu vzorce I jsou velmi a dehydropeptidáze v moč i. Dále mají odolné proti |3-laktamázám I, mají zlepšenou rychlost regenerace vynikající farmakokinetické vlastnosti in vivo, např. poločas v krvi a prakticky nejsou Z hlediska uvedených charakteristik je zřejmé, nefrotoxické. že předkládané sloučeniny obecného vzorce I jsou výbornými antibiotiky.

Při porovnání s aminomethylovými sloučeninami [sloučeniny obecného vzorce I předkládaného vynálezu, kde R¹, R² a R³ jsou vodík; sloučeniny A a B jsou popsány v japonské patentové přihláškce Kokai č. Hei 5-310740], mají předkládané sloučeniny se substituentem na aminoskupině lepší antibakteriální účinky proti Pseudomonas aeruginosa, lepší farmakokinetické vlastnosti a nižší nefrotoxicitu.

Je zřejmé, že předkládané sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelné soli a deriváty jsou výbornými antibakteriálními činidly pro léčbu nebo prevenci (výhodně léčbu) bakteriálních infekcí.

- 38 Farmaceutické přípravky obsahující předkládané sloučeniny

Při použití sloučenin obecného vzorce I a jejich farmaceuticky přijatelných solí a derivátů jako antibakteriálních léčiv, lze volit perorální podávání ve formě tablet, kapslí, granulí, prášku nebo syrupů. Lze podávat bud samotné sloučeniny nebo jejich směsi s nezbytnými farmaceuticky přijatelnými přísadami, excipienty nebo ředidly; Sloučeniny I lze podávat rovněž parenterálně jako injekce.

Farmaceutické s využitím přísad cukerné deriváty přípravky se připravují známými postupy Příkladem přísad jsou excipienty (např. jako laktoza, sacharóza, dextróza, mannit nebo sorbit; deriváty škrobu jako obilný škrob, bramborový škrob, α-škrob, dextrin nebo karboxymethy1 škrob; deriváty celulózy jako krystalická celulóza, nízkosubstituovaná hydroxypropylcelulóza, hydroxypropylmethyleelulóza, karboxymethylcelulóza, karboxymethylcelulóza vápenatá, nebo vnitřně zesítovaná karboxymethylcelulóza sodná; akáciová klovatina; dextran; pullulan; křemičitany jako oxid křemičitý, syntetický hlinitokřemičitan nebo hlinitokřemičitan hořečnatý;

fosforečnany jako fosforečnan vápenatý; uhličitany jako uhličitan vápenatý; nebo sírany jako síran vápenatý; pojivá (např. výše uvedené excipienty, želatina, plyvinylpyrrolidon; nebo Macrogol), disintegrátory (např. výše uvedené excipienty nebo chemicky modifikované deriváty škrobu nebo celulózy, jako síťovaná karmelóza sodná, karboxymethy1 škrob sodný nebo síťovaný polyvinylpyrrolidon,) lubrikanty (např. talek, kyselina stearová, kovové soli kyseliny stearové jako sterarát vápenatý nebo hořečnatý; koloidní silikagel; veegum; vosk jako spermaceti; kyselina boritá; glykol, karboxylové kyseliny jako fomarová nebo adipová; sodné karboxyláty jako benzoát sodný;

síran sodný; leucin; laurylsulfáty jako sodný nebo hořečnatý; křemičitany jako oxid křemičitá; nebo deriváty škrobu excipientů), stabilizátory (např.

sírany jako laurylsulfát křemičitý nebo kyselina uvedené jako příklady p-hydroxybenzoáty jako methyl p-hydroxybanzoát; alkoholy jako chlorbutanol benzylalkohol • ·

• · nebo fenylethylalkohol;

henzalkonium chlorid; deriváty fenolu jako fenol nebo kresol; thimerosal; acetanhydrid; nebo kyselina sorbová), upravující přísady (např. běžná sladidla, kyselé přísady nebo vůně), suspenzní činidla (např.

Polysorbát nebo karboxymathylcelulóza sodná), ředidla a rozpouštědla pro výrobu přípravku (např. voda, ethanol nebo glycerin).

Dávkové množství sloučeniny I závisí na celkovém zdravotním stavu a věku pacienta. Perorální dávky se pohybují v rozmezí 10 až 2000 mg na jednorázovou dávku, výhodně 50 až 1000 mg, intravenózní dávky se pohybují v rozmezí 10 až 3000 mg na jednorázovou dávku, výhodně 100 až 2000 mg. Pro dospělého pacienta lze doporučit jednorázovou dávku nebo dělenou dávku (šest) na den, podle celkového zravotního stavu.

Příklady provedení vynálezu

Dále je vynález podrobněji vysvětlen na příkladech, referenčních příkladech, příkladech testů a příprav přípravků. Uvedené příklady slouží jen jako ilustrace a uváděné konkrétní podrobnosti v žádném případě vynález nevymezují. Při měření ¹H NMR spekter byl použit trimethylsilylpropionát-d4 sodný jako vnitřní standart pro měření v těžké vodě a tetramethy1si lan pro měření v jiných rozpouštědlech, pokud není uvedeno jinak.

• ····

- 40 Příklad 1 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-Aminomethy1pyrro1idin-l-y1karbonyl]-l-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 61)

(1) K roztoku 4~nitrobenzyl(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-2-(d ifeny1fosforyloxy)-1-karbapen~2-em-3-karboxylátu (0,72 g) v bezvodém acetonitrilu (7 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,21 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-methy1-2-[ (3R)-3-(4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)-pyrrolidin-l-ylkarbonylJpyrrolidinu (0,54 g) v bezvodém acetonitrilu (10 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (7:3), s výtěžkem 0,74 g 4-nitrobenzyl(1R,5S,6S)-6-((IR)-1-hydroxyethy1)-1-methy1-2-((2S,4S)-1-methyl-2-[(3R)-3-(4-ni trobenzy1oxykarbonylaminomethy1)pyrro1idin-ylkarbony1]pyrro1 idin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1771, 1721, 1637, 1608, 1522, 1490, 1274, 1245, 1210, 1181,

1137, 1107, 1074, 1046, 1026, 1014.

• ·

- 41 NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,27 (3H;d;J=7,3 Hz), 1,36 (3H;d;J=6,6 Hz), 1,45-2,80 (5H;m), 2,31;2,31 (3H;sx2), 2,98-3,90 (13H;m), 4,18-4,30 (2H;m), 5,10-5,50 (4H;m), 7,48 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,63 (2H;d;J=8,6 Hz),

8,20 (4H;d;J=8,6 Hz) .

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (40 ml) katalyzátor 10% Pd/C (1,46 g).

připravené v kroku (1) (0,73 g) a vodě (28 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), (6:94-1:9), koncentrace byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi (Cosmosil 75C18-PREP eluční směsí acetonitri1/voda acetonitrilu byla postupně zvyšována z 6 % na 10 %)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován na surový produkt titulní sloučeniny (246 mg) ve formě prášku.

230 mg surového produktu bylo přečištěno na HPLC preparativní koloně [Cosmosil 5C18-AR (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitri1/voda (6:94-1:9), koncentrace acetonitrilu byla postupně zvyšována z 6 % na 10 %)], zahuštěno odpařením za sníženého tlaku a lyofi 1izováno se ziskem titulní sloučeniny (156 mg) ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1758, 1633, 1594, 1488, 1455, 1385, 1340, 1313, 1253, 1225,

1210, 1181, 1149, 1095.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,21 (3H;d;J-7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,63-1,86 (2H;m),

2,14-2,93 (4H;m), 2,32 (3H,s), 3,03-4,01 (13H;m), 4,17-4,30 (2H;m).

- 42 Příklad 2 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-Aminomethy1pyrrolid in-l-y1karbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethy1] 1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 61)

(1) K roztoku 4-nitrobenzyl(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy 1]-1-methyl-2-(difeny1fosforyloxy)-l-karhapen-2-em-3-karboxylátu (0,73 g) v bezvodém acetonitrilu (7 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,22 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-methyl-2-[(3R)-3-(4-ni trobenzyloxykarbonylaminomethyl)-pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidinu (0,57 g) v bezvodém acetonitrilu (10 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (7:3), s výtěžkem 0,78 g 4-nitrobenzyl(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethylj-l~methyl-2-[(2S,4S)-1-methyl-2-[(3S)-3-(4-ni trobenzyloxykarbonylam inomethy1)pyrro1 i d in-y1karbony1]pyrrolidi n-4-y1thio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm'¹ :

1771, 1721, 1638, 1608, 1522,

1274, 1246, 1210, 1181, 1137.

1490, 1453, 1375, 1347, 1324,

- 43 NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm: 1,25 (3H;d;J=7,3 Hz), 1,36 (3H;d;J=6,6 Hz),

2,31 (3H;s), 2,98-4,00 (13H;m), 4,18-4,31 (4H;m), 7,42-7,67 (4H;m), 8,13-8,25 (4H;m).

1,46-2,80 (5H;m), (2H;m), 5,11-5,50 (2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (40 ml) katalyzátor 10% Pd/C (1,55 g) .

připravené v kroku (1) (0,76 g) a vodě (28 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP' eluční směsí acetonitril/voda (6:94-1:9)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován na surový produkt titulní sloučeniny (248 mg) ve formě prášku.

189 mg surového produktu bylo přečištěno na HPLC preparativní koloně [Cosmosil 5C18-AR (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitril/voda (6:94-1:9)], zahuštěno odpařením za sníženého tlaku a lyofi 1 izováno se ziskem titulní sloučeniny (125 mg) ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1759, 1633, 1595, 1488, 1455, 1384, 1353, 1211, 1180, 1148,

1095 .

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,21 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,63-1,87 (lH;m),

2,13-2,40 (lH;m), 2,31;2,32 (3H,sx2), 2,53-2,93 (3H;m),

3,08-3,90 (HH;m), 4,18-4,29 (2H;m).

• *

Příklad 3 (lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-Hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-2-[(3R)3-methylaminomethylpyrrol idin-l-yl karbony 1 ] pyrrolidin-4-ylthio] -l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 1)

nhch₃ (1) K roztoku 4-nitrobenzyl(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl 3-1-methy1-2-(d ifenylfosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (1,76 g) v bezvodém acetonitrilu (20 ml) byl přidán N,N-di isopropylethylamin (0,51 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-2-[(3S)~3-(N-methy1-N-4-nitrobenzyloxykarbony laminomethy1)-pyrrol i din-1-y1karbony1]-1-(4-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidinu (1,92 g) v bezvodém acetonitrilu (20 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (95:5-9:1), s výtěžkem 2,52 g 4-n itrohenzy1-(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-methyl-N-4-n i trohenzyloxykarbonylaminomethy 1 )-l-(4-ni trobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrro1idin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1774, 1707, 1652, 1607, 1522, 1441, 1404, 1346, 1292, 1210,

1143, 1110.

9 ·

99

9 9 9

9 9

9· ♦·

9« · · ► · · · » 9 999 · » · · ·· *· ·· · · ·

· · ·

• 99 9999

NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,29 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,37 (3H;d;J=6,l Hz), 1,55-2,73 (5H;m), 2,93-4,58 (18H;m), 5,02-5,52 (6H;m), 7,40-7,70 (6H;m),

8,15-8,30 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (120 ml) katalyzátor 10% Pd/C (5,07 g).

připravené v kroku (1) (2,52 g) a vodě (84 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitril/voda (6:94-8:92)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován (406 mg) ve formě prášku.

na titulní sloučeninu

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1757, 1634, 1598, 1456, 1386, 1311, 1284, 1257, 1225, 1180,

1148, 1099.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,58-1,87 (2H;m),

2,16-2,31 (lH;m), 2,58-2,80 (2H,m), 2,76 (3H;s), 3,03-4,07 (12H;m), 4,18-4,29 (2H;m).

• · • ·

- 46 Příklad 4 (IR,5S,6S)-6-((IR)-l-Hydroxyethyl]-l-methy1-2-((2S,4S)-2-((3R)

3- methylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methy1pyrrolidin

4- ylthio]-l-karbapen-2-em~3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 62)

nhch₃ (1) K roztoku 4-nitrobenzyl(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-2-(difenylfosforyloxy)-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,72 g) v bezvodém acetonitrilu (5 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,21 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-methy1-2-[(3S)-3-(N-methyl-N-4-nitrobenzyl oxy kar bony lam i nomethyl )pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidinu (0,54 g) v bezvodém acetonitrilu (5 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs reagovala přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (6:4), s výtěžkem 0,46 g 4-nitrobenzyl(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-l-methyl-2-((3S)-3-(N-methyl-N-4-ni trobenzyloxykarbo nylaminomethyl)pyrroli din-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 : 1770, 1705, 1640, 1607, 1522,

1278, 1210, 1143, 1106.

1489, 1452, 1403, 1376, 1346, •» «

I · · » · <

• · · · • ·

- 47 NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,27 (3H;d;J=7,3 Hz), 1,37 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,49-2,83 (5H;m), 2,31;2,35 (3H;sx2), 2,95-3,80 (13H;m), 4,20-4,30 (2H;m),

5,16-5,53 (4H;m), 7,52 (2H;d;J=8,8 Hz), 7,64;7,65 (2H;dx2;J=8,8 Hz), 8,22;8,23 (4H;dx2;J=8,8 Hz).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (22 ml) katalyzátor 10% Pd/C (0,93 g) připravené v kroku (1) (0,46 g) a vodě (15 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitri1/voda (4:96-8:92)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován (150 mg) ve formě prášku.

etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na na titulní sloučeninu

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm*¹ :

1760, 1634, 1598, 1454, 1383, 1314, 1279, 1253, 1221, 1180,

1148, 1095.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,21 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,65-1,86 (2H;m),

2,15-2,30 (lH;m), 2,38 (3H;s), 2,57-3,00 (2H,m), 3,10-3,99 (12H;m), 4,18-4,29 (2H;m).

• · · • · · « • · • · (

- 48 Příklad 5 (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-Hydroxyethyl]-l-methyl-2-((2S,4S)-2-((3S)3-methylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio] -l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 1)

NHCH₃ (1) K roztoku 4-nitrobenzyl(lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-2-(difenylfosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,85 g) v bezvodém acetonitrilu (5 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,25 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-2~[(3R) -3-(N-methyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylamínomethyl)-pyrrolidin-1-y1karbonyl]-1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu (0,90 g) v bezvodém acetonitrilu (10 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (95:5-9:1), s výtěžkem 1,07 g

4-nitrobenzyl-(IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyéthyl]-1-methyl-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-(N-methyl-N-4-ni trobenzyloxykarbonylaminome thyl )-1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylátů.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1773, 1707, 1654, 1607, 1522, 1441, 1404, 1373,

1210, 1180, 1143, 1110, 1047, 1015.

1346, 1295, • · • · · ♦ · · • · · · · • · · · · · · • · · · ····· · · ··

NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,27 (3H;d;J=7,3 Hz), 1,37 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,50-2,72 (5H;m), 2,90-4,31 (14H;m), 4,40-4,55 (lH;m), 5,01-5,52 (6H;m), 7,41-7,67 (6H;m), 8,13-8,27 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (50 ml) katalyzátor 10% Pd/C (2,10 g) připravené v kroku (1) (1,05 g) a vodě (35 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP' eluční směsí acetonitril/voda (6:94-1:9)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován na titulní sloučeninu (127 mg) ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm ¹ :

1756, 1633, 1598, 1457, 1387, 1311, 1285, 1258, 1226, 1181,

1149, 1096, 1074.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,59-1,87 (2H;m),

2,16-2,32 (lH;m), 2,58-2,81 (2H,m), 2,77 (3H;s), 3,05-3,86 (12H;m), 3,94-4,03 (lH;m), 3,18-4,28 (2H;m).

• · • ·

- 50 Příklad 6 (lR,5S,6S)-6-[(IR)-l-Hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2-[(3S)

3- methylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbony1]-1-methy1pyrrolidin

4- y1thio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 62)

nhch₃ (1) K roztoku 4-nitrobenzy1(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-2-(difenylfosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,66 g) v bezvodém acetonitrilu (5 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,19 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-1-methy1-2-[(3R)-3-(N-methyl-N-4-nitrobe nzy loxy kar bony lami nomethy 1)pyrrolid i η-1-ylkarbony1]pyrrolidinu (0,53 g) v bezvodém acetonitrilu (5 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs reagovala přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (6:4), s výtěžkem 0,43 g 4-nitrobenzyl(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-l-methyl-2-((3R)-3-(N-methyl-N-4-nitrobenzyloxykarbo ny1ami nomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxy1átu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm¹ :

1771, 1734, 1705, 1639, 1608,

1346, 1278, 1246, 1210, 1142.

1522, 1489, 1452, 1403, 1375, • · · • · 4 • · · · • ·

NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,27 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,37 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,52-2,78 (8H;m), 2,94-3,82 (13H;m), 4,19-4,30 (2H;m), 5,12-5,50 (4H;m), 7,50-7,68 (4H;m), 8,21-8,23 (4H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (20 ml) katalyzátor 10% Pd/C (0,83 g) , připravené v kroku (1) (0,42 g) a vodě (15 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP' etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitri1/voda (4:96-8:92)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován (28 mg) ve formě prášku.

na titulní sloučeninu

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1757, 1642, 1597, 1489, 1457, 1384, 1251, 1210, 1158, 1095,

1028 .

NMR spektrum (400 MHz, D20) δ ppm:

1,21 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,67-1,88 (2H;m),

2,17-2,32 (lH;m), 2,51 (3H;široký s), 2,57-2,75 (lH,m), 2,76 (3H;s), 2,87-3,01 (lH;m), 3,05-3,87 (HH;m), 3,90-4,00 (lH;m), 4,18-4,29 (2H;m).

Příklad 7 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2~[(3R)-3-Guanidinomethy1pyrrolidiη-1-y1karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karhoxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 18)

(1) K roztoku 4-nitrobenzy1(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-2-(d ifeny1fosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,70 g) v bezvodém acetonítrilu (10 ml) byl přidán Ν,N-diisopropylethylamin (0,21 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3R)-3-(4nitrobenzyloxykarbonylguanidinomethy1)pyrrolidin-1-ylkarbonyl]pyrrolidinu (1,28 g) v bezvodém acetonítrilu (10 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (95:5-9:1-6:4), s výtěžkem 0,97 g 4-nitrobenzyl(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-2-[(2S,4S)-1-(4-ni trobenzyloxykarbony1)-2-{(3R)-3-(4-ni trobenzyloxykarbony1 guanidinomethyl)pyrrolidin-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm¹ :

1772, 1709, 1647, 1608, 1522, 1491, 1440, 1404,

1322, 1287, 1210, 1178, 1133, 1109.

1378, 1346, • ·

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,28 (3H;d;J=7,4 Hz), 1,37 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,50-2,77 (8H;m), 2,94-4,05 (12H;m), 4,18-4,28 (2H;m), 4,40-4,55 (lH;m), 5,10-5,51 (6H;m), 7,37-7,68 (6H;m), 8,10-8,27 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (50 ml) katalyzátor 10% Pd/C (1,90 g).

připravené v kroku (1) (0,95 g) a vodě (35 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP eluční směsí acetonitri 1/voda odpařením za sníženého tlaku a sloučeninu (224 mg) ve formě prášku.

etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), (8:92-12:88)], zahuštěn lyofilizován na titulní

Surový produkt byl přečištěn na HPLC preparativní koloně [Cosmosil 5C18-AR (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitri1/voda (8:92-12:88)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován se ziskem titulní sloučeniny (166 mg) ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1757, 1630, 1455, 1386, 1313, 1283, 1260, 1224, 1182, 1147,

1102, 1074.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J-7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,55-1,84

2,18-2,23 (lH;m), 2,52-2,78 (2H;m), 3,06

J=12,3;3,6 Hz), 3,13-3,85 (10H;m),

4,18-4,29 (2H;m).

(2H;m), (lH;dd, (lH;m),

3,96-4,03 • ·

Příklad 8 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-AcetimidoylaminomethyIpyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 17)

NH ch₃ (1) K roztoku 4-nitrobenzy1(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy 1 ] -l-methyl-2-(difenylfosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,81 g) v bezvodém acetonitrilu (10 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,44 ml) a roztok (2S,4S)-4-raerkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarhonyl) -2- [(3R)~3~(4ni trobenzy1oxykarbonylacetimidoylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidinu (1,35 g) v bezvodém acetonitrilu (15 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs reagovala přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (95:5-9:1-8:2), s výtěžkem 1,15 g 4-nitrobenzy1(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl~2-[(2S,4S)-1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3R)-3-(4-nitrobenzy1oxykarhonylacet im idoylaminomethy1)pyrrolid in-ylkarbony1]pyrroli din-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu .

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm¹ :

1773, 1709, 1650, 1607, 1556, 1522, 1494, 1441, 1404, 1373,

1278, 1246, 1237, 1212, 1126, 1110.

• ·

NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,29 (3H;d;J=7,l Hz), 1,37 (3H;d;J=6,l Hz), 1,50-2,72 (9H;m), 2,98-4,06 (12H;m), 4,22-4,30 (2H;m), 4,46-4,57 (lH;m), 5,16-5,52 (6H;m), 7,43-7,67 (6H;m), 8,17-8,27 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (60 ml) katalyzátor 10% Pd/C (2,28 g) připravené v kroku (1) (1,13 g) a vodě (42 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl promyt etherem a ethylacetátem, odpařen za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP (NACALAI TESQUE, INC.), acetonitri1/voda (8:92-12:88)], zahuštěn sníženého tlaku a lyofilizován na titulní eluční směsí odpařením za sloučeninu (337 mg) ve formě prášku.

Surový produkt byl přečištěn na HPLC preparativní koloně [Cosmosil 5C18-AR (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitril/voda (8:92-12:88)], sníženého tlaku a lyofilizován se (166 mg) ve formě prášku.

zahuštěn odpařením za ziskem titulní sloučeniny

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1757, 1630, 1455, 1386, 1313, 1283, 1260, 1224, 1182, 1147,

1102, 1074.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,55-1,84

2,18-2,23 (lH;m), 2,52-2,78 (2H;m), 3,06

J=12,3;3,6 Hz), 3,13-3,85

4,18-4,29 (2H;m).

(10H;m),

3,96-4,03 (2H;m), (lH;dd, (lH;m), • · • · ·

- 56 Příklad 9 (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-Cyklopropylaminomethylpyrroli d in-l-ylkarbony1]pyrro1idin-4-y1thio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 15)

(1) K roztoku 4-nitrohenzyl(lR,5R,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methyl-2-(d i fenylfosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,66 g) v bezvodém acetonitrilu (7 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,19 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3R)-3-(Ncyklopropyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin-1-ylkarbony1]pyrrolidinu (0,14 g) v bezvodém acetonitrilu (8 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs reagovala přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (95:5), s výtěžkem 0,80 g 4-nitrohenzyl(IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-l-(4-n itrobenzyloxykarbony 1)-2-( (3R)-3-(N-cyklopropyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm'¹ :

1774, 1708, 1652, 1607, 1522, 1496, 1444, 1404, 1346, 1287,

1210, 1181, 1138, 1110.

• · • · · · ·

NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

(3H;d;J=7,4 Hz), 1,37,1,38 (6H;m), 3,00-4,05 (HH;m), (lH;m), 5,16-5,52 (6H;m),

0,92 (4H,m), (3H;dx2;J=6,3 Hz), 4,22-4,30 (2H;m),

1,29

1,48-2,74

4,36-4,56

7,43-7,68 (6H;m), 8,17-8,26 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (40 ml) katalyzátor 10% Pd/C (1,57 g) připravené v kroku (1) (0,78 g) a vodě (28 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl promyt etherem a ethylacetátem, odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP' eluční směsí acetonitril/voda (6:94-1:9)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován na titulní sloučeninu (106 mg) ve formě prášku.

byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.),

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1759, 1637, 1599, 1455, 1386, 1312, 1283, 1259, 1224, 1180,

1147, 1103.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

0,88 (4H;m) 1,22 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,63-1,86 (2H;m), 2,14-2,30 (lH;m), 2,58-2,83 (3H;m), 3,08-3,92 (HH;m), 4,06-4,14 (lH;m), 4,19-4,30 (2H;m).

- 58 Příklad 10 (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)-3-Acetimidoylaminomethylpyrrolidin-l-y1karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 17)

(1) K roztoku 4-nitrobenzy1(IR,5R,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-2-(difeny1fosforyloxy)-l~karbapen-2-em-3-karboxylátu (0,58 g) v bezvodém acetonitrilu (10 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,17 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-1-(4-nitrobenzy1oxykarbony1)-2-[(3S)-3-(4nitrobenzyloxykarbonylacetimidoylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidinu (0,93 g) v bezvodém acetonitrilu (10 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (9:1), s výtěžkem 0,61 g 4-nitrobenzyl(lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methy1-2-((2S,4S)-1-(4-ni trobenzyloxykarbony1)-2-((3S)-3-(4-ni trobenzyloxykarbonylacet im i doylam inomethy1)pyrrolid in-y1karbony1]pyrroli d in-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1774, 1709, 1651, 1607, 1558, 1522, 1496, 1441, 1404, 1373,

1346, 1278, 1278, 1238, 1212, 1126, 1110, 1074, 1015.

• ·

- 59 NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,29 (3H;d;J=7,l Hz), 1,37 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,55-2,75 (9H;m), 3,05-4,06 (HH;m), 4,22-4,27 (2H;m), 4,44-4,60 (lH;m), 5,17-5,53 (6H;m), 7,42-7,68 (6H;m), 8,15-8,26 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (30 ml) katalyzátor 10% Pd/C (1,15 g) připravené v kroku (1) (0,58 g) a vodě (20 ml) byl přidán

Vzniklá směs absorbovala vodík

1,5 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP’ eluční směsí acetonitri1/voda (6:94-1:9)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofiiizováň na titulní sloučeninu (156 mg) ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1756, 1687, 1633, 1592, 1454, 1386, 1313, 1284, 1261, 1226,

1182 .

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,2 Hz), 1,57-1,67 (lH;m), 1,70-1,85 (lH;m), 2,12-2,27 (lH;m), 2,25 (3H;s), 2,58-2,79 (2H;m), 3,03-3,85 (lH;m), 3,92-4,01 (lH;m), 4,18-4,29 (2H;m).

• · • · • · ··

- 60 Příklad 11 (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)-3-Guanidinomethylpyrrolidin-l-yl karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1 -1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 18)

(1) K roztoku 4-nitrobenzy1(IR,5R,6S)-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-2-(difenylfosforyloxy)-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu (874 mg) v bezvodém acetonitrilu (9 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,256 ml) a roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-((3S)-3-(4nitrobenzyloxykarbonylguanidinomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidinu (926 mg) v bezvodém acetonitrilu (10 ml), za stálého míchání a chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána přes noc při 0 °C. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Výsledná směs byla promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným a zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu eluční směsí ethylacetát/methanol (7:1), s výtěžkem 1,23 g 4-nitrobenzy1(IR,5S,6S)-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-l-methy1-2-((2S,4S)-1-(4-ni trobenzyloxykarbony 1)-2-( (3S)-3-(4-nitrobenzyloxykarbonylguani dinomethyl)pyrrolid in-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1773, 1710, 1656, 1607, 1521, 1438, 1404, 1385, 1346, 1285,

1208, 1177, 1135, 1109, 1030.

NMR spektrum (400 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,28 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,34 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,65-1,85 (lH;m), 1,90-2,10 (2H;m), 2,15-2,80 (5H;m), 3,05-3,70 (HH;m), 4,00-4,10 (lH;m), 4,10-4,30 (2H;m), 4,45-4,60 (lH;m), 5,00-5,55 (6H;m), 7,40-7,70 (6H;m), 8,15-8,30 (6H;m).

(2) K roztoku sloučeniny v tetrahydrofuranu (38 ml) připravené v kroku (1) (1,14 g) a vodě (19 ml) byl přidán katalyzátor 10% Pd/C (2,3 g). Vzniklá směs absorbovala vodík 1,2 h za stálého míchání a vnější teplotě 30 °C. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl promyt odpařen za sníženého tlaku. Zbytek reverzní fázi [Cosmosil 75C18-PREP' etherem a ethylacetátem, byl chromatografován na (NACALAI TESQUE, INC.), eluční směsí acetonitril/voda (8:92)], zahuštěn odpařením za sníženého tlaku a lyofilizován ve formě prášku.

na titulní sloučeninu (187 mg)

NMR spektrum (270 MHz, D2O, trimethylsilylpropionát-d4 sodný jako vnitřní standart) δ ppm:

1,25 (3H;d;J=7,0 Hz), 1,33 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,55-1,90 (2H;m),

2,10-2,30 3,35-3,50 (lH;m), (3H;m) ,

2,50-2,90 3,60-3,75

3,90-4,10 (lH;m), 4,20-4,35 (2H;m).

(2H;m), (2H;m),

3,05-3,35

3,78-3,90 (4H;m) (lH;m) • · · · • · ··· · • · ·

Příklad 12 (IR,5S,6S)-6-((IR)-l-Hydroxyethyl]-l-methy1-2-[(2S,4S)-2-((3R) 3-(pyrrolidin-l-ylmethyl)pyrrolidin-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 54)

COOH (1) K roztoku 4-nitrobenzyl(IR,5R,6S)-2-(difenylfosforyloxy)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylátu (225 mg) v bezvodém dimethylformamidu (3 ml) byl přidán roztok (2S,4S)-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-((3R)-3-(pyrro1idin-1-ylmethy1)pyrrolidin-1-ylkarbonyl]pyrrolidinu (198 mg) v bezvodém dimethylformamidu (1 ml) a N,N-diisopropylethylamin (0,097 ml) za chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána 20 h při téže teplotě. Dále byla zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl zředěn ethylacetátem. Výsledná směs byla postupně promyta vodou, nasyceným roztokem soli, sušena bezvodým síranem sodným. Rozpouštědlo bylo oddestilováno. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu a eluční směsí ethylacetát/methanol (4:1) byl vymyt 4-nitrobenzyl(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methy1-2-((2S,4S)-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-((3R)-3-(pyrrolidin-l-ylmethyl)pyrrolid i n-l-y1karbony1]pyrroli din-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylát s výtěžkem 235 mg.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

3351, 2970, 1773, 1709, 1697, 1525, 1447, 1246.

NMR spektrum

1,20-1,30

2,00-3,00

4,50-4,70

7,40-7,55 (3H;m), (8H;m) (lH;m) (2H;m), (270 MHz, CDC13) δ ppm:

1,34 (3H;d;J=6,1 Hz), , 3,10-3,80 (6H;m), , 5,00-5,40 (3H;m),

7,60-7,70 (2H;m),

1.40- 2,10 3,80-4,40

5.40- 5,55

8,15-8,25 (4H;m).

(6H;m), (4H;m), (lH;m), (2) K roztoku sloučeniny připravené v kroku (1) (0,161 g) v tetrahydrofuranu (3 ml) a vodě (1,5 ml) byl přidán katalyzátor 10% Pd/C (0,320 g). Vzniklá směs byla hydrogenována při laboratorní teplotě 90 min. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl zahuštěn odpařením za sníženého tlaku. Zbytek byl promyt etherem a vodná vrstva odpařena za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na reverzní fázi (Cosmosil 75C18-PREP (NACALAI TESQUE, INC.) a eluční směsí acetonitril/voda (2:98-1:9) byl vymyt produkt a lyofilizován na s výtěžkem (51 mg) titulní sloučeninu ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-13378, 1763, 1655, 1593, 1489, 1376.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,20 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,28 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,65-1,90 (2H;m),

1,95-2,40 3,30-3,40 (9H;m), (2H;m),

2,65-2,80

3,40-3,55

4,20-4,30 (2H;m), 4,65-4,75 (lH;m).

(lH,m), (2H;m),

3,00-3,25 3,60-4,00 (3H;m), (4H;m),

Příklad 13 (IR,5S,6S)-6-[(lR)-l-Hydroxyethyl]-2-[(2S,4S)-2-[(3S)3-(2-hydroxyethylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4

-ylthio]-lmethy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylové kyselina (stereoizomer sloučeniny

(2S,4S)-2-[(3R)-3~(N-2-Hydroxyethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarhonyl)pyrrolidin (214 mg) byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) s výtěžkem 85,1 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm¹ :

3409, 1747, 1644, 1601, 1455, 1386.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22	(3H; d	;J=7,2 Hz), 1,30	(3H;d;J=6,4 Hz), 1,70-1,95	(2H;m),
2,15·	-2,35	(2H;m),	2,60-2	, 85	(2H,m),	2,85-2,95	(lH;m),
3,15·	-3,30	(3H;m) ,	3,30-3	, 50	(5H;m) ,	3,55-3,90	(2H;m) ,
3,90·	-4,00	(lH;m), 4,	20-4,40	(5H;m)

• · • ·

- 65 (lR,5S,6S)-2~[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(Karbamoylmethylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 6)

Příklad 14

(2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-Karbamoylmethyl-N-4-nitrobenzyloxykar bony laminomethyl )pyrrolidin-l-ylkarbonylJ-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (368 mg) byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) s výtěžkem 158 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm'¹ :

3401, 1754, 1695, 1645, 1597, 1455.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,70-1,90 (lH;m),

1,90-2,05	(lH;m),	2,20-2,35	(lH,m),	2,65-2,80	(lH;m),
2,95-3,10	(lH;m),	3,10-3,22	(2H;m) ,	3,22-3,30	(lH;m),
3,35-3,60	(4H;m),	3,60-3,95	(5H;m),	4,00-4,08	(lH;m),

4,22-4,30 (2H;m), 4,60-4,70 (lH;m).

• ·

Příklad 15 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-(2-Aminoethylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl ]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 12)

H

N

NH₂ (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3S)-3-(N-2-(4-ni trobenzyloxykarbonylamino)ethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylami nomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-pyrrolid in (248 mg) byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) s výtěžkem 48,5 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

3370, 1758, 1648, 1603, 1455, 1386.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d	;J=7,2 Hz) ,	1,30	(3H;d;J=6,4 Hz)	, 1,70-1,90	(lH;m)
1,90-2,05	(lH;m),	2,15-2	,33 (lH,m),	2,55-2,70	(lH;m)
2,97-3,13	(4H;m),	3,15-3	,33 (5H;m),	3,34-3,52	(3H;m)
3,57-3,67	(lH;m),	3,68-3	,90 (3H;m),	4,21-4,30	(2H;m)
4,60-4,67	(lH;m).

Příklad 16 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(2-Dimathylaminoethylamínomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrro1idin-4-ylthio]-6-[(1R)~

-1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 14)

H

N

N(CK₃)₂ (2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-Dimethylaminoethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin-l-y1karbony1]-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidin (428 mg) byl zpracován titulní podle příkladu 12, bod (1) a (2) s vytezkem 109 mg sloučeniny ve formě prášku.

NMR spektrum (270 MHz, D2O) δ ppm:

1,22 (3H;d;J~7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,60-1,90

2,10-2,25 (lH;m), 2,45-2,60 (lH,m), 2,77 (3H;s), 2,79

2,70-3,00 (2H;m), 3,00-3,10 (lH;m), 3,31-3,53

3,55-3,87 (3H;m), 3,88-4,00 (lH;m), 4,20-4,30

4,30-4,40 (lH;m).

(2H;m), (3H;s), (5H;m), (2H;m),

Příklad 17 (IR,5S,6S)-6-[(lR)-l-Hydroxyethyl]-1-metby1-2-[(2S,4S)-2-[(3R)3-(N-methy1-N-2-methylami noethylam inomethyl)pyrro1idin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylové kyselina, hydrochlorid (hydrochlorid stereoizomeru sloučeniny č . 31) • · • ·

(1) (2S,4S)-4~Merkapto-2~[(3R)-3-(N-2-(N-methyl-N-4-ni trobenzyloxykarbonylamino)ethyl-N-methylaminomethyl]pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (617 mg) byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) s výtěžkem 527 mg 4-nitrobenzy1(IR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-l~(4-ni trobenzyloxykarbony1)-2-[(3R)-3-(N-2-(N-methy1-N-4-nitrobenzyloxykarbony1 amino)ethyl-N-methylaminomethy1lpyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylátu ve formě prášku.

roztoku

K ve vodě (1,5 ml) a tetrahydrofuranu (0,400 g). Vzniklá sloučeniny připravené v kroku (1) IN kyselině chlorovodíkové (2) (0,202 g) (0,201 ml)

10% Pd/C laboratorní teplotě 45 min. Filtrát byl zahuštěn odpařením promyt etherem a vodná vrstva Zbytek byl chromatografován (3 ml) byl směs byla Katalyzátor přidán katalyzátor hydrogenována při byl odfiltrován, za sníženého tlaku. Zbytek byl odpařena za sníženého tlaku, na reverzní fázi (Cosmosil byl vymyt produkt

75C18-PREP” (NACALAI TESQUE, INC.) a vodou a lyofilizován s výtěžkem (61 mg) titulní sloučeniny ve formě prášku.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,21 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,29 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,70-1,87 (lH;m), 1,96-2,05 (lH;m), 2,22-2,34 (lH,m), 2,60-2,69 (lH;m), 2,75 (3H;s), 2,90 (3H;s), 3,00-3,10 (lH;m), 3,10-3,75 (7H;m), 4,20-4,27 (2H;m), 4,65-4,79 (lH;m).

• 9 • ·

- 69 Příklad 18 (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-(2-Fluorethylaminomethy 1)pyrrolidi n-l-y1karbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 4)

(2S,4S)-2-((3S)-3-(N-2-Fluorethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

• ·

- 70 Příklad 19 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(l-Methylguanidinomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 36)

NH

NH₂ (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-3-[1-methy1-2,3-bis(4-nitrobenzyloxykarbony1)guanidinomethyl]pyrrolidin-1-ylkarbonyl]-1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (996 mg) byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) s výtěžkem 149 mg titulní sloučeniny.

NMR spektrum (400 MHz, D20) δ ppm:

1,22 (3H;d;J-7,2 Hz), 1,30 (3H;d;J=6,4 Hz), 1,55-1,70 (lH;m),

1,70-1,85 (lH;m), 2,10-2,25 (lH,m), 2,65-2,80 (2H;m), 3,09 (3H;s), 3,15-3,30 (2H;m), 3,35-3,55 (6H;m), 3,70-3,85 (2H;m),

3,95-4,05 (lH;m), 4,20-4,30 (2H;m).

• · · · ·

Příklad 20 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-Acetimidoyl-N-methylaminomethyl )pyrrolIdin-1-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karhapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 35)

(2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-ni trobenzyloxykarbony1)-2-((3R) -3-(N-4-nitrobenzyloxykarbonylácetimidoyl-N-methylaminomethyl) pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 21 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-Formimidoyl-N-methylaminomethy1)pyrrolid i n-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 34)

(2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-ni trobenzyloxykarbony1)-2-((3R)-3-(N-4-nitrobenzyloxykarbonylformimidoyl-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 22 (IR,5S,6S)-6-[(IR)-l-Hydroxyethyl]-l-methyl-2-[(2S,4S)-2-[(3R)3-(2,2,2-trifluorethylaminomethyl)pyrrolid in-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 5)

H

N\ /CF3 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbony1)-2-[(3S)-3-(N-4-nitrobenzyloxykarbonyl-N-2,2,2-trifluorethylaminomethyl] pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

·« ·· ··· ·· · • · ··· · • · · • ·«·· <· ··

- 73 Příklad 23 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-FormimidoylaminomethylpyrrΟΙ idin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((1R)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karhapen-2-em-3-karhoxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 16)

(2S,4S)-4-Merkapto-l~(4-nitrobenzyloxýkarbony1)-2-[(3R)-3-(4-ni trobenzyloxýkarbonylformimidoylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyljpyrrolidin byl zpracován podle příkladu 12, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 24 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-Guanid inomethylpyrrolid in-1-y1karbony1]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 79)

(2S,4S)-2-[(3R)-3-(2,3-bis(4-nitrobenzyloxýkarbony1)- 74 guanidinomethyl]pyrrolidin-1-ylkarbony1]-4-merkapto-l-methylpyrrolidin byl zpracován podle příkladu 4, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 25 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-Acetimidoylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbony1]-1-methylpyrrolidin-4-y1thio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karhapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 78)

(2S,4S)-4-Merkapto-1-methy1-2-[(3R)-3-(N-4-nitrobenzyloxykarhonylacetimidoyl-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 4, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 26 (IR,5S,6S)—2-[(2S,4S)—2-[(3R )-3-Formimidoy1aminomethy1pyrroli di n-1-y1karbony1]-l-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 77)

COOH • · • ·

- 75 (2S,4S)-4-Merkapto-l-methyl-2-[(3R)-3~(4-nitrobenzyloxykarbonylformimidoylaminomethyl)pyrro1idin-l-ylkarbony1]pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 4, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 27 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(1-Methylguanidinomethy1)pyrroli d in-l-ylkarbony1]-1-methylpyrroli din-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 96)

(2S,4S)-4-Merkapto-l-methyl~2-í(3R)-3-[2,3-Bis(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-1-methylpyrrolidin byl zpracován podle příkladu 4, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 28 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-Acetimidoy1-N-methylaminomethy 1 )pyrroli di n-1-y1karbony1]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6 -[(IR ) -1-hydroxyethy1]-l-methyl~l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 95)

COOH • · • · · • · β ·

- 76 (2S,4S)-4-Merkapto-1-methy1-2-[(3R)-3-[N-4-nitrobenzyloxykarbonylacetimidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-y1karbonyl(pyrrolidin byl zpracován podle příkladu 4, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 29 (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-Formimidoy1-N-methylamínomethyl ) pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6 -[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (stereoizomer sloučeniny č. 94)

(2S,4S)-4-Merkapto-1-methy1-2-[(3R)-3-[N-4-nitrobenzy1oxykarbonylformimidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrroli din byl zpracován podle příkladu 4, bod (1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

• ·

- 77 Příklad 30 (IR,5S,6S)-6-((IR)-1-Hydroxyethy1]-l-methyl-2-((2S,4S)-2-( (3R)3-methylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina, hydrochlorid (hydrochlorid stereoizomerů sloučeniny č. 1)

NHCH₃. HCI

K vodnému roztoku (2 ml) (lR,5S,6S)-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-l-methy1-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-methylaminomethy1pyrrolidin -1-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-l-karhapen-2-em-3-karboxylové kyselině (59,7 mg), připravené v příkladu 3, byla přidána IN kyselina chlorovodíková (0,122 ml). Vzniklý vodný roztok byl chromatografován na reverzní fázi (Cosmosil 75C18-PREP (NACALAI TESQUE, INC.) a z frakcí eluovaných vodou byla získána titulní sloučenina (46 mg) ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

3409, 1757, 1634, 1598, 1456, 1386.

NMR spektrum (400 MHz, D2O) δ ppm:

1,21 (3H;d;J=7,2 Hz), 1,29 (3H;d;J=6,3 Hz), 1,70-1,87 (lH;m),

1,96-2,05 (lH;m), 2,20-2,32 (lH,m), 2,60-2,70 (lH;m), 2,75 (3H;s), 3,00-3,10 (1H;m), 3,10-3,35 (3H;m), 3,35-3,45 (lH;m),

3,45-3,50 (3H;m), 3,60-3,90 (3H;m), 4,02-4,09 (lH;m),

4,21-4,28 (2H;m), 4,66-4,78 (lH;m).

Referenční příklad 1

» · · ► · « • · · · • · ··

- 78 (2S,4S)-4-Merkapto-1-methy1-2-[(3R)-3-[4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrro1idin-l-ylkarhonyl]pyrrolidin (1) K roztoku (240 ml) (3S)-3-hydroxymethyl-l-[(IR)fenylethy1]pyrrolidinu (11,5 g) v ethanolu byl přidán katalyzátor Pd-hydroxid/C (11,5 g). Vzniklá směs hýla hydrogenována při teplotě okolí 40 °C 3 h. Katalyzátor byl odfiltrován. Filtrát byl zahuštěn odpařením za sníženého tlaku. Ke zbytku (6,01 g) byl přidán acetonitril (60 ml) a za chlazení ledovou lázní di-t-butyl karbonát (14 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát) a získán (3S)-1-t-butoxykarbony1-3-hydroxymethylpyrrolidin (8,66 g).

Optická rotace: [a]d²⁵=-16,5° (C=1,0;CHaCl)

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-13432, 1698, 1675, 1479, 1454, 1418, 1367.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,46 (9H;s), 1,61-1,80 (lH;m), 1,92-2,30 (2H;m), 2,37-2,47 (lH,m), 3,07-3,17 (lH;m), 3,30-3,69 (5H;m).

K roztoku sloučeniny připravené v referenčním 1—(1) (1,30 g) v tetrahydrofuranu (13 ml) byly chlazení ledovou lázní (2) příkladu postupně přidány za triethylamin a směs byla a methansulfonylchlorid (0,55 ml) (0,99 ml) míchána 1 h. Reakce byla zakončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Ke zbytku (1,83 g) byl přidán N,N-dimethylformamid (20 ml) a azid sodný (1,26 g). Výsledná směs byla míchána 1,5 h při ·· ·· • · ·

- 79 teplotě 80 °C. Reakce byla zakončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahován diethyletherem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (n-hexan/ethylacetát = 7/3) a získán (3S)-3~azidomethyl-l-t-butoxykarbonyl- pyrrolidin (1,39 g).

(3) K roztoku sloučeniny připravené v referenčním příkladu l-(2) (1,23 g) v acetonitrilu (13 ml) byl přidán trifenylfosfin (1,50 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. K reakční směsi byly postupně přidány 4-nitrobenzylchlorformiát (1,52 g) a vodný IN hydroxid sodný (7 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 30 min. Reakční směs byla zředěna vodou a 3 x extrahována methylenchloridem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (n-hexan/ethylacetát = 4/6) a získán (3S)-1-t-butoxykarbony1-3-(4-nitorbenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin (1,97 g).

Optická rotace: [a]d²⁵=-14,3° (C=l,0;CH3Cl)

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm ¹3326, 1727, 1683, 1542, 1413, 1348, 1250.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,55-1,66 (lH;m), 1,92-2,03 (lH;m), 2,35-2,45 (lH;m),

2,95-3,55 (6H,m), 5,18 (1H; široký s), 5,20 (2H;s), 7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,22 (2H;d;J=8,6 Hz).

(4) K roztoku (20 ml) sloučeniny připravené v referenčním příkladu 1—(3) (1,90 g) v methylenchloridu byla přidána za chlazení ledovou lázní kyselina trifluoroctová (3,9 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla reakční směs míchána ještě 2 h. Poté byla zředěna methylenchloridem a 3 x extrahována • ·

- 80 vodou. Vodné vrstvy byly spojeny a zalkalizovány vodným IN hydroxidem sodným (60 ml). Směs byla 3 x extrahována methylenchloridem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Bylo získáno 1,38 g surového (3S)-3-(4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethy1)pyrrolidinu.

(5) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1thio)-1-methy1-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (0,69 g) v tetrahydrofuranu (7 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,43 ml) a pivaloylchlorid (0,30 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,68 g) připravené v refernčním příkladu l-(4) a N,N-diisopropylethylaminu (0,43 ml) v acetonitrilu (8 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Reakce byla ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a směs extrahována 3 x ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát/methanol - 7/3) a získán (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthi o)-1-methy1-2-[(3R)-3-(4-nitrobenzy loxykarbony lam inomethy lpyrrol idin-l-ylkarbonyllpyrroli~ din (0,73 g).

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-11722, 1639, 1610, 1585, 1513, 1445, 1373, 1347, 1322, 1302,

1247, 1177, 1144, 1109.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,50-2,62 (5H;m), 2,29;2,31 (3H;sx2), 3,02-3,83 (10H;m),

3,69;3,70 (2H;sx2), 3,79 (3H;s), 4,98-5,18 (lH,m), 5,19 (2H;s), 6,83 (2H;d;J=6,6 Hz), 7,21 (2H;d;J=6,6 Hz), 7,50 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,22 (2H;d;J=8,6 Hz).

(6) K roztoku sloučeniny (0,65 g) připravené v referenčním příkladu 1-(5) ve směsi anisolu (0,65 ml) ·· ··

- 81 a kyseliny trifluoroctové (6,5 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,27 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Kyselina trifluoroctová byla oddestilována za sníženého tlaku a zbytek promyt n-hexanem a diethyletherem k odstranění anisolu. Zbytek byl zředěn ethylacetátem. Výsledná směs byla promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným solným roztokem, vysušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku s výtěžkem 0,54 g titulní sloučeniny.

[Alternativní způsob přípravy titulní sloučeniny] (7) (3R)-l-t-butylkarbonyl-3-pyrrolidinol (10,0 g) byl rozpuštěn v bezvodém pyridinu (100 ml). K roztoku chlazenému v ledové lázni byl přidán dimethylaminopyridin (652 mg) a p-toluensulfonylchlorid (15,3 g) a směs byla míchána 48 h v ledové lázni. Poté bylo rozpouštědlo odpařeno za sníženého tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v methylenchloridu (200 ml) a promyt vodou. Vodná fáze byla extrahována 2 x methylechloridem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku, se ziskem 24,2 g surového produktu. Surový produkt byl chromatografován na sloupci silikagelu (methylenchlorid/acetonitril = 40/1) a získán (3S)-l-t-butoxykarbonyl-3-p-toluensulfonyloxypyrrolidin (16,8 g).

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,43 (9H;s), 2,25-1,90 (2H;m), 2,46 (3H;s), 3,60-3,30 (4H;m),

5,05 (lH,m), 7,35 (2H;d;J=7,9 Hz), 7,79 (2H;d;J=7,9 Hz).

(8) Sloučenina (12,2 g) připravená v kroku (7) byla rozpuštěna v bezvodém acetonitrilu (122 ml). K roztoku byl přidán 1,8-diazabicyklo[5,4,0]-7-undecen (8,02 ml) a aceton kyanhydrin (6,53 ml), směs byla zahřívána k varu pod zpětným chladičem 10 h. Dále byla reakční směs zředěna ethylacetátem • · «

(11) a 5 x promyta vodou (200 ml) a nasyceným roztokem chloridu amonného (200 ml). Organická vrstva byla sušena bezvodým síranem hořečnatým a odpařena za sníženého tlaku. Bylo získáno 9,10 g surového produktu. Surový produkt byl chromatografován na sloupci silikagelu (eluční směs benzen/ethylacetát = 17/1) a získán (3S)-1-t-butoxykarbonyl-3-kyanopyrrolidin (4,41 g).

NMR spektrum (270 MHz, CDC13) δ ppm:

1,47 (9H;s), 2,35-2,15 (2H;m), 3,15-3,00 (lH;m), 3,75-3,35 (4H;m).

(9) Sloučenina (2,10 g) připravená v kroku (8) byla rozpuštěna v bezvodém tetrahydrofuranu (21 ml). K roztoku byl přidán L1AIH4 (2,03 g) za chlazení ledovou lázní a směs byla míchána 20 min v ledové lázni a 50 min při laboratorní Dále byl do rekční směsi přidán tetrahydrofuran a voda (4,6 ml) a výsledná směs míchána při laboratorní teplotě 10 min. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Zbytek byl zředěn methylenchloriodern (250 ml) (24 g) a směs byla míchána 1 h při Po přefiltrování bylo rozpouštědlo tlaku. Zbytek byl chromatografován na silikagelu (eluční směs ethylacetát/methanol = 1/1) (3R)-3-aminomethy1-1-t-butoxykarbonylpyrrolidin teplotě (40 ml) a bezvodý síran sodný laboratorní teplotě, odpařeno za sníženého sloupe i a získán (703 mg),

NMR

1,30-1,50

1.90- 2,10

2.90- 3,10 spektrum (270 MHz, CDCI3) (2H;široký s), 1,46 (lH;m), 2,15-2,30 (lH;m), 3,20-3,60 (3H;m) δ ppm : (9H;s), (lH;m),

1,50-1,65 (lH;m),

2,65-2,80 (2H;m), (10) Sloučenina (550 mg) připravená v kroku (9) byla rozpuštěna v bezvodém acetonitrilu (5,5 ml). K roztoku byl za chlazení ledovou lázní přidán N,N-diisopropylethylamin (0,575 ml) a p-nitrobenzylchlorformiát (711 mg) a směs míchána v ledu ještě 5 min. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého • · ·· ·· · ·· .··. .

• · t · ···· · · · a··· * · · · • ····· · · · ··J J *·** ··* ··· ···· ··

- 83 tlaku. Zbytek byl rozpuštěn v methylenchloridu (50 ml) a výsledný roztok promyt vodou. Vodná vrstva byla 2 x extrahována methylenchloridem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (eluční směsí benzen/acetonitri 1 = 8/1) a získán (3R)-l-t-butoxykarbonyl-3-(4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin (599 mg). Optická rotace, infračervené i NMR spektra výsledného produktu byla shodná s hodnotami naměřenými pro produkt postupu (3).

Referenční příklad 2 (2S,4S)-4-Merkapto-1-methy1-2-[(3S)-3-[4-nitrohenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin (1)

K roztoku (250 ml) (3R)-3-hydroxyraethyl-l-[(IR)· fenylethyl]pyrrolidinu (12,6 g) v katalyzátor Pd-hydroxid/C (12,5 g) při teplotě

Filtrát byl hydrogenována odf i 1trován.

ethanolu byl přidán Vzniklá směs byla okolí 40 °C 5 h. Katalyzátor byl zahuštěn odpařením za sníženého tlaku. Ke zbytku (7,08 g) byl přidán acetonitril (70 ml) a za chlazení ledovou lázní di-t-butyl dosažení laboratorní teploty byla Reakční směs byla zpracována v referenčním příkladu 1-(1) a karbonát (16 ml). Po směs míchána ještě 1 h.

stejným postupem jako získáno 10,6 g (3R)-1t-butoxykarbony1-3-hydroxymethy1pyrrolidinu.

Optická rotace: [a]o ²⁵= + l6,5° (C=1,0;CH3C1)

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-1 : 3434, 1698, 1675, 1479, 1454, 1418, 1367.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,46 (9H;s), 1,61-1,80 (2H;m), 1,92-2,30 (lH;m), 2,37-2,47 (lH;m), 3,07-3,17 (lH;m), 3,30-3,69 (5H;m).

·· ·· *·

I · · «

I · ·· ··· · ¹ • ♦ « ·· *· (2) K roztoku v referenčním příkladu postupně přidány za pripravene (16 ml) byly triethylamin a směs byla sloučeniny (1,55 g)

2-(l) v tetrahydrofuranu chlazení ledovou lázní (1,18 ml) a methansulfonylchlorid (0,66 ml) míchána 1 h. Reakce byla zakončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Ke zbytku (2,19 g) byl přidán Ν,Ν-dimethylformamid (20 ml) a azid sodný (1,50 g) . Výsledná směs byla míchána 1,5 h při teplotě 80 °C. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(2) a získáno 1,43 g (3R)-3-azidomethy1-1-t-butoxykarbonylpyrrolidinu.

(3) K roztoku sloučeniny (1,00 g) připravené v referenčním příkladu 2-(2) v acetonitrilu (10 ml) byl přidán trifenylfosfin (1,22 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. K reakční směsi byly postupně přidány

4-nitrobenzylchlorformiát (1,24 g) (6 ml). Po dosažení laboratorní 30 min. Reakční v referenčním ještě jako a vodný IN hydroxid sodný teploty byla směs míchána zpracována stejným postupem 1—(3) a získáno 1,51 g směs byla příkladu (3R)-1-t-butoxykarbony1-3-(4-ni torbenzyloxykarbonylamino methyl)pyrrolidinu.

Optická rotace: [a]d²⁵=+14,3° (C=l,0;CH3Cl)

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm“¹3325, 1726, 1682, 1524, 1414, 1348, 1249.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,45 (9H;s), 1,55-1,66 (lH;m), 1,92-2,03 (lH;m), 2,35-2,45 (lH;m), 2,95-3,55 (6H,m), 5,06 (1H; široký s), 5,19 (2H;s),

7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,22 (2H;d;J=8,6 Hz).

(4) roztoku sloučeniny (1,51 g) pripravene

v referenčním příkladu 2-(3) v methylenchloridu (17 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní kyselina trifluoroctová (3,1 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla reakční směs míchána ještě 2 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(4) a získáno 1,16 g (3R)-3-(4-nitrobenzyloxýkarbonylaminomethyl)pyrrolidinu.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,42-1,60 (lH;m), 1,90-2,07 (lH;m), 2,27-2,50 (lH;m), 2,52-3,28 (7H;m), 5,13-5,31 (lH,m), 5,19 (2H;s), 7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,22 (2H;d;J=8,6 Hz).

(5) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-1-methy1-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (0,70 g) v tetrahydrofuranu (7 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,43 ml) a pivaloylchlorid (0,31 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,70 g) připravené v refernčním příkladu 2—(4) a N,N-di isopropylethylam i nu (0,43 ml) v acetonitrilu (8 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 1—(5) a získáno 0,75 g (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1thio)-l-methyl-2-[(3S)-3-(4-ni trobenzyloxýkarbonylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyljpyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-11722, 1639, 1610, 1585, 1513, 1445, 1347, 1302, 1248, 1176, 1144, 1120, 1109.

NMR spektrum (270 MHz, CDCIa) δ ppm:

1,52-2,61 (5H;m), 2,30 (3H;s), 3,03-3,78 (10H;m), 3,70 (2H;s), 3,79;3,80 (3H;sx2), 5,04-5,05 (lH,m), 5,19 (2H;s), 6,83;6,84 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,20;7,22 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,22 (2H;d;J=8,6 Hz).

(6) K roztoku sloučeniny (0,67 g) připravené v referenčním příkladu 2-(5) ve směsi anisolu (0,67 ml) • ·

- 86 a kyseliny trifluoroctové (6,7 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,27 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 0,57 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 3 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3S)-3-(N-methyl-N-(4-ni trobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin-1-ylkarbony1]-1-(4-nitrobenzy loxykarbonyl )pyrrolidin (1) K roztoku sloučeniny (0,82 g) připravené v referenčním příkladu 1-(1) v tetrahydrofuranu (8 ml) byly postupně přidány triethylamin (0,62 ml) a chlorid (0,35 ml).Výs1edná směs byla míchána byla reakce ukončena přídavkem nasyceného methansulfony1ještě 1 h. Poté solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku.

Ke zbytku (1,16 g) byl přidán roztok 40% methylamin-methanol (18 ml) a směs zahřívána v tlakové láhvi na 100 °C, 4 h. Po dosažení laboratorní teploty byla směs zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Odparek (1,32 g) byl rozpuštěn v acetonitrilu (15 ml) a za chlazení ledovou lázní přidány N,N-di isopropylethylamin (1,4 ml) a 4-nitrobenzyl chlorformiát (1,73 g). Směs byla míchána při 0 °C 2 h. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (n-hexan/ethylacetát = 4/6-3/7) a získáno 1,42 g (3R)-1-t-butoxykarbony1-3-[N-methyl-N-(4-n i trobenzyloxykarbonyl)aminomethy1]pyrro1idinu.

• · • 9 · · · ·

- 87 Optická rotace: [α]β²⁵=-6,9° (C=l,0;CH3Cl)

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm*¹1696, 1608, 1524, 1480, 1455, 1404, 1366, 1347, 1293, 1255,

1211, 1191, 1170, 1152, 1125.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,45 (9H;s), 1,56-1,68 (lH;m), 1,89-2,01 (lH;m), 2,45-2,55 (lH,m), 2,98 (3H;s), 2,98-3,10 (lH;m), 3,27-3,57 (5H;m), 5,23 (2H;s), 7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,23 (2H;d;J=8,6 Hz).

(2) K roztoku sloučeniny (1,96 g) připravené v referenčním příkladu 3—(1) v methylenchloridu (25 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní kyselina trifluoroctová (3,8 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla reakční směs míchána ještě 2 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(4) a získáno 1,55 g (3S)-3-(N-methyl-(4-ni trobenzyloxykarhonyl)aminomethyl]pyrro1idinu.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,30-1,51 (lH;m), 1,81-1,97 (lH;m), 2,20-2,69 (3H;m),

2,85-3,06 (6H;m), 3,20-3,35 (2H,m), 5,22 (2H;s), 7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,22 (2H;d;J=8,6 Hz).

(3) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1thio)-1-(4n i trobenzyloxykarhonyl)-2-pyrroli d inkarboxylově kyseliny (1,52 g) v tetrahydrofuranu (15 ml) byl přidán

N,N-diisopropylethylam in (0,59 ml) a pivaloylchlorid (0,42 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (1,00 g) připravené v referenčním příkladu 3-(2) a N,N-diisopropylethylaminu (0,59 ml) v acetonitrilu (15 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(5) a získáno 2,08 g (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1• · · ·

- 88 thio)-2-[(3S)-3-(N-methyl-N-(4-nitrobenzyloxykarbony1)aminomethy 1 )pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-(4-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-11706, 1654, 1608, 1585, 1520, 1439, 1403, 1346, 1299, 1249,

1210, 1194, 1175, 1149, 1110.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,50-2,70 (5H;m), 2,92-4,08 (12H;m), 3,74 (2H;s), 3,80;3,81 (3H;sx2), 4,22-4,45 (lH;m), 4,98-5,33 (4H,m), 6,87 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,22-7,56 (6H;m), 8,20-8,30 (4H;m).

(4) K roztoku sloučeniny (2,03 g) připravené v referenčním příkladu 3-(3) ve směsi anisolu (2,00 ml) a kyseliny trifluoroctové (20 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,62 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 1—(6) a získáno 1,92 g titulní sloučeniny.

[Alternativní způsob přípravy titulní sloučeniny] (5) K roztoku (2S,4R)-4-hydroxy-l-(4-nitrobenzyloxykarbony 1 ) prol i nu (4,65 g) v bezvodém dimethylformamidu (60 ml) byl přidán (3S)-3-[N-methyl-N-(4~nitrobenzyloxykarbony 1 )) am i nomethy 1 ] pyrrol i d i n hydrochlorid (4,95 g),

N,N-diisopropylethylamin (5,23 ml), l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid hydrochlorid (4,03 g) a

1-hydroxybenzotriazol (2,23 g). Výsledná směs byla míchána 10 h při laboratorní teplotě. Poté byla reakční směs odpařena za sníženého tlaku, zbytek rozpuštěn v ethylacetátu. Vzniklý roztok byl promyt vodou a organická fáze vysušena síranem sodným. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek chromatografován na sloupci silikagelu. Z frakcí • · · · · eluovaných směsí ethylacetát/methanol = 9/1 bylo získáno

8,70 g (2S,4R)-4-hydroxy-2-[(3S)-3-[N-methy1-N-(4-nitrobenzyloxykarbonyl )aminomethy1]pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) 3402, 1706, 1654, 1607, 1522, 1436, 1346.	v max cm^-1:
NMR s	pektrum (400 MHz, DMSO-	de ) δ ppm
1,30-2,20	(3H;m), 2,30-2,60	(lH;m),	2,80-3,00	(3H,m),
3,00-3,80	(10H;m), 4,20-4,40	(lH;m),	4,40-4,60	(lH;m),
5,00-5,30	(4H;m), 7,50-7,70	(4H;m),	8,10-8,30	(4H;m).
(6) K	roztoku sloučeniny (8,70 g) připravené v	bodě (5)
v bezvodém	acetonitrilu (87 ml)	byly v	ledové lázni	přidány

triethylamin (2,72 ml) a methansulfonylchlorid (1,34 ml). Výsledná směs byla při téže teplotě míchána 5 min. Poté byla reakční směs odpařena za sníženého tlaku, zbytek rozpuštěn v ethylacetátu. Vzniklý roztok byl postupně promyt vodou a nasyceným solným roztokem a organická fáze vysušena síranem sodným. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku a zbytek chromatografován na sloupci silikagelu. Z frakcí eluovaných směsí ethylacetát/methanol = 18/1-14/1 bylo získáno 9,33 g (2S,4R)-4-methansulfonyloxy-2-[(3S)-3-[N-methy1-N-(4-nitrobenzyloxykarbony 1 )aminomethy1]pyrroli d in-l-y1karbony1]—1 — (4— -nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm'¹ :

1706, 1652, 1607, 1522, 1441, 1405, 1347.

NMR spektrum (400 MHz, DMSO-de) δ ppm:

1,50-2,20 (3H;m), 2,30-2,80 (3H;m), 2,90-3,05 (3H,m), 3,08 (3H;m), 3,10-3,70 (6H;m), 3,80-4,10 (2H;m), 4,50-4,70 (lH;m),

5,20-5,40 (4H;m), 7,40-7,50 (4H;m), 8,15-8,25 (4H;m).

(7) K roztoku sloučeniny (2,00 g) připravené v bodě (6)

- 90 v bezvodém dimethylformamidu (25 ml) byl přidán thioacetát (520 mg) a výsledná směs byla míchána 1,5 h při 75 °C. Po dosažení laboratorní teploty byla reakční směs zředěna ethylacetátem, promyta vodou a nasyceným solným roztokem a organická fáze vysušena síranem sodným. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu. Z frakcí eluovaných směsí ethylacetát/methanol = 100/1 bylo získáno 1,60 g (2S,4S)-4-acetythio-2-[(3S )-3-[N-methyl-N-(4-nitrobenzyloxykarbony1)aminomethy1]pyrroli din-1-ylkarbonyl]—1 — (4-nitrobenzy1 oxykarbonyl)pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1705, 1654, 1607, 1522, 1437, 1404, 1346.

NMR spektrum (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm:

1,70-2,10 (3H;m), 2,34 (3H;s), 2,40-2,70 (2H,m), 2,70-3,10 (3H;m), 3,10-3,70 (6H;m), 3,80-4,10 (2H;m), 4,11 (lH;t;J=9,l Hz), 4,40-4,60 (lH;m), 5,00-5,40 (4H;m),

7,40-7,60 (4H;m), 8,15-8,30 (4H;m).

(8) K roztoku sloučeniny (1,48 g) připravené v bodě (7) v methanolu (30 ml) a methylenchloridu (4,4 ml) byl v ledové lázni přidán IN methoxid sodný v ethanolu (2,3 ml). Výsledná směs byla při téže teplotě míchána 10 min. Poté byla do reakční směsi přidána IN kyselina chlorovodíková (2,4 ml) a výsledná směs odpařena za sníženého tlaku. Zbytek byl zředěn ethylacetátem. Vzniklý roztok byl postupně promyt vodou a nasyceným solným roztokem a organická fáze vysušena síranem sodným. Rozpouštědlo bylo oddestilováno za sníženého tlaku titulní sloučenina získána s výtěžkem 1,34 g ve formě prášku. Infračervené i NMR spektra výsledného produktu byla shodná s hodnotami naměřenými pro produkt postupu (4).

Referenční příklad 4 (2S,4S)-4-Merkapto-l-methy1-2-[(3S)-3-(N-methyl-N-(4-nitro• · benzyloxykarbonylaminomethy1)pyrrolidin-l-y1karbony1]pyrro1 idin

- 91 (1) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-1-methy1-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (0,49 g) v tetrahydrofuranu (5 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,30 ml) a pivaloylchlorid (0,21 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,46 g) připravené v referenčním příkladu 3-(2) a N,N-diisopropylethylaminu (0,30 ml) v acetonitrilu (10 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. byly spojeny, promyty nasyceným solným síranem sodným a odpařeny za sníženého solného roztoku Organické vrstvy roztokem, sušeny tlaku. Zbytek byl silikagelu (ethylacetát/methanol chromatografován = 6/4) a na sloupci z i skáno

1,76 g (2S,4S)-4-(4-methoxybenzyl thio) -l-methyl-2-[ (3S)-3-(N-methy1-N-(4-nitrohenzyloxykarbonylaminomethy1)pyrroli din-l-ylkarbony1]pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-11734, 1705, 1646, 1609, 1585, 1513, 1440, 1403, 1373, 1346, 1301, 1248, 1212, 1191, 1149, 1107.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm

1,55-2,18 (2H;m), 2,35;2,37

3,04;3,06 (3H;sx2), 3,10-3,88 (2H;s), 6,89 (2H;d;J=8,6 Hz), (3H;sx2), 2,41-2,70 (3H;m), (10H,m), 3,85 (2H;s), 5,27

7,27 (2H;d;J=7,9 Hz), 7,57 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,28 (2H;d;J=7,9 Hz).

(2) K roztoku sloučeniny (0,64 g) připravené v referenčním příkladu 4-(l) ve směsi anisolu (0,65 ml) a kyseliny trifluoroctové (6,5 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansuifonové (0,26 ml) .

Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h.

postupem jako 1,92 σ titulní odpařením za snizeneho tlaku. Odparek v acetonitrilu (20 mí) a za chlazení N,N-diisopropylethylamin (1,84 ml) • · ·· · ·· · · ·· ···· · · · · · · · · ···· · · ···· • · ··· · · · · ···· · • · · • · · ·

- 92 Reakční směs byla zpracována stejným v referenčním příkladu l-(6) a získáno sloučeniny. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 0,54 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 5 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-3-(N-methy1-N-(4-nitrobenzyloxykarbonyl )aminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-(4-nitrobenzy loxykarbony1)pyrrolidin (1) K roztoku sloučeniny (1,17 g) připravené v referenčním příkladu 2-(l) v tetrahydrofuranu (12 ml) byly postupně přidány triethylamin (0,89 ml) a methansulfonylchlorid (0,50 ml) za chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána 1 h. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku.

Ke zbytku (1,66 g) byl přidán roztok 40% methylamin-methanol (25 ml) a směs zahřívána v tlakové láhvi na 100 °C, 4 h. Po dosažení laboratorní teploty byla směs zahuštěna (1,89 g) byl rozpuštěn ledovou lázní přidány a 4-nitrobenzy1 chlorformiát (2,28 g). Směs byla míchána při 0 °C 2 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 3-(l) a získáno 1,92 g (3S)-1-t-butoxykarbony1-3-[N-methyl-N-(4-ni trobenzyloxykarbony1)aminomethy1]pyrro1id inu.

Optická rotace: [ ci ] d ^{2 5} =+7,2° (C=l,0;CH3Cl)

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm¹ :

1696, 1608, 1524, 1480, 1455, 1404, 1366, 1347, 1293, 1255,

1211, 1191, 1170, 1152, 1125.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,45 (9H;s), 1,56-1,68 (lH;m), 1,89-2,01 (lH;m), 2,45-2,55 (lH,m), 2,98 (3H;s), 2,98-3,10 (lH;m), 3,27-3,57 (5H;m), 5,22 (2H;s), 7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,23 (2H;d;J=8,6 Hz).

(2) K roztoku sloučeniny (0,84 g) připravené v referenčním příkladu 5-(l) v methylenchloridu (8 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní kyselina trifluoroctová (1,6 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla reakční směs míchána ještě 2 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(4) a získáno 0,58 g (3R)-3-(N-methyl-(4-ni trobenzyloxykarbony1)aminomethyl]pyrro1idinu.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,30-1,51 (lH;m), 1,81-1,97 (lH;m), 2,20-2,69 (3H;m),

(3) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-1-(4nitrobenzyloxykarhony1)-2-pyrrolidinkarboxylově kyseliny (0,92 g) v tetrahydrofuranu (10 ml) byl přidán

N,N-diisopropylethylamin (0,36 ml) a pivaloylchlorid (0,25 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny referenčním (0,55 g) připravené v a N,N-di isopropy1ethylaminu a výsledná směs byla míchána 30 min byla zpracována stejným postupem jako 1—(5) a získán 1,00 g thio)-2-[(3R)-3-(N-methyl-N-(4-ni trobenzyloxykarbony1)aminomethyl)pyrrolid in-l-ylkarbony1]-1-(4-ni trobenzyloxykarbony1)pyrrolidinu.

příkladu 5-(2) (0,36 ml) v acetonitrilu (10 ml) při 0 °C. Reakční směs v referenčním příkladu (2S,4S )-4-(4-methoxybenzyl• ·

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1706, 1654, 1608, 1585, 1520, 1438, 1403, 1346, 1299, 1249,

1210, 1194, 1175, 1148, 1109.

- 94 NMR spektrum 1,50-2,68 (5H;m), 3,79;3,80 (3H;sx2) (2H;d;J=8,6 Hz), (270 MHz, CDC13) δ ppm:

2,92-4,08 (9H;m), 2,97 (3H;s), 3,73 (2H;s), , 4,30-4,46 (lH;m), 4,97-5,35 (4H,m), 6,85 7,24 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,46 (2H;d;J=8,6 Hz),

7,51 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,23 (2H;d;J=8,6 Hz).

(4) K roztoku sloučeniny (0,99 g) připravené v referenčním příkladu 5-(3) ve směsi anisolu (1,00 ml) a kyseliny trifluoroctové (10 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluorměthansulfonové (0,30 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 1—(6) a získáno 0,90 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 6 (2S,4S)-4-Merkapto-1-methy1-2-[(3R)-3-(N-methyl-N-(4~nitrobe nzyloxykarbonyl)aminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrro1 idin (1) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-l-methyl-2-pyrrolidinkarboxy1ové kyseliny (0,50 g) v tetrahydrofuranu (5 ml) byl přidán N,N-diisopropylethylamin (0,31 ml) a pivaloylchlorid (0,22 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,47 g) připravené v referenčním příkladu 5-(2) a N,N-diisopropy1ethylam i nu (0,31 ml) v acetonitrilu (10 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 4-(l) a získán 0,67 g (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-l-methyl-2-[(3R)-3-(N-methyl-N-(4-ni trobenzyloxykarbonyl) am inomethy1)pyrrolid in-l-y1karbony1]pyrrolidinu.

- 95 Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-11705, 1647, 1609, 1585, 1512, 1440, 1403, 1301, 1248, 1212, 1191, 1149, 1107.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,50-2,12 (2H;m), 2,29;2,32 (3H;sx2), 2,37-2,66 (3H,m), 3,00;3,02 (3H;sx2), 3,00-3,88 (10H;m), 3,72 (2H;s), 3,81 (3H;s), 5,23 (2H;s), 6,85 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,23 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,53 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,24 (2H;d;J=8,6 Hz).

(4) K roztoku sloučeniny (0,59 g) připravené v referenčním příkladu 6-(l) ve směsi anisolu (0,60 ml) a kyseliny trifluoroctové (6,0 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,24 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 0,53 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 7 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-n itrobenzyloxykarbony1)-2-[(3R)-3-(4ni trobenzyloxykarbonylguanidinomethyl)pyrro1 id in-l-y1karbony 1 Ipyrrolidin (1) K roztoku sloučeniny (1,50 g) připravené v referenčním příkladu 1—(2) v acetonitrilu (15 ml) byl přidán trifenylfosfin (1,83 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. K reakční směsi byl přidán síran sodný hydrát (2,24 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. Po dosažení laboratorní teploty byl nerozpustný podíl odfiltrován a filtrát odpařen diethylether za sníženého a vzniklá tlaku. Ke sraženina zbytku byl odf i 1trována Odparek přilit

Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku.

(1,90 g) byl rozpuštěn v ethanolu (20 ml), k ttt • ·

- 96 roztoku přidán lH-pyrazol-l-karboxamidin hydrochlorid (1,02 g) a vzniklá směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 3 h. Po dosažení laboratorní teploty byla směs odpařena za sníženého tlaku. Odparek byl promyt diethyletherem.

Odparek (2,86 g) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (25 ml) a vodě (25 ml) a k roztoku byly postupně přidány 4-nitrobenzylchlorformiát (3,57 g) a vodný IN hydroxid sodný (33 ml) za chlazení ledovou lázní. Reakční směs byla míchána ještě 30 min při 0 °C. Dále byla reakční směs zředěna vodou a 3 x extrahována methylenchloridem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát/methanol = 9/1) a získáno 1,29 g (3R)-1-t-butoxykarbony1-3-(4-nitrobenzyl oxy kar bony lguan i d inomethy 1 )pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm¹ :

3393, 3327, 1693, 1652, 1641, 1604, 1523, 1408, 1347, 1289.

NMR spektrum (270 MHz, CDCls) δ ppm:

1,44 (9H;s), 1,68-1,52 (lH;m), 1,95-2,04 (lH;m), 2,36-2,48 (lH;m), 3,03 (2H,s), 6,72 (2H;d;J=8,6 Hz).

(1H;dd;J=11,2;7,2 Hz), (2H,široký s), 7,54

3,15-3,54 (5H;m), 5,19 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,20 (2) K roztoku v referenčním příkladu přidána za chlazení (2,2 ml). Po dosažení ještě 5 h. Reakční směs v referenčním příkladu sloučeniny (1,23 g) připravené 7-(l) v methylenchloridu (13 ml) byla ledovou lázní kyselina trifluoroctová laboratorní teploty byla směs míchána byla zpracována stejným postupem jako l-(4) a získáno 0,72 g (3S)-3-(4nitrobenzyloxykarbonylguanidinomethy1)pyrrolidinu (3) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1thio)-1(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (1,05 g) v tetrahydrofuranu (10 ml) byl přidán N,N-di isopropylethylamin (0,41 ml) a pivaloylchlorid r» « 9 9 4 • · · 1 «* 9 9 • ♦ 9 « • · ·· ·· · · ’ • 9 I

9· 99

- 97 (0,29 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,72 g) připravené v referenčním příkladu 7-(2) a N,N-diisopropylethylaminu (0,41 ml) v acetonitrilu (10 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát/methanol = 9/1) a získáno

0,93 g (2S,4S)-4-(4-methoxyhenzylthio)-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3R)-3-(4-ni trobenzyloxykarbonylguanidinomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm ¹1707, 1651, 1609, 1521, 1432, 1405, 1346, 1319, 1287, 1251, 1207, 1174, 1110.

NMR spektrum 1,55-2,71 (5H;m), (3H,s), 4,97-5,38

7,39-7,56 (4H;m), (270 MHz, CDCls) δ ppm:

2,96-4,40 (10H;m), 3,72;3,74 (2H;sx2), 3,79 (4H;m), 6,81-6,88 (2H;m), 7,20-7,25 (2H;m),

7,99-8,25 (4H;m).

(4) K roztoku sloučeniny (0,88 g) připravené v referenčním příkladu 7-(3) ve směsi anisolu (1,4 ml) a kyseliny trifluoroctové (14 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,31 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 1,28 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 8 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-n i trobenzy1oxykarbonyl)-2-[(3R) -3-(4-ni trobenzyloxykarbonylacet imidoylaminomethyl)pyrrolidin- 98 1-ylkarbonyl]pyrrolidin (1) K roztoku sloučeniny (1,00 g) připravené v referenčním příkladu l-(2) v acetonitrilu (10 ml) byl přidán trifenylfosfin (1,22 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. K reakční směsi byl přidán síran sodný dekahydrát (1,50 g) a zpětným chladičem 1 h.

výsledná směs zahřívána k varu pod Po dosažení laboratorní teploty byl nerozpustný podíl odfiltrován a filtrát odpařen za sníženého tlaku. Ke zbytku byl přilit diethylether a vzniklá sraženina odfiltrována. Filtrát byl odpařen za sníženého tlaku.

Odparek (1,27 g) byl rozpuštěn v acetonitrilu (25 ml), za chlazení ledovou lázní k roztoku přidán 4N HCl v ethylacetátu (1,1 ml) a směs míchána 15 min při 0 °C.

za chlazení ledovou lázní přidán karbonyl)acetamidin (1,15 g) a vzniklá °C 1,5 h. Po dosažení laboratorní teploty byla směs zředěna ethylacetátem. Vzniklá směs byla promyta nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, nasyceným solným roztokem, vysušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu a získáno 1,66 g (3R)-1-t-butoxykarbony1-3-[N-(4-ni trobenzyloxykarbonyl)acetimidoylaminomethyl)pyrroli dinu.

K reakční směsi byl N-(4-nitrobenzyloxysměs zahřívána při

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

3313, 3112, 1687, 1564, 1523, 1411, 1346, 1220.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,46 (9H;s), 1,58-1,72 (lH;m), 1,95-2,12 (lH;m), 2,16;2,25 (3H;sx2), 2,39-2,53 (lH;m), 3,00-3,11 (lH;m), 3,28-3,62 (5H;m), 5,20;5,23 (2H;sx2), 7,57 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,21 (2H;d;J=8,6 Hz).

přidána za chlazení (2,9 ml). Po dosažení (2) K roztoku sloučeniny (1,66 g) připravené v referenčním příkladu 8-(l) v methylenchloridu (17 ml) byla ledovou lázní kyselina trifluoroctová laboratorní teploty byla směs míchána

- 99 ještě 2 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(4) a získáno 0,81 g (3S)-3-[N(4-ni trobenzyloxykarbonyl)acetimi doylaminomethyl]pyrrolidinu.

(3) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-l(4-nitrobenzyloxykarbony1)-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (1,18 g) v tetrahydrofuranu (12 ml) byl přidán

N,N-diisopropylethylamin (0,46 ml) a pivaloylchlorid (0,33 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,81 g) připravené v referenčním příkladu 8-(2) a N,N-diisopropylethylaminu (0,46 ml) v acetonitrilu (10 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát/methanol = 95/5-9/1) a získáno 1,05 g (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-l-(4-nitrobenzyloxykarbony 1 ) -2 - [(3R)-3-(N-(4-ni trobenzyloxykarbony1)acetimidoy1aminomethy1)pyrrolidin-1-ylkarbony1]pyrroli dinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

3300, 3113, 3080, 1709, 1651, 1608, 1585, 1564, 1520, 1439,

1404, 1346, 1301, 1241, 1213, 1176, 1110.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,49-2,77 (8H;m), 3,03-4,12 (10H;m), 3,79 (2H;s), 3,84 (3H;s), 4,30-4,50 (lH;m), 5,04-5,40 (4H;m), 6,90 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,29 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,43-7,65 (4H;m),

8,16-8,32 (4H;m).

(4) K roztoku sloučeniny (1,02 g) připravené v referenčním příkladu 8-(3) ve směsi anisolu (1,5 ml) a kyseliny trif1uoroctové (15 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,36 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako • · · · ·

100 v referenčním příkladu l-(6) a získáno 1,35 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 9 (2S , 4S)-2~ [ (3S )-3-( N-cyklopropyl-N--( 4-ni trobenzyloxykarbonyl )aminomethy1)pyrroli din-1-ylkarhonyl]-4-merkapto1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (1) K roztoku sloučeniny (1,00 g) připravené v referenčním příkladu 1—(1) v tetrahydrofuranu (10 ml) byly postupně přidány triethylamin (0,83 ml) a methansulfony1chlorid (0,46 ml) za chlazení ledovou lázní. Výsledná směs byla míchána 1 h. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku.

Zbytek (1,53 g) byl rozpuštěn v methanolu (10 ml), k roztoku přidán cyklopropylamin (10 ml) a směs zahřívána v tlakové láhvi na 100 °C, 4 h. Po dosažení laboratorní teploty byla směs zahuštěna odpařením za sníženého tlaku. Odparek (1,93 g) byl rozpuštěn v acetonítrilu (20 ml) a za chlazení ledovou lázní přidány Ν,N-diisopropylethylamin (0,95 ml) a 4-nitrobenzy1 chlorformiát (1,18 g). Směs byla míchána při laboratorní teplotě 2 h. Reakce byla ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (n-hexan/ethylacetát = 4/6) a získáno

0,95 g (3S)-1-t-butoxykarbony1-3-[N-cyklopropyl-N-(4-nitrobenzy loxykarbony l)aminomethyl]pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (kapalný film) v max cm^-11697, 1607, 1524, 1494, 1479, 1453, 1405, 1366, 1346, 1288, • · • · • · · ·

101 1258, 1210, 1171, 1141, 1111.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

0,63-0,71 (2H;m), 0,78-0,87 (2H;m), 1,45 (9H;s), 1,55-1,68 (lH;m), 1,90-2,00 (lH;m), 2,50-2,67 (2H,m), 2,96-3,09 (lH;m),

3,18-3,59 (5H;m), (2H;d;J=8,6 Hz).

5,23 (2H;s), 7,53 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,23 (2) K roztoku v referenčním příkladu přidána za chlazení Po dosažení sloučeniny (0,77 g) připravené 9-(l) v methylenchloridu (12 ml) byla ledovou lázní kyselina trifluoroctová (1,4 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla reakční směs míchána ještě 3 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 1~(4) a získáno 0,72 g (3S)-3-[N-cyklopropyl-N-(4-ni trobenzyloxykarbonyl)aminomethyl] pyrrolidinu.

(0,72 g) připravené v a N,N-diisopropylethylaminu (3) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-1(4-ni trobenzyloxykarbonyl)-2-pyrroli dinkarboxylové kyseliny (1,00 g) v tetrahydrofuranu (10 ml) byl přidán

N,N-diisopropylethylamin (0,39 ml) a pivaloylchlorid (0,28 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny referenčním příkladu 9-(2) (0,39 ml) v acetonitrilu (10 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Poté byla reakce ukončena přídavkem nasyceného solného roztoku a reakční směs 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát) a získáno 0,93 g (2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-cyklopropy1-N-(4-n itrobenzyloxykarbonyl)aminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-4-(4-methoxybenztlthio)-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm“¹ :

1707, 1655, 1609, 1585, 1521, 1440, 1404, 1346, 1289, 1250,

1210, 1176, 1139, 1110.

• ·

- 102 NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

0,50-0,75 (2H;m), 0,75-0,95 (2H;m), 1,47-2,02 (3H;m), 2,32-2,74 (3H;m), 2,92-4,08 (9H;m), 3,73 (2H;s), 3,79;3,80 (3H;sx2), 4,26-4,45 (lH;m), 4,97-5,34 (4H;m), 6,85 (2H;d;J=8,6 Hz), 7,23;7,25 (2H;dx2;J=8,6 Hz), 7,46;7,53 (2H;dx2;J=8,6 Hz), 8,23 (2H;d;J=8,6 Hz).

(4) K v referenčním roztoku sloučeniny (0,82 g) připravené příkladu 9-(3) ve směsi anisolu (0,8 ml) a kyseliny trifluoroctové (8 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,24 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 0,77 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 10 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-n i trobenzyloxykarbonyl)-2-[(3S)-3-(4-ni trobenzyloxykarbonylacet imidoylaminomethyl)pyrrolidin-1-yIkarbonyl]pyrrolidin (1) K roztoku sloučeniny (1,00 g) připravené v referenčním příkladu 2-(2) v acetonitrilu (10 ml) byl přidán trifenylfosfin (1,22 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. K reakční směsi byl přidán síran sodný dekahydrát. (1,50 g) a zpětným chladičem 1 h.

Odparek (1,33 g) byl rozpuštěn v acetonitrilu (25 ml), za chlazení ledovou lázní k roztoku přidán 4N HCI v ethylacetátu (1,1 ml) a směs míchána 15 min při 0 °C. K reakční směsi byl lázní přidán za chlazení ledovou

N-(4-nitrobenzyloxykarbony1)acetamidin (1,15 g) a vzniklá směs zahřívána při

- 103 50 °C 1,5 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 8-(l) a získáno 1,58 g (3S)-1-t-butoxykarbony 1-3-[ N— (4-nitrobenzyloxýkarbony1)acetimidoylaminomethyl)pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

3314, 3112, 1690, 1565, 1523, 1409, 1346, 1221.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,46 (9H;s), 1,58-1,72 (lH;m), 1,95-2,12 (lH;m), 2,16;2,25 (3H;sx2), 2,39-2,53 (lH;m), 3,00-3,11 (lH;m), 3,28 (5H;m), 5,20;5,23 (2H;sx2), 7,57 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,21 (2H;d;J=8,6 Hz).

(2) K roztoku sloučeniny (1,58 g) připravené v referenčním příkladu 10-(1) v methylenchloridu (15 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní kyselina trifluoroctová (2,9 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 2 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(4) a získáno 0,97 g (3R)-3-[N(4-nitrobenzyloxýkarbony1)acetimidoylaminomethyl]pyrroli d inu.

(3) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-l(4-nitrobenzyloxýkarbony1)-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (1,06 g) v tetrahydrofuranu (10 ml) byl přidán

N,N-diisopropylethylamin (0,41 ml) a pivaloylchlorid (0,29 ml) za chlazení ledovou lázní. Vzniklá směs byla míchána 10 min při 0 °C. K reakční směsi byl přidán roztok sloučeniny (0,76 g) připravené v referenčním příkladu 10-(2) a N , N-di isopropy1ethylaminu (0,41 ml) v acetonitrilu (10 ml) a výsledná směs byla míchána 30 min při 0 °C. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu 8-(3) a získáno 1,00 g (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-1(4-n i trobenzyloxýkarbony1)-2-[(3S)-3-(N-(4-ni trobenzyloxykarbonyl)acetimidoylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrro1idinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm*¹

- 104 3296, 3113, 3080, 1708, 1680, 1652, 1608, 1584,

1432, 1405, 1346, 1301, 1239, 1216, 1176, 1110.

1564, 1521,

NMR spektrum 1,60-1,80 (8H;m), 4,32-4,52 (lH;m) 7,28 (2H;d;J=8,6 (270 MHz, CDCla ) δ ppm: 3,02-4,10 (9H;m), 3,78 , 5,02-5,38 (4H;m), 6

Hz), 7,45-7,69 (4H;m), 8 (2H;s), 3,83 (3H;s), 90 (2H;d;J=8,6 Hz), 20-8,34 (4H;m).

(4) K roztoku sloučeniny (1,00 g) připravené v referenčním příkladu 10-(3) ve směsi anisolu (1,0 ml) a kyseliny trifluoroctové (10 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,20 ml). Po dosažení laboratorní teploty byla směs míchána ještě 1 h. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 0,93 g titulní sloučeniny.

Referenční příklad 11 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-ni trobenzyloxykarbony1)-2-((3S)-3-(4nitrobenzyloxykarbonylguanidinomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony 1 ]pyrro1id in (1) K roztoku sloučeniny (1,01 g) připravené v referenčním příkladu 2-(2) v acetonitrilu (10 ml) byl přidán trifenylfosfin (1,23 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. K reakční směsi byl přidán síran sodný hydrát (1,51 g) a výsledná směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 1 h. Po dosažení laboratorní teploty byl nerozpustný podíl odfiltrován a filtrát odpařen za sníženého tlaku. Ke d i ethylether byl odpařen za zbytku byl přilit odfiltrována. Filtrát byl chromatografován na a vzniklá sraženina sníženého tlaku. Zbytek silikagelu sloupe i (ethylacetát/methanol = 1/1) a získáno 840 mg (3S)-3-aminomethy1-1-t-butoxykarbonyIpyrrolidinu

HPLC

NMR data výsledného produktu byla shodná s hodnotami naměřenými pro sloučeninu

- 105 referenčního příkladu l-(9).

(2) K roztoku sloučeniny (840 mg) připravené v bodě (1) v ethanolu (14 ml) byl přidán lH-pyrazol-l-karhoxamidin hydrochlorid (686 mg) a vzniklá směs zahřívána k varu pod zpětným chladičem 3 h. Po dosažení laboratorní teploty byla směs odpařena za sníženého tlaku. Odparek byl promyt d i i sopropyletherem.

Odparek (1,50 g) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (20 ml) a vodě (20 ml) a k roztoku byly postupně přidány 4-nitrobenzylchlorformiát (2,41 g) a vodný IN hydroxid sodný (22 ml) za chlazení ledovou lázní. Reakční směs byla míchána ještě 30 min při 0 °C. Dále byla reakční směs zředěna vodou a 3 x extrahována ethylacetátem. Organické vrstvy byly spojeny, promyty nasyceným solným roztokem, sušeny síranem sodným a odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát/methanol = 25/1) a získáno 746 mg (3S)-l-t-butoxykarhonyl-3-(4-nitrobenzyloxykarbonylguanidinomethyl)pyrrolidinu.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,44 (9H;s), 1,68-1,52 (lH;m), 1,95-2,04 (lH;m), 2,36-2,48 (lH;m), 3,03 (1H;dd;J=11,1;7,1 Hz), 3,15-3,54 (5H;m), 5,19 (2H,s), 6,70 (2H,široký s), 7,54 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,20 (2H;d;J=8,6 Hz).

(3) K roztoku sloučeniny (701 mg) připravené v bodě (2) v ethylacetátu (7 ml) byla přidána 4N HCl v ethylacetátu (3,3 ml) a výsledná směs míchána při laboratorní teplotě 1 h. Reakční směs byla zahuštěna. Zbytek byl promyt diethyletherem a získáno 647 mg (3S)-3-(4-nitrohenzyloxykarbonylguanidinomethyl)pyrrolidin hydrochloridu.

(4) K roztoku (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1thio)-1(4-nitrohenzyloxykarhonyl)-2-pyrrolidinkarboxylové kyseliny (947 mg) v N,N-dimethylformamidu (10 ml) byl přidán

N,N-di isopropylethylamin (0,369 ml), sloučenina (647 mg) • 4 • · • 4

4

- 106 připravená v bodě (3), 1-ethy1-3-(3-dimethylaminopropy1)karbodiimid hydrochlorid (406 mg) a 1-hydroxybenzotriazol (286 mg). Vzniklá směs byla míchána přes noc při laboratorní teplotě. K reakční směsi byl přidán ethylacetát. Organická fáze byla promyta vodou, nasyceným solným roztokem, sušena síranem sodným a odpařena chromatografován na sloupci = 12/1) a získáno 1,13 g za sníženého tlaku. Zbytek byl silikagelu (ethylacetát/methanol (2S,4S)-4-(4-methoxybenzylthio)-1-(4-nitrobenzyloxykarbony1)-2-[(3S)-3-(4-ni trobenzyloxykarbony lguanidinomethyl )pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidinu.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 : 1708, 1520, 1251, 1032, 739.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

3,71;3,73 (2H;sx2), 3,77

4,95-5,25 (4H;m), 6,87 (2H;m), 7,45-7,65 (4H;m),

1,5-2,7 (5H;m), 2,9-3,6 (10H;ra), (3H,s), 3,80-3,90 (lH;m), (2H;d;J=8,45 Hz), 7,25-7,28 8,15-8,3 (4H;m).

(5) K roztoku sloučeniny (1,10 g) připravené v bodě (4) ve směsi anisolu (1,65 ml) a kyseliny trifluoroctové (8 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,26 ml). Při této teplotě byla směs míchána ještě 30 min. Reakční směs byla zpracována stejným postupem jako v referenčním příkladu l-(6) a získáno 926 mg titulní sloučeniny.

Referenční příklad 12 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-n itrobenzyloxykarbony1)-2-[(3R)-3~ (pyrrolidin-l-ylmethyl)pyrroli di n-l-y1karbony1]pyrro1idin (1) K roztoku (3S)-3-(pyrrolidin-l-ylmethy1)pyrroli din hydrochloridu (367 mg), připraveného z (3R)-1-t-butoxykarhonyl-3-hydoxymethylpyrrolidinu, v bezvodém Ν,N-dimethy1formamidu (10 ml) byla přidána (2S,4S)-4-(4-methoxy• ·

- 107 benzylthio)-1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-pyrrolidinkarboxylová kyselina (804 mg), N,N-diisopropylethylamin (1,16 ml), hydroxybenzotriazol (243 mg) a l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid hydrochlorid (483 mg). Vzniklá směs byla míchána 10 h při laboratorní teplotě. Poté bylo rozpouštědlo oddestilováno za snížeého tlaku a zbytek zředěn ethylacetátem. Vzniklý roztok byl promyt vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze byla sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Zbytek byl chromatografován na sloupci silikagelu (ethylacetát/methanol = 5/1-1/1) a získáno 362 mg (2S,4S)-4-(4-methoxybenzy1thio)-2-[(3R)-3-(pyrrolidin-l-ylkarbony1]-l-(4-ni trobenzyloxykarbonyl)]pyrrolidinu.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1,00-2,00 (3H;m), 2,00-3,00 (2H;m), 3,00-4,20 (17H;m), 3,73 (2H,s), 3,79 (3H;s), 4,32-4,46 (lH;m), 4,90-5,40 (2H;m), 6,85 (2H;d;J=8,5 Hz), 7,24 (2H;d;J=8,5 Hz), 7,46 (2H;d;J=8,6 Hz), 8,23 (2H;d;J=8,6 Hz).

(2) K roztoku sloučeniny (362 mg) připravené v bodě (1) ve směsi anisolu (0,68 ml) a kyseliny trifluoroctové (3,4 ml) byla přidána za chlazení ledovou lázní a míchání kyselina trifluormethansulfonová (0,14 ml). Při této teplotě byla směs míchána ještě 30 min. Trifluoroctová kyselina byla oddestilována za sníženého tlaku. Zbytek byl promyt hexanem a etherem, sušen za sníženého tlaku a po přidání nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, extrahován ethylacetátem. Organická fáze byla promyta solným roztokem, sušena síranem sodným a odpařena za sníženého tlaku. Bytlo získáno 287 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 :

1697, 1525, 1246.

Referenční příklad 13

- 108 (2S,4S)-2-[(3R)-3-(N-2-Hydroxyethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbony1aminomethy1)pyrrolid in-l-ylkarbony1]-4-merkapto-l-(4-nitrobenzy loxykarbony1)-pyrroli din (3S)-3-(N-2-Hydroxyethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin hydrochlorid (197 mg) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) a získáno 214 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

NMR spektrum (270 MHz, CDCI3) δ ppm:

1.50- 2,20 (2H;m), 2,50-2,90 (2H;m), 2,90-4,10 (12H;m),

4,15-4,30 (2H;m), 4,40-4,55 (lH;m), 5,20-5,30 (4H;m),

7.50- 7,60 (4H;m), 8,19-8,28 (4H;m).

Referenční příklad 14 (2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-karbamoy1methyl-N-4-nitrobenzyloxykarbony1 ami nomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-4-merkapto-l-(4-nitrobenzy loxykarbony 1 )-pyrrolidin (3S)-3-(N-Karbamoylmethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylaminomethy1)pyrrolidín hydrochlorid (261 mg) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) a získáno 368 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm ¹ : 3371, 2948, 2879, 1706, 1645, 1608, 1522, 1347, 1259.

NMR

1.40- 2,05 3,60-4,95

7.40- 7,70 spektrum (2H;m) (4H;m) (4H;m), (400 MHz, DMSO-de)) δ ppm: , 2,30-2,75 (3H;m), , 4,30-4,60 (lH;m),

8,10-8,30 (4H;m).

2,90-3,60 5,00-5,30 (5H;m), (4H;m),

Referenční příklad 15 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-ni trobenzyloxykarbony1 ) - 2- [(3S)-3 ·· ·· ► · · ⁴ » · ·· • · · · « • · « ·· ·· ·· ·« ♦ · « ⁴

109 (N-2-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbony laminomethy1]pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin (3S)-3-(N-2-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethyl-N-4-ni trobenzy1oxykarbonylami nomethy1]pyrrolidin hydrochlorid (195 mg) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) a získáno 248 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr)

1705, 1648, 1607,

1521, 1437, 1347.

v max cm^{- 1}

NMR spektrum 1,50-2,10 (3H;m)

3,80-4,00 (lH;m) 5,15-5,30 (6H;m), (270 MHz, CDCI3+CD3OD)) , 2,60-2,80 (2H;m), , 4,00-4,20 (lH;m), δ ppm: 3,00-3,70

4,40-4,60

7,45-7,60 (6H;m), 8,10-8,30 (6H;m).

(HH;m) , (lH;m),

Referenční příklad 16 (2S,4S)-2-((3S)-3-(N-2-Dimethylaminoethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbony laminomethy1)pyrroli d in-l-y1karbony1]-4-merkapto-l-(4nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin (3S)-3-(N-2-Dimethylaminoethyl-N-4-ni trobenzyloxykarbonylaminomethyl)pyrrolidin dihydrochlorid (302 mg) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) a získáno 461 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Referenční příklad 17 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-3-[N-2-(N-methyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethy1-N-methylaminomethy1]pyrrolidin-l-ylkarbonyl] -1-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)pyrrolidin ·· · · • · ··

- 110 ··· (3S)-3-[N-2-(N-Methyl-N-4-nitrobenzyloxykarbonylamino)ethy1 -N-methylaminomethyl]pyrrolidin dihydrochlorid (580 mg) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) a získáno 628 mg titulní sloučeniny ve formě prášku.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm¹ :

1699, 1645, 1523, 1442, 1347.

NMR spektrum (270 MHz, DMSO-de)) δ ppm:

1,40-2,00 (3H;m), 2,00-4,10 (21H;m), 4,30-4,60 (lH;m),

5,00-5,30 (4H;m), 7,51-7,65 (4H;m), 8,21-8,28 (4H;m).

Referenční příklad 18 (2S,4S)-2-[(3S)-3-(N-2-Fluoroethy1-N-4-nitrobenzyloxykarbony1aminomethy1)pyrrolid in-l-ylkarbony1]-4-merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbony1)pyrrolidin (3S)-3-(N-2-F1uoroethy1-N-4-ni trobenzyloxykarbonylaminomethyl )pyrrol idin hydrochlorid (261 mg) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 19 (2S,4S)-4-Merkapto-2-[(3R)-3-[l-methyl-2,3-bis(4-nitrobenzyloxykarbonyl )guani d inomethy1]pyrroli d i n-1-ylkarbonyl]-1-(4-ni trobenzy loxykarbonyl )pyrrolidin (3S)-3-[N-2-(1-methy1-2,3-bis(4-nitrobenzyloxykarbonyl)guanidinomethyl]pyrrolidin hydrochlorid (1,20 g) byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) a získáno 996 mg titulní sloučeniny.

Infračervené absorpční spektrum (KBr) v max cm^-1 • ·

·· ··

1754, 1709, 1645, 1608, 1521, 1441, 1405, 1347.

- 111 NMR spektrum (270 MHz, DMS0-d6)) δ ppm:

1,50-2,00	(2H;m),	2,60-2,80	(lH;m),	2,90-3,05	(4H;m),
3,10-3,60	(7H;m),	3,65-3,80	(2H;m),	3,80-4,05	(lH;m),
4,30-4,60	(lH;m),	5,00-5,30	(6H;m),	7,45-7,70	(6H;m),

8,05-8,30 (6H;m).

Referenční příklad 20 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3R)-3(N-4-nitrobenzyloxykarbonylacetimidoy1-N-methylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyllpyrrolidin (3S) -3-(N-4-Nitrobenzyloxykarbonylacetimi doyl-N-methy1aminomethyl)pyrrolidin hydrochlorid byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 21 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-ni trobenzyloxykarbonyl) — 2 — [(3R)-3(N-4-nitrobenzyloxykarbonylformimidoyl-N-methy1aminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyllpyrrolidin (3S)-3-(N-4~N i trobenzyloxykarbonylform i m i doy1-N-methy1aminomethyl)pyrrolidin hydrochlorid byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 22 (2S,4S)-4-Merkapto-l-(4-n itrobenzyloxykarbonyl)-2-[(3R)-3~(N-2,2,2-trifluorethyl-N-4-ni trobenzyloxykarbonylaminomethyl) pyrroli din-1-ylkarbonyllpyrrolidin • ·

- 112 (3S)-3-(N-2,2,2-Trifluorethyl-N-4-nitrobenzyloxykarbony1aminomethyl)pyrrolidin hydrochlorid byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 23 (2S , 4S)-4-Merkapto-l-(4-nitrobenzyloxykarbony1)-2-[(3R)-3-(4-ni trobenzyloxykarbonylformimidoylaminomethyl)pyrrolidin-1-ylkarbonyl]pyrrolidin (3S)-3-(N-4-ni trobenzyloxykarbonylformimidoyImethylaminomethyl )pyrrolidin hydrochlorid byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 24 (2S,4S)-2-[(3S)-3-[2,3-Bis(4-n i trobenzyloxykarbony1)guanidinomethyl ]pyrroli d in-l-ylkarbonyl]-4-merkapto-1-methy1pyrrolidin (3S)-3-[2,3-Bis(4-ni trobenzy1oxykarbony1)guanid inomethyl]pyrrolidin byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 4 - (1) a (2) za vzniku titulní s1oučen i ny.

Referenční příklad 25 (2S,4S)-4-Merkapto-l-methy1-2-[(3S)-3-(4-ni trobenzyloxykarbony1 acetimidoylaminomethyl)pyrrolid i n-l-ylkarbonyl]pyrroli d i n (3S)-3-(N-4-N i trobenzyloxykarbonylacet imidoylaminomethyl)pyrrolidin byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno

- 113 v referenčním příkladu 4-(l) a (2) sloučeniny.

za vzniku titulní

Referenční příklad 26 (2S,4S) - 4-Merkapto~1-methy1-2-[(3R)-3-(4-nitrobenzyloxykarbony1formim i doylaminomethyl)pyrrolid in-l-ylkarbony1]pyrrolidin (3S)-3-(N-4-Nitrobenzyloxykarbonylformimidoylaminomethyl)pyrrolidin byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 4—(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 27 (2S,4S)-2-[(3R)-3-[l-Methyl-2,3-bi s(4-nitrobenzyloxykarbony1)guanidinomethyl]-4-merkapto-1-methylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin (3S)-3-[l-Methy1-2,3-bis(4-nitrobenzyloxykarbony1)guanidinomethyl ] pyrrol idin byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 12-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Referenční příklad 28 (2S , 4S ) -4-Merkapto-1-methy1-2-[(3S)-3-(4-nitrobenzyloxykarbony 1acetimidoylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin (3S)-3-(N-4-N itrobenzy1oxykarbonylácetimidoylaminomethyl)pyrrolidin byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 4-(1) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

• · · · • · · ·

- 114 Referenční příklad 29 (2S,4S)-4-Merkapto-l-methyl-2-[(3R )-3-(N-4-nitrobenzyloxykarbonylformimidoy1-N-methylaminomethyl)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin (3S)-3-(N-4-N itrobenzyloxykarbonylformimidoy1-N-methy1aminomethyl)pyrrolidin byl zpracován stejným postupem jako je uvedeno v referenčním příkladu 4-(l) a (2) za vzniku titulní sloučeniny.

Test 1

Antibakteriální aktivita in vitro

Antibakteriální aktivita byla stanovena metodou postupného ředění na agarových plotnách. Byla zjišťována koncentrace inhibitoru pro minimální růst (MIC: ug/ml) u různých patogenních bakterií. Výsledky testů antibakteriální aktivity předkládaných sloučenin z příkladů 3 a 7 proti Staphylococcus aureus 209P, Escherichia a Pseudomonas aeruginosa č. 7 Sloučeniny A a B používané sloučeniny z příkladu 3 japonské patentové přihlášky Kokai č. Hei 5-310740 [sloučeniny obecného vzorce I předkládaného jsou uvedeny co li NIHJ v tabulce 2.

jako srovnávací látky jsou vynálezu, vazebném

Sloučenina konfiguraci S.

kde R¹ , mí stě

B má r<

R³ jsou vodík]. Sloučenina A má ve aminomethylové skupiny konfiguraci R. ve vazebném místě aminomethylové skupiny • ·

- 115

Tabulka 2

Koncentrace inhibitoru pro minimální růst (MIC: ug/ml)

Testovaný bakteriální kmen

Staphylococcus aureus 209P

Escherichia Pseuáomonas coli NIHJ aeruginosa č.l

Sloučenina	Př.	3	0,02	0,02	0,05
Sloučenina	př.	7	0,02	0,02	0,05
Sloučenina	A		0,02	0,02	0,1
Sloučenina	B		0,02	0,02	0,1

Stanovení bylo prováděno v Mueller-Hintonově II agaru (MHA Becktom Dikinson Microbiology activity)

Test 2

Antibakteriální aktivita in vitro

Byla stanovena antibakteriální aktivita předkládaných sloučenin z příkladů 3 a 7 a meropenemu proti Staphylococcus aureus 209P, Escherichia coli NIHJ a Pseuáomonas aeruginosa 3719 (kmen tesistentní vůči meropenemu). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

• · · · « · · · • · · · · · • · · · · • · · · • · ··· · • · ·

116 ·*

Tabulka 3

Koncentrace inhibitoru pro minimální růst (MIC: ug/ml)

	Testovaný	bakteriální	kmen
	Staphylococcus	Escherichia Pseudomonas
	aureus 209P	co li NIHJ	aeruginosa	3719
Sloučenina př. 3	/0,01	10,01	0,2
Sloučenina př. 7	10,01	10,01	0,1
Meropenem	0,02	10,01	6,2
Stanovení bylo prováděno	v mediu Nutrient Agar	Eiken
(Eiken Chemicals	Co., Ltd.)
Test 3
Kultura testovaného bakteriálního	• kmene	byla
intraperi toneálně	naočkována do	skupiny	myší (SPF,	DDY,
samc i ) , v každé	skupině bylo	7 zvířat.	Roztok testované
sloučeniny byl myším podán subkutánně ve dvou dávkách, poprvé
okamžitě a po	druhé 4 h po	očkování.	Z podílu	myší
přežívajících 5	dní po vnesení	infekce byla stanovena 50%

účinná dávka (EDso: mg/kg) postupem Probit a byla určena jednorázová dávka testované sloučeniny.

Výsledky test sloučenin příkladu 3 a 7 a Meropenemu proti Pseudomooas aerug inosa 1008 jsou uvedeny v tabulce 4. Sloučenina A je popsána výše.

·· ·· • · • ·

- 117 Tabulka 4

Léčba infekce (EDso:mg/kg)

Testovaný bakteriální kmen

Pseudomonas aeruginosa 3719

Sloučenina př. 3 0,2

Sloučenina př. 7 0,1

Meropenem 6,2

Výše uvedené výsledky naznačují, že předkládané sloučeniny mají silné antibakteriální účinky při testech in vitro i při léčbě infekcí in vivo. Konkrétně, při porovnání s aminomethylenovými sloučeninami [sloučeniny obecného vzorce

I předkládaného vynálezu, kde R^{* 1}, R^z a R³ jsou vodík; sloučeniny A a B uvedené v japonské patentové přihlášce Kokai č. Hei 5-310740] vykazují předkládané sloučeniny (např. sloučenina příkladu 3) nejlepší antibakteriální účinky proti Pseudomonas aeruginosa. Předkládané sloučeniny jsou zejména účinn proti Pseudomonas aeruginosa 3719, rezistentnímu vůči Meropenemu.

Předkládané sloučeniny (např. sloučenina příkladu 3) mají vynikající farmakokinetické vlastnosti, jako je poločas v krvi. Při podání předkládaných sloučenin králíkům bylo zjištěno, že míra inkorporace do ledvinové kůry je relativně nízká. Intravenózní podání sloučeniny příkladu 3 králíkům v dávce 200 mg/kg nemělo nefrotoxické účinky.

• ·

118

Příklad přípravy farmaceutického přípravku 1

Injekce

V 5 ml destilované vody na injekce bylo rozpuštěno 500i mg sloučeniny příkladu 3. Roztok byl přefiltrován přes filtr určený na sterilizaci roztoků a lyofilizován za vzniku lyofolizovaného přípravku pro injekce.

Příklad přípravy farmaceutického přípravku 2

Tablety

Sloučenina příkladu 3	50	mg
Laktóza	126	mg
Obilný škrob	23	mg
Magnézium stearát	1	mg

200 mg

Složky uvedené výše, každá v práškové formě, byly smíchny, granulovány za vlhka s obilným škroběm, sušeny a tabletovány na tabletovacím stroji. Byly připraveny tablety o hmotnosti 200 mg. Pokud je žádoucí, lze připravené tablety potahovat cukrem.

Průmyslová využitelnost

Předkládané 1-methylkarbapenemové deriváty obecného vzorce I jsou jako látky s antibakteriálními účinky, vysokou chemickou i biologickou stabilitou a nízkou nefrotoxicitou, farmaceuticky využitelné při výrobě léčiv.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY • · · · · · • 0 0 0 0 · 0 0 0 0 0 • · 000 0 0 • 0 0 0 Sloučenina 1-methylkarbapenemu obecného vzorce I: ,R2 N / \ R3 hydroxyl, substituovaný 1 nebo 2 kde: R1 je vodík nebo nižší alkyl; R2 je vodík nebo nižší alkyl; a R3 je vodík, nižší alkyl, nižší alkyl nesoucí 1 až 3 substituenty (ze skupiny substituentů halogen, karbamoyl, karbamoyl nižšími alkyly, karbamoyloxy, karbamoyloxy substituovaný 1 nebo 2 nižšími alkyly, nižší alkoxy, amino nebo amino substituovaná 1 nebo 2 nižšími alkyly), cykloalkyl nebo skupina obecného vzorce -C(=NH)R4 (kde R4 je vodík, nižší alkyl nebo amino), nebo R2 a R3 spolu vytvářejí alkylenovou skupinu případně přerušenou jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry (dusíkový atom je případně substituován nižším alkylem); za podmínky, že R1, R2 a R3 nejsou současně vodík; nebo farmaceuticky přijatelná sůl nebo derivát definované sloučeniny. R3

-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-guanidinomethy1pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-guanidi nomethy1pyrroli din-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-N-methyl-N-formimidoyl• · · · * • ·

124 aminomethy1pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-l-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)-3-N-methy1-N-formimidoy1aminomethy1pyrroli di n-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen~2-em-3karhoxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-N-methyl-N-acetimidoylaminomethylpyrroli d in-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (1R,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S )-3-N-methy1-N-acetimidoy1aminomethylpyrrolidin-l-ylkarhonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-(1-methylguanidinomethy 1)pyrroli d in-1-y1karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]~
2-karbamoylethyl, N-methyIkarbamoylmethyl, N,N-dimethylkarbamoylmethyl, 2-methoxyethyl, 2-karbamoyloxyethyl, 2-aminoethyl, 2-(methylamino)ethyl, 2-(dimethylamino)ethyl, cyklopropyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidin, nebo

R² a R³ spolu vytvářejí trimethylen, tetramethylen, pentamethy1en, ethylenoxyethylen, ethy1enthioethylen, ethylenaminoethylen, ethylen(methylami no)ethylen, ethylenaminopropylen;

nebo farmaceuticky přijatelná sůl nebo derivát definované sloučeniny.

2-fluorethyl, 2,2,2-trifluorethy1, karbamoylmethyl,
3. Sloučenina 1-methylkarbapenemu obecného vzorce I podle nároku 1, kde:

R¹ je vodík nebo methyl nebo ethyl;

R² je vodík nebo methyl nebo ethyl; a

R³ je vodík nebo methyl, ethyl, 2-hydroxyethy1,

3 substituenty (ze halogen, karbamoyl,

Ci-4 alkyly, karbamoyloxy, karbamoyloxy substituovaný 1

Sloučenina 1-methylkarbapenemu obecného vzorce I podle nároku 1, kde:

R¹ je vodík nebo C1-4 alkyl;

R² je vodík nebo C1-4 alkyl; a je vodík, C1-4 alkyl, Ci-4 alkyl nesoucí 1 až skupiny substituentů hydroxyl, karbamoyl substituovaný 1 nebo 2

120 nebo 2 C1-4 alkyly, C1-4 alkoxy, amino nebo amino substituovaná 1 nebo 2 C1-4 alkyly), C3-6 cykloalkyl nebo skupina obecného vzorce -C(=NH)R⁴ (kde R⁴ je vodík, C1-4 alkyl nebo amino), nebo

R² a R³ spolu vytvářejí C2 - 6 alkylenovou skupinu případně přerušenou jedním atomem kyslíku, dusíku nebo síry (dusíkový atom případně nese C1-4 alkyl);

nebo farmaceuticky přijatelná sůl nebo derivát definované sloučeniny.
4. Sloučenina 1-methylkarbapenemu obecného vzorce I podle nároku 1, kde:

R¹ je vodík nebo methyl;

R² je vodík nebo methyl; a

R³ je vodík, methyl, 2-hydroxyethy1, karbamoylmethyl, 2-aminoethyl, 2-(methylamino)ethyl, cyklopropyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidin, nebo

R² a R³ spolu vytvářejí tetramethylen;

nebo farmaceuticky přijatelná sůl nebo derivát • · • · ·

- 121

-ni definované sloučeniny.
5. Sloučenina 1-methylkarbapenemu obecného vzorce I podle nároku 1, kde:

R¹ je vodík nebo methyl;

R² je vodík nebo methyl; a

R³ je vodík, methyl, formimidoyl, acetimidoyl nebo amidin, nebo farmaceuticky přijatelná sůl nebo derivát definované sloučeniny.

Stereoizomer 1-methylkarbapenemu I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5 obecného vzorce nebo obecného vzorce /

R2

R3 a jeho farmaceuticky přijatelná sůl nebo derivát.
-6-[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(1-methylguanidinomethyl )pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(3R)-3-aminomethyl)pyrrolidin-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-l-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (ÍR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-aminomethy1)pyrrolidin-1-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6~[(IR)-1-hydroxyethy 1 ]-l-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2 -((3R)-3-methylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarhonyl]-1• · • ·· ··

- 125

-methylpyrrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-methylaminomethyIpyrrolidin-1-y1karbony1]-1-methyIpyrrolid in-4-y1thio]-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-formimidoylaminomethy1pyrrolidin-l-ylkarbony1]-1-methyIpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em~3-karboxy lová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-formimidoylaminomethy1pyrroli din-1-ylkarbony1]-1-methyIpyrrolidin-4-ylthio]-6- [ (IR)-1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karhoxy lová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-acetimidoylaminomethy1pyrrolid i n-1-ylkarbony1]-1-methyIpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karhapen-2-em-3-karboxy lová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-acet imidoylaminomethy1pyrrolidin-l-ylkarbony1]-1-methyIpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl] -1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxy lová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-guanidinomethy1pyrrolidi n-1-ylkarbony1]-1-methy1pyrro1idin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karhoxy lová kyselina (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)~3~guani d inomethy1pyrroli d in-1-ylkarbony1]-1-methyIpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(lR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxy lová kyselina • · • ·

- 126 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-N-methyl-N-formimidoylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]-l-methylpyrrolidin-4ylthio]-6-I(lR)-l-hydroxyethyl]-1-methy1-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3S)-3-N-methyl-N-formimidoylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]-l-methylpyrrolidin-4ylthio]-6-[(1R)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-N-methy1-N-acetimidoy1aminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4ylthio]-6-((IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxy1ová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-N-methyl-N-acetimidoylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl] -1-methylpyrrolidin-4ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyi]-1-methyl-l~karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3R)-3-(1-methy1guanidinomethy1) pyrrolidin-l-ylkarbonyl]-1-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxy lová kyselina a

(IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-(1-methy1guanidinomethy1) pyrroli din-1-ylkarbonyl]-l-methylpyrrolidin-4-ylthio]-6—[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methy1-l-karbapen-2-em-3-karboxy lová kyselina;

nebo farmaceuticky přijatelné soli nebo deriváty těchto s1oučeni n.

• ·

- 127
7. Sloučenina 1-methylkarbapenemu obecného vzorce I podle nároku 1 volená ze skupiny následujících sloučenin:

(lR,5S,6S)-6-[(IR)-1-hydroxyethyl]-1-methyl-2-[(2S,4S)-2-[(3R)-3-methylaminomethy1pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrolidin-4-ylthio]-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina • ·

- 123 (lR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-(2-N-methylamino)ethylaminomethy1)pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-y1thio]-6 -[(IR)-l-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karhoxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-((3R)-3-formimidoylaminomethy1pyrrolidin-l-ylkarbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethy1]-1-methy1-1-karbapen-2-em-3-karboxy1ová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-((3S)-3-formimidoylaminomethy1pyrrolidin-l-y1karbony1]pyrrolidin-4-ylthio]-6-[(IR) -1-hydroxyethy1]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-((2S,4S)-2-[(3R)-3-acetimidoylaminomethy1pyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((IR) -1-hydroxyethyl]-1-methyl-l-karbapen-2-em-3-karboxylová kyselina (IR,5S,6S)-2-[(2S,4S)-2-[(3S)-3-acetimidoylaminomethylpyrrolidin-l-ylkarbonyl]pyrrolidin-4-ylthio]-6-((1R)~
8. Přípravek na prevenci nebo léčbu bakteriálních infekcí, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje 1-methylkarbapenemovou sloučeninu I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo derivát.
9. Použití 1-methylkarbapenemové sloučeniny I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli či derivátu při přípravě léčiva na prevenci nebo léčbu bakteriálních infekcí.

Způsob prevence nebo léčby bakteriálních infekcí u teplokrevných živočichů, vyznačující se tím, že zahrnuje podání farmaceuticky účinného množství 1-methylkarbapenemové sloučeniny I podle kteréhokoliv z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli či derivátu.