NO319682B1 - Syntetiske polysakkarider og salt derav, fremgangsmate for fremstilling derav og farmasoytiske blandinger inneholdende samme, samt mellomprodukter for fremstilling, sammensetninger inneholdende blandingen og anvendelse av polysakkaridet eller saltet. - Google Patents

Syntetiske polysakkarider og salt derav, fremgangsmate for fremstilling derav og farmasoytiske blandinger inneholdende samme, samt mellomprodukter for fremstilling, sammensetninger inneholdende blandingen og anvendelse av polysakkaridet eller saltet. Download PDF

Info

Publication number
NO319682B1
NO319682B1 NO19990215A NO990215A NO319682B1 NO 319682 B1 NO319682 B1 NO 319682B1 NO 19990215 A NO19990215 A NO 19990215A NO 990215 A NO990215 A NO 990215A NO 319682 B1 NO319682 B1 NO 319682B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
methyl
glucopyranosyl
sulfo
tri
mmol
Prior art date
Application number
NO19990215A
Other languages
English (en)
Other versions
NO990215D0 (no
NO990215L (no
Inventor
Maurice Petitou
Jean-Marc Herbert
Philippe Duchaussoy
Constant Van Boeckel
Pierre-Alexandre Driguez
Peter Grootenhuis
Cornelia Dreef-Tromp
Johannes Basten
Original Assignee
Sanofi Aventis
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Aventis filed Critical Sanofi Aventis
Publication of NO990215D0 publication Critical patent/NO990215D0/no
Publication of NO990215L publication Critical patent/NO990215L/no
Publication of NO319682B1 publication Critical patent/NO319682B1/no

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse omhandler syntetiske polysakkarider og salt derav, fremgangsmåte for fremstilling derav og farmasøytiske blandinger inneholdende samme, samt mellomprodukter for fremstilling, sammensetninger inneholdende blandingen og anvendelse av polysakkaridet eller saltet
Den foreliggende oppfinnelsen relateres til nye syntetiske polysakkarider som har de antikoagulante og antitrombotiske farmakologiske aktivitetene til heparin.
Heparin tilhører familien glykosaminoglykaner (GAG), som er heterogene,, naturlige polysakkarider med sulfat.
Heparinfremstillinger er blandinger av kjeder inneholdende flere monosakkaridenheter som varierer fra 10 til 100 og mer. I tillegg til denne størrelses-heterogeniteten er det en strukturell heterogenitet, som vedrører naturen til de essensielle monosakkaridene og som også vedrører substituentene som de bærer (L. Rodén i: The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosaminogtycans, redigert av Lennarz W.J., Plenum Press, New York og London, 267-371,1980).
Hver familie med naturlige GAG har generelt et bredt område med farmakologiske aktiviteter. Alle er kombinert i fremstillingene som kan bli fremskaffet fra naturlige produkter. Derfor har for eksempel heparinet og heparansulfatene en antitrombotisk aktivitet som er assosiert med den simultane virkningen av flere koagulasjonsfaktorer.
Heparin katalyserer, spesielt via antftrombin III (AT III), inhiberingen av to enzymer som er involvert i blodkoagulasjonskaskaden, nemlig faktor Xa og faktor Ila (eller trombin). Fremstillinger av heparin med lav molekylvekt (LMWH) inneholder kjeder som er dannet av 4 til 30 monosakkarider og har egenskapen til å virke mer selektivt på faktor Xa enn på trombin.
Enkelte syntetiske oligosakkarider, spesielt de som er beskrevet i EP 84.999, har egenskapen til å selektivt inhibere, via antitrombin III, faktor Xa uten å ha noen aktivitet på trombin.
Det er kjent at inhiberingen av faktor Xa krever binding av heparinet til AT III
via antitrombin-bindingsregionen (ABR), og at inhiberingen av faktor Ila (trombin) krever binding til AT (III), via ABR, så vel som til trombin via en dårligere definert bindingsregion (TBR).
De syntetiske oligosakkaridene som korresponderer til ABR-regionen i
heparin er kjent og har en antitrombotisk aktivitet i venøs trombose. Disse
forbindelsene er beskrevet i EP 529 715 og EP 621 282 og i kanadisk patent 2 040 905.
Effektiviteten av disse oligosakkaridene i forebyggingen av arteriell trombose er uansett vanskeliggjort av deres manglende evne til å inhibere trombin.
En syntese av glykoaminoglykaner av heparintype som kan inhibere trombin via AT (III) aktivatoren fremskaffer store problemer og den har faktisk aldri blitt fullendt.
Med det formålet å gjenoppdage aktiviteten til trombin-inhibitor og faktor Xa-inhibitorprodukter har det i EP-A-0 649 854 blitt foreslått å koble to små oligosakkarider (en ABR og en TBR) til en forbindelse ("spacer") som ikke er involvert i den biologiske aktiviteten.
Det har nå blitt funnet at nye polysakkairdderivater relativt enkelt kan bli syntetisert og er biologisk aktive. Spesielt så er de antikoagulerende og antitrombotiske. Videre er det mulig med hensyn på synteseproduksjonen av disse polysakkaridene å selektivt modifisere deres struktur og spesielt fjerne uønskede sulfatsubstituenter som er involvert i interaksjonen med enkelte proteiner. Derfor kan polysakkarider som er sterke antitrombotiske og antikoagulerende agenser bli fremskaffet og som videre kan unnslippe in vivo effekten av proteiner slike som platefaktor 4 (PF4), som nøytraliserer effekten av heparin spesielt på trombin.
Det har derfor overraskende blitt funnet at sulfatiserte og alkylerte polysakkarider kan være sterke antitrombotiske og antikoagulerende agenser avhengig av organiseringen av alkyl- og sulfatgruppene som er båret av karbohydratskjelettet.
Mer generelt har det blitt vist at ved å fremstille polysakkaridsekvenser er det med nøyaktighet mulig å modifisere GAG-typeaktivitetene for å oppnå veldig aktive produkter som har egenskapene til heparin.
Derfor, i henhold til ett av dens aspekter, relateres den foreliggende oppfinnelsen til et nytt syntetisk polysakkarid innbefattende en antitrombin III-bindingsregion som består av en sekvens på fem monosakkarider som totalt har to karboksylsyrefunksjoner og minst fire sulfatgrupper, der denne regionen er bundet direkte på dens ikke-reduserende ende med en trombinbindende region som inneholder en sekvens på 10 til 25 monosakkaridenheter som er valgt fra heksoser, pentoser eller deoksysukker der alle hydroksylgruppene uavhengig er eterifisert med en (CrC6) alkylgruppe eller esterifisert i form av sulfatgrupper, så vel som dets salter, spesielt dets farmasøytisk godkjente salter.
Fortrinnsvis relateres oppfinnelsen til et polysakkarid, som definert over, som er karakterisert ved at alle dets hydroksylgrupper er eterifisert med et metyl eller er esterifisert i form av en sulfogruppe og dets salter, spesielt dets farmasøytisk godkjente salter.
Produktene i den foreliggende oppfinnelsen er spesielt polysakkarider representert med den følgende formelen:
der
-den bølgede linjen betegner en binding enten under eller over planet til pyranoseringen, betegner et polysakkarid Po inneholdende n like eller ulike monosakkaridenheter, som er koblet via dets anomeriske karbon til Pe,
er en diagrampresentasjon av en monosakkaridenhet av pyranosestruktur som er valgt fra heksoser, pentoser og korresponderende deoksysukker, der denne enheten er koblet via dens anomeriske karbon til en annen monosakkaridenhet, og hydroksylgruppene til denne enheten er substituert med like eller ulike grupper -X, der X-gruppene er valgt fra (Ci-Ce) alkylgrupper og sulfogrupper,
-ner et helt tall fra 10 til 25,
- Pe representerer et pentasakkarid med strukturen:
der
- Ri representerer et (C-i-C6) alkyl eller en sulfogruppe,
- Ria representerer Ri eller består av oksygenatomet som det er bundet til og karbonatomet som har karboksylfunksjonen på den samme ringen, en gruppe
C-CHz-O,
- R representerer et (Ci-Ce) alkylgruppe,
- W representerer et oksygenatom eller en metylengruppe, eller et av deres safter, spesielt et salt som er godkjent farmasøytisk.
Det vil generelt bli notert i den foreliggende beskrivelsen at en bølget linje antyder en binding enten under eller over planet til pyranoseringen.
Monosakkaridene i Po kan være identiske med eller forskjellige fra hverandre, og interglykosid-koblingene kan være av a- eller p-typen.
Disse monosakkaridene er fordelaktig valgt fra D eller L-heksosene allose, altrose, glukose, mannose, galose, idose, galaktose og talose (i dette tilfellet h=3) eller fra D eller L-pentosene ribose, arabinose, xylose og lyksose (i dette tilfellet h=2). Andre monosakkarider slike som, foreksempel, deoksysukker kan også bli anvendt (h = 1 og/eller -CH2OX = CH3).
Når enheten W representerer et oksygenatom og R!a er definert som for R) i pentasakkaridene Pe, består disse pentasakkaridene av kjente forbindelser som spesielt er beskrevet i patenter EP 300 099, EP 529 715, EP 621 282 og EP 649 854 så vel som i litteraturen. De er fremskaffet fra syntoner som også er beskrevet i litteraturen av C. van Boeckel og M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690.
Når Ria ikke er lik Ri og/eller W representerer et karbonatom i pentasakkaridene Pe, er disse pentasakkaridene fremstilt ved å anvende nye syntoner som utgjør et ytterligere aspekt av oppfinnelsen.
Når enheten med L-iduronsyretype er byttet ut med en enhet der dens konformasjon er stengt med en bro i pentasakkaridene Pe, er disse pentasakkaridene fremstilt ved å anvende nye syntoner som utgjør et ytterligere aspekt i oppfinnelsen.
Derfor, i henhold til et annet av dens aspekter, relateres den foreliggende oppfinnelsen til nye intermediater som er egnede for fremstillingen av forbindelser (I).
Polysakkariddelen Po kan bestå av 10 til 25 alkylerte og di- eller trisulfatiserte monosakkaridenheter.
Polysakkariddelen Po kan bestå av 10 til 25 alkylerte og mono- eller disulfatiserte monosakkaridenheter.
Polysakkariddelen Po kan bestå av 10 tii 25 ladede og/eller delvis ladede og/eller fullstendig ladede alkylerte monosakkaridenheter.
De ladede eller uladede enhetene kan bli fordelt på hele kjedelengden eller de kan, i motsetning, bli gruppert i ladede eller uladede sakkaridregioner.
Koblingene kan være 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; og av a- eller p-typen.
I den foreliggende beskrivelsen har det blitt valgt å representere konformasjonene 1C4 for L-iduronsyre og <4>Ci for D-glukuronsyre, men det er godt kjent at konformasjonen til monosakkaridenhetene i løsning generelt fluktuerer. Derfor kan L-iduronsyre ha <2>S0 eller 4Ci-konformasjon.
Foretrukkede forbindelser i henhold til oppfinnelsen er de med formelen (I.A): betegner en spesiell familie med polysakkarider Po, som er koblet via deres anomeriske karbon til Pe som definert for (I),
er som definert for (I),
- OX-ene er definert som for (I) og kan for det samme polysakkaridet være identiske eller forskjellige, - monosakkaridene i [ ]m danner et disakkarid som er repetert m ganger, monosakkaridene i [ ]t danner et disakkarid som er repetert t ganger, - m varierer fra 1 til 8, t varierer fra 0 til 5 og p varierer fra 0 til 1, underforstått at 5<m + t<12,
og deres salter, spesielt deres farmasøytisk godtakbare salter.
Fordelaktige forbindelser er saltene, så vel som de korresponderende syrene, hvis anion korresponderer til formel (1.1):
der t representerer 5, 6 eller 7, og kationet er et farmasøytisk godtakbart monovalent kation.
Saltene, så vel som de korresponderende syrene, hvis anion korresponderer til formel (I.2):
dert representerer 5, 6 eller 7, og kationet er et farmasøytisk godtakbart monovalent kation er også fordelaktige.
Saltene, så vel som de korresponderende syrene, hvis anion har formelen (1.3):
der m representerer 1, 2 eller 3 og t representerer 2,3,4 eller 5, og kationet er et farmasøytisk godtakbart monovalent kation er spesielt fordelaktige.
Andre foretrukkede forbindelser i henhold til oppfinnelsen er de med formelen
(ILA):
antyder en spesifikk polysakkaridfamilie Po som er koblet via deres anomeriske karbon til Pe som definert for (I),
er som definert for (I),
- gruppene OX er definert som for (I) og kan for det samme monosakkaridet være identiske eller forskjellige, - monosakkaridet i [ ]m- er repetert rn' ganger, monosakkaridet i [ ]r er repetert f ganger, og monosakkaridet i [ ]p< er repetert p' ganger, - m' varierer fra 1 til 5, f varierer fra 0 til 24, og p' varierer fra 0 til 24, underforstått at 10*m' + p's25,
og de farmasøytisk godtakbare saltene derav.
De foretrukkede saltene i oppfinnelsen er de som er valgt fra alkalimetallkationer og enda mer foretrukket er de der kationet er Na<*> eller K<+>.
De følgende salt av polysakkaridene er spesielt foretrukket:
Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyI) - (1->4) -O- (3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-|3-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]4-0- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-o>D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) - O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, • Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-o>D-glukopyranosyl) - (1,4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]5-O- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1,4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) - O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, • Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- {3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]6-0- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-oc-D-glukopyranosyl) - (1->4) - O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-oc-D<->glukopyranosid, natriumsalt, • Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -]n-0- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-suIfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, • Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-suIfo-a-D-glukopyranosyl) - (1 ->4) - [O- (2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1 ->4) O13-O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-»4) -O- {2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1 -»4) -2,3,6-tri-O-sulfo-cc-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O- (2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-oc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -]i5-0- (2,3-di-O-metyi-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) - O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, • Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyI) - (1 -»4) -O- (3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O- (3-0-metyI-2,6-di-0-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1 -»4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1 ->4) ]2-[0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) (1-»4) ]2-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-*4) -O-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1 -»4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-oc-D-glukopyranosid, natriumsalt,
Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - {1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sutfo-p-D-glukopyranosyT) - (1-»4) ]2-[ O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- {2,3,6-tri-O-metyI-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-suifo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt,
• Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1 -»4) -O- (3-O-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -
[O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- {2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]4-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-»4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt,
• Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -
[O- (2,3,6-tri-O-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]3-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt,
• Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tir-O-metyl-p-D-gtukopyranosyl) - (1->4) k-O-2,3-di-O-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -
(2,3-di-O-metyl-cc-L-idopyranosyluronsyre) - (1 -»4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt og
• Metyl O (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]5-0-2,3-di-O-metyl-6-sulfo-ot-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1 ->4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1 -»4) -
(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-»4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt.
Den foreliggende oppfinnelsen relateres til en prosess for fremstilling av forbindelsene i formel (I) der, i det første trinnet, en fullstendig beskyttet forløper av det ønskede polysakkaridet (I), inneholdende en beskyttet forløper for Pe-regionen (denne regionen er vist i Skjema 1) som er forlenget på dens ikke-reduserende ende av en beskyttet forløper for det sulfatiserte polysakkaridet Po, blir syntetisert, og de negativt ladede gruppene blir introdusert og/eller beskyttelsen blir fjernet i det andre trinnet.
SKJEMA 1 - Struktur av pentasakkaridet Pe når W = O eller C; bokstavene DEFGH er anvendt i teksten for å betegne de aktuelle monosakkaridene.
I den første fremgangsmåten kan den fullstendig beskyttede forløperen til tetrasakkariddelen EFGH av pentasakkaridet bli brukt. Et polysakkarid Po som på dets reduserende terminalende inneholder den manglende enheten D av Pe blir deretter tilsatt for å kunne oppnå, etter kobling, hele ABR som dermed er gjenervervet.
I en annen fremgangsmåte kan den fullstendig beskyttede forløperen til disakkariddelen GH av pentasakkaridet bli brukt. En polysakkarid Po-forløper for TBR som på dens reduserende terminalende inneholder den manglende DEF-enheten av Pe blir deretter tilsatt for, etter kobling, å kunne oppnå hele ABR som dermed blir gjenervervet.
Disse Pe-forløpeme er syntetisert som indikert over fra syntoner som er beskrevet i litteraturen eller som utgjøren del av den foreliggende oppfinnelsen.
Polysakkaridforløperdelen av Po er syntetisert i henhold til reaksjoner som er godt kjent av fagmenn, ved å anvende fremgangsmåtene for syntese av oligosakkarider (G. J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52,1095-1121) eller et oligosakkarid når et glykosid-koblingsdonerende oligosakkarid blir koblet sammen med et glykpsid-koblingsaksepterende oligosakkarid for å resultere i et annet oligosakkarid hvis størrelse er lik summen av størrelsene for de to reaktive forbindelsene.
Denne sekvensen er repetert inntil den ønskede forbindelsen med formel (I) er fremskaffet. Typen og profilen av ladningen til den ønskede sluttforbindelsen bestemmer typen av den kjemiske forbindelsen som er anvendt i de ulike trinnene i syntesen i henhold til regler som er godt kjent av fagmenn.
En foretrukket fremgangsmåte for fremstillingen av Po-forløperne, i henhold til den foreliggende oppfinnelsen, er vist i Skjema 2 under
Skjema 2 - Syntese av den beskyttede forløperen til TBR
Begrepet midlertidig er ment som å referere til en substituent som er konservert for et begrenset antall trinn, begrepet semipermanent er ment å referere til en substituent som er konservert for et større antall trinn, og begrepet permanent er ment å referere til en substituent som er konservert til slutten av syntesen; de permanente substituentene er fjernet i løpet av det siste trinnet. Enkelte permanente grupper kan utgjøre deler av det endelige molekylet.
I Skjema 2 representerer (a) et glykosid-koblingsdonerende monosakkarid, der Z er en midlertidig beskyttende gruppe med en hydroksylfunksjon og Y er en anomerisk karbon aktivator, Tn, som kan være identiske eller forskjellige, er midlertidige, semipermanente eller permanente substituenter for alle de andre hydroksylfunksjonene.
Forbindelsen (b), som har en usubstituert hydroksylgruppe, representerer et glykosid-koblingsaksepterende monosakkarid der Tn, som kan være identiske eller forskjellige, er midlertidige, semipermanente eller permanente substituenter for hydroksylgruppene. T1 er en midlertidig, semipermanent eller permanent beskyttende gruppe i den anomeriske posisjonen. Den blir fjernet når det er ønskelig å aktivere det anomeriske karbonet.
Med formål å fremskaffe forbindelsene i oppfinnelsen blir glykosidkoblings-donoren (a) og glykosid-koblingsmottakeren (b) reagert sammen for å gi disakkaridet (c).
Disakkaridet (c) som er fremskaffet over er spesifikt konvertert til et glykosid-koblingsdonerende disakkarid (d) ved fjerning av Ti og introduksjon av Y, og/eller til en glykosid-koblingsmottaker (e) ved fjerning av Z.
Deretter blir glykosid-koblingsdonoren (d) og glykosid-koblingsmottakeren (e) reagert sammen for å gi tetrasakkaridet (f), dert representerer 1.
Repetisjon av denne sekvensen med reaksjoner resulterer i et oligo- eller et polysakkarid (f), der t er større enn 1.
Det er også mulig, ved å anvende prosessen som er representert i Skjema 2, å oppnå et stort utvalg av fullt beskyttede oligo- eller polysakkarider slik som (g) der oligosakkaridene [ ]m og [ ]t er fullt beskyttede forløpere med forskjellig ladede regioner av forbindelsene i oppfinnelsen.
I det følgende trinnet av prosessen er forbindelser slike som (f) og (g) konvertert til glykosid-koblingsdonorer og er koblet til den ikke-reduserende terminalenheten til fullstendig beskyttede forløpere av Pe.
Som nevnt over kan oligosakkaridet på den ikke-reduserende terminalenheten til et glykosid-koblingsdonerende polysakkarid (g) utgjøre en del av Pe, i tilfellet der (g) er koblet til den ikke-reduserende terminalenheten til et fullt beskyttet oligosakkarid som er forløperen til resten til Pe-strukturen.
Forbindelsene i oppfinnelsen er fremskaffet fra deres fullstendig beskyttede polysakkaridfoiiøpere ved å anvende den følgende rekkefølgen av reaksjoner: Opphevelse av beskyttelsen på alkoholfunksjonene, som behøver å bli konvertert til en sulfogruppe, og karboksylsyrene skjer ved fjerning av Tn-gruppene som er anvendt til å beskytte dem i løpet av utviklingen av skjelettet, deretter
- sulfogruppene blir deretter introdusert.
Prosessen som er beskrevet over er den foretrukkede prosessen i oppfinnelsen. Derimot kan forbindelsene i formel (I) bli fremstilt med andre velkjente fremgangsmåter i sukkerkjemi som for eksempel er beskrevet i Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products. P, M. Collins og R. J. Ferrier, J. Wiley & sons, 1995 og i G. J. Boons, Tetrahedron, 1996, 52,1095-1121.
Forløperen til den delen av pentasakkaridet Pe, når W representerer et oksygenatom og Ria er Ri, er fremstilt i henhold til oligosakkaridsyntesefremgangs-måter og spesielt i henhold til fremgangsmåtene som er beskrevet i patenter EP 84.999, EP 301.618, EP 454.220 og EP 529.715 og i patentsøknader EP 93204769 og EP 94202470. Når fullstendig beskyttelse er utført er det mulig, ved å anvende egnede beskyttende grupper, å oppnå en fri hydroksylgruppe i posisjon 4 på den ikke-reduserende terminalenheten (D). Den fullstendig beskyttede forløperen til Pe er deretter koblet til denne posisjonen ved å anvende kjente fremgangsmåter for oligosakkaridsyntese.
Pentasakkaridet Pe, der W representerer et karbonatom og Ria er R1p har formelen:
der R og Ri er definert som for (I) er fremskaffet fra syntonet tii formelen:
r
der Ti og Tn, som kan være identiske eller forskjellige, representerer en midlertidig, semipermanent eller permanent substituent, Z er en beskyttende gruppe for en hydroksylfunksjon som er fremskaffet med en syntese som er utført med en radikal-reaksjon mellom et fritt-radikal-genererende monosakkarid og et monosakkarid inneholdende en dobbeltbinding, C-disakkaridet som dermed er fremskaffet blir deretter konvertert til synton (11.1) i henhold til standardfremgangsmåten som er beskrevet over i henhold til C. van Boeckel og M. Petitou.
I ett aspekt av foreliggende oppfinnelse, dekkes en forbindelse kjennetegnet ved formelen:
der Ti og Tn, som kan være identiske eller forskjellige, representerer en midlertidig, semipermanent eller permanent substituent, og Z er en beskyttende gruppe for en hydroksylfunksjon.
Syntonet med formel (11.1), som er spesielt egnet for syntesen av forbindelsene (II), har formelen:
Dette syntonet er fremstilt i henhold til reaksjonsskjemaet som er beskrevet i Skjema 22 under.
Pentasakkaridet Pe som har en substituent Ria, som utgjør en L-iduronsyreenhet med bestemt konfigurasjon, har formelen: der R og Ri er som definert for (I) og W representerer et oksygenatom er fremskaffet fra syntonet med formelen :
der Ti og Tn, som kan være identiske eller forskjellige, representerer en midlertidig, semipermanent eller permanent substituent, Z er en beskyttende gruppe for en hydroksylfunksjon som er fremskaffet med en syntese som ble utført i henhold til fremgangsmåtene som er beskrevet i litteraturen M. K. Gurjar et al., Tetrahedron letters, 1995, 36,11,1937-1940,1933-1936 og 1994, 35,14, 2241-2244.
I et annet aspekt, dekker foreliggende oppfinnelse en forbindelse kjennetegnet ved formelen:
der Ti og Tn, som kan være identiske eller forskjellige, representerer en midlertidig, semipermanent eller permanent substituent, Z er en beskyttende gruppe for en hydroksylfunksjon.
Syntonet med formelen (111.1) som er spesielt egnet for syntetisering av forbindelsene (III) har formelen:
Dette syntonet er fremstilt i henhold til reaksjonsskjemaet som er beskrevet i Skjema 34 under.
Intermediatene (11.1) og (III.1) er nye intermediater som er spesielt egnet for å fremstille forbindelsene (I) i henhold til oppfinnelsen.
Pentasakkaridene Pe kan dermed bli fremskaffet fra disse disakkarid-syntonene (11.1) eller (111.1) på den måten som er beskrevet i publikasjonen av C. A. A. van Boeckel og M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl, som er nevnt over.
Begrepet semipermanente grupper som er anvendt over er ment som å referere til gruppene som først kan bli fjernet etter glykosyleringsreaksjonene når karbohydratskjelettet inneholder det ønskede antall enheter, uten å fjerne eller alvorlig affisere de andre gruppene som foreligger, og dermed muliggjør introduksjonen av ønskede funksjonelle grupper i posisjonene som de opptar.
De permanente gruppene er grupper som kan opprettholde beskyttelsen av OH-funksjonene i løpet av introduksjon av de funksjonelle gruppene i steden for de semipermanente gruppene.
Disse gruppene er valgt fra de som er kompatible med de funksjonelle gruppene som er introdusert etter fjerning av de semipermanente gruppene. De er videre grupper som er inerte mot reaksjonene som er utført for å installere disse funksjonelle gruppene og som kan bli fjernet uten at disse funksjonelle gruppene blir alvorlig affisert.
I henhold til oppfinnelsen er de permanente gruppene fortrinnsvis (Ci-C6) alkylgrupper.
Eksempler på semipermanente og/eller midlertidige grupper som kan bli nevnt er benzyl og acetyl, levulinyl, p-metoksybenzylgrupper, osv.
Substituentene i posisjon 3 til uronenheten til målforbindelsen kan allerede være foreliggende i startsyntonene sammen med substituenten R1.
De beskyttende gruppene som er anvendt i prosessen for å fremstille forbindelsene (I) er de som er mye anvendt i sukkerkjemi, for eksempel i Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley & sons, New York, 1981.
De beskyttende gruppene er for eksempel fordelaktig valgt blant acetyl, halometyl, benzoyl, levulinyl, benzyl, substituert benzyl, eventuelt substituert trityl, tetrahydropyranyl, allyl, pentenyl, tert-butyldimetylsilyl (tBDMS) eller trimetylsilyl-etylgrupper (osv.).
De aktiverende gruppene er de som konvensjonelt er anvendt i sukkerkjemi, foreksempel i henhold til G. J.Boons, Tetrahedron, 1996, 52,1095-1121. Disse aktiverende gruppene er for eksempel valgt fra imidater, tioglykosider, pentenyl-glykosider, xantater, fosfitter og halider.
Prosessen som er beskrevet over gjør det mulig å oppnå forbindelsene i oppfinnelsen i form av salter. For å oppnå de korresponderende syrene er forbindelsene i oppfinnelsen i form av salter plassert i kontakt med et kation-utbytteharpiks i sur form.
Forbindelsene i oppfinnelsen i sur form kan deretter bli nøytralisert med en base for å kunne fremskaffe et ønsket salt.
For fremstillingen av saltene til forbindelsene på formel (I) kan enhver organisk eller uorganisk base bli brukt med forbindelsene på formel (I), som resulterer i farmasøytisk godkjente salter.
Natriumhydroksid, kaliumhydroksid, kalsiumhydroksid eller magnesium-hydroksid er fortrinnsvis anvendt som base. Natrium og kalsiumsaltene til forbindelsene på formel (I) er de foretrukkede saltene.
I trinn (a) av prosessen er de beskyttende gruppene som er anvendt de som normalt blir anvendt av fagmenn i sukkerkjemi, for eksempel i henhold til EP 84.999 eller alternativt i henhold til Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, J. Wiley & sons, 1995.
Forbindelsene (I) som dermed er fremskaffet kan eventuelt bli saltgjort.
Forbindelsene på formel (I) over innbefatter også de der en eller flere hydrogen- eller karbonatomer har blitt byttet ut med deres radioaktive isotop, for eksempel tritium eller karbon-14. Slike merkede forbindelser er egnet i farmakokinetiske, metabolske eller forskingsstudier, og i biokjemiske tester som ligander.
Forbindelsene i henhold til oppfinnelsen dannet subjektet for biokjemiske og farmakologiske studier som viste at de har veldig fordelaktige egenskaper.
Forbindelsene i den foreliggende oppfinnelsen som selektivt binder til AT III med en affinitet som er lik eller større enn den til heparin, har de antikoagulerende og antitrombotiske egenskapene til heparin.
Den totale antitrombotiske aktiviteten til produktene på formel (I) ble evaluert intravenøst eller subkutant i rotter i en modell for venøs stase og induksjon av tromboplastin, i henhold til fremgangsmåten som er beskrevet av J. Reyers et al. i Thrombosis Research, 1980, 18, 669-674, så vel som i en modell for arteriell trombose bestående av en shunt som er implantert mellom karotidarterien og jugularvenen i rotter, som beskrevet av Umetsu et al. Thromb. Haemost., 1978, 39, 74-83.1 disse to eksperimentelle modellene var ED50 til forbindelsene i oppfinnelsen minst samme verdien eller mindre enn den til andre syntetiske heparinoider som allerede er kjent (ED50 mellom 5 og 500 ug/kg). Forbindelsene i oppfinnelsen har dermed en virkningsspesifisitet og en antikoagulerende og antitrombotisk aktivitet som er spesielt fordelaktig.
På grunn av deres biokjemiske og farmasøytiske aktivitet er forbindelsene i den foreliggende oppfinnelsen veldig fordelaktige medisiner. Deres toksisitet er helt kompatibel med denne anvendelsen. De er også veldig stabile og er dermed spesielt egnet for å utgjøre den aktive bestanddelen i farmasøytiske spesialprodukter.
Videre blir ikke forbindelsene i oppfinnelsen nøytralisert av store doser kationiske blodplateproteiner slik som platefaktor 4 (PF4) som frigjøres i løpet av aktivering av disse proteinene i tromboseprosessen. Forbindelsene i oppfinnelsen er dermed spesielt fordelaktige for behandlingen og forebygging av arteriell eller venøs trombose. 1 henhold til foreliggende oppfinnelse, dekkes anvendelse av polysakkaridet eller saltet i henhold til kravene 1 til 9, for fremstilling av en medisin som er egnet i patologier som er avhengig av ikke-virksom koagulasjon.
Forbindelsen i henhold til foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt i ulike patologier som kommer etter en modifikasjon av hemostasen til koagulasjons-systemet, som spesielt forekommer ved uregelmessigheter i det kardiovaskulære og cerebrovaskulære systemet, for eksempel tromboemboliske uregelmessigheter som er assosiert med aterosklerose og diabetes, slik som ustabil angina, slag, restenose etter angioplasti, endarterektomi og installasjonen av endovaskulære proteser; eller tromboemboliske uregelmessigheter som er assosiert med retrombose etter trombolyse, med infarkt, med demens med iskemisk opprinnelse, med perifere arterietle sykdommer, med hemodialyse og med aurikulærfibriller eller alternativt i løpet av anvendelsen av vaskulære proteser med aortakoronære broer. Disse produktene kan dessuten bli anvendt til behandlingen eller forebyggingen av tromboemboliske patologier med venøs opprinnelse slik som lungeemboli. De kan bli anvendt til å forebygge eller behandle trombotiske komplikasjoner som forekommer i løpet av kirurgiske intervensjoner eller sammen med andre patologier som kreft og bakterielle eller viråle infeksjoner. Når de er anvendt i løpet av installasjonen av proteser, kan forbindelsene i den foreliggende oppfinnelsen dekke protesene og dermed gjøre dem hemokompatible. Spesielt kan de bli bundet til intravaskulære proteser (stenter). I dette tilfellet kan de eventuelt bli kjemisk modifisert ved introduksjon av en egnet arm på den reduserende eller ikke-reduserende enden, som beskrevet i EP 649 854.
Forbindelsene i den foreliggende oppfinnelsen kan også bli anvendt som adjuyantia ved endarterektomi som er utført med små porøse ballonger.
Forbindelsene i oppfinnelsen er veldig stabile og er dermed spesielt egnet for å utgjøre den aktive bestanddelen i medisiner.
I henhold til et annet av dens aspekter, er subjektet til den foreliggende
oppfinnelsen dermed en farmasøytisk blanding inneholdende, som aktiv bestanddel, et syntetisk polysakkarid eller saft i henhold til foreliggende oppfinnelse som definert i patentkravene, i form av et salt med en farmasøytisk godtakbar base eller i syreform, i kombinasjon eller som en blanding med et inert, ikke-toksisk, farmasøytisk godtakbart bindemiddel.
Oppfinnelsen relateres fortrinnsvis til farmasøytiske blandinger inneholdende, som aktiv bestanddel, en forbindelse med formel (I), (1.1), (I.2) eller (I.3) eller en av dens farmasøytisk godkjente salter, eventuelt i kombinasjon med en eller flere inerte og egnede bindemidler.
I hver doseenhet foreligger den aktive bestanddelen i mengder som er tilpasset de daglig anbefalte dosene. Generelt er hver doseenhet fordelaktig justert i henhold til dosen og typen av planlagt administrering, for eksempel tabletter, gelatinkapsler og dets like, lukteposer, ampuller, sirup og dets like, dråper og transdermale eller transmukøse plaster, slik at en doseenhet inneholder fra 0,1 til 100 mg med aktiv bestanddel, fortrinnsvis 0,5 til 50 mg.
Forbindelsene i henhold til oppfinnelsen kan også bli anvendt i kombinasjon med en annen aktiv bestanddel som er egnet for den ønskede terapien slik som for eksempel antitrombotiske agensen antikoagulanter eller plateantiaggregerende agenser, for eksempel slike som dipyridamol, aspirin, tiklopidin, klopidogrel eller antagonister til glykoprotein llb/llla-komplekset.
De farmasøytiske blandingene er formulert for administrering til pattedyr, inkludert menneske, for behandlingen av de tidligere nevnte sykdommene.
De farmasøytiske blandingene som er fremskaffet er fordelaktige i ulike former slik som for eksempel injiserbare eller drikkbare løsninger, tabletter, dekkede
tabletter eller gelatinkapsler. De injiserbare løsningene er den foretrukkede farmasøytiske formen. De farmasøytiske blandingene i den foreliggende oppfinnelsen er spesielt egnet for forebyggende eller kurativ behandling av sykdommer i den vaskulære veggen, slike som aterosklerose, de hyperkoagulerende tilstandene som for eksempel er observert etter kirurgiske operasjoner, tumor-utvikling eller deregulering av k<p>agulasjon, som er indusert av bakterielle, virale eller enzymatiske aktivatorer. Dosene kan variere mye som en funksjon av alderen, vekten og helsetilstanden til pasienten, typen og graden av lidelsen og administreringsveien. Denne dosen innbefatter administrering av en eller flere doser fra ca. 0,1 mg til 100 mg per dag, fortrinnsvis fra ca. 0,5 til 50 mg per dag, intramuskulært eller subkutant, i sammenhengende administreringer kontinuerlig eller administreringer i regulære intervaller.
Temaet i den foreliggende oppfinnelsen er dermed også farmasøytiske blandinger som inneholder, som aktiv bestanddel, en av forbindelsene over eventuelt kombinert med en annen aktiv bestanddel. Disse blandingene er fremstilt slik at de kan bli administrert via eller utenfor fordøyelseskanalen.
I de farmasøytiske blandingene i den foreliggende oppfinnelsen for oral, sublingval, subkutan, intramuskulær, intravenøs, transdermal, transmukøs, lokal eller rektal administrering kan den aktive ingrediensen bli administrert i enhetsformer for administrering som er blandet med standard farmasøytiske bindemidler, til dyr og til mennesker. De egnede enhetsformene for administrering inkluderer orale former slike som tabletter, gelatinkapsler, pulver, granula og orale suspensjoner eller løsninger, sublingvale og buccale administreringsmåter, subkutane, intramuskulære, intravenøse, intranasale eller intraokulære administreringsmåter og rektale administreringsformer.
Når en fast blanding på tablettform er fremstilt, er den mest aktive ingrediensen blandet med et farmasøytisk bindemiddel som gelatin, stivelse, laktose, magnesiumstearat, talkum, gummi arabicum eller dets like. Tablettene kan bli dekket med sukrose eller andre egnede materialer eller alternativt kan de bli behandlet slik at de har en langvarig eller forsinket aktivitet og slik at de kontinuerlig frigjør en forutbestemt mengde av aktiv bestanddel.
En fremstilling i gelatinkapsler er fremskaffet ved å blande den aktive ingrediensen med et fortynningsmiddel og helle blandingen som er fremskaffet over i myke eller harde gelatinkapsler.
De vanndispergerte pulverne eller granula kan inneholde den aktive ingrediensen blandet med utspredningsagenser eller fuktighetsagenser, eller løsningsagenser, for eksempel polyvinylpyrrolidon, så vel som søtningsmidler eller smaksforsterkere.
For rektal administrering anvendes suppositorier som er fremstilt med bindemidler som smelter ved rektal temperatur, for eksempel kakaosmør eller polyetylenglykoler.
For parenteral, intranasal eller intraokulær administrering er sterile, injiserbare løsninger, isotoniske saltvannsløsninger eller vandige suspensjoner som inneholder farmakologisk kompatible utspredningsagenser og/eller fuktighetsagenser som for eksempel propylenglykol eller butylenglykol, anvendt.
For transmukøs administrering kan den aktive bestanddelen bli formulert i nærværet av en hjelper slik som et gallesalt eller nærværet av en hydrofil polymer hydroksyetylcellulose, etylcellulose, karboksymetylcellulose, dekstran, polyvinylpyrrolidon, pektiner, stivelser, gelatin, kasein, akrylsyrer, akrylestere og deres kopolymerer, vinylpolymerer eller kopolymerer, vinylalkoholer, alkoksypolymerer, polyetylenoksidpolymerer og polyetere, eller en blanding derav.
Den aktive bestanddelen kan også bli formulert i form av mikrokapsler, eventuelt med ett eller flere bindemidler eller tilsetninger.
Den aktive bestanddelen kan også foreligge i form av et kompleks med et syklodekstrin, for eksempel a-, p- eller -y-syklodekstrin, 2-hydroksypropyl-p-syklodekstrin eller metyl- p-syklodekstrin.
Den aktive bestanddelen kan også bli frigjort av en liten ballong som inneholder den eller av en endovaskulær utvider som er introdusert i blodårer. Den farmakologiske effektiviteten til den aktive bestanddelen er dermed ikke alvorlig affisert.
Subkutan administrering er den foretrukkede veien.
De følgende fremgangsmåtene, fremstillingene og skjemaene illustrerer syntesen av de ulike intermediatene som er egnet for fremskaffelsen av polysakkaridene i henhold til oppfinnelsen.
Eksemplene under illustrerer også oppfinnelsen.
De følgende forkortelsene er anvendt:
TBDMS: tert-butyldimetylsilyl; Lev: levulinyl; Bn: benzyl; Bz: benzoyl; TLC: tynnsjiktskromatografi; Olm: trikloracetimidyl; LSIMS: Flytende Sekundær lonemassespéktrometri; ESIMS: Elektron Spray Ioniserende Massespektrometri; TMS: trimetylsilyl; TSP: natrium trimetylsilyl tetradeuteriopropionat; Tf: triflat; MS: molekylære siler; All: allyl; PMB: p-metoksybenzyl; SE: trimetylsilyletyl.
Dowex®, Sephadex®, Chelex® og Toyopearl® er registrerte firmamerker.
I fremgangsmåtene, fremstillingene og i eksemplene som er beskrevet under kan generelle fremgangsmåter som er relatert til katalytisk kobling av imidatene, kutting av levulinesteme, katalytisk kobling av tioglykosider, saponifisering, metylering og selektiv fjerning av beskyttelse fra p-metoksybenzylgruppen, fjerning av beskyttelse og sulfatering av oligo- og polysakkaridene ved hydrogenolyse av benzyleterne eller av esterne, saponifisering av esterne eller sulfateringer bli utført ved å benytte de generelle fremgangsmåtene under til de egnede intermediatene.
Generelle fremgangsmåter
Fremgangsmåte 1. Kobling til imidater katalysert av tert-butyldimetylsilyltriflat.
En løsning av tert-butyldimetylsilyltriflat i diklormetan (1M, 0,2 mol/mol av imidat) ble tilsatt, under argon og ved -20°C, en løsning av imidatet og glykosylmottakeren i diklormetan (17,5 ml/mmol) ved tilstedeværelsen av 4 Å molekylære siler. Etter 10-20 minutter (TLC) ble fast natriumhydrogenkarbonat tilsatt. Løsningen ble filtrert, vasket med vann, tørket og inndampet til tørrhet.
Fremgangsmåte 2. Kutting av levulingruppen.
Forbindelsen som skulle få fjernet beskyttelsen ble løst i en 2/1 etanol/toluen-blanding (42 ml/mmol) og hydrazinacetat (5 mol/mol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 15-30 minutter (TLC) og konsentrert.
Fremgangsmåte 3. Kobling til tioglykosidene katalysert av N-jodsuccinimid/sølvtriflat
Tioglykosidet og glykosylmottakeren ble løst i anhydrøst toluen (18 ml/mmol av tioglykosid) ved tilstedeværelsen av 4 Å molekylære siler i en rundbunnet flaske som var laget av inaktint glass. Blandingen ble rørt i 1 time ved romtemperatur. Den ble avkjølt til 0°C og N-jodsuccinimid (3 mol/mol av tioglykosid) ble tilsatt, etterfulgt av sølvtriflat (0,28 mol/mol av tioglykosid). Etter 10-15 minutter (TLC) ble fast natriumhydrogenkarbonat tilsatt. Etter filtrering ble løsningen vasket med vandig 1M natriumtiosulfatløsning, vann, tørket og inndampet.
Fremgangsmåte 4. Saponifisering, metylering og selektiv fjerning av beskyttelsen til p-metoksybenzylgruppen.
Saponifisering av esterne. Forbindelsen som skulle bli saponifisert ble løst i en 1/1 diklormetan/metanol-blanding (4 ml/mmol). Natriummetoksid ble tilsatt og blandingen ble rørt i 20 minutter og nøytralisert med et 50 H+ Dowex® resin. Løsningen ble konsentrert og denne forbindelsen ble anvendt i de følgende trinnene uten rensing.
Metylering. Natriumhydrid ble satt porsjonsvis, ved 0°C, til en blanding av grovproduktet over og metyljodid i N.N-dimetylformamid (7 ml/mmol). Etter fullstendig reaksjon ble blandingen helt over i vann og ekstrahert med etylacetat. De organiske fasene ble vasket med vann, tørket og inndampet til tørrhet.
Kutting av p-metoksybenzyl. Grovforbindelsen over ble løst i en 9/1 acetonitril/vann-blanding (20 ml/mmol). Ved 0°C ble ammoniumceriumnitrat (0,5 mol/mol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt i 2 timer (overvåket med TLC), mettet natriumhydrogenkarbonatløsning ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med etylacetat, tørket og inndampet.
Fremgangsmåte 5. Fjerning av beskyttelsen og sulfatering av oligo- og polysakkaridene.
Hydrogenolyse av benzyleterne og benzylesteme. En løsning av forbindelsen i iseddiksyre ble rørt i 6-12 timer (TLC) ved en hydrogen atmosfære (40 bar) i nærvær av 5 % Pd/C katalysator (to ganger massen til forbindelsen). Etter filtrering ble produktet anvendt direkte i det følgende trinnet.
Saponifisering av esterne. Vandig 5 M natriumhydroksidløsning (i en slik mengde at konsentrasjonen av natriumhydroksid ble 0,5 M ved slutten av tilsetningen) ble satt til en løsning med en ester i metanol (150 ml/mmol). Etter 2-5 timer ble vann introdusert og blandingen ført gjennom en Sephadex® G-25 gelkolonne (1,6 x 115 cm) eluert med vann. Eluatet ble konsentrert, ført gjennom en Dowex® 50 H+ kolonne (2 ml) og frysetørket. På dette stadiet ble det bekreftet, ved å anvende <1>H NMR, at alle de beskyttende gruppene hadde blitt fjernet. Hvis nødvendig ble produktet utsatt for ytterligere en hydrogenering og/eller saponifisering.
Sulfatering. Trietylamin/svoveltrioksid-kompleks (5 mol/mol av hydroksylfunksjon) ble satt til en løsning av forbindelsen for å bli sulfatert i dimetylformamid (5 mg/ml). Etter en dag ved 55°C, ble løsningen plassert på toppen av en Sephadex® G-25 kolonne (1,6 x 115 cm), eluert med 0,2 M natriumklorid. Fraksjonene som inneholdt produktet ble konsentrert og avsaltet ved å anvende den samme kolonnen som var eluert med vann. Den siste forbindelsen ble fremskaffet etter frysetørking.
Fremstilling 1:
Etyl 2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-1-tio-p-D-glukopyranosid (2).
1, 2,4,6-Tetra-0-acetyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranose 1 (69 g, 0,19 mmol), (B.
Helferich et al., J. prakt. Chem., 132, 321 (1932)) ble løst i toluen (580 ml). Etantiol (28 ml, 0,38 mmol) ble tilsatt etterfulgt av dråpevis tilsetning av en løsning med trifluorboran dietyleterat (1 M i toluen, 190 ml). Blandingen ble rørt i 1,5 time (TLC), fast natriumhydrogenkarbonat ble introdusert og blandingen ble filtrert, vasket med vann, tørket og konsentrert. Kromatografi på en kiselgelkolonne (3/1 sykloheksan/etylacetat) resulterte i 2 (37 g, 54%). [cc]D-26 (c = 1. diklormetan). <1>H NMR (CDCI3). 5 5,05-4,96 (m, 2H, H-2, H-4), 4,39, (d, 1H, J = 9,5 Hz, H-1), 4,18-4,12 (m, 2H, H-6, H-6'), 3,60 (m, 1H, H-5), 3,50 (dd, 1H, J = 9,3 Hz, H-3), 3,41 (s, 3H, OCH3), 2,65-2,53 (m, 2H, SC4>CH3), 2,12, 2,11, 2,09 (3s, 9H, 3 Ac), 1,25 (t, 1H, SC4»CH3).
Fremstilling 2
Etyl 4,6-0-benzyliden-3-0-metyl-1-tio-p-D-glukopyranosid (3).
Forbindelse 2 (37 g, 0,1 mmol) ble løst i en 1/2 blanding av metanol og diklormetan (1,5 L). 2 M natriummetoksidløsning (150 ml) ble tilsatt. Etter 0,5 time ved romtemperatur ble blandingen nøytralisert med Dowex® 50 (H<+>) resin, filtrert og konsentrert.
Grovforbindelsen over ble løst i anhydrøst acetonitril (1 L) og a,o> dimetoksytoluen (30 ml, 0,2 mol) og kamfersulfonsyre (2,3 g, 10 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 1,5 time (TLC), trietylamin (1,4 ml) ble tilsatt og blandingen ble konsentrert. Resten som ble fremskaffet ble felt ut i etyleter og resulterte i 3 (27 g, 81 %). [oc]d-60 (c = 1,63, diklormetan). 'H NMR (CDCI3) 8 7,51-7,34 (m, 5H, Ph), 5,55 (s, 1H, C6H5CH), 4,56 (d, 1H, J = 9,2Hz, H-1), 2,75 (m, 2H, SCH2CH3), 1,32 (t, 3H, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C16H2205S (326,41): C, 58,58; H, 6,79; S, 9,82.
Funnet: C, 58,99; H, 6,74; S, 9,75.
Fremstilling 3
Etyl 2-0-benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-metyM -tio-p-D-glukopyranosid (4).
Natriumhydrid (2,00 g, 83,3 mmol) ble tilsatt ved 0°C til en løsning av 3 (23 g, 71,0 mmol) og benzylbromid (11 ml, 93,0 mmol) i N,N-dimetylformamid (200 ml). Blandingen ble rørt i 2 timer (TLC), metanol ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble helt over i vann. Den ble ekstrahert med etylacetat, vasket med vann, tørket og konsentrert. Resten ble felt ut i etyleter for å kunne fremskaffe 4 (18,8 g, 63 %). Smp. 123°C. [a]D-35 (c = 0,63, diklormetan). <1>H NMR (CDCI3) 8 7,50-7,25 (m, 10H, 2Ph), 5,55 (s, 1H, C6H5CW), 4,54 (d, 1H, J = 9,7 Hz, H-1), 4,34 (m, 1H, H-6), 3,75 (t, 1H, J = 10,2 Hz, H-6'), 3,65 (s, 3H, OCH3), 3,60-3,33 (m, 4H, H-5, H-4, H-3, H-2), 2,75 (m, 2H, SC^CH3), 1,32 (t, 3H, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C23H2805S (416,54): C, 66,32, H, 6,78; S, 7,70.
Funnet: C, 66,25; H, 7,28; S, 7,54.
Fremstilling 4
Etyl 2,6-di-0-benzyl-3-0-metyM-tio-p-D-glukopyranosid (5).
En løsning av trifluoreddikanhydrid (0,65 ml, 4,50 mmol) i trifluoreddiksyre (16 ml, 0,21 mmol) ble, under argon, tilsatt en løsning av 4 (28,8 g, 69,0 mmol) og trietylsilan (33 ml, 0,21 mmol) i diklormetan (120 ml). Blandingen ble rørt i 2 timer og fortynnet med etylacetat og vandig 1 M natriumhydroksidløsning ble satt til pH 9. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat, vasket med vann, tørket og inndampet til tørrhet. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (3/1 og deretter 2/1 sykloheksan/- etylacetat) for å kunne fremskaffe 5 (17,4 g, 60 %). [a]D-47 (c = 1, diklormetan). <1>H NMR (CDCI3) (7,45-7,25 (m, 10H, 2 Ph), 4,47 (d, 1H, J = 9,3 Hz, H-1), 3,66 (s, 3H, OCH3), 3,61-3,40 (m, 2H, H-4 og H-5), 3,36-3,19 (m, 2H, H-2 og H-3), 2,73 (m, 2H, SCH2CH3), 1,31 (t, 3H, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C^tAS (418,55): C, 66,00, H, 7,22; S7,66. Funnet C, 65,62; H, 7,28; S, 7,21.
Fremstilling 5
Etyl 2,6-0-di-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-1 -tio-p-D-glukopyranosid (6).
Forbindelse 5 (17,3 g, 41,4 mmol) ble løst i anhydrøst dioksan (400 ml). Levulinsyre (9,60 g, 83,0 mmol), 1- (3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid (16 g, 86 mmoi) og 4-dimetylaminopyridin (1 g, 8,3 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 4 timer, ekstrahert med etylacetat, vasket suksessivt med vandig 5 % kaliumhydrogen-sulf at løsning, med vann, med mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (6/1 toluen/- etylacetat) for å kunne fremskaffe rent 6 (19,9 g, 93 %). [a]D -5 (c = 1,46, diklormetan). LSIMS, positiv innstilling: m/z tioglyserol + NaCI, 539 (M+Na)<+>: tioglyserol + KF, 555 (M+K)<+-><1>H NMR (CDCI3) 6 7,40-7,20 (m, 10H, 2Ph), 4,92 (m, 1H, H-4), 2,8-2,4 (m, 6H, SCH2CH3 og 0 (C:0) CHfeCM. (C:0) CH3), 2,16 (s, 3H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk), 1,32 (t, 1H, J = 7,3 Hz, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C28H3607S (516,65): C, 65,09, H, 7,02; S, 6,21. Funnet: C, 65,30; H, 7,03; S, 5,75.
Fremstilling 6
Allyl 4,6-0-benzyliden-3-0-metyl-p,-D-glukopyranosid (7).
Trifluormetansulfonsyre (1,10 ml, 0,012 mol) ble satt til en suspensjon av kommersiell 3-O-metylglukose (135 g, 0,7 mol) i allylalkohol (1 L). Blandingen ble varmet ved 120°C i 2 timer. Den ble nøytralisert ved tilsetning av trietylamin (2 ml) og inndampet til tørrhet.
a, a-Dimetoksytoluen (136 ml, 0,9 mol) og kamfersulfonsyre (25 g, 0,13
mmol) ble satt til grovforbindelsen over som var oppløst i N,N-dimetylformamid (2 L). Blandingen ble opp varmet ved 80°C i 1 time under vakuum. Den ble nøytralisert ved tilsetning av trietylamin (21 ml) og ekstrahert med etylacetat, vasket med vann, tørket og konsentrert for å kunne fremskaffe en fast cc/p-blanding = 3/2, (144 g, 57 %). Denne blandingen ble rekrystallisert fra etanol for å kunne fremskaffe rent 7-ct (60 g, 26 %). Kromatografi på en del av opphavsløsningene på en kiselgelkolonne (3/1 sykloheksan/etylacetat) resulterte i ren 7-p (7,6 g), 7-a/p (6,8 g) og ren 7-a (1,4 g). Forbindelse 7-p: [oc]D-43 (c = 1, diklormetan). Smp.: 131°C. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,50-7,26 (m, 5H, Ph) 6,01-5,90 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,55 (s, 1H, C6H5CH), 5,38-5,32 (m, 2H, OCH2 (CH:CH2), 4,47 (d, 1H, J = 7,5 Hz, H-1), 4,42-4,32 (m, 2H, H-6' og OCH2 (CH:CH2)), 4,21 ->4,15 (m, 1H, OChh (CH:CH2)), 3,80 (dd, 1H, J = 10,2 Hz, H-6), 3,67 (s, 3H, OCH3).
Anal. beregnet for Ci7H2206 (322,36): C, 63,34; H, 6,88. Funnet: C, 63,23; H, 7,12.
Fremstilling 7
Allyl 2-0-acetyl-4,6-0-benzyliden-3-0-metyl-p-D-gluko-pyranosid (8).
7 (11,5 g, 35,7 mmol) ble løst i diklormetan (100 ml og eddikanhydrid (4,0 ml, 42,8 mmol), trietylamin (6,40 ml, 46,4 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (440 mg, 3,60 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 2 timer (TLC), suksessivt vasket med vandig 5 % kaliumhydrogensulfatløsning, med vann, med mettet vandig natriumhydrogen-karbonatløsning, med vann, tørket og inndampet til et fast stoff 8 (12,3 g, 95 %) ble fremskaffet. Smp. 115°C. [cx]d-68 (c = 1, diklormetan). LSIMS, positiv innstilling: m/z tioglyserol + NaCI, 387 (M+Naf; tioglyserol + KF, 403 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,51-7,34 (m, 5H, Ph), 5,98-5,78 (m, 1H, OCH2 { ChtChk)), 5,56 (s, 1H, CeHsCeHsCH), 5,32-5,17 (m, 2H, OCH2 (CH:C^)), 4,99 (dd, J = 8 Hz, 1H, H-2), 4,55 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-1), 4,39-4,29 (m, 2H, H-6 og OChh (CH:CH2)), 4,14-4,04 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)) 3,82 (t, J = 10,2Hz, 1H, H-6'), 3,60 (s, 3H, OCH3), 2,12 (s, 3H, Ac).
Anal. beregnet for CigH2407 (366,39): C, 62,63; H, 6,64. Funnet: C, 62,63; H, 6,64.
Fremstilling 8
Allyl 2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosid (9)
En løsning med trifluoreddikanhydrid (306 (il, 2,10 mmol) i trifluoreddiksyre (10 ml) ble ved 0°C tilsatt en løsning av 8 (12,0 g, 33,3 mmol) og trietylsilan (21,3 ml, 133 mmol) i anhydrøst diklormetan (50 ml). Blandingen ble rørt i 4 timer (TLC), fortynnet med etylacetat og vandig 1M natriumhydroksidløsning ble satt til pH 9. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat, vasket med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (8/5 sykloheksan/aceton) for å fremskaffe rent 9 (10 g, 82%). [oc]D-40 (c = 1,06, diklormetan). <*>H NMR (CDCI3) 8 (7,35-7,28 (m, 5H, Ph), 5,87-5,79 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,28-5,14 (m, 2H, OCH2 (CH:C^)), 4,43 (d, 1H J = 7,9Hz H-1), 4,41-4-28 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)) 4,10-4,02 (m, 1H, OCHb (CH:CH2), 3,77-3,75 (m, 2H, H-6 og H-6'), 3,51 (s, 3H, OCH3), 3,30 (dd, 1H, J = 8,9Hz, H-3), 2,8 (d, 1H.OH).
Anal. beregnet for Ci9H2607 (366,39): C, 62,28; H, 7,15. Funnet: C, 61,73: H. 7,19.
Fremstilling 9
Allyl 2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-4-0- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl)-p-D-glukopyranosid (10).
Tioglykosidet 6 (17,4 g, 33,7 mmol) og glykosylmottakeren 9 (10,3 g, 28,1 mmol) ble løst i dikloretan (150 ml). 4 Å molekylære siler ble tilsatt og blandingen ble rørt i 1 time. En løsning av N-jodsuccinimid (8,30 g, 33,7 mmol) og trifluormetansulfonsyre (0,30 ml, 3,30 mmol) i en blanding av dikloretan og etyleter (415 ml, 1:1) ble tilsatt ved -20°C og under én argonatmosfære. Blandingen ble rørt i 10 minutter (TLC), natriumhydrogenkarbonat ble tilsatt og blandingen ble filtrert, suksessivt vasket med vandig 1M natriumtiosulfatløsning, med vann, med mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (11/1 diklormetan/etylacetat) for å kunne fremskaffe det rene disakkaridet 10-oc(11,7 g, 52 %). [oc]D + 38 (c = 1,01, diklormetan). <1>H NMR (CDCb) 8 7,35-7,23 (m, 15H, 3 Ph), 5,90-5,80 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,47 (d, 1H, J = 3,6 Hz, H-V), 5,27-5,14 (m, 2H, OCH2 (CH:CH>)), 5,05-4,90 (m, 2H, H-4' og H-2), 4,42 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-1), 4,38-4,32 (m, 1H, OCH2 (CHiCHfe)), 4,15-4,0 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 3,90 (dd, 1H, J = 8,8 Hz, H-4), 3,54, 3,34 (2s, 6H, 2 OCH3), 2,75-2,40 (m, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,16, 2,10 (2s, 6H, Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Anal. beregnet for C45H56O14 (820,94): C, 65,84; H, 6,88. Funnet: C, 65,74; H, 6,90.
Fremstilling 10
Prop-1 '-enyl-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-4-0- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl)-p-D-glukopyranosid (11).
1,5-Sykloktadienbis[metyldifenylfosfin]iridium heksafluorfosfat (5,80 mg, 0,70 jimol) ble satt til en løsning av 10 (1,36 g, 1,66 mmol) i peroksidfritt tetrahydrofuran (4,30 ml). Løsningen ble avgasset, plassert under en argonatmosfære og hydrogen ble introdusert. Blandingen ble rørt i 10 minutter (TLC) og inndampet. Resten ble tatt opp i diklormetan, vasket med mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (3/1 toluen/etylacetat) for å kunne fremskaffe rent 11 (1,04 g, 76 %). [gc]d + 47 (c = 1,1, diklormetan). LSIMS, positiv innstilling: m/z tioglyserol + NaCI, 951 (M + Na)<+>; tioglyserol + KF, 967 (M + K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,34-7,23 (m, 15H, 3 Ph), 6,21-
6^16 (m, 1H, O (CH:CH) CH3), 5,45 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1'), 5,13-4,97 (m, 3H, H-4', H-2 og O (CH:CH) CH3), 4,6 (d, 1H, J = 7,55 Hz, H-1), 3,96 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, H-4'), 3,54, 3,34 (2s, 6H, 2 OCH3), 2,74-2,36 (m, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,15, 2,08 (2s, 6H, Ac en O (C:0) CH2CH2(C:0) CH3) 1,56-1,51 {dd, 3H, O (CH:CH) CH3).
Anal. beregnet for C45H56O14 (820,94): C, 65,84; H, 6,88. Funnet: C, 66,21; H, 6,92.
Fremstilling 11
2-0-AcetyJ-6-0-benzyl-3-0-metyl-4-0-{2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) -a, p-D-glukopyranose (12).
En løsning av kvikksølvklorid (3,9 g, 14,3 mmol) i en blanding av aceton og vann (26 ml, 5/1) ble dråpevis tilsatt en løsning av 11 (7,8 g, 9,53 mmol) og kvikksølvoksid i det samme løsningsmidlet (80 ml). Blandingen ble rørt i 1 time, filtrert og konsentrert. Den ble ekstrahert med diklormetan og ekstraktene ble vasket med mettet vandig kaliumjodidløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (10/1 og deretter 4/1 diklormetan/aceton) for å kunne fremskaffe 12 (6,70 g, 90 %).
[oc]D + 92 (c = 1,37, diklormetan). TLC, RF 0,31, 14/1 diklormetan/aceton. <*>H NMR (CDCI3) 5 7,37-7,24 (m, 15H, 3 Ph), 5,46 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1'), 5,37 (d, J = 3,6 Hz, H-1 a), 4,58 (d, J = 8 Hz, H-1f3), 3,54, 3,39, 3,36 (3s, 6H, 2 OCH3), 2,75-2,4 (m, 4H, O (C-O) C4>CH2 (C:0) CH3), 2,16, 2,15 (2s, 6H, Ac og O (C:0) CH2Chk (C:0) CH3), 2,16, 2,15 (2s, 6H, Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3).
Anal. beregnet for C42H520i4 (780,83); C, 64,60; H, 6,71. Funnet: C, 65,09; H, 6,82.
Fremstilling 12
2-0-Acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-4-0- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-ct-D-glukopyranosyl) -a, p-D-glukopyranose trikloracetimidat (13).
Forbindelse 12 (5,00 g, 6,4 mmol) ble løst i diklormetan (50 ml) og trikloracetonitril (3,9 ml, 38,8 mmol) og kaliumkarbonat (1,6 g, 11,6 mmol) ble tilsatt under argon. Blandingen ble rørt i 16 timer (TLC) og filtrert. Filtratet ble renset på en kiselgelkolonne (8/1 og deretter 4/1 diklormetan/aceton) for å kunne fremskaffe en blanding (a/p= 60/40) av imidater 13 (5,22 g, 87 %). TLC, Rf 0,66 og 0,51, 20/1 diklormetan/aceton. <*>H NMR (CDCI3) 5 8,62-8,59 (2s, 1H, N:H- ccog p), 7,37-7,23 (m, 15H, 3 Ph), 6,51 (d, J = 3,7 Hz, H-1 a), 5,81 (d, J = 7,1 Hz, H-10), 5,50 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1'), 3,55, 3,41, 3,37 (3s, 9H, 3 OCH3), 2,75-2,40 (m, 4H, O (C:0) ChhChk (C:0) CH3), 2,16, 2,07, 2,04 (3s, 6H, Ac og (C:0) CH2CH2 (C.O) CH3).
Anal. beregnet for C44H52CI3N014 (925,26): C, 57,12; H, 5,66; N, 1,51. Funnet: C, 57,31; H, 5,87; N, 1,55.
Fremstilling 13
Allyl 2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-4-0- (2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - B-D-glukopyranosid (14).
Forbindelse 10 (3,11 g, 3,80 mmol) ble behandlet i henhold til fremgangsmåte 2 for å kunne fremskaffe 14 (2,70 g, 97 %). [a]D+ 25 (c =1,7, diklormetan). LSIMS, positiv innstilling: m/z tioglyserol + NaCI, 745 (M+Na)<+>; tioglyserol + KF, 761 (M+K)\ <1>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,20 (m, 15H, 3 Ph), 5,87-5,78 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,50 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1'), 5,30-5,17 (m, 2H, OCH2 (CH:CM>)), 5,02 (dd, 1H, H-2), 4,43 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-1), 4,34-4,28 (m, 1H, OChk (CH:CH2)), 4,12-4,02 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 3,63, 3,36 (2s, 6H, 2 OCH3), 2,10 (s, 3H, Ac).
Anal. beregnet for C4oHsoOi2 (722,84); C, 66,47; H, 6,97. Funnet: C, 66,31; H, 7,24.
Fremstilling 14
Allyl 0- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) - O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosid (15).
En blanding av imidatet 13 (4,22 g, 4,56 mmol) og glykosylmottakeren 14 (2,63 g, 3,64 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 1. Produktet ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 og deretter 1/1 toluerVetyleter) for å kunne fremskaffe tetrasakkaridet 15 (4,31 g, 80 %). [a]D + 52 (c = 0,66, diklormetan). * H NMR (CDCI3) 8 7,35-7,23 (m, 30H, 6 Ph), 5,83-5,79 (rn, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,47 (d, 2H, J = 3,5 Hz, H-V" og H-1'), 5,25-5,14 (m, 2H, OCH2 (CH:CH2)), 4,38 (d, 1H, J = 7,7 Hz, H-1"), 4,30 (d, 1H, J = 8 Hz, H-1), 4,32-4,25 (m, 1H, OCW2 (CH:CH2)), 4,08-4,02 (m, 1H OCH2 (CH:CH2)), 3,56, 3,53, 3,34, 3,27 (4s, 12H, 4 OCH3), 2,78-2,40 (m, 4H, O (C:0) ChhChh (C:0) CH3), 2,15, 2,09, 1,85 (3s, 9H, 2 Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Anal. beregnet for C82Hioo025 (1485,7): C, 66,29; H, 6,78. Funnet: C, 66,10; H, 6,79.
Fremstilling 15
O- (2,6-Di-O-benzyl-4-0-levulinyI-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,6-di-O-beznyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-a, p-D-glukopyranose (16).
Forbindelse 15 (2,30 g, 1,54 mmol) ble behandlet som i fremstilling 10. Etter 10 minutter ble en løsning av N-bromsuccinimid (0,30 g, 1,70 mmol) i diklormetan (15 ml) og vann (5,50 ml) satt til reaksjonsblandingen. Blandingen ble rørt i 5 minutter (TLC). Den ble fortynnet med diklormetan, vasket med mettet vandig natriumhydrogensulfatløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 toluen/etylacetat) for å kunne fremskaffe rent 16 (1,57 g, 71.
[cc]D + 69 (c = 0,87, diklormetan). <1>H NMR (CDCI3) 8 7,38-7,20 (m, 30H, 6 Ph), 5,47 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1"' og H-1'), 5,36 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1 a), 4,55 (d, 1H, J = 8 Hz, H-1), 4,36 (d, 1H, J = 8 Hz, H-1"), 3,56, 3,54, 3,39, 3,36, 3,28 (5s, 9H, 3 OCH3), 2,75-2,35 (m, 4H, O (C:0) C4>CH2 (C:0) CH3), 2,16, 2,13, 2,12,1,86 (4s, 9H, 2 Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3).
Fremstilling 16
O- (2,6-Di-0-benzy1-4-0-1evuHnyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-g!ukopyranosyl) - (1 -»4) -0- (2,6-di-O-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-a, p-D-glukopyranose trikloracetimidat (17).
En blanding av 16 (1,5 g, 1,04 mmol), trikloracetonitril (0,63 ml, 6,22 mmol) og kaliumkarbonat (0,26 g, 1,87 mmol) i diklormetan (15 ml) ble rørt i 16 timer ved romtemperatur. Løsningen ble filtrert og konsentrert. Den ble renset på en kiselgelkolonne (4/1 toluen/aceton + 1 °/oo trietylamin) for å kunne fremskaffe 17 (1,47 g, 89,6 %), TLC, RF 0,5 7/2 toluen/aceton.
Fremstilling 17
Allyl O- (2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2-O-acetyl-6-0-benzyl-3-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (2,6-di-0-benzyl-3-O-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -2-0-acetyl-6-O-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosid (18).
Delevulineringen av 15 (1,3 g, 0,87 mmol) ble utført i henhold til Fremgangsmåte 2 for å kunne fremskaffe 18(1,05 g, 86 %). [ a] o + 40 (c - 0,6, diklormetan). <1>H NMR, (CDCI3) 8 7,36-7,23 (m, 30H, 6 Ph), 5,83-5,78 (rn, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,50 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1"), 5,47 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1"), 5,25-5,21 (dd, 1H, J = 1,6 Hz, J = 17 Hz, OCH2 (CH:C^)), 5,16-5,13 (dd, 1H, J = 1,4 Hz, J = 10 Hz, OCH2 (CH:CM>)), 4,38 (d, 1H, J = 6,5 Hz, H-1"), 4,31 (d, 1H, J = 6,5 Hz, H-1), 4,08-4,02 (m, 1H, OChh (CH:CH2))f 3,59 (m, 1H, H-4'"), 3,67, 3,53, 3,39, 3,29 (4s, 12H, 4 OCH3), 2,09, 1,86 (2s, 6H, 2 Ac).
Fremstilling 18
Allyl O- (2,6-di-0-benzyl-4-O-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -
[O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosid (19).
En blanding av 18 (842 mg, 0,53 mmol) og 17 (1,17 g, 0,74 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 1. Produktet ble renset på en Toyopearl®
HW-50 kolonne (110 x 3,2 cm; 1/1 diklormetan/etanol) for å kunne fremskaffe 19 (1,44 g, 85 %). [cc]d + 57 (c = 1,01, diklormetan). * H NMR (CDCI3) d 7,35-7,20 (m, 60H, 12 Ph), 5,83-5,78 (m, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 5,24-5,21 (dd, 1H, OCH2 (ChhCWfe), 5,16-5,13 (dd, 1H, OCH2 (CH:CH2)), 3,59, 3,56, 3,51, 3,47, 3,33, 3,26 (6s, 24H, 8 OCH3), 2,75-2,35 (rn, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3) 2,15, 2,09, 1,85, 1,84 (4s, 15H, 4 Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3);
8 av de hovedanomeriske protonene: 5,48; 4,37; 4,29; 4,23 ppm.
Anal. beregnet for CiseCvHiss (2815,51): C, 66,56; H, 6,73. Funnet: C, 66,22; H, 6,75.
Fremstilling 19
O- (2,6-Di-0-benzyl-4-O-levulinyI-3-0-metyl-o>D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-a, p-D-glukopyranose (20).
Forbindelse 19 (720 mg, 0,25 mmol) ble behandlet som i Fremstilling 15. Produktet ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 og deretter 4/3 toluen/etylacetat) for å kunne fremskaffe 20 (555 mg, 78 %). [oi]d + 70 (c = 0,94, diklormetan). TLC, Rf 0,43,1/1 toluen/etylacetat.
Fremstilling 20
O- (2,6-Di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2-O-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-a, p-D-glukopyranose trikloracetimidat (21).
Forbindelse 20 (540 mg, 0,195 mmol) ble behandlet som i Fremstilling 16. Produktet ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 toluen/etylacetat + 1 °/oo trietylamin) for å kunne fremskaffe en blanding (a/p= 27/73) av imidatene 21 (455 mg, 80 %). TLC, RF 0,48, 3/2 toluen/etylacetat. 'H NMR (CDCI3) 5 8,60, 8,59 (2s, 1H, N:H a og p), 7,35-7,21 (m, 60H, 12 Ph), 2,75-2,40 (m, 4H, O (C:0) ChkChh (C:0) CH3), 2,16, 2,06, 2,04,1,85, 1,84 (5s, 15H, 4 Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) C^b).
<1>H NMR (CDCI3) 5 av de hovedanomeriske protonene: 6,50; 5,79; 5,51; 5,48; 4,29; 4,25 ppm.
Fremstilling 21
Fenyl 2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-1 -tio-a-D-glukopyranosid (22).
1,2,4,6-Tetra-0-acetyl-3-0-metyl-fJ-D glukopyranose 1 (5,23 g, 14,4 mmol) ble løst i toluen (45 ml). Tiofenol (3,0 ml, 28,8 mmol) ble tilsatt, etterfulgt av dråpevis tilsetning av trifluorboran dietyleterat (1,77 ml, 14,4 mmol) og blandingen ble deretter varmet til 50°C i 0,5 time. Den ble fortynnet med diklormetan, vasket med mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (5/2 sykloheksan/etylacetat) for å gi 22-a (1,00 g, 17 %) og 22-a (2,71 g, 46%).
22-a, Rf 0,44, 3/2 sykloheksan/etylacetat. [a]D + 230 (c = 1, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 435 (M+Na)<+>; +KF, 451 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,46-7,27 (m, 5H, Ph), 5,89 (d, 1H, J = 5,6 Hz, H-1), 5,05-4,97 (m, 2H, H-2 og H-4), 4,49-4,42 (m, 1H, H-5), 4,25-4,18 (m, 1H, H-6), 4,05-4,00 (m, 1H, H-6"), 3,66, (dd, 1H, J = 9,5 Hz, H-3), 3,51 (s, 3H, OCH3), 2,16, 2,12, 2,00 (3s, 9H, 3 Ac).
Anal. beregnet for Cis^OeS (412,46): C, 55,33; H, 5,87; S, 7,77. Funnet: C, 55,25; H, 5,90; S, 7,75.
Fremstilling 22
Fenyl 4,6-0-benzyliden-2,3-di-0-metyl-1 -tio-a-D-glykopyranosid (23).
Forbindelse 22 (970 mg, 2,35 mmol) ble løst i en 2/1 blanding av metanol og diklormetan (18 ml). 2M natriummetoksidløsning (150 ml) ble tilsatt. Etter 0,5 time ved romtemperatur ble blandingen nøytralisert med Dowex® 50 (H+) resin, filtrert og konsentrert.
a,a-Dimetoksytoluen (0,7 ml, 4,0 mmol) og kamfersulfonsyre (51 mg, 0,22 mmol) ble satt til grovreaksjonsblandingen over i acetonitril (22 ml). Blandingen ble rørt i 1 time, nøytralisert ved tilsetning av trietylamin (0,50 ml) og konsentrert.
Natriumhydrid (73,0 mg, 2,80 mmol) ble ved 0°C tilsatt en løsning av grovproduktet over og metyljodid (163uJ, 4,0 mmol) i N,N-dimetylformamid (9 ml). Blandingen ble rørt i 1 time og metanol ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med etylacetat, vasket med vann, tørket og konsentrert for å oppnå 23 i fast form (840 mg, 94%). Smp.: 178°C. [a]D + 330 (c = 1, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 411,4 (M+Na)<+>; +KF, 427,4 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,50-7,24 (m, 10H, 2 Ph), 5,71 (d, 1H, J = 3,4 Hz, H-1), 5,52 (s, 1H, C6H5CH), 3,62 (s, 3H, OCH3), 3,55 (s, 3H, OCH3).
Anal. beregnet for C21H24O5S (388,48): C, 64,92; H, 6,23; S, 8,25. Funnet: C, 64,87; H, 6,17; S, 7,85.
Fremstilling 23
Fenyl 6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-1-tio-a-D-glukopyranosid (24).
Forbindelse 23 (792 mg, 0,47 mmol) ble behandlet som i Fremstilling 4. Produktet ble renset på en kiselgelkolonne (7/2 og deretter 2/1 sykloheksan/- etylacetat) for å gi 24 (318 mg, 80 %). [a]D + 243 (c = 1, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 413 (M+Na)<+>; +KF, 429 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,52-7,22 (m, 10H, 2 Ph), 5,71 (d, 1H, J = 5,3 Hz, H-1), 3,64 og 3,49 (2s, 6H, 2 OCH3), 3,36 (dd, 1H, H-3).
Anal. beregnet for C21H26O5S (390,50): C, 64,59; H, 6,71; S, 8,21. Funnet: C, 64,05; H, 6,88; S, 7,74.
Fremstilling 24
Fenyl O- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -6-0-benzyl-2,3-di-O-metyl-1 -tio-a-D-glukopyranosid (25).
En blanding av 13 (436 mg, 0,47 mmol) og 24 (153 mg, 0,39 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 1. Produktet ble renset på en kolonne (Sephadex® LH20.1/1 etanol/diklormetan) for å fremskaffe rent 25 (309 mg, 68 %).
[a]D + 144 (c = 1, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 1175 (M+Na)<+>; +KF, 1191 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,51-7,21 (m, 25H, 5 Ph), 5,73 (d, 1H, J = 5,2 Hz, H-1), 5,48 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-1"), 4,46 (d, 1H, J = 8 Hz, H-1'), 3,7, 3,54, 3,5, 3,31 (4s, 12H, 4 OCH3), 2,70-2,41 (m, 4, H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,16, 2,01 (2s, 6H, 1 Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CHfe).
Anal. beregnet for CeaHTeOieS: C, 65,61; H, 6,64; S, 2,78. Funnet: C, 65,02; H, 6,60; S, 2,72.
Fremstilling 25
Metyl O- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (6-0-benzyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (27).
En løsning av N-jodsuccinimid (92 mg, 0,38 mmol) og triflinsyre (37,5 uJ, 0,38 mmol) i en 1/1 løsning av 1,2-dikloretan og etyleter (22 ml) ble, ved -25°C og under argon, tilsatt en blanding av 25 (451 mg, 0,39 mmol) og 26 (434 mg, 0,31 mmol), (P. Westerduin, et al. BioOrg. Med. Chem., 1994, 2,1267) i 1,2-dikloretan (7,5 ml) i nærvær av 4 Å molekylære siler (400 mg). Etter 30 minutter ble fast natriumhydrogenkarbonat tilsatt. Løsningen ble filtrert, vasket med natriumtiosulfatløsning, med vann, tørket og inndampet. Resten ble renset på en Sephadex® LH-20 kolonne (1/1 diklormethan/etanol) og deretter på en kiselgelkolonne (1/1 og deretter 2/3 sykloheksan/etylacetat) for å gi rent 27 (487 mg, 64%). [a]D + 63 (c = 0,54, diklormetan). TLC, Rf 0,28,2/1 sykloheksan/etylacetat. ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 2454 (M+Na)<+>; +KF, 2469 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 5 7,38-7,2 (m, 50H, 10 Ph), 3,56, 3,52, 3,48, 3,46, 3,44, 3,42, 3,39, 3,30, 3,17 (9s, 27H, 9 OCH3), 2,75-2,4 (m, 4H, O (C:0) CHzCH2C:0) CH3), 2,15, 1,98,1,97,1,87, (4s, 12H, 3 Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3); hovedanomeriske protoner: 5,57; 5,47; 5,30; 5,18; 4,57; 4,29; 4,08.
Fremstilling 26
Metyl O- (2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (2-0-acetyl-6-O-benzyl-3-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) -
(1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl- B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1 -4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (28).
Delevuliniseringen av 27 (498 mg, 0,2 mmol) ble utført i henhold til Fremgangsmåte 2 for å gi 28 (402 mg, 84 %). [a]D + 64 (c = 1, CH2CI2). ESIMS, positiv innstilling: m/z 2352,9 (M+NH4)<+.><1>H NMR (CDCI3) 8 7,38-7,20 (m, 50H, 10 Ph), 3,67, 3,52, 3,49, 3,46, 3,44, 3,41, 3,40, 3,28, 3,17 (9s, 27H, 9 Ac), 2,65 (d, 1H, J = 2,14 Hz, OH), 1,98, 1,96,1,87 (3s, 9H, 3 Ac); hovedanomeriske protonen 5,55; 5,49; 5,30; 5,18; 4,56; 4,31; 4,08.
Anal. beregnet for C127H152O41 (2334,48): C, 65,34; H, 6,56. Funnet: C, 65,40; H, 6,62.
Fremstilling 27
Metyl 0- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl)- (1-4) -O-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,6-di-O-benzyI-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-8-D-glykopyranosyl) - (1-4) ]4-0- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) -
(1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (29).
En blanding av 21 (340 mg, 1,16 mmol) og 28 (256 mg, 1,09 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 1. Resten ble renset på en Toyopearl® HW-40 kolonne (3,2 x 70 cm, 1/1 diklormetan/etanol) for å gi det rene 15-mer 29 (421 mg, 76 %). [ab + 65 (c = 1, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + KF, 2584,3 (M+2K)2+; 1736,5 (M+3K)<3*.><1>H NMR (CDCI3) 5 7,35-7,18 (rn, 105H, 21 Ph), 2,75-2,4 (m, 4H, O (C:0) CH2C^(C:0) CH3) 2,15, 1,97, 1,95, 1,87, 1,84, 1,83 (6s, 24H, 7 Ac, og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chh) hovedanomeriske protoner: 5,55; 5,48; 5,30; 5,18; 4,56; 4,29; 4,22; 4,08.
Fremstilling 28
Metyl O- (2,6-di-0-ben2yl-3-0-metyl-a-D-gluko-pyranosyl) - (1-4) -O- (2-O-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyranosyi) - (1-4) - [O- (2,6-di-0-benzyl-3-0-metyl-ct-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2-O-acetyl-6-O-benzyl-3-0-metyl-B-D-glykopyranosyl) - (1-4) ]4-0- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-4) -0- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (30).
Forbindelse 29 (342 mg, 0,067 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 2 for å gi 30 (253 mg, 75 %). [ct]D + 59 (c = 0,92, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + KF, 2535,6 (M+2K)<2+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 av de hovedanomeriske protonene: 5,55; 5,50; 5,48; 5,30; 4,56; 4,30; 4,22; 4,08.
Anal. beregnet for C275H328O85 (4993,37): C, 65,57; H, 6,60. Funnet: C, 65,09; H, 6,57.
Fremstilling 29
Metyl O- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyransoyl) - (1-4) - [O- (2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glykopyranosyl) - (1-4) fc-O- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) -
(1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1 -4) -2,3,6-tri-O-benzyl-ot-D-glukopyranosid (31).
En blanding av 17 (32,7 mg, 20,6 mmol) og 30 (80,7 mg, 16,3 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 1. Produktet ble renset på en Toyopearl® HW-40 kolonne (1/1 diklormetan/etanol) for å gi 19-mer31 (60 mg, 59 %). [a]D + 61 (c = 0,82, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 2162,4 (M+SNa)<3*>; +KF, 2178,5 (M+3K)<3*>.
* H NMR (CDCI3) 8 av de hovedanomeriske protonene: 5,55; 5,48; 5,30; 5,17; 4,56; 4,22; 4,08.
Fremstilling 30
Etyl O- (4,6-O-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -6-0-trityl-1-tio-p-D-glukopyranosid (33).
Til en suspensjon av 32 (50,0 g, 0,105 mol) (J. Westman og M. Nilsson, J. Carbohydr. Chem., 1995, 14 ( 7), 949-960) i diklormetan (620 ml) under argon ble trietylamin (35 ml, 0,252 mol), tritylklorid (29,3 fg, 0,105 mol) og 4-dimetylaminopyridin (1,28 g, 10 mmol) tilsatt. Blandingen ble opprettholdt ved tilbakeløp i 2 timer (TLC), deretter avkjølt til romtemperatur, fortynnet med diklormetan (500 ml) og deretter suksessivt vasket med kald vandig 10 % kaliumhydrogensulfatløsning, med vann og med mettet natriumkloirdløsning. Løsningen ble tørket, konsentrert og filtrert på en kiselgelkolonne (65/35 og deretter 50/50 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe grovproduktet 33, som var tilstrekkelig rent for å bli anvendt i det følgende trinnet. En analytisk prøve ble kromatografert. [a]o + 53 (c = 0,74, diklormetan). ESIMS, negativ innstilling: m/z 715 (M-H)\ 'H NMR. (CDzCIa) 8 7,52-7,25 (m, 20H, 4Ph), 5,42 (s, C6H5CH), 4,97 (d, J = 3,5 Hz, H-1'), 4,40 (d, J = 9,6 Hz, H-1), 3,82 (t, J = 9,3 Hz, H-3"), 3,70, 3,68 (m, 2H, H-3, H-4), 3,60 (dd, J = 2,0,11,0 Hz, H-6a), 3,55 (td, J = 5,2, 9,7, 9,7 Hz, H-5'), 3,49-3,45 (rn, 3H, H-2, H-2<1>, H-5), 3,38 (dd, J = 10,5 Hz, H-6'a), 3,33 (dd, H-6'b), 3,30-3,27 (m, 2H, H-4', H-6b), 2,90-2,77 (m, 2 H, SC^CH3), 1,40-1,37(t,3H,CH2CH3).
Anal. beregnet for C40H44O10S: C 67,02; H, 6,19; S, 4,47. Funnet: C, 66,83; H, 6,19; S, 4,19.
Fremstilling 31
Etyl O- (4,6-0-benzyliden-2,3-di-0-metyl-a-D-gluko-pyranosyl) - (1-4) -2,3-di-O-metyl-6-O-trityM -tio-p-D-glukopyranosid (34).
Metyljodid (34 ml, 0,536 mol) ble satt dråpevis, under argon, til en løsning av forbindelse 33 (64,1 g) i N,N-dimetylformamid (600 ml). Løsningen ble avkjølt til 0°C og natriumhydrid (13,5 g, 0,536 mol) ble sakte tilsatt. Suspensjonen ble rørt i 2 timer ved romtemperatur og deretter avkjølt til 0°C og metanol (35 ml) ble dråpevis tilsatt og, etter røring i 2 timer ble blandingen fortynnet i etylacetat (500 ml) og vann (600 ml). Den vandige fasen ble ekstrahert med etylacetat og de organiske fasene ble vasket med vann, tørket og konsentrert. Resten 34 var tilstrekkelig ren for det følgende trinnet. En analytisk prøve ble renset på en kiselgelkolonne (70/30 sykloheksan/aceton). [oc]d + 45 (c = 0,83, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 795 (M+Na)<+>; +KF, 811 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,52-7,19 (m, 20H, 4Ph), 5,51 (d, J = 3,3 Hz, H-1'), 5,43 (s, C6H5CH), 4,45 (d, J = 9,8 Hz, H-1), 3,60, 3,59, 3,51, 3,49 (4s, 12H, 40CH3), 2,86 (q, 2H, J = 7,5 Hz, SCHzCH3), 1,40 (t, 3H, SCH2CHi).
Anal. beregnet for C44H52O10S: C, 68,37; H, 6,78; S, 4,15. Funnet: C, 68,28; H, 6,98; S, 4,09.
Fremstilling 32
Etyl O- (2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -2,3-di-0-metyl-1 -tio-ot-D-glukopyranosid (35).
En suspensjon av grovprodukt 34 (67,4 g) ble varmet ved 80°C i 2 timer i vandig 60 % eddiksyreløsning (470 ml). Reaksjonsblandingen ble avkjølt, filtrert og konsentrert. Resten ble behandlet med natriummetoksid (940 mg) i metanol (200 ml) i 1 time. Løsningen ble deretter nøytralisert med Dowex® 50WX4 (H<+>) resin og deretter filtrert, konsentrert og renset på en kiselgelkolonne (60/40 toluen/aceton) for å fremskaffe 35 (27,9 g, 60 % i løpet av tre trinn). [a]D + 26 (c = 1,07, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, +NaCI, 465 (M+Na)<+>; +KF, 481 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,62 (d, J = 3,9 Hz, H-V), 4,35 (d, J = 9,8 Hz, H-1), 3,64, 3,64, 3,59, 3,58 (4s, 12H, 40CH3), 1,29 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH2CHs).
Anal. beregnet for deH^OioS. H20: C, 46,94; H, 7,87; S, 6,96. Funnet: C, 47,19; H, 7,72; S, 6,70.
Fremstilling 33
Etyl O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -6-0-acetyl-2,3-di-O-metyM -tio-B-D-glukopyranosid (36).
En løsning av triol 35 (5,86 g, 13,2 mmol) og N-acetylimidazol (3,21 g, 29,1 mmol) i 1,2-dikloretan (120 ml) ble tilbakeløpt i 16 timer. Ytterligere en del av N-acetylimidazol (440 mg, 3,96 mmol) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 4 timer. Den ble plassert til avkjøling ved romtemperatur og metanol (2 ml) ble deretter tilsatt. Blandingen ble rørt i ytterligere 1 time og deretter fortynnet med diklormetan (1 L), suksessivt vasket med kald vandig 1M saltsyreløsning, med kaldt vann, med mettet vandiq natriumhvdroqenkarbonatløsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble kromatografert (3,5/1 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe diacetatet 36 (3,97 g, 57 %). [ a] o+ 33 (c = 1,90, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, +NaCI, 549
(M+Na)<+>; +KF, 565 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,51 (d, J = 3,9 Hz, H-1'), 4,34 (d, J = 9,8 Hz, H-1), 3,64, 3,63, 3,59, 3,56 (4s, 12H, 40CH3), 2,11, 2,06 (2s, 6H, 2Ac), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C22H38O12: C, 50,17; H, 7,27; S, 6,09. Funnet: C, 50,15; H, 7,49;
S, 5,89.
Fremstilling 34
Etyl O- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-1 -tio-p-D-glukopyranosid (37).
Til en løsning av diacetat 36 (19,4 g, 36,8 mmol) i dioksan (400 ml) under argon ble levulinsyre (7,53 ml, 73,5 mmol), 1- (3-dimetylaminopropyl) -3-etylkarbodiimidhydroklorid (14,1 g, 73,5 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (900 mg, 7,35 mmol) tilsatt. Blandingen ble rørt i 3,5 time, fortynnet med diklormetan (1,5 L) og deretter suksessivt vasket med vann, med vandig 10 % kaliumhydrogensulfatløsning, med vann, med vandig 2 % natriumhydrogenkarbonatløsning, med vann og deretter tørket og konsentrert. Resten ble kromatografert (97/3 og deretter 79/21 diklormetan/aceton) for å kunne fremskaffe derivatet 37 (21,8 g, 95 %). [ a] o + 40 (c = 0,72, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 647 (M+Na)<+>; +KF, 663 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,56 (d, J = 3,9 Hz, H-1<1>), 4,35 (d, J = 9,8 Hz, H-1), 3,64, 3,60, 3,58, 3,55 (4s, 12H, 40CH3), 2,76-2,71 (m, 4H, O (C:0) Ctf2CH2 (C:0) CH3), 2,19, 2,08, 2,07 (3s, 9H, 2Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH2CA£).
Anal. beregnet for C^H^OuS: C, 51,91; H, 7,10; S, 5,13. Funnet: C, 51,88; H, 7,05;
S, 4,96.
Skjema 10: Syntese av disakkarider 38 og 40
Fremstilling 35
0- (6-0-Acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a, p-D-glukopyranose trikloracetimidat (38).
Til en løsning av tioglykosid 37 (9,53 g, 15,3 mmol) i en 1/1 diklormetan/- etyleter-blanding (180 ml) ble vann tilsatt (1,4 ml, 76,3 mmol), N-jodsuccinimid (6,84
g, 30,5 mmol) og sølvtriflat (0,51 g, 1,98 mmol). Etter 15 minutter (TLC) ble mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning (5 ml) tilsatt og reaksjonsblandingen ble fortynnet i diklormetan (1,5 L), vasket med vann, vandig 1M natriumtiosulfatløsning og vandig 2 % natriumhydrogenkarbonatløsning. Løsningen ble tørket og konsentrert og resten ble renset på en kiselgelkolonne (80/40 og deretter 100/0 etylacetat/- sykloheksan) for å fremskaffe et fast stoff som ble brukt, uten karakterisering, i det følgende trinnet. En løsning av forbindelsen over (7,88 g, 13,6 mmol) i diklormetan (120 ml) under argon ble behandlet med cesiumkarbonat (7,08 g, 21,7 mmol) og trikloracetonitril (6,81 ml, 67,9 mmol). Etter 40 minutter (TLC) ble blandingen filtrert, konsentrert og renset (85/15 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe imidatet 38 (9,16 g, 83 % i løpet av to trinn). [cc]d + 118 (c = 1,00, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z +NaCI, 746 (M+Na)<+>; 741 (M+NH4)<+.><*>H NMR (CDCI3) 8 8,66, 8,65 (2s, 1H, a og p N:H), 6,52 (d, J = 3,6 Hz, H-1 a), 5,70 (d, J = 7,5Hz, H-1P), 5,58 (d, J = 3,7Hz, H-1'), 2,78-2,57 (m, 4H, O (C:0) ChkChk (C:0) CH3), 2,18, 2,07, 2,06 (3s,
9H, 2Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3).
Anal. beregnet for C27H4oCl3N015. 0,5 H20: C 44,18; H, 5,63; N, 1,98. Funnet: C, 44,14; H, 5,61; N, 1,97.
Fremstilling 36
2- (Trimetylsilyl) etyl 0- (6-0-acetyl-4-0-Ievulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a, B-D-glukopyranosid (39).
Tioglykosidet 37 (10,6 g, 16,94 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 3 med 2- (trimetylsilyl) etanol (4,8 ml, 33,90 mmol) i en 1/2 diklormetan/etyleter-blanding (105 ml). Resten som ble fremskaffet ble renset med
kromatografi (1/1 aceton/diklormetan) for å kunne fremskaffe forbindelse 39 (9,80 g, 85 %) i form av en blanding av anomerer (ot/B 65/35). ESIMS, positiv innstilling: m/z +NaCI, 703 (M+Na)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,58 (d, J = 3,9 Hz, H-1'), 4,94 (d, J = 3,5 Hz, H-1 a), 4,26 (d, J = 7,7 Hz, H-1B), 2,76-2,56 (m, 4H, O (C:0) ChkCHz( C\ 0) CH3), 2,17, 2,08, 2,05 (3s, 9H, 2Ac og 0(C:0) CH2CH2(C:0)C^), 1,18-0,88 (m, 2H, OCH2CH2Si (CH3)3), 0,02 (s, 9H, CH2CH2Si { Chh) 3).
Anal. beregnet for C3oH52015Si: C, 52,92; H, 7,69. Funnet: C, 53,29; H, 7,75.
Fremstilling 37
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - 6-0-acetyl-2,3-di-C-metyl-a, B-D-glukopyranosid (40).
Forbindelse 39 (9,41 g, 13,82 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 2 med hydrazinacetat (10 mot/mol) i en 1/2 toluen/etanol-blanding (21 ml/mmol). Resten ble kromatografert (60/40 aceton/toluen) for å kunne fremskaffe 40cc(4,81 g, 60 %) så vel som en 40a/B-blanding (3,06 g, 37 %). 40a: [a]D + 132 (c = 0,61, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 605 (M+Na)<+>; + KF, 621 (M+K)<+>. 'H NMR (CDCI3) 8 5,55 (d, J = 3,8Hz, H-V), 4,95 (d, J = 3,6 Hz, H-1), 2,10, 2,08 (2s, 6H, 2Ac), 1,16-0,89 (m, 2H, OCH2CH2Si (CH3) 3), 0,02 (s, 9H,
OCH2CH2Si (CH3) 3).
Anal. beregnet for C25H460i3Si: C, 51,53; H, 7,96. Funnet: C, 51,37; H, 8,06.
Skjema 11: Syntese av tetrasakkarid 41
Fremstilling 38
2- (Trimetylsilyl) etyl 0- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyrano-syl) -
(1 -4) -]2-6- (0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (41).
Tioglykosid 37 (4,21 g, 6,74 mmol) og glykosylmottakeren 40 (3,57 g, 6,13 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 3 i en 1/2 diklormetan/etyleter-blanding (105 ml). Resten ble renset med kromatografi på kiselgel (3/1 og deretter 9/1 aceton/sykloheksan) for å kunne fremskaffe 41 (4,81 g, 69 %). [a]o+ 143 (c =
0,56, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 1167 (M+Na)<+>; + KF, 1183 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,57 (d, J = 3,9Hz, H-1'"), 5,44, 5,41 (2d, J = 3,8Hz, H-1", H-1'), 4,96 (d, J = 3,6 Hz, H-1), 2,78-2,58 (m, 4H, O (C:0) C^CHfe (C:0) CH3), 2,18, 2,12, 2,12, 2,09, 2,06, (5s, 15H, 4Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 1,21-0,97 (m,
2H, OCH2CH2Si (CH3) 3), 0,03 (s, 9H, OCH2CH2Si (CH3) 3).
Anal. beregnet for CsoHwO^Si: C, 52,44; H, 7,39. Funnet: C, 52,29; H, 7,46.
Skjema 12: Syntese av tetrasakkarid 42
Fremstilling 39
Etyl 0- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]2-6- (0-acetyl-2,3-di-0-metyl-1 -tio-B-D-glukopyranosid (42).
En løsning av imidat 38 (1,10 g, 1,52 mmol) og glykosylmottaker 36 (806 mg, 1,38 mmol) ble behandlet i en 1/2 diklormetan/etyleterblanding (22 ml) i henhold til Fremgangsmåte 1. Produktet ble renset med kromatografi på kiselgel (2,5/1 og deretter 3/1 etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe 42 (1,12 g, 71 %). [oc]d + 95 (c = 1,00, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 1111 (M+Na)<+>; + KF, 1127 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 5 5,55 (d, J = 3,9Hz, H-1<*>"), 5,39, 5,37 (2d, J = 3,8 og 3,9 Hz, H-1", H-1'), 4,34 (d, J = 9,7Hz, H-1), 2,84-2,51 (m, 6H, SC^>CH3, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,17, 2,10, 2,09, 2,08, 2,04, (5s, 15H, 4Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chh), 1,30 (t, 3H, J 7,4Hz, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C47H76O26S: C, 51,83; H, 7,03; S, 2,94. Funnet: C, 51,66; H, 7,02; S, 2,94.
Fremstilling 40
2- (Trimetylsilyl) etyl [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - ]3-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (43).
Forbindelse 41 (4,71 g, 4,11 mmol) ble reagert som i Fremstilling 37 for å kunne fremstille, etter kolonnekromatografi (3/2 sykloheksan/aceton), derivatet 43 (4,11 g, 95 %). [oc]d+ 154 (c = 0,63, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 1069 (M+Na)<+>; + KF, 1085 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,46, 5,46, (2d, 3H, J = 3,9Hz, H-1', H-1", H-1"'), 4,95 (d, J = 3,5Hz, H-1), 2,81 (d, J = 4,4Hz, OH), 2,11, 2,09, 2,08 (3s, 12H, 4Ac), 1,19-0,97 (m, 2H, OCH2CH2Si (CH3) 3), 0,03, (s, 9H, OCH2CH>Si (CHb) 3).
Anal. beregnet for C^HTsO^Si: C, 51,61; H, 7,51. Funnet: C, 51,39; H, 7,54.
Fremstilling 41
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]6-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (44).
Tioglykosid 42 (3,86 g, 3,54 mmol) og glykosylmottakeren 43 (3,60 g, 3,44 mmol) ble behandlet i henhold til Fremstilling 38. Produktet ble kromatografert (7/2 og deretter 2/1 diklormetan/aceton) for å kunne fremskaffe 44 (5,71 g, 80 %). [oi]d + 161 (c = 0,65, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2072,8, kjemisk masse = 2074,2, eksperimentell masse = 2074 ± 1 a.m.u. <*>H NMR (CDCI3) 8 5,54, (d, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR), 5,47-5,40 (m, 6H, H-1), 4,95 (d, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 2,84-2,51 (m, 4H, O (C:0) ChkChk (C:0) CH3), 2,17, 2,13, 2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 27H, 8Ac og O (C:0) CH2CH2(C:0)CH3), 1,18-0,97 (m, 2H, OCH2CH2Si (CH3) 3), 0,03 (s, 9H, OCH2CH2Si(C^3) 3).
Anal. beregnet for CgoHueOsiSi: C, 52,12; H, 7,19. Funnet: C, 51,98; H, 7,25.
Fremstilling 42
2- (Trimetylsilyl) etyl [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - ]7-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (45).
1M Hydrazinhydratløsning i en 3/2 eddiksyre/pyridin-blanding (7,3 ml), ved 0°C, ble satt til en løsning av forbindelse 44 (3,00 g, 1,45 mmol) i pyridin (5 ml). Etter rø ring i 20 minutter ble reaksjonsblandingen inndampet, fortynnet i diklormetan (400
ml), vasket med vandig 10 % kaliumhydrogensulfatløsning, vann, vandig 2 % natriumhydrogenkarbonatløsning og vann. Løsningen ble tørket og konsentrert og resten ble kromatografert for å fremstille 45 (2,43 g, 85 %). [ci]d + 167 (c - 0,57, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 1974,8, kjemisk masse = 1976,1, eksperimentell masse = 1975,4 ± 2 a.m.u. <*>H NMR (CDCI3) 8 5,47-5,40 (m, 7H, H-1), 4,95 (d, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 2,80 (d, J = 4,4Hz, OH), 2,13, 2,11, 2,10, 2,08, 2,07 (5s, 24H, 8Ac), 1,18-0,97 (m, 2H, OCH2CH2Si (CH3) 3), 0,03 (s, 9H, OCH2CH2Si { Chk) 3).
Anal. beregnet for CssH^C^gSi: C, 51,66; H, 7,24. Funnet: C, 51,32; H, 7,26.
Fremstilling 43
2- (Trimetylsilyl)etyl O- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]i0-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosid (46).
Forbindelse 42 (1,35 g, 1,24 mmol) og forbindelse 45 (2,38 g, 1,20 mmol) ble behandlet i henhold til Fremstilling 38. Resten ble kromatografert (4/3 sykloheksan/aceton) for å kunne fremskaffe 46 (2,56 g, 71%). [ a] o + 166 (c = 0,88, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 3001,3, kjemisk masse = 3003,2, eksperimentell masse = 3004 ± 1 a.m.u. <1>H NMR (CDCI3) 8 5,54,
(d, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR), 5,47-5,40, (m, 10H, H-1), 4,95 (d, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 2,81-2,51 (m, 4H, O (C:0) ChkChk (C:0) CH3), 2,17, 2,13, 2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 39H, 12Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk), 1,17-0,96 (m, 2H, OC^CHfeSi (CH3) 3), 0,03 (s, 9H, OCH2CH2Si { Chk) 3).
Anal. beregnet forCi3oH212075Si: C, 51,99; H, 7,12. Funnet: C, 51,63; H, 7,12.
Fremstilling 44
(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]i0-6-O-acetyl-2,3-di-O-metyl-
ot, p-D-glukopyranose trikloracetimidat (47).
(a) En løsning av glykosid 46 (400 mg, 0,133 mmol) i en 2/1 trifluoreddiksyre/- diklormetan-blanding (2 ml) ble rørt i 1,5 time (TLC). Løsningen ble fortynnet i en 2/1 toluen/n-propylacetat-blanding (12 ml), konsentrert og inndampet sammen med
toluen (5x10 ml). Resten ble renset (4/3 aceton/sykloheksan) for å kunne fremskaffe et fast stoff (364 mg). (b) Det faste stoffet som ble fremskaffet over ble løst i diklormetan (2,5 ml). Cesiumkarbonat (65 mg, 0,200 mmol) og trikloracetonitril (63 ml, 0,620 mmol) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 2,5 time og deretter filtrert (Celite), konsentrert og renset på en kiselgelkolonne (50/50/0,1 sykloheksan/aceton/trietylamin) for å kunne fremskaffe imidatet 47 (348 mg, 86 %). [(x]d + 185 (c = 0,91, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 3044,1, kjemisk masse = 3047,3, eksperimentell masse = 3046,9 ± 0,2 a.m.u. <1>H NMR (CD2CI2) 8 8,61, 8,58 (2s, 1H, (a og B N:H), 6,35 (d, J = 3,7Hz, H-1 a enhet R), 5,59, (d, J = 7,5Hz, H-1b enhet R), 5,38 (d, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR), 5,32-5,25 (m, 10H, H-1), 2,64-2,40 (m, 4H, O (C:0) ChkOH2 (C:0) CH3), 2,02, 1,96, 1,95, 1,94,1,93,1,89 (6s, 39H, 12Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Anal. beregnet for Ci27H2ooCI3N025: C, 50,06; H, 6,61; N, 0,46. Funnet: C, 49,93; H, 6,52; N, 0,42.
Fremstilling 45
(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]2-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a, B-D-glukopyranose trikloracetimidat (48).
Forbindelse 41 (200 mg, 0,174 mmol) ble behandlet i henhold til Fremstilling 44. Reaksjonsblandingen ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe imidatet 48 (230 mg, 77 %). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 1210 (M+Na)<+>; + KF, 1226 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 8,66-8,64 (2s, 1H, aog B N:H), 6,51 (d, J = 3,6Hz, H-1 B), 5,71 (d, J = 7,5Hz, H-1 B), 2,90-2,52 (m, 4H, O (C:0) C^CH2 (C:0) CH3), 2,17, 2,11, 2,11, 2,09, 2,05 (5s, 4Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Fremstilling 46
Metyl O- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -
[O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]2-0- (benzyl-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-ido-pyranosyluronat) - (1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (49).
Imidatet 48 (73 mg, 0,061 mmol) og glykosylmottakeren 26 (82 mg, 0,059 mmol) ble behandlet i henhold til Fremstilling 39. Forbindelsen ble renset på en Sephadex® LH-20 kromatografikolonne (1/1 diklormetan/etanol) og deretter på en kiselgelkolonne (3/1 toluen/aceton) for å fremskaffe derivatet 49 (98 mg, 69 %). [a]o + 95 (c = 1,01, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2414,97, kjemisk masse = 2416,97, eksperimentell masse = 2416,2.<1>H NMR (CDCI3) 8 7,43-7,20 (m, 30H, 6Ph), 5,55 (d, J = 3,9Hz, H-1 enhet NR), 5,50 (d, J = 3,9Hz, H-1 enhet NR-3), 5,44, 5,38 (2d, J = 3,7 og 3,9Hz, H-1 enhet NR-1, enhet NR-2), 5,29 (d, J = 6,8Hz, H-1 enhet R-1), 5,17 (d, J = 3,5Hz, H-1 enhet R-2), 4,56 (d, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 4,10 (d, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-3), 2,81-2,50 (m, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,17, 2,15, 2,11, 2,09, 2,05, 2,00 (7s, 21H, 6Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Anal. beregnet forCi^HiseCbOsi'. C, 59,63; H, 6,59. Funnet: C, 59,23; H, 6,58.
Fremstilling 47
Metyl [O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-cc-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]3-0- (benzyl-2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranosyluronat) -
(1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (50).
Oktasakkaridet 49 (120 mg, 0,050 mmol) ble reagert som i Fremstilling 37. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (3/1 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe forbindelse 50 (95 mg, 83 %). [o.]D + 80 (C = 0,62, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2316,9, kjemisk masse = 2318,4, eksperimentell masse = 2318,2 ± 0,4 a.m.u. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,42-7,12 (m, 30H, 6Ph), 5,50, 5,46, 5,43, 5,40 (d, J = 3,9, 3,9, 3,7, 3,7Hz, H-1 enhet NR, enhet NR-1, enhet NR-2, enhet NR-3), 2,14, 2,10, 2,09, 2,08, 2,00, 1,88 (6s, 18H, 6Ac).
Anal. beregnet for C115H152O49: C, 59,57; H, 6,60. Funnet: C, 59,49; H, 6,61.
Fremstilling 48
Metyl O- (6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -
[0- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]15-0- (benzyl-2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (benzyl-2,3-di-0-metyl-a-L<:>ido-pyranosyluronat) - (1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (51).
Imidatet 47 (84 mg, 0,027 mmol) ble behandlet med glykosylmottakeren 50 (62 mg, 0,027 mmol) i henhold til Fremstilling 39. Resten ble først renset på en kolonne fra ToyopearKE) HW-40 og deretter på en kiselgelkolonne (1/1 sykloheksan/- aceton) for å kunne fremskaffe derivatet 51 (71 mg, 51 % ikke optimalisert). [ a] o + 136 (c = 0,95, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 5200,11, kjemisk masse = 5203,39, eksperimentell masse = 5203,5.<1>H NMR (CDCI3) 8 7,42-7,18 (m, 30H, 6Ph), 5,54 (d, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR), 5,51-5,40 (m, 15 H-1), 5,30 (d, J = 6,8Hz, H-1 enhet R-1), 5,17 (d, J = 3,5Hz, H-1 enhet R-2), 4,56
(d, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 4,09 (d, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-3), 2,85-2,53 (m, 4H, O (C:0) CHzCHz (C:0) CH3), 2,17, 2,16, 2,13, 2,11, 2,08, 2,05, 2,00, 1,88 (8s, 57H, 18Ac og O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3).
Anal. beregnet for C24oH35oOi23.4H20: C, 54,64; H, 6,84. Funnet: C, 54,51; H, 6,79.
Fremstilling 49
Etyl O- (4,6-O-p-metoksybenzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -1-tio-B-D-glukopyranosid (53).
Anisaldehyd dimetylacetal (35,8 ml, 0,21 mol) og kamfersulfonsyre (4,44 g, 19,1 mmol) ble, ved +5°C og under argon, satt til en løsning av forbindelse 52 (73,89 g, 0,19 mmol) (W. E. Dick Jr et J. E. Hodge, Methods in Carbohydrate Chemistry, 7, 1976,15-18) i en 3,5/1 acetonitril/N,N-dimetylformamid-blanding (990 mmol). Etter røring i 1,5 time ved romtemperatur, ble blandingen nøytralisert ved tilsetning av trietylamin (2,96 ml, 21,0 ekv.). Blandingen ble konsentrert og sirupen ble renset på en kiselgelkolonne (100/0 og deretter 50/50 diklormetan/metanol) for å kunne fremskaffe 53 (58,6 g, 61 %, ikke optimalisert). [ a] o + 47 (c = 1,03, metanol). ESIMS, positiv innstilling: m/z, 503 (M-H)\ <*>H NMR (CD3OD) 5 7,41, 6,89 (2d, 4H, CH3OC6H4), 5,51 (s, CHC6H4), 5,20 (d, J = 3,6Hz, H-V), 4,39 (d, J = 7,1 Hz, H-1), 3,78 (s, 3H, CH30C6H4), 2,75 (q, 2H, J = 7,0Hz, SCH2CH3), 1,29 (t, 3H, SCH2C^). Anal. beregnet for C22H32OnS: C, 52,37; H, 6,39; S, 6,35. Funnet: C, 52,15; H, 6,61; S, 5,84.
Fremstilling 50
Etyl O- (2,3-di-0-acetyl-4,6-p-metoksybenzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - 2,3,6-tri-0-acetyl-1 -tio-B-D-glukopyranosid (54).
Trietylamin (65 ml, 0,47 mol) og eddikanhydrid (89 ml, 0,94 mol) ble, ved 0°C, dråpevis satt til en suspensjon av 53 (47,22 g, 93,6 mmol) i diklormetan (450 ml). 4-Dimetylaminopyridin (5,71 g, 46,8 mmol) ble deretter tilsatt og blandingen ble rørt i 1,5 time ved romtemperatur. Reaksjonen ble stoppet med tilsetning av metanol (45 ml, 1,12 mol) og deretter suksessivt vasket med kald vandig 10 % kaliumhydrogen-sulfatløsning, vann, mettet natriumhydrogenkarbonatløsning og vann. Løsningen ble tørket, konsentrert og krystallisert (sykloheksan/etylacetat) for å kunne fremskaffe 54 (64,9 g, 97 %). [a]D + 21 (c = 1,00, diklormetan). pf 213-215°C. ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 737 (M+Na)<+>, + KF, 753 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 5 7,34, 6,86 (2d, 4H, CH3OC6H4), 5,43 (s, CWC6H4), 5,34 (d, J = 4,1 Hz, H-1'), 4,54 (d, J = 9,9Hz, H-1), 3,78 (s, 3H, CH30C6H4), 2,74-2,60 (m, 2H, SC^CH3), 2,10, 2,06, 2,03, 2,01 (4s, 15H, 5Ac), 1,26 (t, 3H, SCH2CH3).
Anal. beregnet for C32H42O16S: C, 53,78; H, 5,92; S, 4,49. Funnet: C, 53,74; H, 6,08; S, 4,40.
Fremstilling 51
Etyl 0- (2,3-di-0-acetyl-4-p-metoksybenzyl-a-D-giukopyranosyl) - (1-4) -2,3,6-tri-0-acetyl-1-tio-p-D-glukopyranosid (55) og etyl O- (2,3-di-0-acetyl-4-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -2,3-di-o-acetyl-1-tio-p-D-glukopyranosid (56).
En suspensjon av 54 (25,0 g, 35,0 mmol), boran/trimetylamin-kompleks (20,4 g, 0,28 mol) og molekylære siler (33 g, 4Å) ble rørt i 1 time under argon i toluen (810 ml). Blandingen ble avkjølt til 0°C og aluminiumklorid (14,0 g, 0,11 mol) ble sakte tilsatt. Reaksjonsmediet ble rørt i 25 minutter (TLC), helt over i kald, vandig 20 % kaliumhydrogensulfatløsning, rørt i 1 time ved 0°C og deretter filtrert (Celite). Den organiske fasen ble vasket med vann, med vandig 2 % natriumhydrogenkarbonat-løsning, med vann, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne for å kunne fremstille 55 (7,37 g, 29 %, ikke optimalisert) og 56 (1,36 g, 6 %). En analytisk prøve av 55 ble krystallisert fra en sykloheksan/etylactat-blanding. [cx]d + 30 (c = 1,00, diklormetan. Smp. 151-153°C. ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 739 (M+Na)<+>, + KF, 755 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 5 7,19, 6,87 (2d, 4H, CH3OC6H4), 5,36 (d, J = 3,5Hz, H-1'), 4,54 (s, 2H, C6H4CH2), 4,53 (d, J = 9,0Hz, H-1), 2,70-2,65 (m, 2H, SCHaCflfe).
Anal. beregnet for C32H42016S: C, 53,62; H, 6,19; S, 4,47. Funnet: C, 53,57; H, 6,21; S, 4,43.
Forbindelse 56: [ a] o + 19 (c = 1,11, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 697 (M+Na)<+>, + KF, 713 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 87,17, 6,84 (2d, 4H, CH3OC6H0, 5,36 (d, J = 4,5Hz, H-1'), 4,54 (d, J = 10,1Hz, H-1), 4,49 (s, 2H, C6H4C42), 2,69-2,64 (m, 2H, SC4>CH3), 2,02, 2,01, 2,00,1,96 (4s, 12H, 4Ac), 1,25 (t, 3H, SCHzC^j).
Anal. beregnet for C3oH42Oi5S: C, 53,40; H, 6,27; S, 4,75. Funnet: C, 53,29; H, 6,39; S, 4,53.
Fremstilling 52
Etyl O- (2,3-tri-0-acetyl-4-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -2,3,6-tri-O-acetyI-1-tio-B-D-glukopyranosid (57).
Eddikanhydrid (1,47 ml, 15,5 mmol) ble, ved 0°C, satt til en blanding av 55 (5,6 g, 7,77 mmol), trietylamin (1,19 ml, 8,54 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (190 mg, 1,55 mmol) i diklormetan (40 ml). Etter røring i 40 minutter (TLC) ved romtemperatur, ble blandingen fortynnet med diklormetan (50 ml) og vasket med kald, vandig 10 % kaliumhydrogensulfatløsning, vann, mettet natriumhydrogen-karbonatløsning og vann. Løsningen ble tørket og konsentrert og resten ble renset på en kiselgelkolonne (35/65 etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe 57 (5,66 g, 96 %). [oc]d + 44 (c = 1,03, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, + NaCI, 781 (M+Na)<+>, + KF, 797 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCfe) 5 7,15, 6,85 (2d, 4H, CH3OC6Hi), 5,30 (d, J = 4,2Hz, H-1'), 4,53 (d, J = 10,0Hz, H-1), 2,69-2,64 (m, 2H, SCH2CH3), 2,09, 2,07, 2,04, 2,01, 2,00,1,98 (6s, 18H, 6Ac), 1,25 (t, 3H, SCH2Cffe).
Anal. beregnet for Ca^eOiyS: C, 53,82; H, 6,11; S, 4,22. Funnet: C, 53,77; H, 6,24; S, 4,09.
Fremstilling 53
Etyl 4,6-0-benzyliden-2,3-di-0-metyl-1 -tio-B-D-glukopyranosid (59).
Natriumhydrid (500 mg, 19,9 mmol) ble, ved 0°C, satt til en blanding av forbindelse 58 (2,59 g, 8,29 mmol) (A. F. Bochkov et al., Izv. Akad. Nauk SSSR, Ser.
Khim. (1968), (1), 179) og metyljodid (1,70 ml, 19,9 mmol) i N,N-dimetylformamid (25 ml) og blandingen fikk returnere til en temperatur på 20°C. Blandingen ble rørt i 30
minutter (TLC) og metanol ble deretter tilsatt. Blandingen ble helt over i vann og
ekstrahert med etylacetat. Den organiske fasen ble suksessivt vasket med vandig 1M natriumtiosulfatløsning og vann, tørket og konsentrert. Resten ble triturert i
etyleter for å kunne fremskaffe 59 (0,42 g, 15 %); rensing av opphavsløsningene på i en kiselgelkolonne (12/1 toluen/aceton) etterfulgt av krystallisering muliggjorde
fremskaffelsen av ytterligere en fraksjon av 59 (1,6 g, totalt utbytte: 71 %). Smp.: 108°C. [cc]d-78 (c = 1,00, diklormetan). LSIMS, positiv innstilling: m/z tioglyserol + NaCI, 363 (M+Na)<+>; tioglyserol + KF, 379 (M+K)\ <1>H NMR (CDCI3) 5 7,51-7,33 (m, 5H, Ph), 5,52 (s, 1H, C6H5CH), 4,45 (d, 1H, J = 9,8Hz, H-1), 3,64 (s, 3H, OCH3), 3,62 (s, 3H, OCH3), 2,78-2,68 (m, 2H, SC^CH3), 1,31 (t, 3H, J = 2,7Hz, SCH2C4j). Anal. beregnet for C17H2405S (340,44): C, 59,98; H, 7,11; S, 9,42. Funnet: C, 59,91; H, 7,15; S, 8,96.
Fremstilling 54
2- (Trimetylsilyl) etyl 4,6-0-benzyliden-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (60).
Forbindelse 59 (23,0 g, 67,5 mmol) og 2-(trimetylsilyl) etanol (19,4 ml, 135 mmol) ble løst i en 2/1 blanding av etyleter og diklormetan (345 ml) og 4 Å molekylære siler (11 g) ble tilsatt. Blandingen ble rørt i 1 time ved 25°C og N-jodsuccinimid (49,7 g, 220 mmol) ble tilsatt, etterfulgt, ved 0°C, av sø I vt rifl at (2,20 g, 8,78 mmol). Blandingen ble rørt i 20 minutter (TLC), og fast natriumhydrogenkarbonat ble deretter tilsatt. Blandingen ble fortynnet med diklormetan, filtrert gjennom Celrte, suksessivt vasket med vandig 1M natriumtiosulfatløsning og vann, tørket og inndampet til tørrhet. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (15/1 og deretter 5/1 sykloheksan/etylacetat) for å kunne fremskaffe 60B(4,20 g, 15 %) og 60oc(8,40 g, 31 %).
Forbindelse 60a. [a]o + 96 (c = 0,4, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z, 419 (M+Na)<+>; 435 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,52-7,35 (m, 5H, Ph), 5,54 (s, 1H, C6H5CH), 4,98 (d, 1H, J = 3,7Hz, H-1), 3,64 (s, 3H, OCHa), 3,62 (s, 3H, OCH3), I, 24-0,96 (m, 2H, OCH2CffcSi (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, OCH2CH2SI (CHb) 3).
Anal. beregnet for CzoHæOeS (396,56): C, 60,58; H, 8,13. Funnet: C, 60,26; H, 8,39.
Fremstilling 55
2- (Trimetylsilyl) etyl 6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (61).
Forbindelse 60 (21,1 g, 53,3 mmol) ble løst i diklormetan (154 ml). Trietylsilan (34 ml, 213 mmol) ble tilsatt ved romtemperatur, etterfulgt av dråpevis tilsetning av en blanding av trifluoreddiksyre (16,3 ml, 213 mmol) og trifluoreddikanhydrid (0,49 ml, 3,47 mmol). Blandingen ble rørt i 2 timer og vandig 1M natriumhydroksidløsning ble tilsatt til pH ble basisk. Etter separering av fasene med synkning, ble den vandige fasen ekstrahert med etylacetat og de organiske fasene ble deretter kombinert, tørket og konsentrert. Resten ble renset på en kiselgelkolonne (14/1 og deretter 12/1 diklormetan/aceton) for å kunne fremskaffe 61 (12,5 g, 59 %). [a]o + 100 (c = 1,45, diklormetan). <*>H NMR 8 7,40-7,20 (m, 5H, Ph), 4,98 (d, 1H, J = 3,5Hz, H-1), 3,62 (s, 3H, OCH3), 3,49 (s, 3H, OCH3), 1,14-0,91 (m, 2H, CH2CH2Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si ( Chk) 3).
Anal. beregnet for C^HsoOeSi (398,58): C, 60,27; H, 8,60. Funnet: C, 60,18; H, 8,81.
Fremstilling 56
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (2,3,6-tri-0-acetyl-4-0-p-metoksybenzyl-ot-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-acetyl-B-D-glukopyranosyl- (1-4) -6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (62).
En blanding av tioglykosid 57 (19,1 g, 25,1 mmol) og glykosylmottakeren 61 (7,5 g, 18,7 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 3 for å kunne oppnå, etter rensing på en kiselgelkolonne (20/1 og deretter 10/1 diklormetan/aceton), 62 (19,7 g, 95 %). [a]D + 90 (c = 1,15, diklormetan).
Anal. beregnet for CæHfaOæSi (1095,24): C, 57,03; H, 6,81. Funnet: C, 57,38; H, 6,85. '
Skjema 18: Syntese av oligosakkarid 66
Fremstilling 57
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl- (1 -4) -6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (63).
Forbindelse 62 (19,7 g, 18,0 mmol) ble behandlet i henhold Fremgangsmåte 4 . for å fremstille, etter rensing på en kiselgelkolonne (3/1 og deretter 2/1 toluen/aceton), forbindelse 63 (11,2 g, 79 % totalt etter de tre trinnene). [a]o + 95 (c = 1,15, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 829 (M+Na)<+>; + KF, 845 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 5 7,34-7,25 (m,6H, Ph), 5,60 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1"), 4,96 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1), 4,29 (d, 1H, J = 8,0Hz, H-1'), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2C4>Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si ( Chh) 3).
Fremstilling 58
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (2,3,6-tri-0-acetyl-4-0-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-acetyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1 -4) -6-0-benzyl-2,3-di-0-metyI-a-D-glukopyranosid (64).
En blanding av tioglykosid 57 (6,87 g, 9,10 mmol) og glykosylmottakeren 63 (6,67 g, 8,30 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 3, og resten ble renset på en kiselgelkolonne (2/5 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe 64 (10,7 g, 86 %). [a]D + 90 (c - 0,83, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: m/z + NaCI, 1525 (M+Na)<+>; + KF, 1541 (M+K)<+>. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,25 (m, 5H, Ph), 7,15-6,84 (m, 4H, CeWCHa), 5,56 (d, 1H, J = 3,9Hz, H-1"), 5,29 (d, 1H, J = 4,0Hz, H-1""), 4,97 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-1"'), 4,27 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1'), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2C4>Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si ( Chk) 3).
Anal., beregnet for C7oHi06033Si (1503,69): C, 55,91; H, 7,11. Funnet: C, 56,05; H, 7,24.
Fremstilling 59
2- (Trimetylsilyl) etyl [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl- (1 -4) ]2-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (65).
Forbindelse 64 (10,7 g, 7,2 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 4 og resten ble renset på en kiselgelkolonne (2/1 og deretter 6/5 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe 65 (6,50 g, 74 % totalt på de tre trinnene). [a]D + 102 (c = 0,68, diklormetan). <1>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,25 (rn, 5H, Ph), 5,65 (d, 1H, J = 3,8Hz H-1""), 5,62 (d, 1H, J ^3,8Hz, H-1"), 4,98 (d, 1H, J = 3,7Hz, H-1), 4,31 (d, 1H, J = . 8,1 Hz, H-1'"), 4,29 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1'), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2CH>Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si ( Chk) 3).
Anal. beregnet for CseHgaCkeSi (1215,48): C, 55,34; H, 8,13. Funnet: C, 55,31; H, 8,19.
Fremstilling 60
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (2,3,6-tri-0-acetyl-4-0-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-acetyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]2-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (66).
En blanding av tioglykosid 57 (4,03 g, 5,31 mmol) og glykosylmottakeren 65 (5,78 g, 4,75 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 3 og resten ble renset på en kiselgelkolonne (2/5 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe 66 (8,63 g, 95 %). [a]o + 94 (c = 0,74, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 1910,83, kjemisk masse = 1912,14, eksperimentell masse = 1911,61 ± 0,12 a.m.u. * H NMR (CDCI3) 5 7,33-7,25, (m, 5H, Ph), 7,15-6,83 (m, 4H, C6H4OCH3), 5,62 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2), 5,60 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR-2), 5,30 (d,
1H, J = 4,0Hz, H-1 enhet NR), 4,98 (d, 1H, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 4,71 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-1), 4,30 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-1 enhet C), 4,29 (d, 1H, J = 8,4Hz, H-1 enhet R-1), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,07 (s, 3H, Ac), 2,03 (s, 3H, Ac), 1,99 (s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2CH2Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si (CH3) 3).
Anal. beregnet for CeeHiseO^Si (1912,14): C, 55,28; H, 7,27. Funnet: C, 55,61; H, 7,35.
Fremstilling 61
2- (Trimetylsilyl) etyl [0- (2,3,6-tri-O-metyl-cc-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl- (1 -4) ]3-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (67).
Forbindelse 66 (8,63 g, 4,50 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 4 og resten ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 og deretter 4/3 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe 67 (5,67 g, 77 % totalt på de tre trinnene), [ccfo + 102 (c = 0,70, diklo*rmetan)<.> LSIMS, positiv innstilling: m/z tioglyserol + NaCI, 1645,9 (M+Na)+ <1>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,32 (m, 5H, Ph), 5,65 (d, 2H, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR og H-1 enhet NR-2), 5,62 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2), 4,98 (d, 1H, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 4,31 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-1 enhet NR-1), 4,30 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet C), 4,29 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-1), 1,08-0,91 (rn, 2H, CH2CH>Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si { Chk) 3).
Anal. beregnet for Cy^iMOseSi (1912,14): C, 54,73; H, 8,07. Funnet: C, 54,61; H, 8,07.
Fremstilling 62
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (2,3,6-tri-0-acetyl-4-0-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-acetyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (68).
En blanding av tioglykosid 57 (1,47 g, 1,95 mmol) og glykosylmottakeren 67 (2,89 g, 1,77 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 3. Resten ble filtrert på en kiselgelkolonne (3/2 sykloheksan/aceton) for å kunne fremskaffe 68 (3,71 g, 92 %). En analytisk prøve ble renset på en kiselgelkolonne (3/2 toluen/aceton). [oc]d + 99 (c = 0,58, diklormetan); ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2319,03, kjemisk masse = 2320,59, eksperimentell masse = 2319,03 ± 0,12 a.m.u. <1>H NMR (CDCI3) 87,33-7,32, (m, 5H, Ph), 7,15-6,83 (rn, 4H, C6H4OCH3), 5,62 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2), 5,60 (d, 2H, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR-2 og enhet C),
5,29 (d, 1H, J = 4,0Hz, H-1 enhet NR), 4,97 (d, 1H, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 4,70 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 8,1Hz, H-1 enhet NR-3 og enhet R-3), 4,29 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-1), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,06 (s, 3H, Ac), 2,02 (s,
3H, Ac), 1,99 (s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2CH>Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si { Chk) 3).
Anal. beregnet for CioeHiyiAaSi (2320,59): C, 54,86; H, 7,38. Funnet: C, 54,76; H, 7,45.
Fremstilling 63
2- (Trimetylsilyl) etyl [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl- (1 -4) ]4-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (69).
Forbindelse 68 (3,61 g, 1,55 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 4 og resten ble deretter renset på en kiselgelkolonne (4/5 toluen/aceton) for å kunne fremskaffe 69 (2,22 g, 70 % totalt på de tre trinnene). [ a] o + 103 (c = 0,80, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2031,01, kjemisk masse = 2032,38, eksperimentell masse = 2032,38 a.m.u. <1>H NMR (CDCIs) 8 7,33-7,32 (m, 5H, Ph), 5,65 (d, 1H, J = 3,8Hz H-1 enhet NR), 5,64 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR-2), 5,62 (d, 2H, J = 3,8Hz, H-1 enhet C og enhet R-2), 4,97 (d, 1H, J = 3,7Hz, H-1 enhet R), 4,30 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-1), 4,29 (d, 3H, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-1, enhet R-3 og enhet NR-3), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2Ctf2Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si { Chk) a)-
Anal. beregnet for C^H^CveSi (2032,38): C, 54,37; H, 8,03. Funnet: C, 54,51; H, 8,04.
Fremstilling 64
2- (Trimetylsilyl) etyl O- (4-0-levulinyl-2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosid (70).
Forbindelse 69 (855 mg, 0,42 mmol) ble løst i diklormetan (8 ml) og trietylamin (83 ul, 0,59 mmol), 4-dimetylaminopyridin (5,14 mg, 0,04 mmol) og levulinanhydrid (117 mg, 0,55 mmol) ble tilsatt ved 25°C. Etter røring i 2 timer (TLC), ble diklormetan deretter tilsatt og blandingen ble vasket med vandig 10 % kaliumhydrogensulfatløsning og deretter med vann, tørket og inndampet til tørrhet. Denne forbindelsen kan bli anvendt urenset i det følgende trinnet uten å gjennomføre en rensing. En analytisk prøve ble renset på en kiselgelkolonne (5/4 sykloheksan/aceton) for å fremskaffe rent 70. [oc]d + 101 (c = 0,89, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2129,05, kjemisk masse = 2130,48, eksperimentell masse = 2130,00 a.m.u. <1>H NMR (CDCI3) 5 7,33-7,32 (m, 5H, Ph), 5,65 (d, 3H, J = 3,8Hz, H-1 enhet NR, enhet NR-2 og enhet C), 5,63 (d, 2H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2), 5,02 (t, 1H, J = 10,1Hz, H-4 enhet NR), 4,98 (d, 1H, J =
3,7Hz, H-1 enhet R), 4,32 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-3 og enhet R-3), 4,29 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-1), 2,80-2,50 (m, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk), 2,18 (s, 3H, O (C:0) CH2C4> (C:0) CH3), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2CH2Si (CH3) 3), 0,00 (s, 9H, CH2CH2Si ( Chk) 3).
Anal. beregnet for C97Hn6e048Si (2032,38): C, 54,69; H, 7,95. Funnet: C, 54,55; H, 8,07.
Fremstilling 65
O- (4-0-Levulinyl-2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a, p-D-glukopyranose (71).
Forbindelse 70 (876 mg, 0,41 mmol) ble behandlet som i Fremstilling 44 (a). Resten ble renset på en kiselgelkolonne for å kunne fremskaffe en blanding av isomerer (a/b = 60/40) av 71 (600 mg, 50 % i løpet av de to trinnene). [a]o + 89 (c = 0,74, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 2028,97, kjemisk masse = 2030,24, eksperimentell masse = 2030,19 ± 0,09 a.m.u. <1>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,32 (m, 5H, Ph), 5,65 (d, 3H, J = 3,8Hz H-1 enhet NR, enhet NR-2 og enhet C), 5,63 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2), 5,33 (d, 1H, J = 3,2Hz, H-1 a (enhet R), 5,02 (t, 1H, J = 10,1 Hz, H-4 enhet NR), 4,59 (d, 1H, J = 5,3Hz, H-ip enhet R), 4,32 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-1), 4,30 (d, 2H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-3 og enhet R-3), 4,29 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-1), 2,80-2,50 (m, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,18 (s, 3H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Fremstilling 66
O- (4-0-Levulinyl-2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-Gt, B-D-glukopyranose trikloracetimidat (72).
Til en løsning av 71 (593 mg, 0,29 mmol) i diklormetan (7 ml) ble kaliumkarbonat (72,2 mg, 0,52 mmol) og trikloracetonitril (176 uJ, 1,75 mmol) tilsatt. Blandingen ble rørt i 16 timer, filtrert og inndampet. Resten ble filtrert gjennom kiselgel (5/4 sykloheksan/aceton + 1 °/00 trietylamin) for å kunne fremskaffe en blanding av anomerene (a/B = 47/53) av imidatet 72 (414 mg, 46 %). [ a] o + 86 (c = 0,84, diklormetan). <1>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,32 (m, 5H, Ph), 6,50 (d, 1H, J = 3,5Hz, H-1 a enhet R), 5,65 (d, 1H, J = 8,2Hz, H-1B, enhet R), 5,65 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet.NR), 5,64 (d, 2H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2 og enhet C), 5,61 (d, 1H, J = 3,8Hz, H-1 enhet R-2), 5,02 (t, 1H, J = 10,1 Hz, H-4 enhet NR), 4,37 (d, 1H, J = 7,9Hz, H-1 enhet R-1), 4,30 (d, 3H, J = 7,9Hz, H-1 enhet NR-1, enhet NR-3 og enhet R-3), 2,80-2,50 (m, 4H, O (C:0) ChkChk (C:0) CH3), 2,18 (s, 3H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) Chk).
Fremstilling 67
Metyl 0- (4-0-levu1inyl-2,3,6-tri-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-0- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-4) -0- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-O-acetyI-2-O-benzyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1 -4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1 -4) -2,3,6-tri-O-benzyl-oc-D-glukopyranosid (73).
Glykosylmottakeren 26 (220 mg, 0,16 mmol) og imidatet 72 (344 mg, 0,16 mmol) ble løst i en 1/2 diklormetan/etyleter-blanding (5 ml). 4 Å molekylære siler (750 mg/mmol) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved 25°C i 1 time. Blandingen ble avkjølt til -25°C og en 1M løsning av tert-butyldimetylsilyltriflat i diklormetan (0,20 mol/mol av imidat) ble tilsatt. Etter røring i 15 minutter ble fast natriumhydrogenkarbonat deretter tilsatt og blandingen ble filtrert og konsentrert. Resten ble plassert på en kolonne av Toyopearl® HW-50 (1/1 diklormetan/etanol) og fraksjonen inneholdende glykosylmottakeren ble returnert til reaksjonen og deretter behandlet som over. Suksessive rensinger ble utført på en kiselgelkolonne (5/4 og deretter 1/1 toluen/aceton) for å oppnå en fraksjon 73o/B = 7/3 (107 mg) og en fraksjon i 73a/|3 = 9/1 (201 mg) med et totalt utbytte på 57 % (308 mg). <*>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,25 (m, 35H, 7Ph), 5,65 (d, 3H, J = 3,5Hz, H-1 enhet A, enhet C og enhet E), 5,57 (d, 1H, J = 3,9Hz, H-1 enhet G), 5,52 (d, 1H, J = 3,3Hz, H-1 enhet I), 5,29 (d, 1H, J = 6,8Hz, H-1 enhet L), 5,17 (d, 1H, J = 3,5Hz, H-1 enhet K), 4,56 (d, 1H, J = 3,5Hz, H-1 enhet M), 4,31 (d, 3H, J = 7,9Hz, H-1 enhet B, enhet D og enhet F),.4,27 (d, 1H, J = 8,0Hz, H-1 enhet H), 4,08 (d, 1H, J = 8,0Hz, H-1 enhet J), 2,80-2,50 (rn, 4H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) CH3), 2,18 (s, 3H, O (C:0) CH2CH2 (C:0) Cfcfe), 1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac).
Fremstilling 68
Metyl [0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]4-0- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-O-acetyl-2-O-benzyl-a-D-glukopyranosyl) - (1 -4) -0- (benzyl 2,3-di-O-metyl-ot-L-idopyranosyluronat) - (1-4) -2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (74).
Forbindelse 73 (130 mg, 38,2 umol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 2 og grovproduktet ble renset på en kiselgelkolonne for å kunne fremskaffe 74 (118 mg, 93 %). [a]D + 78 (c = 0,48, diklormetan); ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 3301,49; kjemisk masse = 3303,65; eksperimentell masse = 3302,40 a.m.u. <*>H NMR (CDCI3) 8 7,33-7,25 (m, 35H, 7Ph), 5,64 (d, 3H, J = 3,5Hz, H-1 enhet A, enhet C og enhet E), 5,57 (d, 1H, J = 3,9Hz, H-1 enhet G), 5,52 (d, 1H, J = 3,3Hz, H-1 enhet I), 5,29 (d, 1H, J = 6,8Hz, H-1 enhet L), 5,17 (d, 1H, J = 3,5Hz, H-1 enhet K), 4,56 (d, 1H, J = 3,5Hz, H-1 enhet M), 4,31 (d, 3H, J = 7,9Hz, H-1 enhet B, enhet D og enhet F), 4,27 (d, 1H, J = 8,0Hz, H-1 enhet H), 4,08 (d, 1H, J = 8,0Hz, H-1 enhet J), 1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac).
Fremstilling 69
Metyl 0- (2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,6-di-O-benzyl-3-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]4-0- (6-0-benzyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1-4) -O- (3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat- (1-4)
-2,3,6-tri-O-benzyl-a-D-glukopyranosid (75).
Glykosylmottakeren 74 (112 mg, 33,9 umol) og imidatet 17 (59,1 mg, 37,2 umol) (se Fremstilling 16) ble løst i toluen (2 ml). 4 Å molekylære siler (42 mg) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved 25°C i 1 time. Blandingen ble avkjølt til -20°C og en 1M løsning av tert-butyldimetylsilyltriflat i toluen (0,20 mol/mol av imidat) ble tilsatt. Etter røring i 15 minutter ble deretter fast natriumhydrogenkarbonat tilsatt og blandingen ble filtrert og konsentrert. Resten ble plassert på en kolonne av Toyopearl® HW-50 (1/1 diklormetan/etanol) og fraksjonen inneholdende mottakeren og 17-mer ble returnert til reaksjonen og behandlet som over. Produktet ble suksessivt renset på en Toyopearl® HW-50 kolonne og på en kiselgelkolonne for å kunne fremskaffe 75 (71 mg, 44 %). [ct]D + 80 (c = 0,26, diklormetan). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 4728,10; kjemisk masse = 4731,26; eksperimentell masse = 4731,27 ± 0,39 a.m.u. <1>H NMR (CDCl3) 8 av de hovedanomeriske protonene: 5,64; 5,57; 5,52; 5,48; 5,47; 5,29; 5,17; 4,56; 4,50; 4,29; 4,27; 4,08 ppm.
Fremstilling 70
Metyl 2,3-di-0-metyl-6-0-tert-butyldimetylsilyl-a-D-glukopyranosid (77).
Tert-butyldimetylsilylklorid (14,0 g, 92,9 mmol), trietylamin (15 ml, 108 mmol) og 4-dimetylaminopyridin (260 mg, 2,13 mmol) ble, under argon, tilsatt en løsning av 76 (D. Trimmell, W. M. Doane, C. R. Russel, C. E. Rist, Carbohydr. Res., (1969) 11,
497) (15,84 g, 71,3 mmol) i diklormetan (300 ml). Etter røring i 15 timer ved
romtemperatur, ble løsningen fortynnet med diklormetan, vasket med mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning, tørket (magnesiumsulfat), filtrert og konsentrert. Resten ble renset med flammekromatografi (1,3/1 sykloheksan/etylacetat) for å kunne fremskaffe 77 (22,79 g, 95 %) i form av en fargeløs sirup. [oc]d + 87 (c = 1,2, kloroform).
Fremstilling 71
Metyl 2,3-di-0-metyl-6-0-tert-butyldimetylsilyl-a-D-xylo-4-heksulopyranosid (78).
En løsning av dimetylsulfoksid (8,7 ml, 123 mmol) i diklormetan (20 ml) ble, under argon og ved -70°C, satt til en løsning av oksalylklorid (5,4 ml, 61,9 mmol) i diklormetan (120 ml). Etter 15 minutter ble en løsning av 77 (18,78 g, 55,8 mmol) i diklormetan dråpevis tilsatt. Etter magnetisk røring i 15 minutter ble trietylamin (37 ml, 265 mmol) tilsatt og, etter 15 minutter, fikk blandingen returnere til romtemperatur. Vann (150 ml) ble tilsatt og den vandige fasen ble ekstrahert med diklormetan (150 ml). De organiske fasene ble kombinert, vasket med mettet vandig natriumkloridløsning, tørket (magnesiumsulfat) og konsentrert. Resten ble renset med flammekromatografi (9/1 og deretter 4/1 sykloheksan/etylacetat) for å kunne fremskaffe 78 (17,3 g, 93 %) i form av en fargeløs olje. [a]D + 98 (c = 1,0, kloroform).
Fremstilling 72
Metyl 4-deoksy-2,3-di-0-metyl-4-C-metylen-6-0-tert-butyldimetylsilyl-a-D-xylo-heksapyranosid (79).
i En 1,6 M løsning av n-butyllitium i n-heksan (75 ml) ble satt dråpevis, under argon, til en suspensjon av metyftrifenylfosfoniumbromid (43,3 g, 127 mmol) i tetrahydrofuran (250 ml). Etter 30 minutter ved romtemperatur ble blandingen kjølt til
-70°C. En løsning av 78 (13,97 g, 41,8 mmol) i tetrahydrofuran (60 ml) ble deretter
tilsatt. Etter 30 minutter ved -70°C fikk blandingen returnere til romtemperatur. Etter 1 time ble mettet vandig ammoniumkloridløsning (300 ml) tilsatt og den vandige fasen ble ekstrahert med eter. Den organiske fasen ble tørket (magnesiumsulfat), filtrert og konsentrert. Resten ble renset med flammekromatografi (7/1 og deretter 4/1 sykloheksan/etylacetat) for å kunne fremskaffe 79 (8,30 g, 60 %) i form av en fargeløs olje. [ a] o + 151 (c = 1,3, kloroform).
Fremstilling 73
Metyl 4-deoksy-2,3-di-0-metyl-4-C-metylen-a-D-xylo-heksapyranosid (80).
Kamfersulfonsyre (pH 1) ble satt til en løsning av 79 (8,50 g, 25,6 mmol) i en 5/1 diklormetan/metanol-blanding (250 ml). Etter fullstendig forsvinning av startmaterialet (TLC, 1/1 sykloheksan/etylacetat), ble løsningen nøytralisert ved tilsetning av trietylamin. Etter konsentrering ble resten renset med flammekromatografi (1/1 og deretter 1/2 sykloheksan/etylacetat) for å gi 80 (5,32 g, 95 %) i form av en fargeløs sirup. [ct]o + 239 (c = 1,0, kloroform).
Fremstilling 74
Fenyl 2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-1 -seleno-B-D-glukopyranosid (83).
Fremgangsmåte 1: Selenofenol (5,7 ml, 53,7 mmol) ble satt til en løsning av 81 (E. L. Hirst, E. Percival, Meihods Carbohydrate Chøm. (1963) 2,145) (1/1 blanding av ånomerer: 13,05 g, 36,0 mmol) i diklormetan (120 ml) under argon. Reaksjonsmediet ble avkjølt til 0°C og 48 % trifluorborandietyleteratløsning (8,8 ml, 71,9 mmol) ble dråpevis tilsatt. Etter 3 timer ved romtemperatur, ble reaksjonsblandingen fortynnet med diklormetan (100 ml), vasket med mettet vandig natriumhydrogenkarbonatløsning, tørket (magnesiumsulfat), filtrert og konsentrert. Grovfort)indelsen 83 (8,17 g, 68 %) fra 81) ble anvendt direkte i deacetyleringsreaksjonen.
Fremgangsmåte 2: Natriumborhydrid (510 mg, 14,6 mmol) ble, ved 0°C og under argon, satt til en suspensjon av difenyldiselenid (2,27 g, 7,27 mmol) i etanol. Ytterligere en del trifluorborandietyleterat ble tilsatt hvis reaksjonsmediet ikke hadde tapt dets originale gule farge i løpet av 15 minutter. Denne løsningen ble overført under argon til en løsning av 82 (A.K. Sen, K.K. Sakar, N. Banerji, J. Carbohydr. Chem., (1988) 7, 645) (4,22 g, 11,0 mmol) i diklormetan (25 ml). Etter tilbakeløpt i 3 timer, ble blandingen avkjølt til romtemperatur, natriumbromidet ble filtrert bort og filtratet ble konsentrert. Resten ble løst i diklormetan (100 ml) og vasket med vandig 1M natriumhydroksidløsning (50 ml) og mettet vandig ammoniumkloridløsning (50 ml). De vandige fasene ble ekstrahert med diklormetan (20 ml) og de organiske fasene ble tørket (magnesiumsulfat), filtrert og konsentrert. Resten ble renset med flammekromatografi (1,7/1 sykloheksan/etylacetat) og deretter krystallisert fra etylacetat for å kunne fremskaffe 83 (4,35 g, 86 %). Smp. 101-102°C. [cc]D-20 (c = 1,0, kloroform).
Fremstilling 75
Fenyl 3-0-metyl-1-seleno-B-D-glukopyranosid (84).
Grovforbindelsen 83 fremskaffet fra 82 (32,3 g, 84,3 mmol) ble løst i metanol (500 ml) og natrium (1,2 g) ble sakte introdusert. Etter 1 time ble løsningen nøytralisert ved tilsetning av IR-120 (H<+>) resin,.filtrert og konsentrert. Resten ble renset med flammekromatografi (1,5/1/1 sykloheksan/etylacetat/aceton) for å kunne fremskaffe 84 i form av en sirup (22,7 g, 81 % fra 82). [ a] o -58 (c = 1,0, metanol).
Fremstilling 76
Fenyl 4,6-0-benzyliden-3-O-metyl-1 -seleno-B-D-glukopyranosid (85).
P-Toluensulfonsyre (45 mg) og benzaldehyd dimetylacetal (5,4 ml, 36,0 mmol) ble, under argon, tilsatt en løsning av triol 84 .(7,65 g, 23,0 mmol) i acetonitril (150 ml). Etter røring i 2 timer ved romtemperatur ble kaliumkarbonat (1,5 g) tilsatt. Etter 30 minutter ble løsningen filtrert og deretter konsentrert. Resten ble renset med flammekromatografi (3,5/1 sykloheksan/etylacetat) for å kunne fremskaffe 85 (8,55 g, 88 %) i form av hvite krystaller. Smp. 123-124°C (sykloheksan/etylacetat). [a]D-38 (c = 1,0, kloroform).
Fremstilling 77
Fenyl 4,6-0-benzyliden-3-0-metyl-2-0- (mety1-4-deoksy-6-0-dimetylsilyl-2,3-di-O-metyl-4-C-metylen-a-D-xylo-heksopyranosid) -1-seleno-B-D-glukopyranosid (86).
En 1,6 M løsning av n-butyllitium (7,0 ml, 11,2 mmol) ble, under argon og ved
-70°C, satt til en løsning av 85 (4,30 g, 10,2 mmol) i tetrahydrofuran (30 ml) plassert i
et Schlenck-rør. Etter 10 minutter ble diklordimetylsilan (5,0 ml, 41,2 mmol) tilsatt og reaksjonsmediet ble varmet til romtemperatur. Etter 3 timer ble blandingen konsentrert og en løsning av 80 (2,10 g, 9,62 mmol) og imidazol (985 mg, 14,4 mmol) i tetrahydrofuran (20 ml) ble tilsatt. Etter 30 minutter ved romtemperatur ble løsningen konsentrert, vann (50 ml) ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med diklormetan. Den organiske fasen ble tørket (magnesiumsulfat), filtrert og konsentrert. En analytisk prøve av 86 ble renset med flammekromatografi (25/1 toluen/aceton inneholdende 0,5 % trietylamin). En fargeløs sirup ble fremskaffet med et utbytte på 90 %.
<1>H NMR (400MHz, C6D6) d 7,77-6,99 (m, 10H, aromatisk), 5,51 (m, 1H, C:Crø>), 5,24 (m, 1H, C-. Chh), 5,16 (s, 1H, CHPh), 4,85 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-1), 4,81 (d, 1H, J = 9,8Hz, H-1'), 4,45 (m, 1H, H-5), 4,38 (dd, 1H, J = 10,8Hz, 4,8Hz, H-6a), 4,33 (dd, 1H, J = 6,2Hz, H-6b), 4,20 (m, 1H, J = 9,2Hz, H-3), 4,05 (dd, 1H, J = 10,3Hz, 4,9Hz, H-6a'), 3,87 (dd, 1H, J = 8,1 Hz, H-2'), 3,52, 3,38, 3,31 og 3,27 (s, 3H, OChk), 3,37 (t, 1H, J = 10,3Hz, H-6b'), 3,35 (t, 1H, H-4'), 3,32 (dd, 1H, H-2), 3,22 (dd, 1H, J = 9,3Hz, H-3'), 3,05 (ddd, 1H, J = 9,3Hz, H-5'), 0,38 og 0,37 (s, 3H, Si ( Chk) 2. MS (m/z): 714 (M+NH4)<+.>
Fremstilling 78
Radikal sykliseringsreaksjon (dannelse av 87) og kutting av bindingen (88).
En løsning av tributyltinhydrid (6,1 ml, 22,7 mmol) og 2,2'-azobisisobutyronitril (200 mg, 1,22 mmol) i avgasset toluen (14 ml) ble, i løpet av en periode på 8 timer, tilsatt en grovløsning av 86 i toluen (850 ml), fremskaffet fra 85 (10,2 mmol) og 80 (9,62 mmol).
Etter den radikale syklinasjonen, ble blandingen konsentrert og resten ble løst i tetrahydrofuran. Et overskudd (20 ekvivalenter) av hydrofluorinsyre (ved en konsentrasjon på 40 % i vann) ble tilsatt. Etter fullstendig desilylering (TLC, 4/1 toluen/aceton), ble løsningen nøytralisert ved tilsetning av fast natriumhydrogenkarbonat, filtrert og konsentrert. Hovedforbindelsen 88 kan bli renset med krystallisering. Smp. 105°C. [oc]D + 119 (c = 1,1, kloroform). <13>C NMR (62,896MHz, CDCI3) d 137,29 (kvartenær aromatisk C), 128,88-125,96 (aromatisk C), 101,11 (CHPh), 97,64 (C-1), 83,52 (C-2), 82,76, 81,95, 80,84, 72,01, 71,92 og 64,31 (C-3, C-5, C-2', C-3', C-4', C-5'), 75,19 (C-V), 69,41 (C-6'), 62,69 (C-6), 60,93, 60,70, 58,31 og 55,20 (OCH3), 38,80 (C4), 25,58 (metylen C).
Anal. beregnet for C24H36O10 • H20 502,558): C, 57,36; H, 7,62. Funnet: C, 57,31; H, 7,54.
Fremstilling 79
Metyl 6-0-acetyl-4-C- (2-0-acetyl-4,6-0-benzyliden-3-0-metyl-a-D-glukopyranosylmetyl) -4-deoksy-2,3-di-0-metyl-o>D-glukopyranosid (89).
Forbindelse 88 ble kvantitativt acetylert i en blanding av 1/1 eddikanhydrid/- pyridin, i nærvær av en katalytisk mengde av 4-dimetylaminopyridin. Produktet ble fremskaffet etter konsentrering og kromatografi. [ a] o + 87 (c = 1,0, kloroform). <1>H NMR (500MHz, CDCI3): se Tabell 1.13C NMR (62,896MHz, CDCI3) d 170,81, 169,80 (C:0), 137,18 (kvartenær aromatisk C), 128,92-125,95 (aromatisk C), 101,31 (CHPh), 97,51 (C-1), 83,22 (C-2), 81,94, 69,25 og 63,83, (C-5, C-4<1>, C-5'), 81,81 (C-3), 78,78 (C-3'), 72,74 (C-2'), 71,96 (C-1'), 69,49 (C-6<1>), 64,17 (C-6), 60,64, 59,82, 58,30 og 55,19 (OCH3), 39,00 (C-4), 26,47 (metylen C), 20,91, 20,76 (OCOCH3). Masse spektrum (m/z): 586 (M+NH4)<+>, 569 (M+H)\ 554 (M-OMe+NH3)<+>, 537 (M-OMe)\
Anal. beregnet forC28H4oOi2 • H20 (586,632): C, 57,33; H, 7,22. Funnet: C, 57,28; H, 7,07.
Den siste delen av syntesen består av å konvertere 89 til imidat 90. For å gjøre dette ble benzyliden åpnet ved å anvende natriumcyanoborhydrid og saltsyre. Hydroksylgruppen som dermed ble frigjort ble beskyttet temporært i form av p-metoksy-benzyleter. Etter deacetylering bie den primære alkoholfunksjonen beskyttet ved selektiv introduksjon av tert-butyldimetylsilyleter, og forbindelsen som dermed ble fremskaffet ble metylert. Oksidering ved Jones-betingelsene førte til uroninsyren, som ble bensylert. P-metoksybenzyleteren ble deretter kuttet av og en levulinester ble introdusert i denne posisjonen. Et system som anvendte en svovelsyre/eddiksyre/eddikanhydrid-blanding førte til acetolyse av den anomeriske metylgruppen så vel som på benzyleteren i posisjon 6', og resulterte i en blanding av to anomeriske acetaten Selektiv deacetylering i posisjon 1 ble utført ved å anvende hydrazin i dimetylformamid, og blandingen av anomerer, oppløst i diklormetan, ble konvertert til 90 med trikloracetonitril i nærvær av 1,8-diazabisyklo [5,4,0]-undec-7-ene.
Fremstilling 80
Etyl O- (2,3-di-0-benzoyl-4,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -2,3,6-tri-O-benzoyl-1 -tio-B-D-glukopyranose (92).
Benzoylklorid (24,5 ml, 211 mmol) ble, i løpet av 20 minutter, dråpevis tilsatt en kjølig (0°C) løsning av forbindelse 91 (16,7 g, 35,2 mmol) (J. Westman og M. Nilsson, J. Carbohydr. Chem., 1995,14 (7), 949-960) i pyridin (202 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 20 timer ved romtemperatur; TLC viste en omtrentlig 50% konvertering. Blandingen ble fortynnet med vann og diklormetan. Etter ekstraksjon, ble den organiske fasen vasket med 10% natriumhydrogenkarbonat-løsning, vann, tørket over magnesiumsulfat og konsentrert. Resten ble igjen behandlet med benzoylklorid i henhold til fremgangsmåten som ble beskrevet over. Grovproduktet ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 22 g av forbindelse 92.
TLC: Rf = 0,80, kiselgel, 9/1 v/v toluen/etanol.
Fremstilling 81
O- (2,3-Di-O-benzoyl-4,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (94).
En blanding av tioglykosid 92 (1,05 g, 1,05 mmol), forbindelse 93 (200 mg, 1,05 mmol) (Jeanioz et al., J. Org. Chem. 1961, 26, 3939-3944) og pulverisert 4Å molekylære siler (1,1 g) i toluen (18 ml) ble rørt under en nitrogenatmosfære i 15 minutter. Blandingen ble deretter avkjølt til -20°C og en fersk fremstilt løsning av N-jodsuccinimid (1,11 mmol) og trifluormetansulfonsyre (0,125 mmol) i 1/1 v/v diklormetan/dioksan (6 ml) ble introdusert deri. Etter 10 minutter ble den røde reaksjonsblandingen filtrert, fortynnet med diklormetan, ekstrahert, suksessivt vasket med 10% natriumtiosulfatløsning, 10% natriumhydrogenkarbonatløsning og vann, tørket over magnesiumsulfat og deretter konsentrert under vakuum. Resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å kunne fremskaffe 1,25 g av forbindelse 94.
TLC: Rf = 0,55, kiselgel, 4/6 v/v heptan/etylacetat.
Fremstilling 82
O- (4,6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (B-D-glukopyranosyl) -
(1 -»4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (95).
Kalium tert-butoksid (ca. 50 mg) ble satt til en løsning av forbindelse 94 (1,24 g, 1,11 mmol) i 1/1 v/v metanol/dioksan (7 ml). Blandingen ble rørt i en time og ytterligere 50 mg kalium tert-butoksid ble tilsatt; blandingen ble deretter rørt i ytterligere 60 minutter. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert med en Dowex® 50WX8 H+ resin, filtrert og konsentrert under vakuum. Etter kromatografi på en kiselgelkolonne, ble 665 mg av forbindelse 95 isolert i form av en olje.
TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 85/15 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 83
O- (4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0-metyl-cc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (96).
Natriumhydrid (387 mg, 9,65 mmol) ble, under en nitrogenatmosfære, satt til en avkjølt (5°C) løsning av forbindelse 95 (660 mg, 1,1 mmol) i tørr tetrahydrofuran (8 ml). Metyljodid (0,51 ml, 8,22 mmol) ble dråpevis tilsatt og blandingen ble rørt i 20 timer ved romtemperatur. Natriumhydridoverskudd ble ødelagt med metanol og blandingen ble helt over i 50 ml iskaldt vann. Etter ekstraksjon med etylacetat (3 ganger 20 ml) ble den organiske fasen vasket med natriumkloridløsning, tørket over magnesiumsulfat og konsentrert for å gi 690 mg av ren forbindelse 96.
TLC: Rf = 0,25, kiselgel, 95/5 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 84
O- (2,3-Di-O-metyl-a-D-gIukopyranosyl) - (1->4) -0-2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-^4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (97).
Den rene forbindelse 96 (690 mg, 1,03 mmol) ble løst i 80% eddiksyre (7,3 ml) og rørt i 20 timer ved 40°C. Blandingen ble konsentrert under vakuum og inndampet sammen med toluen. Kromatografi på en kiselgelkolonne i 8/1/1 diklormetan/etylacetat/metanol muliggjør fremskaffelse av 569 mg av forbindelse 97. TLC: Rf = 0,40, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 85
O- (6-O-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (98).
1-Benzoyloksy-1H-benzotriazol (227 mg, 1,05 mmol) og trietylamin (1,15 mmol) ble satt til en løsning av forbindelse 97 (560 mg, 0,96 mmol) i diklormetan og blandingen ble deretter rørt i 20 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble
fortynnet med diklormetan og vasket med 10% natriumhydrogenkarbonatløsning og vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet til tørrhet. Produktet ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å kunne fremskaffe 600 mg av forbindelse 98.
TLC, Rf = 0,50, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 86
O- (2,3-Di-0-benzoyl-4,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1 -»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (99).
Forbindelse 98 ble konvertert til forbindelse 99 i henhold til fremgangsmåten beskrevet for fremstillingen av forbindelse 94. Koblingsreaksjonen ble utført ved 5°C. TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 2/8 v/v heptan/etylacetat.
Fremstilling 87
O- (4,6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (B-D-glukopyranOsyl) -
(1->4) -0- (2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (100).
Forbindelse 99 ble konvertert til forbindelse 100 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 95.
TLC: Rf = 0,35, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 88
O- (4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (101).
Forbindelse 100 ble konvertert til forbindelse 101 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 96.
TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 89
O- (2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-+4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (102).
Forbindelse 101 ble konvertert til forbindelse 102 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 97.
TLC: Rf = 0,35, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 90
O- (6-0-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4)-0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1_>4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (103).
Forbindelse 102 ble konvertert til forbindelse 103 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 98.
TLC: Rf = 0,40, kiselgel, 7,0/1,5/1,5 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 91
O- (2,3-Di-0-benzoyl-4,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (104).
Koblingsreaksjonen av forbindelse 103 med disakkaridet 2 ble utført i henhold til fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 99.
TLC: Rf = 0,40, kiselgel, 7,0/1,5/1,5 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 92
O- (4,6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (B-D-glukopyranosyl) -
(1_>4) -o- (2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (105).
Forbindelse 104 ble konvertert til forbindelse 105 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 95.
TLC: Rf = 0,60, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 93
O- (4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1 -»4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]r 1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (106).
Forbindelse 105 ble konvertert til forbindelse 106 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 96.
TLC: Rf = 0,70, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 94
O- (2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- {2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1^4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]r1.6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (107).
En løsning av forbindelse 106 (5,05 g, 2,0 mmol) i 80% eddiksyre (50 ml) ble rørt i 20 timer ved 40°C. Blandingen ble konsentrert under vakuum og inndampet sammen med toluen. Resten ble løst i etylacetat og ekstrahert med vann. Den vandige fasen ble ekstrahert med diklormetan og den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet til tørrhet for å gi 2,68 g av forbindelse 107. TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 95
O- (6-0-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1 ->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1->4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]2-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (108).
Forbindelse 107 ble konvertert til forbindelse 108 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 98.
TLC: Rf = 0,80, kiselgel, 7,0/1,5/1,5 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 96
O- (2,3-Di-0-benzoyl-4,6-0-benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-B-D-glukopyranosyl) - (1,4) -O- (6-O-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O-(2,3,6-tri-O-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]2-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (109).
En blanding av tioglykosidet 92 (1,97 g, 2,0 mmol, 3,5 eq), heptasakkarid 108 (0,86 g, 0,57 mmol) og pulveriserte 4Å molekylære siler i toluen (22 ml) ble rørt under en nitrogenatmosfære i 15 minutter. En fersk fremstilt løsning inneholdende N-jodsuccinimid (496 mg, 2,2 mmol) og trifluormetansulfonsyre (0,808 mmol) i 1/1 v/v diklormetan/dioksan (12 ml) ble deretter tilsatt dråpevis ved romtemperatur. Etter 10 minutter ble reaksjonsblandingen filtrert, fortynnet med diklormetan, ekstrahert, vasket med 10 % natriumtiosulfatløsning og med 10% natriumhydrogenkarbonat-løsning, tørket over magnesiumsulfat og konsentrert under vakuum. Grovproduktet ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 1,09 g av forbindelse 109. TLC: Rf = 0,80, kiselgel, 6/2/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 97
O- (4,6-O-Benzyliden-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (B-D-glukopyranosyl) -
(1_>4) -0- (2,3,-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) -[ (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) ]2- (1->4) -1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (110).
Forbindelse 109 ble konvertert til forbindelse 110 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 95.
TLC: Rf = 0,25, kiselgel, 5,0/2,5/2,5 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 98
O- (4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (111).
Forbindelse 110 ble konvertert til forbindelse 111 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 96.
TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 6/2/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 99
O- (2,3-Di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranose (112).
Forbindelse 111 ble konvertert til forbindelse 112 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 97. TLC: Rf = 0,20, kiselgel, 6/2/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 100
O- (6-0-Benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ]3-1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (113).
Forbindelse 112 ble konvertert til forbindelse 113 i henhold til den samme fremgangsmåten som beskrevet for fremstillingen av forbindelse 98.
TLC: Rf = 0,20, kiselgel, 672/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 101
O- (6-0-Benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) \ r 1,6-anhydro-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranose (114). 1 - (3-Dimetylaminopropyl) -3-etylkarbodiimidhydroklorid (48 mg, 0,25 mmol), levulinsyre (29 mg, 0,25 mmol) og dimetylaminopyridin (4 mg, 0,033 mmol) ble satt til en løsning av forbindelse 113 (320 mg, 0,167 mmol) i dioksan (1 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt i 3 timer ved romtemperatur under en nitrogenatmosfære. Diklormetan og vann ble deretter tilsatt og etter ekstraksjon ble den organiske fasen vasket med vann, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Grovproduktet ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 312 mg av forbindelse 114.
TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 6/2/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 102
O- (6-0-Benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3-1,6-di-0-acetyl-2,3-dt-0-metyl-cx, B-D-glukopyranose (115).
En løsning av forbindelse 114 (312 mg, 0,155 mmol) i en blanding av eddikanhydrid (2,25 ml), eddiksyre (50 uJ) og trifluoreddiksyre (0,14 ml) ble rørt i 4 timer ved romtemperatur. Etter tilsetning av toluen (10 ml), ble blandingen konsentrert og inndampet sammen med toluen (3 ganger 10 ml). Etter kromatografi på en kiselgelkolonne ble 324 mg av forbindelse 115 isolert.
TLC: Rf = 0,65, kiselgel, 6/2/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 103
O- (6-0-Benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-oc-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]3-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a,B-D-glukopyranose (116).
En løsning av forbindelse 115 (324 mg, 0,153 mmol) og morfolin (22,3 uJ, 0,256 mmol) i toluen (2 ml) ble rørt i 4 timer ved 35°C. Morfolin (22,3 uJ) ble deretter tilsatt igjen og reaksjonsblandingen ble rørt i 20 timer ved 35°C. Blandingen ble raskt nedkjølt med vann. Etter ekstraksjon med diklormetan ble den organiske fasen suksessivt vasket med 0,1 N saltsyre og vann, tørket og inndampet til tørrhet. Etter kromatografi på en kiselgelkolonne ble 280 mg av forbindelse 116 isolert.
TLC: Rf = 0,45, kiselgel, 6/2/2 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 104
O- (6-0-Ben2oyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-cc-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]3-6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a, p-D-glukopyranose trikloracetimidat (117).
Trikloracetonitril (39 ul, 0,39 mmol) og cesiumkarbonat (4,7 mg) ble satt til en løsning av forbindelse 116 (138 mg, 0,066 mmol) i diklormetan (1,5 ml). Etter røring i 2 timer ble blandingen filtrert og konsentrert, og resten ble kromatografert på en kiselgelkolonne for å gi 152 mg av imidatet 117.
TLC: Rf = 0,35, kiselgel, 8/1/1 v/v/v toluen/etylacetat/etanol.
Fremstilling 105
Metyl 2-0-benzyl-4,6-0-benzyliden-cc-D-glukopyranosid (119).
Forbindelse 118 (60 g) (kommersielt tilgjengelig) ble løst i dimetylformamid (858 ml) med benzylbromid (50,5 ml). Etter avkjøling til 10°C ble vandig 20% natriumhydroksidløsning dråpevis tilsatt. Etter røring i 1 time ble temperaturen fremskaffet til 20°C og blandingen ble rørt i ytterligere 20 timer. Løsningen ble deretter helt over i en blanding av isvann og toluen og ekstrahert. Den organiske fasen ble konsentrert og grovproduktet renset med krystallisering for å gi 30,0 g av forbindelse 119.
TLC: Rf = 0,60, kiselgel, 7/3 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 106
Metyl 2-0-benzyl-4,6-0-benzyliden-3-0-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosid
(120).
Forbindelse 119 (26,4 g) ble løst i dimetylformamid (211 ml) og kjølt til 5°C.
Natriumhydrid (2,5 g) ble tilsatt under en nitrogenatmosfære. 4-metoksybenzylklorid (13,3 g) ble deretter tilsatt dråpevis og rørt i 1 time ved romtemperatur. Blandingen ble fortynnet med etylacetat, vasket to ganger med vann og konsentrert for å gi 40,7
g av ren forbindelse 120.
TLC: Rf = 0,80, kiselgel, 7/3 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 107
Metyl 2-0-benzyl-3-0-p-metoksybenzyl-a-D-glukopyranosid (121).
Forbindelse 120 (34,9 g) ble løst i vandig 60% eddiksyre og rørt i 4 timer ved 60°C. Blandingen ble fortynnet med toluen og konsentrert. Rensing med kromatografi på en kiselgelkolonne muliggjorde fremskaffelsen av 26,4 g av forbindelse 121.
TLC: Rf = 0,07, kiselgel, 7/3 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 108
Metyl 2-0-benzyl-3-0-p-metoksybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid (122).
Forbindelse 121 (26,4 g) ble løst i diklormetan (263 ml) under en nitrogenatmosfære. Trimetyloksonium tetrafluorborat (11,6 g) og 2,6-di-tert-butyl-4-metylpyridin (17,4 g) ble tilsatt ved romtemperatur. Etter 4 timer ble blandingen helt over i isvann og ekstrahert med diklormetan. Den organiske fasen ble vasket med natriumhydrogenkarbonat og konsentrert. Rensing av grovproduktet med kromatografi på en kiselgelkolonne muliggjorde fremskaffelsen av 18,5 g av forbindelse 122.
TLC: Rf = 0,25, kiselgel, 7/3 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 109
Etyl 2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-1-tio-a-L-idopyranose (124).
Forbindelse 123 (1,2,4,6-tetar-0-acetyl-3-0-metyl-oc-L-idopyranose) (Jaurand et al. Bio. Med. Chem. Lett. 1992, 2, 897-900) (48,4 g) ble løst i toluen (175 ml). Etantiol (20 ml) og borontrifluorideterat i toluen (134 ml) ble tilsatt under en nitrogenatmosfære. Etter røring i 1 time ble vandig natriumhydrogenkarbonat (400 ml) tilsatt og blandingen ble rørt i ytterligere 1 time. Blandingen ble deretter heft over i etylacetat. Den organiske fasen ble vasket to ganger med vann og konsentrert. Rensing med kromatografi på en kiselgelkolonne muliggjorde fremskaffelsen av 29,6 g av forbindelse 124.
TLC: Rf = 0,45, kiselgel, 674 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 110
Metyl O- (2,4,6-tri-0-acetyI-3-0-metyl-a-L-idopyranosyl- (1-»4) -2-0-benzyl-3-0-p-metoksybenzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (125).
Forbindelse 122 (17,5 g) og forbindelse 124 (28,2 g) ble løst i toluen (525 ml) under en nitrogenatmosfære. Etter tilførsel av 4Å molekylære siler ble reaksjonen kjølt til -20°C. En fersk fremstilt løsning med 0,1 M N-jodsuccinimid (17,4 gj og trifluormetansulfonsyre (1,38 ml) i 1/1 v/v dioksan/diklormetan ble dråpevis tilsatt under en sammenhengende strøm av nitrogen. Etter 10 minutter ble den røde reaksjonsblandingen filtrert og suksessivt vasket med vandig natriumtiosulfat og vandig natriumhydrogenkarbonat. Den organiske fasen ble konsentrert under vakuum og 30,0 g av forbindelse 125 ble isolert.
TLC: Rf = 0,45, kiselgel, 8/2 v/v diklormetan/etylacetat.
Fremstilling 111
Metyl O- (3-O-metyl-a-L-idopyranosyl) - (1 -»4) -2-0-benzyl-3-0-p-metoksybenzyl-6-O-metyl-oc-D-glukopyranosid (126).
Forbindelse 125 (30,0 g) ble løst i 460 ml 1/1 v/v metanol/dioksan og kaliumtert-butoksid ble tilsatt. Etter 15 minutter ble blandingen nøytralisert med et Dowex 50WX8H<*> resin og konsentrert under vakuum. Rensing ble utført med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 17,4 g av forbindelse 126.
TLC: Rf = 0,25, kiselgel, 95/5 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 112
Metyl 0- (4,6-0-isopropyliden-3-0-metyl-a-L-idopyranosyl) - (1 -»4) -2-O-benzyl-3-0-p-metoksybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid (127).
Forbindelse 126 (17,4 g) ble løst i dimetylformamid (77 ml) under en nitrogenatmosfære. 2,2-Dimetoksypropan (26 ml) og p-toluensulfonsyre ble tilsatt og blandingen ble deretter rørt i 30 minutter. Fortynning av blandingen med vandig natriumhydrogenkarbonat etterfulgt av dens ekstraksjon med etylacetat muliggjorde fremskaffelsen av 19,7 g av forbindelse 127 etter fordamping av løsningsmidlet. TLC: Rf = 0,45, kiselgel, 95/5 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 113
Metyl O- (4,6-0-isopropyliden-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranosyl) - (1->4) -2-0-benzyl-3-0-metoksybenzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid (128).
Forbindelse 127 (18,5 g) ble oppløst i dimetylformamid (24,4 ml) og kjølt til 0°C. Natriumhydrid (1,47 g; 60% dispersjon i olje) og jodmetan (2,36 ml) ble tilsatt under en nitrogenatmosfære. Etter en time ble natriumhydridoverskuddet ødelagt med metanol og blandingen ble ekstrahert med diklormetan og konsentrert for å gi 20,0 g av forbindelse 128.
TLC: Rf = 0,85, kiselgel, 95/5 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 114
Metyl O- (4,6-0-isopropyNden-2,3-di-0-met<y>l-ot-L-idopyranosyl) - (1 -»4) -2-0-benzyl-6-0-metyl- (-D-glukopyranosid (129).
Forbindelse 128 (18,4 g) ble løst i diklormetan (838 ml) og vann (168 ml). 2,3-Diklor-5,6-dicyano-1,4-benzoquinon (7,1 g) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 18 timer ved 4°C. Blandingen ble helt over i vandig natriumhydrogenkarbonat og ekstrahert med diklormetan. Konsentrering av den organiske fasen fremskaffet 12,7 g av forbindelse 129.
TLC: Rf = 0,40, kiselgel, 95/5 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 115
Metyl O- (4,6-0-isopropytiden-2,3-di-0-metyl-a-L-idopyranosyl) - (1->4) -2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (130).
Forbindelse 129 (10,5 g) ble løst i tørr dimetylformamid (178 ml) og deretter avkjølt til 0°C under en nitrogenatmosfære. Natriumhydrid (1,91 g; 60% dispersjon i olje) ble tilsatt, etterfulgt av dråpevis tilsetning av benzylbromid (3,3 ml). Etter 30 minutter ble reaksjonen avsluttet og overskuddet av natriumhydrid ble ødelagt med metanol. Vann ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert to ganger med etylacetat. Fordampning av løsningsmidlet fremskaffet 13,6 g av forbindelse 130.
TLC. Rf = 0,50, kiselgel, 1/1 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 116
Metyl O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyl) - (1-»4) -2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-cc-D-glukopyranosid (131).
Forbindelse 130 ble løst i 77/33 (v/v) eddiksyre/vann og rørt natten over. Blandingen ble fordampet to ganger sammen med toluen og renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å oppnå 11,5 g av forbindelse 131.
TLC: Rf = 0,09, kiselgel, 1/1 v/v toluen/etylacetat.
Rf = 0,68, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 117
Metyl 0- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -2,3-di-0-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (132).
2,2,6,6-Tetrametyl-l-piperidinyloksy [lacuna] (33 mg), natriumhydrogen-karbonatløsning (40 ml), kaliumbromid (218 mg) og tetrabutylammoniumklorid (289 mg) ble satt til en løsning av forbindelse 131 (11,6 g) i diklormetan (60 ml). Blandingen ble avkjølt til 0°C og en blanding av mettet natriumkloridløsning (44 ml), mettet natriumhydrogenkarbonatløsning (21,8 ml) og natriumhypokloritt (1,3 M, 50 ml) ble tilsatt i løpet av 15 minutter. Etter røring i 1 time ble blandingen fortynnet med vann og ekstrahert (3 ganger) med diklormetan. Den organiske fasen ble vasket med vandig natriumkloridløsning, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og inndampet til tørrhet for å gi 13,4 g av grovforbindelsen 132.
TLC: Rf = 0,14, kiselgel, 9/1 v/v diklormetan/metanol.
Fremstilling 118
Metyl O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-oc-L-idopyranosyluronat) - (1-»4) -2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-ot-D-glukopyranosid (133).
Forbindelse 132 ble løst i dimetylformamid (110 ml) under en nitrogenatmosfære. Kaliumhydrogenkarbonat (6,7 g) og benzylbromid (10,7 ml) ble tilsatt og blandingen rørt i 90 minutter. Etylacetat og vann ble tilsatt og den organiske fasen ble konsentrert etter ekstraksjon. Rensing med ionekromatografi på en kiselgelkolonne muliggjorde fremskaffelsen av 9,9 g av forbindelse 133.
TLC: Rf = 0,43, kiselgel, 4/6 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 119
Metyl O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -2,3-di-O-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (134).
Forbindelse 133 (9,9 g) ble løst i 300 ml metanol og varmet med tilbakeløpe under en nitrogenatmosfære. En 1M løsning natriummetoksid i metanol (65,2 ml) ble dråpevis tilsatt og blandingen ble rørt og varmet med tilbakeløp i 3 timer. Blandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur, 1N natriumhydroksid (22,2 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble rørt i ytterligere 90 minutter. Etter nøytralisering med Dowex 50WX8H<*> resin og filtrering ble blandingen konsentrert. Det rene produktet ble løst i dimetylformamid (192 mi) og molekylære siler ble tilsatt under en nitrogenatmosfære. Kalium hydrogenkarbonat (3,2 g) og benzylbromid (4,8 ml) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 5 timer. Etter tilsetning av etylacetat og vann, ekstraksjon og separering av de to fasene, ble den organiske fasen konsentrert. Grovproduktet ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 6,19 g av forbindelse 134 og 1,88 g av startforbindelsen 133.
TLC: Rf ss 0,55, kiselgel, 4/6 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 120
Metyl O- (benzyl 4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1 -»4)
-2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid (135).
Forbindelse 134 (6,2 g) ble løst i 40 ml dioksan. Levulinsyre (2,1 g), disykloheksylkarbodiimid (3,75 g) og 4-dimetylaminopyridin (0,2 g) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 2 timer under en nitrogenatmosfære. Dietyleter (95 ml) ble tilsatt og presrpitatet ble filtrert bort. Filtratet ble vasket med vandig kaliumhydrogensulfat, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert. Krystallisering fra eter/heptan muliggjorde fremskaffelsen av 6,2 g av forbindelse 135.
TLC: Rf = 0,26, kiselgel, 95/5 v/v diklormetan/aceton.
Fremstilling 121
O- (Benzyl 4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -1,3-di-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-ot, B-D-glukopyranose (136).
Forbindelse 135 (6,1 g) ble løst i eddikanhydrid (256 ml) under en nitrogenatmosfære og kjølt til -20°C. En blanding av svovelsyre (4,9 ml) i eddikanhydrid (49 ml) ble dråpevis tilsatt i løpet av 30 minutter. Etter 60 minutter ble natriumacetat satt til en blanding som hadde en nøytral pH ble fremskaffet. Etylacetat og vann ble deretter tilsatt og den organiske fasen konsentrert. Rensing med kromatografi på en kiselgelkolonne muliggjorde fremskaffelsen av 4,2 g av forbindelse 136.
TLC: Rf = 0,24, kiselgel, 8/2 v/v diklormetan/etylacetat.
Fremstilling 122
0- (Benzyl 4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-p-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-cc, p-D-glukopyranose (137).
Forbindelse 136 (4,2 g) ble løst i tetrahydrofuran (42 ml) og piperidin (4,1 ml) ble tilsatt. Blandingen ble rørt natten over ved romtemperatur. Etylacetat ble tilsatt og blandingen ble vasket med 0,5 N saltsyre. Den organiske fasen ble konsentrert og resten ble renset ved kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 3,2 g av forbindelse 137.
TLC. Rf = 0,33, kiselgel, 1/1 v/v diklormetan/etylacetat.
Fremstilling 123
O- (Benzyl 4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyluronat) - (1-»4) -3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-oc-D-glukopyranose trikloracetimidat (138).
Forbindelse 137 (1,59 g) ble løst i tørr diklormetan under en nitrogenatmosfære. Trikloracetonitril (1,1 ml) og cesiumkarbonat (72 mg) ble tilsatt og blandingen ble rørt i 1 time. Cesiumkarbonatet ble filtrert bort og filtratet ble konsentrert. Rensing med kromatografi på en kiselgelkolonne muliggjorde fremskaffelsen av 1,57 g av forbindelse 138.
TLC: Rf = 0,60, kiselgel, 3/7 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 124
Metyl 0- (benzyl 4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-B-D-glukopyranosy1uronat) - (1->4) -0- (3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-oc-L-idopyranosyluronat) - (1->4) -2,3-di-0-benzyl-6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (139).
En blanding av forbindelse 133 (300 mg) og forbindelse 138 (455,6 mg) ble inndampet sammen med toluen og oppløst i diklormetan (6 ml) under en nitrogenatmosfære. Etter tilsetning av 4Å molekylære siler, ble blandingen kjølt til - 20°C. Etter røring i 20 minutter ble trimetylsilyl trifiuormetansulfonat (15 mol% i forhold til forbindelse 138) tilsatt. Etter 10 minutter ble blandingen raskt nedkjølt med vandig natriumhydrogenkarbonat. Etter filtrering av de molekylære silene ble filtratet fortynnet med diklormetan, vasket med vann, konsentrert og renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 560 mg av forbindelse 139.
TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 3/7 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 125
Metyl O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -O- (3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -0- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1 ->4) -2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-gfukopyranosid (140).
Forbindelse 139 (532,6 mg) ble løst i pyridin (1,9 ml) og en blanding av eddiksyre (2,4 ml) og hydrazinhydrat (0,3 ml) i pyridin (1,9 ml) ble tilsatt ved romtemperatur. Etter røring i 9 minutter, ble diklormetan og vann tilsatt. Den organiske fasen ble separert av og suksessivt vasket med 0,1 N saltsyre, vandig natriumhydrogenkarbonat og vann. Den organiske fasen ble konsentrert og renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 451 mg av forbindelse 140.
TLC: Rf = 0,45, kiselgel, 3/7 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 126
Metyl O- (6-0-benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-metyl-a-D-gIukopyranosyl) - (1-»4) - O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-»4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]3-0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -O- (3-0-acetyI-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat)
- (1->4) -2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid (141).
En blanding av forbindelse 117 (144 mg, 0,064 mmol) og forbindelse 140 (76 g, 0,058 mmol) ble inndampet sammen med toluen og oppløst i 1/2 v/v diklormetan/- dietyleter (3,0 ml). 4Å molekylære siler (140 mg) ble tilsatt under en nitrogenatmosfære og blandingen bie avkjølt til 0°C. Tert-butyldimetylsilyl trifluormetan-sulfonat (128 u.l av en 0,1 molar løsning i diklormetan) ble tilsatt og etter 15 minutter ble blandingen raskt nedkjølt med natriumhydrogenkarbonatløsning. Etter ekstraksjon med vann og diklormetan ble den organiske fasen tørket og konsentrert. Produktet ble først renset med kromatografi på Sephadex LH 20 (1/1 v/v diklormetan/metanol) og deretter med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 124 mg av forbindelse 141 i et a/B forhold på 8/2.
TLC: Rf = 0,60, kiselgel, 1/1 v/v toluen/aceton.
Fremstilling 127
Metyl O- (6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) ]3-0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -O- (3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat)
- (1->4) -2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid (142).
Forbindelse 141 ble konvertert til forbindelse 142 i henhold til fremgangsmåten som ble beskrevet for fremstillingen av forbindelse 140.
Forbindelse 142 ble isolert som en 8/2 a/p blanding.
TLC: Rf = 0,45, kiselgel, 1/1 v/v toluen/aceton.
Fremstilling 128
0- (2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (2,3,6-tri-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -1,2,3,6-tetra-O-acetyl-B-D-glukopyranose (144).
Maltotriose (7 g, 13,9 mmol) (kommersielt tilgjengelig) ble porsjonsvis satt til en suspensjon av natriumacetat (7 g, 85 mmol) i eddikanhydrid (70 ml) ved 155°C. Etter 15 minutter ble den klare løsningen raskt nedkjølt med isvann (700 ml). Etter ekstraksjon med etylacetat ble den organiske fasen vasket med vann, tørket over magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert for å gi 13,1 g av forbindelse 144.
TLC: Rf = 0,53, kiselgel, 7/3 v/v diklormetan/etylacetat.
Fremstilling 129
Etyl O- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-acetyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -2,3,6-tri-0-acetyl-1-tio-B-D-glukopyranosid
(145). Forbindelse 144 (13 g, 13,5 mmol) ble løst i toluen (80 ml). Etantiol (1,97 ml, 26,9 mmol) og borontrifluorid dietyleterat (13,7 ml av en en molar løsning i toluen) ble tilsatt under en nitrogenatmosfære. Etter røring i 60 timer, ble blandingen fortynnet med vann og diklormetan. Etter ekstraksjon ble den organiske fasen vasket med 10% natriumhydrogenkarbonatløsning og vann, tørket, filtrert og konsentrert. Grovproduktet ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne for å gi 8,6 g av forbindelse 145.
TLC: Rf = 0,60, kiselgel, 7/3 v/v diklormetan/etylacetat.
Fremstilling 130
Etyl O- (ct-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -1-tio-B-D-glukopyranosid (146).
Forbindelse 145 ble konvertert til forbindelse 146 i henhold til fremgangsmåten som ble beskrevet for fremstillingen av forbindelse 95.
TLC: Rf = 0,80, kiselgel, 13/7/1,674 v/v/v/v etylacetat/pyridin/eddiksyre/vann.
Fremstilling 131
Etyl O- (2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -0- (2,3,6-tri-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -2,3,6-tri-0-benzoyl-1-tio-p-D-glukopyranosid (147).
Forbindelse 146 ble konvertert til forbindelse 147 i henhold til fremgangsmåten som ble beskrevet for fremstillingen av forbindelse 92.
TLC: Rf = 0,50, kiselgel, 9/1 v/v toluen/etylacetat.
Fremstilling 132
Metyl O- (2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-cx-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1->4) -0- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -[ 0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3 -0- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (benzyl 2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronat) - (1->4) -O- (3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (benzyl 2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronat) - (1 ->4) -2,3-di-0-benzyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosid
(148). Tioglykosidet 147 (105 mg, 0,066 mmol) og mottakeren 142 (55 mg, 0,017 mmol), (ot/p ved 8/2) ble koblet i henhold til fremgangsmåten som ble beskrevet for forbindelse 109. Produktet ble først renset med kromatografi på Sephadex LH 20 (1/1 diklormetan/metanol) og deretter med kromatografi på en kiselgelkolonne (9/0,5/0,5 v/v/v dietyleter/etylacetat/etanol) for å gi 49 mg av forbindelse 148.
TLC: Rf = 0,30, kiselgel, 85/7,5/7,5 v/v/v dietyleter/etylacetat/etanol.
Fremstilling 133
Metyl O- (2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0- (2,3,6-tri-O-benzoyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-benzoyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (6-0-benzoyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) -
(1-44) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-+4) ]3 -O- (6-0-acetyl-2,3-di-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1->4) -O- (3-0-acetyl-6-0-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) - 6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (149).
En løsning av forbindelse 148 (47 mg, 0,01 mmol) i etylacetat (10 ml) ble rørt under en nitrogenatmosfære i nærvær av 10% palladium-på-trekull (90% w/w relativ til forbindelse 148) i 3 timer og filtrert. Filtratet ble konsentrert for å gi 42 mg av forbindelse 149.
TLC: Rf = 0,35, kiselgel, 20/7/1,6/4 v/v/v/v etylacetat/pyridin/eddiksyre/vann.
Fremstilling 134
Metyl O-(oe-D-glukopyranosyl) - (1->4) -0- (a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (B-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-(2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-rnetyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) ]3-0-(2,3-di-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1 -»4) -O- (6-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1 ->4) -
0- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -6-O-metyl-a-D-glukopyranosid (150).
En blanding av metanol (0,22 ml) og 0,66 N natriumhydroksidløsning (0,66 ml) ble satt tii forbindelse 149 (41 mg, 0,01 mmol) etterfulgt av røring i 20 timer ved romtemperatur. Blandingen ble fortynnet med vann og surgjort med 0,5 N av 0,5 N saltsyreløsning for å kunne fremskaffe en pH på 6,5. Etter konsentrasjon ble det rene produktet avsaltet på en Sephadex G-25 kolonne, ved å anvende 9/1 v/v vann/actetonitril. Heksadekasakkairdfraksjonene ble kombinert og frysetørket for å fremskaffe 26 mg av forbindelse 150 som et amorft hvitt pulver.
TLC: Rf = 0,35, kiselgel, 8/7/1,6/4 v/v/v/v etylacetat/pyridin/eddiksyre/vann.
Fremstilling 135
6-0-Tert-butyldimetylsilyl-1,2-0-isopropyliden-3-0-metyl-a-D-glukofuranose
(152). Diolen 151 (10 g, 42,7 mmol) ble tatt opp i anhydrøst diklormetan (100 ml) og tert butyldimetylsilylklorid (7,1 g, 47,3 mmol) og imidazol (5,8 g, 85,3 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur. Etter 2 timer ble blandingen fortynnet i diklormetan og vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (1/9 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe det ønskede produktet 152 (11,9 g, 80%) i form av en sirup.
[<x]d-34°(c1,9, CHCI3).
Fremstilling 136
6-0-Tert-butyldimetylsilyl-1,2-0-isopropyliden-3-0-metyl-5-C-vinyl-a-D-glukofuranose (154).
Oksalylklorid (3,2 ml, 36,8 mmol) og dimetylsulfoksid (5,2 ml, 73,4 mmol) ble, véd -78°C, satt til anhydrøst diklormetan (40 ml) og blandingen ble rørt i 30 minutter. Deretter ble forbindelse 152 (6,4 g, 18,4 mmol) tilsatt og blandingen ble rørt ytterligere 1 time. Trietylamin (15,3 ml, 110,0 mmol) ble deretter tilsatt og etter 30 minutter, ble reaksjonsblandingen fortynnet i diklormetan. Standard prosessering muliggjorde fremskaffelsen av 5-ulose-forbindelsen (153), som ble anvendt direkte til den følgende reaksjonen. Grovketonet 153 ble tatt opp i anhydrøst tetrahydrofuran (100 ml) og 1M vinylmagnesiumbromidløsning i tetrahydrofuran (28 ml, 27,6 mmol) ble tilsatt ved 0°C. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen fortynnet med ammonium-klorid og vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (1/9 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe den ønskede forbindelsen 154 (70%, 4,8 g) i form av en sirup.
[a]D-40°(c1,3,CHCl3).
Anal. beregnet: C, 57,72, H, 9,15. Funnet: C, 57,77, H, 9,23.
Fremstilling 137
1,2,4,6-Tetra-0-acetyl-3-0-metyl-5-C-vinyl-8-D-glukopyranose (156).
Forbindelse 154 (3,5 g, 9,4 mmol) ble tatt opp i vann (50 ml); I R-120 resin (1
g) ble tilsatt dertil og blandingen ble varmet ved 80°C i 6 timer. Resinet ble filtrert av og filtratet ble konsentrert. Grovproduktet 155 ble acetylert ved å anvende
eddikanhydrid (12 ml) og pyridin (13 ml). Eddikanhydridoverskuddet ble ødelagt med metanol og løsningsmidlene ble konsentrert. Resten ble ekstrahert med vann og diklormetan. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat, konsentrert og, etter rensing med kromatografi på en kiselgelkolonne (3/2 v/v
etylacetat/sykloheksan), ble tetraacetatforbindelsen 156 fremskaffet i form av et fast stoff (75%, 2,7 g). Smp. 50°C.
[a]D-84°(c1,6,CHCI3).
Anal. beregnet: C, 52,47, H, 6,19. Funnet: C. 52,51, H, 6,19.
CI-MS: 406 (M + NH4), 389 (M + 1).
Fremstilling 138
Metyl 2,3,6-tri-0-benzyl-4-0- (2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-metyl-5-C-vinyl-B-D-glukopyranosyl) -a-D-glukopyranosid (158).
Forbindelse 156 (1,6 g, 4,1 mmol) og forbindelse 157 2,1 g, 4,5 mmol (P. J .
Garegg og H. Hultberg, Carbohydr. Res. 1981, 93, C10) ble løst i anhydrøst diklormetan (50 ml) og molekylære siler (4,0 g) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i en time og TMSOTf (0,95 ml, 5,2 mmol) ble deretter tilsatt
ved -78°C. Reaksjonsblandingen fikk deretter sakte oppvarmes til romtemperatur. Etter 2 timer ble reaksjonsblandingen nøytralisert med trietylamin og filtrert gjennom Celite; filtratet ble vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi på kiselgel (4/1 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe den ønskede forbindelsen 158 (2,77 g, 85%) i form av et fast stoff. Smp. 47°C.
[a]D-36<0>(cO,6,CHCl3).
Anal. beregnet: C, 65,14, H, 6,61. Funnet: C, 65,09, H, 6,70.
Fremstilling 139
Metyl 2,3,6-0-tri-0-benzyl-4-0- (4,6-0-isopropyliden-3-0-metyl-5-C-vinyl-B-D-glukopyranosyl) -a-D-glukopyranosid (160).
Forbindelse 158 (2,7 g, 3,4 mmol) ble løst i metanol (40 ml). Natrium (katalytisk) ble tilsatt ved 0°C og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer. Løsningsmidlet ble konsentrert og resten 159 ble tatt opp i anhydrøst aceton (40 ml) og 2,2-dimetoksypropan (2 ml) og p-toluensulfonsyre (katalytisk) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur natten over. Løsningsmidlet ble fordampet og resten ble tatt opp i kloroform og vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (1/1 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe 4', 6-isopropyliden-O- derivatet 160 (1,7 g, 70%) i form av et fast stoff. Smp. 55°C.
[a]D +13°(c0,8, CHCI3).
Anal. beregnet: C, 67,97, H, 7,13. Funnet: C, 67,87, H, 7,16.
CI-MS: 707 (M + 1), 724 (M + NH4).
Fremstilling 140
Metyl 2,3,6-tri-0-benzyl-4-0- (4,6-0-isopropyliden-3-0-metyl-5-C-vinyl-B-D-mannopyranosyl) -a-D-glukopyranosid (162).
Oksalylklorid (0,35 ml, 4,0 mmol) og anhydrøst DMSO (0,57 ml, 8,0 mmol) i anhydrøst diklormetan (10 ml) ble rørt ved -78°C i 30 minutter. Forbindelse 160 (1,4 g, 2,0 mmol) i anhydrøst diklormetan (10 ml) ble satt til løsningen og blandingen ble rørt i ytterligere 45 minutter. Reaksjonsblandingen ble nøytralisert ved tilsetning av anhydrøst trietylamin (1,7 ml, 12,0 mmol) og deretter fortynnet med diklormetan. Etter vasking med vann ble den organiske fasen tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten 161 ble anvendt direkte i den følgende reaksjonen uten rensing. Ketonet 161 ble tatt opp i anhydrøst tetrahydrofuran (15 ml) og en 1N løsning av superhydrid i tetrahydrofuran (4 ml, 4,0 mmol) ble tilsatt ved -78°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time og 5% natriumhydroksid (2 ml) og hydrogenperoksid (1 ml) ble deretter tilsatt. Løsningsmidlet ble fordampet og -resten ble tatt opp i dietylacetat og vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi (2/1 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe forbindelse 162 (1,0 g, 70%).
[a]D -11°(c 0,5, CHCI3).
CI-MS: 724 (M + 18), 707 (M + 1).
Fremstilling 141
Metyl 2,3,6-tri-0-benzyl-4-0- (2-0-acetyl-3-0-metyl-5-C-vinyl-B-D-mannopyranosyl) -a-D-glukopyranosid (164).
Forbindelse 162 (940 mg, 1,3 mmol) ble løst i pyridin (3 ml) og eddikanhydrid (0,3 ml) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer. Overskudd av pyridin og eddikanhydrid ble fordampet og resten 163 ble anvendt direkte for fjerning av beskyttelsen til isopropyliden ved å anvende 80% eddiksyre (5 ml) ved 60°C i 2 timer. Overskudd av eddiksyre ble fordampet og resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (4/1 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe diolen 164 (660 mg, 70%) i form av et fast stoff. Smp. 53°C.
[a]D-10°(c 0,8, CHCIs).
CI-MS: 709 (M + 1), 726 (M + 18).
Fremstilling 142
Metyl 2,3,6-tri-0-benzyl-4-(2-0-acetyl-3-0-metyl-6-0-tosyl-5-C-vinyl-B-D-mannopyranosyl) -a-D-glukopyranose (165).
Forbindelse 164 (600 mg, 0,9 mmol) ble løst i pyridin (3 ml) og tosylklorid (240 mg, 1,3 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer. Løsningsmidlet ble fordampet og resten ble fortynnet med kloroform og vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (1/1 v/v etylacetat/- sykloheksan) for å kunne fremskaffe tosylforbindelsen 165 (297 mg, 80%) i form av en sirup.
[a]D-26°(c 0,8, CHCI3).
Fremstilling 143
Metyl 2,3,6-tri-0-benzyl-4- (2,6-anhydro-3-0-metyl-5-C-vinyl-B-D-mannopyranosyl) -a-D-glukopyranosid (166).
Forbindelse 165 (550 mg, 0,6 mmol) ble tatt opp i etanol (3 ml) og en 0,1 N etanolisk natriumhydroksidløsning (5 ml) ble deretter tilsatt. Reaksjonsblandingen ble varmet ved 70°C i 3 timer og deretter nøytralisert med IR-120 resin (H+ form) og filtrert gjennom Celite. Etter konsentrering ble resten renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (1/1 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe forbindelse 166 (292 mg, 70%) i form av en sirup.
[a]D +13°(c 0,5, CHCI3).
CI-MS: 666 (M +18).
Fremstilling 144
Metyl 2,3,6-tri-0-benzyl-4- (benzyl 3-0-metyl-2-0-5-C-metyliden-a-L-idopyranuronat) -a-D-glukopyranosid (167).
Forbindelse 166 (260 mg, 0,4 mmol) ble løst i diklormetan (20 ml), løsningen ble rørt ved -78°C og ozon ble deretter boblet gjennom i 30 sekunder. Fargen på løsningen ble lysegul. Dimetylsulfid ble satt til løsningen og reaksjonsblandingen ble deretter vasket med vann. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert og ført direkte over i den følgende reaksjonen uten ytterligere rensing. Grovaldehydet ble tatt opp i tert-butanol (16 ml) og 2-metyl-2-buten- (5 ml) og vann (16 ml) ble tilsatt. NaH2P04 (700 mg) og NaCI02 (700 mg) ble deretter suksessivt tilsatt blandingen. Suspensjonen ble rørt kraftig ved romtemperatur natten over, fortynnet med vann og ekstrahert med etylacetat. Den organiske fasen ble tørket over magnesiumsulfat, konsentrert og deretter ført direkte over i den følgende reaksjonen. Den urensede syren ble tatt opp i dimetylformamid (25 ml) og tetrabutylammoniumjodid (0,7 g, 2,0 mmol), kaliumbikarbonat (0,25 g, 2,5 mmol) og benzylbromid (0,250 ml, 2,1 mmol) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 5 timer. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med vann og eter. Eterfasen ble tørket over magnesiumsulfat og konsentrert, og resten ble renset med kromatografi på en kiselgelkolonne (2/1 v/v etylacetat/sykloheksan) for å kunne fremskaffe derivatet 167 (236 mg, 80%) i form av en sirup.
CI-MS: 774 (M + 18).
Eksempel 1
Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-ot-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]6-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -0- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt (168).
Forbindelse 31 ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 5 for å kunne fremskaffe 168 (80 % totalt på de tre trinnene), [ocfo + 41 (c = 0,8, vann). ESIMS, negativ innstilling: monoisotopisk masse = 7133,26; kjemisk masse = 7138,90; eksperimentell masse = 7137,26 ± 0,0 a.m.u. <1>H NMR (D20) 5 av de hovedanomeriske protonene: 5,71; 5,48; 5,46; 5,44; 5,17; 5,08; 4,81; 4,78; 4,67 ppm.
En identisk fremgangsmåte muliggjorde fremskaffelsen av forbindelsene 169 og 170.
Eksempel 4
Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]15-0- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt (171).
Forbindelse 51 (55 mg, 10,5 mmol) ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 5 for å kunne oppnå, etter frysetørking, det sulfatiserte produktet 187 (50 mg, 77 % over de tre trinnene). [a]o + 107 (c = 0,52, vann). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 6194,16; kjemisk masse - 6198,83; eksperimentell masse = 6195,33 ± 1,79.<1>H NMR (D20) 5 av de hovedanomeriske protonene: 5,71; 5,67; 5,48; 5,43; 5,17; 5,10; 4,68 ppm.
En identisk fremgangsmåte muliggjør fremskaffelse av forbindelsene 172 og 173.
Eksempel 7
Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-ot-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ^-O- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1-4) - O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt (174).
Forbindelse 75 ble behandlet i henhold til Fremgangsmåte 5 for å kunne fremskaffe 174 (84 % totalt på de tre trinnene). [a]D + 62 (c = 0,46, vann). ESIMS, positiv innstilling: monoisotopisk masse = 4966,39; kjemisk masse = 4970,04; eksperimentell masse = 4969,63 ± 0,78 a.m.u. <1>H NMR (D20) 5 for de hovedanomeriske protonene: 5,69; 5,63; 5,57; 5,46; 5,44; 5,41; 5,15; 5,06; 4,79; 4,66; 4,62; 4,41 ppm.
Ved å arbeide i henhold til Eksempel 7 og ved å anvende egnede intermediater, ble Eksemplene 8 til 12, som er beskrevet i Tabell III under, fremstilt.
Eksempel 13
Metyl O- (2,3,4,6-tetra-O-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -0-(2,3,6-tri-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - O- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1->4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1->4) -O-{2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-44) ]3-0- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-44) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-»4) - O- (6-0-metyl-2,3-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-»4) -O- (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1->4) -6-0-metyl-2,3-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosid (180).
Det fullstendig ubeskyttede heksadekasakkaridet 150 (26 mg, 0,0084 mmol) ble løst i dimetylformamid (0,87 ml). Svoveltrioksid/trietylamin-kompleks (125 mg, 0,67 mmol, 80 ekv.) ble tilsatt under en nitrogenatmosfære, og blandingen ble rørt i 16 timer ved 50°C. Blandingen ble avkjølt til 0°C og vandig natriumhydrogenkarbonat (227 mg, 2,6 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble konsentrert til et lite volum og plassert på en Sephadex G-25 kolonne eluert med 9/1 v/v vann/acetonitril. De egnede fraksjonene ble separert, konsentrert til et lite volum, plassert på en Dowex XW4 Na<* >ionebyttekolonne i vann og eluatet ble frysetørket for å gi 37 mg av forbindelse 151 som et hvitt pulver. [ afo = +67,6 (c = 1, vann) MS ESI: molekylvekten ble 4370,6 (H+ form) C128H222O1 13S16 (Teoretisk molekylvekt = 4370,14).
NMR; utskiftning av de anomeriske protonene (ppm):
enhet 1: 5,17; enhet 2: 5,03; enhet 3: 5,41; enhet 4: 4,42; enhet 5: 5,49; enhet 6: 4,66; enheter 7,9 og 11: 5,67; enheter 8,10 og 12: 4,46; enhet 13: 5,61; enhet 14: 4,94; enhet 15: 5,59 ppm; enhet 16: 5,69.

Claims (17)

1. Syntetisk polysakkarid som innbefatter en bindingsregion for antitrombin III, karakterisert ved at den består av en sekvens med fem monosakkarider som totalt har to karboksylsyrefunksjoner og minst fire sulfogrupper, der denne regionen er direkte bundet på dens ikke-reduserende ende med en trombinbindende region som innbefatter en sekvens på 10 til 25 monosakkaridenheter som er valgt fra heksoser, pentoser eller deoksysukker, der hydroksylgruppene uavhengig er eterifisert med en (CrC6) alkylgruppe eller esterifisert i form av sulfogrupper, så vel som dets salter, spesielt dets farmasøytisk godtakbare salter.
2. Polysakkarid i henhold til krav 1, karakterisert ved at det har formelen: der - den bølgede linjen betegner en binding enten under eller over planet til pyranoseringen, betyr et polysakkarid Po inneholdende n like eller ulike monosakkaridenheter, som via dets anomeriske karbon er bundet til Pe, er en skjematisk presentasjon av en monosakkaridenhet til pyranosestruktur som er valgt fra heksoser, pentoser og korresponderende deoksysukker, der denne enheten er koblet via dens anomeriske karbon til en annen monosakkairdenhet, og der hydroksylgruppene til denne enheten er substituert med identiske eller forskjellige X-grupper, der X-gruppene er valgt fra (Ci-Ce) alkylgrupper og sulfogrupper, -ner et heltall fra 10-25, - Pe representerer et pentasakkarid med strukturen: der - Ri representerer en (Ci-C6) alkyl- eller en sulfogruppe, - Ria representerer Ri eller består av, med oksygenatomet som det er bundet til og karbonatomet som har karboksylfunksjonen på den samme ringen, en gruppe - R representerer en (d-Ce) alkylgruppe, - W representerer et oksygenatom eller en metylengruppe, eller et av deres salter, spesielt et salt som er farmasøytisk godtakbart.
3. Salt av et polysakkarid i henhold til krav 2, karakterisert ved at kationet er valgt fra kationer av atkalimetaller, spesielt natrium og kalium.
4. Polysakkarid og salt i henhold til ethvert av kravene 2 og 3, karakterisert ved at det har formelen: betegner en spesiell familie av Po-polysakkarider, som er koblet via deres anomeriske karbon til Pe som definert for (I), er som definert for (I), - OX-ene er som definert for (I) og kan, for det samme monosakkaridet, være identiske eller forskjellige, - monosakkaridene innbefattet i [ ]m danner et disakkarid repetert m ganger, monosakkaridene som er innbefattet i [ ]i danner et disakkarid repetert t ganger, - m varierer fra 1 til 8, t varierer fra 0 til 5 og p varierer fra 0 til 1, der det er underforstått at 5 < m +1 < 12, og deres salter, spesielt deres farmasøytisk godtakbare salter.
5. Polysakkarid og salt i henhold til ethvert av kravene 2 og 3, karakterisert ved at det har formelen: betegner en spesiell familie av Po-polysakkarider, som er koblet via deres anomeriske karbon til Pe som definert for (I), er som definert for (I), - OX-ene er som definert for (I) og kan, for det samme monosakkaridet, være identiske eller forskjellige, - monosakkaridene innbefattet i [ ]m> er repetert m' ganger, monosakkaridet som er innbefattet i [ ] r er repetert f ganger, og monosakkaridet innbefattet i [ ]p> er repetert p' ganger, - rn* varierer fra 1 til 5, f varierer fra 0 til 24 og p' varierer fra 0 til 24, der det er underforstått at 10 < m' + f + p' < 25, og deres salter, spesielt deres farmasøytisk godtakbare salter.
6. Salt i henhold til ethvert av kravene 2 og 3 og deres korresponderende syrer, karakterisert ved at anionet har formelen: der t representerer 5,6 eller 7 og kationet er et farmasøytisk godtakbart monovalent kation.
7. Salt i henhold til ethvert av kravene 2 og 3 og deres korresponderende syrer, karakterisert ved at anionet har formelen: der t representerer 5, 6 eller 7 og der kationet er et farmasøytisk godtakbart . monovalent kation.
8. Salt i henhold til ethvert av kravene 2 og 3 og deres korresponderende syrer, karakterisert ved at anionet har formelen: der m representerer 1,2 eller 3 og t representerer 2, 3,4 eller 5, og der kationet er et farmasøytisk godtakbart monovalent kation.
9. Salt av et polysakkarid ifølge krav 3, karakterisert ved at det er valgt fra: Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-cc-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]4-0-(2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [0- (3-0-metyl-2,6-di-0-suffo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]5-O- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1,4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyI) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]6-O- (2,3-di-0-metyl-6-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) 2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -[O- (2,3-di-O- . metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]n -O- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]i3-0- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (2,3-di-0-metyl-4,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3-di-O-metyl-6-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -]i5-0- (2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) ] 2-[O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]2-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-p-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - ( 1- 4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) fe-[O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-p-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-ot-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt,. Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) j4-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyt-2,6-di-0-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O-(2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]3-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O-(2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-trt-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [0- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]4-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo- a-D-glukopyranosyt) - (1-4) -O- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) - (2,3-di-O-metyl-a-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt, Metyl O- (3-0-metyl-2,4,6-tri-0-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (3-0-metyl-2,6-di-O-sulfo-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) - [O- (2,3,6-tri-O-metyl-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -O- (2,3,6-tri-O-metyl-B-D-glukopyranosyl) - (1-4) ]5-0-2,3-di-0-metyl-6-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1-4) -0- (2,3-di-O-metyl-B-D-glukopyranosyluronsyre) - (1-4) -O-(2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosyl) - (1 -4) - (2,3-di-O-metyl-cc-L-idopyranosyluronsyre) - (1-4) -2,3,6-tri-O-sulfo-a-D-glukopyranosid, natriumsalt.
10. Prosess for fremstillingen av forbindelsene med formelen (I), karakterisert ved at i et første trinn, en fullstendig beskyttet forløper til det ønskede polysakkaridet (I), inneholdende en beskyttet forløper til Pe-regionen som er forlenget på dens ikke-reduserende ende med en beskyttet forløper til det sulfatiserte polysakkaridet Po, blir syntetisert og deretter, i et neste trinn, blir de negativt ladede gruppene introdusert og/eller beskyttelsen fjernet.
11. Forbindelse, karakterisert ved formelen: der Ti og Tn, som kan være identiske eller forskjellige, representerer en midlertidig, semipermanent eller permanent substituent, og Z er en beskyttende gruppe for en hydroksylfunksjon.
12. Forbindelse, karakterisert ved formelen: der T-i og Tn, som kan være identiske eller forskjellige, representerer en midlertidig, semipermanent eller permanent substituent, Z er en beskyttende gruppe for en hydroksylfunksjon.
13. Farmasøytiske blandinger, karakterisert ved at de inneholder, som aktiv bestanddel, et polysakkarid eller salt i henhold til ethvert av kravene 1 til 9, i form av et salt med en farmasøytisk godtakbar base eller i sy ref orm, i kombinasjon eller som en blanding med et inert, ikke-toksisk, farmasøytisk godtakbart bindemiddel.
14. Farmasøytisk blanding i henhold til krav 13, karakterisert ved at den er i form av doseenheter, der den aktive bestanddelen ble blandet med minst ett farmasøytisk bindemiddel.
15. Sammensetning i henhold til krav 14, karakterisert ved at hver doseenhet inneholder f ra 0,1 til 100 mg aktiv bestanddel.
16. Sammensetning i henhold til krav 15, karakterisert ved at hver doseenhet inneholder fra 0,5 til 50 mg aktiv bestanddel.
17. Anvendelse av polysakkaridet eller saltet i henhold til kravene 1 til 9, for fremstilling av en medisin som er egnet i patologier som er avhengig av ikke-virksom koagulasjon.
NO19990215A 1996-07-19 1999-01-18 Syntetiske polysakkarider og salt derav, fremgangsmate for fremstilling derav og farmasoytiske blandinger inneholdende samme, samt mellomprodukter for fremstilling, sammensetninger inneholdende blandingen og anvendelse av polysakkaridet eller saltet. NO319682B1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609116A FR2751334B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant
PCT/FR1997/001344 WO1998003554A1 (fr) 1996-07-19 1997-07-18 Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO990215D0 NO990215D0 (no) 1999-01-18
NO990215L NO990215L (no) 1999-03-18
NO319682B1 true NO319682B1 (no) 2005-09-05

Family

ID=9494266

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19990215A NO319682B1 (no) 1996-07-19 1999-01-18 Syntetiske polysakkarider og salt derav, fremgangsmate for fremstilling derav og farmasoytiske blandinger inneholdende samme, samt mellomprodukter for fremstilling, sammensetninger inneholdende blandingen og anvendelse av polysakkaridet eller saltet.

Country Status (36)

Country Link
US (1) US6534481B1 (no)
EP (1) EP0912613B1 (no)
JP (1) JP3345020B2 (no)
KR (1) KR100311857B1 (no)
CN (1) CN1200003C (no)
AR (1) AR008068A1 (no)
AT (1) ATE224917T1 (no)
AU (1) AU726679B2 (no)
BR (1) BR9710739B1 (no)
CA (1) CA2261597C (no)
CZ (1) CZ301009B6 (no)
DE (1) DE69715866T2 (no)
DK (1) DK0912613T3 (no)
EE (1) EE03929B1 (no)
ES (1) ES2184123T3 (no)
FR (1) FR2751334B1 (no)
HK (1) HK1019757A1 (no)
HU (1) HU223691B1 (no)
ID (1) ID20604A (no)
IL (2) IL128018A0 (no)
IS (1) IS1968B (no)
MY (1) MY124548A (no)
NO (1) NO319682B1 (no)
NZ (1) NZ333721A (no)
PL (1) PL190397B1 (no)
PT (1) PT912613E (no)
RU (1) RU2167163C2 (no)
SA (1) SA99200037B1 (no)
SI (1) SI0912613T1 (no)
SK (1) SK284881B6 (no)
TR (1) TR199900114T2 (no)
TW (1) TW520376B (no)
UA (1) UA61921C2 (no)
WO (1) WO1998003554A1 (no)
YU (1) YU49247B (no)
ZA (1) ZA976340B (no)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2773801B1 (fr) 1998-01-19 2000-05-12 Sanofi Sa Nouveaux pentasaccharides, procedes pour leurs preparations et compositions pharmaceutiques les contenant
FR2814463B1 (fr) * 2000-09-22 2002-11-15 Sanofi Synthelabo Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant au moins une liaison covalente avec la biotine ou un derive de la biotine
US7138531B2 (en) * 2001-10-15 2006-11-21 Kemin Pharma B.V.B.A. Preparation and use of carbohydrate-based bicyclic ring structures with antimicrobial and cytostatic activity
EP1574516A1 (en) * 2004-03-05 2005-09-14 Sanofi-Aventis Antithrombotic compound
US7563780B1 (en) * 2004-06-18 2009-07-21 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Heparin prodrugs and drug delivery stents formed therefrom
FR2874924B1 (fr) * 2004-09-09 2006-12-01 Sanofi Aventis Sa Hexadecasaccharides biotinyles, leur preparation et leur utilisation therapeutique
TWI403334B (zh) * 2004-12-23 2013-08-01 Merck Sharp & Dohme 包含生物素殘基之抗血栓雙重抑制劑
TWI376234B (en) * 2005-02-01 2012-11-11 Msd Oss Bv Conjugates of a polypeptide and an oligosaccharide
IL181431A0 (en) * 2007-02-19 2007-07-04 Micha Shemer Fruit juice and puree with a lowered amount of available sugars
MX338213B (es) 2007-10-16 2016-04-07 Progen Pharmaceuticals Ltd Derivados de oligosacaridos sulfatados novedosos.
WO2009155108A1 (en) 2008-05-30 2009-12-23 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Saccharide structures and methods of making and using such structures
FR2935386B1 (fr) * 2008-08-26 2010-09-10 Sanofi Aventis Nouveaux polysaccharides a activite antithrombotique comprenant une liaion covalente avec une chaine amine
WO2011014793A2 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Reliable Biopharmaceutical Corporation Process for preparing fondaparinux sodium and intermediates useful in the synthesis thereof
FR2949114B1 (fr) 2009-08-14 2011-08-26 Sanofi Aventis OCTASACCHARIDES N-ACYLES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
FR2949115B1 (fr) 2009-08-14 2012-11-02 Sanofi Aventis OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PREPARATION ET LEUR APPLICATION EN THERAPEUTIQUE
US8420790B2 (en) 2009-10-30 2013-04-16 Reliable Biopharmaceutical Corporation Efficient and scalable process for the manufacture of Fondaparinux sodium
KR101682466B1 (ko) * 2010-02-01 2016-12-05 롯데정밀화학 주식회사 아세틸화 셀룰로오스 에테르 및 이를 포함하는 물품
JP2013537181A (ja) 2010-09-10 2013-09-30 サノフイ 抗血栓活性及び改善された代謝安定性を有するビオチン化多糖類
FR2970969B1 (fr) 2011-01-27 2013-10-18 Sanofi Aventis Oligosaccharides 3-o-alkyles activateurs des recepteurs des fgfs, leur preparation et leur application en therapeutique
CN109134554B (zh) * 2017-06-15 2021-09-28 南京正大天晴制药有限公司 抗凝血的五糖类化合物及其制备方法和医药用途
CN109134553B (zh) * 2017-06-15 2021-09-28 南京正大天晴制药有限公司 抗凝血的五糖类化合物及其制备方法和医药用途
CN109134555B (zh) * 2017-06-15 2021-09-28 南京正大天晴制药有限公司 抗凝血的五糖类化合物及其制备方法和医药用途

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4801583A (en) 1982-01-15 1989-01-31 Choay S.A. Oligosaccharides and their biological applications
EP0300099A1 (en) 1987-07-20 1989-01-25 Akzo N.V. New pentasaccharides
US5382570A (en) 1990-04-23 1995-01-17 Akzo, N.V. Sulfated glycosaminoglycanoid derivatives of the dermatan sulfate and chondroitin sulfate type
US5378829A (en) 1990-04-23 1995-01-03 Akzo N.V. Sulfated glycosaminoglycanoid derivatives of the heparin and heparan sulfate type
IL102758A (en) 1991-08-23 1997-03-18 Akzo Nv Glycosaminoglycanoid derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
FR2704226B1 (fr) 1993-04-22 1995-07-21 Sanofi Elf 3-desoxy oligosaccharides, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
ATE190619T1 (de) 1993-09-01 2000-04-15 Akzo Nobel Nv Biskonjugate, die zwei saccharide und einen spacer enthalten
FR2749849B1 (fr) * 1996-06-14 1998-09-04 Sanofi Sa Polysaccharides synthetiques, procede pour leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant

Also Published As

Publication number Publication date
ZA976340B (en) 1999-01-22
CN1200003C (zh) 2005-05-04
FR2751334B1 (fr) 1998-10-16
SK284881B6 (sk) 2006-02-02
CA2261597C (fr) 2004-12-14
JP2000500807A (ja) 2000-01-25
ATE224917T1 (de) 2002-10-15
YU49247B (sh) 2004-12-31
NO990215D0 (no) 1999-01-18
HK1019757A1 (en) 2000-02-25
IL128018A (en) 2007-10-31
CZ301009B6 (cs) 2009-10-14
US6534481B1 (en) 2003-03-18
KR100311857B1 (ko) 2001-11-14
HUP9902287A3 (en) 2001-09-28
HU223691B1 (hu) 2004-12-28
SA99200037B1 (ar) 2006-08-23
TR199900114T2 (xx) 1999-03-22
DE69715866T2 (de) 2003-05-28
PT912613E (pt) 2003-01-31
DE69715866D1 (de) 2002-10-31
JP3345020B2 (ja) 2002-11-18
RU2167163C2 (ru) 2001-05-20
BR9710739B1 (pt) 2008-11-18
UA61921C2 (uk) 2003-12-15
TW520376B (en) 2003-02-11
IS4945A (is) 1999-01-18
AU726679B2 (en) 2000-11-16
PL190397B1 (pl) 2005-12-30
PL331259A1 (en) 1999-07-05
AR008068A1 (es) 1999-12-09
IS1968B (is) 2004-12-15
AU3774797A (en) 1998-02-10
IL128018A0 (en) 1999-11-30
BR9710739A (pt) 1999-08-17
CA2261597A1 (fr) 1998-01-29
ID20604A (id) 1999-01-21
SI0912613T1 (en) 2003-04-30
ES2184123T3 (es) 2003-04-01
SK5399A3 (en) 2000-05-16
DK0912613T3 (da) 2003-01-27
CN1228785A (zh) 1999-09-15
NZ333721A (en) 2000-08-25
CZ16099A3 (cs) 1999-06-16
EP0912613B1 (fr) 2002-09-25
YU1999A (sh) 2000-03-21
FR2751334A1 (fr) 1998-01-23
KR20000067909A (ko) 2000-11-25
EE9900015A (et) 1999-08-16
NO990215L (no) 1999-03-18
EP0912613A1 (fr) 1999-05-06
EE03929B1 (et) 2002-12-16
WO1998003554A1 (fr) 1998-01-29
HUP9902287A1 (hu) 1999-10-28
MY124548A (en) 2006-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO319682B1 (no) Syntetiske polysakkarider og salt derav, fremgangsmate for fremstilling derav og farmasoytiske blandinger inneholdende samme, samt mellomprodukter for fremstilling, sammensetninger inneholdende blandingen og anvendelse av polysakkaridet eller saltet.
KR100891388B1 (ko) 바이오틴 또는 바이오틴 유도체와의 1 이상의 공유 결합을포함하는 항혈전 활성이 있는 다당류
KR100513196B1 (ko) 합성 폴리사카라이드, 그의 제조 방법 및 그를 함유한제약 조성물
KR100533565B1 (ko) 신규한 오당류, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 제약 조성물
JP3501813B2 (ja) 合成ポリサッカライド、それらの製造法およびそれらを含む医薬組成物
JPH09183789A (ja) 新規な硫酸化及び燐酸化糖誘導体、その製法及び用途
Hassan Preparation of a set of selectively protected disaccharides for modular synthesis of heparan sulfate fragments: toward the synthesis of several O-sulfonated [β-D-GlcUA-(1→ 4)-β-D-GlcNAc] OPr types

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired