CZ301009B6 - Syntetický polysacharid, zpusob jeho prípravy, farmaceutický prostredek, který ho obsahuje a použití syntetického polysacharidu pro prípravu farmaceutického prostredku - Google Patents

Abstract

Podstatou rešení je syntetický polysacharid, obsahující oblast vázající se na antithrombin III, tvorenou zretezením peti monosacharidu, pricemž zretezení obsahuje celkem dve karboxylové skupiny a alespon ctyri sulfoskupiny, a oblast je prímo vázána na své neredukující koncovce oblastí vazby na thrombin, obsahující zretezení 10 až 25 monosacharidových jednotek, volených ze souboru zahrnujícího hexosy, pentosy a desoxycukry, jejichž hydroxylové skupiny jsou na sobe nezávisle etherifikovány alkylovými skupinami s 1 až 6 atomy uhlíku nebo jsou esterifikovány za vytvárení sulfoskupin, a jeho soli, zvlášte farmaceuticky prijatelné soli.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká nových syntetických polysacharidů s antikoagulačními a antithrombotickými farmakologickými vlastnostmi heparinu. Heparin patří do skupiny glykosaminoglykanů (GAG), a to jsou heterogenní přírodní polysacharidy s navázaným zbytkem kyseliny sírové.

io

Dosavadní stav techniky

Heparinové přípravky jsou směsmi řetězců, obsahující počet jednotek monosacharidů od 10 až do is 100 i více. A tato heterogenita v celé sestavě se vztahuje k heterogenitě na úrovni povahy monosacharidú, které ji tvoří, ale právě tak je ve vztahu k substituentům, které obsahuje, viz Rodén L. v „The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminoglycans“, vyd. Lennarz W. J., Plenům

Press, New York a London, 267-37L (1980).

Každá skupina přírodních glykosaminoglykanů je spojena obvykle s celým vějířem farmakologíckých vlastnosti. Všechny jsou spojeny v přípravcích, které lze získat z přírodních látek. Takže například hepariny a heparany jako estery kyseliny sírové se vyznačují antithrombotickou účinností, jež je spojena se společným působením více faktorů na koagulaci.

Heparin katalyzuje, zvláště působením antithrombinu III (AT III) inhibování dvou enzymů, které zasahují do této koagulační kaskády krve, tj. faktor Xa a faktor Ila (čili thrombin). Heparinové přípravky s nízkou molekulární hmotností (HBPM héparines de bas poids moléculaire) obsahují řetězce, tvořené čtyřmi až třiceti monosacharidy a jejich vlastností je to, že reagují selektivněji s faktorem Xa než sthrombinem. Některé syntetické oligosacharidy, zvláště ty, které byly popsány v EP 84 999, se vyznačují vlastností, že inhibují selektivně cestou antithrombinu III faktor Xa bez jakékoli účinnosti na thrombin.

Je známo, že inhibování faktoru Xa vyžaduje fixaci heparinu na antithrombin III v oblasti vazby antithrombinu (DLA, domaine de liaison á l'antithrombine) a že inhibování faktoru Ila (thrombi35 nu) vyžaduje fixaci na antithrombin III cestou DLa (viz výše), jakož i na thrombin použitím vazné oblasti, jež je méně dobře definována (DLT, liaison moins bien défini).

Syntetické oligosacharidy, odpovídající oblasti DLA heparinu, známé jsou, a vyznačují se antithrombotickou účinností u vénové thrombosy. Tyto látky jsou popsány vEP 529 715,

EP 621 282 a v kanadském pat. spisu CA 2 040 905.

Účinnost těchto oligosacharidů při prevenci arteriální thrombosy je omezena jejich neschopností inhibovat thrombin.

Syntéza glykosaminoglykanů typu heparinu schopných inhibovat thrombin cestou aktivátoru antithrombinu III je spojena s velkými obtížemi a ve skutečnosti nebyla nikdy provedena.

S cílem docílit aktivitu produktů jako inhibitorů thrombinu a faktoru Xa bylo navrženo spojit navzájem dva oligosacharidy s malým řetězcem ú'eden DLA a jeden DLT) vhodnou jednotkou so (distanční jednotka, „spacer“), nezasahující vůbec do biologických aktivit.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je syntetický polysacharid, obsahující oblast vázající se na antithrombin III, tvořenou zřetězením pěti monosacharidů, přičemž zřetězení obsahuje celkem dvě karboxylové skupiny a alespoň čtyři sulfoskupiny, a oblast je přímo vázána na své nered ukuj ící koncovce oblastí vazby na thrombin, obsahující zřetězení 10 až 25 monosacharidových jednotek, volených ze souboru zahrnujícího hexosy, pentosy a desoxycukry, jejichž hydroxylové skupiny jsou na sobě nezávisle etherifikovány alkylovými skupinami s 1 až 6 atomy uhlíku nebojsou esterifikoio vány za vytváření sulfoskupin, a jeho soli, zvláště farmaceuticky přijatelné soli.

Nyní bylo zjištěno, že lze syntetizovat nové deriváty polysacharidů poměrně jednoduchým postupem s tím, že jsou biologicky aktivní a zvláště pak jsou antikoagulačními a antithrombotickýmí činidly. Navíc pak se zřetelem na provádění syntézy takových polysacharidů je možno modifikovat selektivně jejich strukturu a zvláště pak eliminovat substituce zbytkem kyseliny sírové, zasahující nežádoucím způsobem do interakcí s některými proteiny. Právě tak lze připravit polysacharidy, kteréjsou účinnými antithrombolytickými a antikoagulačními činidly, a které navíc mohou uniknout in vivo účinkům takových proteinů, jako je destičkový faktor 4 (FP4, facteur plaquetaire 4), které ruší účinek heparinu, zvláště na thrombin.

Takže bylo s překvapením zjištěno, že polysacharidy se zbytky kyseliny sírové a alkylované mohou být mocnými antithrombotickými a antikoagulačními činidly podle rozložení alkylových skupin a zbytků kyseliny sírové, jak jsou na cukerném základním řetězci,

Obecněji řečeno bylo zjištěno, že uspořádáním polysacharidických sekvencí je možno modulovat velmi přesně aktivity typu glykosaminoglykanů, aby se tak získaly produkty, a to velmi aktivní, mající vlastnosti heparinu. Takže podle jednoho z předmětů tohoto vynálezu se to týká nového syntetického polysacharidů, obsahujícího vaznou oblast na antithrombin III, kterou představuje zřetězení pěti monosacharidů, na nichž jsou celkem dvě funkce karboxylových kyselin a nejméně so 4 skupiny kyseliny sírové s tím, že tato oblast je přímo vázána neredukční koncovkou na oblast vazby na thrombin, obsahující zřetězení 10 až 25 monosacharidických jednotek, zvolených mezi hexosami, pentosami a desoxycukry, jejichž všechny hydroxylové skupiny jsou nezávisle etherifikovány alkylovou skupinou s jedním až šesti atomy uhlíku nebo esterifikovány ve formě esteru kyseliny sírové. To se týká i jejich solí, zvláště těch, kteréjsou farmaceuticky přijatelné.

S výhodou se vynález týká polysacharidů, jak byl výše definován, charakterizovaného tím, že všechny jeho hydroxylové skupiny jsou methylovány nebo esterifikovány kyselinou sírovou, ajejich solí, zvláště farmaceuticky přijatelných.

Produkty dle tohoto vynálezu jsou zvláště polysacharidy, jejichž struktura je vyjádřena následujícím obecným vzorcem I

OX

Pe xo <ox)h

CZ. <7U1VU7 DU kde vlnovkou je vyznačena vazba, situovaná nad nebo pod pyranosovým cyklem,

s tím, že vzorec vyjadřuje polysacharid Po, obsahující n-počet monosacharidových jednotek totožných či různých, vázaných anomemím atomem na Pe

a je to schematické vyjádření monosacharidické jednotky pyranosové struktury, zvolené mezi hexosami, pentosami a desoxycukry s tím, že tato jednotka je vázána svým anomemím atomem na jinou monosacharidickou jednotku s tím, že hydroxylové skupiny této jednotky jsou substituovány skupinami X, totožnými či různými a zvolenými mezi skupinami alkylovými s jedním až šesti uhlíky a skupinami sulfonovými, n znamená celé číslo od 10 do 25, Pe znamená pentasachand struktury

ve které 15

R] znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, nebo sulfoskupinu,

R_la znamená skupinu R| nebo s kyslíkovým atomem, na kterém je vázána, a s nosným atomem uhlíku karboxylovou funkci na témže cyklu, tedy skupinu

C-CHrO

R znamená alkylovou skupinu s jedním ai šesti atomy uhlíku,

W znamená kyslík nebo methylenovou skupinu, rovněž se to týká odpovídajících solí, zvláště farmaceuticky přijatelných.

Je třeba poznamenat, že zcela obecně v tomto popisu vlnovka znamená vazbu, situovanou nad 30 nebo pod rovinou pyranosového cyklu.

Monosacharidy, obsažené v Po mohou být totožné nebo se mohou lišit jeden od druhého, meziglykosidické vazby mohou být typu a nebo β,

Monosacharidy jsou s výhodou zvoleny z hexos rady D nebo L, tedy allosy, altrosy, glukosy, mannosy, gulosy, idosy, galaktosy a talosy (v případě, že h - 2), z pentos řady D nebo L, tedy

-3CZ 301009 Bó ribosy, arabinosy, xylosy a lysoxy (v případě, že n = 2) a mohou se použít i jiné monosacharídy, jako jsou například desoxycukry (h = 1 a/nebo “CH₂OX = CH₃).

Když v pentasacharidech Pe znamená W kyslík a Rj a má význam, jak byl uveden pro Ri, jsou takové pentasacharidy známými látkami, popsanými zvláště v patent, spisech EP 300 099, EP 529 715, EP 621 282 a EP 649 854, jakož i v literatuře. Získávají se ze synthonů popsaných rovněž v literatuře, viz Van Boeckel C., Petitou M., Angew. Chem., Intem-Ed. (V. Brit.), 32, 1671-1690(1993).

io Když v pentasacharidech Pe se Ri a liší od R_t a/nebo W znamená atom uhlíku, pak se takové pentasacharidy připravují použitím nových synthonů, které představují další předmět dle tohoto vynálezu.

Když v pentasacharidech Pe je jednotka typu kyseliny L-iduronové nahrazena jednotkou, jejíž konformace je dána přemostěním, pak takové pentasacharidy se připravují použitím nových synthonů, představujících další předmět dle tohoto vynálezu.

Rovněž podle dalšího z těchto předmětů se tento vynález týká nových meziproduktů, použitelných pri přípravě sloučenin vzorce I.

Polysacharidická část Po může být představována 10 až 25 jednotkami monosacharidů, alkylovanými nebo di- či trisubstituovanými zbytkem kyseliny sírové.

Polysacharidická část Po může být představována 10 až 25 jednotkami monosacharidů, alkylova25 nými nebo mono- či trisubstituovanými zbytkem kyseliny sírové.

Polysacharidická část Po může být představována 10 až 25 jednotkami monosacharidů alkylovanými plně substituovanými a/nebo částečně substituovanými a/nebo nesubstituovanými.

Jednotky substituované nebo nesubstituované mohou být rozptýleny po celé délce řetězce, nebo mohou být naopak seskupeny v sacharidických oblastech substituovaných či nesubstituovaných. Vazby mohou být povahy 1,2,1,3, 1,4, 1,5, 1,6 a typu a nebo β.

V tomto popise bylo zvoleno použít konformace ’C4 pro kyselinu L-iduronovou, ⁴Cj pro kyselinu D-glukuronovou, ale je zcela běžně známo, že obecně je konformace jednotek monosacharidických v roztoku proměnná.

Takže kyselina L-iduronová může mít konformace “Cí, ²So nebo ⁴Ci.

Výhodnými sloučeninami dle tohoto vynálezu jsou látky vzorce I.A.

(ÍA) kde

Λ

CZ 3U1UU9 Bb

L Jt m

vyznačuje příslušné zvláštní skupiny polysacharidů Po, vázané anomemím uhlíkovým atomem na Pe, jak to bylo definováno u vzorce I,

má významy, j ak byly uvedeny pro vzorec I, skupiny OX mají význam, jak to bylo uvedeno u vzorce I a u téhož monosacharidů mohou být totožné či různé, monosacharidy, obsažené v []_m, tvoří disacharid, opakovaný m-krát, monosacharidy obsažené v [],, tvoří trisacharid, opakovaný t-krát o

m může činit 1 až 8, t může činit 0 až 5 a p znamená nulu nebo 1 za předpokladu že 5 < m +1 < 12 ajejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné.

a kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i odpovídající kyseliny. 20 Právě tak výhodnými jsou soli, jejichž anion odpovídá vzorci Ϊ.2:

ÍI.21 kde každé t znamená 5, 6 nebo 7 a kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i odpovídající kyseliny.

- 5 CZ 301009 B6

Zvláště výhodnými jsou soli, jejichž anion má vzorec 1.3

(1.3) kde m znamená 1, 2 nebo 3 a t znamená 2, 3, 4 nebo 5 a kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i odpovídající soli.

Dalšími výhodnými sloučeninami dle tohoto vynálezu jsou ty vzorce II A

(Π.Α) kde

	OX	οχ
	o	Pxc,
(OX),	' v (OXlh	(OX)„
_ —	m*	ť

znamená specielní skupinu polysacharidů Po, vázaných anomemím uhlíkovým atomem na Pe, jak to bylo uvedeno u vzorce I

OX

má významy, jak to bylo uvedeno u vzorce I skupiny OX mají významy, jak to bylo uvedeno u vzorce I a v případě téhož monosacharidu 15 mohou být totožné či různé, monosacharid, obsažený v []_m' se opakuje m-krát, monosacharid obsažený v []_ť se opakuje t-krát a monosacharid obsažený v []_p- se opakuje p-krát, nť kolísá od 1 do 5, ť kolísá od nuly do 24 a p' kolísá od nuly do 24 za předpokladu, že 10 < m' + ť + p' < 25, jakož i jejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné.

CZ 3U11HJ9 B6

Mezi výhodné soli dle tohoto vynálezu patří ty, jejichž kationem je kation alkalického kovu, zvláště sodíku nebo draslíku.

Zvláště výhodné polysacharidy jsou voleny ze souboru zahrnujícího sodnou sůl methyl0430-methyl-2,4,6-tri-0_sulfo-a-[)-glukopyranosy l)-( 1 -4)04 3 Ο-m ethy I2.6- diO-sulfo-p-D-glukopyranosyl)4 1 —>4)-[0-(3-0-methyl-2.6-di-0-sulfo-a-D-gluk(>i o pyranosylH 1—>4)0430-methyl-2,6-di-0-sulfo-p~D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)]₄-O-<2,3di-O-methy l-óO-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)042,3-diO-methyl-p-D-glukopyranurosylH 1 —>4)042,3,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1—4)042,3-di-Omethy l-a-L-idopyranurosy IH 1 -4)-2,3,6-tríO-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methy1043-0-methyl-2,4,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)-O-(3-O-methy 12.6- di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —4)-[043O-methy 1-2,6-diO-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)043=0-methyl-2,6-4i-0-sulfo-P-D-glukopyranosy IH 1 ->4)]_r-O-(2,320 di-0-methyl-60-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 —4)042,3-diO-methyl-p-D-glukopyranurosy 1)41 —4)042,3,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 ->4)042,3-di-O-methyl-aL-idopy ranurosylH 1—4 )-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methyl-O-Q-O-methy 1-2,4,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —4)-O-(3-O-methyl2.6- di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl)-(l—►4)-[0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 -4)-0430-methyl-2,6-diO-sulfo-p-D-glukopyranosylH 1 —4)]_ó-O-(2,3di-O-methy 1-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosy l)-( 1—4)0-(2,3-di-0-methyl-(3-D-gluko30 pyranurosylH 1 -4)042,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 -4)042,3-diOmethy 1-a-L-idopyranurosylH1 ~>4)-2,3,6-triO-suIfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methyl-042,3-diO-methyl-4,6-diO-sulfo-a-D-glukopyranosylH1—4)-(-042,3-diOmethy l-6O-su lfo-a-D-glu kopy ráno sylH1 -4)] j |042,3-diO-methyl-|3-D-glukopyranurosylH 1 ->4)042,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosylH1—4)042,3-diOmethyl-a-L-idopyranurosylH1 -4)-2,3,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methy1042,3-dÍ-O-methy 1-4,6-di-0-sulfo-oi_D-glukopyranosyl)41 —>4)-[O42,3-di-0methyl-bO-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —4 )^042,3-diO-methy l-(3-D-glukopyranurosylH1 —4)042,3,6-triO-suIfo-a-D-glukopyranosyl)41 —4)042,3-di-O45 methyl-a-L-idopyranurosyl)4l-^>4)-2,3,6-tri-0-sulfO“a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methy1042,3-diO-methyl-4,6-diO-sulfo-a-D-glukopyranosy1)41—4)-(-042,3-diO50 methyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 -4)] 1^-042,3-diO-methy Ι-β-D-glukopyranurosy1)41—4)042,3,6-tri-O-sulfcMX-D-glukopyranosyl)41—4)042,3-di-Omethy 1-a-L-idopyranurosylH1 -4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu, .7CZ 301009 B6 sodnou sůl methy l-O43-O-methy 1-2,4,6-tri^O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)4>4)-O43-O-methyl2.6- di-O-sulfo-3-D-glukopyranosyl)4 1 —>4)-[043-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-<x-D-gluko5 pyranosylH 1 —>4)-O43-O-methyl-2,6-di-O-sulfo-f5-D-glukopyranosyl)4 1 —>4)]₂-[O-(2,3,6-tri^O-methyl-a-D-glukopyranosy 1)4 1 ->4)-O42,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)4 1 —*4)]₂-0-(2,3-dí-0-methyl“6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 ->4)-O42,3-di-Omethy l-p-D-glukopyranurosyl)4 1 —>4)-O42,3,6-tri-O-sulfc-a-D-glukopyranosyl)4 1 —>4)042,3-di-0-methyl-a-L-idopyranurosyl)41-*4)-2,3,6-tri-0-suIfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methyl-0-(3-0-methyl-2,4,6-tri“0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(l^—*4)-O-(3-O-methyl2.6- di-0-sulfo-|3-D-glukopyranosyl)4 1 —>4H043-0-methyl-2,6-di-0-$ulfo-a-D-gluko15 pyranosyl)-(1^4}-O-(3-O-methyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl)“(l—>4)]₂-[O-(2,3,6~tri4)-methyl-a-D-glukopyranosyl)41->4)-O42,3,6“tri-O-methyl-(3-D-gluk0pyranurosy 1)4 1 -+4)]₃-042,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-a-D-gIukopyranosyl)4 1 —>4)—O—(2,3—di—O— methyl-p-D-gíukopyranurosyI)41->4>-042,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41-^>4)O-(2,3-di-O-methy l-a-L-idopyranurosyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-sulfó-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methy l-O43-O-methy 1-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)4 1 —>4ý-O-(3-O-methy I2.6- di-0-sulfo-J3-I>-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-gluko25 py ráno sy 1)4 1 -►4)-O43-O-methy l-2,6-di-0-sulfo-(3-D-glukopyranosyl)4 1 -+4)4042,3,6tri-O-methyl-a-D-glukopyranosylHl^-^4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)(1 -+4)]₄-042,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —>4)-O42,3-dOOmethy Ι-β-D-glukopyranurosy 1)41 -+4)-042,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 -*4)042,3-ói-O-rnethyl-ct-L-idopy ran urosy 1)41—>4)-2,3,6-tri-0-sulfc-ct-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methy l-O43-O-methy 1-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —>4)-O43-O-methy 12.6- di-0-sulfo^p^D-glukopyranosyl)41 —>4)-O43-O-methy 1-2,6-di-O-sulfo-a-D-gluko35 pyranosyl)41 —>4)-043-0-methyl-2,6-di-0-sulfo43”D-glukopyranosyl)41 —>4)-[O42,3,6tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)41-*-4)-042,3,6-tri-0-methyl-p-E>-glukopyranurosyl)(1 ~+4)]₃-O42,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —>4)-O42,3-di-Omethyl-[3-D-glukopyranurosyI)41-+4)-042,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —>4)O42,3-di-O-methy 1-a-L-idopyranurosy 1)41 -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl methyl-043-0~methyl-2.4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41—>4)-O43-O-methyI2.6- di~0-sulfo-(3-D-glukopyranosyl)41—4)4042,3,6-trM3-methyl-a-D-glukopyranosyl)45 (1 —>4)-042,3,6-tri-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)41 —>4)]₄-042,3-di-0-methyl-6-0sulfo-a-D-glukopyranosy1)41-+4)-042,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy 1)41 —>4ýO(2,3-di-O-methy l-(3-D-gIukopyranosyl)41 —>4)-O42,3,6-tri-O-$ulfo-a-D-glukopyranurosyl)41 —>4)42,3-d i-O-methyl-a-L-idopyranurosy 1)41 —>4)-2,3,6-tri-0-suIfo-a-Dglukopyranosidu,

C£ JUIUW BO a sodnou sůl methyl-0-(3-0-me±yl~2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-O-ý3-O-methyl2,6-di-O-sul fo—β—O—gl ukopyranosy 1H1—>4)-[O-(2, 3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)5 (1 -4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl>-( 1 ->4)]5-O-(2,3-di-O-methy 1-6-0sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(l—4)-CH2,3-di-0-methyl-p-D-glukopyranurosyl)-(l—4)-0(2,3,6-tri-O-sulfo-a-I>-glukopyranosyl)-(l—4 )-0-(2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranurosyl)(1 -4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu, io Tento vynález zahrnuje rovněž způsob přípravy sloučenin vzorce 1, vyznačující se tím, že se v prvém stupni prodlouží dokonale chráněný prekursor polysacharidu I, obsahující chráněný prekursor oblasti Pe (tato oblast je zachycena na schématu 1), a to na svém neredukujícím konci chráněným prekursorem se síranovými skupinami polysacharidu Po a potom se v druhém stupni zavedou a/nebo demaskují skupiny v negativním nábojem.

Schéma 1

Struktura pentasacharidu Pe, znamená-li W kyslík nebo uhlík (písmena „DEFGH“ jsou použita v textu k označení příslušných monosacharidů)

Podle prvé z možných cest se může použít prekursor dokonale chráněný v části DFGH tetrasacharidu odpovídajícího pentasacharidu. Potom se přidá polysacharid Po, obsahující na svém redukujícím konci chybějící část Pe, aby se po spojení získal celek DLA, který je takto sestaven.

Podle druhé z možných cest se dá použít dokonale chráněný prekursor disacharidické části GH pentasacharidu. Potom se přidá prekursor polysacharidu Po DLT, obsahující na svém redukujícím konci chybějící část DEF z Pe, a tak se získá po spojení celek DLA, který je takto sestaven.

Syntéza těchto prekurzorů látky Pe se provede, jak to bylo zde již dříve uvedeno, použitím synthonů popsaných v literatuře nebo tvořících ěást tohoto vynálezu.

Syntéza části polysacharidového prekursoru látky Po se provede použitím reakcí, které jsou odborníkům dobře známé, to za použití způsobů syntézy oligosacharidů, viz Boons G. J., Tetra35 hedron 52, 1095-1121, nebo některého oligosacharidů, pokud se oligosacharid, použitý k vytvoření glykosidické vazby spojuje s oligosacharidem jako akceptorem glykosidické vazby pro získání jiného oligosacharidů, jehož sestava se rovná některé ze sestav těchto dvou reaktivních celků.

Tento sekvenční postup se opakuje, až se tak získá potřebná látka vzorce I. Povaha a profil náboje konečné žádoucí sloučeniny jsou rozhodující pro povahu chemických složek, použitých v různých etapách syntézy, to vše podle pravidel, jak jsou odborníkům na tomto úseku známa.

Výhodný postup přípravy prekursoru látky Po podle tohoto vynálezu je zachycen na následujícím schématu 2.

-9CZ 301009 B6

Schéma 2

Syntéza chráněného prekursoru pro DLT

OTn ,0

Ο-Μ|·+»ν OTn fa)

OTn

HO^I^^OT,

OTn (b)

OTn OTn

OTn OTn (c>

OTn

OTn zo 1 |

OTn •V-O.

HO

OTn

OTn

OTn ♦ OTn ^•Ι'^ο^Ι’^οτ, OTn OTn td) le)

OTn i,,

OTn

OTn

OTn

V.l

OTn OTn

OTn OTn

OTn

X-q lf,

OTn wSu'OTn i-^I^ot,

OTn

OTn i I -0-i I I -0-i I | <» ,0-^ I ^OT, οτη

OTn

OTn

OTn

OTn

Jt

OTn

Čas od času je uvažován substituent, který zůstává zachován během určitého počtu reakčních stupňů, jako semipermanentní se označuje substituent, který je zachován během většího počtu reakčních stupňů a jako permanentní substituent takový, který je zachován až do konce. Tyto permanentní substituenty se odstraní během zcela posledního stupně. Některé ze skupin io permanentních mohou být zachovány v konečné molekule.

Ve schématu 2 znamená (a) monosacharid, který je původcem glykosidické vazby, kde Z znamená dočasnou chránící skupinu hydroxylové skupiny a Y je aktivátorem anomemího uhlíku. Tn ve významech totožných či různých jsou dočasně substituenty, semipermanentní nebo permanentní všech dalších hydroxylových skupin.

Sloučenina (b) s nesubstituovanou hydroxylovou skupinou, představuje monosacharid jako akceptor glykosidické vazby, kde Th, totožné či různé, jsou substituenty dočasné, semipermanentní nebo permanentní hydroxylových skupin. Ti znamená chránící skupinu, dočasnou, semi20 permanentní nebo permanentní anomemí polohy. Tato skupina se eliminuje, aktivuje-li se anomemí uhlíkový atom.

Jako cíl získání sloučenin dle tohoto vynálezu reagují spolu původce glykosidické vazby (a) a akceptor glykosidické vazby (b) za vzniku disacharidu (c).

CL 3V1W9 BO

Takto získaný disacharid (c) se převede specifickým způsobem na disacharid (d) s obnažením jeho glykosidické vazby odstraněním chránící skupiny Ti a zavedením Y a/nebo přijetím akceptora glykosidické vazby (e) eliminováním Z.

Konečně původce glykosidické vazby (d) a akceptor glykosidické vazby (e) reagují spolu navzájem za vzniku tetrasacharidu (f), kde t znamená 1. Opakováním této řetězovací reakce se takto připraví oligo- nebo polysacharid (f), ve kterém t znamená číslo větší než 1.

Také je možno za použití postupu ze schématu 2 získat velké množství oligo- nebo polyio sacharidů dokonale chráněných jako (g), ve kterém oligosacharidy []_ra a []_t znamenají prekursory dokonale chráněné v oblastech, lišících se nábojem, sloučenin dle tohoto vynálezu.

V následujícím stupni celého postupu se sloučeniny jako (f) a (g) převádějí na dárce glykosidické vazby a spojují se pak s neredukuj ící koncovkou prekursoru Pe, dokonale chráněného,

Jak o tom zde již byla zmínka, mohou oligosacharidy neredukující koncovky polysacharidu jako dárci glykosidické vazby (g) představovat část Pe, to v případě, kdy se (g) navazuje na neredukující koncovku dokonale chráněného oligosacharidu, který je prekursorem zbytku struktury Pe.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se získávají z jejich polysacharidických prekursorů dokonale chráněných použitím řetězení dle těchto reakcí:

alkoholické funkce se převedou na skupiny O-sulfo, a karboxylové kyseliny se odkryjí odstraněním Tn, použitých kjejich chránění během vypracovávání celé sestavy, potom se zavedou sulfo-skupiny.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se mohou pochopitelně připravovat za použití dalších postupů, které jsou známé odborníkům z oboru syntézy oligosacharidů.

Zde popisovaný postup je výhodným postupem dle tohoto vynálezu. V každém případě je možno sloučeniny vzorce I připravovat jinými postupy, dobře známými z chemie cukrů, jak jsou popsány například v knize „Monosacharides“. Chemie těchto látek a jejich úlohy v přírodních produktech viz CoIIins P. M., Ferrier R. J., J. Wiley and Sons, 1995, díle Boons G. J., Tetrahedron 52, 1095-1121.

Prekursor části pentasacharidu Pe, pokud W znamená kyslík a R, a znamená R_b se připravuje dle postupů syntézy oligosacharidů a zvláště pak dle postupů, popisovaných v pat. spisech EP 84 999 301 618, EP 454 220 a EP 529 715 a v pat. přihl. EP 930 4769 a EP 942 02470. Dokončí-li se kompletní chránění, je možno za použití vhodných chránících skupin získat volnou hydroxylovou skupinu s poloze 4 koncové neredukující části (D). Dokonale chráněný prekursor Pe se pak spojí v této poloze za použití postupů, známých z chemie oligosacharidů.

Pentasacharid Pe, kde W znamená atom uhlíku a Rj a znamená R] vzorce:

-11CZ 301009 B6 kde R a R, mají významy, jak to bylo uvedeno u vzorce 1, se získá ze synthonu vzorce

/

Tn (Π.1) kde T| a T_n, totožné nebo různé, znamenají dočasný substituent, nebo semipermanentní či permanentí, Z znamená skupinu, chránící hydroxylovou funkci, jež byla získána syntézou použitím radikálové reakce mezi monosacharidem jako zdrojem volných radikálů a monosacharidem s dvojnou vazbou, a C-disacharid, takto připravený, byl převeden na synthon II 1 použitím klasických postupů, jak je popsali zde již zmínění Van Boeckel C a Petitou M.

Synthon vzorce II1, který se zvláště hodí pro syntézu sloučenin vzorce II, má vzorec

Hal.

nebo sloučenina 90

Tento synthon se připravuje dle reakčního schématu, popsaného ve schématu 22 zde ještě dále.

Pentasacharid Pe, který obsahuje substituent R^a a který představuje jednotku kyseliny L-iduronové konfigurace dle dále uvedeného vzorce

kde R a R| mají významy, jak byly uvedeny u vzorce I a W znamená kyslík, se připravují ze synthonu vzorce

kde Ti a T_n, totožné Či různé znamenají substituent dočasný, semipermanentní nebo permanentní, 20 Z znamená skupinu, chránící hydroxylovou funkci, jež byla získána synteticky podle popsaných postupů, viz GurjarM. K. a spol., Tetrahydr. Letters 36, 11, 1933-1936, 1937-1940 a 1994 (1995),35, 14. 2241-2244(1994).

Ί

CZ JU1VU9 BO

Synthon vzorce III. 1 je zvláště vhodný pro syntézu sloučenin III vzorce

Tento synthon se připravuje podle reakčního schématu, zachyceného ve schématu 34 zde ještě dále.

Meziprodukty IL1. a HI.L jsou látkami novými a jsou zvláště vhodné pro přípravu sloučenin vzorce I dle tohoto vynálezu.

Pentasacharidy Pe lze tedy připravit z těchto dvou disacharidických synthonů II. 1 nebo III.l io podle postupu, který popsal Van Boeckel C. A. A. a Petitou M., Angew. Chem,, ang. vydání, citováno již dříve.

Semipermanentními skupinami, použitelnými zde výše, lze rozumět skupiny eliminovatelné na prvém místě po glykosylační reakci, když glukosidická sestava má již počet žádaných motivů, aniž by se odstranily či měnily ostatní přítomné skupiny, umožňující vestavění funkčních skupin, předpokládaných v postaveních, která zaujmou.

Permanentními skupinami jsou skupiny schopné trvale chránit hydroxy lové funkce během zavádění funkčních skupin místo seskupení semipermanentních.

Tyto skupiny se volí z těch, které jsou kompatibilní s funkčními skupinami, zavedenými po eliminaci skupin semipermanentních. Kromě jiných faktorů jde o skupiny, které jsou inertními za reakčních podmínek, nutných pro zavedení těchto funkčních skupin a které jsou eliminovatelné, aniž by takové funkční skupiny doznaly změnu.

Podle tohoto vynálezu jsou výhodnými permanentními skupinami skupiny alkylové s jedním až šesti atomy uhlíku.

Jako příklad semipermanentních skupin a/nebo dočasných lze citovat skupiny benzylovou, acety30 lovou, levulinylovou, p-methoxybenzylovou apod.

Substituenty v poloze 3 složky uronové kyseliny cílové sloučeniny mohou být již přítomny ve výchozích synthonech, právě tak jako substituent Ri.

Chránícími skupinami, používanými při přípravě sloučenin vzorce I, jsou ty, které jsou jinak zcela běžně používány v chemii cukrů, viz například „Protective Groups in Organic syntheses, TW Green, John Wiley and Sond, New York 1981. Chrániči skupiny jsou zvoleny s výhodou z těch, jako jsou skupiny acetylové, halogenmethylové, benzoylové, levulinylové, benzylové, případně substituované benzylové, tritylové, rovněž případně substituované, tetrahydropyranylové, allylové, pentenylové, terč-butyldimethylsilylové (BDMS) nebo triethylsilylethylové.

Aktivačními skupinami jsou rovněž ty, které se klasicky používají v chemii cukrů, viz například BoongG. J., Tetrahedron 52, 1095 až 1121 (1996). Tyto aktivující skupiny se zvolí například z imidátů, thioglykosidů, pentenylglykosidů, xanthátů, fosfitů nebo halogenovaných derivátů.

Zde dále popisovaný způsob umožňuje přípravu solí dle tohoto vynálezu sloučenin dle tohoto vynálezu. Mají-li se získat odpovídající kyseliny, pak se sloučeniny dle tohoto vynálezu ve formě solí uvedou do styku s výměnnou pryskyřicí typu katexu ve formě kyseliny.

- n CZ 301009 Bó

Sloučeniny dle tohoto vynálezu ve formč kyselin lze potom neutralizovat vhodnou bází se zřetelem na získání vhodné soli.

Při přípravě solí sloučenin dle tohoto vynálezu vzorce I lze použít báze anorganické či organické, poskytující se sloučeninami vzorce I farmaceuticky přijatelné soli.

S výhodou se použije jako báze roztok hydroxidu sodného, draselného, vápenatého nebo hořečnatého s tím, že sodné a vápenaté soli sloučenin vzorce I jsou pokládány za výhodné.

io

Při stupni (a) tohoto postupu jsou použitelnými chránícími skupinami ty, které obvykle použije odborník na tomto úseku chemie cukrů, například dle EP 84 999 nebo dle „Protective Groups in Organic Syntheses, ZW Greene, J. Wiley and Sons, 1995.

Takto získané sloučeniny vzorce I mohou být případně zmýdelněny.

Sloučeniny výše již uvedeného vzorce I zahrnují rovněž i ty, kde jeden či více atomů vodíku nebo uhlíku byl/y nahrazen/y odpovídajícím radioaktivním isotopem, například tritiem nebo použitím ¹⁴C: Takto značené sloučeniny jsou vhodné při výzkumných pracech, dále při pracech týkajících se metabolizmu nebo farmakokinetiky, při biochemických testech jako je problém ligandů.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu jsou určeny jako předmět biochemických a farmakologických studií s tím, že bylo nalezeno, že mají v tomto směru velmi zajímavé vlastnosti. Sloučeniny dle tohoto vynálezu, které se vážou selektivně na AT II s afinitou stejnou či vyšší než v případě heparinu, mají antikoagulační a antithrombotické vlastnosti heparinu.

Globální antithrombotická účinnost produktu vzorce I byla vyhodnocena intravenózním nebo subkutánním podáváním krysám na modelu venozní stáze a indukování thromboplastinem dle postupu, který popsali Reyers a spol., Thrombosis Research 18, 669 až 674 (1980), jakož i na modelu arterielní thrombosy, vyvolané implantovaným shlukem mezi arteriální karotidu ajugulámí vénu krysy, jak to popsali Umetsu a spol., Thromb. Haumost. 39, 74-83 (1978). Při těchto dvou experimentálních modelech je hodnota DE₅o sloučenin dle tohoto vynálezu nejméně stejná či nižší ve srovnání s ostatními, dosud známými syntetickými heparinoidy (DE_J0 se pohy35 buje mezi 5 až 500 pg/kg). Sloučeniny dle tohoto vynálezu jsou tedy charakterizovány specifickou účinností a zvláště zajímavým antikoagulačním a antithrombotickým působením.

V důsledku jejich účinností biochemických a farmaceutických jsou sloučeniny dle tohoto vynálezu velmi zajímavými léčivy. Jejich toxicita je dokonale kompatibilní s využitím v tomto smyslu. Rovněž jsou to látky velmi stálé a proto se zcela zvláště hodí k použití jako hlavní účinná složka farmaceutických specialit.

Navíc sloučeniny dle tohoto vynálezu nejsou neutralizovány silnými dávkami destičkových kationtových proteinů, jako je destičkový faktor R (FP4, facteur 4 plaquetaire), uvolňovaný při aktivování uvedených destiček během postupu thrombosy. Sloučeniny dle tohoto vynálezu se proto jeví být velmi zajímavými při léčení a prevenci thrombos původu arterielního nebo venozního.

Mohou se využít při různých pathologických stavech v důsledku modifikace hemostaze soustavy so krevní a její koagulace, které se projevují zvláště během svízelí soustavy kardiovaskulární a cerebrovaskulámí jako thrombolytické potíže, spojené s artherosklerosou nebo cukrovkou, jako je tomu v případě nestabilní angíny, mozkové příhody, restenozy po angiopiastice, endarterektomii, zavedení endovaskulámích protéz, nebo jako je tomu v případě thromboembolytických potíží ve spojitosti s rethrombosou po thrombolyze, infarktu, dementních stavech ischemického původu, periferních arterielních onemocnění, hemodialyse, aurikulámích fibrilacích nebo během

Λ

CZ 301U09 B6 využití vaskulámích protéz přemostění aorto-koronámích. Tyto produkty lze proto kromě jiného využít při léčení nebo prevenci pathologických thromboembolických stavů venozního původu, jako jsou plicní embolie. Mohou se použít, nebo předcházet či léčit thrombotické komplikace, jak se projevují během chirurgických zákroků nebo ve spojitosti s jinými pathologickými stavy, jako je rakovina a infekce jak bakterielní, tak i virové. V případě jejich využití při zavádění protéz mohou sloučeniny dle tohoto vynálezu být použity při zavádění protéz a upravit tak jejich hemokompatibilitu. Zvláště pak mohou být fixovány na intravaskulámí protézy („stents“). V takovém případě mohou být případně chemicky modifikovány zavedením na koncovce neredukující či redukující vhodného větvení, viz EP 649 854.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se právě tak mohou využít jako adjuvantia při endarterektomii, realizované porézními vzduchovými měchy.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu jsou velmi stálými látkami a hodí se proto zcela obzvláště k tomu, aby představovaly aktivní princip léčiva.

Podle dalšího svého předmětu se vynález rovněž týká farmaceutické kompozice, obsahující jako hlavní podíl syntetický polysacharid, jak zde byl výše definován.

Vynález se s výhodou týká farmaceutických kompozic, obsahujících jako aktivní složku sloučeninu vzorce 1,1.1,1.2,1.3 nebo některou zjejich solí, farmaceuticky přijatelných, případně spolu s jedním či více inertních a vhodných excipientií.

V každé dávkované jednotce je účinná látka obsažena v množstvích uzpůsobených předpo25 kládaným denním dávkám. Obecně je každá dávkovaná jednotka vhodně upravena se zřetelem na dávkování a typu předpokládaného podávání, například ve formě lisované, kapslí a pod., sáčků, ampulek, sirupů a pod., kapek, mastí transdermálních nebo transmuskulámích takovým způsobem, že taková jednotka dávky obsahuje 0,1 až 100 mg účinné složky, s výhodou 0,5 až 50 mg. Sloučeniny dle tohoto vynálezu se mohou právě tak použít spolu s jinou účinnou látkou, vhodnou pro předpokládané therapeutické využití, jako jsou například antithrombolytická a antikoagulační činidla, antiagregační destičková činidla, jako je například dipyridamol, aspirin, ticlopidin, clopidogrel nebo antagonisti komplexu glykoproteinu Ilb/lIIa.

Kompozice farmaceutické jsou upraveny pro podávání savcům, čítaje v to lidi, a to pro léčení výše uvedených nemocí. Takto připravené farmaceutické kompozice jsou v různých formách, jako jsou například injekční roztoky či kompozice k pití, dražé, lisované produkty nebo pastilky. Výhodnými formami jsou injikovatelné farmaceutické roztoky. Farmaceutické kompozice podle tohoto vynálezu jsou zvláště vhodné pro podávání, preventivní nebo léčebné pri potížích vaskulámího ústrojí, jako je atherosklerosa, stavy hyperkoagulability, pozorované například v důsledku chirurgických zákroků, vývoje tumorů, nebo deregulace koagulování, způsobené aktivátory bakterielními, virovými nebo enzymovými. Dávkování lze široce měnit ve funkci věku, hmotnosti a zdravotního stavu pacienta, povahy a obtížnosti afekce jakož i se zřetelem na způsob podávání. Takové dávkování zahrnuje podávání jedné či více dávek denně od 0,1 až do 100 mg, s výhodou mezi 0,5 až 50 mg denně, a to intramuskulámě nebo subkutánně s tím, že podávání se provádí v stanovených časových odstupech.

Tento vynález se rovněž týká farmaceutických kompozic, obsahujících hlavní účinnou složku jednu z výše zde uvedených sloučenin, případně spolu s další účinnou látkou. Takové přípravky se připravují tak, že se mohou podávat cestou zažívacího ústrojí nebo parenterálně.

Ve farmaceutických kompozicích dle tohoto vynálezu pro podávání orální, sublinguální, subkutánní, intramuskulámí, intravenózní, transdermální, lokální nebo rektální mohou být aktivní složky podávány v jednotných dávkách ve směsi s klasickými farmaceutickými podklady jak zvířatům, tak i lidem. Jednotky pro podávání mohou mít obvyklé formy, tedy jako jsou pro podá55 vání orální lisované tablety, kapsle, prášky, granulky, roztoky či suspenze pro orální podávání,

mohou se podávat sublinguálně, nebo subkutánně, intramuskulámě, intravenózně, intranasálně nebo intraokulámě, nebo může jít o formy podávání cestou rektální.

Pokud se připravuje kompozice pevná pro podávání ve slisované formě, smíchá se účinná složka s farmaceutickým vehikulem, jako je želatina, škrob, laktosa, hořečnatá sůl kyseliny stearové, talek, arabská guma a lze zapracovat do směsi sacharosu nebo jiné hodící se složky, nebo lze směs upravit tak, že se docílí prodloužená či opožděná aktivita složky, jak se uvolňuje v předem určeném množství této hlavní složky.

io Přípravek v kapslích se získá tak, že se smíchá účinná složka s ředidlem a získaná směs se vnese do kapslí měkkých či tvrdých.

Prášky nebo granulky, dispergovatelné ve vodě, lze získat smícháním účinné složky se směsí disperzních činidel nebo činidel, určených ksemletí nebo činidel pro udržení aktivní, látky v suspenzi, jako je pyrrolidon, a právě tak lze přidat barviva nebo látky upravující chuť.

Pro podávání rektální se připravují čípky, které tají za teploty v rektu, jako je například kakaové máslo nebo polyethylenglykoly.

Pro podávání parenterální, intranasální nebo intraokulámí se používají vodné suspenze, isotonické roztoky v solance, nebo jiné sterilní roztoky stím, že injikovatelné roztoky obsahují disperguj ící činidla a/nebo smáčedla, farmakologicky kompatibilní, jako je například propylenglykol nebo butylenglykol.

Pro podávání cestou sliznic se může účinná látka zpracovat za přítomnosti promotoru, jako je sůl některé ze žlučových kyselin, hydrofilní polymer, jako je například hydroxypropylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, hydroxyethylcelulosa, ethylcelulosa, karboxymethylcelulosa, dextran, polyvinylpyrrolidon, pektiny, škroby, želatina, kasein, akrylové kyseliny ajejich estery i kopolymery, vinylové polymery či kopolymery, vinylalkoholy, alkoxylované polymery, poly30 mery polyethylenoxidu, polyethery nebo jejich směsi.

Účinnou látku lze rovněž zapracovat do formy mikrokapslí, případně s jedním či více podklady nebo přísadami.

Účinná látka se může prezentovat právě tak ve formě komplexu s cyklodextrinem, například α, β nebo γ-cyklodextrinem, 2-hydroxypropyH3-cyklodextrinem nebo methyl-β-cyklodextrinem.

Účinnou látku lze rovněž uvolnit z balónku, který ji obsahuje, nebo endovaskulámím zařízením, který ji zavede do krevního oběhu. Farmakologická účinnost hlavní účinné látky tím není jakkoli ovlivněna.

Výhodnou formou podávání je určitě forma subkutánní.

Způsoby, přípravy a následující schémata popisují syntézy různých meziproduktů, vhodných k přípravě polysacharidů dle tohoto vynálezu. Příklady blíže popisují vynález, aniž by jeho rozsah jakkoli omezovaly.

Jsou používány tyto zkratky:

TBDMS: terc.-butyldimethylsulfyl,

Lev: levulinyl Bn: benzyl Bz: benzoyl,

CCM chromatografíe na tenké vrstvě

Olm: trichloracetimidyl i r

CZ J01W9 B6

LSIMS: je zkratkou anglického výrazu „Liquid Secondaiy Ion Mass Spectrometry“

ESIMS: „Electron Spray Ionisation Mass Spectrometry“

TMS: trimethylsilyl

TSP: sodná sůl trimethylsilyltetradeuteriopropionové kyseliny

Tf: triflát, tedy derivát kys. trifluoroctové,

MS: molekulové síto All: allyl

PMB: p-methoxybenzyl SE: trimethylsilylethyl.

Dowex, Sephades, Chelex a Toyopearl jsou chráněné obchodní známky.

Při všech způsobech, přípravách a ve všech zde popisovaných příkladech se mohou všechny uvedené pracovní postupy, týkající se katalytického zdvojení imidátů, štěpení esterů levulové kyseliny, katalytického zdvojení thioglykosidů, zmýdelnění, methylace a selektivního odstranění chránění skupinou p-methoxybenzylovou, selektivního odstranění a sulfatace oligosacharidů a polysacharidů hydrogenolyzou esterů nebo benzyletherů, zmýdelnění esterů či dokonce sulfátaniontů provést použitím obecných postupů, popsaných zde dále použitím vhodných meziproduktů.

Obecné způsoby

Způsob 1: Katalytické spojení imidátů použitím terč-butyldimethyltriflátu

Pod argonem a za chlazení na -20 °C se přidává roztok terc-butyldimethylsulfyltriflátu v dichlormethanu (IM, 0,2 mol/mol imidátu) k roztoku imidátu a glykosylového akceptoru v dichlormethanu (17,5 ml/mmol) za přítomnosti molekulárního síta 4 Á. Po 10 až 20 minutách za sledování chromatografii na tenké vrstvě se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný, roztok se filtruje, promyje se vodou, vysuší a zahustí do sucha.

Způsob 2: Odštěpení skupiny kyseliny levulové

Sloučenina, jež se má zbavit chránících skupin, se rozpustí ve směsi ethanolu a toluenu 2 : 1 (42 ml/mmol) a přidá se octan hydrazinu (5 mol/mol). Směs se ponechá reagovat 15 až 30 minut (kontrola chromatografii na tenké vrstvě) a zahustí se.

Způsob 3: Navázání na thioglykosidy za katalýzy N-jodimidem kyseliny jantarové (složka A) a stříbrnou solí kyseliny trifluoroctové (složka B)

Ve skleněné nádobce se rozpustí thioglykosid a glykosylový akceptor v bezvodém toluenu (18 ml/mmol thioglykosidů) za přítomnosti mol.síta 4 Á. Po protřepávání hodinu za teploty místnosti se reakční směs ochladí na 0 °C, přidá se složka A (3 mol/mol thioglykosidů) a pak složka B (0,28 mol/mol thioglykosidů). Za 10 až 15 minut (kontrola chromatografii na tenké vrstvě) se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný, po filtraci se roztok promyje 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, vysuší se a zahustí.

Způsob 4: Zmýdelnění, methylace a selektivní odstranění p-methoxybenzylové skupiny:

Zmýdelnění esteru: Sloučenina, jež se má zmýdelnit, se rozpustí ve směsi dichlormethanu a methanolu 1 : 1 (4 ml/mmol), přidá se natriummethoxid, směs se protřepává 20 minut a pak se neutralizuje pomocí pryskyřice Dowex 50 H\ Po zahuštění se získaná látka použije v dalším stupni bez jakéhokoli čistění.

Methylace: V malých množství se přidává hydrid sodíku za 0 °C ke směsi surového produktu z předchozího stupně a methyljodidu v N,N-dimethylformamidu (7 ml/mmol). Po skončení reak- 17CZ 301009 B6 ce se reakční směs vlije do vody, po extrakci ethylesterem kyseliny octové se organický roztok promyje vodou, vysuší se a zahustí do sucha.

Odštěpení p-methoxybenzylové skupiny: Surový předchozí produkt se rozpustí ve směsi acetonitrilu a vody 9 : 1 (20 ml/mmol). Za chlazení na 0 °C se přidává dusičnan ceričito-amonný (0,5 mol/mol), reakční směs se míchá 2 hodiny za kontroly chromatografováním na tenké vrstvě, přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, organická látka se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, roztok se vysuší a zahustí.

i o Způsob 5: Odstranění chránících skupin a sulfatace oligo- i polysacharidů

Hydrogenolýza benzyletherů a benzylesterů: Za kontroly chromatografováním na tenké vrstvě reaguje 6 až 12 hodin roztok právě uvedené látky v ledové kyselině octové za přítomnosti katalyzátoru, tedy palladia na uhlí 5% (dvojnásobek hmotnosti sloučeniny) s vodíkem za tlaku

400.10⁵ Pa. Po filtraci se produkt použije přímo v dalším stupni.

Zmýdelnění esterů: K roztoku esteru v methanolu (150 ml/mmol) se přidá 5 M vodný roztok hydroxidu sodného (v takovém množství, že po skončeném přidávání má odpovídat koncentrace hydroxidu sodného 0,5 M). Za 2 až 5 hodin se vše vlije do vody a prolije kolonou Sefadexového

G-25 gelu (1,6 na 115 cm), eluovanou vodou. Po zahuštění se vše prolije kolonou Dowex 50 H⁺ (2 ml) a lyofilizuje. V tomto stadiu se ověří použitím ^]H NMR, že došlo k odstranění všech chránících skupin. Je-li to třeba, pak se produkt znovu hydrogenuje a/nebo zmýdelňuje.

Sulfatace: K roztoku látky, jež se má sulfátovat v dimethylformamidu (5mg/ml) se přidá komplex triethylaminu a oxidu sírového (5 mol/mol hydroxylové funkce) a po stání den při 55 °C se roztok nanese na kolonu Sephadexu G-25 (1,6 na 115 cm) eluovanou 0,2 M chloridem sodným. Frakce, obsahující produkt se zahustí a zbaví soli na téže koloně za eluování vodou. Lyofilizováním se získá konečný produkt.

o

CZ 3U1009 B6

Schéma 3 5 Syntéza monosacharidů 6

. IQ CZ 301009 B6

Příprava 1

Ethyl-2,4,-ó“tri-0-acetyl“3-0~methyl-l-thio-P-D-glukopyranosid (2)

V 580 ml toluenu se rozpustí 69 g (0,19 mmol) l,2,4,6-tetra-O-acetyl-3-O-methyl-P-D-glukopyranosy 1, viz Helferích B a spol., J. prakt. Chem. 132, 321 (1932), přidá se 28 ml (0,38 mmol) ethanthiolu a potom se přikapává roztok diethyletherátu trifluorboranu v toluenu (190 ml, 1 M). Vše se nechá reagovat pod kontrolou chromatografováním na tenké vrstvě 1,5 hodin, přidá se pevný hydrogenuhličitan sodný, po filtraci a promytí vodou se roztok vysuší a zahustí. Chromáío tografováním na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a ethylester kyseliny octové, : 1) se získá 37 g (54 %) sloučeniny vzorce 2, [a]_D - 26° (c = I, dichlormethan), 'H NMR (CDCb): δ 5,05-4,96 (m, 2H, H-2, H-4), 4,39 (d, IH, J = 9,5 Hz, H-l), 4,18-4,12 (m,2H, H-6, H-6'), 3,60 (tn, IH, H-5, 3,50 (dd, IH, J = 9,3 Hz, H-3), 3,41 (s, 3H, OCH,), is 2,65-2,53 (m, 2H, SCH₂CH₃),2,12,2,11,2,09(3s, 9H, 3 Ac), 1,25 (t, IH, SCH₂CH₃).

Příprava 2

EthyM,6-O-benzyliden-3-O-methyl-l-thio-f3-D-glukopyranosid (3)

Ve směsi methanolu a dichlormethanu 1 : 2 (1,5 I) se rozpustí 37 g (0,1 mmol) látky 2, přidá se 150 ml 2 M roztoku natriummethoxidu, po 30ti minutách stání za teploty místnosti se reakční směs neutralizuje na pryskyřici Dowex 50 filtruje a zahustí. Tato surová látka se rozpustí v litru bezvodého acetonitrilu, přidá se 30 ml (0,2 mol) α,α-dimethoxytoluenu a 2,3 g (10 mmol) kyseliny kafrsulfonové, reakční směs se ponechá 1,5 hodin za míchání a kontroly chromatografováním na tenké vrstvě, po přidání 1,4 ml triethylaminu se reakční směs zahustí. Za získaného zbytku se vysrážením etherem získá 27 g (81 %) látky 3, [a]_D -60° (c = 1,63, dichlormethan).

'H NMR (CDC1₃): δ 7,51 - 7,34 (m, 3H, C₆H₅), 5,55 (s, IH, C₆H₅CH), 4,56 (d, IH, J = 9,2 Hz,

H-l), 2,75 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,32 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pro C_1ĎH₂₂O₅S (326,41) vypočteno: 58,58 % C, 6,79 % H, 9,82 % S nalezeno: 58,99 % C, 6,74 % H, 9,75 % S

Příprava 3

Ethyl-2-O-benzyl-4,6-0-benzyliden-3^0-methyl-l-thio-|3-D-glukopyranosid (4)

Za teploty 0 °C se přidává 2,00 g (83,3 mmol) hydridů sodíku do roztoku 23 g (71,0 mmol) látky 3 a 11 ml (93,0 mmol) benzylbromidu v 200 ml Ν,Ν-dimethylformamidu. Reakční směs se míchá 2 hodiny za kontroly CCM, přidá se methanol a reakční směs se vlije do vody. Vše se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, extrakt se promyje vodou, vysuší a zahustí. Vysrážením zbytku etherem se takto připraví 18,8 g (63 %) látky 4, t.t. 123 °C, [a]_D -35° (c - 0,63, dichlormethan).

'H NMR (CDCb): δ 7,50- 7,25 (m, 10H, 2x C₆H₅), 5,55 (s, IH, C₆H₅CH), 4,54 (d, IH, J = 9,7 Hz, H-l), 4,34 (m, IH, H-6), 3,75 (t, IH, J= 10,2 Hz, H-6'), 3,65 (s, 3H, OCH₃), 3,60 - 3,33 (m, 4H, H-5, H-4, H-3, H-2), 2,75 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,32 (t, 3H, SCH₂CH₃).

CZ JV10U9 B6

Analýza pro C₂₃H₂₈O₅S (416,54) vypočteno: 66,32 % C, 6,78 % H, 7,70 % S nalezeno: 66,25 % C, 7,27 % H, 7,84 % S

Příprava 4 ío Ethyl-2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl-l-thio-p-D--glukopyranosid (5)

Pod argonem se přidává 0,65 ml (4,50 mmol) roztoku anhydridu kyseliny trifluoroctové v 16 ml (0,21 mol) kyseliny trifluoroctové k roztoku 28,8 g (69,0 mmol) látky 4 a 33 ml (0,21 mol) triethy Isilanu v 120 ml dichlormethanu. Po dvouhodinovém míchání se reakční směs zředí ethyl15 esterem kyseliny octové a přidává se 1 M roztok hydroxidu sodného až do dosažení hodnoty pH 9. Po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se získaný extrakt promyje vodou, vysuší a zahustí do sucha. Čištěním na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a ethylester kyseliny octové 3:1, potom 2 : 1) se získá 17,4 g (60 %) látky 5, [a]o -47° (c = 1, dichlormethan.

’H NMR (CDC1₃): δ 7,45 - 7,25 (m, 10H, 2x C₆H₅), 4,47 (d, IH, J = 9,3 Hz, H-4), 3,66 (s, 3H, OCH₃), 3,61 - 3,40 (m, 2H, H-4 a H-5), 3,38- 3,19 (m, 2H, H-2 a H-3), 2,73 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,3 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza proC₂₃H₃₀O₅S (418,55) vypočteno: 66,00 % C, 7,22 % H, 7,66 % S nalezeno: 65,62 % C, 7,28 % H, 7,21 % S

Příprava 5

Ethyl-2,6-di-O-benzyM-O-levuliny 1-3-O-methyl-l -thio-p-D-glukopyranosid (6)

Ve 400 ml bezvodého dioxanu se rozpustí 17,3 g (41,4 mmol) látky 5, přidá se 9,60 g kyseliny levulové (83,0 mmol), 16 g (88 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu a 1 g (9,3 mmol) 4-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se míchá 4 hodiny, zředí se přidáním ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje postupně 5% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, opět vodou, vysuší se a zahustí. Čištěním na koloně oxidu křemičitého (toluen a ethylester kyseliny octové, 6 : 1) se získá 19,9 g (93 %) čisté látky 6, [a]_D -5° (c = 1,46, dichlormethan).

LSÍMS, positiv.způsob: m/z thioglycerol + chlorid sodný 539 (M + Na)⁺, thioglycerol + fluorid draselný 555 (M+K)⁺.

'H NMR (CDC1₃): δ 7,40- 7,20 (m, 10H, 2x C₆H₅), 2,8- 2,4 (m, 6H, SCH₂C₃) a[O(CO)CH₂CH₂(CO)CH₃], 2,16 (s, 3H, [O(CO)CH₂CH₂(CO)CH3], 1,32 (t, IH, J = 7,3 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pro C₂₈H₃₆O₇S (516,65) vypočteno: 65,09 % C, 7,02 % H, 6,21 % S nalezeno: 65,30 % C, 7,03 % H, 5,75 % S.

-91 CZ 301009 B6

Příprava 6

Allyl-4,6-O-benzyliden-3~O-methyl-|3~D-glukopyranosÍd (7)

Přidává se 1,10 ml (0,012 mol) kyseliny trifluormethansulfonové do suspenze 135 g (0,7 mol) běžné 3-O-methyl-D-glukosy a litru allylalkoholu, reakční směs se vyhřívá 2 hodiny na 120 °C, po neutralizování přidáním triethylaminu (2 ml) se vše zahustí do sucha.

ίο K tomuto surovému produktu, rozpuštěnému v 2 litrech Ν,Ν-dimethylformamidu se přidá 136 ml (0,9 mol α,α-dimethoxytoluenu a 25 g (0,13 mmol) kyseliny kafrsulfonové, Reakční směs se zahřívá hodinu na 80 °C ve vakuu, neutralizuje se přidáním 21 ml methylaminu a vše se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, extrakt se promyje vodou, vysuší a zahuštěním se získá pevný podíl, směs α/β = 3/2. Výtěžek celkem 144 g (57 %). Krystalováním z ethanolu se získá

60 g (26 %) čisté látky 7-a. Chromatografován ím části matečných louhů na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a ethylester kyseliny octové 3 : 1) se dá získat 7,8 g čistého anoméru 7-β, 6,8 g směsi 7 α/β a 1,4 g čistí látky 7-a.

Sloučenina 7-β: [a_D-43°(c= 1, dichlormethan), tt. 131 °C,

Ή NMR (CDCb): δ 7,50 - 7,26 (m, 5H, C₆H₅), 6,01 - 5,90 (m, IH, OCH,(CH=CH₂)], 5,55 (s, IH, C₆H_sCH), 5,38- 5,32 [m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)], 4,47 (d, IH, J = 7,5 Hz, H-l), 4,42 - 4,32 [m, 2H, H-6' a OCH₂(CH=CH₂)], 4,21- 4,15 [m, IH, OCH₂(CH=CH₂)J, 3,80 (dd, IH, J = 10,2 Hz, H-6), 3,67 (s, 3H, OCH₃).

Analýza pro C,₇H₂₂O₆ (322,36) vypočteno: 63,34 % C, 6,88 % H nalezeno: 63,23 % C, 7,12 % H

Příprava 7

Allyl-2-O-acetyl-4,6—Ο-ΒϋηζγΙίόεη-β-Ο-ΓηείΗγΙ-β-Ο^Ιι^οργΓΗηοΞίά (8).

Ve 100 ml dichlormethanu se rozpustí 11,5 g (35,7 mmol) látky 7, přidá se 4,0 ml (42,8 mmol) anhydridů kyseliny octové, 6,40 ml (46,4 mmol) triethylaminu a 440 mg (3,80 mmol) 4—dimethylaminopyridinu, směs se ponechá za míchání 2 hodiny (kontrola pomocí CCM), promyje se potom následně 5% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, opět vodou, a zahustí se až do získání 12,3 g (95 %) pevné látky 8, t.t. 115 °C, [a_D] -68° (c = 1, dichlormethan.

LSIMS posít, tvar m/t thioglycerol + chlorid sodný 387 (M+Na)⁺, thioglycerol + fluorid draselný

4 03 (M+K)⁺.

Ή NMR (CDCb): δ 7,51 - 7,34 (m, 5H, C₆H₅), 5,98-5,78 [m, IH OCH₂(CH=CH₂)], 5,56 (s, IH, C₆H_sCH), 5,32- 5,17 [m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)], 4,99 (dd, J = 8 Hz, IH, H-2), 4,55 (d, J = 7,9 Hz, IH, H-l), 4,39 - 4,29 [m, 2H, H-6 a OCH₂(CH=CH)₂)], 4,14 - 4,04 [m, IH,

OCH₂(CH=CH₂)], 3,82 (t, J - 10,2 Hz, IH, H-6'), 3,80 (s, 3H, OCH₃), 2,12 (s, 3H, Ac).

CZ 3U1UU9 BG

Analýza pro C19H24O7 (366,39) vypočteno: 62,83 % C, 6,64 % H nalezeno: 62,63 % C, 6,64 % H

Příprava 8

Allyl-2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-methyl-p-D-glukopyranosid (9)

Za teploty 0 °C se přidává do roztoku 12,0 g (33,3 mmol) látky 8 a 21,3 ml (33 mmol) triethylsilanu v 50 ml bezvodého dichlormethanu roztok 306 μΐ (2,10 mmol) anhydridu kyseliny trifluoroctové v 10 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se ponechá 4 hodiny za míchání (kontrola

CCM), zředí se ethylesterem kyseliny octové a až do dosažení hodnoty pH 9 se přidává 1 M vodný roztok hydroxidu sodného. Směs se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, roztok se po promytí vodou vysuší a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a aceton, 8 : 5) se získá 10,0 g (82 %) čisté látky 9, [α]π -40° (c = 1,06, dichlormethan).

’H NMR (CDCI3): δ 7,35- 7,28 (m, 5H, C₆H₅), 5,87- 5,79 [m, IH, OCH₂(CH=CH₂)], 5,28- 5,14 [m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)], 4,43 (d, IH, J - 7,9 Hz, H-l), 4,41-4,28 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂), 4,10 - 4,02 [m, IH, OCH₂(CH=CH₂)], 3,77 - 3,75 (m, 2H, H-6 a H-6'), 3,51 (s, 3H, OCH₃, 3,30 (dd, IH, J = 8,9 Hz, H-3), 2,8 (d, IH, OH).

Analýza proC_I9H₂₈O₇ (366,39) vypočteno: 62,28 % C, 7,15 % H nalezeno: 61,73 % C, 7,19 % H

-73 CZ 301009 B6 o

Otmldala

Schéma 4: Syntéza disacharidů 13

Ί Λ

CZ JU1UW Bb

Příprava 9

Allyl-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-4-0-(2,6-<li-0“benzyl-4-0-íevulinyl“3-05 methyl-a-D-glukopyranosyl)-p-D-glukopyranosid (10).

V 150 ml dichlorethanu se rozpustí 17,4 g (33,7 mmol) thioglykosidu 6 a glykosylový akceptor 9 v množství 10,3 g (28,1 mmol). Po přidání molekulárního síta A se reakční směs míchá hodinu při -20 °C a pod argonem za přidávání roztoku 8,30 g (33,7 mmol) N-jodimidu kyseliny io jantarové a 0,30 ml (3,30 mmol) kyseliny trifluormethansulfonové ve směsi dichlorethanu a ethyletheru (415 ml, 1 : 1). Reakční směs se dále míchá 10 minut za kontroly CCM, přidá se hydrogenuhličitan sodný, a po filtraci se organický roztok promývá postupně 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou, po vysušení se zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na oxidu křemičitém v koloně za použití směsi dichlormethanu a ethylesteru kyseliny octové (11 : 1) a získá se tak 11,7 g (52 %) 10-a disacharidu v čisté formě, [a]_D + 38° (c = 1, dichlormethan).

*H NMR (CDC1₃): δ 7,35 - 7,23 (m, 15 H, 3x QHs), 5,90 - 5,80 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,47 (d, IH, J = 3,6 Hz, H-l'), 5,27 - 5,14 (m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)), 5,05 - 4,90 (m, 2H, H-4' a H-2,

4,42 (d, IH, J= 7,6 Hz, H-l), 4,38 - 4,32 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 4,15- 4,0 (m, IH,

OCH₂(CH=CH₂)), 3,90 (dd, IH, J = 8,8 Hz, H-4), 3,54, 3,34 (2s, 6H, 2 OCH₃), 2,75-2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,10 (2s, 6H, Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃.

Analýza pro C45H56O14 (820,94) vypočteno: 65,84 % C, 6,88 % H nalezeno: 65,74 % C, 6,90 % H

Příprava 10

Prop-1 '-eny 1-2-O-acety 1-6-O-benzy 1-3-O-methy M-O-(2,6-di-O-benzy Μ-Ό-levuliny 1-3O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-p-D-glukopyranosÍd (11).

Do roztoku 1,36 g (1,66 mmol) látky 10 v 4,30 ml tetrahydrofuranu, prostého peroxidů, se přidá 5,80 mg (0,70 pmol) hexafluorfosforečnanu l,5-cyklooktadien-bis-(methyldifenylfosfin)-iridia, roztok se zbaví vzduchu, prostor se naplní argonem a zavádí se vodík. Vše se ponechá za míchání po dobu 10 minut (kontrola CCM), zahustí se, zbytek se rozpustí v dichlormethanu, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití směsi toluenu a ethylesteru kyseliny octové (3 : 1) se takto izoluje 1,04 h (76 %) čisté látky 11, [a]_D + 47° (c - 1,1, dichlormethan),

LSIMS kladný způsob: m/z thioglycerol + chlorid sodný, 951 (M + Na)⁺, thioglycerol + fluorid draselný, 967 (M + K)⁺.

*H NMR (CDC1₃): δ 7,34- 7,23 (m, 15 H, 3 x C₆H₅), 6,21 - 6,16 (m, IH, O(CH=CH)-CH₃), 5,45 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l), 5,13 - 4,97 (m, 3H, H-4', H-2 a O(CH=CHpCH₃), 4,6 (d, IH, J = 7,55 Hz, H-l), 3,96 (dd, IH, J - 8,9 Hz, H-4'), 3,54, 3,34 (2s, 6H, 2 OCH₃), 2,74 - 2,36 (m,4H, C(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15, 2,08 (2s, 6H, Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C'=O)CH₃),

1,56-1,51 (dd, 3H, O(CH-CH)CH₃).

-75CZ 301009 B6

Analýza pro C45H56O14 (820,94) vypočteno: 65,84 % C, 6,88 % H nalezeno: 66,21 % C, 6,92 % H

Příprava 11 o 2-O-Acetyl-6-O-benzy l-3-0-methyl-4-0-(2,6-di-O-benzyl^—O-levuliny 1-3-O-methyl-aD-glukopyranosyl}-a,p-D-glukopyranosa (12).

Roztok 3,9 g (14,3 mmol) chloridu rtuťnatého v 26 ml směsi acetonu a vody (5 : 1) se vkapává do roztoku 7,8 g (9,53 mmol) látky 1_1 a oxidu rtuťnatého v 80 ml stejné směsi rozpouštědel. Po míchání 1 hodinu se směs filtruje a zahustí, extrahuje dichlormethanem, roztok se promyje vodným roztokem, nasyceným, jodidu draselného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy dichlormethan a aceton, 10:1, potom 4 : 1 se získá 6,70 g (90%) látky 12, [a]_D + 92° (c = 1,37, dichlormethan).

Chromatografie na tenké vrstvě, dichlormethan/aceton 14: 1, R_f = 0,31.

Ή NMR (CDCh): δ 7,37- 7,24 (m, 15H, 3 x C₆H₅), 5,46 (d, IH, J= 3,5 Hz, H-l'), 5,37 (d, J = 3,6 Hz, H-la), 4,58 (d, J = 8 Hz, H-l β), 3,54, 3,39, 3,36 (3s, 6H, 2 OCH₃), 2,75 - 2,4 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16,2,15 (2s, 6H, Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pro C42H52O14 (780,83) vypočteno: 64,60 % C, 6,71 % H nalezeno: 65,09 % C, 6,82 % H

Příprava 12

2-0-Acetyl-6-0-benzyl-30-methyl-4-042,6-di-0-benzyl^-0-levulinyI-3-0-methyl-aD-glukopyranosylý-a,p-D-glukoranosyltrichloracetimidát (13)

Rozpustí se 5,0 g (6,4 mmol) látky _12 v 50 ml dichlormethanu a pod argonem se přikapává 3,9 ml (38,8 mmol) trichloracetonitrilu a 1,6 g (11,5 mmol) uhličitanu draselného také. Reakční směs se ponechá za míchání 16 hodin (kontrola CCM), po filtraci se filtrát čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy dichlormethan/aceton, 6:1, potom 4:1a získá se tak 5,22 g (87 %) směsi imidátů 13 (α/β = 60/40). Chromatografie na tenké vrstvě, dichlormethan/aceton 20:1 Rf0,66a0,51.

'H NMR (CDCI₃): δ 8,62- 8,59 (2s, IH, N:H-a a β), 7,37- 7,23 (m, 15 H, 3 x C₆H₅), 6,51 (d, J = 3,7 Hz, H-la), 5,81 (d, J = Hz, Η-1β), 5,50 (d, IH, J - 3,5 Hz, H-l'), 3,55, 3,41, 3,37 (3s, 9H, 3 OCH₃), 2,75 - 2,40 (m, 4H, 0(C=0)CH₂CH₂(C=0)CHj), 2,16, 2,07,2,04 (3s, 6H, Ac a (C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

4-fcZ·

CZ JU1UU9 BO

Analýza pro C44H52CI3NO14 vypočteno: 57,12 % C, 5,66 % H, 1,51 % N nalezeno: 57,31 % C, 5,87 % H, 1,55 % N

Příprava 13 o Allyl-2-O-acety l-6-O-benzyl-3-O-methyl-(2,6-di-O-benzyl-3-O-methy 1-a-D-glukopyranosyl)-(3-D-glukopyranosid (14)

Zpracováním 3,11 g (3,80 mmol) sloučeniny 10 podle způsobu 2 se získá 2,70 g (97 %) sloučeniny 14, [a]_D + 25° (c = 1,7, dichlormethan). LSIMS, kladný modul m/z thioglycerol + chlorid sodný 745 (M+Na)⁺, thioglycerol + fluorid draselný, 761 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCb): δ 7,33 - 7,20 (m, 15 H, 3x C₆H₅, 5,87 - 5,78 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-V), 5,30 - 5,17 (m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)), 5,02 (dd, IH, H-2), 4,43 (d, IH, J = 7,6 Hz, H-l), 4,34 - 4,28 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 4,12 - 4,02 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)),

3,63,3,36 (2s, 6H, 2 OCH₃), 2,10 (s, 3H, Ac).

Analýza pro C4OH50O12 (722,84) vypočteno: 66,47 % C, 6,97 % H nalezeno: 66,31 % C, 7,24 % H

-77CZ 301009 B6

Schéma 5 Syntéza oligosacharidu 19

O

Příprava 14

Allyl-<H2,6-di-0-benzyl-4-OIevulinyl-3-Omethyl-a-D-glukopyranosyl>-( 1 -^4)-0-(25 0-acetyl-6-Obenzyl-3-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)-(l-+4)-0“(2,6-di-Obenzyl-3-0methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-2-Oacety l-6-0-benzyl-3^0-methyl-p~D-glukopyranosid (15)

Směs 4,22 g (4,56 mmol) imidátu Γ3 a 2,65 bg (3,64 mmol) glykosylového akceptoru 14 se io zpracovává dle způsobu 1. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/diethylether, 3 : 2, potom 1 : 1 se získá tetrasacharid 15 ve výtěžku 4,31 g (80 %), [a]_D + 52° (c = 0,66, dichlormethan).

Ή NMR (CDC1₃) δ 7,35 - 7,23 (m, 30 H, 6 x C₆H₅), 5,83 - 5,9 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,47 15 (d, 2H, J = 3,5 Hz, H-l' a H-l'), 5,25 - 5,14 (m, 2H, OCH₂(CH=CH₂)), 4,38 (d, IH, J = 7,7 Hz,

H-l), 4,30 (d, IH, J = 8 Hz, H-l), 4,32 - 4,25 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 4,08 - 4,02 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 3,56, 3,53, 3,34, 3,27 (4s, 4 OCH₃), 2,78- 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15,2,09, 1,85 (3s, 9H, 2 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH3).

Analýza pro C₈₁Hioo0₂₅ (1485,7) vypočteno: 66,29 % C, 6,78 % H 25 nalezeno: 66,10 % C, 6,79 % H

Příprava 15

O-(2,6-Di-O-benzyl-4-O-levulinyl-3-O-methy 1-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(2-O30 acetyl-6-O-benzyl-3-O-methy l-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —*4)-O-(2,6-di-O-benzyl-3-Omethyl-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)-2-Oacetyl-6-Obenzyl-3-0-methyl-a,P~D-glukopyranosa (16)

Zpracuje se 2,30 g (1,54 mmol) sloučeniny 15 právě tak, jak to bylo popsáno v případě 10. Za 35 10 minut se přidá do reakční směsi roztok 0,30 g (1,70 mmol) N-bromimidu kyseliny jantarové v 15 ml dichlormethanu a 5,50 ml vody. Vše se míchá 5 minut (kontrola CCM), po zředění směsi dichlormethanem se organický roztok promyje nasyceným vodným roztokem hydrogensíranu draselného, potom vodou a po vysušení se zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně oxidu křemičitého za eluování směsí toluenu a ethylesteru kyseliny octové (3 : 2) a získá se tím

1,57 g (71 %, přepočteno na obě dvě etapy) Čisté látky 16, [a]_D + 69° (c = 0,87, dichlormethan).

’H NMR (CDClj): δ 7,38 - 7,20 (m, 30H, 6 x C₆H₅), 5,47 (d, IH, J = 3,5 Hz, N-l' a H-l'), 5,36 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-la), 4,55 (d, IH, J = 8 Hz, H-l), 4,36 (d, IH, J = 8 Hz, H-l), 3,56,3,54, 3,39, 3,36, 3,28 (5s, 9H, 3 OCHj), 2,75 - 2,35 (m, 4H, 0(C=O)CH₂CH₂(C=0)CH3), 2,16, 2,12,

1,86 (4s, 9H, 2 Ac a 0(C=O)CH₂CH₂(C=0)CH3).

Příprava 16

O-(2,6-Di-0-benzyl-4-O-levulinyl-3-0-methy 1-a-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2-0 50 acetyl-6-Obenzyl-3-Omethyl-p-D-glukopyranosyl)-(l—^4)-0-(2,6-di-0-benzyl-3-0 methy 1-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)-2Oacetyl-6-Obenzyl-3-Omethy Ι-α,β-D-glukopyranosyltrichloracetamidát (17) .70.

Za teploty místnosti se 16 hodin míchá směs 1,5 g (1,04 mmol) látky J6, 0,63 ml (8,22 mmol) trichloracetonitrilu a 0,26 g (1,87 mmol) uhličitanu draselného v prostředí 15 ml dichlormethanu, po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí na koloně oxidu křemičitého s použití soustavy toluen/aceton 4:1+ hmotnostně 1 % triethylaminu. Získá se tím 1,47 g (89,6 %) sloučeniny 17, chromatografie na tenké vrstvě toluen/aceton 7:2, R_f 0,5.

Příprava 17 io A lly 1-0-(2,6-di-O-benzyl-3-0-methyl-a-D-gIukopyranosyl)-O-(2-0-acetyl-ó-0-benzyl3-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(2,6-di-O-benzy Ι-3-O-rnethy l-a-D-glukopyranosy lý-( 1 —>4)-2-O-acety kó-O-benzy Ι-3-O-methy Ι-β-D-glukopyranosid (J_8)

Odstranění zbytku kyseliny levulové zj_5 se provede za použití 1,3 g této látky (0,87 mmol) použitím způsobu 2; získá se tak 1,05 g (86 %) sloučeniny 18, [a]o + 40° (c = 0,6, dichlormethan).

'H NMR (CDCb) δ 7,36 - 7,23 (m, 30 H, 6 x C₆H₅), 5,83 - 5,78 (m, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l'), 5,47 (d, IH, J= 3,5 Hz, H-l’), 5,25- 5,21 (dd, IH, J= 1,6 Hz,

J = 17 Hz, OCH₂(CH=CH₂)), 5,16 - 5,13 (dd, IH, J = 1,4 Hz, J = 10 Hz, OCH₂(CH=CH₂)), 4,38 (d, 1H, J = 6,5 Hz, H-l), 4,31 (d, 1H, J = 6,5 Hz, H-l), 4,08 - 4,02 (m, 1H, OCH₂(CH=CH₂)), 3,59 (m, IH, H-4’), 3,67,3,53, 3,39,3,29 (4s, 12H, 4 OCH,), 2,09,1,86 (2s, 6H, 2 Ac).

Příprava 18

Allyl-O-(2,6-di-O-benzyl^l-O-levulinyl-3“O-methyI-a-D-glukopyranosyl)-( l—>4>~[0—(2— 0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)-{ 1 —>4)-O-(2,6-dí-O-benzy 1-3-0methyl-a-D-glukopyranosylHl“*4)]₃-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3^0-methyl-p-D-gIukopyranosid (19)

Směs 842 mg (0,53 mmol) látky 18 a 1,17 g (0,74 mmol) látky 17 se zpracuje podle postupu způsobu 1. Produkt se čistí na koloně Toyopearl HW-50 (110 na 3,2 cm, soustava dichlormethan/ethanol, 1 : 1) a získá se tak 1,44 g (85 %) látky 19, [a]_D + 57° (c - 1,01 dichlormethan).

'HNMR (CDCIj) δ 7,35- 7,20 (m, 60 H, 12 x C₆H_S), 5,83 - 5,78 (m, IH, OCH₂(CI1=CH),)), 5,24, 5,21 (dd, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 5,16-5,13 (dd, IH, OCH₂(CH=CH₂)), 3,59, 3,56, 3,61, 3,47, 3,33, 3,26 (bs, 24 H, 8 OCHj), 2,75 - 2,25 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CHj, 2,15, 2,09, 1,85, 1,84 (4s, 15H, 4 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), δ hlavních anomemích protonů: 5,48, 4,37, 4,23 ppm

Analýza pro C₁₅₆O47H₁₈₈(2815,51) vypočteno: 66,56 % C, 6,73 % H nalezeno: 66,22 % C, 6,75 % H

CZ JU1UU9 HO

Příprava 19

O-(2,6-Di-O-benzy 1-4-0-levul iny l-3-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-[O-(2-O5 acety 1-6-O-benzy 1-3,0-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(2,6-di-O-benzyl-3-Omethyl-«-D-glukopyranosyl)-(l—4)]₃-2-0-acetyl-6-O-benzyl-3^0-niethyl-a,p-D-glukopyranosa (20).

-31 CZ 301009 B6

Postupem, jak to bylo uvedeno v přípravě 15, se zpracuje 720 mg (0,25 mmol) sloučeniny 19. Látka se čistí na koloně oxidu křemičitého použitím soustavy toluen a ethylester kyseliny octové 3 : 2, potom 4:3a získá se tak 555 mg (78 %) látky 20, [a]_D + 70° (c = 0,94, dichlormethan).

Chromatografie na tenkou vrstvu, toluen, ethylester kyseliny octové, Rf 0,43.

Příprava 20 i o O-(2,6-Di-O-benzyl-4-O-levuliny l-3-O-methyl-<x-D-gl u kopy ran osy l)-( 1 -+4)-(0-(2-0acety 1-6-O-benzy l-3-0-methyl-p-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,6-di-O-benzy 1—3—0— methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4)]₃-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3^0-methyl-a,(3-D-glukopyranosyltrichlorimidát (21).

Postupem jako v přípravě 16 se zpracuje 540 mg (0,195 mmol) sloučeniny 20. Produkt se čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/ethylester kyseliny octové 3 : 2 + 1% triethylaminu. Získá se tím 455 mg (80 %) imidátové směsi 21_ s poměrem anomérů α/β = 27/73. Chromatografie na tenké vrstvě, toluen/ethylester kyseliny octové 3 : 2, Rf = 0,48.

^lH NMR (CDCh) δ 8,60, 8,59 (2s, IH, N Ha a β), 7,35 - 7,21 (m, 60 H, 12 x C₆H₅, 2,75 - 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,16, 2,06, 2,04, 1,85, 1,84 (5s, 15H, 4 Ac aO(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

H NMR (CDC1₃, δ hlavních anomemích protonů 6,50, 5,79, 5,51, 5,48,4,29,4,25 ppm.

Příprava 21

FenyI-2,4,6“tri-O-acetyl-3-0-methyl-l-thio-a-D-glukopyranosid(22)

V 45 ml toluenu se rozpustí 5,23 g (14,4 mmol) l,2,4,6-tetra-O-acetyl-3-O-methyH3-D“ glukopyranosy, a po přidání 3,0 ml (28,8 mmol) thiofenolu se přikapává 1,77 ml (14,4 mmol) diethyletherátu trifluorboranu, načež se reakční směs vyhřívá 30 minut na 50 °C, Po zředění dichlormethanem se organický roztok promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan a ethylester kyseliny octové, 5 : 2 se takto získá l,0é g (17 %) 22-a a 2,71 g (46 %) 22-β.

22-α⁰ Rf 0,44, cyklohexan/ethylester kyseliny octové 3 : 2, [afo + 230° (c = 1, dichlormethan).

ISIMS kladný modul m/z + chlorid sodný, 435 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 451 (M+K)⁺ 'HNMR(CDCh)δ 7,46-7,27 (m, 5H, C₆H_S), 5,89(d, IH, J = 5,6 Hz, H-l), 5,05-4,97 (m, 2H, H-2 a H-4), 4,49 - 4,42 (m, IH, H-5), 4,25 - 4,18 (m, IH, H-6), 4,03 - 4,00 (m, IH, H-6'), 3,66 (dd, IH, J = 9,5 Hz, H-3), 3,51 (s, 3H, OCH₃), 2,16,2,12,2,00 (3s, 9H, 3 Ac),

Analýza proC₁₉H₂₄O₈S (412,46) vypočteno: 55,33 % C, 5,87 % H, 7,77 % S nalezeno: 55,25 % C, 5,90 % H, 7,75 % S

ΤΊ

CL OU1UU> DO

Schéma 7: Syntéza oligosacharidu 28

Příprava 22

Fenyl—4,6-0~benzylideri“2,3“<li“0-methyl-l-thio-a-l>-glukopyranosid (23)

V 18 ml směsi methanolu a dichlormethanu (2 : 1) se rozpustí 970 mg (2,35 mmol) sloučeniny 22, přidá se 150 ml 2 M roztoku methoxidu sodného a po 30ti minutách stání za teploty místnosti se směs neutralizuje na pryskyřici Dowex 50 (H⁺), filtruje a filtrát se zahustí.

K roztoku tohoto surového produktu v 22 ml acetonitrilu se přidá 0,7 ml (4,0 mmol) α,α-diio methoxytoluenu a 51 mg kyseliny kafřsulfonové (0,22 mmol), reakční směs se míchá hodinu, neutralizuje se přidáním triethylaminu (0,50 ml) a zahustí se.

Za chlazení na 0°C se přidává do roztoku předchozí surové sloučeniny 163 μΐ (4,0 mmol) methyljodidu v 9 ml N,N-dimethylformamidu, 73,0 mg (2,80 mmol) hydridu sodíku, po hodino15 vém míchání reakční směsi se přidá methanol, produkt se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje vodou, vysuší a zahustí. V pevné formě se takto získá 840 mg (94 %) sloučeniny 23. t.t. 178 °C, [a]_D + 330° (c = 1, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 411,4 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 427,4 (M+K)⁺.

'HNMR (CDCI₃) δ 7,50-7,24 (m, 10H, 2 x C₆H₅), 5,71 (d, IH, J = 3,4 Hz, H-l), 5,52 (s, IH, C«H,CH), 3,62 (s, 3H, OCHj).

Analýza pro C21H24O6 S (388,48) vypočteno: 64,92 % C, 6,23 % H, 8,25 % S nalezeno: 64,87 % C, 6,17 % H, 7,85 % S

Příprava 23

Fenyl-6-O-benzyl-2,3-di-O-methy 1-1 -thio-a-D-glukopyranosid (24)

Jako to bylo popsáno v přípravě 4, zpracuje se 792 mg (0,47 mmol) sloučeniny 23. Produkt se čistí na koloně oxidu křemičitého použitím soustavy cyklohexan/ethylester kyseliny octové 7 : 2, potom 2 : 1, a získá se tak 318 mg (80 %) sloučeniny 24. [a]_D + 243° (c = 1, dichlormethan). ISIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný, 4k3 (M + Na)⁺, + fluorid draselný (M + K)⁺ 429.

'H NMR (CDCb) δ 7,52-7,22 (m, 10H, 2x C„H₅), 5,71 (d, IH, J = 5,3, Hz, H-l), 3,64 a 3,49 (2s, 6H, 2 OCHj), 3,36 (dd, IH, H-3).

Analýza pro C₂₁H₂₆O₅S (390,50) vypočteno: 64,50 % C, 6,71 % H, 8,21 % S nalezeno: 64,05 % C, 6,88 % H, 7,74 % S.

Příprava 24

Fenyl-0-{2,6-di-0-benzyl~4-0-levuíinyl-3-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1-+4)-0-(2O-acetyl-ó-O-benzyl-3-O-methyl-p-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-6-O-benzyl-2,3-di-Omethyl-l-thio-a-D-glukopyranosid (25).

Směs 436 mg (0,47 mmol) sloučeniny 13 a 153 mg (0,39 mmol) sloučeniny 24 se zpracuje dle způsobu 1. Čištění se provádí na koloně Sephadex LH20, soustava ethanol/dichlormethan, 1:1, získá se tím 309 mg (68 %) čisté látky 25 [a]_D + 144° (c - 1, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 1175 (M+Na)⁺, + fluorid draselný (M+K)⁺1191.

Ή NMR (CDC1₃) δ 7,51 - 7,21 (m, 25 H, 5 x C₆H₅), 5,73 (d, IH, J = 5,2 Hz, H-l), 5,48 (d, IH, J= 3,5 Hz, H-l), 4,46 (d, IH, J = 8 Hz, H-l), 3,7, 3,54, 3,5, 3,31 (4s, 12 H, 4 OCH₃), 2,70-2,41 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH3), 2,16, 2,01 <2s, 6H, 1 Ac a O(C'=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

io

Analýza pro C₆3H₇₆0i₈S vypočteno: 65,61 % C, 6,64 % H, 2,78 % S nalezeno: 65,02 % C, 6,60 % H, 2,72 % S

Příprava 25

Methy 1-0-(2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4>-O20 (2-O-acety 1-6-O-benzy 1-3-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-O-(6-O_benzy 1-2,3-diO-methyl-a-D-glukopyranosy l-( 1 —>4)-(O-benzyl-2,3-di-O-methyi-p-D-glukopyranosyl)(1 -+4)-0-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-O-(benzyl-2,3_dÍ-Omethyl-a-L-idopyranurosyl}-(l^>4)-2,3,6-tri-0-benzyl-a-D-glukopyranosid (27)

Pod argonem a za chlazení na -25 °C se přidává roztok 92 mg (0,38 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 37,5 μΐ (0,38 mmol) kyseliny trifluoroctové v 22 ml směsi 1,2-dichlorethanu a diethyletheru (1 : 1) ke směsi 451 mg (0,39 mmol) sloučeniny 25 a 434 mg (0,31 mmol) sloučeniny 26 v 7,5 ml 1,2-dichlorethanu za přítomnosti 400 mg molekulárního síta 4Á, viz Westerduin a spol., Bio Org. Med. Chem. 2, 1267 (1994). Po 30 minutách se přidá pevný hydro30 genuhličitan sodný, roztok se filtruje, promyje roztokem thiosíranu sodného, vodou, po vysušení se zahustí. Zbytek se čistí na koloně Sephadexu LH-20, dichlormethan a ethanol (1 : 1), potom na koloně oxidu křemičitého, cyklohexan a ethylester kyseliny octové 1:1, potom 2:3. Získá se tím 487 mg (64 %) čisté látky 27, [a]o + 63° (c = 0,54, dichlormethan). Chromatografie na tenké vrstvě, cyklohexan/ethylester kyseliny octové 2 : 1, R_f - 0,28. ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 2454 (M + Na)⁺, + fluorid draselný 2469 (M+K)\ ’H NMR (CDCb) δ 7,38 - 7,2 (m, 50H, 10 x C₆H₅), 3,65, 3,52, 3,48, 3,46, 3,44, 3,42, 3,39, 3,30, 3,17 (9s, 27H, 9 OCH₃), 2,75 - 2,4 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,15, 1,98, 1,97, 1,87 (4s, 12H, 3 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH3).

Hlavní anomemí protony: 5,57, 5,47, 5,30, 5,15,4,57,4,29,4,08.

Příprava 26

Methyl-O-(2,5-di-O-benzyl-3-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-O-(2-O-acety 1-6O-benzyÍ-3-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-{l—>4}-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-methyl-aD-gIukopyranosyl-{ 1 —>4)-( O-benzy 1-2,3-di-0-methyl-(3-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(3,6di-O-acety l~2-O-benzyl-a-D-glukopyranosy 1)~{ 1 —»4)-O-(benzy 1-2,3-di-O-methy 1-a-Lidopyranurosyl)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (28).

K odstranění kyseliny levulové z 498 mg (0,2 mmol) sloučeniny 27 se použije postup dle způsobu 2, získá se tak 402 mg (84 %) sloučeniny 28, [a]_D + 64° (c = 1, methylenchlorid). ESIMS, kladný modul: m/z 2352.9 (M + amoniový kation/.

'H NMR (CDClj): δ 7,38-7,20 (m, 50 H, 10 x C₆H,), 3,67, 3,52, 3,49, 3,45, 3,44, 3,41, 3,40,

3,28,3,17, (9s, 27 H, 9 Ac), 2,65 (d, IH, J = 2,14 Hz, OH), 1,98, 1,96, 1,87 (3s, 9H, 3 ac).

Hlavní anomemí protony: 5,55, 5,49, 5,30, 5,18,4,45,4,31, 4,08.

Analýza pro C127H152O41 2334,48) vypočteno: 65,34 % C, 6,56 % H nalezeno: 65,40 % C, 6,62 % H

Příprava 27

Methy 1-0-(2,6-di-O-benzyl-4-O-levu líny 1-3-0-methyI-a-l>-glukopyranosyI)-( 1 —>4)-O(2-0-acetyl-6-0-benzyÍ-3-0-methyl-J3-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-[0-(2,<í-di-0-benzyl-3O-methyl-a-D-glukopyranosyl-( 1 —>4)-0-(2-0-acety l-6-O-benzyl-3-O-methyl-p-Dglukopyranosy IH 1 ->4)]₄-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-020 (benzyl-2,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)-(l—^4)-0-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzylα-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(benzy 1-2,3-di-O-methy l-a-L-idopyranurosyl)-( 1 ->4)2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (29).

Směs 340 mg (1,16 mmol) sloučeniny 21 a 256 mg (1,09 mmol) sloučeniny 28 se zpracuje dle způsobu 1. Zbytek se čistí na koloně Toyopearl HW-Á0 (3,2 na 70 cm, dichlormethan a ethanol, 1 : 1) a získá se tak 421 mg (78 %) čistého 15ti-méru 29, [a]_D + 65° (c = 1, dichlormethan). ESIMS, kladný modul: m/z + fluorid draselný 2584,3 (M+2K)⁺, 1736 (M+3K)⁺.

’H NMR (CDClj) δ 7,35- 7,18 (m, 105 H, 21 x C₆H₅), 2,75- 2,4 (m, 4H, O(C=O)30 CH₂CH₂(C=O)CH5), 2,15,1,97, 1,95,1,87, 1,83 (6s, 24 H, 7 Ac + O(C=O)CH,CH₂(C=O)CH₃). Hlavní anomemí protony: 5,55, 5,48, 5,30, 5,13, 4,56,4,29,4,22, 4,08.

Schéma 8, Syntéza polyaacharldu 91 (příklad l)

_ 97 _

Příprava 28

Methy 1-0-(2,6-di-O-benzy 1-3-O-methyl-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)-O-(2-O-acety 1-65 O-benzyl-3-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-[O-(2,6-di-O-benzy 1-3-O-methy l—aD-glukopyranosy l-( 1 —>4)-(2-O“acetyl-6-O-benzy Ι-3-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy 1)(1 —>4)]₄-O-(ň-O-benzyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-O-(benzy 1-2,3-diO-methyl-p-D-glukopyranurosylH 1 ->4)-O-(3_J6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-aD-glukopyranosylH 1 -+4)-O-benzyl-2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranurosyl)-( 1 ->4)-2,3,6-tri-Oi o benzy 1-a-D-glukopyranosid (30)

Použitím způsobu 2 se zpracováním 342 mg (0,087 mmol) sloučeniny 29 získá 253mg (75 %) sloučeniny 30, [a]_D + 59° (c- 0,92 dichlormethan). ESIMS, kladný modul: m/z + fluorid draselný 2535,6 (M+K)²⁺.

^lH NMR (CDC1₃) δ hlavních anomemích protonů: 5,55, 5,50, 5,48, 5,30,4,56,4,30, 4,22, 4,08. Analýza pro C275H328O05 (4993,37) vypočteno: 65,57 % C, 6,60 % H nalezeno: 65,09 % C, 6,57 % H

Příprava 29

Methy 1-0-(2,6-di-O-benzy 1-4—O-levul iny 1-3-O-methy l-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-O(2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-methyl-p-D-glukopyranosy l)-( 1 -^4)-(2,6-di-O-benzy I-3-Omethyl-a-D-glukopyranosy l-( 1 —>4}-O-(2-O-acetyl-6-O-benzy 1-3-O-methyl-p-D-gluko30 pyranosyl)-( 1 —>4)]₆-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-O(benzyl-2,3-di-O-methyl-3-D-glukopyranurosyl)-(l—>4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyla-D-gIukopyranosyl)-( 1 —>4)-(benzy l-2,3-di-0-methyl-a-L-idopyranurosyl)-( 1 ^4)-2,3,6tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (31).

Postupem dle, způsobu 1 se zpracuje směs 32,7 mg (20,8 mmol) sloučeniny Γ7 a 80,7 mg (16,3 mmol) sloučeniny 30. Čištění na koloně Toyopearl HW-^0, dichlormethan/ethanol, 1:1, výtěžek 19ti-méru sloučeniny 31: 60 mg (89 %), [a]_D + 61°(c = 0,82, dichlormethan). ISIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný, 2162,4 (M + 3 Na)³⁺, + fluorid draselný 2178,5 (M+RK)³⁺.

’Η NMR (CDCI3) δ hlavních anomemích protonů: 5,55, 5,48, 5,30, 5,17, 4,56, 4,28, 4,22, 4,08.

CZ 3U1UU9 B6

Sahena 9: Syntéza disacharidu 37

-30CZ 301009 B6

Příprava 30

Ethyl-0-(4,6-0-benzyliden-p-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-6-0-trityl-l-thio-p-D-gluko5 pyranosid (33).

K suspenzi 50,0 g (0,105 mmol) sloučeniny 32, viz Westman J. a Nilsson M., J. Carbohydr. Chem. 14, 949-960 (1995) v 520 ml dichlormethanu se pod argonem přidá: 35 ml (0,252 mol) triethylaminu, 29,3 g (0,105 mol) tritylchloridu, a 1,28 g (10 mmol) 4-dimethylaminopyridinu.

Reakční směs se zahřívá 2 hodiny do varu pod zpětným chladičem za kontroly CCM, po ochlazení na teplotu místnosti a zředění přidáním 500 ml dichlormethanu se organický roztok promývá postupně 10% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení a zahuštění se filtrováním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/aceton, 65 : 35, později 50 : 50 získá surový produkt 33, dostatečně čistý k použití v tomto stavu v následujícím stupni. Analytický vzorek se chromatografuje, [a]_D + 53° (c = 0,74, dichlormethan)- ESIMS, negativní modul; m/z 715 (M-H)“.

'H NMR (CD₂C1₂) δ 7,52 - 7,25 (m, 20H, 4 x C₆H₅), 5,42 (s, C₆H₅CH), 4,97 (d, J = 3,5 Hz, H-l'), 4,40 (d, J = 9,6 Hz, H-l), 3,82 (t, J = 9,3 Hz, H-R'), 3,70, 3,68 (m, 2H, H-3, H-5), 3,60 (dd, J - 2,0, 11,0 Hz, H-6a), 3,55 (td, J = 5,2, 9,7, 9,7 Hz, H-5'), 3,49 - 3,45 (m, 3H, H-2, H-2', H-5), 3,38 (dd, J- 10,5 Hz, H-6'a), 3,33 (dd, H-6'b), 3,30 - 3,27 (m, 2H, H-4'-, H-6b), 2,90 - 2,77 (m, 2H, SCH₂CH₃), 1,40 - 1,37 (t, 3H, CH₂CH₃).

Analýza:

pro C40H44O10S vypočteno 67,02 % C, 6,19 % H, 4,47 % S nalezeno: 66,83 % C, 6,19 % H, 4,19 % S.

Příprava 31

Ethyl-O-(4,6-O-benzyliden-2,3-di-O-methyI-«-D-glukopyranosyl)-( 1 —4)-2,3-di43methy 1-6-O-trity I-1 -thio-p-D-glukopyranosid (34)

Pod argonem se přidává po kapkách 34 ml (0,537 mol) methyljodidu do roztoku 64,1 g sloučeniny 33 v 600 ml dimethylformamidu, po ochlazení na 0 °C se přidává pomalu 13,5 g (0,536 mol) hydridů sodíku, reakční směs či lépe suspenze se míchá za teploty místnosti po 2 hodiny, ochladí se na 0 °C, přikapává se 35 ml methanolu a po dvouhodinovém míchání se reakční směs zředí přidáním 500 ml ethylesteru kyseliny octové, potom 600 ml vody. Vodný podíl se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, organický roztok se promyje vodou, vysuší se a zahustí. Zbytek 34 je dostatečně čistý k použití v dalším stupni. Analyticky čistý vzorek se získá chromatografováním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan a aceton, 70 : 30, [<x]_D + 45° (c - 0,83, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný, 795 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 811 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCb): δ 7,52 - 7,19 (m, 20 Η, x C₆H_S), 5,51 (d, J = 3,3 Hz, H-l'), 5,43 (s, C₆HsCH), 4,45 (d, J= 9,8 Hz, H-l), 3,60, 3,59, 3,49, 3,51 (4s, 12 H, 4 OCH₃), 2,86 (q, 2H, J= 7,5 Hz, SCHjCH,), 1,40 (l, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pro C₄4H₅₂Oi₀S i Λ

CZ 3U1UU9 B6 vypočteno: 68,37 % C, 6,78 % H, 4,15 % S nalezeno: 68,28 % C, 6,98 % H, 4,09 % S

Příprava 32

Ethy l-0-(2,3-di-0-methyl-ot-D-glukopyranosyl>-<l -*4)-2,3-di-O-methyl-l-thio-p-Dglukopyranosid (35).

hodiny se zahřívá 67,4 g surového produktu 34 v suspenzi v 470 ml 60% vodného roztoku io kyseliny octové na 80 °C, po ochlazení a filtraci se reakční smés zahustí. Ke zbytku se přidá roztok 940 mg natriummethoxidu v 200 ml methanolu během hodiny, roztok se potom neutralizuje na pryskyřici Dowex 50WX4 (H⁺), filtruje, filtrát se zahustí a čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/aceton, 60 : 40. Získá se tak látka 35 ve výtěžku 27,9 g, tj. 60 %, a to ve třech etapách. [a]_D + 26° (c = 1,07, dichlormethan). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 465 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 481 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCh) δ 5,62 (d, J = 3,9 Hz, H-l), 4,35 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,64, 3,59, 3,58 (4s, 12 H, 4 OCH₃), 1,29 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pro C)₈H₃40ioS.H₂0 vypočteno: 46,94 % C, 7,87 % H, 6,96 % S nalezeno: 47,19 % C, 7,82 % H, 6,70 % S

Příprava 33

Ethy 1-04 6-O-acetyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 ~*⁴)·

6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-l-thio-(3-D-glukopyranosid (36)

Roztok 5,86 g (13,2 mmol) triolu 35 a 3,21 g (29,1 mmol) N-acetylimidazolu v 120 ml dichlorethanu se zahřívá 16 hodin do varu pod zpětným chladičem. Po přidání 440 mg (3,96 mmol)

N-acetylimidazolu se směs míchá 4 hodiny, nechá se ochladit na teplotu místnosti, po přidání 2 ml methanolu se znovu míchá hodinu a zředí se přidáním litru dichlormethanu. Organický roztok se promývá postupně 1 M vodným studeným roztokem kyseliny chlorovodíkové, studenou vodou, vodným nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, opět vodou a po vysušení se zahustí. Chromatografováním zbytku za použití soustavy toluen/aceton 3,5 : 1 se získá diacetyl40 derivát 36 ve výtěžku 3,97 g (57%), [a]_D + 33° (c= 1,90, dichlormethan). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 549 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 565 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCh) δ 5,51 (d, J = 3,9 Hz, H-l'), 4,34 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,63, 3,59,3,56 (4s, 12H, 4OCH₃), 2,11,2,06 (2s, 6H, 2 Ac), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pro C22H38O12S vypočteno: 50,17 % C, 7,27 % H, 6,09 % S nalezeno: 50,15 % C, 7,49 % H, 5,89 % S

-41 CZ 301009 B6

Příprava 34

Ethyl-0-(6-O-acetyM-O-levulinyl-2,3-di™O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l —>4)-6-Oacetyl-2,3-di-0-methyl-l-thio-p~D-glukopyranosid (37).

Do roztoku 19,4 g (36,8 mmol) diacetylderivátu 36 v 400 ml dioxanu se přidá pod argonem 7,53 ml (73,5 mmol) kyseliny levulové, 14,1 g (73,5 mmol) hydrochloridu l-{3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu a 900 g (7,35 mmol) 4-dimethylaminopyridinu, reakční směs se míchá 3,5 hodin, zředí se potom přidáním 1,5 I dichlormethanu, roztok se promývá postupně io vodou, 10% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, opět vodou, vodným roztokem (2%) hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, a po vysušení se zahustí. Chromatografováním zbytku za použití soustavy dichlormethan/aceton 97 : 3, potom 79 : 21 se izoluje takto 21,8 g (95 %) derivátu 37, [a]_D (c = 2, díchlormethan). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný (647 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 663 (M+K)\

Ή NMR (CDC1₃) δ 5,56 (d, J = 3,9 Hz, H-l), 4,35 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,60, 3,58, 3,55 (4s, 12H, 4 OCH₃), 2,76 - 2,71 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,19, 2,08, 2,07 (3s, 9H, 2 Ac a 0(C=0)CH₂CH₂(C=0)CH₃), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH₂CH₃.

Analýza ρΓΟ C27H44O14S vypočteno: 51,91 % C, 7,10 % H, 5,13 % S nalezeno: 51,88 % C, 7,05 % H, 4,96 % S.

Schéma 10

Syntéza disacharidu 3 8 a 40

l

OAe

OAC

Příprava 35

O-( 6-O-Acetyl-4-O-levu líny 1-2,3-d i-O-methyl-a-D-glukopy ranosy 1)-(l—>4)-6-O-acetyl35 2,3-di-0-methyl-p-D-glukopyranosyl-trichloracetimidát (38)

Do roztoku 9,53 g (15,3 mmol) thioglykosidu 37 ve směsi 180 ml dichlormethanu a diethyletheru (1:1), 1,4 ml (76,3 mmol) vody, 6,84 g (30,5 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové se přidá 0,51 g (1,98 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové. Po 15ti minutách (kontrola CCM) se přidá 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, reakční směs se zředí cz juiuuy ho přidáním 1,5 litru dichlormethanu, vše se promyje vodou, 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného a 2% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení a zahuštění se zbytek chromatografie na koloně oxidu křemičitého (ethylester kyseliny octové/cyklohexan, 80:40, pak

100:0), získaný pevný zbytek se hned použije v dalším stupni bez charakterizování. K roztoku

7,88 g (13,6 mmol) právě popsané látky v 150 ml dichlormethanu se pod argonem přidá 7,08 g (21,7 mmol) uhličitanu česného a 6,81 ml (67,9 mmol) trichloracetonitrilu, po 40tí minutách (kontrola CCM) se směs filtruje, zahustí a Čistí: toluen/aceton 85:15, získá se tak 9,16 g imidátu 38 (83 % ve dvou stupních). [a]_D + 118° (c = 100, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 746 (M+Na)⁺, 741 (Μ + NH^.

^]H NMR (CDC1₃): δ 8,66, 8,65 (2s, IH, a a β: N:H), 6,52 (d, J- 3,6 Hz, H-la), 5,70 (d, J = 7,5 Hz, Η-1β), 5,58 (d, J = 3,7 Hz, H-l), 2,78 - 2,57 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18,2,07,2,06 (3s, 9H, 2 Ac a O(C=O)CH₂CH₂XC=O)CH₃),

Analýza pro C₂7H4oCl₃NOi5.0,5 H₂O

Vypočteno: 44,18 % C, 5,63 % H, 1,98 % N nalezeno: 44,14 % C, 5,61 % H, 1,97 % N

Příprava 36

2-{Trimethylsilyl)-ethyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyrano25 sylH 1 -+4)~6-O-acetyl-2,3-di-O-methyl-a^D-glukopyranosid (39)

Podle způsobu 3 se provede reakce 10,6 g (16,94 mmol) thioglykosidu 37 s 4,8 ml (33,90 mmol) 2-(trimethylsilyl)-ethanolu v 105 ml směsi dichlormethanu a diethyletheru 1:2. Zbytek se čistí chromatografícky za použití soustavy aceton/dichlormethan, 1:1a získá se tímto způsobem

9,80 g (85 %) sloučeniny 39 ve formě směsi obou možných anomerů, a / β 65:35. ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 703 (M + Na)⁺.

*H NMR (CDCb): δ 5,58 (d, J = 3,9 Hz, H-l'), 4,94 (d, J - 3,5 Hz, H-la), 4,26 (d, J = 7,7 Hz, H-Ιβ), 2,76- 2,56 (tn, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,08, 2,05 (3s, 9H, 2 Ac a O(C-O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,18-0,88 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃, 0,02 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza proC₃₀H₅₂O₁₅Si vypočteno: 52,92 % C, 7,69 % H nalezeno: 53,29 % C, 7,75 % H.

Příprava 37

2-(TrÍmethylsilyl)-ethyl-O-(6-O-acety 1-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosylH 1 -+4)-60-acetyl-2,3-di-0-methyl-a^D-glukopyranosid (40).

so Podle způsobu 2 se působí na 9,41 g (13,82 mmol) sloučeniny 39 octanem hydrazinu (10mol/mol/ ve směsi toluenu a ethanolu 1 : 2 (21 ml/mmol). Chromatografováním zbytku v soustavě aceton/toluen 60 : 40 se takto připraví 4,81 g (60 %) sloučeniny 40 a, jakož i 3,06 g (37 %) směsi 40 α/β. 40 a: [a]_D + 132° (c = 0,61, dichlormethan), ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 605 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 621 (M+K)⁺.

-43CZ 301009 B6 'H NMR (CDCh) δ 5,55 (d, J = 3,8 Hz, H-f), 4,95 (d, J = 3,6 Hz, H-l), 2,10, 2,08 (2s, 6H, 2 Ac, 1,16 - 0,89 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,02 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C₂₅H4₈0i₃Si vypočteno: 51,53 % C, 7,96 % H io nalezeno: 51,37 % C, 8,06 % H

Schéma 11

Syntéza tetrasacharidu 41

Příprava 38

2-(Trimethylsilyl)-ethyl-O-(6-O-acetyl-4-O-levulinyl-2,3-di-O-methyl-a-D-gluko20 pyranosy l)-( 1 —>4)-[O-(6-O_acetyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl}-( 1 —>4)-]₂-6-Oacetyl-2,3-dí-0-methyl-<x-D-glukopyranosÍdu (41)

Podle způsobu 3 se zpracuje 4,21 g (6,74 mmol) thioglykosidu 37 a 3,57 g (6,13 mmol) glykosylového akceptoru ve směsi 105 ml dichlormethanu a diethyletheru (1 : 2). Reakční zbylý produkt se Čistí chromatografováním na oxidu křemičitém za použití soustavy aceton/cyklohexan 3:1, potom 9:1a získá se tak 4,81 g (69 %) sloučeniny 41, [a]_D + 143° (c = 0,56, dichlormethan). 1SIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 1167 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 1183 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCI,) δ 5,57 (d, J = 3,9 Hz, H-l'), 5,44, 5,41 (2d, J = 3,8 Hz, H-l, H-l'), 4,96

3o (d, J = 3,6 Hz, H-l), 2,78 - 2,58 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18, 2,12, 2,12, 2,09, 2,06 (5s, 15 H, 4 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,21 - 0,67 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH,),), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

4

CZ 3U1UU9 B6

Analýza pro C50H64O27S1 vypočteno: 52,44 % C, 7,39 % H nalezeno: 52,29 % C, 7,48 % H

Schéma 12

Syntéza tetrasacharidu 42 om

je

Příprava 39

Ethy l-0-(6-0-acetyl^-O-levul iny 1-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosylHl^—>4)-[O-(6O-acetyl-2,3-di43-methyl-a-D-glukopyranosylH 1 —4)]₂-6~C>-acetyl-2,3-di~O-methyl-1thio-fV-D-glukopyranosid (42)

Podle způsobu 1 se provede reakce roztoku 1,10 g (1,52 mmol) imidátu 38 a 806 mg (1,38 mmol) glykosylového akceptoru 36 ve 22 ml směsi dichlormethynu a diethyletheru. Čistění chromatografováním na oxidu křemičitém, soustava ethylester kyseliny octové a cyklohexan 2,5 : 1, potom 3:1. Získá se tak 1,12 g (71 %) sloučeniny 42, [a]_D + 95 ⁰ (c = 1,00, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 1111 (M+Na)\ + fluorid draselný 1127 (M+K)\ ’H NMR (CDCb) δ 5,55 (d, J = 3,9 Hz, H-l', 5,39, 5,37 (2d, J = 3,8 a 3,9 Hz, H-l a H-l'), 4,34 (d, J= 9,7 Hz, H-l), 2,84 - 2,51 (m, 6H, SCH₂CH₃, O(C-O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17,

2,10, 2,08, 2,09, 2,04 (5s, 15 H, 4 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,30 (t, 3H, J- 7,4 Hz, SCH₂CH₃).

Analýza pro C47H7óO₂6S vypočteno: 51,83 % C, 7,03 % H, 2,94 % S nalezeno: 51,66 % C, 7,02 % H, 2,94 % S

- 4S cz 301009 B6

Schéma 13

Syntéza polysacharidů 47

OSE

Příprava 40

2-(Trimethylsilyl)-ethyl-[0-6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—*-4)-]35 6-O-acetyl-2,3-di^O-methyl-ct-D-glukopyranosid (43).

Podobným způsobem se zpracuje jak to bylo popsáno v přípravě 37, 4,71 g (4,11 mmol) sloučeniny 41, aby se tak získal po chromatografování na koloně za použití soustavy cyklohexan/aceton, 3 : 2, derivát vzorce 43 ve výtěžku 4,11 g (95 %). [ot]_D + 154° (c = 0,63, dichlormethan).

ío ESIMS modul kladný, m/z + chlorid sodný 1069 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 1085 (M+K)⁺.

’H NMR (CDC1₃) δ 5,46, 5,45, 5,41, (2d, 3H, J= 3,9 Hz, H-l', H-l, Η-Γ), 4,95 (d, J = 3,5Hz, H-l), 2,81 (d, J= 4,4 Hz, OH), 2,11, 2,09, 2,08 (3s, 12H, 4 Ac), 1,19-0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza ρΓΟ C45H78O25SÍ vypočteno: 51,61 % C, 7,51 % H nalezeno: 51,39 % C, 7,54 % H

Příprava 41

2-(Tritnethylsilyl)-ethyl-0-(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-<X“D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-[O-(6-O-acety l-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —»-4H₆-6-O-acety 12,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (44)

Podle postupu 38 se provede reakce 3,86 g (3,54 mmol) thioglykosidu 42 a glykosylového akceptoru 43 v množství 3,60 g (3,44 mmol). Chromatografováním za použití soustavy dichlormethan/aceton 7 : 2, potom 2 : 1 se získá 5,71 g látky 44 (80 %), [a]_D + 161° (c = L,65, dichlormethan)- ESIMS, modus kladný: monoisotopická hmotnost = 2072,8, hmotnost chemická = 2074,2, hmotnost experimentální = 2074 ± 1 u.m.a.

'HNMR (CDCb) δ 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l, jednotka NR), 5,47 - 5,40 (m, 6H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7 Hz, H-l, jednotka R), 2,84-2,51 (4H, O(C=O)CH₂CH₂(C-O)CH₃), 2,17, 2,13, 2,12,

2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 27H, 8 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C-O)CH₃), 1,18- 0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C90H146O51S1 vypočteno: 52,12 % C, 7,19 % H nalezeno: 51,98 % C, 7,25 % H

Příprava 42

2-(Trimethylsilyl)-ethyl-[0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl^a-D-glukopyranosyl)-(l“*^,4)“]7“

6-O-acetyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosid (45)

Za chlazení na 0 °C se přidává 7,3 ml 1 M roztoku hydrazinhydrátu ve směsi kyseliny octové a pyridinu (3 : 2) k roztoku 3,00 g (1,45 mmol) sloučeniny 44 v 5 ml pyridinu. Reakční směs se míchá 20 minut, zahustí se, zbytek se zředí přidáním 400 ml dichlormethanu, tento roztok se

-Al CZ 301009 B6 promyje 10% vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, 2% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, opět vodou, vysuší se, zahustí a chromatografováním zbytku se takto získá 2,43 g (85 %) sloučeniny 45, [a]_D + 167° (c = 0,57, dichlormethan), ESIMS, modus kladný: monoisotopická hmotnost = 1974,8, hmotnost chemická = 1976,1, hmotnost experimen5 tální ~ 1975,4 ± 2 u.m.a.

^lH NMR (CDCh) δ 5,47- 5,40 (m, 7H, H-l), 4,95 (d, J= 3,7, H-l, jednotka R), 2,80 (d, J = 4,4Hz, OH), 2,13, 2,11, 2,10, 2,08, 2,07 (5s, 24H, 8 Ac), 1,18- 0,97 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C₈₅Hi₄₂0₄oSí vypočteno: 51,66 % C, 7,24 % H nalezeno: 51,32 % C, 7,26 % H

Příprava 43

2-(Trimethylsilyl)-ethyl-0-(6~0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyI-a-D-gIukopyranosylH l^_*‘⁴b[04^-0”Rcetyl-2,3-dÍ-0-methyl-a-D-glukopyranosy ()-(1 —>4)-] ιο-6-Οacetyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (46)

Podobně, jako v přípravě 38, se provede reakce 1,35 g (1,24 mmol) sloučeniny 42 s2,38g (1,20 mmol) sloučeniny 45. Chromatografováním reakčního zbytku za použití soustavy cyklohexan/aceton (4:3) se získá 2,56 g (71 %) sloučeniny 46, [ctjo + 166° (c = 0,88, dichlormethan), ESIMS, modus kladný: monoisotopická hmotnost = 3001,3, hmotnost chemická # 3003,2, hmotnost experimentální - 3004 ± 1 u.m.s.

'H NMR (CDC1₃) δ 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l, jednotka NR), 5,47 - 5,40 (m, 10H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotky NR), 2,81 - 2,51 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,13,

2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 39H, 12 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,17-0,96 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,03 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza

ΡΓΟ C|₃oH₂i₂075SÍ vypočteno: 51,99 % C, 7,12 % H nalezeno: 51,63 % C, 7,12 % H

Příprava 44 (6-0-Acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l-+4)-[0-(b“0-acetyl45 2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-]iú-6-O-acetyl-2,3-di-O-methyl-a,p-Dglukopyranosyl-trichloracetimidát (47).

(a) Po dobu 1,5 hodin se míchá za kontroly CCM roztok 400 mg (0,1333 mmol) glykosidu 46 v 2 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormethanu 2:1. Směs se zředí přidáním 12 ml směsi so toluenu a n-propylesteru kyseliny octové 2:1, zahustí se a znovu odpaří přidáním 10 ml toluenu, a to se opakuje celkem 5x. Chromatografíckým čištěním zbytku za použití soustavy aceton/cyklohexan 4 : 3 se získá 364 mg pevné látky, (b) Takto získaná pevná látka se rozpustí v 2,5 ml dichlormethanu, přidá se 65 mg (0,200 mmol) uhličitanu česného a 63 ml (0,620 mmol) trichloracetonitrilu, reakční směs se míchá 2,5 hodiny, po filtraci celitem se zahustí a zbytek se čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan/aceton/triethylamin 50: 50: 0,1. Připraví se tak 348 mg (86 %) imidátu 47, [a]_D+185° (c = 0,91, dichlormethan). ISIMS, modul kladný: monoisotopická hmotnost =

3044,1, hmotnost chemická 3047,3, hmotnost experimentální 3046,9 ± 0,2 u-m-a-..

Ή NMR (CDC1₃) δ 8,61, 8,58 (2s, IH, a a β N:H), 6,35 (d, J = 3,7 Hz, H-l a jednotky R), 5,59 (s, J = 7,5 Hz, H-l β jednotky R), 5,38 (d, J - 3,8 Hz, H-l jednotky NH), 5,32 - 5,25 (m, 10H, ío H-l), 2,64- 2,40 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH2(C=O)CH₃), 2,02, 1,96, 1,95, 1,94, 1,93, 1,89 (6s, 39 H, 12 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pro Ci₂7H20oCl₃NC>25 vypočteno: 50,06 % C, 6,61 % H, 0,46 % N nalezeno: 49,93 % C, 6,52 % H, 0,42 % N _ JO _

Η

GJ

-Β

x) o

co

.3 o

lT>

T3

Ή

ΪΗ

CO

XI o

CU

M *r4 r-i

O

CO «

'1)

G ř>>

tn t

u

O

Z

Příprava 45 (6-O-Acetyl-4-O-levuliny 1-2,3-dÍ-O-methyl-a-D-glukopyranosy IH 1 —>4)-[O-(6-O-acety 1

2,3-di-0-methyHx-D-gIukopyranosyl)-( 1 —>4)]r-6-O-acety 1-2,3-di-O-methy Ι-α,β-Dglukopyranosyl-trichloracetamidát(48)

CZ 3U1009 B6

Podobně jako při postupu 44 se zpracuje 200 mg (0,174 mmol) sloučeniny 41. Reakční směs se čistí chromatografováním na koloně oxidu křemičitého s použitím soustavy toluen-aceton 3:2 a získá se tak 230 mg (77 %) imidátu 48. ESIMS, modul kladný: m/z + chlorid sodný 1210 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 1226 (M+K)⁺.

‘H NMR (CDC1₃) δ 8,66-8,64 (2s, IH, a a β N=H), 6,51 (d, J= 3,6 Hz, H-la), 5,71 (d, J = 7,5 Hz, H-l β), 2,90 - 2,52 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,11, 2,11, 2,09, 2,05 (5s, 4 Ac a 0(CO)CH₂CH₂)C=0)CH₂).

io Příprava 46

Methyl-0-(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l-^>4)-[0(6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l-*4)]₃-O-( benzyl-2,3-di-O-methyIβ-D-glukopyranurosy 1)41 —>4)-O43,6-di-O-acety 1-2-O-benzy 1-a-D-glukopyranosyl)15 (1 —>4)-O4benzy 1-2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranurosy 1)41 —>4 )-2,3,6-tri-O-benzy l-a-Dglukopyranosid (49).

Podobné jako to bylo popsáno v přípravě 39 se zpracuje 73 mg (0,061 mmol) imidátu 48 a 82 mg (0,059 mmol) glykosylového akceptoru, produkt se čistí na koloně Sephadexu LH-20 chromato20 grafováním za použití soustavy dichlormethan/ethanol 1:1, potom na koloně oxidu křemičitého soustavou toluen/aceton 3:1a získá se tak 98 mg (69 %) sloučeniny 49. [a]_D + 95° (c - 1,01, dichlormethan). ESIMS, modul kladný: monoisotopická hmotnost 2414,97, hmotnost chemická = 2416,54, hmotnost experimentální í 2416,2.

*H NMR (CDCh) δ 7,43 - 7,20 (m, 30 H, 6x C^), 5,55 (d, J = 3,9 Hz, H-l-jednotky NR), 5,50 (d, J= 3,9Hz, H-l jednotky NR-3), 5,44, 5,38 (2d, J=3,7a 3,9Hz, H-l-jednotky NR-1), jednotky NR₂), 5,29 (d, J= 6,8 Hz, H-l-jednotky NR-1), 5,17 (d, J = 3,5 Hz, H-l jednotky R-2), 4,56 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,10 (d, J = 7,9 Hz, H-l-jednotky R-3), 2,81 - 2,50 (m,4H, O(C'=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,15, 2,11, 2,09, 2,05, 2,00 (7s, 21H, 6 Ac a O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza pro CpoHisgChi vypočteno: 59,63 % C, 6,59 % N nalezeno: 59,23 % C, 6,58 % H

Příprava 47

Methyl-[O46-O-acety 1-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)41—*4)]₄-O4benzy 1-2,3-diO-methy Ι-β-D-glukopyranosy 1)4 1-+4)-043,6-di-O-acety 1-2-O-benzy 1-a-D-glukopyranurosy 1)41 —>4)4benzyl-2,3-di-O-niethyl-a-L-idopyranurosyI)41 -+4)-2,3,6-tri-O-benzy 1-aD-glukopyranosid (50).

⁴⁵

Postupem jako v přípravě 37 se zpracuje 120 mg (0,050 mmol) oktasacharidu 49. Čistěním na koloně oxidu křemičitého v soustavě toluen/aceton 3 : 1 se získá takto 95 mg (83 %) sloučeniny 50, [a]_D + 80° (c = 0,62, dichlormethan), ISIMS, modul kladný : monoisotolicka hmotnost = 2316,9, hmotnost chemická = 2318,4, hmotnost experimentální - 2318,2 ± 0,4 u.m.a.

Ή NMR (CDCh) δ 7,42 - 7,12 (m, 30 H, 6 x C₆H₅, 5,50, 5,46, 5,40 (4d, J = 3,9, 3,9, 3,7, 3,7 Hz, H-l-jednotky NR, jednotky NR-1, jednotky NR-2, jednotky NR-3), 2,14,2,10,2,09,2,08,2,00, 1,88 (6s, 18 H, 6ac).

. si CZ 301009 B6

Analýza pro Cn₅H₁₃₂O₄9 vypočteno: 59,57 % C, 6,60 % H nalezeno: 59,49 % C, 6,61 % H

CZ JUIWV HO

Příprava 48

Methy 1-0-( 6-O-acety l-4_O-levulinyI-2,3-dÍ-O-methy l-a-D-glukopyranosy l)-( 1 -*4)-[O5 (6-O-acety 1-2,3-di-O-methy l-a-D-glukopyranosy 1)41—►4)]₁₅-O-(benzyl-2,3-di-O-methylp-D-glukopyranurosylH 1 —>4)-O-(3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranosyl)(1 —>4)-04benzyl-2,3-di-0-methyl-a-L-idopyranurosyl)41 -+4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-Dglukopyranosid (51)

Podle přípravy 39 se zpracuje 84 mg (0,027 mmol) imidátu 47 s 62 mg (0,027 mmol) glykosylového akceptoru 50. Zbytek se čistí nejprve na koloně Toyopearl HW-40, potom na koloně oxidu křemičitého v soustavě cyklohexan/aceton 1:1a získá se tak 71 mg (51 %) derivátu 51, [a]_D + 136° (c = 0,95, dichlormethan). ESIMS, kladný modul: isotopická hmotnost = 5200,11, hmotnost chemická = 5203,39, hmotnost experimentální = 5203,5.

'H NMR (CDC1₃) δ 7,42 - 7,18 (m, 30 H 6 x C₆H₅), 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,51 - 5,40 (m, 15-H-l), 5,30 (d, J = 6,8 Hz, H-l jednotky R-l), 5,17 (d, J = 3,5 Hz, H-l jednotky R-2), 4,56 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,09 (d, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-3), 2,85 - 2,53 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,17, 2,16, 2,13, 2,11, 2,08, 2,05, 2,00, 1,88 (8s, 57 H,

18 ac a O(C=O')CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Analýza

ΡΓΟ C₂4oH35oOi23.4H₂0 vypočteno: 54,64 % C, 6,84 % H nalezeno: 54,51 % C, 6,79 % H

-53CZ 301009 Bó

Příprava 49

Ethyl-0-{4,6“0-p-methoxybenzyliden-a-D-glukopyranosyl-( 1 —>4)— 1 -thio-p-D-glukopyranosid

Pod argonem se přidává za teploty + 5 °C 35,8 ml (0,21 mol) dimethylacetalu anisaldehydu a 4,44 g (19,1 mmol kyseliny kafrsulfonové do roztoku 73,89 g (0,19 mol) sloučeniny 52, viz ío Dick. W. E. Jr. a Hodge J. E., Methods in Carbohydrate Chemistry 7, 15-18 (1976) ve směsi

990 ml acetonitrilu a N,N-dimethylformamidu 3,5 : 1. Za teploty místnosti se reakční směs

C A míchá 1,5 hodin, neutralizuje se přidáním 2,96 ml (21,0 ekv.) triethylaminu, zahustí se a získaný sirup se čistí chromatografováním na koloně oxidu křemičitého v soustavě dichlormethan/methanol 100 : 0 potom 50 : 50 a získá se tak 58,6 g (61 %) sloučeniny 53, [a]_D + 47° (c = 1,03, methanol). ES1MS, modul negativní: m/z 503 (M+H)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 7,41, 6,89 (2d, 4H, CH₃OC₆H4), 5,51 (s, CHC0H4), 5,20 (d, J = 3,6 Hz, H-l'), 4,39 (d, J = 7,1 Hz, H-l), 3,78 (s, 3H, ClhOCé^), 2,75 (q, 2H, J = 7,0 Hz, SCf^CHa), 1,29 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pro C₂₂H₃₂O)iS vypočteno: 52,37 % C, 6,39 % H, 6,35 % S nalezeno: 52,15 % C, 6,61 % H, 5,84 % S

Příprava 50

Ethyl-G-(2,3-di-0-acetyl-4,6-p-methoxybenzyliden-a-D-glukopyranosyl)-(l—»4 )-2,3,6-tri20 O-acetyl-l-thio-p-D-glukopyranosid (54)

Do suspenze 47,22 g (93,6 mmol) látky 53 v 450 ml dichlormethanu se přikapává za chlazení na 0 °C 65 ml (0,47 mol) triethylaminu a 89 ml (0,94 mol) anhydridu kyseliny octové. Dále se přidá 5,71 g (46,8 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a reakční směs se míchá za teploty místnosti

90 minut. Přeruší se přidáním 45 ml (1,12 mol) methanolu, následuje promytí použitím postupně

10% vodného roztoku hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou. Po vysušení se směs zahustí a krystalováním zbytku ze směsi cyklohexanu a ethylesteru kyseliny octové se izoluje 64,9 g (97%) sloučeniny 54, [a]o+ 21° (c= 1,00, dichlormethan), t.t. 213 až 215 °C. ISIMS, modul kladný: m/z + chlorid sodný 737 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 753 (M+K)⁺.

'H NMR (CDClj) δ 7,34, 6,86 (2d, 4H, CHjOCTL), 5,43 (s, CHCsH,), 5,34 (d, J = 4,1 Hz, Η-Γ), 4,54 (d, J = 9,9 Hz, H-l), 3,78 (s, 3H, CHjOQH,), 2,74 - 2,60 (m, 2H, SCH₂CH₃), 2,10, 2,06,2,03,2,01, (4s, 15 H, 5 Ac), 1,26 (t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pro C32H42O16S vypočteno: 53,78 % C, 5,92 % H, 4,49 % S nalezeno: 53,74 % C, 6,08 % H, 4,40 % S

Příprava 51

Ethy l-0-(2,3-di-0-acetyl-4-p-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosy 1)-(1-+4)-2,3,6-tri-Oacetyl-l-thio-P-D-glukopyranosid (55) a ethy 1-0-(2,3-di-O-acetyM-p-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosyí)-( 1 -+4)-2,3-di-Oacetyl-l-thio-p-D-glukopyranosid (56)

Hodinu se pod argonem v prostředí 810 ml toluenu protřepává suspenze 25,0 g (35,0 mmol) látky 54, 20,4 g (0,28 mol) komplexu boranu s trimethylaminem a 33 g molekulárního síta 4Á. Po ochlazení na 0 °C se pomalu přidává 14,0 g (0,11 mol) chloridu hlinitého, za kontroly pomocí CCM se vše míchá 25 minut, potom se reakční prostředí vlije do studeného vodného 20%

- SS CZ 301009 B6 roztoku hydrogensíranu draselného, vše se promíchává za chlazení na 0 °C hodinu, filtruje dále pres celit. Organická fáze se promyje vodou, vodným 2% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, vysuší se a roztok se zahustí. Čistěním zbytku na koloně oxidu křemičitého se získá takto 7,37 g (29 %) látky 55 a 1,36 g (6 % látky) 56. Analyticky čistý vzorek látky 55 se získá krystalováním ze směsi cyklohexanu a ethylesteru kyseliny octové, [a]_D + 30° (c = 1,00, dichlormethan), t.t. 151 až 153 °C. ESIMS, modul kladný: m/z + chlorid sodný 739 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 755 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCIj) δ 7,19, 6,87 (2d, 4H, CHjOC₆H,), 5,36 (d, J= 3,5 Hz, H-l), 4,54 (s, 2H, io C₆H₄CH₂,4,53 (d, J = 9,0 Hz, H-l), 2,70 - 2,65 (m, 2H, SCH₂CHj).

Analýza pro C32H42O16S vypočteno: 53,62 % C, 6,19 % H, 4,47 % S nalezeno: 53,57 % C, 6,21 % H, 4,43 % S sloučenina 56, [a]_D + 19° (c= 1,11, dichlormethan), ESIMS, modul kladný: m/z + chlorid sodný

697 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 713 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCIj) δ 7,17, 6,84 (2d, 4H, CH,OC₆H₄), 5,36 (d, J= 4,5 Hz, H-l), 4,54 (d, J = 10,1 Hz, H-l), 4,49 (s, 2H, C₆H₅CH₂), 2,69 - 2,64 (m, 2H, SCH₂CH₃), 2,02, 2,01, 2,00, 1,96 (4s, 12H, 4 Ac, 1,25), t, 3H, SCH₂CH₃).

Analýza pro C₃₀H42Oi₅S vypočteno: 53,40 % C, 6,27 % H, 4,75 % S nalezeno: 53,29 % C, 6,39 % H, 4,53 % S

Příprava 52

Ethy l-O-(2,3-tri-O-acety 1^4-p-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-2,3,6-tri-Oacetyl-l-thio-p-D-glukopyranosid (57)

Za teploty 0°C se přidává 1,47 ml (15,5 mmol) anhydridu kyseliny octové do směsi 5,6 g (7,77 mmol) látky 55, 1,19 ml (8,54 mmol) triethylaminu a 190 mg (1,55 mmol) 4-dimethyl40 aminopyridinu v 40 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá 40 minut (kontrola CCM) za teploty místnosti, zředí se přidáním 50 ml dichlormethanu a promyje se studeným vodným 10% roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou. Po vysušení a zahuštění se čištěním na koloně oxidu křemičitého (ethylester kys.octové a cyklohexan, 35:65) získá 5,66 g (96 %) láky 57, [a]_D + 44° (c = 1,03, dichlor45 methan). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 781 (M+Na)\ + fluorid draselný 797 (M+K)⁺

Ή NMR (CDCIj) δ 7,15, 6,85 (2d, 4H, CHjOCíH,), 5,30 (d, J= 4,2 Hz, H-l'), 4,53 (d, J = 10,0 Hz, H-l), 2,69-2,64 (m,2H,SCH₂CH₃), 2,09,2,07,2,04,2,01,2,00, 1,98 (6s, 18H,

6 Ac), 1,25 (t, 3H, SCH₂CHj).

Analýza pro C₃4H₃₆0i7S vypočteno: 53,82 % C, 6,11 % H, 4,22 % S nalezeno: 53,77 % C, 6,24 % H, 4,09 % S tc

CZ 3U1UW9 Bó

Schéma 17

Syntéza trisacharidu 62

HO

MtO

Οβη

OSE

Příprava 53

Ethyl-4,6-0-benzyliden-2,3-di4>-methyl-l-thio-|3-D-glukopyranosid (59)

Za teploty 0 °C se vnese 500 mg (19,9 mmol) hydridu sodíku do směsi 2,59 g (8,29 mmol) io sloučeniny 58, viz Bočkov A. F., Izvest. Akad. Nauk SSSR, Ser. Chim. 1968, č. 1,179, a 1,70 ml (19,9 mmol) methyljodidu v 25 ml N-N-dimethylformamidu, teplota reakční směsi se nechá vystoupit na 20 °C, směs se míchá za kontroly CCM 30 minut, přidá se methanol a vše se vlije do vody. Po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se org. roztok promývá postupně 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Triturováním zbytku s díethyletherem is se získá takto 0,42 g (15 %) sloučeniny 59. Látka se čistí chromatografováním na sloupci oxidu křemičitého za použití směsi toluenu a acetonu (12 : 1) stím, že matečné louhy po kiystalizaci umožňují získání ještě jedné frakce látky 59 (v množství 1,6 g), což, odpovídá celkovému výtěžku 71 %, t.t 108 °C, [a]_D -78° (c=l,00 dichlormethan). LSIMS, kladný modul: m/z thioglycerol + chlorid sodný 363 (M+Na)⁺, thioglycerol + fluorid draselný 379 (M+K)⁺.

Ή NMR (CDCb) δ 7,51 - 7,33 (tn, 5H, C₆H₅), 5,52 (s, IH, C₆H₅CH), 4,45 (d, IH, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64 (s, 3H, OCH₃), 3,62 (s, 3H, OCH₃), 2,78- 2,88 (m, 2H), SCH₂CH₃), 1,31 (t, 3H, J = 2,7 Hz, SCH2CH3).

-S7CZ 301009 B6

Analýza proC₁₇H₂₄O₅S (340,44) vypočteno: 59,98 % C, 7,11 % H, 9,42 % S nalezeno: 59,91 % C, 7,15 % H, 8,96 % S

Příprava 54 io 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-4,6-0-benzyliden-2,3-dHO-methyl-a-D-glukopyranosid (60).

Ve směsi diethyletheru a dichlormethanu, 345 ml, 2:1, se rozpustí 23,0 g (67,5 mmol) sloučeniny 59 a 19,4 ml (435 mmol) 2-(trimethylsilyl)-ethanolu; po přidání molekulárního síta 4 A se reakční směs míchá hodinu při 25 °C, přidá se 49,7 g (220 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové, potom za 0 °C 2,20 g (8,78 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové a směs se ponechá za míchání 20 minut (kontrola CCM). Po přidání hydrogenuhličitanu sodného a zředění dichlormethanem se směs filtruje přes celit, filtrát se promývá postupně 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan a ethylester kyseliny octové 15 : 1, potom 5 : 1 se takto připraví 4,20 g (15 %) 60 β a 8,40 g (31 %) 60 a.

Sloučenina 60 a: [a]_D + 96° (c = 0,4, dichlormethan), ESIMS kladný modul: m/z 419 (M+Na)⁺, 435 (M+K)⁺.

'H NMR (CDCb) δ 7,52 - 7,35 (m, 5H, C₆H₅), 5,54 (s, IH, C₆H₅CH), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 3,64 (s, 3H, OCH₃), 3,62 (s, 3H, OCH₃), 1,24 - 0,96 (m, 2H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, OCH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza proC₂₀H₃₂O₆S (396,56) vypočteno: 60,68 % C, 8,13 % H nalezeno; 60,26 % C, 8,39 % H

Příprava 55

2-(Trimethylsilyl)-6-O-benzyl-2,3-di^O-methyl-a-D-glukopyranosid (61), v 154 ml dichlormethanu se rozpustí 21,1 g sloučeniny 60, a za teploty místnosti se přidá 34 ml (213 mmol) trimethylsilanu, načež se přikapává směs 16,3 ml (213 mmol) kyseliny trifluoroctové a 0,49 ml (3,47 mmol) anhydridů kyseliny trifluoroctové. Po dvou hodinách stání se přidává 1 M vodný roztok hydroxidu sodného až k dosažení alkalické oblasti pH; po dekantování se extrahuje vodná fáze do ethylesteru kyseliny octové, organické roztoky se spojí, celek se vysuší a zahustí.

Zbytek se čistí na koloně oxidu křemičitého použitím soustavy dichlormethan a aceton, 14 : 1, potom 12:1a získá se tak 12,5 g (59 %) sloučeniny 61, Md ⁺ 100° (c = 1,45 dichlormethan).

’H NMR (CDC1₃) δ 7,40 - 7,20 (m, 5H, C₆H₅), 4,98 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l), 3,63 (s, 3H, OCH₃), 3,49 (s, 3H, OCH₃), 1,14 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃). 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si50 (CH₃)₃),

Analýza pro C₂qH₃₀O6Sí (398,58)

CO

CZ 3U1UW BO vypočteno: 60,27 % C, 8,80 % H nalezeno: 60,15 % C, 8,61 % H

Příprava 56

2-(TriinethyIsilyI>-ethyl-C-(2,3,6“tri-0-acetyI-4-0-p-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosylH 1 —4)-6-0~benzyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosid (62).

ío Ze směsi 19,1 g (25,1 mmol) thioglykosidu 57 a 7,5 g (18,7 mmol) glykosylového akceptoru 61 se získá podle způsobu 3 po přečištění na koloně oxidu křemičitého (dichlormethan a aceton, 20:1, potom 10 : 1) 19,7 g (95 %) sloučeniny 62, [afo + 90° (c = 1,15 dichlormethan).

Analýza pro C₃₂H₇₄O₂₃Si (1095,24) vypočteno: 57,03 % C, 6,81 % H nalezeno: 57,38 % C, 6,85 % H .59.

Schéma 18

Syntéza olígosacharidu 66

1·

Příprava 57

2-(TrÍmethylsilyl)-ethyl-O-(2,3,6-tri-(>-methyl-<x-D-glukopyranosyl)-(l—+4)~O-(2,3,6-tri0-methyl-p-Oglukopyranosyl)-(1^4)--6-0-benzyl-2,3HÍi-0--rnethyl-a-D-glukopyranosid io (63)

Podle způsobu 4 se získá z 19,7 g (18,0 mmol) sloučeniny 62 po čištění na koloně oxidu křemičitého (toluen/aceton 3:1, potom 2:1) sloučenina 63, výtěžek 11,2 g (79 %, počítáno na 3 postupné stupně), [a]_D + 95° (c = 1,15, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 829 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 845 (M+K)*.

‘HNMR (CDC1₃) δ 7,34- 7,25 (m, 5H, C₆H₅), 5,60 (d, IH, J= 3,8 Hz, H-l), 4,96 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l), 4,29 (d, IH, J= 8,0 Hz, H-l'), 1,08- 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

rn

CL 0U1UU9 BO

Příprava 58

2-(Trimethylsílyl)-ethyl-0-(2,3,6--tri-0-acetyM-0-p-methoxybenzyl-oi-D-glukopyranosyl)-(l->4)-O-(2,3,6-tri—O-acetyl-p-D-glukopyranosylH 1—4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-a5 D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy 1-p-D-glukopyranosylH 1 -+4)-6-0benzyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosid (64)

Postupem podle způsobu 3 se zpracuje směs 6,87 g (9,10 mmol) thioglykosidu 57 a 6,67 g (8,30 mmol) glykosylového akceptoru 63. Produkt se čistí chromatografováním na koloně oxidu to křemičitého v soustavě toluen/aceton, 2:5a získá se tak 10,7 g (86 %) sloučeniny 64, [a]_D +90° (c = 0,83, díchlormethan). ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 1525 (M+Na)⁺, + fluorid draselný 1541 (M+K)\ ’H NMR (CDCb) δ 7,33 - 7,25 (m, 5H, C₆H₃), 7,15 - 6,84 (m, 4H, C₆H4OCH₃), 5,56 (d, IH, 15 J = 3,9 Hz, H-l), 5,29 (d, IH, J = 4,0 Hz, H-l'), 4,97 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 4,71 (d, IH,

J = 8,1 Hz, H-l'), 4,27 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l'), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂SÍ(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C7qHio$0₃₃Sí (1503,69) vypočteno: 55,91 % C, 7,11 % H nalezeno: 56,05 % C, 7,24 % H

Příprava 59

2-(Trimethylsilyl>-ethyl-[0-(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l-*’4>-<H2,3,6-tri-0-methyl-|3-D-glukopyranosyl)-(l“+4)]₂-6-0-benzyl-2,3-di-O-methyl-a-D-gluko30 pyranosid (65)

Za použití způsobu 4 se zpracuje 10,7 g (7,2 mmol) sloučeniny 64, produkt se čistí chromatografováním na sloupci oxidu křemičitého v soustavě toluen/aceton, 2:1, potom 6:5a získá se tak 6,50 g (74 %, ve třech etapách) sloučeniny 65. [a]_D + 102° (c - 0,68, díchlormethan).

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,25 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l'), 5,62 (d, IH,

J = 3,8 Hz, H-l), 4,98 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l), 4,31 (d, IH, J = 8,1 Hz, H-l'), 4,29 (d, IH,

J = 7,9 Hz, H-l'), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C₅₆H_9í[O₂₆Si (1215,48) vypočteno: 55,34 % C, 8,13 % H 45 nalezeno: 55,31 % C, 8,19 % H

Příprava 60

2HTrimethylsilyl)-ethyl-0-(2,3,6“tri-0~acetyM-0-p-methoxybenzyl-a-D-gluko50 pyranosyl)-( 1 —>4)-O-(2,3,6-tri-O-acetyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1-+4)-(0-(2,3,6-trW>methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-trí-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —*-4)]r6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosid (66).

-61CZ 301009 B6

Podle způsobu 3 se zpracuje směs 4,03 g (5,31 mmol) thioglykosidu 57 a 5,78 g (4,75 mmol) glykosylového akceptoru 65, produkt se čisti chromatografováním na koloně oxidu křemičitého v soustavě toluen/aceton, 2:5a získá se tím 8,63 g (95 %) sloučeniny 66, [a]_D + 94° (c = 0,74, dichlormethan). ESIMS kladný modul: monoisotopická hmotnost = 1910,83, chemická hmotnost = 1912,14, experimentální hmotnost = 1911,61 ± 0,12 u.m.a.

'H NMR (CDCIj) δ 7,33 - 7,25 (m, 5H, C„H₅), 7,15-6,83 (m, 4H, CsFbOCHj), 5,62 (d, IH, J = 3,8Hz, N-1 jednotky R-2), 5,60 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,30 (d, IH, J = 4,0 Hz, H-l jednotky NR), 4,98 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,71 (d, 1H, J = 7,9 Hz, ío H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, IH, J - 8,1 Hz, H-l jednotky C), 4,29 (d, IH, J = 8,4 Hz, H-l jednotky R-l), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,07 (s, 3H, Ac), 2,03 (s, 3H, Ac), 1,99 (s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H,

Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08 - 0,91 (nt, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro CggHngCXnSí 1912-14 vypočteno: 55,28 % C, 7,27 % H nalezeno: 55,61 % C, 7,35 % H

CZ 3U1UU9 B6

Schéma 19

-ήτ CZ 301009 B6

Příprava 61

2-(TrimethyIsi Iyi)~ethyl—[O—(2.3,6-tri-O-methy 1-a-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,3,6—tri—

-O-methy l-J3-D-glukopyranosyl)-( 1 —►4)]₃-6-O-benzyl-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosid (67)

Podle způsobu 4 se zpracuje 8,63 g (4,50 mmol) sloučeniny 66 a produkt se čistí na koloně oxidu křemičitého s eluováním soustavou toluen/aceton 3 : 2, potom 4:3a získá se tím ve třech io etapách 5,67 g (77 %) látky 67, [a]_D + 102° (c= 0,70, dichlormethan). LSIMS, kladný modul m/z thioglycerol + chlorid sodný 1645,9 (M+Na)⁺.

‘H NMR (CDCls) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR a H-l jednotky NR-2), 5,62 (d, IH, J= 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 4,98 (d, IH, J= 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,31 (d, IH, J = 8,1 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky

C), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 1,08- 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C₇4H₁₃₀O₃₆Si (1912,14) vypočteno: 54,73 % C, 8,07 % H nalezeno. 54,61 % C, 8,07 % H

Příprava 62

2-(T rimethy ls i lyl)-ethy 1-0-(2,3,6-tri-O-acetyl-4-O-p-methoxybenzy Ι-α-D-g lukopyranosylH 1 -+4>O-(2,3,6-tri-O-acetyl-E>-glukopyranosyl)-( 1 —>4)—[O—(2,3,6—tri—O— methyI-p-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)]₃6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosid (68)

Podle způsobu 3 se zpracuje směs 1,47 g (1,96 mmol) thioglykosidu 57 a 2,89 g (1,77 mmol) glykosylového akceptoru 67. Chromatografováním na koloně oxidu křemičitého s použitím soustavy cyklohexan/aceton 3 : 2 se získá 3,71 g (92 %) sloučeniny 68. Analyticky čištěný vzorek na koloně oxidu křemičitého (toluen/aceton, 3 : 2): [a]o +99^ů (c = 0,58, dichlormethan). ESIMS, kladný modul: monoisotopická hmotnost = 2319,03, chemická hmotnost = 2320,59, experimentální hmotnost= 2319,03 ±0,12 u.m.a.

'H NMR (CDCb) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C«H₅), 7,15 - 6,83 (m, 4H, C(,H₄OCH₃), 5,62 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,60 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR-2 a jednotky C), 5,29 (d, IH, J = 4,0 Hz, H-l jednotky NR), 4,97 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,70 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 8,1 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,06 (s, 3H, Ac), 2,02 (s, 3H, Ac),

1,99 (s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08 - 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃).

Analýza pro C]06H|7o05₃Si (2320,59) vypočteno: 54,86 % C, 7,38 % H nalezeno: 54,76 % C, 7,45 % H

£. A

CZ JVIWV BO

Příprava 63

2-(Trimethylsilyl)-othyl-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—*4)-O-(2,3,6-tri0-methyl-p-D-glukopyranosyl)-(¹*4)]4-6-0“benzyl-2,3“di-0-methyl-a-D-gíukopyranosid (69)

Zpracuje se podle způsobu 4 3,61 g (1,55 mmol) sloučeniny 68 a získá se tak 2,22 g (70 % ve třech etapách) látky 69 po chromatografíckém čistění na koloně oxidu křemičitého (toluenaceton, 4 : 5). [a]_D + 103° (c = 0,80, dichlormethan). ESIMS, kladný modul: monoisotopická i o hmotnost = 2031,01, chemická hmotnost = 2032,38, experimentální hmotnost = 2032,3 8 u.m.a.

^lH NMR (CDCb) 5 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,64 (d, IH, J= 3,8 Hz, H-l jednotky NR-2), 5,62 (d, 2H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky C a jednotky R-2), 4,97 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,30 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1),

4,29 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l, jednotky R-3 a jednotky NR-3), 1,08-0,91 (m, 2H,

CH₂CH₂Si(CH₃)3), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH₃)3).

Analýza pro C^Hi^CíeSi (2032,38) vypočteno: 54,37 % C, 8,03 % H nalezeno: 54,51 % C, 8,04 % H

Příprava 64

2-(TrimethylsÍlyl)-ethyl-0-(4-0-levulínyl-2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1 -^4)-0-(2,3,6-tri-Q-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-[O-(2,3,6-tri-O-methy I-a-DglukopyranosylH 1 -+4)-(0-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-{ 1 -*4)]₃-6-O-benzyl30 2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosid (70)

Roztok 855 mg (0,42 mmol) látky 69 v 8 ml dichlormethanu se vyhřeje na 25 °C a přidá se : 83 μΐ (0,59 mmol) triethylaminu, 5,14 g (0,04 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a 117 mg (0,55 mmol) anhydridu kyseliny levulové, směs se míchá 2 hodiny za kontroly CCM, zředí se přidáním dichlormethanu, roztok se promyje 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu draselného, vodou, vysuší se a zahustí do sucha. Látku lze použít v tomto surovém stavu pro další stupeň bez jakéhokoli Čistění, Analyticky čistý vzorek se získá na koloně oxidu křemičitého, cyklohexan/aceton, 5 : 4; Čistá látka 70 má [α]ρ + 10Γ (c = 0,89, dichlormethan). ESIMS, modul kladný : monoisotopická hmotnost = 2129,05, chemická hmotnost = 2130,48, experimentální hmotnost = 2130,00 u.m.a.

'H NMR (CDCb) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, 3H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR, jednotky NR-2 a jednotky C), 5,63 (d, 2H, J= 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,02 (t, IH, J= 10,1 Hz, H-4 jednotky NR), 4,98 (d, IH, J= 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,32 (d, IH,

J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,80- 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃)_S 2,18 (s, 3H,O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 1,08- 0,91 (m, 2H, CH₂CH₂Si(CH₃)₃), 0,00 (s, 9H, CH₂CH₂Si(CH3)₃).

Analýza pro C97H166O48SÍ (2032,38) vypočteno: 54,69 % C, 7,95 % H nalezeno: 54,55 % C, 8,07 % H

Příprava 65

O-(4-O-Levulinyl-2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l —>4)-O-(2,3,6-tri-O-methylβ-D-glukopyranosylH 1^—>4)—[O—(2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l -^4)-0-(2,3,5 6-tri-O-methy Ι-β-D-gl u kopy ráno syl-( 1 —>4)]₃-6-0-benzyl-(2,3-di-0-methyl-a,p-D-glukopyranosa(71)

Zpracuje se 876 mg (0,41 mmol) sloučeniny 70, jak to bylo popsáno v přípravě 44(a). Zbytek se čistí na koloně oxidu křemičitého a získá se tím směs anomerů α / β ~ 60/40 látky 71 ve výtěžku io 600 mg /80% ve dvou etapách); [ot]_D +89° (c = 0,74, dichlormethan). ESIMS kladný modul: monoisotolická hmotnost - 2028,97, chemická hmotnost = 2030,24, experimentální hmotnost =

2030,19 db 0,09 u.m.a.

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 5,65 (d, 3H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR, jednotky NR-2 a jednotky C), 5,63 (d, IH, J= 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,33 (d, IH,

J = 3,2 Hz, H-la jednotky R, 5,02 (t, IH, J= 10,1 Hz, H-4 jednotky NR), 4,59 (d, IH,

J = 5,3 Hz, H-Ιβ jednotky R), 4,32 (d, IH, J= 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H,

J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,80 - 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18 (s, 3H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

Příprava 66

O-(4-O-Levul iny 1-2,3,6-tri-O-methy 1-a-D-glukopy ranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy 1β-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-[O-(2,3,ó-tri-O-methyi-a-D-glukopyranosy l)-{ 1 -^4)-0-(2,3,25 6-tri-0-methyH^-D-glukopyranosyl-(l-+4)]₃-6-0-benzyl-(2,3-di-0-methyl-a,P-D-glukopyranosa trichloracetimidát (72).

Do roztoku 593 mg (0,29 mmol) sloučeniny 71 v 7 ml dichlormethanu se přidá 72,2 mg (0,52 mmol) uhličitanu draselného a 176 μΐ (1,75 mmol) trichloracetonitrilu, reakční směs se míchá 16 hodin, po filtraci se filtrát zahustí. Filtrací na gélu z oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan/aceton, 5 : 4 pro 1 % triethylaminu se získá 414 mg (46 %) směsi anomerů α / β = 47/53, tedy sloučeniny 72, [a]_D + 86° (c = 0,54, dichlormethan).

'H NMR (CDClj) δ 7,33 - 7,32 (m, 5H, C₆H₅), 6,50 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-la jednotky R), 5,65 (d, 1H, J = 8,2 Hz, H-1-β jednotky R), 5.65 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,64 (d, 2H,

J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR-2 a jednotky C), 5,61 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,02 (t, IH, J = 10,1 Hz, 1M jednotky NR, 4,37 (d, IH, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 4,30 (d, 3H, J= 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1, jednotky NR-3 a jednotky R-3), 2,80- 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18 (s, 3H, C(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃).

zr

CZ 301W9 B6

	(Λ t-
Ο	0 Ό Η Μ Φ Λ Ο Φ Φ S,
<Ν ta	φ Ν
	XD
φ	4»
Λ	α
ο
03	03

.67.

Příprava 67

Methyl-0-(4-0-levuIinyl-2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O~ methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-α-D-glukopyranosyH 1 —>4)]₃-O-(6-O-benzyl-2,3-di-O-methyl-aD-glukopyranosylH 1 —4)-O-(benzyl-2,3-di4)-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 —4)-O(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a,D-glukopyranosyl)-(l —>4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-aL-idopyranurosy l)-( 1 -4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (73).

V 5 ml směsi dichlormethanu a diethyletheru (1 : 2) se rozpustí 220 mg (0,18 mmol) glykosylového akceptoru 26 a 344 mg (0,16 mmol) imidátu 72, a po přidání 750 mg/mmol molekulárního síta 4 Á se reakční směs za teploty 25 °C míchá hodinu. Po ochlazení na -25 °C se přidává roztok 1 M terč ,-butyldimethylsÍlyl-trifluoracetátu v dichlormethanu (0,20 mol/mol imidátu), směs se míchá 15 minut, přidá se pevný hydrogenuhličitan sodný, směs se filtruje a filtrát zahustí. Nanese se na kolonu Toyopearl HW-50, použije se dále směs dichlormethanu a ethanolu 1:1, frakce obsahující glykosylový akceptor se vrátí do reakce a pracuje se jako předtím. Následujícím čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/aceton 5 :4, potom 1 :1 se takto získá 107 mg frakce 73 α/β = 7/3 a frakce 201 mg 73α/β = 9/1 s celkovým výtěžkem 308 mg (57 %).

*H NMR (CDCb) 5 7,33 - 7,25 (m, 35H, 7 x C₆H₅), 5,65 (d, 3H, J - 3,5 Hz, H-l jednotky A, jednotky C a jednotky E), 5,57 (d, IH, J = 3,9 Hz, H-l jednotky G), 5,52 (d, IH, J = 3,3 Hz, H-l jednotky I, 5,29 (d, IH, J = 8,8 Hz, H-l jednotky L), 5,17 (d, IH, J = 3,5 Hz, H-l jednotky K),

4,56 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky M), 4,31 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky B, jednotky D a jednotky F), 4,27 (d, IH, J = 8,0 Hz, H-l jednotky H), 4,08 (d, IH, J = 8,0 Hz, H-l jednotky J), 2,80- 2,50 (m, 4H, O(C=O)CH₂CH₂(C=O)CH₃), 2,18 (s, 3H, O(C=OCH₂CH₂(C-O)CH₃), 1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac).

CZ 3U1UU9 B6

Schéma 21

Syntéza polysacharidů 74 a 75

- AQ CZ 301009 B6

Příprava 68

Methyl-[O-(2,3,6-tri-O-methy Ι-α-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,3,6~tri-0-methy 1—β—D— glukopyranosyl)-(l—>4)]₄-0-(6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l“->4)-0(benzyl-2,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-(l-*4)-O-(3,6-dÍ-O-acetyl-2-O-benzyl-aD-gIukopyranosyl)-(l—>4)-(-benzy 1-2,3-di-0-methyl-aL-idopyranurosyl)-( 1-^4)-2,3,6-^1O-benzyl-a-D-glukopyranosid (74) io Postupem podle způsobu 2 se zpracuje 130 mg (38,2 mmol) sloučeniny 73 a čistěním surového produktu na koloně oxidu křemičitého se takto získá 118 mg (93 %) sloučeniny 74, [(*]□ + 78° (c= 0,48, dichlormethan). ESIMS modul kladný : monoisotopická hmotnost = 3301,49, chemická hmotnost = 3303,65, experimentální hmotnost = 3302 u.m.a.

'H NMR (CDCb) δ 7,33 - 7,25 (m, 35H, 7 x C₆H_S), 5,64 (d, 3H, J = 3,5 Hz, H-l jednotky A, jednotky C a jednotky E), 5,57 (d, IH, J = 3,9 Hz, H-l jednotky G), 5,52 (d, IH, J = 3,3 Hz, H-l jednotky I), 5,29 (d, IH, J = 6,8 Hz, H-l jednotky L), 5,17 (d, 1H, J ~ 3,5 Hz, H-1 jednotky K), 4,56 (d, IH, J = 3,8 Hz, H-l jednotky M), 4,32 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky B, jednotky D a jednotky F), 4,27 (d, IH, J = 8,0 Hz, H-l jednotky H, 4,08 (d, IH, J = 8,0 Hz, H-l jednotky J),

1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac).

Příprava 69

Methy l-O-(2_J6-di^O-benzy l-4-Olevulinyl-3-0-methy l-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —4)-025 (2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(2,6-di-O-benzy 1-3O-methyl-a-D-glukopyranosylH 1 —►4)-O42^O-acetyl-6-O-benzyI-3-O-methyl-|3-DglukopyranosylH 1 —>4)-[O-(2,3,6-tri-O-methy Ι-α-D-glukopyranosy 1)-( 1-^4)-0-(2,3,6—tri— O-methyI-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —►4)]₄-O-(6-O-benzyI-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranosyl)-( I —>4)-O-(benzyl-2,3-dt-O-rnethy 1-a-D-glukopyranurosy l)-( 1 —>4)-O-(3,6-dí30 O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-α-L-idopyranuΓosylHl -+4)-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (75).

Ve 2 ml toluenu se rozpustí 112 mg (33,9 pmol) glykosylového akceptoru 74 a 59,1 mg (37,2 pmol imidátu 17, viz příprava 16, a po přidání 42 mg molekulárního síta 4 Á se reakční směs míchá při 25 °C hodinu. Po ochlazení na -20 °C se přidá 1 M roztok terc.-butyldimethylsilyl-trifluoracetatu v toluenu (0,20 mg/mol imidátu), směs se míchá 15 minut, dále se přidá hydrogenuhličitan sodný v pevném stavu, směs se filtruje a filtrát se zahustí. Nanese se na kolonu Toyopearl HW-50 s použitím soustavy dichlormethan/ethanol, 1:1, frakce, obsahující glykosylový akceptor se vrátí zpět do reakce s 17-mérem, vše se zpracuje jako předešle. Potom se vše čistí postupně na koloně Toyopearl HW-50 a na koloně oxidu křemičitého, získá se tak 71 mg (44 %) sloučeniny 75, [a]_D + 80° (c - 0,26, dichlormethan). ESIMS, modul kladný:isotopická hmotnost = 4728, 10, chemická hmotnost = 4731,26, experimentální hmotnost = 4731 ± 0,39 u.m.a.

'H NMR (CDCb) δ hlavních anomemích protonů: 5,64, 5,57, 5,52, 5,48, 5,47, 5,29, 5,17, 4,56, 4,50,4,29,4,27,4,08 ppm.

CL JUIUU? DO

CQ
	o PM *0 •H fc o	♦ H
	o	«
	CQ	H
	ra	H
	CÍ Φ	ra
	A	ct
	ra	*ri a
	N	ra
		>o
	P	ra
	£1	o
	Ρϊ	H
	ra	ra
	o ►.	*
	A	ra
	s «4»	£ ra
	a
	H ra	ra
	-P	o
	•H
		o
	0	3
	A	a
	*	á
	3	Ρ»
	tí O	•A
	Λ	fc
	P	ra
	d	4»
	Ps	d
	ra	•H
CM		I
Úl	ra	O
ra	ra
§	fc	o
	A	C
Λ	M	Ό
o	>fc	ra
w	A	T3

Příprava 70

Methyl-2,3“di-O-methyl-6-O-terc-butyldimethylsilyl-a-D-glukopyranosid (77)

Pod argonem se přidává 14,0 g (92,9 mmol) terč-butyldimethylsilylchloridu, 15 ml (108 mmol) triethylaminu a 260 mg 4-dimethylaminopyridinu (2,10 mmol) do roztoku 15,84 g (71,3 mmol) sloučeniny 76-viz Trimell D., Doane W. M. a Russel C. R., Carbohydr. Research 11,497 (1969) ío v 300 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá za normální teploty 15 hodin, zředí se dichlormethanem, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromatografii (cyklohexan a ethylester kyseliny octové, 1,3 : 1) a získá se tak 22,79 g (95 %) sloučeniny 77 ve formě bezbarvého sirupu, [<x]_D + 87° (c = 1,2, chloroform).

-71CZ 301009 B6

Příprava 71

Methy 1-2,3-di-O-methyl-6-O-terc.butyld imethy lsilyl-a-D-xylo-4-hexulopyranosid (78)

Pod argonem a za chlazení na -70 °C se přidá roztok 8,7 ml (123 mmol) dimethylsulfoxidu v 20 ml dichlormethanu k roztoku 5,4 ml (61,9 mmol) dichloridu oxalové kyseliny v 120 ml dichlormethanu. Po 15ti minutách se přikapává dále roztok 18,78 g (55,8 mmol) sloučeniny 77 v dichlormethanu, po 15ti minutovém magnetickém míchání se přidá 37 ml (265 mmol) triethylto aminu a za 15 minut se nechá reakční teplota vystoupit na normální. Po zředění přidáním 150 ml vody se oddělený vodný podíl extrahuje do 150 ml dichlormethanu, organické roztoky se spojí, celek se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, a po vysušení bezvodým síranem sodným se filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií (cyklohexan a ethylester kyseliny octové 9:1, potom 4 : 1 a ve formě bezbarvého oleje se takto připraví

17,3 g (93 %) sloučeniny 78, [a]_D + 98° (c = 1,0, chloroform).

Příprava 72

Methyl-4-desoxy-2,3-di-O-methyl-4-C-methylen-6-O-terc.butyldimethylsilyl-a-D-xylo20 hexopyranosid (79).

Pod argonem se přikapává 1,6 M roztok n—butyllithia vn-hexanu (75 mol) k suspenzi 43,3 g (127 mmol) methyltrifenylfosfoniumbromidu v 250 ml tetrahydrofuranu. Za 30 minut stání pri teplotě místnosti se reakční směs vychladí na -70 °C a přidá se roztok 13,97 g (41,0 mmol) sloučeniny 78 v 60 ml tetrahydrofuranu. Po třicetiminutovém stání pri -70 °C se teplota nechá vystoupit na normální, po hodině se přidá 300 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a vodný podíl se extrahuje do etheru. Roztok v etheru se po vysušení bezvodým síranem hořečnatým filtruje, filtrát se zahustí a zbytek se čistí bleskovou chromatografií, cyklohexan a ethylester kyseliny octové 7:1, pak 4:1. Sloučenina 79 se získá v množství 8,30 g (60 %) ve formě bezbarvého oleje, [a]_D + 151⁰ (c = 1,3, chloroform).

Příprava 73

MethyI-4-desoxy-2,3-di-0-methyl-4-C-methylen-a-D-xylo-hexopyranosid (80)

Do roztoku 8,50 g (25,6 mmol) sloučeniny 79 ve 250 ml směsi dichlormethanu a methanolu 5 : 1 se přidává kyselina kafrsulfonová a k dosažení hodnoty pH 1. Jakmile zcela vymizí použitá výchozí sloučenina (kontrola CCM, cyklohexan a ethylester kyseliny octové 1:1), neutralizuje se reakční směs přidáváním triethylaminu. Zbytek, získaný zahuštěním, se čistí bleskovou chromatografií za použití směsi cyklohexanu a ethylesteru kyseliny octové 1:1, potom 1 : 2 a získá se tak 5,32 g (95 %) sloučeniny 80 ve formě bezbarvého sirupu, [a]_D + 239° (c - 1,0, chloroform).

Příprava 74

Fenyl-2,4,6-tri-0-acetyl-3-O-methyl-l -seleno-a-D-glukopyranosid (83)

Způsob 1: Pod argonem se přidává 5,7 ml (53,7 mmol) selenofenolu k roztoku sloučeniny 81, viz Hirst E. L., Percival E,, Methods Carbohydr. Chem. 2,145 (1963) v 120 ml dichlormethanu. Této so látky, což je směsi anomérů 1 : 1, se použije 13,05 g (36,0 mmol). Po ochlazení reakční směsi na

0°C se přikapává pomalu 8,8 ml (71,9 mmol) 48% roztoku diethyletherátu trifluorboranu. Po hodinách stání za teploty místnosti se reakční směs zředí přidáním 100 ml dichlormethanu, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, a po vysušení

-79 CL JUIUIW BO bezvodým síranem horečnatým a filtraci se filtrát zahustí. Použije se přímo získaná surová sloučenina 83 (8,17 g, 68 %, přepočteno na 81) při desacetylační reakci.

Způsob 2: Pod argonem a za teploty 0 °C se přikapává 510 mg (14,6 mmol) hydridu borito5 sodného k suspenzi 2,27 g (7,27 mmol) difenylselenidu v ethanolu. Pokud barva reakčního prostředí, žlutá se nezmění během 15 minut, přidá se další podíl diethyletherátu trifluorboranu a roztok se potom přepraví pod argonem do roztoku 4,22 g (11,0 mmol sloučeniny 82 ve 25 ml dichlormethanu, viz Sen A. K.., Sakař K. K., Banerji N., J. Carbohydr. Chem. 7 645 (1988), v 25 ml dichlormethanu. Reakční směs se zahřívá 3 hodiny do varu pod zpětným chladičem, po io ochlazení na teplotu místnosti se odfiltruje bromid sodný, filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v dichlormethanu (100 ml) a tento roztok se promyje použitím 50 ml 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného, 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, organické podíly se extrahují do 20 ml dichlormethanu, potom se organická fáze vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií za použití směsi is cyklohexanu a ethylesteru kyseliny octové 1,7: 1, a potom se krystalováním z ethylesteru kyseliny octové získá 4,35 g (86 %) látky 83, t.t. 101 až 102 °C, [a]o -20° (c - 1,0, chloroform). Příprava 75

Fenyl-3-0-methyl-l-seleno_(3-D-glukopyranosid (84)

Surová sloučenina 83, jak byla získána z 32,3 g (84,3 mmol) látky 82 se rozpustí v 500 ml methanolu a do roztoku se pomalu přidává 1,2 g sodíku. Za hodinu se roztok neutralizuje pryskyřicí IR—120 (1Γ) a po filtraci se zahustí. Takto připravený zbytek se čistí bleskovou chromatografií za použití směsi cyklohexan, ethylester kyseliny octové a aceton 1,5 : 1 : 1 a ve výtěžku 22,7 g (tj. 81 %, přepočteno na 82 se získá sirupovitá látka 84, [ct]_D -58° (c = 1,0, methanol).

Příprava 76

FenyM,6-0-benzyliden-3-0-methyl-l-seleno-p-D-giukopyranosid (85)

Do roztoku 7,65 g (23,0 mmol) sloučenina 84 v 150 ml acetonitrilu se přidává pod argonem 45 mg kyseliny p-toluensulfonové a 5,4 ml (36,0 mmol) dimethylacetalu benzaldehydu. Po dvouhodinovém míchání za teploty místnosti se přidá 1,5 g uhličitanu draselného, za 30 minut se roztok filtruje a filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií v soustavě cyklohexan a ethylester kyseliny octové 3,5 : 1 a získá se tím 8,55 g (88 %) sloučeniny 85 ve formě bílých krystalků, t.t. 123 až 124 °C po krystalování z ethylesteru kyseliny octové, [a]_D - 38° (c = 1,0, chloroform).

Příprava 77

Feny 1-4,6-O-ben2yliden-3-C)-methyl-2-O-(methyl-4-desoxy-6-O-dimethylsÍlyl-2,3-di-OmethyM-C-methylen-a-D-xylo-hexopyranosid)-l -seleno-p-D-glukopyranosid (86)

Pod argonem a za chlazení na -70 °C se přidává 7,0 ml (11,2 mmol) 1,6 M roztoku n-butyllíthia k roztoku 4,30 g (10,2 mmol) sloučeniny 85 v 30 ml tetrahydrofuranu, umístěného v zařízení dle Schlencka. Za 10 minut se přidá 5,0 ml (41,2 mmol) dichlordimethylsilanu a teplota reakční směsi se nechá vystoupit na teplotu místnosti. Po 3 hodinách a zahuštění potom se přidá roztok

2,10 g (9,62 mmol) sloučeniny 80 a 985 mg (14,4 mmol) imidazolu v 20 ml tetrahydrofuranu. Po třicetiminutovém stání za teploty místnosti se roztok zahustí, přidá se 50 ml vody s následnou extrakcí do dichlormethanu. Organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, po filtraci se filtrát zahustí. Analyticky čistý vzorek 86 se získá čistěním bleskovou chromatografií

-73CZ 301009 B6 s použitím směsi toluenu a acetonu 25 : 1 s obsahem 0,5 % triethylaminu. Ve výtěžku 90 % se takto připraví bezbarvý sirup.

'H NMR (400 MHz, C₆D₆) δ 7,77 - 6,99 (m, Ι0Η, aromatické), 5,51 (m, IH, C=CH₂), 5,24 (m,

IH,C=CH₂), 5,16(s, 1H, CHC_SH_S), 4,85 (d, IH, J = 3,7 Hz, H-l),4,81 (d, IH, J = 9,8 Hz, H-l'), 4,45 (m, IH, H-5), 4,38 (dd, IH, J = 10,8 Hz, 4,8 Hz, H-6a), 4,33 (dd, IH, J = 6,2 Hz, H-6b), 4,20 (m, IH, J= 9,2 Hz, H-3), 4,05 (dd, IH, J= 10,3 Hz, 4,9 Hz, H-6a'), 3,87 (dd, IH, J = 8,1 Hz, H-2’), 3,52, 3,38, 3,31 a 3,27 (s, 3H, OCH₃), 3,37 (t, IH, J = 10,3 Hz, H-6b'), 3,35 (t, IH, H^l'), 3,32 (dd, IH, H-2), 3,22 (dd, IH, J = 9,3 Hz, H-R'), 3,05 (ddd, IH, J = 9,3 Hz, io H-5'), 0,38 a 0,37 (s, 3H, Si(CH₃)₂). MS (m/u): 714 (M+NH,)*.

Příprava 78

Cyklizační radikálová reakce (příprava 87) a odštěpení etheru (88)

Během osmi hodin se pomalu přidává roztok 6,1 ml (22,7 mmol) hydridu tributylcínu a 200 mg (1,22 mmol) 2,2-azobisisobutyronitrilu ve 14 ml odplyněného toluenu k roztoku surové látky 86 v 850 ml toluenu za doplnění 10,2 mmol látky 85 a 9,62 mmol látky 80.

Po průběhu radikálové reakce se reakční směs zahustí a zbytek se rozpustí v tetrahydrofuranu. Přidá se nadbytek (20 ekvivalentů 40% vodného roztoku fluorovodíku a po dokonalém průběhu děsilylování (kontrola CCM, toluen/aceton, 4 : 1) se roztok neutralizuje přidáváním pevného hydrogenuhličitanu sodného, filtruje se a zahustí. Převládající látku 88 lze vyčistit krystalováním, t.t. 105 °C, [a]_D + 119° (c = 1,1, chloroform).

^l3C NMR (62,896 MHz, CDC1₃) δ 137,29 (kvart. arom. uhlíky), 128,8- 125,96 (aromatické uhlíky), 101,11 (CHC₆H₅), 97,64 (C-l), 83,52 (c-2). 82,76, 81,95, 80,84, 72,01, 71,92 a 64,31 (C-3, C-5, C-2', C-3’, C-4', C-5'), 75,19 (C-l'), 69,41 (C-6'), 62,69 (C-6), 60,93, 60,70, 58,31 a 55,20 (OCH₃), 38,80 (CM), 25,58 (uhlík methylenové skupiny).

Analýza pro C_2íH₃₆O₁₀.H₂O (502,558) vypočteno: 57,36 % C, 7,62 % H nalezeno: 57,31 % C, 7,54 % H

Příprava 79

Methy l-6-0-acetyM-C42-0-acetyM,6-0-benzyliden-3-0--methyl-ct-D-glukopyranosylmethyl)-4-des0xy-2,3-di-O-methyl-a-D~glukopyranosid (89)

Sloučenina 88 se kvantitativně acetyluje ve směsi anhydridu kyseliny octové a pyridinu 1 : 1 za přítomnosti katalytického množství 4-dimethylaminopyridinu. Produkt se získá zahuštěním reakční směsi a chromatografováním, [a]_D + 87° (c = 1,0, chloroform).

'HNMR (500 MHz, CDCI₃), viz tabulka I.

^I3C NMR (62,896 MHz, CDCI₃) δ 170,81, 169,80 (C=O), 137,18 (kvartémí aromatické uhlíky),

128,92 - 125,95 (aromatické uhlíky), 101,31 (CHC₆H₅), 97,51 (C-l), 83,22 (C-2), 81,94, 69,25 a63,83 (C-5, C^»', C-5'), 81,81 (C-3), 78,78 (C-3'), 72,74 (C-2’), 71,97 (C-l'), 69,49 (C-6'), 64,17 (C-6), 60,64, 59,82, 58,30 a 55,19 (OCH₃), 38,00 (C-4), 26,47 (uhlík methylenové skupiny), 20,91,20,76 (OCOCH₃).

CZ JU1UU9 B6

Hmotnostní spektrum (m/z): 586 (M+H)' 569 (M+H)\ 554 (M-OMe + NH₃)\ 537 (M-OMe)⁺.

Analýza pro C₂₈H4₀O_l2.H₂O (586,632) vypočteno: 57,33 % C, 7,22 % H nalezeno: 57,28 % C, 7,07 % H ío Prvá část syntézy záleží v přeměně 89 na imidát 90. K tomuto účelu se benzy lidenová skupina otevře použitím natriumkyanborohydridu a kyseliny chlorovodíkové. Takto obnažená hydroxylová skupina je dočasně chráněna tvorbou p-methoxybenzyietheru. Po desacetylování je primární alkoholická funkce chráněna selektivní tvorbou etheru s terč-butyldimethylsilylovou skupinou a takto získaná sloučenina se methyluje. Oxidace za podmínek dle Jonese vede k uranové kyselině, ta se benzyluje. p-Methoxybenzyl-ether se takto rozruší a do této polohy se zavede ester levulové kyseliny. Soustava za použití směsi kyseliny sírové, kyseliny octové a anhydridu kyseliny octové vede k acetolyze anomemí methylové skupiny, jakož i benzyletheru v poloze 6'a vznikne tak směs dvou acetylovaných monomerů. Selektivní desacetylace v poloze 1 se provede použitím hydrazinu v dimethylformamidu a směs anomérů, rozpuštěná v dichlormethanu, se převede na látku 90 trichloracetonitrilem za přítomnosti 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undec-7-enu.

-75 CZ 301009 B6

Schéma 23 Syntéza pentasacharidu 99

set

v ^C6^HJ

OSl

OM·

OM·

OM·⁰

Příprava 80

Ethyl-C-{2,3-dÍ-0-benzoyM,6-0-benzyliden-a-D-gIukopyranosyI)-( 1—>4)-2,3,6-tri-Obenzoy i-1 -th ίο-β-D-glukopyranosy (92).

Do roztoku 16,7 g (35,3 mmol) sloučeniny, kterou připravili Westmand J. a Nilsson M., J. Carbohydr. Chem. 14, 949 až 960 (1995) v 202 ml pyridinu, ochlazené na 0 °C, se přikapává io během 20ti minut 24,5 ml (211 mmol) benzoyIchloridu. Reakční směs se potom míchá za teploty místnosti 20 hodin, chromatografií na tenké vrstvě se ukáže, že reakce proběhla asi z 50 %. Směs se zředí přidáním vody a dichlormethanu, po extrakci do rozpouštědla se organická fáze promyje

CZ JU1UU? DO

10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Podle výše uvedeného pochodu se na zbytek působí znovu benzoylchloridem. Surový produkt se čistí chromatografováním na lélu oxidu křemičitého a získá se tak 22 g sloučeniny 92,

CCM: Rf = 0,80, silikagel, toluen/ethanol 9/1 objemově.

Příprava 81 i o 0-(2,3-Di-0-benzoyM,6-0-benzy liden-a-D-glukopyranosylH 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-Obenzoyl-p-D-glukopyranosylH 1 -+4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-p-D-glukopyranosa (94).

Směs 1,05 g (1,05 mmol) thioglykosidů 92. 200 mg (1,08 mmol) sloučeniny 93, viz Jeanloz a spol., J. Org. Chem. 26, 3939-3944 (1961) a 1,1 g práškovaného molekulárního síta 4Á se míchá v prostředí 18 ml toluenu pod dusíkem 15 minut, potom se ochladí na -20 °C a přidá se čerstvě připravený roztok 1,11 mmol N-jodimidu kyseliny jantarové a 0,125 mmol kyseliny trifluormethansulfonové ve směsi dichlormethanu a dioxanu, 1/1, obj., celkem 6 ml. Po 10ti minutách se červená směs filtruje, zředí dichlormethanem, po extrakci se organický roztok postupně promyje 10% vodným roztokem thiosíranu sodného, 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí ve vakuu. Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu a získá se tak 1,25 g sloučeniny 94.

CCM, Rf = 0,55, silikagel, heptan a ethylester kyseliny octové, 4/6 obj.

Příprava 82

O-(4,6-O-benzyliden-<x-D“glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(p-D-glukopyranosyl)-( 1 -4)-1,6-an30 hydro-2,3_di-O-methy Ι-β-D-glukopyranosa (95).

Do roztoku 1,24 g (1,11 mmol) sloučeniny 94 v 7 ml směsi methanolu a dioxanu, 1/1 obj. se přidá asi 50 mg kalium-terc.-butoxidu, reakční směs se míchá hodinu, přidá se další dávka 50 mg kalium-terc.-butoxidu a v míchání se pokračuje ještě 60 minut. Reakční směs se neutrali35 zuje na pryskyřici Dowex 50WX8 Ηζ filtruje se a zahustí ve vakuu. Chromatografováním na koloně silikagelu se takto získá 665 mg sloučeniny 95 ve formě oleje.

CCM: Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/ethanol, 85/15 obj.

Příprava 83

O-(4,6-O-benzyliden-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosylH 1 —>4)-O-(2,3,6-tri-Omethyl-p-D-glukopyranosylH 1 -+4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-m ethy Ι-β-D-glukopyranosa (96).

Do roztoku 660 mg (1 mmol) sloučeniny 95 v 8 ml suchého tetrahydrofiiranu se po ochlazení na 5°C přidá pod dusíkem 387 mg (9,65 mmol) hydridu sodíku, potom se přikapává 0,51 ml (0,22 mmol) methyljodidu a za teploty místnosti se reakční směs míchá 20 hodin. Nadbytek hydridu sodíku se rozruší přidáním methanolu, vše se vlije do 50 ml ledové vody, směs se extrahuje třikrát vždy do 20 ml ethylesteru kyseliny octové, organický roztok se promyje roztokem chloridu sodného a po vysušení síranem hořečnatým se zahuštěním filtrátu získá 690 mg čisté látky 96.

CCM, Rf = 0,25, silikagel, dichlormethan/methanol 95/5 obj.

-77CZ 301009 B6

Příprava 84

O-(2,3-Di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)4 1 ->4)-0-2,3,6-tri-0-methyl-[3-D-glukopyranosylH I —>4)— 1 ,6_anhydro-2,3-di-0-methyl-(3-D-glukopyranosa (97)

V 7,3 ml 80% kyseliny octové se rozpustí 690 mg (1,03 mmol) čisté sloučeniny 96 a za teploty 40 °C se směs míchá 20 hodin, dále se zahustí ve vakuu a znovu se zahustí po zředění toluenem, Chromatografováním na koloně silikagelu v prostředí dichlormethanu/octanu ethylnatého a methanolu 8/1/1 se takto získává 569 mg sloučeniny 97.

CCM, Rf = 0,40, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj.

Příprava 85

O46-O-Benzoy 1-2,3-di-O-methy l-a-D-glukopyranosy 1)41 -4)-042,3,6-tri-O-methy Ι-βD-glukopyranosyl)41 —^4)-1,6-anhydro-3,3-di-0-methyl-f3-D-glukopyranosa (98).

Do roztoku 560 mg (0,96 mmol) sloučeniny 97 v dichlormethanu se přidá 227 mg (1,05 mmol) 1-benzoyloxy-lH-benzotriazolu a 1,15 mmol triethylaminu, reakční směs se míchá 20 hodin za normální teploty, zředí se potom díchlormethanem, roztok se promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí do sucha. Produkt se čistí chromatografováním na koloně silikagelu s výsledkem: 600 mg sloučeniny 98.

Příprava 86

O42,3-Di-O-benzoy 1-4,6-O-benzyliden-a-D-glukopyranosy 1)41 —>4 )-0-(2,3,6-tri-Obenzoyl-(3-D-glukopyranosy 1)41 ->4)-O46-0-benzoyl-2,3-dÍ-0-methy 1-a-D-glukopyranosylH 1 -4)-042,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosy 1)41 —4)-l ,6-anhydro-2,3-di30 O-methyl-p-D-glukopyranosa (99).

Sloučenina vzorce 98 se převede na látku vzorce 99 postupem, jak byl popsán při přípravě látky 94. Kopulační reakce se provádí za teploty 5 °C.

CCM, Rf = 0,50, silikagel, heptan a ethylester kyseliny octové, 2/8, obj.

_ *70 .

cz juiuuy no

Schéma 24 Syaté&a heptasacharidu χθ£

104

Příprava 87

0-(4,6-0-Benzy liden-a-D-glukopyranosyl)4 1 ->4)-O4P-D-g^lukopyranosy l)-( 1 —4)-0(2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosy I)-( 1 -4)-042,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 —4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranosa (100).

-79CZ 301009 Bó

Sloučenina 99 se převede na sloučeninu 100 stejným způsobem, jak byl popsán pro přípravu sloučeniny 95.

CCM, Rf = 0,38, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj.

Příprava 88

O-(4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4 )-0-(2,3,6-tri-Omethyl-p-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —+4)i o O-(2,3,6-tri-O-methyl)-( 1 —+4)-0-(2,3,ó-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosylH 1 -+4)-1 ,6anhydro-2,3-di-O-methy Ι-β-D-gl ukopyranosa (101)

Sloučenina 100 se převede na sloučeninu 101 stejným způsobem, jak to bylo popsáno při přípravě látky 96.

CCM, Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1, obj.

Příprava 89

O-(2,3-Di-O-methy I-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-(3-D-glukopyranosyl)-( 1—>4 )--0-(2,3,6-tri-Omethyl-p~D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranosa (102).

Sloučenina 101 se převede na sloučeninu 102 týmž způsobem, jak to bylo popsáno pro přípravu sloučeniny 97.

CCM, Rf = 0,35, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj.

Příprava 90

0-(6-0-Benzoyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-O-(2,3,6-tri-O-methyl-pD-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-<2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosylH 1 -+4)-0-(2,3,6tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosyH 1 -^4)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopy ran o35 sa (103).

Sloučenina 102 se převede na sloučeninu 103 podle postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny 98.

CCM, Rf = 0,40, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 7,0/1,5/1,5 obj.

Příprava 91

0-(2,3-Di-0-benzoyM,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —+4)-0-(2,3,6-tri-O45 benzoy l-(3-D-gIukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-( 6-O-benzoyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —+4)-0-(2,3,6-tri-Omethyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-gl ukopyranosyl)-( 1 -+4)1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-|3-D-glukopyranosa (104).

Reakce spojování sloučeniny 103 s disacharidem 2 se provede použitím postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny 99.

CCM, Rf = 0,40, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol, 7,0/1,5/1,5 obj.

ΟΛ

CZ ÍUIVUV BG

Schéma 25 Syatésa oligosacharidu

1U*

109

-81 CZ 301009 B6

Příprava 92

044,6-0-BenzyIiden-a-D-glukopyranosyl)4 1 —+4)-O4 β-D-gIukopyranosy 1)4 1 -+4)-05 (2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy 1)4 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy l-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —+4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-(3D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-1,6-anhydro-2,3-di^O-methyl-|3-D-gliikopyranosa (105).

Sloučenina 104 se převede na sloučeninu 105 stejným způsobem, jak byl popsán pro přípravu io sloučeniny 95.

CCM, Rf = 0,60, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj.

Příprava 93

Q44,6-O-Benzy liden-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-Omethy l-(3-D-glukopyranosyl)~( 1 -+4>[042,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)4 1 -+4)O-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)]^-1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl43-Dglukopyranosa (106).

Sloučenina 105 se převede na sloučeninu 106 použitím postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny 96.

CCM, Rf = 0,70, silikagel, dichlormethan/methanol, 9/1 obj.

Příprava 94

O42,3-DÍ-0-methy l-a-D-glukopyranosyl>-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-gIukopyranosyl)-( 1 -+4)-(042,3,6-tri-O-methy 1-ct-D-glukopyranosy 1)-(1 —+4)-0-(2,3,6-tri-O30 methyl-p-D-glukopyranosy l)-{ 1 —+4)] 2— 1,6-anhydro-2,3-di-0-methyI-p-D-gIukopyranosa (107).

Roztok 5,05 g (2,0 mmol) sloučeniny 106 v 50 ml 80% kyseliny octové se míchá 20 hodin za teploty 40 °C. Po zahuštění ve vakuu a novém zahuštění po přidání toluenu se zbytek rozpustí v ethylesteru kyseliny octové a roztok se extrahuje vodou. Vodný podíl se vytřepá do dichlormethanu a spojené organické roztoky se vysuší bezvodým síranem hořečnatým. Zahuštěním po filtraci do sucha se takto připraví 2,68 g sloučeniny 107

CCM, Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/ethanol 9/1, obj.

Příprava 95

O46-O-Benzoy 1-2,3-d i-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)41-^4)-042,3,6-tri-O-methy Ι-βD-glukopyranosy 1)4 1-+4)-(042,3,6-tri-O-methy 1-ct-D-glukopyranosy 1)41 ->4)-O42,3,645 tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy 1)41 ->4)]₂-l ,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranosa (108).

Sloučenina 107 se převede na sloučeninu 108 použitím téhož postupu, jak byl popsán pro přípravu sloučeniny 98.

CCM, Rf = 0,80, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 7,0/1,5/1,5 obj.

_ co _

UZ. JU1WU7 DO

Příprava 96

0-(2,3-Di-0-benzoyM,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-Obenzoyl-p-D-glukopyranosylH 1 —>4)-0-(6-0~benzoy 1-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyrano5 sylH 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-(0-(2,3,6-tri-O-methy 1-aD-glukopyranosylHl-*4)-0-(2_ř3,6-tri-0-methyl-(3-D-glukopyranosyl)-(l-+4)]2-l,6anhydro-2,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranosa (109).

Směs 1,97 g (2,0 mmol, 3,5 ekv.) thioglykosidu 92, 0,86 g (0,57 mmol) heptasacharidu Γ08 ío a práškovaného molekulárního síta 4A se v prostředí 22 ml toluenu míchá pod dusíkem 15 minut.

Za teploty místnosti se potom přikapává čerstvě připravený roztok 496 mg (2,2 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 0,808 mmol kyseliny trifluormethansulfonové v 12 ml směsi dichlormethanu a dioxanu, 1/1, obj. Po 10ti minutách se reakční směs filtruje, filtrát se zředí dichlormethanem, extrahuje, promyje 10% roztokem thiosíranu sodného a 10% roztokem hydrogenuhli15 čitanu sodného a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se filtrát zahustí ve vakuu. Surový produkt se Čistí chromatografováním na koloně sílikagelu a získá se tak 1,08 g sloučeniny 109 CCM, Rf = 0,80, silikagel, toluen/ethy lester kyseliny octové/ethanol 8/2/2. obj.

-83CZ 301009 B6

Schéma 26 Syntéaa oligosacharidu 115

109

i

i

i

í

115

CZ 3010U9 B6

Příprava 97

0-(4,6-0-Benzy liden-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(P-E>-glukopyranosy l}-( 1 —>4)-0(2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-(l-+4)-0-(2,3,6~tri-0-methyl-p-D-gluko5 pyranosy!)-[(1 -»4>O-2,3,6-tri-0-methy 1-a-D-glukopyranosylH 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-Omethyl-p-D-glukopyranosyOhí 1 —>4)-l ,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-(3-D-glukopyranosa (HO)

Sloučenina 109 se převede na sloučeninu 110 stejným způsobem, jak to bylo popsáno při io přípravě látky 95.

CCM, Rf = 0,25, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 5,0/2,5/2,5 obj.

Příprava 98

O-(4,6-O-Benzyliden-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranosy IH 1 -4)-0-(2,3,6-tri-Omethy Ι-β-D-glukopyranosy l)-( 1 -4)-(0-(2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosy l)-( 1 -4}O-(2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1—>4)]₃—1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-p-Dglukopyranosa (111)

Sloučenina 110 se převede na sloučeninu 111 týmž postupem, jak to bylo popisováno pro přípravu sloučeniny 96

DDM, Rf = 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 6/2/2 obj.

Příprava 99

O-(2,3-Di-O-methy Ι-α-D-glukopyranosy l)-( 1 -4)-0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosyl)-( 1 -4)-(0-(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —4)-0-(2,3,6-tri-O-methy 130 p-D-glukopyranosyI)-( 1 —4)]₃-l ,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-[3-D-glukopyrattOsa (112)

Sloučenina 111 se převede na sloučeninu 112 stejným pracovním postupem, jak to bylo popsáno při přípravě sloučeniny 97

CCM, Rf - 0,20, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 6/2/2, obj.

Příprava 100

0-(6-O-Benzoyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —4)-0-(2,3,6-tr4O-methyl-(340 D-glukopyranosylH 1-+4)-(0-(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6tri-0-methyl-(3-D-glukopyranosy l)-( 1 —4)]₃-1,6-anhydro-2,3-dí-O-methyl-p-D-glukopyranosa (113).

Sloučenina 112 se převede na sloučeninu 113 stejným postupem, jak to bylo popsáno pří přípravě sloučeniny 98

CCM, Rf = 0,20, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 6/2/2

Příprava 101

O-(6-O-Benzoy l-4-O-levulinyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6tri-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)-(¹-^>4)-[0-(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-^-D-glukopyranosyl)-( l-+4)]₃-l ,6-anhydro-2,3-diOmethyl-|3-D-glukopyranosa (114)

-85 =

Do roztoku 320 mg (0,167 mmol) sloučeniny 113 v 1 ml dioxanu se přidá 48 mg (0,25 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu, 29 mg (0,25 mmol) kyseliny levulové a 4 mg (0,033 mmol) dimethylaminopyridinu, reakční směs se míchá za normální teploty 3 hodiny pod dusíkem, zředí se přidáním dichlormethanu a vody, po extrakci se organický roztok promyje vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Surový produkt se čistí chromatografováním na koloně silikagelu s výsledkem: 312 mg sloučeniny 114.

io CCM, Rf = 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 6/2/2 obj.

Příprava 102

C)-(6—0-Benzoyl-4-0~levulinyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)—(1—>4)-O-(2,3,615 tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-{l—*4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranosy IH 1 -+4)]₃-l ,6-di-acetyl-2,3-di-Omethyl-P-D-glukopyranosa (115).

Za teploty místnosti se 4 hodiny míchá roztok 312 mg (0,155 mmol) sloučeniny 114 ve směsi

2,25 ml anhydridu kyseliny octové, 50 μΐ kyseliny octové a 0,14 ml kyseliny trifluoroctové, po přidání 10 ml toluenu se směs odpaří a třikrát se ještě oddestiluje po přidání vždy 10 ml toluenu. Po chromatografování na koloně silikagelu se izoluje takto 324 mg sloučeniny 115.

CCM: Rf = 0,65, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové a ethanol/6/2/2 obj.

Příprava 103

0-(6-0-Benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosylH 1—>4)-O-(2,3,6tri-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)-{l—>4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)or

CZ JU1UUV tíb (1 —>4 )-0-(2,3,6-tri-O-m ethy l-{3-D-glukopyranosyl)-( 1 —+4)]3-6-O-acetyl-2,3-di-O-methylα,β-D-glukopyranosa (116)

Roztok 324 mg (0,153 mmol) látky 115 a 22,3 μί morfolinu (0,256 mmol) v 2 ml toluenu se míchá 4 hodiny za teploty 35 °C. Po přidání další dávky 22,3 μί morfolinu se pokračuje vmíchání reakční směsi 20hodin při 35 °C. Dále se reakční směs prudce ochladí vodou, extrahuje dichlormethanem, organický roztok se postupně promyje 0,1 N roztokem kyseliny chlorovodíkové a vodou, po vysušení se zahustí do sucha. Po chromatografování na koloně silikagelu se takto připraví 280 mg sloučeniny 116.

io

CCM, Rf = 0,45, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol 6/2/2 obj.

Příprava 104

O-(6-O“BenzoylM-O-levulinyl-2,3-di-O-methyl-ct-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-0-(2,3,6tri-O-methyl-p-D-glukopyranosy í)—(1 ->4)-[O-(2,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)(1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-(3-D-glukopyranosyl)-(l—>4)]₃-6-O-acety 1-2,3-di-O-methyla, β-D-glukopyranosy 1-trichloracetimidát (117)

Do roztoku 138 mg (0,066 mmol) sloučeniny 116 v 1,5 ml dichlormethanu se přidá 39 μί (0,39 mmol) trichloracetonitrilu, dále 4,7 mg uhličitanu česného, reakční směs se míchá 2 hodiny, filtruje, filtrát se zahustí a zbytek se chromatografuje na koloně silikagelu. Získá se tak 152 mg imidátu 117.

CCM, Rf = 0,35, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/ethanol, 8/1/1, obj.

-87CZ 301009 B6

Schéma 2β»

Syntéza disacharidu Ι2β

♦

HO

MBnO

124

122

OH

121

OM* OBn

OAe

125

126

Příprava 105

Methyl-2-0-benzyl-4,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosid (119)

V 858 ml dimethylformamidu se rozpustí společně 60 g sloučeniny 118, jež je běžně obchodně dostupná a 50,5 ml benzylbromidu. Po ochlazení na 10°C se přikapává pomalu 20% vodný ee

CL JU1UU? BO roztok hydroxidu sodného, reakční směs se míchá hodinu, teplota se nechá vystoupit na 20 °C s následujícím mícháním po dobu 20 hodin. Roztok se vlije na směs vody a ledu, a po extrakci toluenem se organický roztok zahustí; krystalováním surového produktu se takto připraví 30,0 g sloučeniny 119.

CCM Rf= 0,60, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7/3 obj.

Příprava 106 io Methyl-2-O-benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-p-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosid (120).

V 211 ml dimethylformamidu se rozpustí 26,4 g sloučeniny 119, a po ochlazení roztoku na 5 °C se pod dusíkem přidává 2,5 g hydridů sodíku. Potom se přikapává do reakční směsi 13,3 g 4-methoxybenzylchloridu, směs se dále míchá za teploty místnosti hodinu, zředí se ethylesterem kyseliny octové, roztok se promyje dvakrát vodou a zahuštěním se takto připraví 40,7 g sloučeniny 120.

CCM, Rf = 0,80, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7/3 obj.

Příprava 107

Methyl-2-0-benzyl-3-0-p-methoxybenzyl-a-D-glukopyranosid (121)

V 60% vodné kyselině octové se rozpustí 34,9 g sloučeniny 120 a roztok se míchá 4 hodiny při

60 °C. Dále se zředí toluenem, zahustí a dalším čistěním chromatografií na silikagelu se připraví tímto způsobem 26,4 g sloučeniny 121.

CCM, Rf = 0,07, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7/3 obj.

Příprava 108

Methyl-2-0-benzyl-3-0-p-methoxybenzyl-6-0-methyl-<x-D-glukopyranosid (122).

Pod dusíkem se rozpustí 26,4 g sloučeniny 121 v 263 ml dichlormethanu a za teploty místnosti se přidá 11,6 g triethyloxoniumtetrafluorborátu a 17,4 g 2,6-di-terc.-butyl-4-methylpyridÍnu. Po 4 hodinách se reakční směs vlije do ledové vody, po extrakci do dichlormethanu se organický roztok promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného a zahustí. Čistěním surového produktu chromatografováním na koloně silikagelu se připraví takto 18,5 g sloučeniny 122.

CCM Rf = 0,25, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7/3, obj.

Příprava 109

EthyI-2,4,6-tri-0-acetyI-3-0-methyl-l-thio-a-L-idopyranosid (124)

V 175 ml toluenu se rozpustí 48,4 g sloučeniny 123, tj. l,2,4,6-tetra-O-acetyl-34>-methyl-aL-idopyranosy, viz Jaurand a spol, Bio. Med. Chem. Lett. 2, 897-900 (1992); dále se pod dusíkem přidává 20 ml ethanthiolu a 134 ml etherátu fluoridu boritého (v toluenu). Po hodinovém míchání a přidání 400 ml vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se směs míchá ještě další hodinu. Po vlití do ethylesteru kyseliny octové se oddělená organická fáze promyje dvakrát vodou, zahustí se a dalším čistěním na koloně silikagelu se získá 29,6 g sloučeniny 124

CCM Rf = 0,45, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové, 6/4, obj.

-89CZ 301009 B6

Příprava 110

MethyI-O-(2,4,6-tri-O-acety 1-3-O-methy Ι-α-L-idopyranosy I)-( 1 —>4)-2-O-benzyl-3-O-p5 methoxybenzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (125).

Pod dusíkem se rozpustí v 525 ml toluenu 17,5 g sloučeniny 122 a 28,2 g sloučeniny 124, přidá se molekulární síto 4Á a reakční směs se vychladí na -20 °C. Přikapává se pod nepřetržitým proudem dusíku čerstvě připravený roztok 17,4 g 0,1 M N-jodimidu kyseliny jantarové a 1,38 ml io kyseliny trifiuormethansulfonové ve směsi dioxanu a dichlormethanu, 1/1, obj. Po 10ti minutách se červená reakční směs filtruje, filtrát se promyje postupně vodným roztokem thiosíranu sodného a vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, zahuštěním vysušeného filtrátu se získá 30,0 g sloučeniny 125

CCM Rf = 0,45, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové, 8/2, obj.

Příprava 111

Methy l-0-(3-0-methyl-a-L-idopyranosy l)-( 1 -^4)-2-O-benzy l-3-O-p-methoxybenzy 1-620 O-methyl-a-D-glukopyranosid (126).

V 460 ml směsi methanolu a dioxanu 1/1 obj. se rozpustí 30,0 g sloučeniny 128 a přidá se kalium-terc.-butoxid. Za 15 minut se reakční směs neutralizuje na pryskyřici Dowex 50WX8H⁺, zahustí se ve vakuu a zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu a výsledkem

17,4 g sloučeniny 126.

CCM, Rf = 0,25, silikagel, dichlormethan/methanol 95/5 obj.

Příprava 112

Methyl-O-{4,6-O-isopropyliden-3-O-methyl-a-L-idopyranosyl)-{l—>4)~2-O-benzy 1-3-0p-methoxybenzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (127).

Pod dusíkem se rozpustí 17,4 g sloučeniny 126 v 77 ml dimethylformamidu a po přidání 26 ml 35 2,2-dimethoxypropanu a kyseliny p-toluensulfonové se reakční směs míchá 30 minut. Následuje zředění reakční směsi vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného s následující extrakcí do ethylesteru kyseliny octové. Po oddestilování rozpouštědla se takto získá 19,7 g sloučeniny 127,

CCM, Rf = 0,45, silikagel, dichlormethan/methanol, 95/5 obj.

Příprava 113

Methyl-0-(4,6-0-isopropyliden-2,3-di-0-methyl-ci-L-Ídopyranosyl)-(l—>4)-2-O-benzyl3-0-p-methoxybenzyl-6-0-methyl-a-D-glukopyranosid (128).

Roztok 18,5 g sloučeniny 127 v 24,4 ml dimethylformamidu se vychladí na 0 °C a pod dusíkem se přidá 1,47 g hydridu sodíku, (disperze v oleji, 60%) a 2,36 ml methyljodidu. Po hodině se nadbytek natriumhydridu rozruší methanolem, a extrakcí do dichlormethanu s obvyklým dalším zpracováním se získá 20,0 g sloučeniny 128.

CCM, Rf = 0,85, silikagel, dichlormethan/methanol, 95/5, obj.

_ Qfl GL JUlUUy DO

Schéma 29, Syntéaa disacharidu 138

12a i

131

OM*

133

♦

>

CCi,

-9l CZ 301009 B6

Příprava 114

Methyl-Cf-(4,6-0-isopropyIiden-2,3-di-0-methyl-a-L-idopyranosyl)-(l'^->4)-2-O-benzyl3-0-p-methoxybenzyl-6-0-methyl-<x-D-glukopyranosid 129

Ve směsi 838 ml dichlormethanu a 168 ml vody se rozpustí 18,4 g sloučeniny 128, přidá se 7,1 g 2,3-dichlor-5,6-dikyan-l,4-benzochinonu a reakční směs se míchá za teploty 4°C 18 hodin, vlije se dále do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se extrahuje do dichlormethanu. Zahuštěním organického vysušeného roztoku se takto získá 12,7 g sloučeniny 129.

CCM, Rf- 0,40, silikagel, dichlormethan/methanol 95/5 obj.

Příprava 115

Methyl-0-(4,6-isopropylÍden-2,3-di-0-methyl-a-L-idopyranosy l>-( 1 —>4)-2,3-di-O-benzyl6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (130).

Ve 178 ml suchého dimethylformamidu se rozpustí 10,5 g sloučeniny 129 a po ochlazení na 0 °C se přidá pod dusíkem 1,91 g hydridu sodíku (60% disperze v oleji) s následným přikapáváním

3,3 ml benzylbromidu. Za 30 minut je reakce skončena, nadbytek hydridu sodíku se rozruší methanolem, přidá se voda a směs se extrahuje dvakrát do ethylesteru kyseliny octové. Po zahuštění roztoku se takto připraví 13,6 g sloučeniny 130.

CCM, Rf = 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 1/1, obj.

Příprava 116

Methyl-0-(2,3-di-0-methylHX-L-Ídopyranosyl)-( 1—>4)—2,3-di-O-benzyl-ó-O-methyl-aD-glukopyranosid (131)

Ve směsi kyseliny octové a vody 77/33 se rozpustí sloučenina 130, reakční směs se míchá po dobu noci, zahustí se dvakrát po přidání toluenu a zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu: 11,5 g sloučeniny 13135 CCM, Rf = 0,09, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové, 1/1, obj.

Rf - 0,68, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1, obj.

Příprava 117

Methyl^O-(2,3-di-0-methyl-<x-L-idopyranurosyl)-( 1—>4)-2,3-di-0-benzyl-6-O-methyl-aD-glukopyranosid (132).

K roztoku 116 g sloučeniny 131 v 60 ml dichlormethanu se přidá 33 mg 2,2,6,6-tetramethyl-l45 piperidinyloxy, 40 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 218 mg bromidu sodného a 289 mg tetrabutylamoniumchloridu, směs se ochladí na 0 °C, a během 15 minut se přidá 44 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, 21,8 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 50 ml 1,3 M roztoku chlornanu sodného. Po hodinovém míchání se reakění směs zředí vodou a vše se extrahuje třikrát do dichlormethanu. Spojený organický roztok se promyje vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a filtrát se zahustí. Získá se tak 13,4 g surového produktu 132.

CCM, Rf = 0,14, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1, obj.

_ 07 _ cz juiuuv bo

Příprava 118

Methy l-O-(benzy 1-2,3-di-O-methy 1-a-L-idopyranurosy l)-( 1 -4)-2,3-di-O-benzy 1-6-0methyl-a-D-glukopyranosid (133).

Pod dusíkem se rozpustí sloučenina 132 v 110 ml dimethylformamidu, přidá se 6,7 g hydrogenuhličitanu draselného, 10,7 ml benzylbromidu a reakční směs se 90 minut míchá. Po přidání ethylesteru kyseliny octové a vody se oddělená organická fáze po extrakci zahustí. Čistěním chromatografií na silikagelu se takto připraví 9,9 g sloučeniny 133.

io

CCM, Rf = 0,43, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové, 4/6, obj.

Příprava 119

Methy l-O4benzyl-2,3-di-O-methy l-p-D-glukopyranurosyl)41 -+4)-2,3-di-O-benzyl-ó-Otnethyl-a-D-glukopyranosid (134)

Roztok 9,9 g sloučeniny 133 v 300 ml methanolu se vyhřeje pod dusíkem do varu pod zpětným chladičem, přikapává se 1 M roztok natriummethoxidu v methanolu (65,2 ml) a reakční směs se za míchání zahřívá 3 hodiny do varu pod zpětným chladičem. Po ochlazení na teplotu místnosti se přidá 22,2 ml 1 N roztoku hydroxidu sodného a reakční směs se míchá dalších 90 minut. Po neutralizování na pryskyřici Dowex 50WX8H+ a filtraci se směs zahustí, produkt se rozpustí v dimethylformamidu (192 ml) a pod dusíkem se přidá molekulární síto. Ke směsi se přidá dále 3,2 g hydrogenuhličitanu draselného a 4,8 ml benzylbromidu, směs se míchá 5 hodin, přidá se ethylester kyseliny octové a voda, po extrakci se obě fáze oddělí a organický roztok se zahustí. Surový produkt se čistí chromatografováním na koloně silikagelu: 6,19 g sloučeniny 134 a 1,88 g výchozí látky J_33

CCM, Rf= 0,55, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 4/6, obj.

Příprava 120

Methyl-04benzyl-4-O-levulinyl-2,3-di-0-methyH3-D~glukopyranurosyl)41 -+4)-2,3-diO-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (135)

V 40 ml dioxanu se rozpustí 6,2 g sloučeniny 134, přidá se 2,1 g kyseliny levulové, 3,75 g dicyklohexylkarbodiimidu a 0,2 g 4-dimethylaminopyridinu, načež se reakční směs míchá pod dusíkem 2 hodiny. Přidáním 95 ml diethyletheru vyloučená sraženina se odfiltruje, filtrát se promyje vodným roztokem hydrogensíranu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí. Krystalováním ze směsi etheru a heptanu se izoluje 6,2 g sloučeniny 135.

CCM, Rf= 0,26, silikagel, dichlormethan/aceton 95/5 obj.

Příprava 121

04BenzyM-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-P-D-glukopyranurosyl)41 -+4)-1,3-di-O-acetyl2-O-benzy 1-6-O-methy 1-a, β-D-glukopyranosid (136).

Pod dusíkem se rozpustí 6,1 g sloučeniny 135 v 256 ml anhydridu kyseliny octové a po ochlazení na -20 °C se přikapává během 30 minut směs 4,9 ml kyseliny sírové a 49 ml anhydridu kyseliny octové. Po 60ti minutách se přidává octan sodný tak dlouho, až směs má neutrální hodnotu pH. Přidá se pak voda a ethylester kyseliny octové, oddělená organická fáze se zahustí. Čistěním na koloně silikagelu se chromatografováním izoluje sloučenina 138 ve výtěžku 4,2 g.

*93CZ 301009 B6

CCM, Rf = 0,24, silikagel, dichlormethan/ethyiester kyseliny octové 8/2, obj.

Příprava 122

04Benzyl-4-0-levulinyl_2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy 1)41 —>4)-3-O-acety 1-20-benzyl-ó-0-methyl-a,p-D-glukopyranosa (137)

Do roztoku 4,2 g sloučeniny 136 v 42 ml tetrahydrofuranu se přidá 4,1 ml piperidinu a směs se míchá za teploty místnosti po dobu noci. Po zředění ethylesterem kyseliny octové se roztok io promyje přidáním 0,5 N kyseliny chlorovodíkové, organický roztok se zahustí a zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu: 3,2g sloučeniny 137.

CCM, Rf = 0,33, silikagel, dichlormethan/ethyiester kyseliny octové 1/1, obj.

Příprava 123

04BenzyM-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranurosyl)41—>4)-3-0-acetyl-2O-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosyltrichloracetimidát (138).

Pod dusíkem se rozpustí v dichlormethanu 1,59 g sloučeniny 137, přidá se 1,1 ml trichloracetonitrilu a 72 mg uhličitanu česného, směs se potom míchá hodinu. Po odfiltrování uhličitanu ceósného se filtrát zahustí a čistěním chromatografováním na koloně silikagelu se takto připraví 1,57 g sloučeniny 138.

CCM, Rf = 0,60, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové, 3/7, obj.

Schéma 30

Syntéza tetrasacharidu 140

138 + 133

140

cl ουιυυ? do

Příprava 124

Methyl-O-( benzy M-O-levulinyl-2,3-di-O-methyl-P-D-gIukopyranurosyl)-(l—>4)-0-{3-Oacety 1-2-O-benzy Ι-6-O-methyl-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl5 α-L-idopyranurosy l)-( 1 —>4)-2,3-di-O-benzy Ι-6-methyl-a-D-glukopyranosid (139).

Směs 300 mg sloučeniny 133 a 455,6 mg sloučeniny 138 se společně zahustí po přidání toluenu, a zbytek se rozpustí pod dusíkem v 6 ml dichlormethanu. Po přidání molekulárního síta 4Á se směs ochladí na -20 ^ŮC, míchá se takto 20 minut a v množství 15 mol %, přepočteno na ío sloučeninu 138, se přidá trimethylsilyltrifluormethansulfonát. Za 10 minut se reakce přeruší přidáním vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, molekulární síto se odfiltruje, filtrát se zředí dichlormethanem, roztok se promyje vodou a po zahuštění se čistí chromatografováním na koloně sílikagelu: 560 mg sloučeniny 139.

CCM, Rf = 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 3/7 obj.

Příprava 125

Methy l-0-(benzyl-2,3-di-O-methyl-|3-D-glukopyranurosyl)-( 1 —>4)-O-(3-O-acety 1-2-020 benzyl-6-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-O-(benzyl-2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranurosyl)-( 1 —^4)-2,3-di-O-benzy 1-6-methyl-a-D-glukopyranosid (140).

V 1,9 ml pyridinu se rozpustí 532,6 mg sloučeniny 139 a za teploty místnosti se přidá směs 2,4 ml kyseliny octové a 0,3 ml hydrazinhydrátu v 1,9 ml pyridinu. Po míchání 9 minut se přidá dichlormethan a voda, organická fáze se po oddělení promývá postupně 0,1 N roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, po vysušení se zahustí a zbytek se čistí chromatografováním na koloně sílikagelu: 451 mg sloučeniny 140

CCM, Rf = 0,45, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 3/7, obj.,

-95CZ 301009 B6

or cz juiuvy bo

Příprava 126

Methyl-0-(6-0-benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-niethyl-a-D-glukopyranurosyl)-( 1 -4)CH2,3,6-tri-0-methyl-p-D“glukopyranosyl)-(^1_*4)-[0-(2,3₎6-tri-0-methyl-a-D-glukopy5 ranosy l)-( 1 -+4)-O~{2,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)-( 1 -4)]₃-O-(6-acetyl-2,3-di0-methyl-a-L-idopyranurosyl)-(l-+4)-0-benzyl'-2,3-di-0-methyl-p-I>-glukopyranurosyl)(1 -+4)-O-(3-O-acetyl-2-O-benzyl-6-O-methy 1-a-D-glukopyranosy IH 1 -*4)-0-(benzyl2,3-di-0-methyl-a-L-idopyranurosyl)41—4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyí-a-D-glukopyranosid (141).

Směs 144 mg (0,086 mmol) sloučeniny 117 a 76 mg (0,058 mmol) se společně oddestiluje po přidání toluenu a zbytek se rozpustí v 3,0 ml směsi dichlormethanu a etheru 'Λ obj ./obj. Po přidání 140 mg molekulárního síta 4A se pod dusíkem směs vychladí na 0 °C, přidá se 128 μΐ 0,1 M roztoku terc.-butyldimethylsilyltrifluormethansulfonátu v dichlormethanu a za 15 minut se reakce přeruší přidáním roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po extrakci vodou a dichlormethanem se oddělená organická fáze po vysušení zahustí. Zbytek se nejprve čistí chromatografováním na Sephadex-u LH 20, dichlormethan a methanol, 1/1 obj., potom chromatografováním na koloně oxidu křemičitého: 124 mg sloučeniny 141, poměr anomérů α/β = 8/2

CCM, Rf = 0,80, silikagel, toluen/aceton, 1/1 obj.

Příprava 127

Methy 1-0-( 6-O-benzoy 1-2,3-dimethyl-a-D-glukopyranurosyl)~{ 1 —4)-O-(2,3,6-tri-025 methy Ι-β-D-glukopy ranosy l)-( 1 -4)-(0-(2,3,ó-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosylH 1 —4)0-(2,3,6~tri-0-methyl-3-D-glukopyranosy IH 1 -+4)]₃-O-(6-acetyI-2,3-di-O-methyl-a-Dglukopyranurosy 1)41 —4)-benzyl-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy l)-( 1 -4)-0-(3-0acety l-2-0-benzyl-6-0-methyl-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -+4)-O4benzyI-2,3-di-O-methylα-L-idopyranurosylX l -+4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl~a-D-glukopyranosid (142).

Sloučenina 141 se převede na 142 podle postupu přípravy látky MO. Sloučenina 142 je směs α/β anomérů 8/2

CCM, Rf = 0,45, silikagel, toluen/aceton 1/1, obj.

-97CZ 301009 B6

Schéma 32, Syntéaa trisacharidu

OH OH OH

143

148 ▼

147 no

CL JU1WI9 BO

Příprava 128

0-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glukopyranosy I)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-acety 1-a-D-glukopyranosy l)-( 1 —>4)—1,2,3,6-tetra-O-acety Ι-β-D-glukopyranosa (144)

V malých dávkách se přidává 7 g (13,9 mmol) maltotriosy (obchodně dostupná látka) do suspenze 7 g (85 mmol) octanu sodného v 70 ml anhydridu kyseliny octové za teploty 155 °C. Po 15ti minutách se čirý roztok ochladí, reakce se přeruší přidáním 700 ml ledové vody, a po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se organický roztok promyje vodou, vysuší se bezvodým ío síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěním filtrátu získá 13,1 g sloučeniny 144

CCM, Rf = 0,53, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové 7/3, obj.

Příprava 129 15

Ethy 1—0—(2,3,4,6-tetra-O-acety 1-a-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-acety 1-a-Dglukopyranosy IH 1 -+4)-2,3,6-trÍ-0-acetyl-l-thio-fi-D-glukopyranosid (145).

V 80 ml toluenu se rozpustí 13 g (13,5 mmol) sloučeniny 144, pod dusíkem se přidává do 20 roztoku 1,97 ml (26,9 mmol) ethanthiolu a 3,7 ml molámího roztoku diethyletherátu fluoridu boritého v toluenu. Reakční směs se 60 hodin míchá, zředí se vodou a dichlormethanem, organická fáze se po oddělení promyje 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší, filtruje a zahustí. Surový produkt reakce se čistí chromatografováním na koloně silikagelu: 8,6 g sloučeniny 145

CCM, Rf = 0,60, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové 7/3 obj.

Příprava 130

Ethyl-O-(a-D-glukopyranosyl)-( 1 —+4)-O-(a-D-glukopyranosyI)-( 1 -+4)-1 -thio-p-D-glukopyranosid (146).

Sloučenina vzorce 145 se převede na látku 146 postupem, který byl popsán pro přípravu sloučeniny 95.

CCM, Rf = 0,80, silikagel, ethylester kyseliny octové/pyridin/kyselina octová/voda 13/7/1,6/4 obj.

Příprava 131 40

Ethyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-a-D“glukopyranosyl)-{ 1-+4)-0-(2,3,6-tri-O-benzoy 1-aD-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-2,3,6-tri-O-benzoy 1- l-thio-p-D-glukopyranosid (147).

Sloučenina vzorce 146 se převede na látku 147 postupem, popsaným pro přípravu sloučeniny 92. 45

CCM, Rf = 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 9/1, obj.

-99CZ 301009 B6

Schéma 33» Syntéze polysacharidů 180

1ΛΛ cl juiuuy bó

Příprava 132

Methy 1-0-(2,3,4,6-tetra-O-acety 1-a-D-glukopyranurosy 1)4 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-benzoy 1(3-D-glukopyranosyl)4 1 -+4)-042,3,6-tri-0-benzoyl-p-D~glukopyranosyl)4 1 -+4)-046-05 benzoy 1-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy 1)4 1 -+4)-0-(2,3,6-tri-O-methy 1-a-Dglukopyranurosy 1)4 1-+4)-(0-(2,3,6-tri-Q-methy 1-a-D-glukopyranosylH1-+4)-042,3,6tri-O-methyl-p-D-glukopyranosyl)41->4)]₃-046~0-acetyl-2,3-di-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)41 —'Tj-CHbenzy 1-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy 1)41 -+4)-O43-acetyl2-O-benzy 1-6-0-methy 1-a-D-glukopyranosy 1)41 —>4)-O-benzy 1-2,3-di-O-methy 1-a-L1 o idopyranurosy 1)41 -+4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-methyl-a-D-glukopyranosid (148).

Podle postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny 109, se spojí spolu dohromady 105 mg (0,066 mmol) thioglykosidů 147 a 55 mg (0,017 mmol) glykosidového akceptoru 142, poměr α/β = 8/2. Surový reakční produkt se vyčistí nejprve chromatografováním na Sephadexu LH 20 za použití soustavy dichlormethan a methanol, 1/1, potom chromatografováním na koloně silikagelu se soustavou diethylether/ethylester kyseliny octové/ethanol 0/0,5/0,5 obj. Sloučenina 148 se získá ve výtěžku 49 mg. CCM, Rf = 0,30, silikagel, diethylether/ethylester kyseliny octové/ethanol, 85/7,5/7,5, obj.

Příprava 133

Methyl-042,3,4,6-tetra-O-benzoy l-a-D-glukopyranurosyl)41-+4)-042,3,6-tri-O-benzoy 1a-D-glukopyranosyl)41 —►4)-042,3,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukopyranosyl)41-+4)-046O-benzoy 1-2,3-di-O-methy 1-a-D-glukopyranurosy 1)41 -+4)42,3,6-tri-O-methy Ι-β-D25 glukopyranosyl)41-+4)-(042,3,6-tri-0-methyl-a-D--glukopyranosyl)41—*4)-O42,3,6-triO-methyl-|3-D-glukopyranosyl)41 -+4)^-046-O-acetyl-2,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosylH 1 -+4)42,3-di-0-methyl-3-D-glukopyranurosyl)41 -+4)-O43-O-acety 1-6-Omethy l-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -*4)-O42,3-di-O-methy l-a-L-idopyranurosyl)41 -+4)-6O-methyl-a-D-glukopyranosid (149).

Roztok 47 mg (0,01 mmol) sloučeniny 148 v 10 ml ethylesteru kyseliny octové se protřepává v atmosféře dusíku 3 hodiny s 10 % palladia na uhlí (90 % hmotnostně se zřetelem na látku 148). Zahuštěním filtrátu se získá 42 mg sloučeniny 149

CCM, Rf = 0,35, silikagel, ethylester kyseliny octové/pyridin/kyselina octová/voda 20/7/1,6/4, obj.

Příprava 134

Methy l-04a-D-glukopyranurosy 1)41 -+4)-O4a-D-glukopyranosy 1)41 -+4)4p-D-glukopyranosylH¹ -+4)-042,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranurosy 1)41 ->4)-042,3,6-tri-Omethyl^D-glukopyranosy 1)41 —>4)4042,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosyl)(l-+4)]3-O42,3-di-O-methyl-a-D-glukopyranosy 1)41 -+4)-2,3-di-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy1)41—*4)-046-0-methyl-a-D-glukopyranosy 1)41 —>4)-O42,3-dimethy 1-ct-L45 idopyranurosyl)41“+4)-6-0-methyl-a-D-glukopyranosid (150).

Směs 0,22 ml methanolu a 0,66 ml 0,66 N roztoku hydroxidu sodného se vlije na 41 mg (0,01 mmol) sloučeniny 149 a směs se míchá 20 hodin za teploty místnosti. Potom se zředí vodou a okyselí přidáváním 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkové až do dosažení hodnoty pH 6,5, Po zahuštění se roztok zbaví soli na koloně Sephadexu G-25 za použití soustavy voda a acetonitril 9/1 obj. Frakce s obsahem hexadekasacharidu se spojí a lyofilizováním se takto získá 26 mg sloučeniny 150 ve formě amorfního bílého prášku.

-101CZ 301009 B6

CCM, Rf = 0,35, silikagel, ethylester kyseliny octové/pyridin/kyselina octová/voda: 8/7 /1,6/4 obj.

Příprava 135

6-0-terc.-butyldimethylsilyl-l,2-0-isopropyliden-3-0-methyl-a-D-glukofuranosa (152)

V 100 ml bezvodého dichlormethanu se rozpustí 10 g (42,7 mmol) diolu 151. přidá se 7,1 g (47,3 mmol) terč -butyldimethylsilylchloridu a 5,8 g (85,3 mmol) imidazolu, reakční směs se io míchá za teploty místnosti, po dvou hodinách se zředí přidáním dichlormethanu, roztok se promyje vodou, organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtrát se zahustí a zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu za použití soustavy ethylester kyseliny octové a cyklohexan 1/9 obj. Ve formě sirupu se získá očekávaný produkt 152 ve výtěžku 11,9 g (80 %). [a]_D-34° (c = 1,9, chloroform).

Příprava 136

6“(Merc,-butyldÍmethylsilyl“l,2-CMsopropyIiden-3-0-methyl-5-C“VÍnyl“a-D“glukofuranosa (154).

Za chlazení na -78 °C se přidá do 40 ml bezvodého dichlormethanu 3,2 ml (36,8 mmol) dichloridu kyseliny oxalové a 5,2 ml (73,4 mmol) dimethylsulfoxidu, směs se míchá 30 minut, přidá se ještě 8,4 g (18,4 mmol) sloučeniny 152 a vmíchání reakční směsi se pokračuje ještě hodinu. Potom se přidá 15,3 ml (110,0 mmol) triethylaminu a po 30ti minutách se reakční směs zředí dichlormethanem. Klasickým postupem se pak získá 5-ulosa (153). jež se přímo použije při další reakci. Surový keton 153 se rozpustí v 100 ml bezvodého tetrahydrofuranu a přidá se 1 M roztok vinylmagnesiumbromidu v tetrahydrofuranu, 28 ml (27,6 mmol) za chlazení na 0 °C. Po hodině se směs zředí chloridem amonným, promyje se vodou, organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtrát se zahustí a zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu za použití soustavy ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 1/9 obj. Ve formě sirupu se takto připraví 4,8 g (70 %) sloučeniny 154. [a]_D 40°, (c - 1,3, chloroform).

Analýza vypočteno: 57,72 % C, 9,15 % H nalezeno: 57,77 % C 9,23 % H

Příprava 137

1,2,3,6-Tetra-0-acetyl-3-G-methyl-5-C-vinyl-(3-D-glukopyranosa (156)

Ve vodě (50 ml) se rozpustí 3,5 g (9,4 mmol) sloučeniny 154 a po, přidání 1 g pryskyřice IR—120 se vše zahřívá 6 hodin na 80 °C. Pryskyřice se odfiltruje a filtrát se zahustí; produkt 155 se acetyluje za použití 12 ml anhydridu kyseliny octové a 13 ml pyridinu.

Nadbytek anhydridu kyseliny octové se rozruší přidáním methanolu, rozpouštědla se oddestilují, zbytek se extrahuje do směsi vody a dichlormethanu, oddělená organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtrát se zahustí a po přečištění na koloně oxidu křemičitého chromatografováním v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan, 3/2 obj. se získá ve výtěžku 2,7 g (75 %) tetraacetylderivát 156 ve formě pevné látky, t.t. 50 °C.

[ot]_D -84°, (c = 1,6, chloroform)

1Λ7 cl ουιυυ? do

Analýza vypočteno: 52,47 % C, 6,19 % H nalezeno: 52,51 % C, 6,19 % H

CI-MS: 406 (Μ+ΝΗ»), S89 (M + 1).

Příprava 138 ío Methyl-2,3,6-tri-O-ben2yl-4-O-(2,4,6-tri-O-acetyl-3-O-methyl-5-C-vinyl-p-D-glukopyranosyl)-a-D-glukopyranosid (158)

V 50 ml bezvodého dichlormethanu se rozpustí 1,6 g (4,1 mmol) sloučeniny 156 a 2,1 g (4,5 mmol) sloučenin 157, viz GareggP. J. a Hultberg H., Carbohydr. Res. 93, CIO (1981). Po přidání 4,0 g molekulárního síta se reakční směs míchá hodinu za teploty místnosti, potom se po vychlazení na -78 °C přidá 0,95 ml (5,2 mmol) TMSOTf

Teplota reakční směsi se nechá vystoupit pomalu na teplotu místnosti a za 2 hodiny se reakční směs neutralizuje triethylamínem, filtruje přes celit, filtrát se promyje vodou, organická fáze se potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu se získá zbytek. Ten chromatografickým čistěním na oxidu křemičitém v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan, 4/1, obj. poskytne 2,77 g (85 %) sloučeniny 158 v pevné formě, t.t. 47 °C. [a]_D -36°, (c ~ 0,6, chloroform).

Příprava 139

Methyl-2,3,6-tri-O-benzy 1-4-0-(4,6-O-isopropyliden-3-O-methyl-5-C-vinyl-P-D-glukopyranosylj-a-D-glukopyranosid (1601.

V 40 ml methanolu se rozpustí 2,7 g (3,4 mmol) sloučeniny 158. Za teploty 0 °C se přidá katalytické množství sodíku a vše se potom míchá za teploty místnosti 3 hodiny. Po oddestilování rozpouštědla se zbytek 159 rozpustí v 40 ml bezvodého acetonu, přidá se v množství 2 ml 2,2-dimethoxypropan a katalytické množství kyseliny p-toluensulfonové. Reakční směs se míchá za pokojové teploty přes noc, rozpouštědlo se oddestiluje, zbytek se rozpustí v chloro35 formu a roztok se promyje vodou. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým, zahustí se a zbytek se čistí chromatografováním na koloně oxidu křemičitého v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan, 1/1, obj. a získá se tak 1,7 g (700) 4',6 -isopropylídenového derivátu, pevná látka, t.t. 55 °C. [afo +13°, (c = 0,8, chloroform).

Analýza vypočteno: 67,97 % C, 7,13 % H nalezeno: 67,87 % C, 7,16 % H

CI-MS: 707 (M+l), 724 (Μ + NH4).

Příprava 140

Methyl-2,3,6-tri-O-benzy 1-4-0-(4,6-0-isopropyliden-3-0-methyl-5-C-vinyl-(3-D-gluko50 pyranosyl)-a-D-glukopyranosid (162)

V prostředí 10 ml bezvodého dichlormethanu se protřepává 30 minut za chlazení na -78 °C směs 0,35 ml (4,0 mmol) dichloridu kyseliny oxalové a 0,57 ml (8,0 mmol) bezvodého dimethylsulfoxidu. Přidá se 1,4 g (2,0 mmol) sloučeniny 160, rozpuštěné v 10 ml bezvodého dichlor-103CZ 301009 B6 methanu a vše se míchá dalších 45 minut. Reakční směs se neutralizuje přidáním 1,7 ml (12,00 mmol) bezvodého triethylaminu, zředí se dichlormethanem, roztok se promyje vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a filtrát se zahustí. Zbytek, látka 161 se použije přímo pro další reakci bez čištění. Keton 161 se rozpustí v 15 ml bezvodého tetrahydrofuranu, přidá se

1 N roztok superhydridu v tetrahydrofuranu (4 ml, 4,0 mmol) za chlazení na -78 °C, potom se reakční směs míchá hodinu za teploty místnosti a zředí se přidáním 2 ml 5% roztoku hydroxidu sodného a 1 ml peroxidu vodíku. Po oddestilování rozpouštědel se zbytek rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a filtrát se zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním za použití soustavy ethylester kyseliny octové i o a cyklohexan, 2/1, obj. Takto se připraví 1,0 g (70 %) sloučeniny 162.

[a]_D -11°, (c = 0,5, chloroform).

CI-MS: 724 (M+18), 707 (M+l).

Příprava 141

Me1hyl-2,3,6-tri-O-benzyl-4-0-(2-0-acetyl-3=0-methyl-5-C-vinyl-(3-D-mannopyrano$yl)-a-D-glukopyranosid (164)

V 3 ml pyridinu se rozpustí 940 mg (1,3 mmol) sloučeniny 162, přidá se 0,3 ml anhydridu kyseliny octové a reakční směs se míchá za normální teploty 3 hodiny. Nadbytek pyridinu i anhydridu kyseliny octové se oddestiluje, zbytek, látka 163 se přímo použije při odstraňování isopropylidenové skupiny za použití 5 ml 80% kyseliny octové, 2 hodiny, 60 °C. Nadbytek kyseliny octové se vydestiluje, a zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 4/1 obj. Získá se tak 660 mg (70 %) diolu

164 ve formě pevné látky, t.t 53 °C.

[a]_D -10° (c = 0,8, chloroform).

CI-MS 709 (M+l), 726 (m+18)

Příprava 142

Methyl-2,3,6-tri-0-benzyl-4-0-(2-0-acetyl-3-0-methyl-5-0-tosyl-5=C-vinyl-p-I>mannopyranosyl)-a-D-glukopyranosa (165)

V 3 ml pyridinu se rozpustí 600 mg (0,9 mmol) látky 164 a přidá se 240 mg (1,2 mmol) p-toluensulfonylchíoridu; reakční směs se míchá za teploty místnosti 3 hodiny, rozpouštědlo se vydestiluje, zbytek se zředí chloroformem, a roztok po promytí vodou se vysuší bezvodým síranem hořeěnatým. Zbytek po zahuštění filtrátu se čistí chromatografováním na koloně silikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 1/1, obj. Získá se tak tosyl-derivát

165 ve výtěžku 297 mg (80 %) ve formě sirupu.

[a]_D -26°, (C = 0,8, chloroform).

Příprava 143

Methyl-2,3,6-tri-O-benzyM-{2,6-anhydro-3-O-methyI-54>vinyl-p-D-mannopyranosyl)50 a-D-glukopyranosid (166).

Ve 3 ml ethanolu se rozpustí 550 mg (0,8 mmol) sloučeniny 165, přidá se 5 ml 0,1 N ethanolického roztoku hydroxidu sodného, reakční směs se vyhřívá 3 hodiny na 70 °C, potom se neutralizuje na pryskyřici IR-120 ve vodíkovém cyklu a filtruje se celitem. Zbytek po zahuštění

ΓιΛ

CZ JU1UU7 DO se Čistí chromatografováním na koloně silikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan 1/1 obj. a získá se tak 292 mg (70 %) sloučeniny 166 ve formě sirupu. [a]_D + 13° (c = 0,5, chloroform). CI-MS: 666 (M+l8)

Příprava 144

Methyl-2,3,6-tri-O-benzyl-+Kbenzyl-3-O-methyl-2-O-5-C-methyliden-a-L“idopyrarunosyl)-a-D-glukopyranosid (167) io Ve 20 ml dichlormethanu se rozpustí 260 mg (0,4 mmol) sloučeniny 166, roztok se míchá za chlazení na -78 °C a potom se 30 sekund roztok probublává ozonem, barva roztoku se změní na bledě žlutou. Do roztoku se přidá dimethylsulfid, potom se reakční směs promyje vodou, organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, zahustí a přímo bez jakéhokoli čistění použije v další reakci. Surový aldehyd se rozpustí v 16 ml terc.-butylalkoholu, přidá se 5 ml 2-methyl15 2-butenu a 16 ml vody. Do směsi se dále postupně přidává 700 mg dihydrogenfosforečnanu sodného a 700 ml chloritanu sodného. Suspenze se energicky míchá za obvyklé teploty po dobu noci, zředí se vodou a produkt se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Organický roztok po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se použije přímo v další reakci. Surová kyselina se rozpustí v 25 ml dimethylformamidu, přidá se 0,7 g (2,0 mmol) tetrabutylamoniumjodidu, 0,25 g (2,5 mmol) hydrogenuhličitanu draselného a 0,250 ml (2,1 mmol) benzylbromidu. Reakční směs se míchá za pokojové teploty 5 hodin, extrahuje se vodou a etherem, roztok v etheru se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtrát se zahustí a zbytek se chromatografuje na koloně sílikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové a cyklohexan 271 obj. Získá se tím 236 mg (80 %) derivátu 167 ve formě sirupu, CI-MS: 774 (M+l 8)

-105CZ 301009 B6

Schéma 34 Příprava synthonu použitelného pro syntéau pentgsacharidu Pe jehož konfigurace kyseliny L—iduronové je uaaVřetia (IXX«1«)

r“t

*Φ

O

-P o

o «

o •

Λ

G

CO tí d

Ό •H fc

.tí

O xd

Λ tí

-p

Φ

(O w

O ř>

Ό

Φ va tn i nr

CL OU1UU? BO g

tEpítí?<M O O tí <Λ

Schéma 34, 1.pokračování

Příprava a prvé přeměny disacharidu

r.γθ% va dvou etapách

-107 o

fc a

i-l w

° u

CM O Λ o rSchéma 34, 2_opokračování

3» Konstruováni bicyklického systámu

/h r~I C O Ή 0Q fQ O *rl E4 h I

Cl· ft ° J3 1§ G © CV (Λ

Φ

S

vi <o

to tO mo _

L.ZL JU1UU7 DO

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Sodná sůl methyl-0-(3-0-methyl-2,4,6-tri-0-suIfo-a-D-glukopyranosyl)-(l ->4)-(3-Omethy 1-2,6-di-O-sulfo-P-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-[O-(3-O-methy 1-2,6-di-O-sulfo-a-DglukopyranosylH 1 -+4)-0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl)41 —+4)]2-Oio (2,3-di-O-methyl-6-O-sulfo-a-D“glukopyranurosyl)-(l—⁾’4)-O-(2,3’di-O-methyl-[3-DglukopyranurosylM 1 -+4)-(2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-2,3-di-O-methylα-L-idopyranurosylHl^-*4)-l ,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu (168)

Ze sloučeniny 31 zpracováním dle způsobu 5 se získá látka 168 (80 % ve 3 etapách), [ct]_D +41° (c = 0,8, voda).

ESIMS, modul záporný: monoisotopická hmotnost = 7133,28, chemická hmotnost = 7138,90, experimentální hmotnost = 7137,26 ± 0,0 u.m.s.

^]H NMR (D₂O) 8 hlavních anomemích protonů: 5,71, 5,48, 5,46, 5,44, 5,17, 5,08, 4,81, 4,78, 4,67 ppm.

Totožným postupem lze připravit sloučeniny 169 a 170.

109CZ 301009 B6

Tabulka I

0 1-^1	+ 39	CO (*? +
**	m	to
	3	SI
tí
TJ	tí	tí
	3	tí
d	Ή	•H
	tí	tí
M	o	Φ
>J<	>o	>o
01	tí	tí
	o	O
0	H	r4
H	ta	ca
m
M	«	a
>O	cv

_ i in _

CL JU1VU7 DO

Příklad 4

Sodná sůl methyl-0-(2,3-di-0-methyl-2,4-di-0-sulf(>-a-D-glukopyranosy 1)-(1-^4)-(05 (2,3-di-O-methyl-á-O-sulfo-ct-D-glukopyranosy 1)-(1-^4)]! 5-0-(2,3-di-O-methyl-[3-DglukopyranurosylH 1—>4 )-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( l-+4)-O-(2,3-di-Omethy Ι-α-L-idopyranurosy IH 1 —>4)—2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu (171)

Podle způsobu 5 se zpracuje 55 mg (10,5 mmol) sloučeniny 51 a po lyofilizování se připraví io 50 mg (77 % ve 3 etapách) produktu typu esteru sírové kyseliny, [a]_D +107° (c = 0,52, voda).

ESIMS, modul kladný: hmotnost monoisotopická = 6194,16, hmotnost chemická = 6198,83, hmotnost experimentální = 6195,33 ± 1,79 ^]H NMR (D₂O) δ hlavních anomemích protonů: 5,71,5,67,5,48,5,43, 5,17, 5,10,4,68 ppm. Podobným postupem je možno připravit sloučeniny 172 a 173

-111 CZ JU1UU9 B6 ε

o ω 7 ®

□ Ξ	σι V* Γ- +	a τ- +
	m	CD
ϋ •α α Η	sl
Μ Μ	S	β ϋ
Jfc	«Η	«Η
Ρ*	ct	ϋ
	Φ	φ
Ό	X?	>ο
Η	0
«3	Ο	0
Μ	Η	Η
Χ>	η	η
	*	*
	ιη

Μ rt ρ

11? VZj ^U1UV7 UU

Příklad 7

Sodná sul methyl-O-(3-O-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-(l—>4)043-05 methyl-2,6-dí sulfo-P-D-glukopyranosy1)41-4>O434)-methyl-2,6-di-O-$ulfo-a-DglukopyranosylH 1 —*4)-043-0-methyl-2,6-dí-0-sulfo-p-D-glukopyranosy 1)41 -+4)-[0(2,3,6-tri-O-methy l-a-D-glukopyranurosyl)41 —4)-042,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosylH 1 “*⁴)]2-*042,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyI)41 -4)042,3diO-methyl-p-D-glukopyranurosyl)41 -+4)042,3,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosy 1>io (1-4)42,3-di-O-methy 1-a-L-idopyranurosy 1)41 -4)-2,3,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosidu (174).

Zpracováním sloučeniny 75 podle způsobu 5 se získá ve výtěžku 84 % (ve třech etapách) sloučenina 174, [a]_D + 62° (c = 0,46, voda).

ESIMS, modul kladný: monoisotopická hmotnost = 4966,39, chemická hmotnost = 4970,04, experimentální hmotnost = 4969,63 ± 0,78 u.m.a.

’H NMR (D₂0) δ hlavních anomemích protonů: 5,69, 5,63, 5,46, 5,44, 5,41, 5,15, 5,06, 4,79, 20 3,66,4,62,4,41 ppm.

Postupem podle příkladu 7 a za použití vhodných meziproduktů lze připravit látky z příkladů 8 až 12 popsané v další tabulce III.

-113CZ 301009 B6 ό^<\Κ ω NO

Tabulka Σ1Χ

_ 1 14 _

CZ JU1UU7 DO

Příklad 13

Methy1-042,3,4,6-tetra-O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -^4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D5 glukopyranosy 1)41 -4)-042,3, ó-tri-O-sulfo-p-D-glukopyranosylH 1 -+4)-0-(2,3-di-Omethyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)4 1 -4)-042,3,6-tri-O-methyl-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -+4)-(0-(2,3,6-tri-O-methy 1-a-D-glukopyranosy 1)4 1 -4)-0-(2,3,6-tri-O-methy l-|3D-glukopyranosyl)41 —4)]₃-O-2,3-di-O-methy 1-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —4)(2,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)41 —4)-O46-O-methyl-2,3-di-O-sulfo-a-Di o glukopyranosy 1)41 —4)-O42,3-di-O-methy 1-a-L-idopyranurosy 1)41 -4)-O-6-methy 1-2,3di-O-sulfo-a-D-glukopyranosid (180).

V 0,87 ml dimethylformamidu se rozpustí 26 mg (0,0084 mmol) hexadekasacharidu 150, dokonale zbaveného chránících skupin, a pod dusíkem se přidává 125 mg (0,67 mmol, 80 ekv.) komplexu oxidu sírového s triethylaminem. Reakční směs se míchá 16 hodin za teploty 50 °C, po ochlazení na 0 °C se přidá 227 mg (2,6 mmol) vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, směs se zahustí na malý objem a ten se nanese na kolonu Sephadexu G-25 za eluování směsí vody a acetonitrilu 9/1, obj. Vhodné frakce se oddělí, zahustí na malý objem, ten se nanese na kolonu Dowex-u XW4 Na⁺ charakteru výměníku iontů za použití malého objemu vody a eluát se lyofílizuje, získá se tím 37 mg sloučeniny 151 ve formě bílého prášku, [a]_D ²⁰ = +67,6° (c = 1, voda). MS ESI: molekulární hmotnost 4370,6 (forma PT) CugHraOinSie (vypočtená mol. hmotnost = 4370,14).

NMR, anomemí protony (ppm), poloha

l.jednotka: 5,17, 2. jednotka 5,03, 3. jednotka 5,41, 4, jednotka 4,42, 5. jednotka 5,49, 6. jednotka 4,66, 7., 9. a 11. jednotka 5,67, 8., 10. a 12. jednotka: 4,46, 13. jednotka: 5,61, 14. jednotka: 4,94,15. jednotka 5,59,16. jednotka 5,69.

Claims (16)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Syntetický polysacharid, obsahující oblast vázající se na antithrombín III, tvořenou zřetězením pěti monosacharidů, přičemž zřetězení obsahuje celkem dvě karboxylové skupiny a alespoň čtyři sulfoskupiny, a oblast je přímo vázána na své neredukující koncovce oblastí vazby na thrombin, obsahující zřetězení 10 až 25 monosacharidových jednotek, volených ze souboru io zahrnujícího hexosy, pentosy a desoxycukry, jejichž hydroxylové skupiny jsou na sobě nezávisle etherifikovány alkylovými skupinami s 1 až 6 atomy uhlíku nebojsou esterifíkovány za vytváření sulfoskupin, a jeho soli, zvláště farmaceuticky přijatelné soli.
2. 2. Syntetický polysacharid podle nároku 1 obecného vzorce I

   Pe (I) kde znamená vlnovka vazbu nad rovinou nebo pod rovinou pyranosového cyklu přičemž vzorec znamená polysacharid Po obsahující n stejných nebo různých monosacharidových jednotek vázaných svým anomemím atomem uhlíku na Pe a je schematickým znázorněním monosacharidové jednotky pyranosové struktury, volené ze souboru zahrnujícího hexosy, pentosy a desoxycukry, přičemž taková jednotka je vázaná svým

   25 anomemím atomem uhlíku na jinou monosacharidovou jednotku a hydroxylové skupiny této jednotky jsou substituovány skupinami X, přičemž znamená X skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku nebo sulfoskupinu,

   30 n číslo 10 až 25 a

   -117CZ 301009 B6

   5 R skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku,

   Ri skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku, nebo sulfoskupinu,

   Ri_a skupinu alkylovou R_h nebo s atomem kyslíku, na kterém je uvedená skupina vázána, a s ato10 mem uhlíku, na kterém je karboxylová skupina na témže cyklu, skupinu C-CH₂-0

   W atom kyslíku nebo methylenovou skupinu, a jeho soli, zvláště farmaceuticky přijatelné soli.
3. 3. Syntetický polysacharid podle nároku 2 ve formě soli s alkalickým kovem, zvláště se sodíkem nebo s draslíkem.
4. 4. Syntetický polysacharid podle nároku 2 obecného vzorce IA znamená zvláštní skupinu polysacharidů vzorce Po, vázaných svým anomemím atomem uhlíku na Pe, jak je uvedeno u obecného vzorce I, kde . 1 IR _

   Ví. fe^UAW7 UU

   OX \r^ /

   Cr (0X)_h má stejný význam jako uvedeno pro obecný vzorec I, OX má stejný význam jako uvedeno pro obecný vzorec I, a pro tentýž monosacharid je stejný nebo různý, monosacharid v závorce [ ]_m tvoří disacharid opakující se m-krát, monosacharid v závorce [ ]_t tvoří disacharid opakující se t-krát, přičemž znamená m číslo 1 až 8, t Číslo 0 až 5, p číslo 0 až 1, za podmínky, že 5<m + t<12, ajeho soli, zvláště farmaceuticky přijatelné soli.
5. 5, Syntetický polysacharid podle nároku 2 obecného vzorce I1A Pa fIX.A>

   skupinu polysacharidů Po vázaných svým anomemím atomem uhlíku na Pe, jako u obecného vzorce I,

   OX má stejný nebo různý význam jako u obecného vzorce I, monosacharid v []_m' se opakuje m-krát, monosacharid v []/ se opakuje ť-krát, monosacharid []/ se opakuje p-krát, přičemž

   20 znamená m' číslo 1 až 5, ť číslo 0 až 24 a p' Číslo 0 až 24 za podmínky že 10 < m' + ť + p' á 25, ajeho soli, zvláště farmaceuticky přijatelné soli.

   -119CZ 301009 B6
6. 6. Syntetický polysacharid podle nároku 3 ve formě soli, přičemž anion má vzorec LI (1.1) kde t znamená 5, 6 nebo 7, a kationem je jednovazný kation farmaceuticky přijatelný a jeho odpovídající soli kyselin.
7. 7. Syntetický polysacharid podle nároku 3 ve formě soli, přičemž anion má vzorec 1.2

   CL JU1UU7 DU kde znamená Me methylovou skupinu, t znamená 5, 6 nebo 7, a kationem je jednovazný kation farmaceuticky přijatelný a jeho odpovídající soli kyselin.

   -121CZ 301009 B6
8. 8. Syntetický polysacharid podle nároku 3 ve formě soli, přičemž anion má vzorec 1.3 v

   tft

   R

   P

   - 122 CL JV)1UV7 UU kde znamená Me methylovou skupinu, m znamená 1, 2 nebo 3 a t znamená 2, 3, 4 nebo 5, a kationtem je jednovazný kation farmaceuticky přijatelný a jeho odpovídající soli kyselin.
9. 9. Syntetický polysacharid podle nároku 1 volený ze souboru zahrnujícího sodnou sůl methy l-O-(3-O_methy 1-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 -4)43434)-methyt2.6- di-0-sulfo-p-D-glukopyranosy l)-( 1 -4)4O434)-methyl~2,6-di4)-sulfo~a-D-glukoi o pyranosy 1)41 ->4)-043-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl)41 -4)]₄4)42,3dÍ-O-methyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —>4)-O42,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)41 —*4)4)42,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —4)4)42,3-di-Omethyl-a-L-idopyranurosy 1)41 —4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu,

   15 sodnou sůl methyl-043-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosy1)41-4)-043-0-methy 12.6- di-O-sulfo-|3“D-glukopyranosyl)41 -*4)-[O43-0-methy 1-2,6-di-O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —4)_043-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-[3-D-glukopyranosy 1)41 —4)]₅-O42,320 di-O-methy l-6-0-sulfo-a-0-glukopyranosy1)41—4)-042,3-di-O-methyI-p-D-glukopyranurosy 1)41 -^4)4)42,3,6-tri-0-sulf<wx-D-glukopyranosyl)41-4)-042,3-di-Omethyl-a-L-idopyranurosyl)41 -4)-2,3,6-tri4)-sulfo-a4>-glukopyranosidu, sodnou sůl methy1-043-0-methy 1-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41-4)-043-0-methyl2.6- di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl)41 —4)-[O434)-methyl-2,6-di4)-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —4}-O43-O-methy 1-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosy 1)41 -4)]₆-O42,3di-O-methy Ι-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosy1)41-4)-042,3-di-O-methyl-|3- D-gluko30 pyranurosylH 1 -4)4)42,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41-+4)-042,3-di-Omethyl-a-L-idopyranurosy 1)41 —4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl

   35 methy1-042,3-di-O-methy 1-4,6-di-O-sulfo-a-D-gIukopyranosy 1)41 -+4)-(-042,3-di-Omethy 1-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —*4)] j₁-042,3-di-0-methyl-p-D-glukopyranurosylH l -4)-042,3,6-tri-O-sulfc-a-D-glukopyranosyl)41 -4)4H2,3-di-0methyl-a-L-idopyranurosyl)41 -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu,

   40 sodnou sůl methyl4>-(2,3-di-0-methyM,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 -4>-[-O42,3-di4)methy 1-643-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 -4)] _B4H2,3-di-O-methyl-p-D-glukopyranurosylH 1-4)-042,3,6-tri4>-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 -4)4)42,3-di-O45 methyl-a-L-idopyranurosyl)41 —4)-2,3,6-tri-0-sulfo-a-D--glukopyranosidu, sodnou sůl methyl-O42,3-di-O-methy 1-4,6-di-O-sulfo-ct-D-glukopyranosy 1)41 -4)-[-O42,3-di-O50 methyl-64)-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41-+4)]i54>-(2,3-di-0-methyl-3-D-glukopyranurosylH 1 -4)4)42,3,6-tri-O-suIfo-a-D-glukopyranosy1)41-4)-042,3-di4>methyl-a-L-idopyranurosyl)41 -4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu,

   - 123CZ 301009 B6 sodnou sůl methy l-O43-O-methyl-2,4,6-tri^O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)4 1 —>4)-O-(3^O-methy 12.6- di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl)4 1 —>4)-[O43-O-methy 1-2,6-di-O-sulfo-ct-D-gluko5 pyranosyl)4 1 —*4)-043-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-P-D-glukopyranosyl)4 1 —*4)]j-[O(2,3,6-tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl)41 -+4)-0-(2,3, ó-tri-0-methyl-(3-D-glukopyranurosy 1)41 —*4)] 2-0-(2,3-di-O-methy l-ó-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -^4)-042,3di-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)41—*4}-0-{2₎3,6-tri-0-sulfo-a-I>-glukopyranosyl)(1 —*4)-042,3-di-0-methyl-a-L-idopyranurosyl>4 1 —*4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-gluko10 pyranosidu, sodnou sůl methy l-0-(3-O-methy 1-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —*4)-O43-O-methyli s 2,6-di-0-$ulfo-P-D-glukopyranosyl)-( 1 ->4)-[O43-O-methyl-2,6_di-O-$ulfo-a-D-glukopyranosylH 1 -+4)-0-(3-0-methyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)] ₂—[O— (2,3,6-tri-O-methy l-a-D-glukopyranosy 1)41 ->4)-O42,3,6-tri-O-methyl-p-D-glukopyranurosyl)41 —>4)]₃-042,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 -*4>O42,3d i-O-methyl-p-D-glukopyranurosy 1)41^4)-042,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)20 (1 -*4 H>42,3-di^O-methyl-a-L-idopyranurosy 1)41—4)-2,3,6-triO-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl

   25 methyl-043-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —*4)-O43-O-methy 12.6- di-0-sulfo~P-D-glukopyranosyl)41 —>4)-O43-O-methyl-2,6-di-O-sulfb-a-D-glukopyranosyl)41 -*4)-043-0-methyl-2,6-di-0-suIfo-P-D-glukopyranosyl)41 ^4)-(042,3,6tri-0-methyl-a-D-glukopyranosyl}41~⁺4)-042_J3,6“tri-0-methyl-p-D-glukopyranurosyl)(1 —>4)]₄-042,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 ^4)-042,3-di-O30 methyl-p-D-glukopyranurosyl)41 -^4)-042,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —*4)042,3-di-0-methyl-a-L-idopyranurosyl)41^—*4)-2,3,6-tri-O-sulfo-cc-D-glukopyranosidu, sodnou sůl

   35 methyl-O43-0-methyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 ->4)-O43-0-methyl2.6- di-0-sulfo-p-D-glukopyranosy1)41—*4)-043-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosylH 1 ->4)-043^0-methyl-2,6-di-0-sulfb-p-D-glukopyranosy1)41—*4)4042,3,6tri-O-methy l-a-D-glukopyranosy 1)41 ->4)-O42,3,6-tri-O-methy Ι-β-D-glukopyranurosy 1)(1 —*4)]yO42,3-di-O-methy l-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosy 1)41 —*4)-O42,3-di-O40 methy l-(3_D-glukopyraniirosyl)41 ->4)-O42,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)41 —*4)O42,3-di-O-methyl-a-L-idopyranurosyl)41 —*4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu, sodnou sůl

   45 methy l-043-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyI)41 —*4)-O43-0-methyl2.6- di-0-suIfo-P-D-glukopyranosyl)41—*-4)-(042,3,6-tri-O-methy l-a-D-glukopyranosyl)(1 ->4)-O42,3,6-tri-O-methyl-p-D“glukopyranosyl)41 —>4)]₄-042,3-di-O-methyl-ó-0sulfo-a-D-glukopyranosyl)41-*4)-042,3-di“0-methyl-p-D-glukopyranurosy 1)41 —>4)-O(2,3-di-0-methyl-p-D-glukopyranosyl)41 -*4)-042,3,6-tri-0™-sulfo-a-D-gluko50 pyranurosyl)41 —*4)42,3-di-O-methy l-a-L-idopyranurosy 1)41 —*4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-Dglukopyranosidu, a sodnou sůl

   1 Λ

   CL JU1W? BO methyl-O-(3-Q-methyl-2,4,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4)-O-(3-O-tnethy 1~

   2,6-di-0-suIfo-p-D-glukopyranosy l)-( 1 -+4)-(0-(2,3,6-tri-O-methy 1-a-D-glukopyranosy 1)(1 ->4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-3-D-glukopyranosyl)-( 1-M)] 5-0^2,3-di-O-methy 1-6-0sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 —>4)-O-(2,3-di-0-rnethy Ι-β-D-glukopyranurosy l)-( 1 -+4}~O5 (2,3,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl)-( 1 -+4>O-(2,3-di-O-methyl-a-L-idopyranurosyl)(1 -+4)-2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosidu.
10. 10. Způsob přípravy syntetického polysacharidů obecného vzorce I, vyznačující se tím, že se v prvním stupni připravuje dokonale chráněný prekursor polysacharidů obecného io vzorce I, s obsahem chráněného prekursoru prodloužené oblasti Pe na své neredukující koncovce, chráněným prekursorem sulfátového polysacharidů Po, a ve druhém stupni se zavedou a/nebo odkryjí negativně nabité skupiny.
11. 11. Syntetický polysacharid podle nároku 1 obecného vzorce Π.1

    O /

    i n (Π.1) kde znamená I) a T_n stejné nebo různé dočasné, polopermanentní nebo permanentní skupiny a Z skupinu chránící hydroxyíovou skupinu.
12. 12. Syntetický polysacharid podle nároku 1 obecného vzorce 1Π.1 kde znamená Ti a T_n stejné nebo různé dočasné, polopermanentní nebo permanentní skupiny a Z skupinu chránící hydroxyíovou skupinu.
13. 13. Farmaceutický prostředek s antikoagulačními a antithrombotickými účinky obsahující jako 25 účinnou látku syntetický polysacharid podle nároků 1 až 9 ve formě soli s farmaceuticky přijatelnou zásadou nebo ve formě kyseliny spolu nebo ve směsi s inertním farmaceuticky přijatelným netoxickým nosičem.
14. 14. Farmaceutický prostředek podle nároku 13 obsahující účinnou látku s alespoň jedním 30 farmaceuticky vhodným nosičem.
15. 15. Farmaceutický prostředek podle nároku 13, jehož jednotlivá dávka obsahuje 0,1 až 100 mg, zvláště 0,5 až 50 mg účinné látky.

    - 125CZ 301009 B6
16. 16. Použití syntetického polysacharidů podle nároků 1 až 9 pro přípravu farmaceutického prostředku pro léčení nemocí způsobených dysfunkcí koagulace krve.