CZ32694A3

CZ32694A3 - Purified form of streptogramins, process of its preparation and pharmaceutical preparations in which it is comprised

Info

Publication number: CZ32694A3
Application number: CZ94326A
Authority: CZ
Inventors: Pascal Anger; Bertrand Bonnavaud; Alain Callet; Patrick Lefevre
Original assignee: Rhone Poulenc Rorer Sa
Priority date: 1993-02-17
Filing date: 1994-02-15
Publication date: 1994-09-14
Also published as: ITMI940192A1; BR9408613A; AU5510094A; PT101460A; FR2701709A1; FR2701709B1; SK18494A3; HUT66821A; IT1269214B; NO940533D0; GR1002385B; FI940717A; ZA941024B; FI111009B; IL108641A0; NZ250884A; PL174835B1; ES2081763B1; GR940100078A; FI940717A0

Description

Oblast, techniky

Vynález se týká purifikované formy streptograminú.obsahující alespoň jednu složku skupiny B streptograminú sdruženou s alespoň jednou minoritní složkou skupiny A, která je dále definována obecným v20rcem II.

Dosavadní stav techniky

Ze známých streptograminú byl pristinamycin (RP 7293}, který je antibakteriální účinnou látkou přírodního původu produkovanou mikroorganismem Streptomyces pristinaespiralis, poprvé izolován v roce 1955. Tento pristinamycin, který je komerčně dostupný pod označením Pvostacineⁱ , je v podstatě tvořen pristinamycinem IA a pristinamycinem HA. · .. .

Další antibaktariálně účinná látka ze skupiny streptograminů, virginiamycin byl připraven z mikroorganismu Streptomycas virginiae, ATCG 13161 /Antibiotics and Chemotherapy, 5, 632 (1 955 )/. Uvedený ..virginiamycin {Staphylomycine } je v podstatě tvořen faktorem S a faktorem Mp

V patentu US 3 325 359 jsou popsané farmaceutické kompozice obsahující antibiotické látky tvořící antibiotikum 899: faktor S a faktor Ml.

' Antibaktariálně účinné látky přírodníhopůvodu skupiny streptograminú jsou tvořeny směsí dvou skupin složek, tj. směsí složek skupiny B a složek skupiny A, přičemž každá z těchto skupin má vlastní antibakteriální účinnost. Bylo prokázáno, že

V patentu FR 2 619 008 je popsáno použití složek skupiny A a skuoiny B prc léčení akné.

π

z.

kombinace tvořená oběma skupinami těchto složek vyvolává ,synergii Účinku, přičemž^-aúšTěakěmTétCfsyn-ergi-e—jeHoa-kter-io-----^-------statická účinnost, zesílení baktericidního účinnku a rozšíření spektra účinnosti.

V Streptogramine ais Modelsysteme fur den Kationentransport durch Membranen, Dissertation zur Erlangung des Doktorgrades der Mathematisch-Naturwissenschaftlichen Facultát der Georg-August Universitát zu Gottingen, Gottingen 1979, v Antibiotics III, 521 (1975) a v Antibiotics of the virginiamvcin family, Inhibitors which contain synergistic component, C. Cocito, Microbiological Reviews, 145-98 (1979) jsou popsané složky skupiny A a skupiny B streptograminů. Přírodní pristinamycin, jakož, i jednotlivé složky, které ho tvoří, byly rovněž ^-popsané_. J . Pre.ud Komme7_m,. P2Tg_L?i£Í.9É77^errLA._A^jellGC-em v Bull.

Soc. Chim. Fr., 2, 585 (1968).

Všechny pokusy připravit purifikovsnou kombinaci streptograminů vždy zahrnovaly majoritní složku skupiny A /pristinamvcin IIA (PIIA)/, o které se předpokládá,,, že je zodpovědná za uvedenou účinnost a synergii 'účinku.. Ostatně existují studie, ve kterých se dochází k závěru, že pro vyvolání nejlepšího synergického účinku je ne jdůlé-žitě jší právě tato složka.

Nicméně tyto pokusy připravit purifikovanou účinnou kombinaci streptograminů nebyly nikdy korunovány úspěchem a to jednak vzhledem k těžkostem, ke kterým dochází při její průmyslové výrobě, a zejména vzhledem k tomu, Že purifikovány pristinamycin IIA je krystalickým produktem, o kterém bylo zjištěno, že jeho dostupnost pro biologický organismus je příliš omezená na to, aby s ním mohlo být počítáno jako s účinnou látkou léčiva.

y m*!/

Z hlediska průmyslové přípravy takových produktů neumožňují techniky, které jsou áž dosud k dispozici, získat v preparativním měřítku dostatečně purifikovanou formu a produkci dostatečně stálých a reprodukovatelných kvalitních Šarží, která by splňovala zákonné požadavky registračního řízení v některých zemích.

I.

Jako' příklad lze uvést, že průmyslové šarže přírodního pristinamycinu obsahují po purifikací množství nečistot, které může dosahovat až 20 %. Až dosud provedené pokusy vyčistit tento produkt se vždy setkaly s neúspěchem 'nebo mely často za rrá- sledek degradaci některé ze skupin složek vzhledem k tomu, že se jedná o křehké· produkty, u kterých mohou purifikační operace způsobit otevření cyklické struktury nebo dehydrataci složek skupiny A. Vzhledem k těmto skutečnostem panuje již mnoho leť přesvědčení, že již nebude dosaženo dalšího zlepšení stupně čistoty uvedených šarží. Ještě v roce 1988 byla purifikace uvedených šarží stále považována za problém (o tom viz: J. of L'iq. Chromatography1 1(1 1 ), 2367 (1988)ť Rovněž v roce 1 988 uvedli N.K. Sharma a M.J.O. Anteunis, že také separace a purifikaceí složek virginiamycinu jsou možné pouze pro analytické účely, avšak nerealizovatelné pro výrobu těchto produktů a to vzhledem k potížím, se kterými se při separaci a purifikací těchto složek setkali (Bull. Soc. Chim. Belg*.’, 97( 3 ) 1 93 ( 1 988 ).

V důsledku této situace, byla komerční využitelnost pristinamycinu {Pyostacine ) definitivně omezena pouze na některé země, jakými jsou Francie a Belgie. Stejně je tomu v případě virginiamycinu (Staphylomycine), který je komerčně využíván pouze v omezeném počtu zemí a to pokud jde o humánní medicínu, jakož i v případě mikamycinu, jehož komerční využitelnost (omezená na Japonsko) je v současné době pozastavena. Pro určitou část lidské populace to má tudíž za následek, že je zbavena možnosti léčení těžkých infekcí způsobených grampozitivními koky (zejména infekcí způsobených stafylokoky rezistentními na methicillin) nebo léčení nemocí přenocných sexuálním stykem.

V oblasti antibakteriálně účinných látek praktičtí lékaři velmi dobře znají, že po podávání některých skupin anti4 biotik muže dojík k alergiím nebo rezistencím na podávaná antibiotika /The New Eřňgland^-Journal^-o'f“M'ed'i'cřney -3-24--(-9-)-, -6-Θ-1—(1991)/. V klinické praxi jsou zejména známé četné rezistentj ní kmeny mikroorganismu Staphylococcus aureus. Vzhledem k tomu je pr.o praktického lékaře velmi důležité mít k dispozici široké spektrum chemicky odlišných skupin antibiotik, aby bylo možné přizpůsobit léčení konkrétní léčené nemoci. Nemožnost komerční využitelnosti uvedené skupiny antibakteriálně účinných látek může mít velmi vážné, ba i dramatické následky, poněvadž zbavuje možnosti léčení těch pacientů, které nesnáší ostatní skupiny antibiotik.

Provedené purifikační pokusy měly takto vždy za cíl odstranit minoritní složky streptograminů, nebot tyto minoritní •složky—js.o.U—po-V-a.ž.ov.a.né_..z.a_postradatelné_,a spise za nečis toty.

Z těchto minoritních složek skupiny A přírodních streptograminů představuje pristinamycin IIB (PIIB) minoritní složku, jejíž hmotnostní obsah je nižší než 10 % hmotnosti, vztaženo na celkovou hmotnost přírodního pristinamycinu, zatímco ve virgi niamycinu je jeho obsah nejčastějí roven asi 8 % hmotnosti nebo dokonce,asi 6 % hmotností.

Podstata vynálezu ’

Nyní bylo nově zjištěno, a toto zjištění tvoří podstatu vynálezu, že kombinace tvořená jednou nebo několika složkami skupiny B obecného vzorce I

(Ia'| ; (Ta) t

I , ve kterem R znamena znamená atom vodáka, atom vodíku nebo hydroxyskupinu a Y methyLaminovou skupinu nebo dimethylamínovou skupinu,

R znamená ethylovou skupinu nebo v případe, že R* znamená atom vodíku, potom R může rovněž znamenat methylovou skupinu a r a R₂ znamenají atom vodíku, nebo také

A₁ znamená skupinu vzorce

(lb) ~R-znamená„is.obutylpvou_skup_inu.^a_________ _________ r znamená hydroxy-skupinu a S₂ znamená methylovou skupinu, a jednou nebo několika minoritními složkami skupiny A obecného vzorce II

ve kterém R znamená atom vodíku nebo methylovou nebo ethylovou skupinu, je obzvláště zajímavá vzhledem k její biologické účinnosti in vivo.

Kombinace podle vynálezu vykazují ve srovnání s přírodnim produktem ( jakým je například pnrodni vírginiamycin nebo přírodní pristinamycin) a· s kombinacemi, ve kterých se·, výrazně * uplatňuje majoritní složka skupiny A výrazně vyšší biologický účinek in vivo a kromě toho mají zcela uspokojivou biodisponibi- \ litu (dosažitelnost pro organismus). Kromě toho mohou být tyto kombinace· připraveny ve velkém měřítku.

Takto je možné získat purifikovanou'a biodisponovatelnou formu finálního produktu, který má dobrou úroveň účinku a který obsahuje méně než 6 % nečistot.

Produkt obecného vzorce II, ve kterém R znamená ethylovou skupinu a který je dále nazýván pristinamycin IIP (PUF) a produkt obecného vzorce II, ve kterém R znamená atom vodíku a který je dále nazýván pristinamycin IIG (PIIG) jsou nové produkty, které tvoří velmi minoritní složky streptograminú, přičemž jejich hmotnostní obsah v šaržích přírodního produktu je nižší než 0,5 %.

Kombinace podle vynálezu jsou výhodně připraveny v poměrech od 10/90 do 90/10 (hmotnostně)nebo výhodně v poměrech od 20/80 do 80/20. Vyskytují sere stavu fyzikální směsi prášků nebo také, .a to tvoří- další znak vynálezu, ve stavu koprecipitátu anebo podle třetího znaku vynálezu ve stavu kokrystalizátu, který je definován dále.

Vynález se také týká purifikovaných forem tvořených kombinacemi získanými společnou krystalizací alespoň jedné složky skupiny 5 obecného vzorce I a alespoň jedné složky skupiny A definované obecným vzorcem II.

Společná krystalizace se provádí při. zachování konstantní stechiometrie 1 molu složky nebo složek obecného vzorce I a 2 molů složky nebo složek skupiny A obecného vzorce II (tato stechiometrie odpovídá vzájemnému hmotnostnímu poměru asi.

43-44/57-56 v případě, kdy složkou A je produkt obecného vzor8 ce I, ve kterém A^ má strukturu Ia).

Společně vykrystalizovaná kombinace podle vynálezu může být alternativně použita jako purifikované a stabilní antimikrobiální činidlo, které má rovněž zlepšenou účinnost in vivo, jakož i dobrou biodisponibilitu, nebo také jako purifikační prostředek ^kminoritní složky streptograminů odpovídající obecnému vzorci II.

Ve skutečnosti nebylo doposud nikdy možné purifikovat složku skupiny A obecného vzorce II krystalizaci. Až dosud byly známé pro přípravu purifikovaného produktu skupiny A obecného vzorce II pouze chromatografické metody, přičemž dosud nebyl znám žádný purifikační postup, který by umožňoval izolaci těchto produktů ve velkém měřítku.

Nyní bylo prokázáno, že složka skupiny A obecného vzorce II může být získána v čistém stavu postupem zahrnující přípravu výše uvedené společně vykrystalizované kombinace. Přitom se postupuje tak, že surová směs obsahující alespoň 30 % minoritní složky skupiny A odpovídající obecnému vzorci II se uvede do roztoku'v organickém rozpouštědle, jakým je' keton'(aceton, methylethylketon, methylisobutylketon a podobně), ester (například ethylacetát, isopropylacetát, butylacetát a isobutylacetát), chlorované rozpouštědlo (methylen chlorid, chloroform, 1,2-dichlorethan a podobně.) nebo nitril (například acetonitril), načež se přidá složka skupiny B definovaná obecným vzorce I, načež se krystalizací získá společně vykrystalizovaná kombinace s výše uvedeným poměrem složek. Je samozřejmé, že množství zavedené sloučeniny obecného vzorce I se vhodně zvolí tak, aby reziduální koncentrace tohoto produktu (po společné krystalizaci) byla nižší, než je jeho rozpustnost v uvedeném prostředí. Je rovněž samozřejmé, že variace ve vzájemných obsazích výchozího prostředí' vzhledem k produktu obecnéhovzorce II a vzhledem k produktu' obecného vzorce I nezpůsobí modifikaci získané společně vykrystalizované kombinace. Takto získaná společně vykrystalizovaná kombinace uvedená do roztoku v rozpouštědle, jakým je například methylisobutylketon nebo dichlorethan a uvedená.do styku s ky9 selým prostředím (například kyselina sírová nebo kyselina chlorovodíková) umožňuje po zpracování organické fáze rozpouštědlem, jakým je například hexan, získat purifikovanou minoritní složku skupiny A, která je prosta složky skupiny 3.

λ

Výhodou této společně, vykrystalizované kombinace je výrazně zvýšená stabilita, zvýšená čistota a zejména skutečnost, že umožňuje-snadnou insdustrializaci.

'Je také'samozřejmé, že tato metoda může být také přizpůsobena pro přípravu kokrystalizátů s modifikovanými deriváty přírodních složek skupiny B streptograminů a že takové kokrvstalizáty rovněž spadají do rozsahu vynálezu. Stejně tak do rozsahu vynálezu spadá příprava purifikovaných forem minoritních složek obecného vzorce II z těchto kokrystalizátů.

Výhodné provedení vynálezu zahrnuje kombinaci pristinamycinu IB (tak, jak byl definován výše, když A^ znamená radikál obecného vzorce Ia, ve kterém Y znamená methylaminovou skupinu a R znamená atom vodíku, a R znamená ethylovou skupinu) nebo virginiamycinu Sl {tak, jak byl· definován výše, když A₁ znamená skupinu obecného vzorce Ia, ve kterém Y a r' znamenají atomy vodíku, a R znamená ethylovou skupinu) nebo směsi virginiamycinu

„..„Sl a virginiamycinu S4'{tak, jak byl. def inován výše- , když Aj je definován jako pro virginiamycin S1 a R znamená methylovou

Ί skupinu) s prostínamycinem 113 (tak, jak byl definován výše obecným vzorcem II, ve kterém R znamená methylovou skupinu), která obsahuje méně než 6 % nečistot, výhodně méně než 3 % nečistot.

výhodné provedení způsobu podle vynálezu rovněž zahrnuje purifikovaný strsptogramin obořený kombinací složky skupiny 3 streptograminů definované obecným vzorcem I a složky skupiny A obecného vzorce II, obsahující složky skupin B a A v konstantním molárním poměru asi 1/2.

Nové kombinace alespoň jedné složky 3 streptograminů obec10 ného vzorce I a alespoň jedné složky skupiny A obecného vzorce mohou byt podle vynálezu zí^kaň^napříkTaď^řÝpTavwvýše^-^·-flnovane společně vykrystalizované kombinace. Jestliže má být, získána kompozice s různými obsahy složek, potom může být k takto připravené společně vykrystalizované sloučenině přidána alesροη jedna ze složek obecného vzorce I nebo alespoň jedna ze slo- '' žek skupiny A obecného vzorce II, které byly předběžně purifikovánv, a to ve vhodném množství k dosažení požadovaného poměru složek, nebo může být také složka skupiny A obecného vzorce II (nebo jejich směs) purifikována z kokrystalizátu a potom smíšěna v požadovaném poměru s jednou nebo několika složkami skupiny B obecného vzorce I. Alternativně mohou být kombinace podle vynálezu připraveny po izolaci složky nebo složek skupiny B a složky skupiny A obecného vzorce II z odpovídajícího přírodního strepto—gra-mÍ’n-u--pur-idikac.í_ka,ždé_z._těohto_s.ložek_ a._potom.smíšením purif.i- _ kovaných složek v požadovaných poměrech, které byly definovány výše.

Kombinace podle vynálezu mohou.být rovněž společně vysráženv v požadovaných poměrech z roztoku složek obecného vzorce I a II (nebo alternativně z roztoku kokrystalizátu a jedné ze složekobecného vzorce- I nebo II) v methylisobutylketonu, acetonu nebo methylenchloridu, nalitého do hexanu, cyklohexanu nebo vody. .

Příprava a separace složek skupin A a B se provádí fermentací a izolací složek z fermentačního rmutu metodou popsanou J. -Preud'homme-m a kol. v Bull. Soc. Chim. Fr., sv.2, 585(1963), v Antibiot. and Chemother., 5, 632 (1955) nebo 7, 606 (19577, v Chromatog. Svm., 2° Brusel, 181 (1962), v Antibiot. Ann., 723-734 (1954-55), v patentu US 3 299 047 nebo v Streptoqramine ais Modelsysteme fur den Kationentransport durch Membranen, Dissertation zur.Eriangung des Ďoktorgrades der Maťemátisch-Naturwissenschaftlichen Facultát der Georg-August Universitat zu Gottingen, Gottingen 1979 nebo postupy, které-jsou analogické s těmino postupy anebo postupy popsanými v dále uvedených příkladech. Obzvláště v případě pristinamycinů se separace složek

1 skupiny A a B provádí suspendováním surového streptograminu v 1 organickém'rozpouštědle, jakým je acetát (například ethylacetát), následným odfiltrováním nebo odstředěním surové složky skuoinv A a extrakcí této složky skupiny 3 v kyselém vodném prostředí a následnou reextrakcí v chlormethylenovém prostředí. Separace složek skupin A a 3 může být rovněž provedena kyselou extrakcí roztoku surového streptograminu v methylisobutylketonu a potom izolací extrakcí složky skupiny 3 z vodné fáze a izolací složky skuoinv A precipitací z organické fáze.

Po separaci, purifikace složek skupiny B streptogrami.nů může být provedena krystalizaci v alkoholu, jakým je například ethanol, methanol nebo isopropanol, v acetátu (například v isopropylacetáťu nebo butylacetátu), v ketonu (například . 1 v methylethylketonu) nebo v acetonitrilu, nebo chromatograficky. ''

Purifikace složek skupiny A obecněno vzorce II muže byt provede- · na chromatograficky za použití eluční soustavy tvořené směsí acetonitrilu a vody,

-Μ-'Αι

S. W Z *

Alternativně se příprava složek skupin A a 3 obecného ^! vzorce II, resp. I provádí postupem popsaným ve francouzském¹ ' ’ patentu 2 689 518 a spočívajícím ve fermentaci rozdělené do následujících stupňů.:

II» I I I. ' ! «* *·|Γ“ ' '

- první stupeň (fakultativní), mutageneze na neselektivním produkčním mikroorganismu streptograminu a

- druhý stupeň, selekce selektivních mikroorganismů.

Neselektivními mikroorganismy jsou obecně Actinomycetes a houby. Výchozími mikroorganismy, které jsou použitelné při tomto způsobu, jsou zejména neseLektivní'produkční mikroorganismy streptograminu, zvoleného z množiny zahrnující pristi.namycin, virginiamycin, mukamycin, ostreogrycin, virtdogrisein, vernamycin a etamycin. Příklady použitelných nesektivnícn mikroorganismů jsou uvedeny v následující tabulce 1.

^!í'·. ·

Tabulka 1

Mikroorganismy

Antibiotika

Houby

Micromonosoora sp.

vernamycin

Streptomyces

Streptomyces alborectus

Streptomyces griseus (NRRL2426) Streptomyces lavendulae Streptomyces lodensis (ATCC11415) Streptomyces mitakaensis (ÁŤČC15297) Streptomyces ostreogriseus (ATCC27455) Streptomyces pristinaespiralis (ATCC25486) Streptomyces virginiae (ATCC13161)

Actinomyces

Actinomyces daghestanicus virginiamycin viridogrisein etamycin vernamycin míkámycin ostreogrycin pristinamycin virginiamycin etamycin

Uvedená příprava se zejména provádí za použití mikroorganismů zvolených z množiny zahrnující Streptomyces alborectus, Streptomyces mitakaensis, Streptomyces pristinaespiralis, Streptomyces ostreogriseus a Streptomyces virginiae.

První stupeň přípravy spočívá v modifikaci neselektivního mikroorganismu v tom smyslu, aby se zvýšila jeho globální schopnost- orodukovat antibiotikum nebo/.a. aby .syntetizoval pouze. jed-... nu z obou složekstpeptograminů. Toho může být dosaženo genetickou modifikací (mutace v úrovni genů s enzymovou strukturou implikovaných biosyntézou nebo v úrovni sekvencí umožňujících expresi takových strukturních genů nebo podobně) nebo biochemiekou modifikací .-Swfc.

ϊ t' £ • Ť at ' \ &

(modifikace post-translacnrho mechanismu, alterace retroinhi- J

- * v i bicmho mechanismu a podobné). Za tím účelem se používají různé -j mutagenezní nástroje: , 1

- fyzikální činidla: rentgenové paprsky, ultrafialové paprsky nebo

- chemická činidla: alkylační činidla, jakými jsou například:

etnylmethansulfonát (EMS), Ň-methyi-N ' ~ nitro-N-nitrosoguanidin (Delic a kol.,

Mutatlon Res. 9 ( 1 970 ) 167-132) nebo 4-, nitrochinolin-1-oxid (NQO), bialkylační činidla, interkalační činidla, nebo

- libovolný systém mutační inserce do DNA a zejména transř<· . i;

posony, integrační plasmidy, fagy nebo profagy, y nebo také

- fúze protoplastů (Cohen, Nátuře 263 (1977) 171-174).

Tyto nástroje (samotné nebo v kombinaci) mohou být aplikovány na neselektivní mikroorganismy ve stavu spor, vyklíče- . - o ných nebo klíčících spor neba na mycelium. Tato příprava může také využívat manipulací (náhodných nebo řízených) umožňujících získat mikroorganismy schopné selektivně produkovat jednu .složku straptograminů z neselektivních mikroorganismů.

ΖΓ

Druhý stupeň přípravy se týká identifikace a isolace selektivních mikroorganismů. Tento stupeň může být uskutečněn zejména použitím testu citlivosti vůči určitému mikrobu. Existují různé mikroby, které jsou specificky senzitivní na složky skupiny A nebo na' složky skupiny 3 streptograminů: například Baciilus sub^tilis ÍATCC6633), BaciLlus circulans. .Bacíllus cereus (Watanabe, J,Antibio.Ser.A Χ1ΙΣΝ) (1960) 62), nebo C.xero:<15 (citovaný Watanabe', které jsou specificky senzitivní na složky skupiny B, zatímco Streptococcus agalactiae B96 (Ántimicrob,Agents Chemother. 10(5)(1976} 795), Micrococcus luteus (citovaná Přikrylová) nebo Sarcina lutea (ATCC9341) jsou specificky citlivé na složky skupiny A. Rovměž je možné uměle připravit

4 mikroby specificky senzitivní na některou složku streptogramirrů^__a^__ťó ^rn’z’erc’í~do—mi-k-robu—sen-z-i-t-i-v-n-í-ho-na·· -obě—s-l-oš-ky s-t.rep.to.-_ graminů genu s rezistencí vůči jedné z těchto složek. Některé z těchto genů již byly klonovány (Le Goffic a kol., J.Antibío. XXX(8), 665 (1977); Le Goffic a kol., Ann. Microbiol. Inst. Pasteur 128B, 471 (1977); Solh a kol., Path. Biol. 32(5), 362 (194) a takové geny se do jednotlivých mikrobů zavádí klasickými postupy molekulární biologie. Selekční stupeň může být rovněž proveden testem ELISA za použití specifických protilátek složek A nebo B nebo také analytickými postupy, jakými jsou chromatografie (kapalinová chromatografie, chromatografie na tenké vrstvě a podobně). V případě testu citlivosti vůči mikrobu je navíc výhodné vyhodnotit selekci chromatografickým stanovením.

•r

I

V rámci vynálezu je takto možné v průmyslovém měřítku získat novou purifikovanou formu streptograminu, jejíž obsah nečistot a definice a stálost složení odpovídá zákonným požadavkům pro registrační řízení a která má vyšší účinnost in vivo, zlepšenou biodisponovatelnost a nižší toxicitu. Tato nová kombinace takto v četných zemích umožní na rozdíl od minulé doby léčení za použití antibakteriálně účinných látek této skupiny sloučenin.

Nová kombinacesložky skupiny E streptograminů obecného vzorce I a složky skupiny A streptograminů obecného vzorce II vykazuje obzvláště zajímavou účinnost in vivo vůči gram-pozitivním mikrobům. Bylo prokázáno, že in vivo u myší má vůči mikroorganismu Staphylococcus aureus IP -8203 účinnost při perorálních·dávkách od 30 do 50 mg/kg.

Dále jsou pro ilustraci uvedeny hodnoty DC-θ při perrální''aplikaci několik'akombinací složek obecných· vzorců-I· a-II myším, které byly experimentálně infikovány mikroorganismem Staphylococcus aureus IP 8203.

V následující tabulce 2 jsou uvedeny studované kombinace,

5 které byly připraveny společnou koprecipitací hexanem z roztoku složek obecných vzorců I a II v meťnylisobutylketonu nebo v acetonu.

Tabulka 2

Kombinace produkt I/produkt- II PKpříklad 1/PIIB(příklad 18)	• DC-θ (mg/kg) p.o.
10/90	< t 44
20/80	32
30/70	30
70/30	ý 30
. _. -4—
80/20	3 0
90/10	50

V následující tabulce 3 jsou ilustrovány kombinace spoLečně vykrystalizovaných produktů - připravené postupy popsanými v příkladech.

6

Tabulka 3

Kombinace společně vykrystalizo-	DC_5q (mg/kg) p.o.
váných: produkt	I/produkt II
PI/PIIB	(příklad 9)	38
ΡΙΆ/ΡΙΙΒ	(příklad 11)	28
PIB/PIIB	(příklad 12)	32

PIC/PIIB	(příklad 13)	36
PID/PIIB	(příklad 14)	50
Faktor S/PIIB (příklad 15)	32
Faktor S1/PIIB	(příklad 16)	50
Příklad S/PIIF	(příklad 17)	50

V následující tabulce 4 je popsána kombinace, která je připravena ve formě fyzikální směsi prášku.

Tabulka 4

'4 ''•«I : . ,1

Kombinace produkt I/produkt II. DC-q (mg/kg) p.o

PIA (příklad 1)/?II3 (příklad 13)

30/70 - 36

PIA (příklad 1)/PIIB (příklad 18)

50/50 40 i

Faktor S (příklad 5)/PII3 (příklad 13)

30/70 44

Navíc není nová kombinace toxická: při perorální dávce 150 mg/kg (2 podání) nelze u myší pozorovat žádnou známku toxicity.

.ϋι I»

Když se v rámci vynálezu společně vykrystalizovaná kombinace použije jako purifikační prostředek složky obecného- vzorce II, může být tato získána kyselou extrakcí roztoku společně .vykrystalizované sloučeniny v ketonu (například methylisobutylketon) a potom izolací extrakcí složky skupiny A vysrážením z organické .fáze. ' ·

V následující části popisu bude pomoci konkrétních příkladů jerío p rove ilustrační charakter a nikterak neomez který je jednoznačně vymezen formulací těchto příkladech jsou obsahy uvedeny vynález blíže ob jasněm dění, kreré mají pouze ují předmět vynálezu, patentových nároků, v ve hmotnostních procentech.

8

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 kg surového pristinamycinu /pristinamycin JA (PIA):

20,7 %, pristinamycin IB (PIB): 3,9 %, pristinamycin IC (PIC):

0,6 %, pristinamycin ID (PID): 0,3 %, pristinamycin ΙΣ3 (PIIB):

%, pristinamycin IIA (PIIA): 45 %, pristinamycin IIF (PUF): méně než 0,5 % (nestanoven), pristinamycin IIG (PIIG): méně než 0,5 % (nestanoven)/ se suspenduje ve 210 litrech ethylacetátu a míchá po dobu 15 hodin při okolní -teplotě. Suspenze se zfiltruje a ethylacetátový filtrát se dvakrát extrahuje 20 litry IN kyseliny sírové a potom 20 litry destilované vody. Sloučené vodné fáze se 6 krát promyjí 15 litry ethylacetátu, načež se jejich oH nastaví na hodnotu 7 přidáním 3 0 litrů /0.% hydrogen- __ uhličitanu sodného a potom..se extrahují třikrát 30 litry methylen chloridu. Methylenchloridové fáze se sloučí a promyjí 10 litry destilované vody. Methylenchlorid se potom oddestiluje a nahradí 50 litry ethanolu.. Směs se potom zahřívá k varu pod zpětným chladičem v přítomnosti 0,8 kg aktivního uhlí,L3S po dobu 30 minut. Po filtraci a dvojnásobném promytí 5 litry ethanolu se směs ochladí v průběhu 15 hodin až na teplotu 10 °C. Po jedné hodině na teplotě 10 °C se suspenze zfiltruje a třikrát promyje 7 litry ethanolu. Po vysušení pevného podílu při teplotě 40 °C za sníženého tlaku se získá 5,7 kg purifikovaného pristinamycinu I (dále je názýván PI).

Čistota: 96,8 % (PIA: 81,1 %, PIB: 12 %, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 %); Výtěžek vztažený na PIA: 74 %.

1500 g purifikovaného PI se vyjme 9 litry 1,2-dichlorethanu, načež se přidá 1,5 ekvivalentu anhydridu kyseliny jantarové a 0,015 ekvivalentu dimethylaminopyridinu. Získaný roztok

sloupce: 1 m a průměr sloupce: 20 cm). Eluce se provádí perkolací směsi 1,2-dichlorethanu a methanolu po dobu 6 hodin při průtoku 18 litrů za hodinu. Obsah methanolu (obsah vody 5 %) se zvyšuje

9 v průběhu chromatografie z 0 na 4 %. Jímá se 47 frakcí o objemu

2,4 litru. >

Frakce 5 až 15 se sloučí, i,2-dichlorethan se odpaří a nahradí 5 litry ethanolu. Po krystalizací se získá 365 g PIA o čistotě 99,8 %.

Příklad 2

Frakce 36 až 39 jímané při chromatografii popsané v příkladu 1 se sloučí a 1,2-díchlorethan se oddestiluje, přičemž se takto získá 210 g pevného podílu. 40 g tohoto pevného podílu se vyjme 8 litry vody,-ke které se přidá 9 cm^ ION kyseliny chlorovodíkové. Po třech hodinách zahřívání na teplotu 90 C se roztok neutralizuje na hodnotu pH 6,5 přidáním hydrogenuhličitanu sodného. Roztok se extrahuje litrem ethvlacetátu a získaný extrakt se dvakrát promyje 0,2 litru vody. Po zpraco3 vání- aktivním uhlím se odpaří ethylacetát a nahradí se 600 cm’’ ethanolu. Po rekrystalizací se získá 20 g PI3 o čistotě 97 %

Příklad 3

Frakce 22 až 26' jímané při chromatografii popsané v příkladu 1 se sloučí a 1,, 2-díchlorethan se odpaří, přičemž se získá 139 g pevného produktu. Tento pevný produkt se vyjme minimálním množstvím 1,2-dichlorethanu a směs se zavede na sloupec silikagelu. Sluce se provádí perkolací směsi 1,2-dichlorethanu a methanolu po dobu 6 hodin při průtoku 13 litrů za hodinu. Obsah methanolu (obsah vody 5 %) se v průběhu chromatografie zvýší z 0 na 5 %. Jímá se 43 frakcí o objemu 2,4 litru. Frakce 33 až 43 se odpaří a pevnv zoyie.t se Wjme j00..cm etnanc-iu. ?o raxc/sralizaci se získá 22 g PI obsahujícího 40 % PIC. Následné chromatografie na silikagelu (20 až 45^um) za použití eluční soustavy tvořené směsí methylenchloridu a -methanolu v’objemovém poměru 98/2 poskytnou 5 g pevného produktu, který po vytřepání ' do methylisobutylketonu a rekrystalizací z ethanolu má obsah PTC rovný^-9'5~%T ......— ----------- —

Příklad 4

1000 g PI- získaného postupem popsaným v příkladu 1 se rozpustí v minimálním množství chloroformu a purifikuja v následných frakcích na sloupci silikagelu (20 až 45/Um). Po eluci chloroformem obsahujícím 2 až 5 % methanolu se získá produkt, který se zahustí k suchu. Tento produkt se potom purifikuje dvěma následnými průchody sloupcem pryskyřice Diaion perkolova ným směsí acetonitrilu a vody v objemovém poměru 60/40. Frakce jsou monitorované chromatograficky. Frakce obsahující PID se .slouč_í_.azahustí suchu. Takto se získají asi 3 g produktu obsahujícího 60 % PID. Dodatečná purifikace se provádí protiproudou chromatografií za použití směsi rozpouštědel tvořené methylisobutylketonem, acetonem a kyselinou mravenčí v objemovém poměru 40/2/40. Po koncentraci k suchu frakcí obsahujících PID se. získá 1 g pevného produktu obsahujícího 95 % PIĎ.

Příklad 5

R «

400 g Staphylomycinu (ve formě tablet - výchozí složení virginiamycin Ξ1 (51): 3,4 %, virginiamycin S4 (S.4) : 0,9 %) sa zavede do 4 litrů vody.

Tablety se desintegrují mícháním po dobu 15 minut při teplota 20 °C. Přidá se 1 litr methylenchloridu a v míchání se pokračuje ještě oo dobu jedné hodiny. Methylenchl.oridová fáze se potom dekantuje a zfiltruje, načež se v průběhu 30 miňuř nalije do '3'” litrů míchaného hexanu. Po jednohotíinovém mí- cháni se suspenze zfiltruje, přičemž se jímá pevný podíl, který se třikrát promyje 250 cn? hexanu. Po vysušení -se získá 52 g . pevného produktu, který se suspenduje ve 370 cm³ ethylacetátu. Potom se provedou dvě následná intenzivní míchání při teplotě °C v délce 10 hodin. Filtrát odpovídající každému z obou míchání se zahustí k suchu, načež se rozpustí v 850 c~^ methanolu zahřívaného na teplotu varu poč zpětným chladičem. Po postupném snížení teploty až na - 20 °C v průběhů 16 hodin se filtrací izoluje pevný podíl, který se promyje malým množstvím methanolu Po vysušení pevného podílu při teplotě 35 °C a za sníženého, ' tlaku se získá 9 g faktoru S (virainiamycin S).

Čistota: 96 % (SI: 75,4 %, S4: 20,6 %).

Výtěžek vztažený na faktor SI {virainiamycin SI): 50 %.

Příklad 6

J g faktoru S získaného postupem popsaným v příkladu 5 se převede do roztoku v acetonitrilu v množství odpovídající koncentraci 125 mg/cm^ a purifikuje ve 4 operacích chromatografií na sloupci produktu Nucleosil!5C8 (výška sloupce 25 cm a průměr sloupce 2,54 cm) za nástřiku 2'cín a při použití eluční soustavy tvořené směsí vody a acetonitrilu v objemovém poměru 3 ~ „

60/40 a průtoku 7,5 cm za minutu.V každém průpade se jímá 120 cm eluátu obsahujícího faktor SI, což je celkem 480 cnA Chromatografie se opakuje čtyřikrát, aby se zpracoval celkem 1 g faktoru S. Takto se. jímá objem asi 500 cm^ obsahující faktor ST. .Acetonitril se odstraní v rotační odparce. Vodná fáze * \ ' 3 ' se trikrat extrahuje 50 cm dichlormethanu. Methylenchloridové fáze se sloučí, promyjí 50 cm destilované vody, vysuší nad síranem sodným a zfiltrují. Dichlormethan se odstraní v rotační odparce za sníženého tlaku (665 Pa). Takto se získá 0,67 g faktoru Ξ1 s čistotou 99,6 %.

Příprava surových složek skupínv A

Příklad 7

500 g surového pristinamycinu /pristinamycin IA (PIA):

20,7 %, pristinamycin 13 (PI3): 3,9 ť pristinamycin IC (PIC):

<V·

0,6 %, pristinamycin ID (PID): 0,3 %, pristinamycin IIB (PIIB):

'8~%H”p'r'iS'ťi^_n'amy ci-n—íI-I-A—(-P-I-I-A-) —4-5—%-/— se—u .v.e d e -do.. r .o.zto.k u_ v.. 50__ litrech methylisobutylketonu. Tento roztok se pětkrát extrahuje vodnou fází tvořenou 2,5 litru vody a 2,5 litru IN kyseliny sírové a potom promyje třikrát 10 litry vody. Methylisobutylketon se potom zpracuje 7,5 litru vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného o koncentraci 35 g/1 a potom promyje 5 litry vody Pokaždé se vodná fáze smísí s organickou fází, dekantuje a odděl

Získaná organická fáze se uvede do styku se 750 g oxidu hlinitého, zfiltruje, zahustí až na objem asi 4 litru a vyjme 5 objemy hexanu. Vyloučená sraženina se odfiltruje a vysuší. Získá se 300 g produktu, který se - suspenduje v 1 litru isopropanolu. Po míchání při teplotě 55 °C po dobu 45 minut se suspenze zfiltruje při teplotě 4 °C. Filtrační matečné louhy se zahustí k suchu, vyjmou 500 cm^ methylisobutylketonu, ďo ktsrého**sě ná-“ lije 5 objemů hexanu. Sraženina se odfiltruje, promyje hexanem· a vysuší za sníženého tlaku při teplotě 40 °C. Získá se 69 g surového PIIB obsahujícího 36 % PIIB a 6 % PIIA a neobsahujícího již PIA.

Příklad 8 g surového PIIB získaného v předcházejícím příkladu 7 se purifikuje v několika operacích chromatograficky na sloupci produktu Nucleosil5C8 (průměr sloupce 5 cm, výška sloupce 30 cm) za použití eluční soustavy tvořené směsí vody a acetonitrilu v objemovém poměru 60/40. Takto se získá 250 mg pristinamycinu HF (PIIF) .

Příprává spol acně vy.krystal izovaného produktu ... .. .

V následujících příkladech bylo prokázáno, že difrakční’ rentgenové spektrum společně vykrystalizovaného produktu je odlišné od spektra složky skupiny Β , která vykrystalizovala samotná ve stejném rozpouštědle, pokud tato složka existuje.

Příklad 9

se promyje a vysuší. Po rekrystalizací z acetonu obsahujícího 100 g produktu v jednom litru acetonu se získá 10 g bílých krystalů obsahujících 55 % PIIB+PIIF+PIIG a 43 % PIA+PI3e?IC+PID.

Příklad 10

250 mg purifikovaného PIIB získaného postupem popsaným v příkladu 18 sa rozpustí v 17 cm ethylacetátu. K získanému roztoku se přidá 300 mg purifikovaného PI (PIA: 81,1 %, PI3:

%, PIC: 2,6 %, PID: 1,1 5). Po 20 hodinách míchání při teplotě 20 °C, filtraci, promytí a vysušení se získá 125 mg bílých krystalů.

---Obsah PIIS+PIIFi-pTTG: 56 %, z toho obsah PIIB: 54 %.

Obsah PIA+PIB+PIC-tPID: 43 %.

Příklad 11

500 mg PIIB v čistém stavu získaného postupem popsaným

Obsah PIA: 43 %.

Matečný louh z předcházející krystalizace se vyjme a doplní novou šarží 560 mg PIIB. Hmotnostní poměr PIIB/PIA je blízký 4. Po 20 hodinách míchání, filtraci, promytí a vysušení se získá 195 mg krystalů, jejichíčistota a složení jsou stejné jako čistota a složení krystalů pocházejících z prvního zpracování.

Příklad 12

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, avšak s tím, že se PIA nahradí 480 mg PIB (čistota 97 %), přičemž se získá 820 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG činí 56 % (z toho obsah PIIB = 54 '%) a jejichž obsah PIB činí 43 %.

Příklad 13

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, přičemž se za pouč tí 680 mg PIIB a 580 mg PIC (čistota 95 %) ve 4 cín acetonu získá 315 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF-rPIIG činí 57 % (z toho obsah PIIB = 55 %) a jejich!obsah PI činí 42 % (z toho obsah PIC činí 37 %).

Příklad 14

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, avšak s výjimkou spočívající v tom, že se PIA nahradí 480 mg PID (čistota 95 %).

přičemž se získá 4/5 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+

PIIG čiší 55 % ('z toho obsah PIIB činí 53 %} a jejichž obsah

PID činí 39 %.

Příklad 15

Postupuje se 'stejně jako v příkladu 1 1 , přičemž se za použití 450 mg PIIB a 330 mg faktoru Ξ (Sl; 75,4 %, S4: 20,6 %) ve 4 cm^ acetonu získá 550 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG činí 53 % (z toho obsah’PII3 činí 56 %) a jejichž obsah faktoru Ξ činí 41 % (z toho obsah Sl činí 37 %).

Postupuje se stejně jako v příkladu 11, avšak s výjimkou spočívající v tom, še se PIA nahradí 480 mg faktoru Sl, přičemž se získá 750 mg bílých krystalů, jejichž obsah PIIB+PIIF+PIIG 'μί činí 53 % (z toho obsah PIIB činí 54 %) a jejichž obsah faktoru Sl činí 41 %.

Příklad 17

Postupuje se stejne jako' v přikladu 11, pricemz se za po„ 3 užiti 224 mg PUF a 192 mg faktoru S ve 2 cm acetonu získá 220 mg bílých krystalů, jejichž obsah PUF činí 55 % a jejichž obsah faktoru S .činí,. 39 % (z toho 31 % faktoru Sl a 5 % faktoru S4). **—Rentgenové difrakční diagramy produktů z příkladů 9 až 17

V následující tabulce 5 jsou uvedeny relativní intenzity základních čar. Tyto rentgenové difrakční diagramy byly změřeny difraktometrem Phillips PW1700 s kobaltovou antikatodou, Referen; ni hodnota 100 je přiřazena čáře při 15,8 X. Uvedené relativní hodnoty čar se stanoví změřením·výšky každé čáry-po odečtení kontinuálního oozadí.

- 26 Tabulka 5

Interplanámí vzdálenost	Produkt z příkladu:
0 (A)	Př. 9	Př. 11	Př. 12	Př. 13	Př. 14	Př. 15	Př. 16	Př. 17
15,8	100	100	100	100	100	100	100	1 00
11,8	40	34	35	32	43	28	36	21
10,3	69	52	63	65	50	70	80	87
9,7	38	45	47	44	43	40	49	45
-------θ_₄_---	—44—	—4-1 —	—51~ -	—44—	—3-7—	. 4Q. ·	—51 —	—39 —
6,1	38	41	40	38	43	-30	40	35
5,9	75	64	70	63 .	67	74	89	71
5,8	. 38	39	47	49	50	44	54	35
5,2	92	75	79	71	70	70	91	81
5,0	67·.	59	60	60	57	54	69	52
4,7	50	- ⁴³	53	49	47	50	40	42

Uvedené rentgenové difrakční diagramy jsou obdobné pro libovolné· společně vykrystalizované produkty {interplanámí vzdálenosti hlavních čar se výrazně neliší).

Purifikace složky skupiny' A

Příklad 18

9,3 g produktu získaného v příkladu 9 se rozpustí ve 490 ’

cm methylisobutyiketonu. Tento rozto.t se extrahuje dvakrat

370 cm vodného roztoku (0,5N) kyseliny sírové, načež se dvakrát promyje T50 cm^ vody. Organická žáze se potom zahustí až na oojem.asi 30 cm a takto zahuštěny podíl se nalije do 5’objemů hexanu. Vyloučené sraženina se promyje, zfiltruje a .vysuší.

Za účelem eliminace methylisobutyiketonu se produkt vyjme aceto* X nem k dosažení koncentrace 100 g/1, roztok se nalije do 10 objemů hexanu, promyje a vysuší. Získá se 3,5 g produktu obsahujícího ' purifikovaný PIIB, který již neobsahuje PI.

Obsah PIIB+PIIP+PIIG: asi 95 %, z toho obsah PIIB: 92 š.

Vynález se. rovněž týká farmaceutických kompozic použitelných v humánní nebo veterinární medicíně, které jako účinnou látku obsahují novou purifikovanou kombinaci streptograminu obsahující alespoň jednu složku skupiny B streptograminů sdruženou se složkou skupiny A obecného vzorce II v čistém stavu nebo v'přítomnosti jednoho nebo několika kompatibilních a farmaceuticky přijatelných ředidel nebo přísad. Tyto kompozice mohou být použity perorálně nebo topicky. Mohou obsahovat kombinace podle vynálezu vé stavu fyzikální směsi prášků, .kopracipitátu nebo kokrystalizátu.

¹ **** , -J *J 44. *

Jako kompozice pro perorální podání mohou být použity tablety, želatinové tobolky, pilulky, prášky získané lyofilizací nebo granule. V těchto kompozicích může být účinná látka podle vynálezu smíšena s jedním nebo několika inertními ředidly nebo přísadami, jakými jsou sacharóza, laktoza nebo škrob. Tyto kompozice mohou rovněž obsahovat jiné látky než ředidla, například mazivo, jako naoříklad stearát hořečnatý.

kompozicemi pro rop pomády nebo lotiony.

íTiUí-OU Ο V Z. nd O u 1 \ i 3. G K r.*V _t

V rámci humánní nebo veterinární terapie jsou kompozice podle vynálezu obzvláště použitelné pro léčení infekcí bakteriálňi'hb~ρ'ΰνο'άαγ —ze jmén-a—i-n-f-ek-e-í—z-púsob e n.ých._g.r.am.-p_o.z.i.tivn im koky_£ infekce stafylokoky (zejména infekce stafylokoky rezistentními na methicillin), infekce streptokoky (zejména pneumokoky rezistentními na penicilín a makrolidy). Tyto kompozice jsou rovněž vhodné pro léčení infekcí způsobených mikroorganismy Hemophilus, Moraxella catarrhalis, Neisseria, gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumoniae, Ureaplasma urealyticum.

Kompozice podle vynálezu mohou být použity zejména pro léčení infekcí horního a dolního dýchacího traktu (například pro léčení plicních infekcí), při léčení kožních infekci, při dlouhodobém léčení kostních a kloubních infekcí, při léčení nebo profy.laxi.^endokarditidy v zubní a urinární chirurgii, při léčení nemocí přenosných sexuálním stykem, jakož i při léčení bakteriaIhich'” a parazitních infekcí doprovázejících AIDS a při profylaxi rizika stafylokokové infekce i pacientů s potlačenou iminitní odezvou

Obvykle budou .podávané dávky účinných látek podle vynálezu stanoveny- ošetřujícím lékařem, přičemž tyto dávky budou záviset na věku, hmotnosti, stupni zasažení infekcí a na ostatních charakteristických faktorech léčeného pacienta. Obecně se budou tyto dávky pohybovat mezi 0,4 a 3,5 g účinné látky, přičemž tyto dávky jsou' vztažené na perorální podání dvou nebo tří dílčích dávek denně dospělému pacientu.

Následující příklady ilustrují neomezujícím způsobem kompozice podle vynálezu.

Příklad A

Obvyklými technikami se připraví neprůhledné želatinové tobolky obsahující 250 mg společně vykrystalizované kombinace PIB/PIIB.

Příklad Β

Obvyklými technikami se připraví neprůhledné želatinové tobolky obsahující 250 mg společně vykrystalizované kombinace faktor 5/PIIB.

Příklad C

Obvyklými technikami se připraví tablety obsahující 384 mg účinné látky a mající následující složení:

PIB/PIIB (45%/55%) 384 mg

Hydroxypropylmethylcelulóza 25 g

Stearát hořečnatý 35 _mc

Xoloidní silika 14 mg

Škrob doplnit na 700 mg.

Příklad D

Obvyklými technikami se připraví tablety obsahující 384 mg

Faktor S/PIIB (453/45%) Hydroxypropylmethylcelulóza Stearát hořečnatý

Xoloidní silika

Škrob doplnit na

4 mg 25 mg 3 5 mg 1 4 mg

700 mg,

Claims

PATENTOVÉ

NÁROKY

1, Purifikovaná forma streptograminů, vyznačená tím, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů obecného vzorce ch₇

I ³

N

O.

O

3 1 ve kterém R znamená atom vodíku nebo hydroxy-skupinu a Y znamená atom vodíku, meťnylaminovou skupinu nébo dimethylaminovou skupinu,

R znamená ethylovou skupinu nebo v případě, kdy R znamená atom vodíku, R může také znamenat methylovou skupinu a

R^ a R^ znamenají atom vodíku, nebo také ,'ť

R .znamená isobutylovou skupinu a

R.j znamená hydroxy-skupinu a

R^ znamená methylovou skupinu, a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptogra_ . „ minu obecnénojvzorce ve kterém R znamená atom vodíku nebo methylovou skupinu nebo

ethylovou skupinu, ve^-sťa'vu'^_ko'kryst-a-l-i-z-át-un—k-op-r-ee-i-p-i-t-á-t-u—nebo- -fyzikální.-, směsi _p.r.á.šus ku.
2. Purifikovaná forma streptograminů podle nároku 1, v y značená tím, že obsahuje méně než 6 % nečistot.
3. Purifikovaná forma streptograminů podle nároku 1 nebo 2, vyznačen- á tím, že je tvořena kombinací jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů definovaných v nároku 1 ve vzájemném hmotnostním poměru 10/90 až 90/10 a ve stavu koprecipitátu nebo fyzikální směsi prásků.
4. Purifikovaná forma streptograminů podle některého z nároků 1 až 3, vyznačená t ί π , že je tvořena kombinací jedné, nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů definovaných v nároku 1 ve vzájemném hmotnostním poměrru 20/80 až 80/20 a ve stavu koprecipitátu nebo fyzikální směsi prášků.
5. Purifikovaná forma streptograminů podle nároku 1 nebo 2, vyznačená tím, že se jedná o společně vykrystalizovanou směs jedné nebo několika složek skupiny B streptograminů a jedné- nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů definovaných v nároku 1 v molárním poměru asi 1/2.
6.· — Použití., společně vykrystalizované směsi podle pro přípravu purifikované formy streptograminů podle z nároků 1 až 4.

nároku 5 některého
7. Použití společně vykrystalizované směsi podle, nároku 5 pro purifikaci minoritní nované v nároku 1.

složky skupiny A streptograminů defi
8. Způsob přípravy purifikované formy streptograminů podle některého z nároků 1 až 5, vyznačený tím, že se společně vykrystalizují složka nebo složky skupiny A streptograminů se složkou nebo složkami skupiny B streptograminů, přičemž uvedené složky jsou definované v nároku 1, načež se případně k takto získané společně vykrystalizované směsi přidá vhodná složka nebo vhodné složky skupiny A nebo B za vzniku kombinace s požadovanými obsahy složek.
9. Způsob purifikace minoritní složky skupiny A streptograminů definované v nároku 1,vyznačený tím, že sepřipraví společně, vykrystalizovaná směs této složky s jednou... nebo několika složkami skupiny B streptograminů, načež se zpracováním v kyselém prostředí odstraní složka nebo složky skupiny

S.
10. Purifikované složka skupiny A streptograminů definovaná v nároku 1 a získaná prostřednictvím společně vykrystalizované směsi podle nároku 5.
11. Složka skupiny A streptograminů obecného vzorce ve kterém R znamená atom vodíku nebo ethylovou skupinu.
12. Použití jedné nebo několika minoritních složek skupiny A streptograminů definovaných v nároku 1 pro přípravu kokrystalizátŮ s jednou nebo několika složkami skupiny B streptograminů nebo \ jejich derivátů.
13. Společně vykrystalizované směsi tvořené jednou nebo několika složkami skupiny B streptograminů nebo jejich derivátů a jednou nebo několika minoritními složkami skupiny A streptograminů definovaných ^v nároku 1.
14. Farmaceutická kompozice, vyznačen a 't í“ m~~že obsahuje purifikovanou formu streptograminů podle některého z nároků 1 az 5 v čistém stavu nebo v přítomnosti libovolného kompatibilního a farmaceuticky přijatelného ředidla nebo libovolné kompatibilní a farmaceutický přijatelné přísady.